RU2804076C1 - Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток - Google Patents

Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток Download PDF

Info

Publication number
RU2804076C1
RU2804076C1 RU2022129367A RU2022129367A RU2804076C1 RU 2804076 C1 RU2804076 C1 RU 2804076C1 RU 2022129367 A RU2022129367 A RU 2022129367A RU 2022129367 A RU2022129367 A RU 2022129367A RU 2804076 C1 RU2804076 C1 RU 2804076C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cultivation
medium
cell cultures
continuous cell
saline solution
Prior art date
Application number
RU2022129367A
Other languages
English (en)
Inventor
Виктор Николаевич Денисенко
Лариса Александровна Гнездилова
Алексей Иванович Албулов
Павел Николаевич Абрамов
Елена Игоревна Ярыгина
Сергей Григорьевич Юрков
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ МВА имени К.И. Скрябина)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ МВА имени К.И. Скрябина) filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ МВА имени К.И. Скрябина)
Application granted granted Critical
Publication of RU2804076C1 publication Critical patent/RU2804076C1/ru

Links

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в вирусологических лабораториях, при проведении исследований, а также на биокомбинатах, при производстве вакцин. Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток содержит в качестве источника питательных веществ и ростовых факторов 0,25% сухого порошка ферментативного гидролизата мяса норок, растворённого в солевом растворе. Получена нетоксичная среда полноценного аминокислотного содержания, используемая для культивирования и обеспечения роста разных перевиваемых линий клеток. 1 табл.

Description

Изобретение относится к вирусологии и биотехнологии и может быть использовано в вирусологических лабораториях при проведении исследований, а также на биокомбинатах, при производстве вакцин. Предлагается в качестве источника питательных веществ и ростовых факторов для перевиваемых культур клеток вместо среды Игла-МЕМ использовать 0,25% раствор ферментативного гидролизата машечной массы тушек норки на солевом раствором Эрла.
Из уровня техники известна питательная среда для культивирования перевиваемых клеток Игла-МЕМ на солевым раствором Эрла, которая производится из сухого порошка различных фирм («HyClone» USA, «Biolodical Industry» Israel и др.). Основным недостатком этой среды является необходимость использования высокоочищенных синтетических аминокислот, тестированных в культуре клеток, что обусловливает ее высокую стоимость.
В заявленной среде источником питательных веществ и ростовых факторов для перевиваемой культуры клеток является изготовленный промышленным путем ЗАО «Биопрогресс» РФ, по разработанной нами оригинальной технологии, ферментный гидролизат мышечной массы норок.
Гидролизат содержит 18 аминокислот, в том числе незаменимые аминокислоты - аргинин (4,54 %), валин (3,72%), гистидин (1,85%), изолейцин (5,4%), лизин (5,35%), метионин (1,55%), треонин (3,31 %), триптофан (1,21%), фениламин (2,70%), а такжевосемь заменимых аминокислот. Микроэлементный состав гидролизата представлен 18 микроэлементами, в том числе эссенциальными йод, медь, цинк, железо, кобальт.
Целью изобретения является получение доступной питательной среды без использования зарубежных компонентов и обладающей невысокой себестоимостью.
Техническим результатом заявленного изобретения является простота приготовления среды, отсутствие токсичности, полноценность аминокислотного содержания, и ее использование для культивирования обеспечивает рост разных перевиваемых линий клеток.
Заявленный технический результат достигается за счет того, что питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток содержит в качестве источника питательных веществ и ростовых факторов 0,25 % сухого порошка ферментного гидролизата мяса норок, растворенного в солевом растворе Эрла. При помощи гидрокарбоната натрия раствор доводят до pH 7,4. Затем раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, и перед применением вносят сыворотку крови КРС в пропорции, рекомендованной для конкретной культуры клеток.
Изобретение иллюстрируются результатами сравнительного изучения роста перевиваемых линий клеток на известной и экспериментальной среде. При этом были использованы следующие линии перевиваемых культур клеток из коллекции ФГБНУ ФИЦВиМ:
ВНК-21\13 - перевиваемая линия клеток почки новорожденного сирийского хомяка;
ППК-66б - монослойно-суспензионная клональная сублиния перевиваемых клеток почки эмбрион свиньи;
ПО (ВНИИВВиМ) - перевиваемая линия клеток почки овцы.
Оценку токсичности и ростовых свойств сравниваемых питательных сред проводили в монослойных культурах указанных перевиваемых линий клеток методом последовательных пересевов в течение пяти пассажей при посевной плотности 100 ± 10 тысяч клеток\мл.
Сыворотку крови КРС в исследуемую и контрольную среды добавляли в соответствии с паспортными характеристиками и требованиями каждой культуры клеток.
Результаты сравнительной оценки токсичности и ростовых свойств опытной среды 0,25% ферментативного гидролизата мышц норок и контрольной среды Игла-МЕМ приведены в таблице 1.
Таблица № 1

п\п
Наименование ПЛК Питатель
ная среда
Количес
тво пассажей
Срок формирования моно слоя (час) Индекс пролифе-рации
(ИП)
Цитоморфологическая характе
ристика
1 ВНК-21\13
(Англия)
0,25% фермента
тивный гидролизат мяса норок на солевом растворе Эрла
5 24 3,00±0,12 Соответ
ствует паспортной характеристике
Игла-МЕМ на солевом раствореЭрла
КОНТРОЛЬ
5 24 2,90±0,19 Соответствует паспортной характеристике
2 ППК-66б 0,25% фермента
тивный гидролизат мяса норок на солевом растворе Эрла
5 48 2.80±0,20 Соответствует паспортной характеристике
Игла-МЕМ на солевом растворе Эрла
КОНТРОЛЬ
5 48 2,75±0,12 Соответствует паспорт
ной характеристике
3 ПО (ВНИИВВиМ) 0,25% ферментативный гидролизат мяса норок на солевом растворе Эрла 5 48 2,20±0,23 Соответствует паспортной характеристике
Игла-МЕМ на солевом растворе Эрла
КОНТРОЛЬ
5 48 2,30±0,10 Соответствует паспорт
ной характе
ристике
Анализ таблицы № 1 свидетельствует о том, что экспериментальная среда с 0,25% ферментативного гидролизата мышечной массы норок на солевом растворе Эрла нетоксична для перевиваемых линий клеток. Ростовые свойства перевиваемых культур клеток (срок формирования монослоя и индекс пролиферации) в экспериментальной среде соответствуют таковым в контрольной среде Игла-МЕМ.
Список литературы
1. Абрамов П.Н. Белковые гидролизаты в профилактике метаболических нарушений у пушных зверей / П.Н. Абрамов, Н.А. Слесаренко, С. В. Позябин [и др.]. - Москва : ЗооВетКнига, 2022. - 184 с.
2. Дьяков Л.П. Живая клетка в культуре. Москва: Спутник, 2009. - 656 с.
3. Патент РФ № 2546252 C2, МПК A23K 1/10. Способ получения белкового гидролизата из мясного или мясокостного сырья тушек норок для парентерального питания: № 2013116939/10 от 15.04.2013; опубл. 10.04.2015 / А.И. Албулов, В.Н. Денисенко, А.Я. Самуйленко [и др.]; Заявитель Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук.
4. Юрков С.Г., Колбасова О.Л. и др. Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ. Покров, Россельхозакадемия, ВНИИВВиМ, 2010; 89 с.

Claims (1)

  1. Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток, содержащая в качестве источника питательных веществ и ростовых факторов 0,25% сухого порошка ферментативного гидролизата мяса норок, растворённого в солевом растворе с конечной pH среды, доведённой до значения 7,4 при помощи раствора гидрокарбоната натрия и последующей стерилизации методом мембранной фильтрации и внесения перед применением сыворотки крови КРС.
RU2022129367A 2022-11-11 Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток RU2804076C1 (ru)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2804076C1 true RU2804076C1 (ru) 2023-09-26

Family

ID=

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2673718C1 (ru) * 2018-01-22 2018-11-29 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") Питательная среда для культивирования перевиваемых клеточных линий млекопитающих

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2673718C1 (ru) * 2018-01-22 2018-11-29 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") Питательная среда для культивирования перевиваемых клеточных линий млекопитающих

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Инструкция по применению питательной среды Игла МЕМ жидкой, 18.12.2006. РОГОВ РОМАН ВАСИЛЬЕВИЧ, Технология получения белкового гидролизата из мышечной ткани норок и оценка его эффективности в свиноводстве, автореферат диссертации, Щелково, 2012, с., весь документ. FLACZYK, E., Technologycal and nutritional aspects of protein hydrolyzates. Part I: Preparation and chemical characterization / E. Flaczyk // Przem. Spozyw. 1997. V. 51. N 3. P. 6-31. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPS60500400A (ja) 組織培養培地
RU2018122615A (ru) Способы, среда и продукты для культивирования эмбрионов
RU2804076C1 (ru) Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток
RU2412240C1 (ru) Питательная среда для выращивания легионелл
KR20230077644A (ko) 도축 부산물에서 유래한 FBS(fetal bovine serum) 대체제 활용 배양육의 생산 방법
RU2213779C2 (ru) Питательная среда для выделения лактобактерий
RU2443428C1 (ru) Способ изготовления аллергена для дифференциальной диагностики парааллергических реакций у крупного рогатого скота на ппд туберкулин для млекопитающих
RU2575797C2 (ru) Биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов
RU2460774C1 (ru) Питательная среда для выращивания легионелл
RU2506309C2 (ru) Способ культивирования миобластов in vitro для получения биомассы миоцитов для пищевых целей
RU2525637C2 (ru) Питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза
RU2020153C1 (ru) Способ получения ферментативного гидролизата и питательная среда для культивирования клеток эукариотов
RU2710718C1 (ru) Способ модификации пролиферативной активности клеточных культур млекопитающих
JP4210674B2 (ja) マイコプラズマ・ガリセプティカム培養用培地
RU2797013C1 (ru) Способ повышения эффективности культивирования в условиях in vitro каллусной культуры Базилика Обыкновенного (Ocimum basilicum)
RU2301256C1 (ru) Питательная среда жидкая для культивирования холерного вибриона
RU2701504C1 (ru) Питательная среда для культивирования бруцеллезного микроба
US7074612B2 (en) Insect cell primary culture medium, extracellular matrix, and process of preparing an insect culture cell line in a short period of time using the medium and matrix
RU2826008C1 (ru) Способ повышения продуктивности кроликов при одновременном улучшении качества мяса
RU2262859C2 (ru) Способ получения ферментативного гидролизата на основе белков рыб
RU2425871C1 (ru) Питательная среда для выращивания легионелл
RU2644248C2 (ru) Питательная среда плотная для культивирования и выращивания туляремийного микроба
Plotnikova et al. The method of activation of animal cells cultures in vitro for the reproduction of viruses
RU2677027C1 (ru) Способ приготовления кормовой добавки из птичьего помета с применением штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП
RU2631795C1 (ru) Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных