RU2012120081A - Применение дендримерной нанотехнологии для доставки биомолекул в растительные клетки - Google Patents

Abstract

1. Способ внесения представляющей интерес молекулы в растительную клетку, имеющую клеточную стенку, для осуществления устойчивой трансформации растения и семян, где способ включает:обеспечение растительной клетки, имеющей клеточную стенку;взаимодействие дендримера, и, необязательно, одного или более CPP, с представляющей интерес молекулой, с образованием активированной дендримерной структуры;приведение в контакт друг с другом клетки, имеющей клеточную стенку, и активированной дендримерной структуры; ипредоставление дендримеру и представляющей интерес молекуле возможности проникновения в клетку, имеющую клеточную стенку.2. Способ по п.1, где взаимодействие дендримера с представляющей интерес молекулой включает сборку представляющей интерес молекулы на поверхности дендримера.3. Способ по п.1, где взаимодействие дендримера с представляющей интерес молекулой включает взаимодействие отрицательно заряженных групп молекулы, представляющей интерес, с заряженными аминогруппами на конце дендримера.4. Способ по п.1, дополнительно включающий предоставление дендримеру возможности проникновения в компартмент растительной клетки, содержащей клеточную стенку.5. Способ по п.4, где компартмент выбран из группы, состоящей из цитозоля, ядра, тонопластов, пластид, этиопласта, хромопласта, лейкопласта, элайопласта, протеинопласта, амилопласта, хлоропласта и просвета двойной мембраны.6. Способ по п.1, где растительная клетка, содержащая клеточную стенку, выбрана из группы, состоящей из клеток табака, моркови, маиса, канолы, рапсового семени, хлопка, пальмы, арахиса, сои,,,и сахарного тростника.7. Способ по п.1, где растительная к�

Claims (21)

1. Способ внесения представляющей интерес молекулы в растительную клетку, имеющую клеточную стенку, для осуществления устойчивой трансформации растения и семян, где способ включает:

обеспечение растительной клетки, имеющей клеточную стенку;

взаимодействие дендримера, и, необязательно, одного или более CPP, с представляющей интерес молекулой, с образованием активированной дендримерной структуры;

приведение в контакт друг с другом клетки, имеющей клеточную стенку, и активированной дендримерной структуры; и

предоставление дендримеру и представляющей интерес молекуле возможности проникновения в клетку, имеющую клеточную стенку.

2. Способ по п.1, где взаимодействие дендримера с представляющей интерес молекулой включает сборку представляющей интерес молекулы на поверхности дендримера.

3. Способ по п.1, где взаимодействие дендримера с представляющей интерес молекулой включает взаимодействие отрицательно заряженных групп молекулы, представляющей интерес, с заряженными аминогруппами на конце дендримера.

4. Способ по п.1, дополнительно включающий предоставление дендримеру возможности проникновения в компартмент растительной клетки, содержащей клеточную стенку.

5. Способ по п.4, где компартмент выбран из группы, состоящей из цитозоля, ядра, тонопластов, пластид, этиопласта, хромопласта, лейкопласта, элайопласта, протеинопласта, амилопласта, хлоропласта и просвета двойной мембраны.

6. Способ по п.1, где растительная клетка, содержащая клеточную стенку, выбрана из группы, состоящей из клеток табака, моркови, маиса, канолы, рапсового семени, хлопка, пальмы, арахиса, сои, Oryza sp., Arabidopsis sp., Ricinus sp. и сахарного тростника.

7. Способ по п.1, где растительная клетка является клеткой из ткани, выбранной из группы, состоящей из эмбриона, меристемы, каллюса, пыльцы, листьев, пыльников, корней, корневых кончиков, цветков, семян, стручков и стеблей.

8. Способ по п.1, где дендример содержит полиамидоаминный дендример.

9. Способ по п.1, дополнительно включающий дериватизирование поверхности дендримера.

10. Способ по п.1, где представляющая интерес молекула содержит компонент, выбранный из группы, состоящей из нуклеиновых кислот, ДНК, РНК, молекул РНКи, генов, плазмид, космид, YAC, BAC, полипептидов, ферментов, гормонов, гликопептидов, сахаров, жиров, сигнальных пептидов, антител, витаминов, мессенджеров, вторичных мессенджеров, аминокислот, цАМФ, лекарственных средств, гербицидов, фунгицидов, антибиотиков и их комбинаций.

11. Способ по п.9, где представляющая интерес молекула содержит ген.

12. Способ по п.10, где ген представляет собой ген чужеродного белка, агрономически важный ген или маркерный ген.

13. Способ по п.10, дополнительно включающий отбор клеток, в которых имеется устойчиво интегрированная представляющая интерес молекула.

14. Способ по п.12, где отобранные клетки являются регенерируемыми клетками.

15. Способ по п.13, дополнительно включающий регенерирование растения из регенерируемых клеток.

16. Способ по п.1, где дендример содержит дендримерный реагент.

17. Способ стабильного экспрессирования гена, где способ включает:

обеспечение растительной клетки, имеющей клеточную стенку;

взаимодействие дендримера и, необязательно, одного или более CPP с геном для образования активированной дендримерной структуры;

приведение в контакт друг с другом растительной клетки, имеющей клеточную стенку, и активированной дендримерной структуры;

предоставление дендримеру и гену возможности проникновения в растительную клетку, содержащую клеточную стенку; и

экспрессирование гена в потомстве растения, имеющего растительную клетку.

18. Способ по п.17, где ген экспрессируется в хлоропласте.

19. Способ по п.17, дополнительно включающий отбор клеток, стабильно экспрессирующих ген.

20. Способ переноса молекулярного вещества в растительную клетку, включающий:

взаимодействие дендримера и, необязательно, одного или более CPP с плазмидной ДНК с образованием активированной дендримерной структуры; и

приведение активированной дендримерной структуры в контакт с интактной имеющей стенку растительной клеткой в условиях, допускающих проникновение дендримера и гена из плазмидной ДНК в растительную клетку.

21. Способ по п. 20, дополнительно включающий стабильно экспрессированный ген в потомстве растения, имеющего растительную клетку.