RU2688335C1 - Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза - Google Patents
Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2688335C1 RU2688335C1 RU2017142220A RU2017142220A RU2688335C1 RU 2688335 C1 RU2688335 C1 RU 2688335C1 RU 2017142220 A RU2017142220 A RU 2017142220A RU 2017142220 A RU2017142220 A RU 2017142220A RU 2688335 C1 RU2688335 C1 RU 2688335C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cultivation
- brucella
- colonies
- nutrient medium
- brucellosis
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 37
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims abstract description 25
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 24
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 12
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 8
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 7
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 10
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 claims description 8
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 8
- 239000004296 sodium metabisulphite Substances 0.000 claims description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 abstract description 8
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 abstract description 6
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 abstract description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 abstract 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 30
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 16
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 description 10
- 241000164109 Brucella abortus 544 Species 0.000 description 10
- 241000274793 Brucella melitensis bv. 1 str. 16M Species 0.000 description 10
- 241001196938 Brucella suis 1330 Species 0.000 description 10
- 229940056450 brucella abortus Drugs 0.000 description 10
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical class [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical compound O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 2
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical class [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 208000004023 Legionellosis Diseases 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical class [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical class [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Chemical class 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Chemical class 0.000 description 1
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Chemical class 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L sodium dithionite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])=O JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000005979 thermal decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Плотная питательная среда для культивирования возбудителя бруцеллеза содержит мясную воду двойной концентрации, пептон сухой ферментативный, сыворотку крови лошади нормальную для культивирования микоплазм на питательных средах жидкую, натрий хлористый, глюкозу, глицерин, натрия метабисульфит и агар микробиологический при заданном содержании компонентов. Изобретение позволяет получить достаточное количество колоний в максимально ранние сроки. 3 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии именно к разработке питательных сред, которые создают оптимальные условия для культивирования возбудителя бруцеллеза.
Известна питательная среда мясопептонный агар для выращивания бруцеллезного микроба, основой которой является г/л: мясная вода 1000,0 мл, 10 г сухого пептона, 5 г химически чистого натрия хлористого и 25 г агар-агара, промытого водопроводной водой и хорошо отжатого, рН среды устанавливают 7,8. Затем среду варят до полного расплавления агара и разливают в необходимую посуду (по 1-2 л). В дальнейшем среду автоклавируют при 115°С в течение 20 минут, отстаивают, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, предварительно смоченный теплой водой и вновь устанавливают рН 7,1-7,2. Среду разливают в необходимую посуду и стерилизуют при 115°С в течение 20 минут (Профилактика инфекционных болезней инфекции, общие для человека и животных. Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей. Методические указания МУ 3.1.7.1189-03. С. 53).
Недостатком данной среды является недостаточная эффективность, ввиду позднего роста возбудителя.
Наиболее близкой к заявляемому изобретению является питательная среда для культивирования бруцелл содержащая г/л: к 500,0 мл пептона Мартена, добавляют 500,0 мл мясной воды, и 5 г химически чистого хлористого натрия, 5,0 г натрия уксуснокислого и агар-агар 15,0-20,0. Смесь кипятят, устанавливают рН - 7,3±0,2, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют 20 мин при 120°С (М.С. Поляк; В.И. Сухаревич; М.Э. Сухаревич. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СП6. - 2008. - С. 65-66).
Недостатком данной среды является низкая питательная ценность для бруцеллезного микроба.
Целью изобретения является разработка рецептуры питательной среды плотной для культивирования возбудителя бруцеллеза, обеспечивающей достаточное количество колоний максимально в ранние сроки через 48 ч, а через 72 ч отмечается увеличение колоний.
Сущность предполагаемого изобретения заключается в том, что в качестве основного источника азотистого питания в предлагаемой среде используется мясная вода, пептон ферментативный и сыворотка крови лошади нормальная для культивирования микоплазм на питательных средах жидкая, для поддержания изотоничности среды и окислительно-восстановительного потенциала натрий хлористый, в качестве стимулирующих добавок - глюкоза, глицерин, натрия метабисульфит, а также агар микробиологический, при следующем соотношении ингредиентов г/л:
| Мясная вода | 0,800-1200,0 |
| Пептон сухой ферментативный | 8,0-12,0 |
| Сыворотка крови лошади нормальная | |
| для культивирования микоплазм на |
| питательных средах жидкая | 90,0-150,0 |
| Натрий хлористый | 4,0-6,0 |
| Глюкоза | 5,0-15,0 |
| Глицерин | 15,0-25,0 |
| Натрий метабисульфит | 0, 1-0,5 |
| Агар микробиологический | 14,0-22,0 |
В качестве исходного сырья используют мясную воду, являющуюся основой для многих питательных сред, обычно для приготовления мясной воды служит говядина или конина. Конина отличается большим содержанием углеводов (гликоген). Из мяса молодых хорошо упитанных животных (телят) обычно получают мясную воду лучшего качества (питательные свойства, прозрачность). Азотистые вещества от 12,7 до 21,71%, жиры от 1,4 до 15,5%. Минеральные вещества мяса состоят из солей натрия, калия, кальция, фосфора и железа, общее количество их достигает 1%. Мясо свежее содержит также витамины, экстрактивные вещества в большем количестве чем в замороженном (Ю.А. Козлов. Питательные среды в медицинской микробиологии. Медгиз - 1950 г. С. 46-48).
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - ГОСТ 13805-76. Производитель «НПО Порт-Петровск».
Сыворотка крови лошади нормальная для культивирования микоплазм на питательных средах жидкая. Дата выпуска 27.05.2016. Серия Л-16-04. Срок годности 2 года. Производитель ООО БиолоТ. С-Петербург.
Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 партия 24. Производитель г. Барнаул. Бактерии нуждаются в минимальном количестве солей. Будучи растворены в питательной среде и находясь в состоянии электролитического распада, ионизируемые минеральные соединения являются одновременно катализаторами различных химических процессов, происходящих в микробной клетке.
Глюкоза кристаллическая, чда, партия 20140327 0 00«МСД Торговая компания». Срок годности 3 года. С внесением в питательную среду глюкозы в концентрации 1% - улучшается ее ростовые свойства.
Глицерин ГОСТ 6259-75, партия 21/2015. Дата выпуска 04.2015. Срок годности 3 года. С внесением в питательную среду глицерина в концентрации 2% - улучшается ее ростовые свойства. Производитель Польша.
Натрия метабисульфит ГОСТ 11683-76 в средах переходит в гидросульфит натрия, при нагревании происходит термическое разложение с выделением двуокиси серы (SO2), что способствует нейтрализации продуктов жизнедеятельности культивируемых микроорганизмов.
Агар микробиологический - агар бактериологический (европейский тип). Производитель: «Pronadisa» Испания. Партия LF 15130184. Срок годности до 10.2017 г. Дата изготовления: октябрь 2013 г. Порошок светло-кремового цвета сероватого оттенка, запах без постороннего, свойственный студню с массовой долей сухого агара 0,85%. Температура плавления студня с массовой долей сухого агара 0.85% не ниже 80°С, температура застудневания - 30-37°С, прочность студня не менее - 350±40 г. Главная особенность агара - его желирующая способность.
Приготовление мясной воды двойной концентрации
Способ приготовления питательной основы для культивирования возбудителя бруцеллеза: 1 кг мясного фарша заливают 1 л дистиллированной воды и ставят на один сутки при температуре 6-8°С. Через сутки смесь фарша с водой кипятят в течение часа. Небольшие количества - до 5 литров можно кипятить на открытом огне, часто помешивая, чтобы не произошло пригорания частичек мяса. После кипячения мясную воду отжимают от фарша, доливают до первоначального объема дистиллированную воду, фильтруют и стерилизуют 30 минут при температуре 120°С. Хранят мясную воду двойной концентрации в стерильном виде.
Приготовление питательной среды плотной
Питательную среду на основе мясной воды двойной концентрации для культивирования возбудителя бруцеллеза готовят следующим способом: соединяют мясную воду - 1000,0; пептон ферментативный - 10,0; натрий хлористый - 5,0; агар микробиологический - 18,0. Среду кипятят до полого растворения ингредиентов, устанавливают рН 7,2±0,1 с помощью 20% раствора натрия гидроокиси добавляют глюкозу - 10,0; глицерина - 20,0; натрий метабисульфит - 0, 3; тщательно перемешивают разливают по 330 мл питательной среды в градуированные флаконы объемом 450 мл, перекрывают ватно-марлевыми пробками и бумагой крафт, фиксируют резиновым кольцом, стерилизуют при 1 атм. в течение 20 мин. После стерилизации, охлаждают до 56°С, стерильно над факелом добавляют в каждый флакон по 40,0 мл сыворотки крови лошади нормальной для культивирования микоплазм на питательных средах жидкой (т.е 120,0 мл на 880,0 мл среды), затем разливают на чашки Петри по 35-40 мл приготовленной питательной среды. Подсушенные чашки помещают в термостат на 48 ч при 37°С, проверяют на стерильность.
Сочетанное применение выше описанных ингредиентов, обеспечивает существенное усиление ростовых качеств при культивирования возбудителя бруцеллезного микроба в значительно ранние сроки на 2-3 сутки на пластинках питательного агара. Готовую питательную среду плотную используют для культивирования возбудителя бруцеллеза Brucella abortus 544, Brucella abortus 19BA. Brucella suis 1330, Brucella melitensis 16M.
Эффективность полученной среды оценивают в соответствии с методическими указаниями (МУ 3.3.2.2124-06) «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза», Москва, 2007 г., с использованием вирулентных культур: Brucella abortus 544, Brucella abortus 19BA. Brucella suis 1330, Brucella melitensis 16M.
Испытуемые культуры выращивают в бактериологических пробирках на поверхности скошенного агара рН 7,2±0,1 при температуре 37°С в течение 48 ч. Из двухсуточных культур тест-штаммов бруцелл смывают с поверхности скошенного агара 0,9% раствором натрия хлорида, доводят концентрацию микробной взвеси до 10 единиц по оптическому стандарту мутности ОСО 42-28-85 ФГБУ НЦЭСМП МЗ России, эквивалентную 1,7×109 бруцелл 1 мл. Полученную микробную взвесь культуры разводят сначала до концентрации 1×10-9 м.к./мл затем серийными десятикратными разведениями до 1×106 и 1×107 м.к./мл. В процессе разведения перенос взвеси в следующую пробирку производят стерильной пипеткой объемом 1 мл, меняя пипетку для каждого разведения. По 0,1 мл каждой культуры: Brucella abortus 544, Brucella abortus 19BA, Brucella suis 1330, Brucella melitensis 16M из разведений 10-6 (100 м.к.) и 10-7 (10 м.к.) высевают на 3 чашки Петри с испытуемыми средами и равномерно распределяют покачиванием по всей поверхности. Посевы инкубируют при температуре (37±1)°С.
Оценку ростовых свойств питательной среды плотной для культивирования возбудителя бруцеллеза Brucella abortus 544, Brucella abortus 19BA, Brucella suis 1330, Brucella melitensis 16M проводят путем подсчета количества выросших колоний бруцелл посуточно на пластинках агара с плотной питательной средой через каждые 24-48-72-120 ч. В качестве контроля использовали бруцеллагар.
Пример 1. Культуры выращивали на питательной среде плотной для культивирования возбудителя бруцеллезного микроба Brucella abortus 544, Brucella abortus 19B A, Brucella suis 1330, Brucella melitensis 16M содержащей, г/л: мясную воду - 800,0 мл; пептон сухой ферментативный - 8,0; сыворотку крови лошади нормальной для культивирования микоплазм на питательных средах жидкую - 90,0; натрий хлористый - 4,0; глюкозу - 5,0; глицерин - 15,0; натрия метабисульфит - 0, 1; агар микробиологический - 14,0.
При таком соотношении ингредиентов на испытуемой среде колонии Brucella abortus 544, Brucella abortus 19BA. Brucella suis 1330, Brucella melitensis 16M начинали формироваться через 52 ч, отмечался интенсивный рост колоний через 72 ч (на 3 сутки) при посеве 0,1 мл из 10-6 разведения вырастает 132; 36; 51; 99 колоний диаметром 1,5 мм соответственно, из 10-7 разведения вырастает 12; 8; 3; 11 колонии соответственно типичных по морфологии бруцеллезному микробу, а на бруцеллагаре начинали формироваться колонии через 48 ч, отмечался интенсивный рост колоний через 72 ч (на 3 сутки) при посеве 0,1 мл из 10-6 и 10-7 разведений вырастало 151; 37; 68; 98 и 23; 8; 6; 15 колоний соответственно диаметром 1,5 мм. Контрольная среда бруцеллагар - питательная среда темно- коричневого цвета в микроскоп не просматривается морфология колоний.
Пример 2. Культуры выращивали на питательной среде плотной для культивирования возбудителя бруцеллезного микроба Brucella abortus 544, Brucella abortus 19B A. Brucella suis 1330, Brucella melitensis 16M содержащей, г/л: мясную воду - 1000,0; пептон сухой ферментативный - 10,0; сыворотку крови лошади нормальной для культивирования микоплазм на питательных средах жидкую - 120,0; натрий хлористый - 5,0; глюкозу - 10,0; глицерин - 20,0; натрия метабисульфит - 0, 3; агар микробиологический - 18,0.
При таком соотношении ингредиентов на испытуемой среде колонии Brucella abortus 544, Brucella abortus 19BA, Brucella suis 1330, Brucella melitensis 16M начинали формироваться через 48 ч отмечался интенсивный рост колоний через 72 ч (на 3 сутки) при посеве 0,1 мл из 10-6 разведения вырастает 184; 50; 86; 134 колоний диаметром 1,5 мм соответственно, из 10-7 разведения вырастает 22; 12; 4; 18 колонии соответственно типичных по морфологии бруцеллезному микробу, а на бруцеллагаре начинали формироваться колонии через 48 ч, отмечался интенсивный рост колоний через 72 ч (на 3 сутки) при посеве 0,1 мл из 10-6 и 10-7 разведений вырастало 151; 37; 68; 98 и 23; 8; 6; 15 колоний соответственно диаметром 1,5 мм. Контрольная среда бруцеллагар - питательная среда темно- коричневого цвета в микроскоп не просматривается морфология колоний.
Пример 3. Культуры выращивали на питательной среде плотной для культивирования возбудителя бруцеллезного микроба Brucella abortus 544, Brucella abortus 19B A. Brucella suis 1330, Brucella melitensis 16M содержащей, г/л: мясную воду - 1200,0; пептон сухой ферментативный - 12,0; сыворотку крови лошади нормальной для культивирования микоплазм на питательных средах жидкую - 150,0; натрий хлористый - 6,0; глюкозу -
При таком соотношении ингредиентов колонии Brucella abortus 544, Brucella abortus 19BA, Brucella suis 1330, Brucella melitensis 16M на испытуемой среде начинали формироваться через 67 ч, через 76 ч (на 3 сутки - 4 сутки) отмечался интенсивный рост колоний, при посеве 0,1 мл из разведения 10-6 вырастало 102; 25; 39; 72 колоний указанных штаммов, соответственно, диаметром 1,5 мм. Из разведения 10-7 вырастало 8; 7; 4; 8 типичных по морфологии колоний вышеуказанных штаммов, соответственно, а на бруцеллагаре начинали формироваться колонии через 48 ч, через 72 ч (на 3 сутки) отмечался интенсивный рост колоний, при посеве по 0,1 мл из разведений 10-6 и 10-7 вырастало 151; 37; 68; 98 и 23; 8; 6; 15 колоний указанных штаммов, соответственно, диаметром 1,5 мм. Контрольная среда бруцеллагар - питательная среда темно-коричневого цвета, морфология колоний в микроскоп не просматривается.
Таким образом, заявленная питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллеза (пример №2) является оптимальной по количеству подобранных ингредиентов, что позволяет получить достаточное количество колоний в максимально ранние сроки -через 48 ч, а через 72 ч отмечается увеличение колоний до 1,5 мм в диаметре.
Claims (2)
- Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллеза, при следующем соотношении ингредиентов:
-
мясная вода двойной концентрации 800-1200 мл пептон сухой ферментативный 18,0-22,0 г сыворотка крови лошади нормальная для культивирования микоплазм на питательных средах жидкая 90-150 мл натрий хлористый 4,0-6,0 г глюкоза 5,0-15,0 г глицерин 15-25 мл натрия метабисульфит 0,1-0,5 г агар микробиологический 14,0-22,0 г
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017142220A RU2688335C1 (ru) | 2017-12-04 | 2017-12-04 | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017142220A RU2688335C1 (ru) | 2017-12-04 | 2017-12-04 | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2688335C1 true RU2688335C1 (ru) | 2019-05-21 |
Family
ID=66636526
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017142220A RU2688335C1 (ru) | 2017-12-04 | 2017-12-04 | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2688335C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2748808C1 (ru) * | 2020-09-21 | 2021-05-31 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Универсальная питательная среда плотная для выращивания биомассы бруцелл |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2148638C1 (ru) * | 1998-06-22 | 2000-05-10 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Синтетическая питательная среда для выращивания бруцелл |
| RU2238973C1 (ru) * | 2003-03-24 | 2004-10-27 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Питательная среда (жидкая) для культивирования бруцелл |
| RU2580028C1 (ru) * | 2014-12-26 | 2016-04-10 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда плотная для культивирования бруцелл |
-
2017
- 2017-12-04 RU RU2017142220A patent/RU2688335C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2148638C1 (ru) * | 1998-06-22 | 2000-05-10 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Синтетическая питательная среда для выращивания бруцелл |
| RU2238973C1 (ru) * | 2003-03-24 | 2004-10-27 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Питательная среда (жидкая) для культивирования бруцелл |
| RU2580028C1 (ru) * | 2014-12-26 | 2016-04-10 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда плотная для культивирования бруцелл |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ПОЛЯК М.С., СУХАРЕВИЧ В.И., СУХАРЕВИЧ М.Э., Питательные среды в медицинской микробиологии, Санкт- Петербург, Элби- СПб, 2008, с. 65-66. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2748808C1 (ru) * | 2020-09-21 | 2021-05-31 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Универсальная питательная среда плотная для выращивания биомассы бруцелл |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Stuart et al. | Studies on bacteriologically sterile Moina macrocopa and their food requirements | |
| RU2688335C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза | |
| RU2412240C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| RU2681285C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БРУЦЕЛЛ ВИДА Brucella neotomae | |
| RU2580028C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования бруцелл | |
| RU2626568C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования и сбора биомассы чумного микроба вакцинного штамма Y.pestis EV | |
| RU2748808C1 (ru) | Универсальная питательная среда плотная для выращивания биомассы бруцелл | |
| RU2687364C2 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ B.ovis | |
| RU2435842C1 (ru) | Питательная среда транспортная (жидкая) для культивирования бруцеллезного микроба | |
| RU2648153C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования чумного микроба | |
| RU2529364C1 (ru) | Бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба | |
| RU2728379C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования бруцелл | |
| RU2681499C1 (ru) | Питательная среда плотная на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов | |
| RU2299238C2 (ru) | Питательная среда для культивирования бруцелл | |
| RU2702174C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И СБОРА БИОМАССЫ ВАКЦИННОГО ШТАММА ЧУМНОГО МИКРОБА Y.pestis EV | |
| CN113207912A (zh) | 一种鸡大肠杆菌生物消毒剂及其制备与应用 | |
| RU2460768C1 (ru) | Питательная среда плотная для выращивания легионелл | |
| RU2663720C1 (ru) | Пробиотик на основе штамма бактерий Bacillus subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 и способ применения пробиотика для профилактики желудочно- кишечных заболеваний у сельскохозяйственных животных и птиц | |
| RU2346052C1 (ru) | Двухфазная питательная среда для выделения бруцеллезного микроба | |
| RU2460774C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| Al-Azzauy et al. | The beetroot juice as a bacterial growth and maintenance medium for many pathogenic bacteria | |
| CN111109289A (zh) | 一种稳定性固体过氧化氢加合物及其在畜禽、水产养殖领域的应用 | |
| RU2510416C1 (ru) | Питательная среда для выделения лактобактерий | |
| RU2644248C2 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования и выращивания туляремийного микроба | |
| RU2247775C1 (ru) | Транспортная жидкая питательная среда для сбора, культивирования и транспортировки крови больных, подозреваемых на заболевание бруцеллезом |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191205 |