RU2681499C1 - Питательная среда плотная на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов - Google Patents
Питательная среда плотная на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2681499C1 RU2681499C1 RU2017142222A RU2017142222A RU2681499C1 RU 2681499 C1 RU2681499 C1 RU 2681499C1 RU 2017142222 A RU2017142222 A RU 2017142222A RU 2017142222 A RU2017142222 A RU 2017142222A RU 2681499 C1 RU2681499 C1 RU 2681499C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- microorganisms
- cultivation
- nutrient medium
- secondary product
- sodium
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 29
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 title claims abstract description 24
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 24
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 19
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 16
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 10
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 26
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 17
- 241001622809 Serratia plymuthica Species 0.000 description 16
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 15
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 241000156692 Shigella flexneri 1a Species 0.000 description 11
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 10
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000001054 red pigment Substances 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 3
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- UKTDQTGMXUHPIF-UHFFFAOYSA-N [Na].S(O)(O)=O Chemical compound [Na].S(O)(O)=O UKTDQTGMXUHPIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hcl hcl Chemical compound Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006241 metabolic reaction Methods 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000003463 sulfur Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к микробиологии, а именно к приготовлению плотных питательных сред, которые создают оптимальные условия для культивирования микроорганизмов. Питательная среда для культивирования микроорганизмов содержит основу вторичного продукта кислотного гидролизата говяжьего мяса, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, натрий сернистокислый, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов. Изобретение позволяет решить задачу оптимизации состава питательной среды с обеспечением стабильного роста достаточного количества выросших колоний микроорганизмов. 3 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, именно к получению питательных сред, которые создают оптимальные условия для культивирования микроорганизмов.
Известна питательная среда для культивирования микроорганизмов, включающая, г/л: гидролизат говяжьего мяса с содержанием общего азота 250-300 мг % и аминного азота 30-130 мг % - 120,0, разведенный дистиллированной водой до 1 л, натрий хлористый - 5,0; натрия дигидрофосфат - 0,3; агар микробиологический - 24,0. Кипятят до полного растворения агар-агара. Фильтруют в горячем состоянии через ватно-марлевый фильтр. Разливают во флаконы, стерилизуют 30 мин при 1 атм. (М.С. Поляк; В.И. Сухаревич; М.Э. Сухаревич. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СП6.-2008. С. 66-67).
Недостатком данной среды является нестабильность роста микроорганизмов.
Наиболее близкой к предполагаемому изобретению является питательная среда для культивирования микроорганизмов, включающая, г/л: гидролизат говяжьего мяса с содержанием общего азота 700-900 мг % и аминного азота 0,12-0,14% - 180,0, натрий хлористый - 4,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 4,0. Доводят до кипения, устанавливают рН 7,2±0,2 при помощи (20±1)% раствора натрия гидроокиси (если рН ниже заданного значения), или раствором соляной кислоты 1:1 (если рН выше заданного значения), агар микробиологический - 18,0; питьевая вода - до 1 литра. (Промышленный регламент на производство вакцины чумной живой, лиофилизата для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций. ПР 01897080-09-09. Регистрационный №2134-09. 2009 г. 226 с.).
Недостатком данной среды является ее дороговизна.
Целью изобретения является получение качественной питательной среды плотной для культивирования микроорганизмов на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса, которая обеспечивает стабильный рост достаточного количества колоний на пластинках питательного агара.
Сущность предполагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда плотная в качестве питательной основы содержит вторичный продукт гидролизата говяжьего мяса, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, агар микробиологический, с добавлением в среду стимулирующей добавки - натрия сернистокислого, а также дистиллированной воды при следующем соотношении ингредиентов, г/л:
| Основа вторичного продукта кислотного | |
| гидролизата говяжьего мяса с содержанием | |
| амминного азота 421±6 мг% | 10,0-50,0 |
| Натрий хлористый | 4,0-6,0 |
| Натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный | 3,0-5,0 |
| Натрий сернистокислый | 0,15-0,35 |
| Агар микробиологический | 6,0-10,0 |
| Дистиллированная вода | до 1 л |
Основа вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса, содержащая, в среднем, 0,56% белка. Благодаря высокому содержанию пептидов - 17,5%; белка (по методу Бредфорда) - 106 мг %; общего белка (по Кьельдалю) - 2,1%; аминного азота - 0,98 мг %, углеводов - 0,15%; хлоридов - 1,8%, сухого остатка - 5,25%, вторичный продукт гидролизата говяжьего мяса является полноценной питательной основой для культивирования микроорганизмов.
Натрий хлористый 99,9%, хч, ГОСТ 4233-77, партия 246, срок годности 09.2019. Производитель ООО «НеваРеактив». Бактерии нуждаются в минимальном количестве солей. Будучи растворены в питательной среде и находясь в состоянии электролитического распада, ионизируемые минеральные соединения являются одновременно катализаторами различных химических процессов, происходящих в микробной клетке.
Включение в состав среды натрия фосфорнокислого 2-замещенного 12-водного обосновано широким использованием фосфатов при приготовлении питательных сред, т.к. это единственные неорганические соединения, обладающие буферным действием в физиологически важном диапазоне рН, они малотоксичны (Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов. - М., 1989). (М.С. Поляк; В.И. Сухаревич; М.Э. Сухаревич. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СП6. - 2008. - С. 37-38).
Натрий сернистокислый ГОСТ 195-77, ЧДА, дата поступления 19.01.16 г., партия №15, порошок белого цвета, растворим в воде. Выдерживает испытание п. 3.4. ГОСТ 195-77. Определение щелочности, %, - не более 0,048. Массовая доля основного вещества, %, - не менее 99,1. Дата контроля 26.01.16 г. Срок хранения 6 месяцев. Изготовитель АО «Химический завод им. Л.Я. Карпова». Натрий сернистокислый является стимулятором роста микроорганизмов, источником серы и восстановителем окислительно-восстановительного потенциала питательной среды. Сера, присутствующая в натрии сернистокислом, необходима для белка клеток микроорганизмов в количестве 1%. Для подавляющего числа микроорганизмов, в том числе и патогенных, благоприятной средой для роста и размножения является среда с нейтральной реакцией (рН 7,0±0,5), поэтому уровень рН среды до нужного значения необходимо контролировать, этот фактор доводят до нужного использованием сернистых солей или кислот. Этим фактором и является натрий сернистокислый. При добавлении натрия сернистокислого среда становится прозрачнее.
Агар микробиологический - агар бактериологический (европейский тип). Производитель: «Pronadisa» Испания. Партия LF 15130184. Срок годности до 10.2017 г. Дата изготовления: октябрь 2013 г. Порошок светло-кремового цвета сероватого оттенка, запах без постороннего, свойственный студню с массовой долей сухого агара 0,85%. Температура плавления студня с массовой долей сухого агара 0,85% не ниже 80°С, температура застудневания - 30-37°С, прочность студня - не менее 350±40 г. Главная особенность агара - его желирующая способность.
Дистиллированная вода ГОСТ 6709-72 отвечает всем гигиеническим требованиям. Внешний вид - прозрачная жидкость, хлориды, мг/дм : нет, нитраты, мг/дм3: нет. Удельная электропроводимость при 20°С, См/м - 0,38, рН - 6,5. Вода составляет 80-90% от клеточной массы микроорганизмов и играет важнейшую роль в их физиологических функциях, а также входит состав структурных элементов клетки, служит средой для биохимических реакций, источником кислорода в процессах метаболизма, непосредственно участвует в метаболических реакциях, например в реакциях гидролиза.
Приготовление основы вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов.
Способ приготовления питательной основы для выращивания микроорганизмов заключается в следующем: оставшуюся после гидролиза говяжьего мяса и декантации жидкой фракции минерально-белковую субстанцию помещают в противни из нержавеющей стали равномерным слоем толщиной 0,8-1,0 см и замораживают в холодильной установке TEFCOLD SE-45 при температуре минус 39,0-40,0°С на протяжении 72 часов. Последующее высушивание замороженной субстанции осуществляют сублимационным способом в лиофильной сушилке ЛС-500 («Проинтех») при рабочем давлении в камере высушивания 85-95 Па, температуре конденсора - минус 49,0-50,0°С и общей длительности цикла сушки - 29 часов.
Остаточная влажность высушенной субстанции - 3-4%. Количество влаги в высушенных образцах вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса измеряют с помощью анализатора влагосодержания MB 25 (Ohaus). Показатели учитывают при выбранной опции автоматического измерения с температурой нагрева до 100°С.
Высушенную субстанцию измельчают до порошкообразного состояния, помещают в сухую, чистую, герметично закрываемую тару и хранят при температуре не выше 25°С.
Полученную массу высушивают лиофильно с предварительным замораживанием при температуре минус 40,0±0,5°С в течение 72 часов при рабочем давлении в камере высушивания 8,0-9,0 Па при температуре конденсора минус 50,0±1°С, общей длительности цикла сушки 28 часов до остаточной влажности 9±1%. Затем из полученного порошка удаляют липиды при помощи петролейного эфира (ТУ 6-02-1244-83). Полученный белоксодержащий порошок впоследствии подвергают кислотному гидролизу по классической методике Козлова Ю.А. (1950) в собственной модификации, которая заключается в следующем: 40 граммов белоксодержащего порошка добавляют к 1 л 1% соляной кислоты (HCl) (х.ч., ГОСТ 3118-77), доводят рН до 3,28 и автоклавируют при температуре плюс 125°С в течение 60 мин. Затем гидролизат нейтрализуют 20% раствором натрия гидроокиси (NaOH) (ч.д.а., ГОСТ 4328-77) до рН 6,6±0,1, полученный раствор центрифугируют при 4800 оборотах в мин при температуре плюс 4°С, надосадочную жидкость фильтруют через 0,2 мкм стерилизующий фильтр (Sartorius). В фильтрате (гидролизате) аминный азот составляет 421±6 мг %, сухой остаток - 5,25±0,05%.
Приготовление питательной среды
Питательную среду на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов готовят следующим способом: взвешивают навеску основы вторичного продукта кислотного гидролизата говяжьего мяса в оптимальной дозе 30,0; затем добавляют натрий хлористый - 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 4,0; агар микробиологический - 8,0; дистиллированную воду - до 1 литра. Среду кипятят до полного растворения ингредиентов, затем устанавливают рН 7,2±0,1 с помощью 20% раствора натрия гидроокиси, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, затем в фильтрат добавляют стимулирующую добавку - натрий сернистокислый - 0,25, разливают в градуированные флаконы по 200,0 мл, закрывают ватно-марлевыми пробками и бумагой Крафт, стерилизуют при 0,5 атм. в течение 30 мин. После стерилизации охлаждают до 56°С, разливают в стерильные чашки Петри по 30 мл.
Согласно МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред» М., 2008, для контроля специфической активности (чувствительности и стабильности основных биологических свойств микроорганизмов) готовых к употреблению плотных питательных сред для культивирования различных микроорганизмов используют тест-штаммы S. flexneri 1a 8516, S. sonnei «S-form», P. aeruginosa 27/99, S. plymuthica 1. Тест-штаммы S. flexneri 1a 8516 и S. sonnei «S-form» при посеве из разведения 10-6 через 18-20 ч инкубации при температуре 37°С должны вырастать в виде изолированных бесцветных, прозрачных колоний. Тест-штаммы P. aeruginosa 27/99 и S. plymuthica 1 при посеве взвеси концентрацией 101 м.к./мл через 18-20 ч инкубации при температуре 37°С и 22°С, соответственно, должны образовывать ярко выраженные сине-зеленый и оранжево-красный пигменты, соответственно (МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред» М., 2008, с. 46).
Подготовка тест-штаммов для контроля плотной питательной среды на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов.
Тест-штаммы S. flexneri la 8516, S. sonnei «S-form», P. aeruginosa 27/99, S. plymuthica 1 получают из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ФГБУ «НЦЭСМП» МЗ России. Используемые для контроля тест-штаммы должны соответствовать паспортным данным.
Тест-штаммы хранят при температуре 2-8°С в лиофилизированном состоянии или на среде Романова (МУК 4.2.2316-08, с. 33) или на питательной среде следующего состава: питательный бульон сухой (СПБ) (ФСП 42-0504-5806-04) - 15,0 г или ГРМ-бульон (ФСП 42-0084-6559-05) - 20 г; агар микробиологический - 3,0 г; вода дистиллированная - 1,0 л, рН 7,2±0,2.
Пересевы культур со среды хранения на среду выращивания и вновь на среду хранения проводят через каждые 3 мес, но не более четырех раз.
I ПАССАЖ
Лиофилизированные культуры каждого тест-штамма S. flexneri 1a 8516, S. sonnei «S-form», P. aeruginosa 27/99, S. plymuthica 1 из ампулы или со среды хранения засевают на пробирку с питательным бульоном (СПБ или ГРМ-бульоном в пробирках), в пробирку и на чашку Петри с питательным агаром СПА (ФСП 42-0504-5807-04) или ГРМ-агаром (ФСП 42-0084-6558-05). Посевы с тест-штаммами S. flexneri 1a 8516, S. sonnei «S-form», P. aeruginosa 27/99 инкубируют в течение 18-20 ч при температуре (37±1)°С, с тест-штаммом S. plymuthica 1 - в течение 18-20 ч при температуре (22±2)°С. Выросшие на питательной среде культуры тест-штаммов проверяют визуально на чистоту роста и отсутствие диссоциации (МУК 4.2.2316-08, с. 30).
II ПАССАЖ
Культуру каждого тест-штамма пересевают на две пробирки и на чашку Петри с питательным агаром (СПА или ГРМ-агаром) (в случае отсутствия роста на питательном агаре используют культуру, выросшую в бульоне) и инкубируют в течение 18-20 ч тест-штаммы S. flexneri 1a 8516, S. sonnei «S-form», P. aeruginosa 27/99 при температуре (37±1)°C, S. plymuthica 1 - при температуре (22±2)°C. Выросшие культуры проверяют визуально на чистоту роста и используют для контроля.
Готовят взвесь культуры каждого тест-штамма, соответствующую 10 единицам по отраслевому стандартному образцу мутности (ОСО 42-28-85 соответствующего года выпуска) ФГБУ «НЦЭСМП» МЗ России, с использованием 0,9% раствора натрия хлорида. Полученные взвеси культур S. flexneri 1a 8516 и S. sonnei «S-form» титруют путем последовательных десятикратных разведений каждого тест-штамма до разведения 10-6 в пробирках (ГОСТ 25336-82 Е). Каждое разведение делают отдельной пипеткой объемом 1 мл 2-го класса точности. Для P. aeruginosa 27/99 и S. plymuthica 1 используют взвесь, соответствующую 10 единицам по ОСО (это взвесь концентрацией 1×101 м.к./мл).
Посев тест-штаммов
По 0,1 мл микробной взвеси культуры каждого тест-штамма высевают на две чашки Петри с питательной средой плотной (ВПГГМ) для культивирования микроорганизмов: S. flexneri la 8516 и S. sonnei «S-form» из разведения 10-6, P. aeruginosa 27/99 и S. plymuthica 1 - из суспензии, соответствующей 10 единицам, и стерильным шпателем распределяют взвесь по поверхности агаровой пластинки. Все чашки Петри с посевами S. flexneri la 8516; S. sonnei «S-form» и P aeruginosa 27/99 помещают на 18-20 ч для выращивания в термостате при температуре (37±1)°С, для тест-штамма Serratia plymuthica 1 - при температуре (22±1)°С.
Учет результатов
Через 18-20 ч инкубации тест-штаммов S. flexneri la 8516, S. sonnei «S-form», P. aeruginosa 27/99 при температуре (37±1)°C, a S. plymuthica 1 - через 18-20 ч при температуре (22±2)°С, определяют наличие и характер роста тест-штаммов. Определение проводят визуально.
Тест-штаммы Shigella flexneri 1a 8516 и S. sonnei «S-form» при посеве по 0,1 мл микробной взвеси каждого из тест-штаммов из разведения 10-6 через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1)°С образуют бесцветные, прозрачные, выпуклые, круглые колоний диаметром 1,0-2,0 мм - S. flexneri 1a 8516 и 1,5-2,5 мм - S. sonnei «S-form». Выросшие культуры тест-штаммов Pseudomonas aeruginosa 27/99 и Serratia plymuthica 1 при посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10 ед через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1)°С для P. aeruginosa 27/99 и (22±1)°С для S. plymuthica 1 образуют сине-зеленый и оранжево-красный пигменты, соответственно.
Пример 1. Тест-штаммы выращивают на чашках Петри с питательной средой плотной на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса, содержащей, г/л: основу вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса - 10,0; натрий хлористый - 4,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 3,0; натрий сернистокислый - 0,15; агар микробиологический - 6,0; дистиллированную воду - до 1 л. При таком соотношении ингредиентов через 18-20 ч инкубации при 37°С тест-штаммов S. flexneri 1a 8516 и S. sonnei «S-form» из разведения 10-6 вырастают изолированные бесцветные, прозрачные, выпуклые, круглые колонии в недостаточном количестве :1 и 2, соответственно, диаметром 1,0 мм. Выросшие из суспензии, соответствующей 10 единицам, культуры P. aeruginosa 27/99 и S. plymuthica 1 образуют неярко выраженные сине-зеленый и оранжево-красный пигменты, соответственно.
Пример 2. Тест-штаммы выращивают на чашках Петри с питательной средой плотной на основе вторичного гидролизата говяжьего мяса, содержащей, г/л: основу вторичного продукта кислотного гидролизата говяжьего мяса - 30,0; натрий хлористый - 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 4,0; натрий сернистокислый - 0,25; агар микробиологический - 8,0; дистиллированную воду - до 1 л. При таком соотношении ингредиентов через 18-20 ч инкубации при 37°С тест-штаммов S. flexneri 1a 8516 и 51 sonnei «S-form» из разведения 10-6 вырастают изолированные бесцветные, прозрачные, выпуклые, круглые колонии в достаточном количестве: 30 и 35, соответственно, диаметром 1,2-1,8 мм. Выросшие из суспензии, соответствующей 10 единицам, культуры P. aeruginosa 27/99 и S. plymuthica 1 образуют ярко выраженные сине-зеленый и оранжево-красный пигменты, соответственно.
Пример 3. Тест-штаммы выращивают на чашках Петри с питательной средой плотной на основе вторичного кислотного гидролизата говяжьего мяса, содержащей, г/л: основу вторичного гидролизата говяжьего мяса - 50,0; натрий хлористый - 6,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 5,0; натрий сернистокислый - 0,35; агар микробиологический - 10,0; дистиллированную воду - до 1 л. При таком соотношении ингредиентов через 18-20 ч инкубации при 37°С тест-штаммов S. flexneri 1a 8516 и S. sonnei «S form» из разведения 10-6 вырастают изолированные бесцветные, прозрачные, выпуклые, круглые колонии в недостаточном количестве: 2 и 3, соответственно, диаметром 1,0-1,2 мм. Выросшие из суспензии, соответствующей 10 единицам, культуры P. aeruginosa 27/99 и S. plymuthica 1 образуют неярко выраженные сине-зеленый и оранжево-красный пигменты, соответственно.
Таким образом, заявленная питательная среда плотная на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов (пример 2) может применяться для культивирования различных микроорганизмов, т.к. удовлетворяет требованиям по специфической активности МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред» М., 2008, на основании стабильного образования достаточного количества изолированных бесцветных, прозрачных колоний тест-штаммами S. flexneri 1a 8516 и S. sonnei «S-form» и образования пигментов сине-зеленого и оранжево-красного цвета тест-штаммами P. aeruginosa 27/99 и S. plymuthica 1, соответственно.
Claims (2)
- Питательная среда плотная на основе вторичного продукта кислотного гидролизата из говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов, содержащая, г/л:
-
основа вторичного продукта кислотного гидролизата говяжьего мяса с содержанием аминного азота 421±6 мг % 10,0-50,0 натрий хлористый 4,0-6,0 натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный 3,0-5,0 натрий сернистокислый 0,15-0,35 агар микробиологический 6,0-10,0 дистиллированная вода до 1 л
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017142222A RU2681499C1 (ru) | 2017-12-04 | 2017-12-04 | Питательная среда плотная на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017142222A RU2681499C1 (ru) | 2017-12-04 | 2017-12-04 | Питательная среда плотная на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2681499C1 true RU2681499C1 (ru) | 2019-03-06 |
Family
ID=65632835
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017142222A RU2681499C1 (ru) | 2017-12-04 | 2017-12-04 | Питательная среда плотная на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2681499C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2748492C1 (ru) * | 2020-07-17 | 2021-05-26 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда плотная для контроля количества живых микробных клеток вакцинного штамма чумного микроба y. pestis ev |
| RU2800127C1 (ru) * | 2022-10-06 | 2023-07-18 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU492544A1 (ru) * | 1974-03-27 | 1975-11-25 | Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт | Среда дл выращивани патогенных микроорганизмов |
| RU2245362C2 (ru) * | 2002-12-15 | 2005-01-27 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба |
| RU2348686C2 (ru) * | 2007-04-20 | 2009-03-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Ставропольский государственный университет | Питательная среда для культивирования микроорганизмов |
| RU2410424C1 (ru) * | 2009-05-25 | 2011-01-27 | Государственное общеобразовательное учреждение высшего профессионального образования Ставропольский государственный университет | Питательная среда для культивирования микроорганизмов |
-
2017
- 2017-12-04 RU RU2017142222A patent/RU2681499C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU492544A1 (ru) * | 1974-03-27 | 1975-11-25 | Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт | Среда дл выращивани патогенных микроорганизмов |
| RU2245362C2 (ru) * | 2002-12-15 | 2005-01-27 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба |
| RU2348686C2 (ru) * | 2007-04-20 | 2009-03-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Ставропольский государственный университет | Питательная среда для культивирования микроорганизмов |
| RU2410424C1 (ru) * | 2009-05-25 | 2011-01-27 | Государственное общеобразовательное учреждение высшего профессионального образования Ставропольский государственный университет | Питательная среда для культивирования микроорганизмов |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2748492C1 (ru) * | 2020-07-17 | 2021-05-26 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда плотная для контроля количества живых микробных клеток вакцинного штамма чумного микроба y. pestis ev |
| RU2800127C1 (ru) * | 2022-10-06 | 2023-07-18 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2433170C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ев | |
| CN112175872B (zh) | 一种鼠李糖乳杆菌及其制剂、应用 | |
| RU2681499C1 (ru) | Питательная среда плотная на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов | |
| RU2626568C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования и сбора биомассы чумного микроба вакцинного штамма Y.pestis EV | |
| RU2580028C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования бруцелл | |
| CN110205355A (zh) | 一种微生物高灵敏检测培养基及其制备方法和应用 | |
| RU2412240C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| RU2681285C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БРУЦЕЛЛ ВИДА Brucella neotomae | |
| RU2648153C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования чумного микроба | |
| RU2415923C1 (ru) | Способ получения ферментативного гидролизата из свежей белокочанной капусты и питательная среда для культивирования лактобактерий на его основе | |
| RU2702174C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И СБОРА БИОМАССЫ ВАКЦИННОГО ШТАММА ЧУМНОГО МИКРОБА Y.pestis EV | |
| JP2010075145A (ja) | 一般生菌数測定用培地 | |
| CN109042765A (zh) | 一种绿色环保环境消毒剂的药物组合及其制备方法 | |
| RU2688335C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза | |
| RU2748808C1 (ru) | Универсальная питательная среда плотная для выращивания биомассы бруцелл | |
| RU2708029C1 (ru) | Питательная среда для культивирования yersinia pestis ev | |
| RU2299238C2 (ru) | Питательная среда для культивирования бруцелл | |
| RU2529364C1 (ru) | Бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба | |
| RU2460774C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| RU2410424C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов | |
| RU2687364C2 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ B.ovis | |
| RU2748492C1 (ru) | Питательная среда плотная для контроля количества живых микробных клеток вакцинного штамма чумного микроба y. pestis ev | |
| RU2745504C9 (ru) | Питательная среда жидкая для выращивания и сбора биомассы вакцинного штамма чумного микроба yersinia pestis ev | |
| RU2792438C1 (ru) | Селективная питательная среда с маннитом, желчью и полимиксином для выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia сухая | |
| RU2681116C2 (ru) | Питательная среда плотная для хранения микроба чумы |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191205 |