RU2631795C1 - Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных - Google Patents
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2631795C1 RU2631795C1 RU2016122351A RU2016122351A RU2631795C1 RU 2631795 C1 RU2631795 C1 RU 2631795C1 RU 2016122351 A RU2016122351 A RU 2016122351A RU 2016122351 A RU2016122351 A RU 2016122351A RU 2631795 C1 RU2631795 C1 RU 2631795C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nutrient medium
- necrobacteriosis
- cultures
- causative agent
- staphylococcus
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/14—Streptococcus; Staphylococcus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных предусматривает получение фильтрата культур стафиококка путем выращивания культур стафилокока на мясопептонном агаре с последующим культивированием в термостате при 37оС в течение 8-10 дней. Проводят инактивацию культуры стафилококка на водяной бане при температуре 90-95оС в течение 30 мин. Центрифугируют в течение 20 мин с последующим отделением надосадочной жидкости и дополнительной фильтрацией через фильтр Зейтца. Изобретение позволяет сократить сроки культивирования посевного материала и повысить чувствительность бактериологического исследования. 25 ил., 4 табл., 5 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности, к способам получения новых питательных сред для ускоренного выделения возбудителя некробактериоза - F. necrophorum при бактериологических исследованиях.
Среди инфекционных заболеваний, с поражением дистальных частей конечностей, в частности некробактериоз, остается одной из важнейших проблем в патологии крупного рогатого скота, который получил еще большее распространение в связи с завозом импортного поголовья, не приспособленного к местным условиям содержания и кормления. Особенно ощутимый экономический ущерб терпят от этой болезни хозяйства молочного направления.
При несоблюдении зооветеринарных параметров содержания и кормления животных, предрасполагающими факторами в возникновении болезни являются снижение естественной резистентности организма и мацерация кожного покрова дистальных частей конечностей.
После внедрения в организм через поврежденный кожный покров микробы F. necrophorum в местах первичной локализации обуславливают появления болезненного воспалительного отека подкожной клетчатки.
Исходным моментом в профилактике и лечении некробактериоза является постановка точного диагноза. Кроме эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, в диагностике некробактериоза чрезвычайно важно получить чистую культуру из пораженных органов, что, однако, удается с трудом.
В ветеринарной практике для бактериологического исследования используют различные питательные среды.
Известно применение печеночного бульона, мозговой среды, свернутой сыворотки крови, мясопептонного агара с кровью, полужидкого агара с добавлением 2%-го сахара (В.А. Балабанов. Некробактериоз животных. М., 1971; Лабораторные исследования в ветеринарии, под редакцией Б.И. Антонова М., 1986.). Недостатком указанных питательных сред является низкая чувствительность их в отношении F. necrophorum и длительный срок культивирования, который наступает только на 3-8 сутки.
Известна питательная среда для выделения возбудителя некробактериоза - Китта-Тароцци («Анаэробные организмы», материал из Википедии - свободной энциклопедии - ru.rn.wikipedia.org). Однако применение этой среды позволяет инкубировать посевы не ранее трех - пяти суток, просматривая их при этом ежедневно.
Известна также питательная среда для выявления возбудителя некробактериоза, содержащая питательную среду 199, сыворотку крови крупного рогатого скота и 40%-ный раствор глюкозы при следующем соотношении компонентов, мас. %: питательная среда 199-85,0, сыворотка крови 10,0, 40%-й раствор глюкозы 5,0 (Патент №2569456, МПК C12N 1/20, C12R 1/01, опубл. 27.11.2015 г., БН №33).
Хотя данная питательная среда и обладает высокой чувствительностью по сравнению с другими питательными средами (первичный рост возбудителя в анаэробных условиях происходит через 4 часа после посева, а в аэробных условиях через 2 часа), однако чувствительность ее недостаточна для выявления возбудителя некробактериоза у больных животных.
Технический результат, на достижения которого направлено заявляемое изобретение, состоит в повышении чувствительности бактериологического исследования и сокращении сроков культивирования посевного материала.
Для достижения этого технического результата в предлагаемом способе культивирование возбудителя некробактериоза осуществляют в фильтрате культур стафилококка, который получают путем высева в жидкую питательную среду суточных культур стафилококка, а в качестве питательной среды для выращивания культур стафилококка используют мясопептонный бульон, затем их культивируют в термостате при температуре 37°С в течение 8-10 дней, инактивируют в водяной бане при температуре 90-95°С в течение 30 мин, центрифугируют при 1000 об/мин в течение 20 мин, а полученную надосадочную жидкость дополнительно фильтруют через фильтр Зейтца и используют как питательную среду для выявления возбудителя некробактериоза.
Такое выращивание возбудителя некробактериоза в фильтрате культур стафилококка позволяет повысить чувствительность бактериологического исследования и сократить сроки культивирования посевного материала в 8 раз.
Питательная среда для выращивания стафилококков на мясопептонном агаре (МПА) при температуре 35-40°С известна (allvet.ru>knowledge_base/microbiology/…). Известен и фильтрат культур стафилококков (http://lekmed.ru/info/arhivy/mikrobiologicheskih-issledovaniy-38.html), однако для выявления и культивирования возбудителя некробактериоза животных он никогда ранее не использовался, кроме того внесены значительные изменения в сам способ получения фильтрата культур стафилококка.
Пример 1. В качестве питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза использовали предварительно полученный следующим образом фильтрат культур стафилококка. В жидкую питательную среду высевали культуры стафилококка, культивировали в термостате при 37°С в течение 8-10 дней. Полученную в мясопептонном бульоне культуры стафилококка инактивировали в водяной бане при температуре 90-95°С в течение 30 мин, подвергали центрифугированию при 1000 об/мин в течение 20 мин. Затем полученную надосадочную жидкость отделяли и фильтровали через фильтр Зейтца (рис. 1-а, б, в) и использовали в дальнейшем как питательную среду для выявления возбудителя некробактериоза.
Полученный фильтрат прозрачный, соломенно-желтоватого цвета, стерильный, не дает осадка при хранении, рН 7,96-7,99.
Химический состав культуральной жидкости стафилококков включает ферменты, глюкозу, общий белок, мочевину, альбумины, щелочную фосфатазу, креатинин, железо, кальций, фосфор, сероактивный белок, гамма-глобулины.
Количественное соотношение указанных веществ в питательной среде:
Аланинаминотрансфераза | 2,7 ммоль /л |
Аспартатаминотрансфераза | 1,2 ммоль /л |
Креатинин | 125,0 ммоль/л |
Мочевина | 7,6 ммоль/л |
Общий белок | 0,5 г/л |
Глюкоза | 0,3 ммоль/л |
Щелочная фосфатаза | 20,9 ммоль/л |
Холестерин | 0,1 ммоль/л |
Амилаза | 0,8 г/л |
Общий билирубин | 0,5 ммоль/л |
Альбумины | 0,5 г/л |
Гамма-глобулины | 1,6 г/л |
Кальций | 0,1 ммоль/л |
Фосфор | 23,3 мг/л |
Железо | 11,5 ммоль/л |
Сероактивный белок | 1,0 мг/л |
Полученный фильтрат культур стафилококка был испытан как питательная среда в Республиканской лаборатории РТ с использованием для культивирования культур F. necrophorum, производственные штаммы, выделенные нами в ООО АФ «Татарстан» Высокогорского района и ООО АФ «Южный» Нурлатского района РТ в 2014 г. (Патент №2569456), а также на посевах из патологического материала, полученного от больных коров с поражением дистальных частей конечностей.
Пример 2. Бактериальные суспензии F. necrophorum из производственных штаммов ООО АФ «Татарстан» Высокогорского района и ООО АФ «Южный» Нурлатского района с содержанием 500000 микробных тел по стандарту мутности готовили на физиологическом растворе и высевали в 10 пробирок с содержанием предлагаемой питательной среды с наслоением вазелинового масла и в 10 пробирки без масла. Перед применением пробирки со средами регенерировали в водяной бане в течение 30 мин при температуре 55°С. После высева пробирки помещали в термостат при температуре 37°С с установлением визуального наблюдения через каждый час до 14 часов, а затем через 36, 56, 84 часов после высева культур. Результаты исследования представлены в таблице 1 и рисунках 2 - а, б, в, г, д, е; 3 - а, б, в, г, д, е; 4 - а, б, в, г, д, е; 5 - а, б, в, г, д, е.
Как видно из таблицы 1, первичный рост музейных штаммов F. necrophorum начинает появляться в первые же 15 минут после посева (рис. 2а, 4а) с последующим усилением роста в виде образования пузырьков газа и помутнения среды (рис. 2 - б, в, г, д, е; 4 - б, в, г, д, е).
В аэробных условиях рост возбудителя несколько усиливается, чем в анаэробных условиях (рис. 3 - а, б, в, г, д, е; 5 - а, б, в, г, д, е).
Рост вышеуказанных штаммов в условиях Республиканской лаборатории определяли по результатам оптической плотности с помощью прибора фотоэлектроколориметра (ФЭК - 56 М).
Пример 3. В четыре стерильные пробирки вносили по 10 мл испытуемой питательной среды и засевали возбудителем некробактериоза производственными штаммами, выделенными в ООО АФ «Татарстан» Высокогорского района и в ООО АФ «Южный» Нурлатского районов РТ. В целях создания анаэробных условий в две из них наслаивали вазелиновое масло и помещали в термостат при температуре 37°С.
Результаты исследования по определению оптической плотности засеянных культур представлены в таблице 2 и рисунках 6 (а, б, в, г); 7 (а, б, в, г); 8 (а, б, в, г); 9 (а, б, в, г).
Как видно из таблицы 2, рост культуры некробактериоза начинается уже в первые минуты, культура некробактериоза лучше растет с добавлением вазелинового масла.
Однако в отличие от музейных штаммов, возбудитель, выделенный из патологического материала, полученного от больных животных, обладает свойством более медленного роста при посевах на питательные среды и обладает более высокой вирулентностью.
Пример 4. Крестьянское фермерское хозяйство (КФХ) «Козлов М.И.» Ново Шешминского района Республики Татарстан. Всего на ферме 1337 голов крупного рогатого скота черно-пестрой породы. Из всего поголовья 400 голов коров, 258 - нетели, 305 - телок, быки производители – 6, остальное - поголовье молодняка разного возраста. При клиническом осмотре было обнаружено 75 коров, 12 нетелей с различной степенью хроматы.
Патологический материал в количестве 12 проб получен от коров и нетелей с поражением дистальных частей конечностей.
Посевной материал после предпосевной обработки засевали в шесть пробирок с содержанием испытуемой питательной среды. В три пробирки в целях создания анаэробных условий наслаивали вазелиновое масло. Все шесть пробирок поместили в термостат при температуре 37°С и установили наблюдения в тех же параметрах, что описано в примерах 1 и 2.
Результаты исследования представлены в таблице 3, рисунках 10 - а, б и 11 - а, б.
Как видно из таблицы 3, сроки появления первичного роста возбудителя из патологического материала в аэробных и анаэробных условиях происходит через 1 час (рис. 10 а, б; 11 а, б).
Пример 5. ООО «Сот Иле» филиал «Новая Шешма» Ново Шешминского Республики Татарстан в трех отделениях: Азеево, Чертушкино, Тубылгытау общее поголовье 3599 голов крупного рогатого скота черно-пестрой породы.
В отделении ООО «Сот Иле» филиал «Новая Шешма» Азеево содержится всего 1268 голов крупного рогатого скота, из них 648 голов коровы, 43 - нетели, 5 - быки производители, остальное - поголовье молодняка разного возраста. При клиническом осмотре было обнаружено 116 коров и 5 нетелей с различной степенью хроматы, отобрали материал в количестве 5 проб.
В отделении ООО «Сот Иле» филиал «Новая Шешма» Чертушкино находится 656 голов крупного рогатого скота, в том числе 209 коров, 51 - нетель, 6 - быков производителей. При клиническом осмотре всего поголовья выявлены 63 коров и 9 нетелей с различной степенью хроматы, отобрано 2 пробы.
В отделении ООО «Сот Иле» филиал «Новая Шешма» Тубылгытау всего 1675 голов крупного рогатого скота, из всего поголовья 730 коров, 63 - нетели, 5 - быков производителей остальное - поголовье молодняка разного возраста. При клиническом осмотре всего поголовья выявлены 150 коров и 12 нетелей с различной степенью хроматы, патологический материал в количестве 15 проб получен от коров и нетелей.
Посевной материал, доставленный из хозяйства в транспортной питательной среде, после соответствующей предпосевной обработки засевали в шесть пробирок с содержанием испытуемой питательной среды. В целях создания анаэробных условий в три пробирки наслаивали вазелиновое масло и помещали в термостат при температуре 37°С.
Как видно из таблицы 4, сроки появления первичного роста возбудителя из патологического материала в аэробных и анаэробных условиях происходит в первые минуты после посева, микроскопия - через 4 часа (рис. 12 а, б), а в аэробных условиях - через 3 часа (рис. 13 а, б).
Таким образом, предлагаемый способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза в восемь раз повышает чувствительность бактериологического исследования и сокращает в среднем более чем в пять раз сроки культивирования посевного материала. Предлагаемый способ может быть использован как экспресс-метод диагностики возбудителя некробактериоза.
Claims (1)
- Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных, заключающийся в том, что культивирование возбудителя некробактериоза животных осуществляют в фильтрате культур стафилококка, который получают путем высева в жидкую питательную среду суточных культур стафилококка, а в качестве питательной среды для выращивания культур стафилококка используют мясопептонный бульон, затем их культивируют в термостате при температуре 37°С в течение 8-10 дней, инактивируют в водяной бане при температуре 90-95°С в течение 30 мин, центрифугируют при 1000 об/мин в течение 20 мин, а полученную надосадочную жидкость отделяют, дополнительно фильтруют через фильтр Зейтца и используют как питательную среду для выявления возбудителя некробактериоза.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016122351A RU2631795C1 (ru) | 2016-06-06 | 2016-06-06 | Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016122351A RU2631795C1 (ru) | 2016-06-06 | 2016-06-06 | Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2631795C1 true RU2631795C1 (ru) | 2017-09-26 |
Family
ID=59931194
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016122351A RU2631795C1 (ru) | 2016-06-06 | 2016-06-06 | Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2631795C1 (ru) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2569456C1 (ru) * | 2015-02-03 | 2015-11-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный Центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Питательная среда для выявления возбудителя некробактериоза |
-
2016
- 2016-06-06 RU RU2016122351A patent/RU2631795C1/ru active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2569456C1 (ru) * | 2015-02-03 | 2015-11-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный Центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Питательная среда для выявления возбудителя некробактериоза |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Под ред. АНТОНОВА Б.И. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции. Справочник. М., Анграпромиздат, 1986, с.56-57. * |
ШЕВЧЕНКО А.А. и др. Диагностика некробактериоза и копытной гнили у животных. Учебное пособие. Краснодар, 2013, с. 1-12. * |
ШЕВЧЕНКО А.А. и др. Диагностика некробактериоза и копытной гнили у животных. Учебное пособие. Краснодар, 2013, с. 1-12. Под ред. АНТОНОВА Б.И. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции. Справочник. М., Анграпромиздат, 1986, с.56-57. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Islam et al. | Isolation and identification of Escherichia coli and Salmonella from poultry litter and feed | |
CN107743519A (zh) | 用于分离包括传统培养基中无法培养的如支原体的物种的临床样本的培养基 | |
RU2631795C1 (ru) | Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных | |
RU2569456C1 (ru) | Питательная среда для выявления возбудителя некробактериоза | |
RU2443428C1 (ru) | Способ изготовления аллергена для дифференциальной диагностики парааллергических реакций у крупного рогатого скота на ппд туберкулин для млекопитающих | |
Kassa et al. | Bacterial flora of Nile tilapia of pond fish and their relationship with predisposing factors | |
RU2640251C2 (ru) | Способ получения питательной среды для транспортировки патологического материала, содержащего возбудитель некробактериоза животных | |
Bbockelman et al. | Rhabditis maupasi: occurrence in food snails and cultivation | |
JP7274704B2 (ja) | ノトバイオートカイコの作製方法 | |
RU2688335C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза | |
CN112481188A (zh) | 一种高效产β-葡萄糖醛酸酶混合菌剂的制备方法 | |
Sapkota et al. | Prevelance and associated risk factor of escherichia coli from the cases of Poultry at Regional Veterinary Laboratory (RVL) Surkhet, Nepal | |
Chirilă et al. | Isolation and characterization of an Aeromonas hydrophila strain in a carp (Cyprinus carpio) toxemia focus. | |
RU2249206C2 (ru) | Способ бактериологического исследования рыб | |
RU2648160C2 (ru) | Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica | |
RU2288953C1 (ru) | Способ дифференциации аллергических реакций на ппд-туберкулин для млекопитающих животных | |
RU2510416C1 (ru) | Питательная среда для выделения лактобактерий | |
RU2484141C1 (ru) | Элективно-дифференциальная питательная среда для выделения холерных вибрионов (варианты) | |
JP4210674B2 (ja) | マイコプラズマ・ガリセプティカム培養用培地 | |
RU2344169C1 (ru) | Среда для сохранения жизнеспособности клинических изолятов патогенной treponema pallidum | |
RU2378368C2 (ru) | Способ получения плотной питательной среды для культивирования бактерий саmpylobacter jejuni и campylobacter coli | |
RU2328526C1 (ru) | Способ выявления микобактерий туберкулеза крупного рогатого скота | |
Bakiyeva et al. | DEVELOPMENT OF A METHOD FOR MANUFACTURING AND OBTAINING HYPERIMMUNE SERUM AGAINST STREPTOCOCCOSIS IN FARM ANIMALS | |
RU2289813C2 (ru) | Способ выявления форм трихомонад | |
Jahan et al. | Isolation, identification and antibiogram study of bacteria from diarrhoeic goat at selected areas of Sylhet. |