RU2288953C1 - Способ дифференциации аллергических реакций на ппд-туберкулин для млекопитающих животных - Google Patents
Способ дифференциации аллергических реакций на ппд-туберкулин для млекопитающих животных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2288953C1 RU2288953C1 RU2005112170/13A RU2005112170A RU2288953C1 RU 2288953 C1 RU2288953 C1 RU 2288953C1 RU 2005112170/13 A RU2005112170/13 A RU 2005112170/13A RU 2005112170 A RU2005112170 A RU 2005112170A RU 2288953 C1 RU2288953 C1 RU 2288953C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tuberculin
- corynebacteria
- bcg
- mammals
- differentiation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к лабораторным исследованиям, касается способа дифференциации аллергических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих, инфицированных бактериями из рода Corynebacterium, и может быть использовано для дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. Для осуществления способа патологический материал от животного с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих обрабатывают 0,5% раствором препарата «Лесептик» в течение 30-45 минут, засевают на плотную яичную среду. Затем посевы выращивают при температурном оптимуме в течение трех дней с последующей окраской по Цилю-Нильсену и анализом морфологических признаков, по которым проводят идентификацию и дифференциацию коринебактерий. Способ по изобретению прост в осуществлении и эффективен при исследованиях для выяснения причин сенсибилизации животных к туберкулину. 1 табл.
Description
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к лабораторным исследованиям, касается способа дифференциации неспецифических туберкулиновых реакций, и может быть использовано для дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.
Основу комплекса противотуберкулезных мероприятий составляет диагностика, основным способом которой считается туберкулиновая проба. Проблема специфичности реакций приобрела особую остроту в последние десятилетия из-за широкого распространения неспецифических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих. Так, по некоторым данным, положительные туберкулиновые реакции могут регистрироваться в более 80% хозяйств, причем в 13,3% хозяйств от крупного рогатого скота выделяли возбудителей туберкулеза, в 54,3% хозяйств - атипичные микобактерии и в 32,3% хозяйств природа аллергии к туберкулину не установлена /1/.
Для выяснения причин реагирования животных на ППД-туберкулин для млекопитающих проводят диагностический убой с дополнительным исследованием брыжеечных лимфатических узлов на наличие микобактерий и близкородственных микроорганизмов /2/.
Цель изобретения - способ дифференциации аллергических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих, инфицированных бактериями из рода Corynebacterium.
Коринебактерии - род бактерий, включающий патогенные для человека, животных и растений микроорганизмы, а также сапрофитные виды. Коринебактерии представляют собой полиморфные палочки, от булавовидных или заостренных форм до коккоподобных, неподвижны за исключением нескольких сапрофитных и патогенных для растений видов, грамположительны, некислотоустойчивы, аспорогенны с зернами валютина. Микроб продуцирует экзо- и эндотоксины, обладающие гемолитическими, дермонекротическими и антигемолитическими (в отношении β-гемолизина золотистого стафилококка) свойствами. Патогенными для животных являются С.equi, С.suis, С.pyogenes и С.pseudotuberculosis (C.ovis). С.pseudotuberculosis (C.ovis) вызывают у животных псевдотуберкулез, который рассматривается как группа заболеваний с туберкулезоподобными поражениями. Коринебактерии могут персистировать в организме животных без видимых поражений. При заражении лабораторных животных болезнь характеризуется угнетением, диареей, истощением, изменением волосяного покрова, параличами и летальным исходом. Зараженные белые мыши гибнут через 2-4 дня, морские свинки и кролики - в срок от 2 до 35 дней. При вскрытии регистрируют в паренхиматозных органах и мышцах обширные очаги или мелкие фокусы, содержащие творожистую массу, в стенке кишечника - некрозы, в легких - эмфизематозные участки, увеличение печени, гиперплазию и бугристость селезенки. Наличие у коринебактерий общих с микобактериями антигенов /3/ объясняет природу положительных реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих в случае сенсибилизации коринебактериями.
Поставленная цель достигается тем, что в способе, включающем отбор патологического материала от положительно реагировавших на ППД-туберкулин для млекопитающих животных, засев на плотную яичную среду, например на среду Левенштейна-Йенсена, выращивание при температурном оптимуме, патологический материал предварительно обрабатывают 0,5% раствором препарата «Лесептик», на 2-3 день выращивания осуществляют окраску по Цилю-Нильсену с последующей идентификацией коринебактерий.
Способ осуществляется следующим образом.
Патологический материал от положительно реагировавших на ППД-туберкулин животных (брыжеечные, заглоточные, подчелюстные лимфатические узлы, кусочки органов с подозрительными на туберкулез изменениями) разрезают на кусочки размером 0,5×0,5 см, заливают 0,5% раствором препарата «Лесептик», оставляют при комнатной температуре на 30-45 минут, отмывают стерильным физиологическим раствором, растирают пестиком и засевают на плотную яичную среду, например, на среду Левенштейна-Йенсена или Финн-2. Выращивают при температуре +34°С. 2-3-дневные культуры окрашивают по Цилю-Нильсену и по морфологическим признакам колоний и клеток идентифицируют коринебактерии.
Сущность способа поясняется примерами.
Пример 1. Для обоснования заявленных параметров способа изучали бактерицидное действие различных концентраций препарата «Лесептик» и экспозиций на микроорганизмы 1, 2 и 3 групп устойчивости in vivo. Результаты представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, результаты испытаний значений концентрации препарата «Лесептик» ниже (0,2%) и выше (1,0%) заявленного (0,5%) позволили рекомендовать в качестве оптимальной для применения на практике заявленную концентрацию. Концентрация меньше заявленной обеспечивала бактерицидное действие относительно микроорганизмов 1 и 2 групп устойчивости, увеличение концентрации выше заявленной нецелесообразно, так как не обеспечивало повышения бактерицидного действия относительно заявленной.
| Таблица 1 Бактерицидное действие препарата «Лесептик» в зависимости от концентрации и экспозиции |
||||||||||||
| Культура | Концентрация препарата «Лесептик»(%), экспозиция (часов) | |||||||||||
| 0,2 | 0,3 | 0,5 | 1,0 | |||||||||
| 0,4 | 0,5 | 1,0 | 0,4 | 0,5 | 1,0 | 0,4 | 0,5 | 1,0 | 0,4 | 0,5 | 1,0 | |
| Prot. mirabilis, №237 | + | - | - | - | - | - | ||||||
| Shig. flexneri, №170 | - | - | - | - | - | - | ||||||
| Е.coli, №17 | + | + | - | - | - | - | ||||||
| Staph. aureus, №209 | + | - | - | - | - | - | ||||||
| Enterobac. faecalis, №4 | + | + | - | - | - | - | ||||||
| Salm. tm., №18 | + | + | - | - | - | - | ||||||
| M. avium, | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
| M. bovis (Vallee) | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
| M. tuberculosis (H37Ra) | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
| Coryn.pseudotuberculosis, №2 | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | - | - |
| Coryn.pseudotuberculosis, №3 | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | - | - |
| Rhodococcus equi | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
| + - рост, - отсутствие роста, пустые клетки - исследования не проводились | ||||||||||||
Пример 2. Для подтверждения эффективности дифференциации коринебактерий от быстрорастущих микобактерий, родококков и нокардий заявленным способом патологический материал от коровы, положительно реагировавшей на ППД-туберкулин для млекопитающих, без изменений, характерных для туберкулеза, разрезали на кусочки размером 0,5×0,5 см, заливали 0,5% раствором препарата «Лесептик», оставляли при комнатной температуре на 30-45 минут, отмывали стерильным физиологическим раствором, растирали пестиком и засевали на среду Левенштейна-Йенсена и выращивали при температуре +34°С. 2-3-дневные культуры окрашивали по Цилю-Нильсену. При микроскопировании выявляли некислотоустойчивые синие палочки (короткие или овальные) с розовыми или темно-синими зернами (зерна валютина), которые идентифицировали как коринебактерии и дифференцировали по морфологическим признакам от микобактерий (скорость роста при +34°С, отсутствие кислотоустойчивости), родококков (скорость роста при +34°С, форма и окраска клеток) и нокардий (отсутствие воздушных гифов и кислотоустойчивых клеток). Идентификацию подтверждали исследованием жирнокислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии (характерный спектр эфиров жирных кислот, не содержащих более 20 атомов углерода, отсутствие туберкулостеариновой кислоты, большое количество олеиновой кислоты).
Пример 3. Для подтверждения достижения технического результата - выявление инфицированности микроорганизмами рода Corynebacterium - культурами, выделенными на среде Левенштейна-Йенсена, как в примере 2, внутримышечно заражали трех морских свинок (1 мл ≈ 500 млн микробных клеток). Животные погибали в течение 3 недель. При вскрытии в паренхиматозных органах и в стенке кишечника нашли некротические очажки серовато-желтого цвета, в легких - энфизематозные участки. Селезенка увеличена, бугристая с множеством узелков, печень увеличена, бугристая пестро-желтого цвета, что указывало на токсичность культуры. Патологические изменения во внутренних органах были характерны для коринебактерий.
Пример 4. Для подтверждения осуществимости заявленного способа в неблагополучном по туберкулезу стаде от убитого теленка с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих исследовали подчелюстные, заглоточные, брыжеечные лимфатические узлы, участки тощей и подвздошной кишок, печень и селезенку в соответствии с заявленным способом, как в примере 2. При патолого-анатомическом осмотре у теленка наблюдали в брыжеечных лимфатических узлах некротические узелки величиной с мелкую фасоль. Рост колоний, идентифицированных как коринебактерии по морфологическим признакам (быстрый рост желтоватых колоний с неровными краями, синие палочки-овоиды при окраске по Цилю-Нильсену, наличие внутриклеточных зерен валюнтина, окрашенных в розовый или густо-синий цвет), регистрировали на 2 день. При дальнейшем выращивании в течение 2 месяцев при температуре +37°С роста колоний не наблюдали.
Пример 5. Для подтверждения осуществимости заявленного способа в благополучном по туберкулезу стада от убитой телки с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих исследовали подчелюстные, заглоточные, брыжеечные лимфатические узлы, участки тощей и подвздошной кишок, печень и селезенку в соответствии с заявленным способом, как в примере 2. При патологоанатомическом осмотре у животного не наблюдали патолого-анатомических поражений. Рост колоний, идентифицированных как коринебактерии по морфологическим признакам (быстрый рост желтоватых колоний с неровными краями, синие палочки-овоиды при окраске по Цилю-Нильсену, наличие внутриклеточных зерен валюнтина, окрашенных в розовый или густо-синий цвет), регистрировали на 3 день. При дальнейшем выращивании в течение 2 месяцев при температуре +37°С роста колоний не наблюдали.
Пример 6. Для подтверждения разрешающей возможности способа в неблагополучном по туберкулезу стаде у убитой с контрольно-диагностической целью коровы с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих без видимых патолого-анатомических изменений, характерных для туберкулеза, исследовали брыжеечные лимфатические узлы, как в примере 2. В течение первых 2-3 дней выращивания рост колоний отсутствовал, что указывало на отсутствие коринебактерий. Посевы продолжали выращивать при температуре +37°С. Через 2 недели выросли мелкие, блестящие колонии бледно-желтого цвета, которые окрашивали по Цилю-Нильсену и по морфологическим признакам идентифицировали как микобактерии, что подтверждали исследованием жирно-кислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии. По хемотаксономическим характеристикам (наличие эфиров миколовых кислот с числом атомов углерода 22, 24, 26) микобактерии идентифицировали как М. avium.
Проведенные исследования подтвердили эффективность заявленного способа при исследованиях для выяснения причин сенсибилизации животных к туберкулину, что необходимо для оценки эпизоотической ситуации в стаде. Способ прост в осуществлении и экономически целесообразен.
Источники информации
1. Н.П.Овдиенко, A.M.Кадочкин, Н.А.Иванов, А.И.Козин и др. Выделение микобактерии и чувствительность крупного рогатого скота к туберкулинам//Ветеринария. - 1996. - №3. - С.28.
2. В.А.Созинов, В.П.Федоряка, И.Т.Нечваль, П.С.Шеверенко и др. - Роль атипичных микобактерий в эпизоотическом процессе//Ветеринария. - 1998. - №9. - С.28
3. О.А.Нестеренко, Е.И.Квасников, Т.М.Ногина. Нокардиоподобные и коринеподобные бактерии. - Киев, 1985. - С.168-170.
Claims (1)
- Способ дифференциации аллергических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих животных, предусматривающий отбор патологического материала от положительно реагировавших на ППД-туберкулин животных, засев его на плотную яичную среду, выращивание при температурном оптимуме, идентификацию коринебактерий, обуславливающих аллергическую реакцию, по морфологическим признакам выросших колоний и дифференциацию их от микобактерий, родококков и нокардий, отличающийся тем, что патологический материал перед посевом обрабатывают 0,5%-ным раствором препарата «Лесептик» в течение 30-45 мин, а идентификацию коринебактерий и их дифференциацию проводят в первые три дня выращивания.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005112170/13A RU2288953C1 (ru) | 2005-04-22 | 2005-04-22 | Способ дифференциации аллергических реакций на ппд-туберкулин для млекопитающих животных |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005112170/13A RU2288953C1 (ru) | 2005-04-22 | 2005-04-22 | Способ дифференциации аллергических реакций на ппд-туберкулин для млекопитающих животных |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005112170A RU2005112170A (ru) | 2006-10-27 |
| RU2288953C1 true RU2288953C1 (ru) | 2006-12-10 |
Family
ID=37438485
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005112170/13A RU2288953C1 (ru) | 2005-04-22 | 2005-04-22 | Способ дифференциации аллергических реакций на ппд-туберкулин для млекопитающих животных |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2288953C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2592372C1 (ru) * | 2015-02-20 | 2016-07-20 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт" | Способ диагностики коринебактериоза и ассоциативных с коринебактериями инфекций у животных |
-
2005
- 2005-04-22 RU RU2005112170/13A patent/RU2288953C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Иммунология. Справочник. Под ред. Герхарда Бундшу с соавт. - Киев: Наукова думка, 1981, с.419-420. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2592372C1 (ru) * | 2015-02-20 | 2016-07-20 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт" | Способ диагностики коринебактериоза и ассоциативных с коринебактериями инфекций у животных |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2005112170A (ru) | 2006-10-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Islam et al. | Isolation and identification of Escherichia coli and Salmonella from poultry litter and feed | |
| Abera et al. | Study of bovine mastitis in Asella government dairy farm of Oromia Regional state, South Eastern Ethiopia | |
| Islam et al. | Isolation and identification of Salmonella spp. from broiler and their antibiogram study in Sylhet, Bangladesh | |
| CN114836358B (zh) | 罗伊氏乳杆菌sxdt-32及其应用 | |
| Zahid et al. | In vitro and in vivo pathogenicity tests of local isolates APEC from naturally infected broiler in Baghdad | |
| Waseem et al. | Isolation and identification of major mastitis causing bacteria from clinical cases of bovine mastitis in Kashmir Valley | |
| CN107743519A (zh) | 用于分离包括传统培养基中无法培养的如支原体的物种的临床样本的培养基 | |
| RU2288953C1 (ru) | Способ дифференциации аллергических реакций на ппд-туберкулин для млекопитающих животных | |
| RU2428484C2 (ru) | Способ видовой дифференциации микобактерий туберкулеза | |
| RU2569456C1 (ru) | Питательная среда для выявления возбудителя некробактериоза | |
| RU2321636C1 (ru) | Способ бактериологического выявления нокардиоформных актиномицетов | |
| Hossain et al. | Isolation of some emergent bacterial pathogens recovered from captured and culture fisheries in Bangladesh | |
| Chirilă et al. | Isolation and characterization of an Aeromonas hydrophila strain in a carp (Cyprinus carpio) toxemia focus. | |
| Yimana et al. | Isolation, identification and antimicrobial profile of Corynebacterium bovis from selected dairy farms in Bishoftu, Central Ethiopia. | |
| Aziz et al. | Isolation, identification and antibiogram profiles of Staphylococcus aureus from commercial broiler flocks in Dinajpur District of Bangladesh with special focus on the determination of lethal effect of extracted toxin | |
| Sapkota et al. | Prevelance and associated risk factor of escherichia coli from the cases of Poultry at Regional Veterinary Laboratory (RVL) Surkhet, Nepal | |
| RU2610412C2 (ru) | Способ первичной идентификации микобактерий комплекса m.tuberculosis от нетуберкулёзных микобактерий | |
| RU2328526C1 (ru) | Способ выявления микобактерий туберкулеза крупного рогатого скота | |
| RU2631795C1 (ru) | Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных | |
| RU2309681C1 (ru) | Способ выявления некультивируемых микобактерий туберкулеза крупного рогатого скота | |
| Molitor | An Investigation of the Effect of Antibiotic Use in Honeybee hives on the Resistance of Gut Microbiota in Honeybees, Apis mellifera L. | |
| Kum et al. | Isolation and Identification of Salmonella gallinarum from Poultry Droppings Used as Manure in Jos East Local Government Area, Plateau State | |
| Arunkumar et al. | Isolation and identification of pathogenic bacteria and its antibacterial susceptibility in edible fish, Cirrhinus mrigala | |
| RU2640251C2 (ru) | Способ получения питательной среды для транспортировки патологического материала, содержащего возбудитель некробактериоза животных | |
| Rais et al. | Morphological, physio-biochemical properties and antibiogram of the Clostridium chauvoei |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070423 |