RU2011141308A

RU2011141308A - Модифицированный антигенный а бета-пептид, его получение и применение

Info

Publication number: RU2011141308A
Application number: RU2011141308/15A
Authority: RU
Inventors: Андреа ПФАЙФЕР; Клод НИКОЛО
Original assignee: Ац Иммуне С.А.
Priority date: 2005-12-12
Filing date: 2011-10-12
Publication date: 2013-04-20
Also published as: IL191397A; NO346055B1; EP2380588B1; NZ568384A; MY181173A; AR058327A1; CA2633399A1; CN101330923B; US20080267986A1; JP5249043B2; DK1959991T3; RU2008128133A; US7807175B2; ES2551604T3; CA2633399C; ZA200804918B; SG172617A1; US8603487B2; EP1959991A2; EP1959991B1

Abstract

1. Способ получения модифицированного антигенного Аβ-пептида, включающий (а) получение заготовки антигенного Аβ-пептида с помощью стандартного автоматизированного пептидного синтеза на смоле; и (б) модификацию полученной заготовки антигенного Аβ-пептида посредством прививки на смоле липофильного или гидрофобного фрагмента с концевыми остатками полученной заготовки Аβ-пептида.2. Способ по п.1, включающий этапы:(а) присоединения защищенной аминокислоты к смоле с использованием известного в химии метода пришивки;(б) удаления защищенной группы и присоединения второго защищенного аминокислотного остатка:(в) синтез антигенного Аβ-пептида на смоле с помощью стандартного автоматизированного пептидного синтеза, используя известный в химии метод пришивки;(г) на конечном этапе объединения двух дополнительно защищенных аминокислотных остатков в растущий пептидный фрагмент;(д) селективного отщепления Mtt групп от защищенных аминокислотных остатков и сочетания с пальмитиновой кислотой; и(е) отщепления всех защитных групп и последовательного отделения пальмитоилированного антигенного Аβ-пептида от смолы.3. Способ по п.1, где защищенные аминокислотные остатки на этапах а) и б) являются Fmoc-защищенными.4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где полученный модифицированный антигенный Аβ-пептида обладает высокой частотой.5. Способ по п.4, где модифицированный антигенный Аβ-пептида обладает частотой от 50% до 95%.6. Способ по п.5, где модифицированный антигенный Аβ-пептид состоит из встречающегося один раз или повторяющегося несколько раз участка, включающего от 13 до 15 смежных аминокислотных остатков из N-концевой област

Claims

1. Способ получения модифицированного антигенного Аβ-пептида, включающий (а) получение заготовки антигенного Аβ-пептида с помощью стандартного автоматизированного пептидного синтеза на смоле; и (б) модификацию полученной заготовки антигенного Аβ-пептида посредством прививки на смоле липофильного или гидрофобного фрагмента с концевыми остатками полученной заготовки Аβ-пептида.

2. Способ по п.1, включающий этапы:

(а) присоединения защищенной аминокислоты к смоле с использованием известного в химии метода пришивки;

(б) удаления защищенной группы и присоединения второго защищенного аминокислотного остатка:

(в) синтез антигенного Аβ-пептида на смоле с помощью стандартного автоматизированного пептидного синтеза, используя известный в химии метод пришивки;

(г) на конечном этапе объединения двух дополнительно защищенных аминокислотных остатков в растущий пептидный фрагмент;

(д) селективного отщепления Mtt групп от защищенных аминокислотных остатков и сочетания с пальмитиновой кислотой; и

(е) отщепления всех защитных групп и последовательного отделения пальмитоилированного антигенного Аβ-пептида от смолы.

3. Способ по п.1, где защищенные аминокислотные остатки на этапах а) и б) являются Fmoc-защищенными.

4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где полученный модифицированный антигенный Аβ-пептида обладает высокой частотой.

5. Способ по п.4, где модифицированный антигенный Аβ-пептида обладает частотой от 50% до 95%.

6. Способ по п.5, где модифицированный антигенный Аβ-пептид состоит из встречающегося один раз или повторяющегося несколько раз участка, включающего от 13 до 15 смежных аминокислотных остатков из N-концевой области 1-16 или 1-17 Аβ-пептида.

7. Способ по п.6, где модифицированный фрагмент Аβ-пептид состоит из встречающегося один раз или повторяющегося несколько раз участка, включающего от 13 до 15 смежных аминокислотных остатков из N-концевой области 1-16 или 1-17 Аβ-пептида, который выбирают из группы, включающей остатки 1-15, 1-14 и 1-13.

8. Способ по п.7, в котором модифицированный Аβ-пептид выбирают из группы, включающей антигенный Aβ_1-15-пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO:1, и Аβ_1-16(Δ14), последовательность которого представлена в SEQ ID NO:3.

9. Способ по п.1, в котором модифицированный антигенный Аβ-пептид модифицируют с помощью липофильного или гидрофобного фрагмента, который облегчает встраивание в липидный бислой липосомы, представляющей собой носитель/адъювант.

10. Способ по п.9, в котором липофильный или гидрофобный фрагмент представляет собой жирную кислоту, триглицерид или фосфолипид.

11. Способ по п.10, в котором гидрофобный фрагмент представляет собой пальмитиновую кислоту.

12. Способ по п.2 или 11, в котором антигенный Аβ-пептид модифицируют с помощью 2 пальмитоилированных аминокислотных остатков, присоединенных с помощью ковалентной связи к N- и С-концу пептида соответственно.

13. Способ по п.2 или 11, в котором антигенный Аβ-пептид модифицируют с помощью 4 пальмитоилированных аминокислотных остатков, два из которых присоединены с помощью ковалентной связи к N- и С-концу пептида соответственно.

14. Способ получения антигенной конструкции, включающий реконструирование модифицированного антигенного Аβ-пептида, полученного способом по любому из предыдущих пунктов в носитель.

15. Способ по п.14, где модифицированный антигенный Аβ-пептид реконструируют в липосому.

16. Способ по п.15, в котором антигенный β-амилоидный пептид является пальмитоилированным антигенным Аβ_1-15-пептидом модифицированным путем присоединения с помощью ковалентной связи пальмитоилированных остатков, который реконструируют в липосоме.

17. Способ по п.5, где 2 или большее количество молекул пальмитоилированного антигенного Aβ_1-15-пептида модифицированного путем присоединения с помощью ковалентной связи пальмитоилированных остатков на каждом конце пептида реконструируют в одной липосоме.

18. Способ по п.15, где препарат липосомы содержит адъювант.

19. Способ по п.18, где адьювантом является липид А.

20. Модифицированный антигенный Aβ-пептид, полученный способом по любому из пп.1-19.

21. Антигенпый пептид по п.20, который имеет частоту от 50% до 95%.

22. Антигенная конструкция, включающая модифицированный антигенный Аβ-пептид по любому из пп.20 или 21.

23. Композиция, включающая модифицированный антигенный Аβ-пептид по п.20 или 21 или антигенную конструкцию по п.22.

24. Композиция по п.23, которая имеет гомогенность от 50% до 95% в отношении модифицированного антигенного Аβ-пептида.

25. Композиция по п.24, у которой гомогенность равна от 80% до 95%.

26. Композиция по п.23, включающая ингибитор системы комплемента.

27. Композиция по п.23, включающая соединение, которое вызывает повышенное, регулируемое высвобождение кислорода в тканях, в частности аллостерический эффектор гемоглобина.

28. Композиция по п.26 или 27, включающая ингибитор системы комплемента и соединение, которое вызывает повышенное, регулируемое высвобождение кислорода в тканях, в частности аллостерический эффектор гемоглобина.

29. Композиция по пп.23, 26 или 27 для применения в терапии человека или животного.

30. Композиция по п.29 для применения при лечении ассоциированного с амилоидом заболевания или состояния.

31. Композиция по п.30 для применения при лечении ассоциированной с амилоидом болезни или состояния, которое характеризуется утратой когнитивной способности к запоминанию у животного или человека.

32. Композиция по п.29, где ассоциированным с амилоидом болезнью или состоянием является неврологическое нарушение.

33. Композиция по п.32, где ассоциированное с амилоидом заболевание или состояние выбрано из группы, включающей болезнь Альцгеймера (AD), умеренное ухудшение когнитивной способности (MCI), деменция, связанная с тельцами Леви, синдром Дауна, наследственное церебральное кровоизлияние, сопровождающееся амилоидозом (типа Дутча); комплекс деменции Гуама-Паркинсона; прогрессирующий надъядерный паралич, рассеянный склероз; болезнь Крейцфельдта-Якоба, болезнь Паркинсона, связанная с ВИЧ деменция, ALS (амиотрофический боковой склероз), диабет взрослых; старческий сердечный амилоидоз; эндокринные опухоли и дегенерация желтого пятна.

34. Композиция по п.33, где ассоциированное с амилоидом заболевание или состояние представляет собой болезнь Альцгеймера.

35. Применение модифицированного антигенного Аβ-пептида, как заявлено в любом из предыдущих пунктов для приготовления фармацевтической композиции для лечения ассоциированной с амилоидом болезни или состояния, при котором эта фармацевтическая композиция вводится животному или человеку, которое страдает от такой болезни или состояния, в терапевтически или профилактически эффективном количестве.

36. Применение по п.35, при котором указанное лечение приводит к значительному снижению нерастворимых связанных с бляшками Аβ_1-40 и Aβ_1-42 в головном мозге и/или значительному снижению уровня Аβ_1-42 в головном мозге.

37. Применение по п.35, где ассоциированным с амилоидом болезнью или состоянием является неврологическое нарушение.

38. Применение по п.37, в котором ассоциированное с амилоидом заболевание или состояние выбирают из группы к болезнь Альцгеймера (AD), умеренное ухудшение когнитивной способности (MCI), деменция, связанная с тельцами Леви, синдром Дауна, наследственное церебральное кровоизлияние, сопровождающееся амилоидозом (типа Дутча); комплекс деменции Гуама-Паркинсона; прогрессирующий надъядерный паралич, рассеянный склероз; болезнь Крейцфельдта-Якоба, болезнь Паркинсона, связанная с ВИЧ деменция, ALS (амиотрофический боковой склероз), диабет взрослых; старческий сердечный амилоидоз и дегенерацию желтого пятна.

39. Применение по п.38, в котором ассоциированное с амилоидом заболевание или состояние представляет собой болезнь Альцгеймера.

40. Применение модифицированного антигенного Аβ-пептида, как заявлено в любом из предыдущих пунктов для приготовления фармацевтической композиции для значительного сокращения отставания или улучшения когнитивной способности к запоминанию, включающий введение млекопитающему фармацевтической композиции в иммунологически эффективном количестве.

41. Применение по п.40, где введение указанной фармацевтической композиции приводит к независимому от Т-клеток иммунному ответу.

42. Применение модифицированного антигенного Аβ-пептида, как заявлено в любом из предыдущих пунктов для приготовления фармацевтической композиции для индукции иммунного ответа у млекопитающих, страдающих от ассоциированного с амилоидом состояния, характеризующегося отставанием или утратой когнитивной способности к запоминанию, включающий введение млекопитающему фармацевтической композиции в иммунологически эффективном количестве.

43. Применение по п.40, где введение указанной фармацевтической композиции приводит к независимому от Т-клеток иммунному ответу.

44. Применение по любому из пп.40-43, где отставание или утрата когнитивной способности к запоминанию у подвергаемых лечению животных возрастает по сравнение с утратой когнитивной способности к запоминанию до введения.

45. Применение по любому из пп.40-43, где утрата когнитивной способности к запоминанию подвергаемых лечению животных полностью восстанавливается.

46. Антитела или смесь антител из животных, иммунизируемых модифицированным антигенным Аβ-пептидом, антигенной конструкции или композиции по любому из предшествующих пунктов.