RU2013112563A

RU2013112563A - Щелочная подпитка

Info

Publication number: RU2013112563A
Application number: RU2013112563/10A
Authority: RU
Inventors: Кристиан ШАНЦ
Original assignee: Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date: 2010-08-30
Filing date: 2011-08-25
Publication date: 2014-10-10
Also published as: US9845347B2; BR112013004396A2; US8951756B2; US20130323783A1; US20150132802A1; CN103068967A; JP2013537432A; JP5798193B2; EP2611900A1; KR20130100301A; CN103068967B; MX339227B; ES2558751T3; KR101584414B1; MX2013002144A; WO2012028522A1; EP2611900B1; HK1181811A1; RU2631001C2; JP2016005461A

Abstract

1. Способ культивирования клетки Escherichia coli, экспрессирующей полипептид, отличающийся тем, что культивирование включает в себя добавление щелочного раствора аминокислоты, выбранной из аспартата, аспарагиновой кислоты, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, триптофана и тирозина, в течение культивирования,в котором концентрация аминокислоты в щелочном растворе выше, чем растворимость данной аминокислоты в воде при 20°С и при нейтральном рН, при этом концентрация аминокислоты составляет 30 г/л или более, ив котором щелочной раствор представляет собой 10% (вес/объем) или более раствор аммиака, ив котором сухой вес клеток культивируемых бактерий в определенный момент культивирования составляет по меньшей мере 20 г/л.2. Способ получения полипептида, включающий стадииа) культивирования клетки Escherichia coli, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид,б) регулирования значения рН во время культивирования с помощью щелочного раствора, содержащего аминокислоту, выбранную из аспартата, аспарагиновой кислоты, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, триптофана и тирозина,в) выделения полипептида из клеток или культуральной среды и, таким образом, получение полипептида,в котором концентрация аминокислоты в щелочном растворе составляет 30 г/л или более, ив котором щелочной раствор представляет собой 10% (вес/объем) или более раствор аммиака.3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что бактериальная клетка является ауксотрофной по аминокислоте и ауксотрофия относится к аминокислоте, выбран

Claims

1. Способ культивирования клетки Escherichia coli, экспрессирующей полипептид, отличающийся тем, что культивирование включает в себя добавление щелочного раствора аминокислоты, выбранной из аспартата, аспарагиновой кислоты, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, триптофана и тирозина, в течение культивирования,

в котором концентрация аминокислоты в щелочном растворе выше, чем растворимость данной аминокислоты в воде при 20°С и при нейтральном рН, при этом концентрация аминокислоты составляет 30 г/л или более, и

в котором щелочной раствор представляет собой 10% (вес/объем) или более раствор аммиака, и

в котором сухой вес клеток культивируемых бактерий в определенный момент культивирования составляет по меньшей мере 20 г/л.

2. Способ получения полипептида, включающий стадии

а) культивирования клетки Escherichia coli, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид,

б) регулирования значения рН во время культивирования с помощью щелочного раствора, содержащего аминокислоту, выбранную из аспартата, аспарагиновой кислоты, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, триптофана и тирозина,

в) выделения полипептида из клеток или культуральной среды и, таким образом, получение полипептида,

в котором концентрация аминокислоты в щелочном растворе составляет 30 г/л или более, и

в котором щелочной раствор представляет собой 10% (вес/объем) или более раствор аммиака.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что бактериальная клетка является ауксотрофной по аминокислоте и ауксотрофия относится к аминокислоте, выбранной из аспартата, аспарагиновой кислоты, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, триптофана и тирозина.

4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что щелочной раствор имеет рН9 или более.

5. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что полипептид представляет собой аполипопротеин А1 человека или его производное.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что аполипопротеин А1 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:01-35.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что аполипопротеин А1 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:01, 02, 34 и 35.

8. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что концентрация аминокислоты составляет около 50 г/л.

9. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что щелочной раствор представляет собой приблизительно 12,5% (вес/объем) водный раствор аммиака.

10. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что аминокислота представляет собой лейцин.

11. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что щелочной раствор содержит лейцин и пролин.

12. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что щелочной раствор представляет собой примерно 12,5% (вес/объем) раствор аммиака и содержит аминокислоты лейцин и пролин, каждую в концентрации около 50 г/л.

13. Применение щелочного раствора аминокислоты в качестве подпитки при культивировании бактериальной клетки, в котором аминокислота выбрана из аспартата, аспарагиновой кислоты, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, триптофана и тирозина, при культивировании до достижения сухого веса клеток 20 г/л и более, и концентрации аминокислоты в щелочном растворе 30 г/л и более, при этом щелочной раствор представляет собой 10% (вес/объем) или более раствор аммиака.

14. Применение по п.13, отличающееся тем, что бактериальная клетка является ауксотрофной по аминокислоте и ауксотрофия относится к аминокислоте, выбранной из аспартата, аспарагиновой кислоты, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, триптофана и тирозина.

15. Способ по п.2, отличающийся тем, что клетка Eschehchia coli представляет собой ауксотрофную по аминокислоте клетку Escherichia coli.