RU2575797C2 - Биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов - Google Patents
Биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2575797C2 RU2575797C2 RU2014100291/10A RU2014100291A RU2575797C2 RU 2575797 C2 RU2575797 C2 RU 2575797C2 RU 2014100291/10 A RU2014100291/10 A RU 2014100291/10A RU 2014100291 A RU2014100291 A RU 2014100291A RU 2575797 C2 RU2575797 C2 RU 2575797C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- viruses
- temperature
- pike
- reproduction
- extract
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 7
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 23
- 210000003205 Muscles Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 241000277342 Esox lucius Species 0.000 claims abstract description 13
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N (3β)-Cholest-5-en-3-ol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229940107161 Cholesterol Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 230000003287 optical Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 235000003954 Cucurbita pepo var melopepo Nutrition 0.000 claims description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 4
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 claims 1
- 240000001980 Cucurbita pepo Species 0.000 claims 1
- 235000009852 Cucurbita pepo Nutrition 0.000 claims 1
- 240000007366 Cucurbita pepo var. melopepo Species 0.000 claims 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims 1
- 235000020354 squash Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 2
- 241000219122 Cucurbita Species 0.000 abstract 2
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 abstract 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 abstract 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 abstract 1
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 24
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 16
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 14
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 13
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 12
- 239000002609 media Substances 0.000 description 12
- 244000302526 Cucurbita pepo subsp pepo Species 0.000 description 9
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 4
- 210000003501 Vero Cells Anatomy 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 4
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 3
- 108060001685 CNTF Proteins 0.000 description 2
- 210000003754 Fetus Anatomy 0.000 description 2
- 241000219843 Pisum Species 0.000 description 2
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 2
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000001058 adult Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000002458 infectious Effects 0.000 description 2
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229940042115 Methylene blue Drugs 0.000 description 1
- 210000004080 Milk Anatomy 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene (PE) Substances 0.000 description 1
- 229940001941 Soy Proteins Drugs 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structures Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 1
- 235000020664 gamma-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Предложена биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов, представляющая собой экстракт из кабачков и мышц щуки. Указанный экстракт получают экстрагированием измельченных гомогенизатором тканей кабачков и мышц щуки раствором Хэнкса в соотношении 1:3 при температуре 1-2°С в течение 24 ч, центрифугированием и сбором супернатантов. Осуществляют замораживание супернатантов при температуре -20°С в течение 5-7 суток, оттаивание при температуре 4-20°С, очистку. Смешивают полученные экстракты растительного и животного происхождения в соотношении 1:1 и стерилизуют фильтрацией. Полученный экстракт характеризуется следующими показателями: оптической плотностью 0,081±0,004 ед. опт. пл., рН 7,26±0,04, содержанием общего белка 9,1±0,04 г/л, свободного гемоглобина 0 г/л, общих липидов 0,15±0,07 г/л, общего холестерина 0,02±0,01 ммоль/л. Изобретение обеспечивает повышение роста клеток животных и репродукции на них вирусов. 6 табл., 5 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для культивирования линий клеток животных тканей и репродукции на них вирусов.
Из практики культивирования клеток известно, что для этой цели используют сыворотку крови разных видов животных (крупного рогатого скота, лошадей, кроликов, свиней, кур и др.). Известно, что сыворотка крови плодов коров и сыворотка молодых животных обладает более высокой ростостимулирующей активностью, чем сыворотка взрослых животных (Дьяконов Л.П., 2009 // Животная клетка в культуре / Методы применения в биотехнологии. - Изд-во «Спутник», М, 2009. - 656 с. ), но чаще всего клетки выращиваются на среде с сывороткой крови взрослого крупного рогатого скота. Оптимальная концентрация сыворотки в культуральной питательной среде составляет 10% (Голубев Д.Б. и др., 1976 // Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. - Л.: Медицина, 1976 с. 222).
Кроме сывороток крови в состав культуральных питательных сред включают гидролизаты как растительного, так и животного происхождения: ферментативные гидролизаты белков гороха и сои (Гизитдинов Н.Н. и др. // Разработка паточного способа изготовления сухих белковых гидролизатов гороха и сои / Н.Н. Гизитдинов, Ю.Х. Бахтахунов, М.Т. Велямов / Вестник с/х. науки Казахстана. - №1. - 1984. - С. 62-64.; Патент 2103360 РФ, МКИ6 C12N 5/09, 1998, Бюл. №3; Онищенко Г.Г. и др., 2007); предложено значительное число белковых гидролизатов животного происхождения (казеина, молока, цельной крови, сыворотки крови, эмбрионов, внутренних органов, мышечной ткани), а также пептон Витте, бактопептон. Наибольшее распространение в практике культур клеток получила среда с гидролизатом лактальбумина - ГЛА (Melnik J., Riordan J., 1952).
Из всех аналогов, применяемых в качестве биодобавок в культуральные среды при выращивании клеток животных и репродукции на них вирусов, в качестве прототипа мы использовали сыворотку крови плодов коров, так как она оказывает минимальное негативное воздействие, как на рост клеток, так и на накопление в них вирусной массы (Патент RU №2455015 С1, 2012). Но данная биодобавка имеет ряд недостатков:
1. По некоторым оценкам, 55% общей стоимости работ на культурах клеток приходится на сывороточный компонент, хотя он составляет всего 10% от общего объема питательной среды.
2. В связи с резким снижением поголовья КРС возникли большой дефицит в данной сыворотке крови и дороговизна. Поиск замены сыворотки крови животных в культуральной среде более дешевыми биологически активными веществами является перспективным направлением.
Цель предлагаемого изобретения - возможность введения в практику культивирования клеток в качестве ростстимулирующего фактора в питательные среды биодобавки, состоящей из экстрактов кабачков и мышц щуки. Основополагающей позитивной стороной использования данного комбинированного экстракта, является то обстоятельство, что он заведомо не может содержать антител и вирусов против инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных, а также содержит в себе биологически активные вещества как животного, так и растительного происхождения.
Химический состав полученного продукта характеризуется следующими показателями (табл. 1) www.mosbiotehworld.ru.
Схема получения фито-зооэкстратов из кабачков и мышц щуки:
1. Мацерация тканей гомогенизатором;
2. Экстрагирование измельченных тканей раствором Хэнкса в соотношении 1:3 в полиэтиленовые канистры при температуре +1-2ºC в течение 24 часов;
3. Центрифугирование и сбор супернатантов;
4. Замораживание экстрактов при температуре -20ºC в течение 5-7 суток;
5. Оттаивание экстрактов при температуре +4-20ºC;
6. Предварительная очистка экстрактов через марлю, а затем глубинный фильтр EKS;
7. Смешивание экстрактов растительного и животного происхождения в соотношении 1:1;
8. Стерилизующая фильтрация комбинированного экстракта мембранными фильтрами фирм «Millipore», «Владисарт»;
9. Контроль профильтрованных экстрактов на возможное присутствие в них контаминантов путем посева их на бактериологические среды: МПА, МПБ, Китт-Тароцци, ТПС-агар, ТПС-бульон, Сабуро, Чапека.
Пример 1. Изучение состава сыворотки крови плодов коров и комбинированного экстракта из кабачков и мышц щуки (ЭК+ЭМЩ).
Для опытов было приготовлено по 3 серии сыворотки крови плодов коров и комбинированного экстракта из кабачков и мышц щуки, результаты приведены в табл. 2.
Из таблицы 1 следует, что сыворотка крови плодов коров по физико-химическим показателям соответствует требованиям, предъявляемым к ним Минздравом РФ. Что касается фито-зооэкстракта, то он имеет сравнительно низкие оптическую плотность, концентрации общего белка, общих липидов, в том числе холестерина, а свободный гемоглобин в нем отсутствует. Несмотря на низкое содержание общего белка в экстракте, как показано в дальнейших исследованиях, он является хорошей биодобавкой в питательные среды при культивировании клеток и репродукции на них вирусов, так как лишь небольшая часть биологически активных веществ используется клетками.
Пример 2. Рост культур клеток LEK, MDBK, РК-15, Vero на среде Игла MEM с 10% сыворотки крови плодов коров и фито-зооэкстрактом при посевной концентрации 40 тыс кл/мл.
В качестве контроля в опытах использовали сыворотку крови плодов коров. Монослой маточной культуры снимали со стекла раствором трипсина-версена (1:3), далее получали клеточную суспензию и в концентрации 40 тысяч кл/мл рассевали по 2 см3 во флаконы емкостью 10 см3 с посевной площадью 3 см3.
Пролиферативная активность культур клеток MDBK, LEK, РК-15 и Vero исследовалась после 72-часовой инкубации в средах с фито-зооэкстрактом, а также с сывороткой крови плодов коров. Клетки снимали со стекла раствором трипсина-версена (1:3), наливая в каждый флакон по 3 см3, и подсчитывали в камере Горяева. Для дифференциации живых и мертвых клеток использовали 1%-ный раствор метиленового синего. Количество живых клеток подсчитывали в 4-х камерах. Определяли среднее значение и рассчитывали концентрацию клеток в 1 мл по формуле:
где 1000 - количество кубических миллиметров в 1 см3;
а - количество клеток в камере;
н - разведение клеточной суспензии;
0,9 - объем камеры Горяева в мм3.
С сывороткой крови плодов коров и комбинированным экстрактом из кабачков и мышц щуки было проведено по 5 серий опытов. Индекс пролиферации клеток, как показатель ростстимулирующей активности, рассчитывали общепринятым методом по Антонову Б.И. (1986).
Более детально ростстимулирующую активность биодобавок на перечисленных выше перевиваемых культурах клеток приведена в табл. 3.
Из таблицы 2 следует, при культивировании перевиваемых клеток LEK, MDBK, РК-15, Vero, что лучшую пролиферацию их обеспечивает сыворотка крови плодов коров как контрольная (ИП 6,06-7,02), хотя комбинированная биодобавка из экстрактов кабачков и мышц щуки обеспечивает рост клеток почти на том же уровне (ИП 5,65-6,85).
Пример 3. Рост культур клеток РК-15 и Vero при плотности посева 20 тыс кл/см2 на среде Игла MEM с 10% сыворотки крови плодов коров и фито-зооэкстрактом. Результаты исследований отражены в табл. 4.
Из таблицы 3 видно, что комбинированный экстракт из кабачков и мышц щуки хорошо стимулирует рост клеток РК-15 и Vero даже при сравнительно низкой плотности их посева (20 тыс. кл/см2).
Пример 4. Изучение репродукции вирусов инфекционного ринотрахеита (ИРТ), парагриппа-3 (ПГ-3) на перевиваемых культурах клеток MDBK, LEK, соответственно.
В ходе эксперимента было проведено 5 последовательных пассажей каждого вируса. Результаты исследований приведены в табл. 5.
Из таблицы 4 следует, что репродукция вируса инфекционного ринотрахеита в культуре клеток MDBK выше, когда в ростовой среде находилась сыворотка крови плодов коров (титр = 7,1º0,2 lg ТЦД50/см3), но на 0,5 lg ТЦД50/мл меньше в случае использования комбинированной биодобавки из кабачков и мышц щуки (6,6º0,2 lg ТЦД50/см3). Титр вируса парагриппа-3 в культуре клеток LEK, выращенной на среде с фито-зооэкстрактом, был незначительно ниже (6,4º0,3 lg ТЦД50/см3), по сравнению с тем, когда в ростовой среде находилась сыворотка крови плодов коров (6,8º0,3 lg ТЦД50/см3).
Пример 5. Изучение репродукции реовируса тип I штамм «Lang» на перевиваемой культуре клеток Vero. Результаты исследований отражены в табл. 6.
Как видно из таблицы 5, репродукция реовируса на культуре клеток Vero, с добавлением в культуральную среду комбинированного экстракта из кабачков и мышц щуки совпадала по значению, когда клетки культивировались в среде с сывороткой крови плодов коров (1:64 в РГА, 
). Полученные результаты свидетельствуют о беспрепятственном накоплении массы реовируса в культуре клеток Vero, выращиваемой на среде Игла MEM с 10% фито-зооэкстракта.
Claims (1)
- Биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов, представляющая собой экстракт из кабачков и мышц щуки, полученный путем экстрагирования измельченных гомогенизатором тканей кабачков и мышц щуки раствором Хэнкса в соотношении 1:3 при температуре 1-2°C в течение 24 ч, центрифугирования и сбора, полученных супернатантов, замораживания при температуре -20°C в течение 5-7 суток, оттаивания при температуре 4-20°C, очистки, смешивания экстрактов растительного и животного происхождения в соотношении 1:1, стерилизующей фильтрации полученного экстракта, характеризующегося следующими показателями: оптической плотностью 0,081±0,004 ед. опт. пл., pH 7,26±0,04, содержанием общего белка 9,1±0,04 г/л, свободного гемоглобина 0 г/л, общих липидов 0,15±0,07 г/л, общего холестерина 0,02±0,01 ммоль/л.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014100291/10A RU2575797C2 (ru) | 2014-01-09 | Биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014100291/10A RU2575797C2 (ru) | 2014-01-09 | Биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014100291A RU2014100291A (ru) | 2015-07-20 |
| RU2575797C2 true RU2575797C2 (ru) | 2016-02-20 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1700053A1 (ru) * | 1990-02-23 | 1991-12-23 | Институт биохимии АН ЛитССР | Способ культивировани вируса лейкоза крупного рогатого скота |
| RU2377295C1 (ru) * | 2008-06-11 | 2009-12-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1700053A1 (ru) * | 1990-02-23 | 1991-12-23 | Институт биохимии АН ЛитССР | Способ культивировани вируса лейкоза крупного рогатого скота |
| RU2377295C1 (ru) * | 2008-06-11 | 2009-12-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Методы культивирования клеток. Под редакцией Г.П. Пинаева. Л.: "Наука", 1988, с. 47-54. * |
| ХАЗИЕВ Л.Р. Способ оптимизации состава и свойств культуральной среды для репродукции вирусов // Ученые записки Казанской Государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана, Казань, 2012, том 211, с. 183-187. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gibor | Some ecological relationships between phyto-and zooplankton | |
| KR101950245B1 (ko) | 남조류 스피룰리나 추출물을 함유하는 세포 배양액, 이의 제조방법, 및 이를 이용한 세포의 배양방법 | |
| CN109097298A (zh) | 一种富集培养法制备噬菌蛭弧菌制剂的方法 | |
| CN102492623B (zh) | 海水盾纤毛虫体外活体培养培养基的制备及培养方法 | |
| CN105664150B (zh) | 一种鸡新城疫病毒、禽流感病毒和禽腺病毒三联灭活疫苗 | |
| CN104152403B (zh) | 一种建立鹅胚上皮细胞系的方法及建立的鹅胚上皮细胞系 | |
| CN106222131B (zh) | 一种羔羊睾丸支持细胞自然传代细胞系及其在羊痘病毒分离培养和增殖中的用途 | |
| CN105582533A (zh) | 一种禽流感病毒、禽腺病毒二联灭活疫苗 | |
| CN108048327A (zh) | 一种高效分离硅藻的新方法 | |
| CN104830665A (zh) | 螺旋藻的培育方法及专用装置 | |
| CN105535958A (zh) | 一种鸡新城疫病毒、传染性支气管炎、禽腺病毒三联灭活疫苗 | |
| CN102886043B (zh) | 猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN101481679A (zh) | 鱼卵细胞提取物及其在诱导人成体细胞分化为多能干细胞中的应用 | |
| RU2575797C2 (ru) | Биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов | |
| CN110684718B (zh) | 一种暗纹东方鲀原代肝细胞高效分离及培养方法 | |
| CN103484425B (zh) | 一种大黄鱼头肾细胞系及其构建方法 | |
| CN105969739A (zh) | 一株适应于Vero细胞培养的赤羽病病毒疫苗株及其用途 | |
| RU2414227C1 (ru) | Иммуномодулятор для выращивания бройлеров и способ его применения | |
| Bbockelman et al. | Rhabditis maupasi: occurrence in food snails and cultivation | |
| RU2804076C1 (ru) | Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток | |
| CN105770885B (zh) | 一种鸡新城疫病毒、禽腺病毒二联灭活疫苗 | |
| CN103611156A (zh) | 一种禽用五联疫苗及其制备方法 | |
| KR102494136B1 (ko) | 배양육 생산용 근육세포 배양용 배지 조성물, 이의 제조방법 및 세포 생산 방법 | |
| RU2525637C2 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза | |
| RU2202608C2 (ru) | Способ культивирования лептоспир |