KR20120061049A

KR20120061049A - 치료 백신

Info

Publication number: KR20120061049A
Application number: KR1020127002472A
Authority: KR
Inventors: 안드레아 파이퍼; 끌로드 니콜라우
Original assignee: 에이씨 이뮨 에스.에이.
Priority date: 2005-12-12
Filing date: 2006-12-08
Publication date: 2012-06-12
Also published as: CA2633399C; WO2007068411A2; TWI537000B; CR9994A; CN101330923A; BRPI0619747A2; RU2008128133A; KR101236611B1; EP2380588B1; HK1127486A1; CN101330923B; US20080267986A1; US7807175B2; NZ568384A; NO20082216L; MY181173A; TW200744630A; AU2006326283A1; US8603487B2; AR058327A1

Abstract

본 발명은 아밀로이드증(amyloidosis)을 포함하는, 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질과 관련되거나 또는 이에 기인되는 장애 및 질병의 치료에서의 치료적 및 진단적 용도를 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 유기체, 특히 동물 내에서, 상세하게는 포유류 또는 인간 내에서, 고도로 특이적이고 고도로 유효한 면역 반응을 이끌어내기 위한 방법 및 조성물을 제공하며, 이는 예를 들어, 경증 인지 장애(mild cognitive impairment; MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 병태 또는 질환을 포함하는, 알츠하이머병(Alzheimer's Disease; AD)과 같은 신경계 질환을 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련(age-related) 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크(amyloid plaque) 형성과 관련된 장애 및 질환 그룹인 아밀로이드증 또는 아밀로이드증과 관련된 증상을 완화하거나 예방할 수 있다.

Description

치료 백신{THERAPEUTIC VACCINE}

본 발명은 알츠하이머병(Alzheimer's Disease)과 같은 아밀로이드 단백질과 관련된 이상(abnormality) 및 장애 그룹인 아밀로이드증(amyloidosis)을 포함하는, 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인되는 또는 이와 관련되는 장애 및 질환의 치료에서의 치료적 및 진단적 용도를 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.

아밀로이드증(amyloidosis)은 단일 질환(single disease entity)이 아니라 오히려, 하나 이상의 기관 또는 신체에 축적되는, 아밀로이드로 불리는 밀랍상(waxy), 전분-유사 단백질의 세포외 조직 침착물(deposit)을 특징으로 하는 다양한 진행성 질환 과정의 그룹이다. 상기 아밀로이드 침착물이 쌓여 올려짐에 따라, 이는 상기 기관 또는 신체의 정상 기능을 방해하기 시작한다. 적어도 15개의 상이한 유형의 아밀로이드증이 있다. 주된 형태는 공지된 선행물질(antecedent)이 없는 원발성 아밀로이드증(primary amyloidosis), 일부 다른 병태(condition)에 따르는 속발성 아밀로이드증(secondary amyloidosis), 및 유전성 아밀로이드증이다.

속발성 아밀로이드증은 결핵(tuberculosis), 가족성 지중해열(familial Mediterranean fever)로 불리는 세균 감염, 뼈 감염(골수염(osteomyelitis)), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 소장염(육아종회장염(granulomatous ileitis)), 호지킨병(Hodgkin's disease), 및 나병(leprosy)과 같은 만성 감염 또는 염증 질환을 가진 사람에게서 발생한다.

아밀로이드 침착물은 일반적으로 세 가지 성분을 함유한다. 아밀로이드 물질의 약 90%를 차지하는 아밀로이드 단백질 원섬유(fibril)는 여러 상이한 유형의 단백질 중 하나를 포함한다. 이들 단백질은 아밀로이드 단백질의 독특한 염색 특성을 야기하는 콩고 레드(Congo red)에 대한 결합 부위를 나타내는 독특한 단백질 배열(configuration)인, 소위 "베타-플리트된(beta-pleated)" 시트 원섬유로 접힐 수 있다. 또한, 아밀로이드 침착물은 아밀로이드 P (오각형) 성분(AP), 정상 혈청 아밀로이드 P (SAP)에 관계되는 당단백질과, 황산화 글리코스아미노글리칸(sulfated glycosaminoglycan; GAG), 연결 조직의 복합 탄수화물과 밀접하게 관련된다.

많은 노화 질환은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 이와 관련되고, 질환의 진행뿐만 아니라 발병기전에 기여하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 물질의 세포외 침착물의 축적을 일부 특징으로 한다. 이들 질환은, 예를 들어, 경증 인지 장애(mild cognitive impairment; MCI), 루이 소체 치매(Lewy body dementia), 다운증후군(Down's syndrome), 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형)(hereditary cerebral hemorrhage with amyloidosis (Dutch type)); 괌 파킨슨-치매 복합증(Guam Parkinson-Dementia complex)과 같은 인지 기억 능력(cognitive memory capacity)의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련된 다른 질환으로는 진행성 핵상 마비(progressive supranuclear palsy), 다발성 경화증(multiple sclerosis); 크로이츠펠트 야콥병(Creutzfeld Jacob disease), 파킨슨병(Parkinson's disease), HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS; amyotropic lateral sclerosis), 성인 발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증(senile cardiac amyloidosis); 내분비 종양, 및 황반 변성(macular degeneration)을 포함하는 그 밖의 질환이 있다.

비록 이들 질환의 발병기전은 다양할 수 있지만, 이들의 특징적인 침착물은 종종 많은 공동(shared) 분자 성분을 함유한다. 이는 전염증성 경로의 상당한 정도로의 국부적 활성화에 기여할 수 있어, 활성화된 보체 성분(complement component), 급성기 반응물질(acute phase reactant), 면역 조절물질(immune modulator), 및 다른 염증 매개체(inflammatory mediator)가 동시 침착될 수 있다(McGeer 등, 1994).

알츠하이머병(AD)은 뇌 내 단백질의 이상 침착물의 축적물인 아밀로이드 플라크에 기인하는 것으로 주로 생각되는 신경계 장애이다. 병에 걸린 개인의 뇌에서 발견되는 가장 흔한 아밀로이드의 유형은 주로 Aβ 원섬유로 구성된다. 과학적 증거는, 플라크에서의 베타-아밀로이드 단백질의 생산 및 축적의 증가가, 알츠하이머병의 발생 및 진행에 기여하는 신경 세포 사멸의 원인이 되는 것을 증명한다. 이번에는, 중요한(strategic) 뇌 구역에서의 신경세포의 상실은 신경 전달 물질의 감소와 기억 장애를 유발한다. 플라크 축적에 주로 필수적인 단백질은 아밀로이드 전구체 단백질(APP) 및 두 프레세닐린(presenilin)(프레세닐린 Ⅰ 및 프레세닐린 Ⅱ)을 포함한다. 효소 β 및 γ 세크레타아제(secretase)에 의한, 대부분의 세포에서 구성적으로 발현되고 이화되는(catabolized) 아밀로이드 전구체 단백질(APP)의 순차적 분할(cleavage)은 39 내지 43 아미노산 Aβ 펩타이드를 방출시킨다. APP의 분해는 그들의 플라크로 결집하려는 경향을 증가시키는 듯 하다. Aβ(1-42) 절편(fragment)은 특히 그의 C-말단에서의 2개의 극소수성(very hydrophobic) 아미노산 잔기로 인한 높은 결집물 축적 경향을 갖는다. 따라서, 상기 Aβ(1-42) 절편은 알츠하이머병에서 신경 플라크(neutritic plaque) 형성의 개시에 주로 관여하고 또한 필수적이라고 여겨지며, 따라서 높은 병리적 가능성을 갖는 것으로 여겨진다. 따라서 아밀로이드 플라크 형성을 흐트러뜨리고 이를 표적으로 할 수 있는 특정 항체가 필요하다.

알츠하이머병의 증상은 더디게 나타나며, 제1 증상은 가벼운 건망증뿐일 것이다. 이 단계에서, 개인은 최근의 사건, 활동, 잘 아는 사람들 또는 사물들의 이름을 잊어버릴 수 있으며, 간단한 수학 문제를 풀 수 없을지도 모른다. 질환이 진행함에 따라, 증상은 보다 쉽게 인지되고 알츠하이머병에 걸린 사람 또는 그의 가족 구성원이 의학적 도움을 찾을만큼 심각해진다. 중간 단계의 알츠하이머병의 증상은 몸치장(grooming)과 같은 간단한 일을 하는 법을 잊어버리는 것을 포함하고, 문제점은 말하기, 이해하기, 읽기 또는 쓰기에서도 발생한다. 후반 단계의 알츠하이머병 환자는 불안해하거나 또는 공격적이 될 수 있고, 집을 잃어버릴 수 있으며 결국 종합 간병을 필요로 한다.

현재, 알츠하이머병을 진단하기 위한 유일한 방법은 개체의 사망 후 부검하여 뇌 조직의 플라크 및 매듭(tangle)을 확인하는 것이다. 따라서, 아직 사람이 살아있는 동안, 의사는 "가능한(possible)" 또는 "충분히 확실한(probable)" 알츠하이머병의 진단만을 수행할 수 있다. 통상의 방법을 사용하여, 내과의사는 "충분히 확실한" 알츠하이머병을 진단하기 위한 여러 도구를 이용하여 90 퍼센트 이하의 정확도로 알츠하이머병을 진단할 수 있다. 내과의사는 사람의 일반적인 건강, 과거의 의료 문제, 및 일상 활동을 수행하며 갖는 모든 어려움의 히스토리(history)에 대해 질문한다. 기억력, 문제 해결, 집중력, 계산, 및 언어의 행동 테스트는 인지 퇴행의 정보를 제공하며, 혈액, 소변, 또는 척수액의 테스트 및 뇌 스캔과 같은 의학적 테스트는 일부 추가적 정보를 제공할 수 있다.

알츠하이머병의 관리는 투약-기반 및 비투약 기반 치료로 구성된다. 질환의 근원적 과정의 변화(진행의 지연 또는 역행)를 목표로 한 치료는 그동안 대부분 실패해왔다. 콜린에스테라제 억제제(ChEIs)와 같은 신경 세포의 화학적 전달자(신경전달물질)의 결핍(결손), 또는 기능부전(malfunction)을 회복시키는 약은 증상의 개선을 나타내어 왔다. 투약은 또한 알츠하이머병의 정신병적 표시(manifestation)를 처리(address)할 수 있다.

타크린 및 리바스티그민과 같은 콜린에스테라제 억제제는, 현재 알츠하이머병의 치료를 위해 FDA에 의해 승인된 작용제의 유일한 종류의 작용제이다. 이들 작용제는 뇌에서의 화학적 신경전달에서의 결함 또는 기능부전을 회복시키는 약이다. ChEIs는 신경전달물질의 효소적 분해를 방해하여 뇌에서의 신경 신호를 전달할 수 있는 화학적 전달자의 양을 증가시킨다.

질환 초기 및 중기 단계의 일부 사람들을 위한 약물들인, 타크린(tacrine) (COGNEX^？, Morris Plains, NJ), 도네페질(donepezil) (ARICEPT^？Tokyo, JP), 리바스티그민(rivastigmine) (EXELON^？,East Hanover, NJ), 또는 갈란타민(galantamine) (REMINYL^？,New Brunswick, NJ)은 제한된 시간 동안 일부 증상이 악화되는 것을 예방하는 것을 도울 수 있을 것이다. 다른 약물인, 메만틴(memantine) (NAMENDA^？,New York, NY)은 중등도 내지 중증 알츠하이머병의 치료를 위해 승인되었다. 또한, 일부 약은 불면, 초조, 방랑(wandering), 불안 및 우울증과 같은 알츠하이머병의 행동 증상의 제어를 도울 수 있다. 이들 증상의 치료는 종종 환자를 보다 편안하게 만들고 또한 간병인에게는 간병이 보다 수월해지도록 한다. 불행히도, 현저한 치료 진보는 이 클래스의 작용제가 위약(placebo)보다 일관적으로 나은 것으로 나타나지만, 질환은 계속 진행되고, 정신 기능의 평균 효과는 그다지 크지 않다. ChEIs는 또한 위장관 기능장애, 간 독성 및 체중 감소를 포함하는 부작용도 갖는다.

알츠하이머병에서 발생하는 뇌 이상을 파악하는 것에서의 진보는, 질환의 발생 및 과정을 변경하는 것에 보다 집중되는 치료의 새로운 표적을 위한 골격을 제공할 것으로 기대된다. 항염증제를 포함하는 다수의 화합물이 활발하게 조사되고 있다. 로페콕시브(rofecoxib) 및 셀레콕시브(celecoxib)와 같은 특정 시클로옥시게나제 억제제(COX-2)를 사용하는 임상 시험 또한 진행중이다.

아밀로이드-유사 단백질의 침착물 및 축적물에 기인하거나 또는 이와 관련되는 그 밖의 질환은 경증 인지 장애, 루이 소체 치매(LBD), 근육위축가쪽경화증(ALS), 봉입체 근염(inclusion-body myositis; IBM) 및 황반 변성, 특히 연령-관련 황반 변성(age-related macular degeneration; AMD)이다.

경증 인지 장애(MCI)는 포착하기 어렵지만 측정가능한 기억 장애로서 가장 일반적으로 정의되는 일반 용어이다. MCI를 갖는 사람은 노화에 의해 일반적으로 기대되는 것보다 큰 기억 문제를 경험하지만, 판단(judgment) 또는 추론(reasoning) 부전과 같은 치매의 다른 증상을 나타내지는 않는다. MCI는 AD의 전임상적 단계를 종종 반영하는 병태이다.

내후각뇌피질(entorhinal cortex; EC) 내 β-아밀로이드의 침착은 중장년층에서 경증 인지 장애(MCI)의 발생에 주요 역할을 할 것으로 여겨진다. 이는, AD가 임상적으로 나타난 후 CSF-A Aβ(1-42) 수치가 현저히 감소된다는 관찰과 일치한다. MCI 시기에서, CSF-Aβ(1-42)에 반하여 CSF-tau 수치는 현저하게 증가하고, 이들 값은 그 후 계속 상승될 것이며, CSF-tau의 증가된 수치를 지시하는 것은 AD가 발생할 것으로 예상되는 MCI 대상을 검출하는데 도움을 줄 수 있을 것이다.

루이 소체 치매(LBD)는 65세를 넘은 사람에게서 일어날 수 있는 신경퇴행성 장애로, 일반적으로 인지(사고) 장애 및 비정상적 행동 변화의 증상을 유발한다. 증상은 인지 장애, 신경계 징후, 수면 장애, 및 자율신경 기능상실(autonomic failure)을 포함할 수 있다. 인지 장애는 대개의 경우의 LBD가 나타내는 특성이다. 환자는 점진적으로 악화되는 혼돈의 재발성 삽화(recurrent episode)를 갖는다. 인지 능력에서의 기복(fluctuation)은 종종 집중력 및 각성도(alertness)의 이동 정도(shfting degree)와 관련된다. 인지 장애 및 사고의 기복은 분, 시간, 또는 하루 동안 다양할 수 있다.

루이 소체는 인산화된 및 비인산화된 신경미세섬유(neurofilament) 단백질로 형성된다; 이들은 손상된 또는 비정상적 단백질의 제거에 관여하는 유비퀴틴(ubiquitin)뿐만 아니라 시냅스 단백질 알파-시누클레인(alpha-synuclein)을 함유한다. 루이 소체에 추가로, 신경 세포의 세포 돌기(cell process)에서의 봉입체인 루이 신경돌기(Lewy neurite)도 존재할 수 있다. 아밀로이드 플라크는 DLB로 고생하는 환자의 뇌 내에 형성될 수 있으나, 이들은 알츠하이머병에 걸린 환자에서 나타나는 수 보다 적은 경향이 있다. AD의 다른 미세병리학적 특징인, 신경섬유매듭(neurofibrillary tangle)은 DLB의 주요 특성은 아니지만 아밀로이드 플라크에 추가하여 종종 나타난다.

근육위축가쪽경화증(ALS)은 상부 및 하부 운동 뉴런(neuron)의 퇴행을 특징으로 한다. 일부 ALS 환자에서, 치매 또는 실어증(aphasia)이 나타날 수 있다(ALS-D). 치매는 대부분 일반적으로 전측두엽 치매(frontotemporal dementia; FTD)이고, 이들 경우의 대부분은 전두엽 및 측두엽의 표면층(superficial layer) 및 치아 이랑(dentate gyrus)의 뉴런 내에 유비퀴틴-양성(ubiquitin-positive), 타우-음성(tau-negative) 봉입체(inclusion)를 갖는다.

봉입체 근염(IBM)은 50세를 넘은 사람들에게서 일반적으로 발견되는 심각한(crippling) 질환으로, 여기서 근육 섬유는 염증을 발생시키고, 위축되기 시작한다 - 그러나 뇌는 이를 면하여 환자는 그들의 전체적 지능을 유지한다. 아밀로이드-β 단백질의 생성에 관여하는 두 효소는, 노인에서 가장 흔한, 진행성인 근육 질환에 걸린 환자의 근육 세포 내부에서 증가되는 것으로 밝혀졌으며, 여기서 아밀로이드-β 또한 증가된다.

아밀로이드-유사 단백질의 축적물 및 침착물과 관련되거나 또는 이에 기인하는 다른 질환은 황반 변성이다.

황반 변성은 흔한 안질환으로, 망막 (감광(light-sensitive) 세포가 뇌로 시각 신호를 보내는 눈 뒤쪽의 종이처럼 얇은 조직)의 중앙 구역인 황반의 악화(deterioration)를 유발한다. 선명한, 맑은, '거짓없는(straight ahead)' 시력은 황반에 의해 처리된다. 황반에의 손상은 맹점(blind spot) 및 흐려보임 또는 난시를 야기한다. 연령-관련 황반 변성(AMD)은 미국 내의 65세가 넘은 사람들에게서 시각 장애의 주된 원인이며, 백인 중 법적 맹인의 주요 원인이다. 약 180만명의 40세 이상의 미국인들이 진행된(advanced) AMD에 걸려 있으며, 중간(intermediate) AMD에 걸린 다른 730만명의 사람들은 시력 상실에 대한 실질적 위험에 처해 있다. 정부는 2020년까지 290만명의 사람이 진행된 AMD에 걸릴 것으로 추정한다. AMD의 희생자는 종종, 이 눈을 멀게 하는 병태의 치료 및 원인에 대해 알려진 바가 매우 적다는 것을 발견하고 놀라고 좌절한다.

황반 변성은, 건성 황반 변성(dry macular degeneration) 및 습성 황반 변성(wet macular degeneration)의 두 형태가 있다. 황반의 세포가 천천히 파괴되기 시작하는 건성 형태는, 황반 변성 사례의 85 퍼센트에서 진단된다. 한쪽 눈이 시력을 상실하고, 다른쪽 눈이 걸리지 않은 상태로 잔류할 수 있지만, 통상적으로 양쪽 눈 모두 AMD에 걸린다. 망막 아래의 황색 침착물인 드루젠(drusen)은, 건성 AMD의 통상적인 초기 징후이다. 진행된 건성 AMD 또는 습성 AMD의 발전 위험은 드루젠의 크기 또는 수가 증가할수록 증가한다. 건성 AMD는 진행하여, 질환의 습성 형태로 변하지 않고 시력 상실을 유발하는 것이 가능하다; 그러나, 초기 건성 AMD가 갑자기 습성 형태로 변화하는 것 또한 가능하다.

습성 형태는, 비록 사례의 15 퍼센트만을 차지하지만, 실명의 90퍼센트를 야기하고, 진행된 AMD로 여겨진다 (습성 AMD의 초기 또는 중기는 없다). 습성 AMD는 언제나 질환의 건성 형태를 앞세운다. 건성 형태가 악화되면, 일부 사람들은 황반 뒤에 자라는 비정상적인 혈관을 갖기 시작한다. 이들 혈관들은 매우 연약하여 유체와 혈액이 샐 것이고 (따라서, '습성' 황반 변성), 황반에 대한 급속한 손상을 유발한다.

AMD의 건성 형태는 처음에 종종 약간 흐려보이는 것을 유발할 것이다. 그 후 특히 시야의 중심이 흐려지고, 질환이 진행될수록 이 영역은 더욱 커진다. 한쪽 눈만 걸렸다면 어떠한 증상도 인지하지 못할 수 있다. 습성 AMD에서는, 직선이 물결모양인 것 같이 보일 수 있고, 중심 시력 상실이 급속히 발생할 수 있다.

황반 변성의 진단은 일반적으로 확장된 눈 검사(dilated eye exam), 시력 테스트(visual acuity test), 및 AMD의 진단을 돕기 위한 안저검사(fundoscopy)로 불리는 절차를 이용하여 눈의 뒤쪽을 보는 것을 포함하고, 또한 - 만약 습성 AMD가 의심된다면 - 형광 혈관조영술(fluorescein angiography)도 수행될 수 있다. 만약 건성 AMD가 진행 단계에 도달했다면, 시력 상실을 예방할 수 있는 통용되는 치료는 존재하지 않는다. 그러나, 항산화제 및 아연의 특정 고용량 제형은, 중간 AMD의 진행된 단계로의 진행을 지연시키거나 또는 예방할 수 있다. 마큐젠(Macugen)？(페갑타닙 나트륨 주사액(pegaptanib sodium injection)), 레이저 광응고(laser photocoagulation) 및 광선역학요법(photodynamic therapy)은 황반에서의 비정상적인 혈관 성장 및 출혈을 제어할 수 있으며, 이는 습성 AMD에 걸린 일부 사람들에게 도움이 된다; 그러나, 이미 상실한 시력은 이들 기술에 의해 회복되지 않을 것이다. 시력이 이미 상실되었다면, 존재하는 저시력 보조기(low vision aid)가 삶의 질을 향상시키는데 도움될 수 있다.

연령-관련 황반 변성(AMD)의 최초의 징후 중 하나는 브루크막(Bruch's membrane; BM)과 망막색소상피(retinal pigmented epithelium; RPE)의 바닥판(basal lamina) 사이에 드루젠으로 알려진 세포외 침착물의 축적이다. Anderson 등에 의해 수행된 최근의 연구는 드루젠이 아밀로이드 베타를 함유하는 것을 확인하였다. (Experimental Eye Research 78 (2004) 243-256).

환경적, 유전적, 및 식이적(dietary) 요인들을 탐구하는 연구와 함께 지속하는 진행중인 연구는 AMD에 기여할 것이다. 각막 세포 이식, 질환의 진행을 예방할 또는 감속시킬 약물, 방사선 요법, 유전자 요법, 시력을 강화시키는 것을 도울 수 있는 망막에 삽입되는 컴퓨터 칩 및 황반 아래의 새로운 혈관의 성장을 예방할 작용제를 포함하는 새로운 치료 전략 또한 탐구될 것이다.

따라서 필요한 것은, 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증, 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질과 관련되거나 또는 이에 기인하는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환을 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증과 관련되는 합병증을 처리하기 위한 효과적인 치료 백신 조성물 및 방법이다. 특히 필요한 것은, 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 펩타이드의 섬유(fiber)의 결집과 관련된 플라크의 형성과 같은 질환의 생리적 표시에 반대작용할 수 있는, 특수화되고 또한 고도로 효과적인 치료 백신 및 상기 백신을 포함하는 조성물이다.

본 발명은, 예를 들면, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환을 포함하는, 알츠하이머병(AD)와 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증, 또는 아밀로이드증과 관련된 증상을 예방하거나 또는 완화할 수 있는, 유기체, 상세하게는 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간 내에서 고도로 특이적이고 또한 고도로 효과적인 면역 반응을 이끌어내기 위한 신규한 방법 및 조성물을 제공한다.

특히, 본 발명은 아밀로이드-관련 질환 또는 병태를 나타내는 포유류에서 인지 기억 능력을 유지시키거나 또는 향상시키기 위한, 특히 회복시키기 위한, 보다 상세하게는 완전히 회복시키기 위한 신규한 방법 및 조성물을 제공한다.

본 발명의 목적은, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애, 상세하게는 예를 들어, 작용적으로 균등한 절편을 포함하는, Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 13 내지 15 연속(contiguous) 아미노산 잔기의 단일 또는 반복적 스트레치로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 잔기 1-15, 1-14, 및 1-13으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 보다 상세하게는 서열 식별 번호: 1로 주어지는 바와 같은 잔기 1-15로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 특히, 예를 들어, 리포좀과 같은 담체 입자/보조제 내에서 재구성된 또는 이에 혼입된, 또는 이에 부착된 전술된 바와 같은 Aβ 펩타이드 절편을 포함하는 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련되는 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련된 질환 및 장애의 치료를 위한 치료 백신 조성물 및 상기 조성물의 생산 방법을 제공하는 것이다.

이 13 내지 15 아미노산 잔기의 연속 스트레치(contiguous stretch)는 Aβ 펩타이드의 N-말단 절편 1-16, 1-17, 1-18 또는 1-20, 특히 각각 서열 식별 번호: 2 및 서열 식별 번호: 5로 주어진 바와 같은 Aβ 펩타이드의 N-말단 절편 1-16 또는 1-17로부터 수득될 수 있고, 13 내지 15 아미노산 잔기의 스트레치를 유발하기 위한 하나 내지 세 아미노산 잔기의 결실(deletion)에 의해 인터럽트(interrupt)될 수 있으며, 여기서 상기 결실된 아미노산 잔기는 이웃의 아미노산 잔기 또는 적어도 1 아미노산 잔기로 상호 분리된 잔기, 특히 항원성 펩타이드 분자의 전체 순 전하가 음(negative)인 것을 희망한다면, 음전하를 띄지 않은 아미노산 잔기, 또는 항원성 펩타이드 분자의 전체 순 전하가 양(positive)인 것을 희망한다면, 양전하를 띄지 않은 아미노산 잔기일 수 있다. 이 13 내지 15개 아미노산 잔기의 연속 스트레치는 본 발명의 항원성 구조체 내에서 2 내지 50회, 상세하게는 2 내지 30회, 보다 상세하게는 2 내지 20회, 보다 더 상세하게는 2 내지 16회, 특히 2 내지 10회 반복될 수 있다.

본 발명의 특정 구체예에서, 13 내지 15 아미노산 잔기의 연속 스트레치는, 2-머(mer), 3-머, 4-트라머(tramer), 5-머, 6-머, 7-머, 8-머, 9-머, 10-머, 11-머, 12-머, 13-머, 14-머, 15-머, 16-머, 20-머, 30-머 및 50-머로 구성되는 그룹으로부터 선택된 폴리머의 형태로 사용된다.

추가의 구체예에서, 본 발명은 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애, Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 보다 상세하게는 서열 식별 번호: 1에 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3에 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편을 이용하는, 본원의 이하에서 보다 구체화된 바와 같은, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성에 관련되는 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련된 장애 및 질환의 치료를 위한 치료 백신 조성물 및 상기 조성물의 생산 방법을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 언급한 절편과 본질적으로 동일하고 또한 상기 절편과 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 갖는 펩타이드 절편, 상세하게는 하나 이상의 아미노산, 상세하게는 하나 내지 10 아미노산, 보다 상세하게는 하나 내지 6 아미노산, 보다 더 상세하게는 하나 내지 4 아미노산, 특히 하나 내지 3 아미노산이 화학적으로 유사한 아미노산으로 치환되도록 변경(alteration)된 상기 절편의 보존적으로 변형된 변이체(variant)인 펩타이드 절편을 포함한다. 작용적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존 치환(conservative substitution) 표는 기술분야에 공지되어 있으며, 본원의 이하에 개시된다. 보존 치환은 바람직하게는 펩타이드의 전체 순 전하(overall net charge)와 펩타이드 분자 전체의 전하 분포 또한 본질적으로 동일하게 잔류하도록 만들어진다.

본 발명의 특정 구체예에서 적어도 하나, 상세하게는 2, 보다 상세하게는 3 또는 심지어 음전하를 띈 아미노산 잔기 1, 3, 7, 11 모두는 화학적으로 유사하게 음전하를 띈 아미노산으로 교체될 수 있다. 특히, 자리 1 및 7의 Asp 각각은 Glu와 교체될 수 있고, 자리 9 및 11의 Glu 각각은 Asp와 교체될 수 있다.

본 발명의 특정 구체예에서는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하지만 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 질환 및 장애의 치료를 위한, Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1- 15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특별히 Aβ_1-15펩타이드 항원, 그러나 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편을 포함하는 치료 백신 조성물 및 상기 조성물의 생산 방법이 제공된다.

본 발명의 특정 구체예에서는, 기억 장애를 겪는 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간의 인지 기억 능력의 보유(retention) 또는 개선을 위한, 특히 완전 회복을 위한, Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특별히 Aβ_1-15펩타이드 항원, 그러나 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편을 이용하는 치료 백신 조성물 및 치료 백신 조성물의 생산 방법을 제공한다.

본 발명의 목적은 또한 본원에 기술된 바와 같은 본 발명의 백신 조성물을 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에 투여함에 의한, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하나 이에 제한되는 것이 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련된 질환 및 장애의 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 특정 구체예에서는 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 백신 조성물을 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 투여함에 의한, 기억 장애에 걸린 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간의 인지 기억 능력을 유지(retain) 또는 증가시키기 위한, 상세하게는 인지 기억 능력을 완전히 회복시키는 방법을 제공한다.

본 발명의 추가의 목적은 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편을 이용하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련된 질환 및 장애의 치료를 위한 방법뿐만 아니라 백신 조성물 및 상기 조성물의 생산 방법을 제공하는 것이며, 여기서 상기 Aβ 펩타이드 항원은 α-나선부 및/또는 β-시트부 및/또는 랜덤 코일부의 균형 비율을 특징으로 하는 정해진 배좌(defined conformation)를 유지시키고 또한 안정시킬 수 있으며, 또한 치료된 동물에서 고도로 특화된 면역 반응을 유도할 수 있도록 변형된다.

본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 백신 조성물을 동물, 상세하게는 포유류, 특히 인간에게 투여하면, 주로 예를 들어, 이소타입(isotype) IgG1 및 IgG2b와 같은 비염증성 Th2 서브타입(subtype)의 항체 및/또는 예를 들어, IgG3와 같은 T-세포 비의존성 IgG 서브클래스(subclass)의 항체 및/또는 뇌 내에서 염증 마커(marker), 상세하게는 IL-1β, IL-6, IFN-γ 및 TNFα로 구성되는 그룹으로부터 선택된 염증 마커를 현저히 증가시키지 않는 항체를 발생시킨다.

본 발명의 추가의 구체예에서는, 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 백신을 동물, 상세하게는 포유류, 특히 인간에게 투여하면, 뇌 내에서 불용성의, 플라크-관련-Aβ1-40 및 Aβ1-42가 현저히 감소된다.

본 발명의 또 다른 추가의 구체예에서는, 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명에 따른 백신을 동물, 상세하게는 포유류, 특히 인간에게 투여하면, 뇌 내에서 가용성 Aβ1-42의 수치가 현저히 감소된다.

인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 아밀로이드-관련 병태에 걸린 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 투여한 후 인지 기억 능력의 보유를 증가시키는, 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 백신이 추가로 제공된다.

본 발명은 또한 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 아밀로이드-관련 병태에 걸린 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 투여한 후 인지 기억 능력의 완전히 회복시키는 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 백신에 관한 것이다.

특히, 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편은, 예를 들어, 소포(vesicle), 미립자체(particulate body) 또는 미립자 분자, 상세하게는, 리포좀과 같은 담체 내에서 재구성되거나 또는 이에 혼입되어, 또는 이에 부착되어 제시된다.

본 발명의 면역원성 조성물은, 본 발명의 정제된 또는 일부 정제된 또는 변형된 항원성 펩타이드의 존재하에 리포좀을 재구성함으로써 제조된 리포좀을 포함할 수 있다. 추가로, 펩타이드 절편은 리포좀 내부로 재구성될 수 있다. 본 발명은 또한 이의 항원성을 증가시키도록 변형된 항원성 펩타이드 절편을 포함한다. 예를 들어, 항원성 모이어티(moiety) 및 보조제(adjuvant)가 상기 펩타이드에 부착되거나 또는 혼합될 수 있다. 항원성 모이어티 및 보조제의 예는 친지성 뮤라밀 디펩타이드(muramyl dipeptide) 유도체, 비이온성 블록 폴리머, 수산화알루미늄 또는 알루미늄 포스페이트 보조제, 및 이의 혼합물을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 구체예에서는, 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편은 친지성 또는 소수성 모이어티에 의해, 상세하게는 리포좀 이중층 내의 펩타이드에 대해 앵커(anchor)로서 작용하고 상기 펩타이드가 리포좀 표면에 가깝게 근접하여 위치되도록 또한 안정화되도록 하는 디멘션(dimension)을 갖는 친지성 또는 소수성 모이어티에 의해 변형되고, 이는 리포좀 담체/ 면역 보조제의 지질 이중층 내로의 삽입을 용이하게 한다.

본 발명의 추가 구체예에서, 친지성 또는 소수성 모이어티는 지방산, 트리글리세리드(triglyceride) 또는 인지질, 특히 지방산 탄소 백본(back bone)이 적어도 10개의 탄소 원자를 갖는, 지방산, 트리글리세리드 또는 인지질이다. 상세하게는, 상기 친지성 또는 소수성 모이어티는, 적어도 약 14개의 탄소 원자 내지 약 24개 이하의 탄소 원자를 가지고, 탄소 원자의 각각의 개별적 수는 본 발명의 일부가 되는 범위 내에 있는, 탄소 백본을 갖는 지방산이다. 보다 상세하게는, 상기 친지성 또는 소수성 모이어티는 적어도 14개의 탄소 원자, 특히 16개의 탄소 원자의 탄소 백본을 갖는다. 소수성 모이어티의 예는 팔미트산, 스테아르산, 미리스트산, 라우르산, 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 특정 구체예에서, 상기 친지성 또는 소수성 모이어티는 팔미트산이다.

본 발명의 또 다른 추가 구체예에서, 소수성 모이어티는 팔미트산이고, 리포좀 제제는 예를 들어, 지질 A, 명반(alum), 인산칼슘(calcium phosphate), 인터루킨(interleukin) 1, 및/또는 다당류 및 단백질의 마이크로캡슐, 특히 모노포스포릴(monophosphoryl) 또는 디포스포릴(diphosphoryl) 지질 A와 같은 무독화된(detoxified) 지질 A, 또는 명반과 같은 보조제를 추가로 함유할 수 있다.

본 발명의 다른 목적은 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인하는 또는 이와 관련되는 질환 및 장애의 치료를 위한, 상세하게는 기억 장애에 걸린 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간의 인지 기억 능력의 보유, 증가 또는 회복을 위한, 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 면역원성 항원성 펩타이드를 사용하는 치료 백신 조성물 및 상기 조성물의 생산 방법뿐만 아니라 상기 아밀로이드증의 치료 방법을 제공하는 것이고, 여기서 β-아밀로이드 펩타이드 항원은 리포좀 내에서 재구성된, 하나 이상의, 상세하게는 하나 또는 두개의, 라이신(lysine), 글루타민산 또는 시스테인, 또는 항원성 펩타이드에 팔미토일 잔기를 커플링시키기에 적합하게 사용될 수 있는 임의의 다른 아미노산 잔기와 같은 적합한 아미노산 잔기를 통해 펩타이드 항원의 각각의 말단에 커플링된, 공유적으로(covalently) 부착된 팔미토일 잔기, 상세하게는 2 내지 4의 팔미토일 잔기, 보다 상세하게는 4 팔미토일 잔기로 변형된, 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 팔미토일화된(palmitoylated) Aβ 펩타이드 항원, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 팔미토일화된 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편이다.

본 발명의 특정 구체예에서, 펩타이드의 각각의 말단에 공유적으로 부착된 팔미토일 잔기로 변형된 2 이상의 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 항원 분자는 단일 리포좀 내에서 재구성된다.

본 발명은 아밀로이드-관련 병태, 상세하게는 예를 들어 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 병태에 걸린 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 투여한 후 상기 동물 또는 인간에서 면역 반응을 유도하는, 면역원성 항원성 펩타이드를 포함하는 신규한 방법 및 면역원성 조성물을 제공한다. 본 발명의 치료 백신으로의 치료는 인지 기억 능력의 보유 또는 증가, 상세하게는 인지 기억 능력의 완전 회복을 이끈다.

본 발명의 다른 목적은 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에서 면역 반응을 유도하기 위한 면역원성 항원성 펩타이드를 사용하는 치료 백신 조성물 및 상기 조성물의 생산 방법뿐만 아니라 치료된 동물 또는 인간의 인지 기억 능력이 유지되도록 또는 증가되도록, 상세하게는 완전 회복되도록, 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 팔미토일화된 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편을 포함하는 치료 백신 조성물을 상기 동물 또는 인간에게 투여함에 의한, 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에서 면역 반응을 유도하는 방법을 제공하는 것이며, 상기 동물 또는 인간은 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 아밀로이드-관련 병태에 걸려있다.

본원에서 상술한 바와 같은 항원성 펩타이드, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편 또한 본 발명의 일부이다.

하나 이상의, 상세하게는 하나 또는 두개의, 라이신(lysine), 글루타민산 또는 시스테인, 또는 항원성 펩타이드에 팔미토일 잔기를 커플링시키기에 적합하게 사용될 수 있는 임의의 다른 아미노산 잔기와 같은 적합한 아미노산 잔기를 통해 펩타이드 항원의 각 말단에 커플링된, 공유적으로(covalently) 부착된 팔미토일 잔기, 상세하게는 2 내지 4의 팔미토일 잔기, 보다 상세하게는 4 팔미토일 잔기로 변형된, 본원에서 상술한 바와 같은 본 발명의 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 항원, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 팔미토일화된 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편 또한 본 발명의 일부이다.

본 발명의 특정 구체예에서, 펩타이드의 각각의 말단에 공유적으로 부착된 팔미토일 잔기로 변형된 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 항원 분자의 2 이상은 단일 리포좀 내에서 재구성된다.

본원에서 상술한 바와 같은, 예를 들어, 소포, 미립자체 또는 미립자 분자, 상세하게는 리포좀과 같은 담체에 함침되어 또는 재구성되어 또는 부착되어 제시되는 항원성 펩타이드, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 본원에서 상술한 바와 같이 예를 들어, 소포, 미립자체 또는 미립자 분자와 같은 담체 내에 함침되어 또는 재구성되어, 또는 이에 부착되어 제시되는, 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편이 본 발명에 추가로 포함된다.

특정 가설에 구속되고자 하는 의도 없이, 본 발명의 치료 백신 조성물에 의해 유도되는 면역 반응이 동물 또는 인간에서 T-세포 및 면역원성 작용제에 대한 다른 반응성 면역 세포의 자극, 특히 β-아밀로이드 항원의 구역에서 특정 에피토프(epitope)를 특이적으로 인식하고 결합하는 능력을 갖는 고도로 특이적이고 또한 고도로 효과적인 항체를 발생시키고, 상기 항체는 항원에 결합한 후, 치료된 동물 또는 인간에서 인지 기억 능력의 관찰가능한 보유, 증가 효과 및 상세하게는 완전 회복을 매개 및/또는 유도한다는 것을 추정하는 것은 논리적이다.

본 발명은 또한 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 투여한 후 치료된 동물 또는 인간에서, β-아밀로이드 단백질의 에피토프 영역, 상세하게는 n은 2 내지 15, 상세하게는 5 내지 15, 보다 상세하게는 8 내지 15, 보다 더 상세하게는 10 내지 15의 정수이고, m은 3 내지 17, 상세하게는 6 내지 17, 보다 상세하게는 9 내지 17, 보다 더 상세하게는 11 내지 17의 정수이고, 여기서 n과 m은 동일한 수가 될 수 없으며, n은 항상 m보다 작아야하고, n과 m 사이의 차≥2인 아미노산 잔기 aa_n-aa_m로 제한되는 Aβ 폴리펩타이드의 에피토프 구역 내의 에피토프에 표적화(targeting)하고 특이적으로 결합함으로써, 예를 들어, Aβ 모노머성 펩타이드 1-39; 1-40, 1-41, 1-42 또는 1-43를 포함하는 섬유와 같은, β-아밀로이드 섬유, 특히 Aβ_1-42모노머성 펩타이드를 포함하는 섬유에 직접적으로 또한 특이적으로 결합하는 항체의 발생을 유도하는, 및/또는 아밀로이드 모노머성 펩타이드, 상세하게는 Aβ 모노머성 펩타이드 1-39; 1-40, 1-41, 1-42 또는 1-43와 같은 β-아밀로이드 모노머성 펩타이드, 특히 Aβ_1-42모노머성 펩타이드의 결집에 의해 형성된, 미리형성된 고분자 폴리머성 아밀로이드 원섬유 또는 미세섬유의 가용화를 유도할 수 있는 백신 조성물을 제공한다.

*본 발명의 특정 구체예에서, 항체는 아미노산 잔기 1-10, 특히 아미노산 잔기 1-9를 포함하는 β-아밀로이드 단백질의 에피토프 영역 내의 에피토프에 결합한다.

상기 항체는 또한 가용성 아밀로이드 모노머성 펩타이드 및 올리고머성 펩타이드, 상세하게는 Aβ 펩타이드 1-39; 1-40, 1-41, 1-42 또는 1-43로 구성되는 그룹으로부터 선택된 β-아밀로이드 모노머성 또는 올리고머성 펩타이드, 특히 Aβ_1-42에 특이적으로 결합하고, Aβ 모노머 또는 올리고머의 고분자 폴리머성 원섬유로의 결집을 억제한다.

추가의 구체예에서, 본 발명은 작용적으로 균등한 모든 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 항체, 상세하게는 단일클론성(monoclonal) 항체를 제공하고, 상기 항체는 결집 억제, 해체(disaggregation), 배좌 전이(conformational transition)의 유도, 4-16 영역, 상세하게는 1-9 영역 내의 에피토프의 인식 및 이로의 직접 결합으로 구성되는 그룹으로부터 선택된 특성 중 적어도 하나, 특히 상기 특성 중 2 이상의 조합을 구체화한다. 보다 특히, 작용적으로 균등한 모든 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 항체, 상세하게는 단일클론성 항체가 제공되고, 상기 항체는 1-16 및 29-40 영역에 대해, 보다 상세하게는 1-16 및 22-35 영역에 대해 조합된 반응성을 나타내고, 이는 상기 두 영역, 1-16 및 29-40 영역과 1-16 및 22-35 영역, 각각을 인식할 수 있고 또한 결합할 수 있으며, 본원에서 전술한 특성인, 결집 억제, 해체, 배좌 전이의 유도 중 적어도 하나, 특히 상기 특성 중 2 이상의 조합을 구체화할 수 있다.

본 발명의 백신 조성물에 의해 유도된 항체 및 상기 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주(hybridoma cell line) 또는 면역된 동물로부터 수득된 항체 또한 본 발명의 일부이다.

특정 구체예에서, 본 발명은 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 백신 조성물, 상세하게는 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13)펩타이드 항원, 보다 더 상세하게는 Aβ_1-14펩타이드 항원, 특히 Aβ_1- ₁₅펩타이드 항원을 포함하는 백신 조성물로 적절한 동물을 면역화시킴으로써 수득할 수 있는 작용적으로 균등한 모든 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 항체, 상세하게는 단일클론성 항체를 제공하고, 상기 항체는 이작용성(bifunctional) 항체이며, 아밀로이드 모노머성 펩타이드, 상세하게는 예를 들어 Aβ 모노머성 펩타이드 1-38, 1-39; 1-40, 1-41, 1-42 또는 1-43와 같은 β-아밀로이드 모노머성 펩타이드, 특히 Aβ_1-42모노머성 펩타이드와 공동-인큐베이션(co-incubation)하면, Aβ 모노머의 고분자성 폴리머성 원섬유로의 결집을 억제하고, 또한 아밀로이드 모노머성 펩타이드, 상세하게는 예를 들어, Aβ 모노머성 펩타이드 1-38, 1-39; 1-40, 1-41, 1-42 또는 1-43와 같은 β-아밀로이드 모노머성 펩타이드, 특히 Aβ_1-42모노머성 펩타이드의 결집에 의해 형성된, 미리형성된 고분자 폴리머성 아밀로이드 원섬유 또는 미세섬유와 공동-인큐베이션하면, 미리 형성된 폴리머성 원섬유 또는 미세섬유를 해체할 수 있다.

특정 구체예에서, 본 발명은 Aβ_1-42모노머성 펩타이드에 대해 고도의 특이성을 나타내지만, Aβ_1-38, Aβ_1-39, Aβ_1-40, 및/또는 Aβ_1-41모노머성 펩타이드에 대해서는 단지 작은(minor) 교차-반응성(cross-reactivity)을 보이거나 또는 전혀 보이지 않는, 작용적으로 균등한 모든 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 항체, 상세하게는 이작용성 항체, 특히 단일클론성 항체, 상세하게는 이작용성 단일클론성 항체, Aβ_1-38, Aβ_1-39, Aβ_1-40, Aβ_1-41에 비하여아밀로이드 펩타이드 Aβ_1-42에 대해 100배 이하, 상세하게는 50 내지 100배, 보다 상세하게는 80 내지 100배, 특히 100배 초과하여 민감하고, Aβ_1-38과 비교하여 아밀로이드 펩타이드 Aβ_1-42에 대해 1000배 이하, 상세하게는 500 내지 1000배, 보다 상세하게는 800 내지 1000배, 특히 1000배 초과하여 민감하며, 따라서 아밀로이드 형성 모노머성 펩타이드, 특히 아밀로이드 펩타이드 Aβ_1-42의 결집을, 인 비트로(in vitro) 및 인 비보(in vivo), 억제할 수 있는 항체와 작용적으로 균등한 모든 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 항체, 특히 단일클론성 항체를 제공한다.

본 발명의 다른 특정 구체예에서 항체, 상세하게는 이작용성 항체, 특히 단일클론성 항체, 상세하게는 작용적으로 균등한 모든 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 이작용성 단일클론성 항체는 아밀로이드 펩타이드 Aβ_1-42에 대해 높은 결합 민감도를 갖고, 적어도 0.001㎍ 하한인 농도, 상세하게는 0.5㎍ 내지 0.001㎍의 범위의 농도, 보다 상세하게는 0.1㎍ 내지 0.001㎍ 범위의 농도, 특히 0.001㎍ 농도의 Aβ_1-42섬유를 검출할 수 있다.

본 발명의 그 특정 구체예에서, 작용적으로 균등한 모든 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 항체, 상세하게는 단일클론성 항체가 제공되며, 상기 항체는 최소 농도 0.001 ㎍까지의 Aβ_1-42섬유 및 최소 농도 0.1 ㎍까지의 Aβ_1-40섬유 및 최소 농도 1 ㎍까지의 Aβ_1-38섬유를 검출할 수 있다.

아밀로이드 형성 모노머성 펩타이드에의, 특히 아밀로이드 형태(1-42)에의 본원에서 전술된 바와 같은 본 발명의 항체의 결합은 고분자 원섬유 또는 미세섬유에 대한 모노머성 아밀로이드 형성 펩타이드의 결집을 억제시킨다. 본 발명의 항체는 아밀로이드 형성 모노머성 펩타이드의 결집의 억제를 통해 아밀로이드 플라크, 상세하게는 배좌의 변화에 의해 가용성이 되고, 질환에 걸린 동물 또는 인간의 뇌에서의 아밀로이드 플라크의 대부분이 되는 것으로 알려져 있는 아밀로이드 형태(1-42)의 형성을 예방하거나 또는 감속시킨다.

본 발명의 특정 구체예는 작용적으로 균등한 모든 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 단일클론성 항체에 관한 것으로, 상기 항체는 2005년 12월 08일에 기탁된, DSM ACC2756인 하이브리도마 세포주 EJ 7H3에 의해 생산된 항체의 독특한 특징을 갖는다.

보다 상세하게는, 본 발명은 2005년 12월 08일에 기탁된, DSM ACC2756인 하이브리도마 세포주 EJ 7H3에 의해 생산된 작용적으로 균등한 모든 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 단일클론성 항체에 관한 것이다.

본 발명의 목적은 또한 본 발명에 따른 초분자 항원성 구조체(supramolecular antigenic construct), 상세하게는 본 발명에 따른 초분자 항원성 구조체를 포함하는 백신 조성물을 상기 질환에 걸려 치료를 필요로 하는 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 투여함에 의한, 예를 들면, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형)과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 괌 파킨슨-치매 복합증; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양, 및 황반 변성을 포함하는 다른 질환을 포함하는, 알츠하이머병(AD)와 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌, 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태의 영향을 예방, 치료 또는 완화하기 위한 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 구체예에서, 예를 들면, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그밖의 질환, 특히 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증의 영향을 예방, 치료 또는 완화하기 위한, 상기 장애, 질환 또는 병태에 걸려 치료를 필요로 하는 유기체, 상세하게는 동물 또는 사람에게서 면역 반응을 유도하기 위한 백신 조성물의 조제 방법이 제공된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서는, 예를 들면, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환, 특히 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증의 영향을 예방, 치료 또는 완화하기 위한, 본 발명의 항체를 약학적으로 허용가능한 형태로 제형화하는 것을 포함하는 치료 백신 조성물의 조제 방법이 제공된다.

특정 구체예에서, 본 발명은 바람직한 항원 배좌의 개선된 노출 및 안정화를 야기하는 항원 제시(antigen presentation)를 이용하여, 결국 고도로 특이적인 면역 반응을 이끌고, 독특한 특성을 갖는 항체의 발생시킨다.

한 구체예에서, 본 발명은, β-아밀로이드 펩타이드의 N-말단부를 대표하는 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 β-아밀로이드 펩타이드 항원을 포함하는 초고분자 항원성 구조체를 포함하는 면역원성 조성물을 제공하고, 상기 항원성 펩타이드는 변형되어 항원의 정해진 배좌, 상세하게는 랜덤 코일부, α-나선부 및 β-시트부의 균형 비율을 특징으로 하는 배좌를 유지 및 안정시킬 수 있다. 이 정해진 배좌는 동물 또는 인간 내로 도입 후 강한, 고도의 특이적인 면역 반응의 유도를 이끈다.

본 발명의 다른 구체예에서 본 발명의 백신 조성물은 Aβ 펩타이드 항원, 상세하게는 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원에 추가로, 보체 활성화 억제제를 포함할 수 있다. 따라서 본 발명은 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 연령-관련 아밀로이드증 및 속발성 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인되거나 또는 이와 관련되는 질환 및 장애 그룹의 치료를 위한, Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 7 내지 16 연속 아미노산 잔기, 상세하게는 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 13 내지 16 연속 아미노산 잔기의 단일 또는 반복적 스트레치로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 잔기 1-16, 1-15, 1-14, 및 1-13로, 보다 상세하게는 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 잔기 1-15로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는, 이의 작용적으로 균등한 절편을 포함하는 Aβ 펩타이드 절편을 포함하는, 특히 막 조절 단백질의 가용성 버전(version), 보체 단백질에 대한 인간화된(humanized) 항체, 보체 경로의 여러 단계에서 작용하는 소분자 억제제, 및 유전자전이(transgenic) 동물에서 발현되는 인간 보체 조절기로 구성되는 그룹으로부터 선택된 보체 시스템의 억제제, 상세하게는 보체 경로의 억제제와 함께 예를 들어, 리포좀과 같은 담체 입자/보조제에 부착된 또는 함침된 또는 재구성된, 본원에서 전술된 바와 같은 Aβ 펩타이드 절편을 포함하는 백신 조성물 및 상기 조성물의 생산 방법에 관한 것이다.

이 13 내지 15 아미노산 잔기의 연속 스트레치는 본 발명의 구조체 내에서 2 내지 50번, 상세하게는 2 내지 30번, 보다 상세하게는 2 내지 20번, 보다 더 상세하게는 2 내지 16번, 특히 2 내지 10번 반복될 수 있다.

본 발명의 특정 구체예에서, 본원에서 전술된 바와 같은 치료 백신 조성물의 성분인 보체 활성화 억제제는 가용성 인간 보체 수용체 1, 예를 들어, 인간화된 항 C5 단일클론성 항체 또는 인간화 단일클론성 항체의 단일-사슬 절편과 같은 항-인간 보체 단백질 C5, C1-에스테라제 억제제-N 및 천연의 인간 C1 억제제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 화합물이다.

본 발명은 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 본 발명의 Aβ 펩타이드 절편에, 적혈구 세포 내에서 0₂/헤모글로빈 친화도의 감소를 유발한 후 이어서 조절된 방식으로 산소를 조직으로 방출시키는, 헤모글로빈의 알로스테릭 효과기(allosteric effector)를 추가로 포함하는, 본원에서 전술된 바와 같은 본 발명의 백신 조성물을 추가로 포함한다.

따라서 본 발명은 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 연령-관련 아밀로이드증 및 속발성 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 질환 및 장애의 치료를 위한, Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 7 내지 16 연속 아미노산 잔기, 특히 13 내지 16 연속 아미노산 잔기의 단일 또는 반복적 스트레치로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 잔기 1-16, 1-15, 1-14, 및 1-13, 보다 상세하게는 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 잔기 1-15로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 상기 펩타이드의 각 말단에 공유적으로 부착된 팔미토일 잔기, 특히 2 내지 4, 상세하게는 4 팔미토일 잔기에 의해 변형된 본원에서 전술한 바와 같은 Aβ 펩타이드 절편, 특히 예를 들어, 리포좀과 같은 담체 입자/보조제에 부착된, 또는 함침된 또는 재구성된 본원에서 전술한 바와 같은 Aβ 펩타이드 절편을 0₂/헤모글로빈 친화도의 감소를 유발한 후 산소를 기관 조직으로 방출시키는 화합물과 함께 포함하는 백신 조성물 및 상기 조성물의 생산 방법에 관한 것이다.

특히, 본 발명의 조성물 내에서 적합하게 사용될 수 있는 화합물은 예를 들어, 클로피브릭산(clofibric acid) 또는 베자피브레이트(bezafibrate) 유도체 LR16 및 L35을 포함하는 베자피브레이트와 같은 항지질제(antilipidemic drug), 예를 들어, [2-[4[[(아릴아미노)카르보닐]-아미노]페녹시]-2-메틸프로피온산과 같은 요산 유도체, 헤모글로빈의 알로스테릭 효과기로 구성되는 그룹으로부터 선택된 것들이다.

0₂/헤모글로빈 친화도 조정 화합물은 또한 헤모글로빈의 알로스테릭 부위에 대한 음이온성 리간드를 포함하는 화합물일 수 있으며, 여기서 상기 음이온성 리간드는 내부 피로인산 고리(internal pyrophosphate ring)를, 선택적으로 예를 들어 Ca²⁺ 및 Na⁺과 같은 무독성 양이온과 함께 포함한다.

보다 명확히, 본 발명은, 본 발명의 Aβ 펩타이드 절편에 추가로 내부 피로인산 고리를 포함하는 이노시톨 헥사포스페이트(IHP) 유도체를 포함하고, 선택적으로 예를 들어, Ca² ⁺ 및 Na⁺와 같은 무독성 양이온을 함께 포함하는, 전술한 바와 같은 본 발명의 치료 백신 조성물에 관한 것이다.

또 다른 구체예에서 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 본 발명의 Aβ 펩타이드 절편에 추가로, 보체 활성화 시스템의 억제제, 상세하게는 막 조절 단백질의 가용성 버전, 보체 단백질에 대한 인간화된 항체, 보체 경로의 여러 단계에서 작용하는 소분자 억제제, 및 유전자전이 동물에서 발현되는 인간 보체 조절기로 구성되는 그룹으로부터 선택된 보체 경로의 억제제와, 0₂/헤모글로빈 친화도를 감소시킨 후, 조절된 방식으로, 보다 많은 산소를 조직으로 방출시키는, 헤모글로빈의 알로스테릭 효과기의 조합을 포함하는, 본원에서 전술된 바와 같은 본 발명의 백신 조성물이 제공된다.

따라서 본 발명은 또한 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애, 상세하게는, 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 질환 및 장애의 치료를 위한, Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 7 내지 16 연속 아미노산 잔기, 특히 13 내지 16 연속 아미노산 잔기의 단일 또는 반복적 스트레치로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 잔기 1-16, 1-15, 1-14, 및 1-13으로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기, 보다 상세하게는 서열 식별 번호:1에 주어진 바와 같은 잔기 1-15로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편 및 이의 작용적으로 균등한 절편을 포함하는 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 상기 펩타이드의 각 말단에 2 내지 4개의 팔미토일 잔기, 상세하게는 4개의 팔미토일 잔기가 공유적으로 부착된 팔미토일 잔기에 의해 변형된, 본원에서 전술된 바와 같은 Aβ 펩타이드 절편, 특히 예를 들어 리포좀과 같은 담체/보조제에 부착된, 또는 이에 함침되거나 또는 재구성된, 전술된 바와 같은 Aβ 펩타이드 절편을 보체 시스템의 억제제, 상세하게는 막 조절 단백질의 가용성 버전, 보체 단백질에 대한 인간화된 항체, 보체 경로의 여러 단계에서 작용하는 소분자 억제제 및 유전자전이 동물에서 발현되는 인간 보체 조절제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 보체 활성화의 억제제 및 화합물, 상세하게는 0₂/헤모글로빈 친화도를 감소시켜 그 후 더 많은 산소가 조절된 방식으로 조직으로 방출되도록하는, 헤모글로빈의 알로스테릭 효과기와 함께 포함하는 백신 조성물 및 상기 조성물의 생산을 위한 방법에 관한 것이다.

또 다른 구체예에서, 아밀로이드-관련 질환 또는 병태에 걸린 동물, 상세하게는 포유류, 특히 인간에게, 본원에서 전술된 바와 같은 본 발명에 따른 치료 백신 조성물, 상세하게는 Aβ_1-15펩타이드 항원, 보다 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-15펩타이드 항원을 포함하는 백신 조성물을 투여하는 것을 포함하는 아밀로이드-관련 질환 또는 병태의 치료를 위한 방법이 제공된다.

본 발명의 특정 구체예에서 상기 백신 조성물의 투여는, 주로 비염증성 서브타입, 상세하게는 예를 들어 이소타입 IgG1 및 IgG2b와 같은 비염증성 Th2 서브타입의 항체의 발생을 일으킨다.

다른 특정 구체예에서, 상기 백신 조성물의 투여는, 주로 T-세포 비의존성 IgG 서브클래스의, 상세하게는 IgG3 이소타입의 항체의 발생을 일으킨다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 백신 조성물의 투여는 뇌 내에서 염증 마커의, 상세하게는 IL-1β, IL-6, IFN-γ 및 TNFα로 구성되는 그룹으로부터 선택된 염증 마커를 현저히 증가시키지 않는다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 백신 조성물의 투여는 뇌 내의 불용성, 플라크-관련-Aβ1-40 및 Aβ1-42의 현저한 감소를 이끈다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 백신 조성물의 투여는 뇌 내의 가용성 Aβ1-42 수치의 현저한 감소를 이끈다.

특히, 아밀로이드-관련 질환 또는 병태는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증, 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질과 관련되거나 또는 이에 기인하는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환을 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 질환들로 구성되는 그룹으로부터 선택된 하나이다.

보다 상세하게는, 상기 아밀로이드 관련 질환 또는 병태는 알츠하이머병이다.

본 발명의 또 다른 특정 구체예에서, 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 아밀로이드-관련 질환 또는 병태의 치료 방법이 제공되며, 여기서 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 아밀로이드-관련 병태에 걸린 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 상기 백신 조성물의 투여는 인지 기억 능력의 보유의 증가, 상세하게는 완전 회복을 이끈다.

또 다른 구체예에서, 아밀로이드-관련 질환 또는 병태에 걸린 동물, 상세하게는 포유류, 특히 인간에게 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 항원성 구조체 및 보체 시스템의 억제제를 포함하는 치료 백신 조성물을 투여하는 것을 포함하는 아밀로이드-관련 질환 또는 병태의 치료 방법이 제공되고, 여기서 상기 백신 조성물은 상세하게는 보체 억제제 및 항원성 구조체가 동시에, 간헐적으로 또는 순차적으로 투여되도록 투여된다.

특정 구체예에서, 보체 억제제는 항원성 구조체로의 백신접종(vaccination)에 앞서, 상세하게는 백신접종 20시간 전까지는 시작하고, 백신접종 직전에 끝나는 타임 윈도우(time window) 내에 투여된다.

다른 특정 구체예에서, 보체 억제제는 항원성 구조체로의 백신접종에 이어, 백신접종 직후 시작되고 백신 적용 1일 후에 끝나는 타임 윈도우 내에 투여된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서는, 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 백신 조성물을 포함하는 아밀로이드-관련 질환 또는 병태의 치료를 위한 약제의 조제 방법이 제공된다.

본 발명의 이들 및 다른 목적, 특성, 이점은 이하에 개시된 구체예의 상세한 설명 및 첨부된 청구항의 검토 후 명백해질 것이다.

본원에서 사용된 용어 "폴리펩타이드", "펩타이드", 및 "단백질"은 펩타이드 결합에 의해 링크된 아미노산으로 구성된 생체분자를 의미하는 것으로 정의된다.

용어 "펩타이드"는 아미노산(일반적으로 L-아미노산)의 사슬로, 이의 알파 탄소는 한 아미노산의 알파 탄소의 카르복실기와 다른 아미노산의 알파 탄소의 아미노기 사이의 응축 반응에 의해 형성된 펩타이드 결합을 통해 링크된다. 사슬의 한 단부 (즉, 아미노 말단)의 말단 아미노산은 자유 아미노기를 가지고, 반면 사슬의 다른 단부(즉, 카르복시 말단)의 말단 아미노산은 자유 카르복실기를 갖는다. 그 자체로, 용어 "아미노 말단"(단축하여 N-말단)은 펩타이드의 아미노 말단에서의 아미노산의 자유 알파-아미노기, 또는 펩타이드 내의 임의의 다른 위치에서의 아미노산의 알파-아미노기(펩타이드 결합에 관여할 때에는 이미노기)를 지시한다. 유사하게, 용어 "카르복시 말단" (단축하여 C-말단)은 펩타이드의 카르복시 말단에서의 아미노산의 자유 카르복실기, 또는 펩타이드 내의 임의의 다른 위치에서의 아미노산의 카르복실기를 지시한다.

일반적으로, 펩타이드를 구성하는 아미노산은, 아미노 말단에서 시작하여 펩타이드의 카르복시 말단을 향한 방향으로 증가하는 순서로 계수된다. 따라서, 한 아미노산이 다른 것을 "따른다"고 할 때, 상기 아미노산은 앞선 아미노산에 비해 펩타이드의 카르복시 말단에 더 가깝게 위치된다.

용어 "잔기"는 아미노 결합에 의해 펩타이드 내로 혼입된 아미노산을 나타내기 위해 본원에서 사용된다. 그 자체로, 아미노산은 천연적으로 발생한 아미노산일 수 있거나 또는, 달리 제한되지 않는다면, 천연적으로 발생한 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 천연 아미노산의 공지된 유사체(analog)(즉, 아미노산 모방체(mimetic))를 포함할 수 있다. 또한, 아미드 결합 모방체는 당업자에게 공지된 펩타이드 백본(backbone) 변형물을 포함한다.

구(phrase) "로 필수적으로 구성되는(consisting essentially of)"은 상기 구가 지시하는 것에 대해 펩타이드의 필수적인 특성을 실질적으로 변경시키는 모든 요소를 배제하기 위해 본원에서 사용된다. 따라서, ". . .로 필수적으로 구성되는" 펩타이드의 설명은 상기 펩타이드의 생물학적 활성을 실질적으로 변경하는 모든 아미노산 치환, 추가, 또는 결실(deletion)을 배제한다.

또한, 당업자는 위에 언급한 바와 같은, 인코드된(encoded) 서열 내의 단일 아미노산 또는 아미노산의 적은 비율(일반적으로 5% 미만, 보다 일반적으로 1% 미만)을 변경, 첨가 또는 삭제하는 개별적 치환, 결실 또는 첨가는, 아미노산이 화학적으로 유사한 아미노산으로 치환되는 변경인 보존적으로 변형된 변이(conservatively modified variation)로 인식할 것이다. 작용적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당업계에 공지되어 있다. 하기 여섯 그룹 각각은 서로 보존적 치환되는 아미노산을 함유한다:

1) 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T);

2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E);

3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q);

4) 아르기닌(R), 라이신(K);

5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V); 및

6) 페닐알라닌(F), 타이로신(Y), 트립토판(W).

구 "단리된(isolated)" 또는 "생물학적으로 순수한(biologically pure)"은, 실질적으로 또는 필수적으로, 그의 고유(native) 상태에서 발견되는 바와 같은 정상적으로 동반하는 성분이 없는 물질을 나타낸다. 따라서, 본원에 기술된 펩타이드는 그들의 인 시투(in situ) 환경과 정상적으로 관련된 물질을 함유하지 않는다. 일반적으로, 단리된, 본원에 기술된 면역원성 펩타이드는, 은 염색된(silver stained) 겔 상의 밴드 농도로 측정된 바와 같이 적어도 약 80%, 일반적으로 적어도 약 90%, 또한 바람직하게는 적어도 약 95% 순수하다.

단백질 순도 또는 균질성(homogeneity)은, 단백질 샘플의 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 후 염색에 의한 시각화와 같은 당업계에 공지된 다수의 방법에 의해 나타낼 수 있다. 특정 목적을 위해 고분해능(high resolution)이 필요할 것이고, 정제를 위한 HPLC 또는 유사한 수단이 사용될 것이다.

면역원성 펩타이드가 길이면에서 상대적으로 짧을 때 (즉, 약 50 아미노산 미만), 그들은 종종 표준 화학적 펩타이드 합성 기술을 이용하여 합성된다.

서열의 C-말단 아미노산이 불용성 지지대(supprot)에 부착되고, 그 후 상기 서열 내의 남은 아미노산의 순차적인 첨가가 뒤따르는 고체상 합성은 본원에 기재된 면역원성 펩타이드의 화학적 합성을 위해 바람직한 방법이다. 고체상 합성을 위한 기술은 당업자에게 알려져 있다.

또는, 본원에 기술된 면역원성 펩타이드는 재조합 핵산 방법론을 이용하여 합성된다. 일반적으로, 이는 펩타이드를 인코드하는 핵산 서열의 안출, 특정 프로모터의 제어 하에 발현 카세트(cassette) 내 상기 핵산의 배치, 숙주 내에서 상기 펩타이드의 발현, 상기 발현된 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 단리 및, 요구된다면, 상기 펩타이드의 재생(renature)을 포함한다. 상기 절차를 통한 기술 중 하나를 가이드하기에 충분한 기술은 문헌에서 찾을 수 있다.

발현되면, 재조합 펩타이드는 황산암모늄 침전, 친화도 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 겔 전기영동 등을 포함하는 표준 절차에 따라 정제될 수 있다. 치료제로서의 용도를 위한 실질적으로 순수한 조성물은 약 50 % 내지 95% 균질성을 갖는 것이 바람직하고, 80% 내지 95% 또는 그 이상의 균질성이 가장 바람직하다.

당업자는, 화학적 합성, 생물학적 발현 또는 정제 후, 면역원성 펩타이드가 만들어진 펩타이드의 고유의 배좌와는 실질적으로 상이한 배좌를 가질 수 있음을 인식할 것이다. 이 경우에서, 항증식성(antiproliferative) 펩타이드를 변성 및 환원시켜 펩타이드가 바람직한 배좌로 리폴딩(re-fold)되도록 하는 것이 종종 필요하다. 단백질을 환원 및 변성시키는 방법 및 리폴딩을 유도하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다.

정제된 단백질의 항원성은 예를 들어, 면역 혈청 또는 단백질 자체에 대해 생산된 항혈청과의 반응을 증명함으로써 확인될 수 있다.

본원에서 사용된 용어 "a", "an" 및 "the"는 "하나 이상"을 의미하는 것으로 정의되며, 문맥이 어울리지 않아도 복수를 포함한다.

본원에서 사용된 용어 "검출하는(detecting)" 또는 "검출된(detected)"은, 면역화학적 또는 조직학적(histological) 방법과 같은 생물학적 분자의 검출을 위한 공지의 기술을 사용하는 것을 의미하고, 조사중인 생체분자의 존재 또는 농도를 정성적으로 또는 정량적으로 측정하는 것을 나타낸다.

"단리된(isolated)"은 자연적으로 발생했을 때 가졌던 성분의 적어도 일부가 없는 생물학적 분자를 의미한다.

본원에서 사용된 용어 "항체" 또는 "항체들"은 기술 공인 용어이고, 공지된 항원에 결합하는 분자 또는 분자의 활성 절편, 상세하게는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역적으로 활성인 부분, 즉 항원에 면역특이적으로 결합하는 결합 사이트를 함유하는 분자를 나타내는 것으로 이해된다. 본 발명의 면역글로불린은 임의의 타입(IgG, IgM, IgD, IgE, IgA 및 IgY) 또는 클래스(IgG1 , IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)) 또는 면역글로불린 분자의 서브클래스일 수 있다.

본 발명의 범위 내의 "항체들"은 단일클론성 항체, 다클론성, 키메라(chimeric), 단일 사슬, 이중특이성(bispecific), 유인원화된(simianized), 인간 및 인간화된 항체 및 이들의 활성 절편을 포함하는 것을 의도한다. 공지된 항원에 결합하는 분자의 활성 절편의 예는, Fab 면역글로불린 발현 라이브러리의 산물 및 모든 항체의 에피토프-결합 절편 및 상기 언급된 절편들을 포함하는, Fab 및 F(ab')₂절편을 포함한다.

이들 활성 절편은 다수의 기술에 의해 본 발명의 항체로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 정제된 단일클론성 항체는 펩신(pepsin)과 같은 효소로 절단(cleave)될 수 있고, 또한 HPLC 겔 여과될 수 있다. 그 후 Fab 절편을 함유하는 적절한 분획이 수합되어 막 여과 등에 의해 농축될 수 있다. 항체의 활성 절편의 단리를 위한 일반적 기술의 추가적 설명은 예를 들어, Khaw, B. A. 등 J. Nucl. Med. 23:1011-1019 (1982); Rousseaux 등 Methods Enzymology, 121 :663-69, Academic Press, 1986를 참조한다.

"인간화된 항체"는 비-인간 도너(donor) 면역글로불린으로부터 유래된 CDRs, 하나(또는 그 이상)의 인간 면역글로불린(들)로부터 유래되는 분자의 면역글로불린-유래된 일부인 나머지를 갖는, 가공된(engineered) 항체의 유형을 나타낸다. 추가로, 프레임워크 지지 잔기(framework support residue)는 결합 친화도를 보존하기 위해 변경될 수 있다. "인간화된 항체"를 수득하는 방법은 당업자들에게 공지되어 있다 (예를 들어, Queen 등, Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson 등, Bio/Technoloy, 9:421 (1991) 참조)

"인간화된 항체"는 또한 예를 들어, 토끼와 같은 큰 동물에서 친화도-발달된(affinitiy-matured) 인간유사 다클론성 항체를 생산할 수 있는 신규한 유전공학 수단에 의해 또한 수득될 수 있다 (http://www.rctech.com/bioventures/therapeutic.php).

용어 "단일클론성 항체"는 또한 당업계에서 잘 인지될 수 있으며, 또한 실험실에서 단일 클론으로부터 대량 생산된, 하나의 항원만을 인식하는 항체를 나타낸다. 단일클론성 항체는 일반적으로, 정상적으로 단명하는, 항체-생산 B 세포를 (때때로 "무한증식(immortal)" 세포로 나타내어지는) 암세포와 같은 빨리-성장하는 세포와 융합하여 제조된다. 결과물인, 대량의 항체를 생산(create)하는 클론(clone)을 생성하는 하이브리드(hybrid) 세포, 또는 하이브리도마는 빠르게 증식한다.

"작용적으로 균등한 항체"는, β-아밀로이드 단백질, 상세하게는 Aβ_1-42단백질, 또한 보다 상세하게는 Aβ_1-42단백질의 4-16 에피토프 영역에 대한 결합 특이성, 인 비트로 면역반응성, Aβ_1-42모노머의 고분자 폴리머성 원섬유로의 결집의 억제 및/또는 미리형성된 Aβ_1-42폴리머성 원섬유의 해체, 및/또는 β-시트 파괴 특성 및 예방적으로 또는 치료적으로 투여될 때, 예를 들면, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환을 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 질환을 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증과 관련된 장애의 영향을 완화시키는 것을 포함하는 본원에 기재된 및 상기에 언급된 항체와 적어도 하나의 주요 작용 특성을 실질적으로 공유하는 항체를 나타내는 것으로 본 발명의 범위 내에서 이해된다. 상기 항체는 IgG, IgM,또는 IgA 등과 같은 임의의 클래스 또는 IgG1, IgG2a등과 같은 임의의 서브클래스 및 당업계에 알려지거나 또는 본원의 상기에 언급된 다른 서브클래스일 수 있다.

또한, 항체는 파아지 디스플레이(phage display)와 같은 임의의 방법에 의해 생산될 수 있거나, 또는 인간화된 항체와 같은, 원하는 특색을 갖는 항체를 생산하는 세균의, 곤충의, 포유류의 또는 다른 유형의 세포 또는 세포주를 포함하는 임의의 유기체 또는 세포주에서 생산된다. 상기 항체는 상이한 종으로부터의 Fab부분 및 Fc 영역을 조합함으로써 형성될 수도 있다.

용어 "항원"은 유기체, 상세하게는 동물, 보다 상세하게는 인간을 포함하는 포유류 내에서 면역 반응을 유도할 수 있는 실재(entity) 또는 이의 절편을 나타낸다. 상기 용어는 항원성 또는 항원결정기의 원인인 영역 및 면역원을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "가용성"은 수용액에 부분적으로 또는 완전히 용해되는 것을 의미한다.

또한 본원에 사용된 바와 같은 용어 "면역원성"은 면역원성 작용제에 대해 유도된 항체, T-세포 및 다른 반응성 면역 세포의 생산을 향상시키거나 또는 이끌어내고, 또한 인간 또는 동물에서의 면역 반응에 기여하는 물질을 나타낸다.

면역 반응은 치료될 장애를 절제시키거나 또는 완화시키기 위해, 투여된 본 발명의 면역원성 조성물에 대해, 개체가 충분한 항체, T-세포 및 다른 반응성 면역 세포를 생산할 때 일어난다.

용어 "하이브리도마"는 항체-생산 세포와 무한증식 세포, 예를 들어 다발골수종(multiple myeloma cell) 세포의 융합에 의해 생산된 세포를 나타내는 것으로 당업계의 보통의 기술자에 의해 인식되고 이해된다. 상기 하이브리드 세포는 항체의 지속적인 공급을 일으킬 수 있다. "단일클론성 항체"의 정의는 융합 방법의 보다 상세한 설명을 위한 상기 및 이하의 실시예를 참조한다.

본원에서 사용된 용어 "담체"는 항원성 펩타이드 또는 초분자 구조체가 이의 내부로 혼입될 수 있거나 또는 이와 결합되어 인간 또는 동물의 면역 시스템에 항원성 펩타이드 또는 상기 펩타이드의 일부를 제시하거나 또는 노출시킬 수 있는 구조를 의미한다. 예를 들면, 소포, 입자 또는 미립자체와 같은 동물 또는 인간 치료에 적합하게 사용될 수 있는 모든 입자가 본 발명의 문맥 내의 담체로서 사용될 수 있다.

용어 "담체"는 항원성 펩타이드를 포함하는 초분자 항원성 구조체 조성물이 인도(delivery) 메카니즘에 의해 원하는 사이트에 수송될 수 있는 인도 방법을 또한 포함한다. 상기 인도 시스템의 한 예는 콜로이드 금과 같은 콜로이드 금속을 이용한다.

본 발명의 초분자 항원성 구조체 조성물에 사용될 수 있는 담체 단백질은 말토오스 결합 단백질 "MBP"; 소 혈청 알부민 "BSA"; 키홀 림펫 헤모시아닌(keyhole lympet hemocyanin) "KLH"; 오브알부민; 플라젤린(flagellin); 티로글로불린(thyroglobulin); 모든 종의 혈청 알부민; 모든 종의 감마 글로불린; 동계 세포(syngeneic cell); Ia 항원을 함유하는 동계 세포; 및 D- 및/또는 L-아미노산의 폴리머를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 초분자 항원성 구조체에서, 리포좀은 본원에서 전술된 바와 같은 초분자 구조체를 포함하는 담체로서 사용될 수 있는, 동시에, 본 발명의 치료 백신으로 치료될 표적 동물 또는 인간 내에서 면역 반응을 증가시키거나 또는 자극하기 위한 보조제로서 작용하는 이중 작용을 가질 수 있다. 이는 본 발명의 초분자 항원성 구조체 조성물이 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH), 소혈청 알부민(BSA) 및 예를 들어, 지질 A, 명반, 인산칼슘, 인터루킨 1, 및/또는 다당류 및 단백질의 마이크로캡슐, 상세하게는 예를 들어 모노포스포릴 또는 디포스포릴 지질 A와 같은 무독화된 지질 A, 또는 명반과 같은 다른 보조제를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 추가적 보조제, 추가의 방부제, 희석제, 유화제, 안정제, 및 종래 기술의 백신에 사용되고 알려진 다른 성분을 더 포함할 수 있는 것으로도 이해된다. 상기 보조제는 프로인트 불완전 보조제, 프로인트 완전 보조제, 다분산된 β-(1,4) 링크된 아세틸화 만난(polydispersed β-(1,4) linked acetylated mannan)("Acemannan"), TITERMAX^？(CytRx Corporation의 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 코폴리머 보조제), Chiron Corporation의 변형된 지질 보조제, Cambridge Biotech의 사포닌 유도체 보조제, 사멸된 Bordetella pertussis , 그람-음성 세균의 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide; LPS), 덱스트란 설페이트와 같은 큰 폴리머성 음이온, 및 명반, 수산화 알루미늄 또는 인산 알루미늄과 같은 무기겔을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 용어 "유효량"은, 인간 또는 동물에게 투여되었을 때, 면역 반응을 이끌어내는 항원성/면역원성 조성물의 양을 나타낸다. 상기 유효량은 일상적인 절차를 따라 당업자에 의해 쉽게 결정된다.

용어 "초분자 항원성 구조체"는 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 항원성 구조체를 나타낸다. 특히, "초분자 항원성 구조체"는 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원, 특히 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ_1-16(Δ14) 또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편을 포함하는 항원성 구조체를 나타내며, 상기 항원성 펩타이드는 예를 들어, 소포, 미립자체 또는 미립자 분자와 같은 담체, 상세하게는 리포좀 내에 함침되어 또는 재구성되어, 또는 이에 부착되어 제시된다. 보다 상세하게는, 본 발명의 항원성 펩타이드는 리포좀 담체/면역 보조제의 지질 이중층 내부로 삽입을 용이하게 하는 친지성 또는 소수성 모이어티에 의해, 상세하게는 지방산, 트리글리세리드 또는 인지질을 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 친지성 또는 소수성 모이어티, 특히 지방산, 트리글리세리드 또는 인지질에 의해 변형되고, 여기서 상기 지방산 탄소 백본은 리포좀 이중층 내 펩타이드에 대해 앵커로서 작용하는 적어도 10 탄소 원자를 가지고, 또한 펩타이드가 상기 리포좀 표면에 대해 가깝게 근접하여 안정화되도록 하는 디멘션을 갖는다.

예를 들어, 본 발명의 초분자 항원성 구조체 조성물은 비경구적으로, 특히 복막내로, 정맥내로, 피하로 및 근육내로, 범위를 제한하고자 하는 것은 아니지만, 환자당 약 1.0 ㎍ 내지 10.0 mg 범위로 투여될 수 있다. 면역 반응을 일으키기 위해 요구되는 조성물의 실제량은 투여되는 조성물의 면역원성 및 각 개인의 면역 반응에 따라 각 개인 환자에 있어 다양할 것이다. 따라서, 각 개인에게 투여되는 특정량은 일상적인 실험에 의해 또한 당업자의 훈련 및 경험에 기초하여 결정될 것이다.

본 발명의 초분자 항원성 구조체는 유기체, 상세하게는 동물 또는 인간에서 면역 반응을 유도하기 위한, 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 또는 장애 그룹인 아밀로이드증을 예방, 치료 또는 완화하기 위한 백신 조성물의 조제에 사용될 수 있다.

따라서 본 발명의 목적은 본 발명의 초분자 항원성 구조체, 상세하게는 본 발명의 초분자 항원성 구조체를 포함하는 백신 조성물을 상기 장애에 걸려 치료를 필요로 하는 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 투여함으로써, 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 또는 장애 그룹인 아밀로이드증의 영향을 예방, 치료 또는 완화하기 위한 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 구체예에서는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증의 영향을 예방, 치료 또는 완화하기 위한, 상기 장애, 질환 또는 병태에 걸려 치료를 필요로 하는 유기체, 상세하게는 동물 또는 인간에서 면역 반응을 유도하기 위한 백신 조성물의 조제를 위한 방법이 제공된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서는, 본 발명의 항체를 약제학적으로 허용되는 형태로 제형화하는 것을 포함하는, 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증의 영향을 예방, 치료 또는 완화하기 위한 조성물의 조제를 위한 방법이 제공된다.

특정 구체예에서, 본 발명은 마침내 고도의 특이적인 면역 반응을 일으키고, 독특한 특성의 항체를 발생시키는 바람직한 항원 배좌의 향상된 노출 및 안정화를 야기하는 항원 제시를 이용한다.

한 구체예에서, 본 발명은 β-아밀로이드 펩타이드의 N-말단부를 대표하는 전술된 바와 같은 본 발명의 β-아밀로이드 펩타이드 항원을 포함하는 초분자 항원성 구조체를 포함하는 면역원성 조성물을 제공하고, 상기 항원성 펩타이드는 변형되어 항원의 정해진 배좌, 상세하게는 랜덤 코일부, α-나선부 및 β-시트부의 균형 비율을 특징으로 하는 배좌를 유지 및 안정화시킬 수 있다. 이 정해진 배좌는 동물 또는 인간에게 도입된 후 강한 및 고도의 특이적 면역 반응을 유도시킨다.

배좌 및 항원성 펩타이드의 희망하는 배좌의 안정화를 수득하기 위한 한 방법은 부분적으로 또는 전체적으로, 예를 들어, 소포, 미립자체 또는 미립자 분자와 같은 담체 또는 항원성 펩타이드를 위한 담체/보조제로서 적합하게 사용될 수 있는 임의의 다른 수단 내부로, 부분적으로 또는 완전히, 함침된 또는 재구성된, 또는 이에 부착된 항원성 펩타이드를 제시함에 의한다. 본 발명의 특정 구체예에서, 항원성 펩타이드는 예를 들어, 반 데르 발스의, 소수성 또는 정전기적 상호작용, 또는 상기 상호작용의 둘 이상의 조합과 같은 약한 상호작용을 통해 담체 내에 함침되거나 또는 재구성되고, 또는 이에 부착되고, 상기 펩타이드는, 상기 항원성 펩타이드의 삼차원적 움직임(movement)의 자유를 한정하여 배좌 변화가 예방되고 또는 몹시 한정됨으로써 유지되고 안정화되는 특정 배좌로 제시된다.

소포, 입자 또는 미립자체가 예를 들어, 리포좀과 같은 담체/보조제로서 사용될 때, 항원성 펩타이드의 조성물은 그의 전체 순 전하가 펩타이드가 부착되는 담체/보조제 표면의 전체 순 전하와 동일하도록 선택될 수 있다. 동일하게 대전된 담체/보조제 표면과 항원성 펩타이드, 특히, 동일하게 대전된 담체 표면과 항원성 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기, 또한 보다 상세하게는 동일하게 대전된 담체 표면과 항원성 펩타이드에 포함된 동일하게 대전된 아미노산 잔기 사이에서 효율적인 정전기적 반발력(electrostatic repulsion force)은 고도의 생물학적 활성을 보장하는 정해진, 고도로 특이적인 및 안정화된 배좌를 갖는 항원성 펩타이드가 되도록 할 수 있다. 결과로서, 항원성 펩타이드는 표적 유기체의 면역 시스템이 생물학적 활성 배좌 내 항원성 구조체 내에 함유된 항원 결정기와 자유롭게 상호작용할 수 있도록 하는 고도의 생물학적으로 활성인 배좌로 노출되고 제시되어, 예를 들어, 표적 유기체 내에서의 높은 항체 역가를 야기하는, 강하고도 배좌-특이적인 면역 반응을 이끈다.

일측면 상의 항원성 펩타이드의 전체 순 전하 및 다른측면 상의 펩타이드가 부착될, 함침될 또는 재구성될 담체의 전체 순 전하를 주의하여 조화시킴(coordinate)으로써, 동일하게 대전된 담체 표면과 항원성 펩타이드, 상세하게는 동일하게 대전된 담체 표면과 항원성 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기, 또한 보다 상세하게는 동일하게 대전된 담체 표면과 항원성 펩타이드 내에 포함된 동일하게 대전된 아미노산 잔기 사이에서 효율적인 정전기적 반발력에 의해 유도되고 안정화된 배좌의 항원성 펩타이드는 담체 표면 상에, 또는 매우 근접하여 노출되어 제시된다. 이는 표적 유기체의 면역 방어 기구(immune defense machinery)에 자유로이 접근 가능하고, 따라서 동물 또는 인간에게 투여한 후 강하고 고도의 특이적인 면역 반응의 유도가 가능한 항원성 구조체를 제시시킨다. 면역원성 반응은 담체로서 리포좀을 사용함으로써 또한 증가될 수 있으며, 상기 리포좀은 본 발명의 치료 백신으로 치료될 표적 동물 또는 인간 내부의 면역 반응을 증가시키거나 또는 자극할 수 있는 보조제로서 작용할 수 있다. 선택적으로, 상기 리포좀은 예를 들어, 지질 A, 명반, 인산칼슘, 인터루킨 1, 및/또는 다당류 및 단백질의 마이크로캡슐과 같은 추가의 보조제, 특히 상세하게는 모노포스포릴 또는 디포스포릴 지질 A와 같은 무독화된 지질 A 또는 명반을 추가로 함유할 수 있다.

본 발명의 특정 구체예에서, 본원에서 전술된 바와 같은 본 발명의 항원성 펩타이드, 상세하게는 전체 순 전하가 음(negative)인 항원성 펩타이드는 리포좀, 상세하게는 리포좀 머리부(head group)의 전체 순 전하가 음이 되도록 성분이 선택된 리포좀에서 재구성되어 사용된다. 특히, 리포좀은 디미리스토일 포스파티딜 콜린(DMPC), 디미리스토일 포스파티딜 에탄올아민(DMPEA), 디미리스토일 포스파티딜 글리세롤(DMPG) 및 콜레스테롤로 구성되는 그룹으로부터 선택된 성분으로 구성되고 또한, 선택적으로 모노포스포릴 지질 A 또는 예를 들어, 명반, 인산칼슘, 인터루킨 1, 및/또는 다당류 및 단백질의 마이크로캡슐과 같은 본 발명의 범위 내에서 적절하게 사용될 수 있는 임의의 다른 보조제를 함유한다.

본 발명의 다른 특정 구체예에서 본원에서 전술된 바와 같은 본 발명의 변형된 펩타이드 항원은, 담체/보조제 내로 삽입시킬 수 있어 상기 펩타이드를 상기 담체/보조제에 고정시키고 또한 담체/보조제 분자의 표면상에 또는 이에 근접하여 제시시킬 수 있는 앵커-유형 분자에 공유적으로 결합되어 본원에서 전술한 바와 같이 정전기력이 효율적이 되도록 제공된다.

리포좀이 담체/보조제로서 사용될 때, 항원성 펩타이드 구조체는 형성되었을 때 일반적으로 리포좀 막 내부로 삽입되는 소수성 꼬리(tail)를 갖는다.

추가로, 항원성 펩타이드는 소수성 꼬리를 함유하도록 변형될 수 있어, 리포좀 내부로 삽입될 수 있다.

본 발명의 초분자 항원성 구조체는 일반적으로 항원성 효과를 향상시키도록 변형된 펩타이드를 포함하고, 여기서 상기 펩타이드는 (폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 사용하는) PEG화를 통해 변형될 수 있고, 또는 전술한 바와 같은 팔미트산, 폴리-아미노산 (예를 들어 폴리-글리신, 폴리-히스티딘), 다당류(예를 들어 폴리갈락투론산(polygalacturonic acid), 폴리락트산(polylactic acid), 폴리글리콜리드(polyglycolide), 키틴, 키토산), 합성 폴리머 (폴리아미드, 폴리우레탄, 폴리에스테르) 또는 코폴리머 (예를 들어 폴리(메타크릴산) 및 N-(2-히드록시)프로필메타크릴아미드) 등과 같은 다른 방법을 통해 변형될 수 있다.

본 발명의 특정 구체예에서, 본원에서 전술된 바와 같은 본 발명의 항원성 펩타이드는 소수성 꼬리를 함유하도록 변형되어 제공되어 상기 펩타이드는 리포좀 내부로 삽입될 수 있다. 특히, β-아밀로이드 펩타이드는 담체/보조제의 지질 이중층 내부로의 삽입을 용이하게 하는 친지성 또는 소수성 모이어티에 의해 변형될 수 있다. 본 발명의 친지성 또는 소수성 모이어티는 지방산, 트리글리세리드 및 인지질일 수 있고, 상세하게는 지방산, 트리글리세리드 및 인지질이고, 여기서 상기 지방산 탄소 백본은 적어도 10개의 탄소 원자, 상세하게는 적어도 약 14개의 탄소 원자의 또한 약 24개 탄소 원자 이하의 탄소 백본을 갖는 지방산을 갖는 친지성 모이어티, 보다 상세하게는 적어도 14개의 탄소 원자의 탄소 백본을 갖는 소수성 모이어티를 갖는다. 소수성 모이어티의 예는 팔미트산, 스테아르산, 미리스트산, 라우르산, 올레산, 리놀레산, 리놀레산 및 콜레스테롤 또는 DSPE를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 특정 구체예에서 소수성 모이어티는 팔미트산이다.

C₁₆ _:0 지방산 모이어티의 상대적으로 감소된 길이에 기인한 팔미토일화는, 리포좀 이중층 내의 펩타이드를 위한 앵커를 제공하는 동시에, 상기 펩타이드가 상기 리포좀 표면상에 또는 이에 매우 근접하여 노출되어 제시되도록 한다. 따라서, 항원을 처리하는 세포는 펩타이드를 갖는 전체 리포좀을 섭취해야할 것이다. 본 발명의 다른 구체예에서, PEG는 초분자 구조체의 조제에 사용되고, 여기서 자유 PEG 말단은 포스파티딜에탄올아민 분자에 공유적으로 부착된다 (지방산은 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 올레산 등 또는 이의 조합일 수 있다). 이 초분자 구조는 인지질 및 콜레스테롤(여러 몰비의 포스파티딜에탄올 아민, 포스파티딜 글리세롤, 콜레스테롤)로 구성되는 리포좀 내에서 재구성될 수 있다. 다른 인지질이 사용될 수 있다. 지질 A는 인지질의 약 40 ㎍/pmole 농도로 사용된다.

본 발명의 또 다른 목적은 본원에 전술한 바와 같은 본 발명의 항원성 펩타이드를 포함하는 초분자 항원성 구조체를 포함하는 백신 조성물을 제공하는 것으로, 상기 펩타이드는 항원성 효과를 향상시키기 위해 변형되고 여기서 상기 펩타이드, 상세하게는 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편, Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ_1-16(Δ14)또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 Aβ 펩타이드 절편은 (폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 사용하는) PEG화를 통해 변형되거나, 또는 폴리-아미노산 (예를 들어 폴리-글리신, 폴리-히스티딘), 다당류(예를 들어 폴리갈락투론산, 폴리락트산, 폴리글리콜리드, 키틴, 키토산), 합성 폴리머 (폴리아미드, 폴리우레탄, 폴리에스테르) 또는 코폴리머 (리(메타크릴산) 및 N-(2-히드록시)프로필메타크릴아미드) 등과 같은 다른 방법을 통해 변형된다.

본 발명의 다른 구체예에서, 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 β-아밀로이드 펩타이드 항원은, 리포좀 내에서 재구성되도록 펩타이드의 각 말단에 공유적으로 부착된 2개 내지 4개 사이의, 상세하게는 4개의 잔기 팔미토일 잔기로 변형된, Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편, 특히 1-15, 2-15, 3-15, 1-14, 2-14, 1-13; 1-16(Δ2), 1-16(Δ4), 1-16(Δ5), 1-16(Δ6), 1-16(Δ8), 1-16(Δ9), 1-16(Δ10); 1-16(Δ12), 16(Δ13), 16(Δ14), 1-16(Δ15), 1-15(Δ2), 1-15(Δ4), 1-15(Δ5), 1-15(Δ6), 1-15(Δ8), 1-15(Δ9), 1-15(Δ10); 1-15(Δ12), 15(Δ13), 15(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되는 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편, 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-16(Δ15)펩타이드 항원, 보다 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-16(Δ14)또는 Aβ_1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 한층 더 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-14 펩타이드 항원, 특히 팔미토일화된 Aβ_1-15펩타이드 항원, 특히 서열 식별 번호: 1로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-15, 및 서열 식별 번호: 3으로 주어진 바와 같은 아미노산 잔기 1-16(Δ14)로 구성되는 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 절편이다. 이 팔미토일화된 항원성 구조체는 속발성 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증의 치료에 사용될 수 있으며, 또한 질환과 관련된 증상을 완화하기 위해 또는 질환에 걸리지 않은 건강 개체에서 발견되는 상태를 회복시키기 위해 사용될 수 있다.

특정 구체예에서, 본 발명의 초분자 항원성 구조체는 각 말단의 적어도 하나, 상세하게는 각 말단의 1 또는 2의 PEG화된 라이신-에 공유적으로 부착된, 본원에서 전술한 바와 같은 항원성 펩타이드 서열을 포함한다. 폴리에틸렌글리콜(PEG) 사슬의 길이는 n = 8 내지 n = 150.000 이상, 상세하게는 n = 10 내지 n = 80.000, 보다 상세하게는 n = 10 내지 n = 10.000로 다양할 수 있다. 본 발명의 특정 구체예에서 PEG 사슬의 길이는 n = 45를 초과하지 않고, 상세하게는 n = 5 내지 n = 40, 보다 상세하게는 n = 10 내지 n = 30, 그리고 보다 더 상세하게는 n=10이다.

본 발명의 조성물 내에 사용될 수 있는 리포좀은 당업자에게 공지된 것들을 포함한다. 리포좀을 만들기 위해 사용가능한 모든 규격 지질이 사용될 수 있다. 규격 이중층 및 다중층 리포좀이 본 발명의 조성물을 제조하기 위해 사용될 수 있다. 당업자에게 공지된 리포좀을 제조하는 모든 방법이 사용될 수 있지만, 가장 바람직한 리포좀은 본원에 참조로서 삽입된 Alving 등, Infect . Immun . 60:2438-2444, 1992의 방법에 따라 제조된다. 상기 리포좀은 보조제 또는 면역조절물질 또는 둘 모두를 선택적으로 함유할 수 있다. 바람직한 면역조절물질은 지질 A, 상세하게는 예를 들어, 모노포스포릴 또는 디포스포릴 지질 A와 같은 무독화된 지질 A이다.

상기 리포좀은, 본원에서 전술된 바와 같은 초분자 구조체를 포함하는 담체로서 사용될 수 있는, 동시에, 본 발명의 치료 백신으로 치료될 표적 동물 또는 인간 내에서 면역 반응을 증가시키거나 또는 자극하기 위한 보조제로서의 작용인, 이중의 작용성을 가질 수 있다. 선택적으로, 상기 리포좀은 예를 들어, 지질 A, 명반, 인산칼슘, 인터루킨 1, 및/또는 다당류 및 단백질의 마이크로캡슐, 상세하게는 지질 A, 보다 상세하게는 모노포스포릴 또는 디포스포릴 지질 A와 같은 무독화된 지질 A 또는 명반과 같은 추가의 보조제 또는 및 면역조절물질 또는 둘 모두를 추가로 함유할 수 있다.

특히, 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환, 상세하게는 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하는 연령-관련 아밀로이드증은, 본 발명의 초분자 항원성 구조체, 특히 본 발명의 초분자 항원성 구조체를 포함하는 백신 조성물을 상기 장애, 특히 증상의 표시가 가벼운 건망증 내지 전체 기억 상실로 증명되는 알츠하이머병에 걸려 치료를 필요로 하는 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 투여함으로써 치료된다.

본원에서 전술된 바와 같은 본 발명의 초분자 항원성 구조체를 포함하는 본 발명의 조성물은 액체 용액, 또는 주사가능한 현탁액 형태로, 그렇지 않으면 이하에 기재된 바와 같은, 예를 들어, 본 발명의 조성물을 이용하기 위한 키트의 환경에서 주사 전에 가용화하기에 적합한 고체 형태로 조제될 수 있다.

초분자 항원성 구조체를 포함하는 본 발명의 조성물은 아밀로이드-관련 질환에 걸린 인간 또는 동물에서 상기 질환과 관련된 증상을 완화하기 위한 면역 반응을 유도하기 위해, 또는 상기 질환에 걸리지 않은 건강 개체에서 발견된 상태를 회복시키기 위해 인간 또는 동물에게 투여된다.

본 발명의 조성물은 임의의 적절한 표준 투여 루트(route)에 의해 인간 또는 동물에게 투여된다. 일반적으로, 상기 조성물은 국소적, 경구적, 직장, 비강 또는 비경구적(예를 들어, 정맥내, 피하, 또는 근육내) 루트로 투여될 수 있다. 추가로, 상기 조성물은 생분해성 폴리머와 같은 서방성 매트릭스 내로 함침될 수 있고, 상기 폴리머는 인도가 희망되는 곳의, 예를 들어, 종양 사이트 부근에 삽입(implant)될 수 있다. 상기 방법은 단일 용량의 투여, 미리결정된 시간 간격에서의 반복 용량의 투여, 및 미리결정된 시기에 대한 지속 투여(sustained administration)를 포함한다.

특히, 본 발명의 항원성 펩타이드 조성물은 비경구적으로, 상세하게는 복막내, 정맥내, 피하 및 근육내 주입에 의해 투여된다.

상기 조성물의 투여량은, 치료될 병태, 사용되는 특정 조성물, 및 환자의 무게, 크기 및 상태와 같은 다른 임상적 요인, 체표면적, 투여되는 특정 화합물 또는 조성물, 동시에 투여될 다른 약물, 및 투여 루트에 의존할 것이다.

본 발명의 치료 백신 조성물은 다른 생물학적 활성 물질 및 질환의 치료를 위한 절차와 조합되어 투여될 수 있다. 상기 다른 생물학적 활성 물질은 혼합물의 형태인 본 발명의 치료 백신을 이미 포함하는 동일한 조성물의 일부일 수 있으며, 여기서 상기 치료 백신 및 다른 생물학적 활성 물질은 동일한 약제학적으로 허용가능한 용매 및/또는 담체에서 또는 이와 함께 혼합(intermix)되거나 또는 개별적 조성물의 일부로서 개별적으로 제공될 수 있고, 이는 부품(parts)의 키트 형태로 개별적으로 또는 함께 제공될 수 있다.

본 발명의 치료 백신 조성물은 다른 생물학적 활성 물질 또는 물질들과 동시에, 간헐적으로 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 치료 백신 조성물은 제1 추가적 생물학적 활성 물질과 동시에 또는 상기 치료 백신의 투여 전 또는 그 후 순차적으로 투여될 수 있다. 하나 이상의 추가적 생물학적 활성 물질이 하나 이상의 본 발명의 치료 백신과 함께 투여되는 적용 계획이 선택된다면, 여러 조합의 화합물 또는 물질은 부분적으로 동시에, 부분적으로 순차적으로 투여될 수 있다.

본 발명의 다른 목적은 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환을 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 질환과 같은 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증의 영향의 예방 및/또는 요법적 치료 및/또는 완화를 위한, 본 발명의 치료 백신 및, 선택적으로, 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 물질의 혼합물, 뿐만 아니라 본 발명의 치료 백신, 또는 상기 치료 백신 또는 치료 백신의 혼합물을 포함하는 조성물을 포함하는 이의 혼합물을 사용하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 혼합물은, 본 발명의 치료 백신에 추가로, 면역원성 펩타이드 항원에 대해 생성된(raised) 항체, 상세하게는 초분자 항원성 구조체의 형태로 제시된 면역원성 항원에 대해 생성된 항체, 보다 상세하게는 본원에 개시된 바와 같은 본 발명의 항체를 포함하는, 예를 들어, 알츠하이머병에 관여하는 Aβ 단백질과 같은 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질과 관련된 질환 또는 장애 그룹인 아밀로이드증의 약제로 사용되는 공지된 화합물과 같은 생물학적 활성 물질을 포함할 수 있다.

본 발명의 다른 구체예에서, 다른 생물학적 활성 물질 또는 화합물은 또한 아밀로이드 β 에 기인하는 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 질환 및 장애의 치료에 사용될 수 있거나 또는 다른 신경계 장애의 약제로 사용될 수 있는 치료제가 될 수 있다.

상기 다른 생물학적 활성 물질 또는 화합물은 본 발명의 치료 백신과 동일한 또는 유사한 메카니즘에 의해 또는 언급되지 않은 작용 메카니즘에 의해 또는 언급된 및/또는 언급되지 않은 작용 메카니즘의 다양성(multiplicity)에 의해 그의 생물학적 효과를 발휘할 수 있다.

일반적으로, 상기 다른 생물학적 활성 화합물은 중성자-전달 증강제(neutron-transmission enhancer), 정신치료제(psychotherapeutic drug), 아세틸콜린 에스테라아제 억제제, 칼슘-채널 차단제(blocker), 생원성(biogenic) 아민, 벤조디아제핀 진정제(tranquillizer), 아세틸콜린 합성, 저장 또는 방출 증강제, 아세틸콜린 시냅스 후부의 수용체 작용제, 모노아민 옥시다아제-A 또는 -B 억제제, N-메틸-D-아스파르테이트 글루타메이트 수용체 길항제, 비스테로이드성 항염증제, 항산화제, 및 세로토닌 수용체(serotonergic receptor) 길항제를 포함할 수 있다.

특히, 본 발명의 혼합물은 산화적 스트레스에 대한 화합물, 항-자가사멸 화합물, 금속 킬레이터(chelator), 피렌제핀(pirenzepin) 및 대사물과 같은 DNA 수복 억제제, 3-아미노-1-프로판술폰산(3APS), 1,3-프로판디술포네이트(1,3PDS), 세크레타아제 활성제(secretase activator), β- 및 γ-세크레타아제 억제제, 타우 단백질(tau protein), 신경전달물질(neurotransmitter), β-시트 파괴제(sheet breaker), 항-염증 분자, 또는 타크린(tacrine), 리바스티그민(rivastigmine), 도네페질(donepezil), 및/또는 갈란타민(galantamine)과 같은 콜린에스테라아제 억제제(ChEIs) 및 다른 약물 및 영양 보조제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 생물학적 활성 화합물과, 본 발명의 치료 백신 및, 선택적으로, 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 희석제 및/또는 부형제를 함께 포함할 수 있다.

다른 구체예에서, 본 발명의 혼합물은 본 발명의 치료 백신과 함께 니아신(niacin) 또는 메만틴(memantine)을, 선택적으로, 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 희석제 및/또는 부형제를 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서 제공되는 혼합물은, 환각(hallucination), 망상(delusion), (두드러진 사고산란(marked incoherence), 탈선(derailment), 사고이탈(tangentiality)로 표시되는) 사고 장애(thought disorder), 및 기묘한 또는 혼란된 행동, 뿐만 아니라 무쾌감증(anhedonia), 정서둔마(flattened affect), 무감동(apathy), 및 사회적 위축(social withdrawal)을 포함하는 양성 및 음성 정신병 증상의 치료를 위해, 예를 들어, 클로자핀(clozapine), 지프라시돈(ziprasidone), 리스페리돈(risperidone), 아리피프라졸(aripiprazole) 또는 올란자핀(olanzapine)과 같은 "비전형적 항정신병약(atypical antipsychotics)"을, 본 발명의 치료 백신 및, 선택적으로, 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 희석제 및/또는 부형제와 함께 포함한다.

본 발명의 특정 구체예에서, 본원에서 전술된 바와 같은 본 발명의 조성물 및 혼합물은 치료적 또는 예방적 유효량의 본 발명의 백신 및 생물학적 활성 물질을 각각 포함한다.

본 발명의 백신과 조합되어 혼합물에 적절하게 사용될 수 있는 다른 화합물은, 예를 들어, 치료 약물 표적(36-39페이지), 알칸술폰산 및 알칸올황산(39-51페이지), 콜린에스테라아제 억제제(51-56페이지), NMDA 수용체 길항제(56-58페이지), 에스트로겐(58-59페이지), 비스테로이드성 항-염증제(60-61페이지), 항산화제(61-62페이지), 퍼옥시좀 증식체-활성화된 수용체(peroxisome proliferators-activated receptor; PPAR) 작용제(63-67페이지), 콜레스테롤-저하 작용제(68-75페이지); 아밀로이드 억제제(75-77페이지), 아밀로이드 형성 억제제(77-78페이지), 금속 킬레이터(78-79페이지), 항-정신병약 및 항-우울제(80-82페이지), 영양 보충제(83-89페이지) 및 뇌 내 생물학적 활성 물질의 유용성을 증가시키는 화합물(89-93페이지 참조) 및 전구약물(prodrug)(93 및 94페이지)로, 특히 상기에 지시된 페이지에 언급된 화합물을 포함하는 본원에 참조로서 삽입된 문서인 WO 2004/058258 (특히 16 및 17페이지 참조)에 설명된다.

정상 숙주 단백질을 갖는 동물 또는 인간 숙주의 백신접종은 자가면역 장애로서 집단적으로 알려진 장애를 야기하는 숙주 단백질에 대한 자가-항체의 발생을 이끌 수 있음이 오랫동안 알려졌다. Aβ 및 이의 APP 전구체 단백질은 상기 정상 단백질이다. 따라서 백신접종에 이들 숙주 단백질을 이용하는 것은 바라지 않았던 부작용을 일으키는 잠재성을 갖는다. Aβ가, 알츠하이머병 또는 다른 신경퇴행성 질환에 걸린 환자에게서 이미 고도로 활성화된, 보체 시스템의 과활성화에 의해 부분적으로 기인될 수 있는 신경염증 반응을 활성화시킬 수 있다는 일부 증거가 문헌에 있다.

β-시트 배좌의 인간 Aβ는 인간 보체 시스템의 강력한 활성제이다. 이는 인간 보체 C1q의 콜라겐 꼬리에 강하게 결합한다. 보체 시스템의 과활성화는 숙주의 천연 방어 시스템을 바꾸고, 신경을 포함하는 세포 및 조직과 그들의 처리를 자괴(autodestruction)시킨다. 예를 들어, 막 공격 복합체(membrane attack complex; MAC)는 숙주의 천연 방어 시스템의 일부이고, 숙주 세포 내부로 이를 삽입할 수 있고, 자괴를 일으킬 수 있는 과활성화를 통해, 침입하는 세균 및 바이러스 내부로 이를 삽입함으로써 상기 세균 및 바이러스로부터 숙주를 보호한다. 과활성화는 또한 무산소 라디칼(oxygen-free radical) 및 해로운 단백질 분해효소와 같은 독성 화합물을 생성하도록 미세아교 세포를 자극시킬 수 있다.

따라서 본 발명의 추가의 목적은, 이미 과활성화된 보체 시스템을 더욱 자극할 잠재성을 갖는, 자가항원을 갖는 자가면역질환에 걸린 동물 또는 인간에게의 백신 접종에 기인하는 신경계 합병증과 같은 잠재적 부작용을 예방하는 것이다. 이는 Aβ 펩타이드 항원, 상세하게는 팔미토일화된 Aβ 펩타이드 항원, 보다 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-15 펩타이드 항원, 특히 팔미토일화된 Aβ_1-15 펩타이드 항원(ACI-24, Aβ_1-15)을 보체 억제제와 조합하여 투여함으로써 본 발명의 범위 내에서 달성될 수 있다.

따라서 본 발명의 다른 구체예는 Aβ 펩타이드 항원, 상세하게는 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원에 추가로 보체 시스템의 억제제를 포함하는 백신 조성물을 제공한다.

상기 보체 억제제는 가용성 인간 보체 수용체 1, 예를 들어, 인간화된 항 C5 단일클론성 항체 또는 인간화된 단일클론성 항체의 단일 사슬 절편과 같은 항-인간 보체 단백질 C5, C1-에스테라아제 억제제-N 및 천연 인간 C1 억제제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 화합물일 수 있다.

최근, Aβ와 뇌혈관 질환의 동반이환(co / morbidity), Aβ와 죽상동맥경화증의 링크, 아밀로이드 혈관병증(angiopathy)과 관련된 인지 장애, 유의한 뇌 미세혈관 병리학, 및 알츠하이머병에서의 혈액뇌장벽을 가로지르는 Aβ의 불충분한 제거에 중점을 두고 있으며, 모두 혈관 장애가 알츠하이머병에서의 만성 신경퇴행성 병태의 중요한 특성임을 나타낸다 (Zlokovic, B.: (2005) Trends in Neurosciences 28, 202-208). 따라서, 신경혈관 기능장애(neurovascular dysfunction)는 알츠하이머병의 발병기전에서 주요 역할을 할 수 있다.

알츠하이머병과 뇌혈관 장애의 인지 감퇴 사이의 강한 관련의 충분한 증거가 있다 (Torre, de la, J. C: (2004) Neurol. Res. 26, 517-524, Gorelick, P. B.: (2004) Stroke 35, 2620-2622). 감소된 미세혈관 밀도, 절편화된 혈관의 증가된 수, 혈관 직경의 두드러진 변화 등이 알츠하이머병에서 설명되어 왔다 (Bailey, T. L. 등:(2004) Neurol. Res. 26, 573-578 Farkas, E., 및 Luiten, P. G.: (2001) Prof. Neurobiol. 64, 575-611).

큰 모집단에 기초한 로테르담 연구를 포함하는 여러 연구(Greenberg, S. M 등: (2004) Stroke 35, 2616-2619)는 혈관성 위험 요소가 소위 "혈관성 치매(Vascular dementia)"를 이끄는 노인에서의 인지 감퇴의 원인일 수 있음을 나타내었다. 일과성 허혈성 발작(transient ischemia attack), 죽상동맥경화증(atherosclerosis), 심장 질환, 높은 혈청 점도(high serum viscosity) 등을 포함하는 알츠하이머병 및 혈관성 치매에 대한 여러 위험 요소는 중복된다.

혈관성 치매는 뇌 내의 좁아진 또는 막힌 혈관에 기인하는 산소 부족에 뒤따르는 뇌 조직 손상의 결과로서 일어나며, 두번째로 자주 일어나는 치매의 형태이다. 환자는 종종 알츠하이머병 및 혈관성 치매의 두 형태에 걸린다. EU에서는 170만명 및 미국에서는 55.000명의 사람이 혈관성 치매를 앓는 것으로 추정된다.

뇌 내의 정상 O₂ -압력을 회복시키는 요법은, 혈액 흐름 장애에도 불구하고, 알츠하이머병의 전개에 유의한 영향을 미치는 및 혈관성 치매를 현저하게 감소시키는 잠재성을 가진다.

따라서 백신 조성물을 제공하기 위한 본 발명의 또 다른 구체예는 Aβ 펩타이드 항원, 상세하게는 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원에 추가로, 0₂/헤모글로빈 친화도의 감소를 유발하여 그 결과로서 산소가 기관 조직으로 방출되도록 하는 화합물을 포함한다.

특히, 0₂/헤모글로빈 친화도 조정 화합물은, 예를 들어, 클로피브릭산 또는 베자피브레이트 유도체 LR16 및 L35를 포함하는 베자피브레이트와 같은 항지질제, 예를 들어, [2-[4[[(아릴아미노)카르보닐]-아미노]페녹시]-2-메틸프로피온산과 같은 요산 유도체, 예를 들어, 2,3-디포스포글리세레이트(DPG), 이노시톨 헥사키스포스페이트(IHP), 및 피리독살 포스페이트와 같은 헤모글로빈의 알로스테릭 효과기로 구성되는 그룹으로부터 선택된 화합물일 수 있다.

보다 상세하게는, 상기 0₂/헤모글로빈 친화도 조정 화합물은 헤모글로빈의 알로스테릭 부위에 대한 음이온성 리간드를 포함하는 화합물일 수 있으며, 여기서 상기 음이온성 리간드는 내부 피로인산 고리를, 선택적으로 무독성 양이온과 함께 포함한다.

보다 더 상세하게는, 상기 0₂/헤모글로빈 친화도 조정 화합물은 적어도 하나의 내부 피로인산 고리를, 선택적으로 무독성 양이온을 함께 포함하는 이노시톨 헥사포스페이트(IHP) 유도체이다.

과활성화된 보체 시스템 및 뇌혈관성 장애 각각의 잠재적으로 유해한 영향을 완화하는 것에서 보체 억제제 및 0₂/헤모글로빈 친화도 조정 화합물에 의해 제공되는 유익한 영향을 획득하기 위해, 본 발명은 백신 조성물을 제공하고, 여기서 Aβ 펩타이드 항원, 상세하게는 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원은 보체 시스템의 억제제 및 O₂/헤모글로빈 친화도 조정 화합물, 상세하게는 헤모글로빈의 알로스테릭 효과기와 조합되어 포함된다.

Aβ 펩타이드 항원, 상세하게는 본원에서 전술된 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원을 포함하는 본 발명의 백신 조성물은 과활성화된 보체 시스템 및 뇌혈관 장애 각각의 잠재적으로 유해한 영향을 완화하기 위해 보체 억제제 및/또는 0₂/헤모글로빈 친화도 조정 화합물과 동시에, 간헐적으로 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 백신 조성물은 보체 억제제와 동시에 또는 백신의 투여 전 또는 후에 순차적으로 투여될 수 있다. 보체 억제제 및 0₂/헤모글로빈 친화도 조정 화합물, 상세하게는 헤모글로빈의 알로스테릭 효과기가 적어도 하나의 본 발명의 백신과 함께 투여되는 적용 계획이 선택된다면, 여러 조합의 상기 화합물 또는 물질은 부분적으로 동시에, 부분적으로 순차적으로 투여될 수 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 알츠하이머병(AD), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 신경계 장애; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환을 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 질환과 같은 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크와 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증의 영향을 예방 및/또는 요법적 치료 및/또는 완화하기 위한, 본 발명의 백신과 보체 억제제 및/또는 0₂/헤모글로빈 친화도 조정 화합물, 상세하게는 헤모글로빈의 알로스테릭 효과기의 혼합물뿐만 아니라 본 발명의 백신, 또는 상기 백신 또는 본 발명의 백신과 보체 억제제 및/또는 O₂/헤모글로빈 친화도 조정 화합물, 상세하게는 헤모글로빈의 알로스테릭 효과기의 혼합물을 포함하는 조성물을 포함하는 이의 혼합물을 사용하는 방법을 제공하는 것이다.

변형된 아밀로이드 1-15 펩타이드는 Nicolau 등 (2002) Proc Natl. Acad. Sci USA 99, 2332-2337에 보고된 방법에 따라 합성될 수 있다. Nicolau 등에서 보고된 수단은 미리형성된 펩타이드의 말단 아미노산 잔기에 대해 친지성 또는 소수성 모이어티의 수지상 그래프팅(on-resin grafting)에 의해 항원성 펩타이드를 변형시키는 것을 포함한다. 특히, 보호된 아미노산, 상세하게는 Fmoc-보호된 아미노산은 공지된 커플링 케미스트리(coupling chemistry)에 의해 수지에 부착된다. 상기 보호기는 제거되고, 두번째 보호된 아미노산 잔기가 커플링된다. 그 후, 서열 식별 번호: 1로 주어진 서열을 갖는 펩타이드 조각을 생산하기 위해, 공지된 보호 케미스트리, 상세하게는 Fmoc/tBu 케미스트리를 이용하는 자동화된 표준 펩타이드 합성, 및 표준 측쇄 보호기가 아밀로이드 단백질 Aβ_1-42의 아미노산 1 내지 15 상에 커플링시킴에 의한 Aβ 항원성 펩타이드, 상세하게는 Aβ_1-15항원성 펩타이드의 합성에 사용되었다. 최종 단계에서 추가의 두개의 보호된 아미노산이 성장하는(growing) 펩타이드 절편에 커플링된다. 그 후 Mtt기가 선택적으로 분할되고 팔미트산에 커플링된다. 수지의 세척 후, 보호기가 제거되고 상기 수지는 실질적으로 분할되고, 그 후 표준의 방법론을 사용하는 측쇄 탈보호가 수행된다. 그 후 고순도의 최종 생산물이 수득될 수 있고, 이의 동일성(identity)은 예를 들어, 전기분무 질량 분석법과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 확인된다.

본 발명의 친지성 또는 소수성 모이어티는 지방산, 트리글리세리드 또는 인지질일 수 있고, 여기서 상기 지방산 탄소 백본은 적어도 10개의 탄소 원자를 가질 수 있다. 상세하게는, 상기 친지성 또는 소수성 모이어티는 적어도 약 14개의 탄소 원자 내지 약 24개 이하의 탄소 원자를 갖는 탄소 백본을 갖는 지방산으로, 이 범위 내의 탄소 원자의 각 개별적 수 또한 본 발명의 일부가 된다. 보다 상세하게는, 상기 친지성 또는 소수성 모이어티는 적어도 14개의 탄소 원자, 특히 16개의 탄소 원자의 탄소 백본을 갖는다. 소수성 모이어티의 예는 팔미트산, 스테아르산, 미리스트산, 라우르산, 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 특정 구체예에서 상기 친지성 또는 소수성 모이어티는 팔미트산이다.

그 후 본 발명의 리포좀 항원은 Nicolau 등(2002)에 설명된 바와 같이 조제될 수 있다. 변형된 아밀로이드 Aβ 항원성 펩타이드, 상세하게는 변형된 Aβ_1-15항원성 펩타이드는 리포좀, 상세하게는 디미리스토일 포스파티딜 콜린 (DMPC), 디미리스토일 포스파티딜 에탄올아민 (DMPEA), 디미리스토일 포스파티딜 글리세롤 (DMPG) 및 콜레스테롤로 제조되고, 선택적으로 모노포스포릴 지질 A를 함유하는 리포좀으로 구성되는 구조체 내에서 재구성될 수 있다.

본 발명의 특정 구체예에서, 지질 A를 갖는 리포좀은 항-아밀로이드 백신을 조제하는데 보조제로서 사용된다. 디미리스토일포스파티딜-콜린, -글리세롤 및 콜레스테롤은, 상세하게는 0.9:1.0:0.7의 몰비로 혼합된다. 그 후 예를 들어, 모노포스포릴 지질 A와 같은 강한 면역조절물질이 적절한 농도, 상세하게는 인지질 mmol당 30 내지 50 mg, 보다 상세하게는 인지질 mmol당 40 mg의 농도로 첨가된다. 그 후 변형된 항원성 Aβ 펩타이드가 1 :30 내지 1 :200인 펩타이드 대 인지질의 몰비, 상세하게는 1:50 내지 1:120, 보다 상세하게는 1:100의 몰비로 첨가된다. 용매는 예를 들어, 증발법을 통해 제거되고, 결과물인 필름은 예를 들어 PBS와 같은 멸균된 완충용액으로 수화된다.

리포좀은 또한 예를 들어, Wagner 등((2002) Journal of Liposome Research Vol 12(3), pp 259 - 270)에 설명된 바와 같이 크로스플로우 주입 기술(crossflow injection technique)에 의해 조제될 수 있다. 지질 용액을 수용성 완충액 시스템 내로 주입하는 동안, 지질은 "침전물(precipitates)"의 형태가 되는 경향이 있고, 그 후 소포 내에서 자가 배열된다. 수득된 소포 크기는 지질 농도, 교반 속도, 주입 속도 및 지질의 선택과 같은 요소에 의존한다. 조제 시스템은 크로스플로우 주입 모듈, 극성상(polar phase)(예를 들어, PBS 완충용액)을 위한 용기, 에탄올/지질 용액 용기 및 가압 장치, 상세하게는 질소 가압 장치로 구성될 수 있다. 수용액 또는 극성 용액이 크로스플로우 주입 모듈을 통해 펌프되는 동안 에탄올/지질 용액은 변화하는 압력이 가해진 극성상으로 주입된다.

변형된 Aβ 항원성 구조체의 면역원성을 측정하기 위해 적절한 동물은 마우스, 랫트, 토끼, 돼지, 새 등으로 구성되는 그룹으로부터 선택되고, 상세하게는 마우스, 특히 C57BL/6 마우스가 항원성 펩타이드로 면역화된다. 항원성 구조체의 면역원성은, 면역화한 후 적절한 시간 간격의 혈청 샘플을 예를 들어, ELISA 어세이(assay)와 같은 면역어세이(immunoassay)을 이용하여 규명함으로써 측정된다:

변형된 항원성 구조체, 상세하게는 팔미토일화된 항원성 구조체, 보다 상세하게는 팔미토일화된 Aβ_1-15구조체는, 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증과 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태; 뿐만 아니라 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증(ALS), 성인발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양과 같은 아밀로이드-유사 단백질에 기인하거나 또는 이와 관련되는 다른 질환, 및 황반 변성을 포함하는 그 밖의 질환, 특히 예를 들어, 경증 인지 장애(MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 병태 또는 임의의 다른 아밀로이드-관련 질환을 포함하는, 알츠하이머병(AD)과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크 형성과 관련된 질환 및 장애 그룹인 아밀로이드증과 관련된 증상에 걸린 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간의 면역화를 위해 사용된다.

본 발명의 초분자 항원성 구조체, 특히 상기 본 발명의 초분자 항원성 구조체를 포함하는 백신 조성물은 모든 적합한 표준 투여 경로에 의해 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 투여된다. 일반적으로, 상기 조성물은 국소적, 경구적, 직장, 비강 또는 비경구적(예를 들어, 정맥내, 피하, 또는 근육내) 경로에 의해 투여될 수 있다. 추가로, 상기 조성물은 생분해성 폴리머와 같은 서방성 매트리스 내로 함침될 수 있고, 상기 폴리머는 인도되기 바라는 곳, 예를 들어, 종양 사이트에 삽입(implant)될 수 있다. 상기 방법은 단일 용량의 투여, 미리결정된 시간 간격에서의 반복 용량의 투여, 및 미리결정된 시기에 대한 지속 투여를 포함한다.

본 발명의 특정 구체예에서 약제학적으로 허용가능한 형태의 본 발명의 항원성 구조체, 상세하게는 상기 항원성 구조체를 포함하는 백신 조성물은 반복 용량, 특히 1 내지 15 용량, 보다 상세하게는 2 내지 10 용량, 보다 더 상세하게는 3 내지 7 용량 및 보다 더 상세하게는 4 내지 6 용량으로, 1 내지 10주의 시간 간격, 상세하게는 1 내지 6주의 시간 간격, 보다 상세하게는 1 내지 4주의 시간 간격, 또한 보다 더 상세하게는 2 내지 3주의 시간 간격으로 투여된다. 면역 반응은 추가접종 후, 상세하게는 추가접종하고 3 내지 10일 후, 보다 상세하게는 추가접종하고 4 내지 8일 후, 및 보다 상세하게는 추가접종하고 5 내지 6일 후 적절한 시간에 혈청 샘플을 취하고, 공지된 방법론, 상세하게는 예를 들어 ELISA 어세이와 같은 통상적으로 이용되는 면역어세이 중 하나를 이용하여 항원성 구조체의 면역원성을 측정함으로써 모니터된다.

약제학적으로 허용가능한 형태의 본 발명의 항원성 구조체로의, 상세하게는 본 발명의 항원성 구조체를 포함하는 백신 조성물로의 면역화는 치료된 동물 또는 인간에서 현저한 및 고도의 특이적인 면역 반응을 이끈다.

본 발명의 초분자 항원성 구조체 조성물은, 전염성 유기체와 같은 항원성 작용제에 대한 또는 β-아밀로이드 결집(알츠하이머병)과 같은 다른 병원성 병태의 항원성 양상에 대한 또는 암과 같은 과증식성 (hyper proliferative) 장애에 대한 면역성을 유도하기 위해 인간 또는 동물에게 투여된다. 면역화된 인간 또는 동물은 전염성 유기체에 대해 순환 항체를 발생시키고, 따라서 질환을 자극하는 그의 능력을 불활성화시키거나 또는 감소시킨다.

본 발명의 조성물은 항원성 펩타이드에 대해 유도된 항체를 생산하는데 또한 사용될 수 있다. 결과물인 항체는 아밀로이드 단백질과 관련된 질환을 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 여러 질환 또는 장애에 대해 그들을 수동적으로 면역화하기 위해 개체에 투여된다.

따라서, 본 발명의 특정 구체예에서, 본 발명의 초분자 항원성 구조체 조성물은 예를 들어, 알츠하이머병을 포함하는 여러 장애에 특이적인 단일클론성 또는 다클론성 항체의 패널(panel)을 생산하기 위해 사용된다. 항체는 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조된다.

본 발명의 조성물은 인간 또는 동물에게 임의의 적절한 수단, 바람직하게는 주사에 의해 투여된다. 예를 들어, 리포좀 내에서 재구성된 변형된 항원성 펩타이드는 피하 주사에 의해 투여된다. 내부적으로 생산되것이든 또는 외부 기원으로부터 제공된 것이든, 순환 항체는 항원에 결합하여, 질환을 자극하는 그의 능력을 불활성화시키거나 또는 감소시킨다..

어떤 구체예에서, 초분자 항원성 구조체는 β-아밀로이드의 아미노산 잔기를 갖는 펩타이드를 포함한다. 상기 펩타이드는 또한 전체 아밀로이드 베타 펩타이드 및 이의 활성 절편을 포함할 수 있거나 또는 이에 부합할 수 있다. 추가로, 본 발명에 유용한 펩타이드는 추가로 Aβ를 포함한다.

모든 작용적으로 균등한 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 본 발명의 항체를 생산하기 위한 방법, 상세하게는 모든 작용적으로 균등한 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 본 발명의 단일클론성 항체를 생산하기 위한 방법이 추가로 제공되고, 상기 방법은 항체, 특히 예를 들어, 팔미트산과 같은 소수성 모이어티 또는 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 친수성 모이어티, 또는 이들의 조합으로 변형된, 본원에서 전술한 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원, 상세하게는 Aβ1-16(Δ15) 펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ1-16(Δ14) 또는 Aβ1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 보다 더 상세하게는 Aβ1-14 펩타이드 항원, 특히 β-아밀로이드 펩타이드 Aβ_1-15의 아미노산 서열에 상응하는 항원성 펩타이드를 포함하는 초분자 항원성 구조체에 대한 단일클론성 항체를 생성하는 것을 포함하고, 여기서 상기 소수성 및 친수성 모이어티 각각은 예를 들어, 라이신 또는 예를 들어, 글루타민산 및 시스테인과 같은 펩타이드 절편에 소수성 및 친수성 모이어티를 커플링하기 위한 연결 장치로서 작용할 수 있는 임의의 다른 적합한 아미노산 또는 아미노산 유사체와 같은, 상기 항원성 펩타이드의 각 말단의 말단 아미노산 잔기에 커플링된 적어도 하나, 상세하게는 1 또는 2개의 아미노산을 통해 상기 항원성 펩타이드의 각 말단에 공유적으로 결합한다.

상기 방법에 의해 수득가능한 항체, 상세하게는 단일클론성 항체는 기억 장애에 걸린 동물, 상세하게는 포유류 또는 인간에게 투여되면 치료된 동물, 포유류 또는 인간에서 인지 기억 능력을 유지 또는 증가시킬 수 있다. 본 발명의 또 다른 일면은 예를 들어, 팔미트산과 같은 소수성 모이어티로 또는 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 친수성 모이어티 또는 이들 둘의 조합으로 변형된, 본원에서 전술된 바와 같은 본 발명의 Aβ 펩타이드 항원, 특히 Aβ1-16(Δ15) 펩타이드 항원, 보다 상세하게는 Aβ1-16(Δ14) 또는 Aβ1-16(Δ13) 펩타이드 항원, 보다 더 상세하게는 Aβ1-14 펩타이드 항원, 특히 β-아밀로이드 펩타이드 Aβ_1-15의 아미노산 서열에 상응하는 항원성 펩타이드를 포함하는 초분자 항원성 구조체에 대해 생성된, 모든 작용적으로 균등한 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 항체, 또는, 보다 상세하게는, 모든 작용적으로 균등한 항체 또는 이의 작용부를 포함하는 단일클론성 항체를 제공하고, 여기서 상기 소수성 및 친수성 모이어티 각각은 링커 분자로서 사용될 수 있는 예를 들어, 라이신 또는 임의의 다른 적절한 아미노산 또는 아미노산 유사체와 같은 아미노산을 통해 항원성 펩타이드의 각 말단에 공유적으로 결합된다. PEG가 친수성 모이어티로 사용될 때, 자유 PEG 말단은 리포좀 이중층 내에 항원성 구조체를 파묻기(embedding) 위해 포스파티딜에탄올아민 또는 앵커링 요소로서 작용하기에 적합한 임의의 다른 화합물에 공유적으로 결합한다.

특히, 본 발명은 유기체, 특히 동물 내에서, 상세하게는 포유류 또는 인간 내에서, 고도로 특이적이고 고도로 유효한 면역 반응을 이끌어내기 위한 방법 및 조성물을 제공하며, 이는 예를 들어, 경증 인지 장애(mild cognitive impairment; MCI)와 같은 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 병태 또는 질환을 포함하는, 알츠하이머병(Alzheimer's Disease; AD)과 같은 신경계 질환을 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련(age-related) 아밀로이드증을 포함하는 아밀로이드 플라크(amyloid plaque) 형성과 관련된 장애 및 질환 그룹인 아밀로이드증 또는 아밀로이드증과 관련된 증상을 완화하거나 예방할 수 있다.

도 1a: 전장(full length) 아밀로이드 β1-42 펩타이드의 처음의 15(ACI-24, Aβ1-15) 및 16(ACI-01, Aβ1-16) 아미노산을 갖는 펩타이드 면역원을 함유하는 두 리포좀 백신의 생체물리학적 특성화 및 설계. b) ACI-01은 PEG 사슬의 다른 말단 상에서 리포좀 앵커로서 사용되는 DSPE를 운반하는 각 면에 하나의 PEG화된 라이신 잔기와 플랭크된(flanked) Aβ1-16를 함유한다 (a). ACI-24 (b)에 대해서는, 항원을 리포좀 (a) 내부로 재구성하고 앵커하기 위해 두 말단의 팔미토일화된 라이신 잔기가 Aβ1-15의 각 말단에 공유적으로 링크되었다. c) 리포좀 내에서 재구성된 두 항원의 CD 스펙트럼. ACI-01은 랜덤-코일의 또는 비구조화 단백질 배좌를 나타내는 스펙트럼을 나타내는 (210nm까지 네가티브 신호이고, 260nm까지 제로축에 천천히 접근한다) 반면 ACI-24 스펙트럼은 베타 구조의 현저한 비율을 함유한다 (210nm까지 포지티브 신호이고, 그 후 제로축을 가로지른 후 260nm까지 제로축에 천천히 접근한다). CD 스펙트럼 분석을 위해 베타-아밀로이드 샘플(ACI-01 및 -24)은 리포좀 내에서 재구성되었으며, 0.9865 mg/ml의 펩타이드 농도에서 프로브 초음파분쇄기(probe sonicator)를 이용하여 초음파분쇄하였다 (PBS 내 1 ml). CD 스펙트럼은 Dichrograph (JASCO J-810)에서 0.1 cm 광 경로 길이(optical path length)의 석영 셀 큐빗(cell cuvette)으로 기록되었다. 스펙트럼 창은 25℃에서 20 nm/min의 스캔 속도에서 190-260이었으며, 가공하지 않은 데이터는 θ(mdeg) 단위의 타원율로 표현되었다.
도 1b: PBS 완충용액, pH 7.2 내에서, A. ACI-01 백신, B. ACI-24 백신, C. 1 mM ACI-01, D. 1 mM ACI-24 및 4 mM Ab1-15 펩타이드의 매직 앵글 스피닝(magic angle spinning) NMR 스펙트럼의 방향족 측쇄 및 펩타이드 아미드 양성자를 포함하는 ¹H 스펙트럼 영역.
도 1c: PEG화된(검정) 및 팔미토일화된 베타-아밀로이드 1-15(파랑)의 9 내지 5.5 ppm의 1차원적 1H NMR 스펙트럼. 펩타이드는 합성되고, 팔미트산 또는 Peg 각각에 공유적으로 링크되고, PBS 내에서 재구성된다. NMR 분석을 위해, 샘플은 원심분리하고, 총 스펙트럼은 9 내지 0.2 ppm에서 기록하였다.
도 2: 리포좀 내의 PEG화된 (ACI-01) 또는 팔미토일화된 (ACI-24) 항원으로 면역화된 APP×PS1 마우스의 혈청 내 아밀로이드-특이적인 역가의 분석은, 빈 리포좀(대조군)으로 면역시킨 마우스와 비교하였다. a) ACI-24로의 면역화는 단지 두번의 면역화 후 및 첫번째 면역화한 뒤 3주 후에 고수준의 아밀로이드-특이적인 IgG 항체(a, 왼쪽)를 생성하였으며, 5주 후에 최대에 도달했다. 반면, ACI-24로의 면역화는 7주 후에 최대인 고수준의 아밀로이드-특이적인 IgM 항체(a, 오른쪽)를 생성하였으나, ACI-24에 비교하여 낮은 IgG 수준이었다(a, 왼쪽, p<0.5).

실시예 1 : 테트라 ( 팔미토일 라이신)-Aβ _1-15 펩타이드 항원의 합성

1.1 합성 프로토콜 1:

팔미토일화된 아밀로이드 1-15 펩타이드는 개선된, 이전에 보고된 방법에 따라 합성되었다 (Nicolau 등 2002). 이 새로운 수법은 변형된 아미노산 Fmoc-Lys(Pal)-OH를 혼입시키는 순차적인 고체상 합성보다는 오히려 미리-형성된 펩타이드의 말단 Lys 잔기에의 팔미트산의 수지상 그래프팅을 포함한다. 이 신규한 수법은 커플링 효율을 개선시키고, 상당히 높은 순도의 생산물을 제공한다. 따라서, 직교하여(orthogonally) 보호된 아미노산 Fmoc-Lys(Mtt)-OH은 HBTU 커플링 케미스트리를 이용하여 왕 수지(Wang resin)에 부착시켰다. Fmoc기는 DMF에 녹인 20% 피페리딘을 이용하여 제거하였으며, 두번째 Fmoc-Lys(Mtt)-OH 잔기를 커플링시켰다. 그 후 그 다음의 15 아미노산에 커플링하기 위해 Fmoc/tBu 케미스트리를 이용하는 표준의 자동화된 펩타이드 합성 및 표준의 측쇄 보호기를 사용하였다. 마지막으로, 커플링된 마지막 두 아미노산은 Fmoc-Lys(Mtt)-OH였다. 그 후 Mtt기는 디클로로메탄에 녹인 1% TFA를 이용하여 선택적으로 분할시킨 후, HBTU를 이용하여 팔미트산에 커플링시켰다. 수지를 세척한 후, Fmoc기는 N, N-디메틸포름아미드(DMF)에 녹인 20% 피페리딘으로 제거하였으며, 마지막으로 동시 수지 분할 및 측쇄 탈보호(deprotection)를 표준 조건 하에 TFA를 이용하여 수행하였다. 차가운 디에틸 에테르로 분쇄하여 흰 고체인 생산물을 수득하였다. 전기분무 질량 분광분석법으로, 어떠한 다른 트리-,디- 또는 모노-팔미토일화된 펩타이드는 검출되지 않은, 상기 생산물의 동일성을 확인하였다 (m/z 기대값: 1097.9 ([M]3+); 측정값: 1096.8 ([M-3H]3+).

1.2 합성 프로토콜 2:

미리-형성된 펩타이드의 말단 라이신 잔기에의 팔미트산의 수지상 그래프팅에 기초한 테트라(팔미토일 라이신)-Aβ_1-15 펩타이드 항원의 합성을 위해 다른 수법이 사용될 수 있다. 따라서, 2-클로로트리틸 수지 상에 직교하여 보호된 아미노산 Fmoc-Lys(ivDde)-OH를 커플링시켰다. Fmoc 탈보호 후 두번째 Fmoc-Lys(ivDde)-OH를 커플링시키고, 뒤따라 Fmoc/tBu 케미스트리 및 표준의 아미노산 측쇄 보호기를 이용하는 표준의 자동화된 펩타이드 합성의 15회(round)가 이어졌다. 마지막 두 Fmoc-Lys(ivDde)-OH 잔기의 커플링 후, Fmoc기는 DMF에 녹인 20% 피페리딘을 이용하여 제거시켰으며, N-말단은 tert-부틸 디카보네이트를 이용하여 Boc기로 보호시켰다. 그 후 ivDde 보호기는 DMF에 녹인 3% 히드라진으로 처리하여 화학선택적으로 제거시켰으며, 그 후 이들 네 개의 라이신 잔기에 각각 18h인 두 커플링을 이용하는 HBTU를 이용하여 팔미트산을 커플링시켰다. 수지를 세척한 후, 측쇄는 표준 조건 하에서 TFA / TIPS를 이용하여 탈보호시켰다. 차가운 디에틸 에테르로 분쇄하여 흰 고체인 생산물을 수득하였다. MALDI-Tof는 어떠한 다른 트리-, 디- 또는 모노-팔미토일화된 펩타이드가 검출되지 않는 상기 생산물의 동일성을 확인하였다.

리포좀 백신은 US6843942 및 EP1337322에 설명된 방법을 이용하여 제조하였다.

실시예 2: N- 및 C-말단 지질- PEG β-아밀로이드 펩타이드 항원의 합성

팔미토일화는, 리포좀 이중층 내 펩타이드에 대한 앵커를 제공하는 한편, C_16:0 지방산 모이어티의 상대적으로 감소된 길이에 기인하여 리포좀 표면 상에 펩타이드가 실질적으로 놓여지도록 한다. 따라서, 항원을 처리하는 세포는 상대적 기간 내에 더욱 느린 면역 반응을 일으킬 수 있는, 펩타이드를 갖는 리포좀 전체를 섭취해야할 것이다.

면역 반응을 향상시키기 위해, 다른 앵커/스페이서, 그 예로서, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이 리포좀 내에서 펩타이드를 재구성하기 위해 적용되어왔다. PEG는 펩타이드의 양 말단 모두에 결합된 라이신 잔기에 공유적으로 부착되었다. 사슬(PEGn=70)의 다른 단부에서 포스파티딜 에탄올 아민(PEA)은 공유적으로 결합되어 리포좀 이중층 내에서 앵커링 요소로서 작용한다. 따라서, 리포좀은 보조제로서 작용하고, 이중층으로부터 충분히 멀리 떨어진 펩타이드는 단독으로 처리될 수 있어, 그의 면역원성은 팔미토일화된 항원에 비교하여 증가한다.

N-α-위치에서의 펩타이드의 모노-PEG화(mono-pegylation)을 위한 방법론은 알려져 있으며, 널리 사용되었다. 중간 크기 펩타이드의 내부의, N- 또는 C-말단의 아미노산 잔기에서의 사이트-특정 모노-PEG화 또한 이하의 고체상 또는 펩타이드-그래프팅 수단 중 어느 것으로든 기술되어 왔다.

입체 장애(steric hindrance)의 문제를 피하기 위해, 반응은 액체상(solution-phase)에서 수행하였다. 이 성공적인 수단은 표준 Fmoc/tBu 아미노산 측쇄 보호를 이용하는 펩타이드 서열의 합성을 포함한다. 내부 Lys 또는 His 잔기 (1-16, 1-15)를 함유하는 이들 펩타이드 서열을 위해, 직교하여 보호된 Lys(ivDde)를 각 말단에 추가하였다. 합성을 용이하게 하기 위해 추가적 Gly를 C-말단에 추가하였다. Fmoc기는 DMF에 녹인 20% 피페리딘으로 제거하였으며, 아세트산 무수물을 이용하여 N-아세틸화시켰다. DMF에 녹인 3% 히드라진 수화물을 1시간 동안 처리하여 ivDde기의 선택적 분할을 달성하였다. 2-클로로트리틸 수지는 히드라진분해(hydrazinolysis)에 보다 저항성이 좋은 것으로 입증되어 보다 널리 사용된 왕 수지에 비해 선호된다. 또한, 상기 2-클로로트리틸 수지는, 왕 수지와는 달리, 매우 산 민감성이므로, 보호된 펩타이드의 단리가 가능하다. 실제로, 이는 액체상에서의 어떠한 커플링 생산물도 생성시키지 않는 미리-활성화된 PEG화된 지질 시약 DSPE-PEG-SPA에의 수지-결합 펩타이드의 커플링인 커플링 반응을 수행하기 위해 필요하였다. 따라서 온화한 조건(아세트산 / 트리플루오로에탄올 / 디클로로메탄, 1:1:8, 1시간, rt) 하에서 수지로부터의 선택적인 분할은 내부적으로 보호된 펩타이드를 산출하였다.

DMSO에 녹인 DSPE-PGE-SPA에의 액체상 커플링이 서열 1-16, 1-15로부터 유도된 펩타이드 및 과량의 염기로 성공적으로 달성되었다. 그 후 상기 반응은 과량의 에탄올아민을 2시간 동안 첨가하여 퀀치시켰으며, 용액은 동결건조하였다.

HPLC (반-분취(semi-preparative) 역상 C₄ 컬럼)에 의한 정제는, 그의 동일성이 MALDI에 의해 확인된, 50-70% 순도의 N- 및 C-말단 PEG-지질 컨쥬게이트(conjugate)를 제공한다. 각 서열은 커플링 반응의 용이면에서 상당한 변화를 나타내었으며, 조건은 (온도, 몰 당량 DSPE-PEG-SPA의 수, 시간)에 따라 조정하였다. 원하는 생산물로부터 과량의 DSPE-PEG-SPA의 분리를 위해 HPLC 정제를 적용하였다. 최종 측쇄 탈보호 이전의 모노- 및 디-커플된 생산물의 분리는 양이온-교환 크로마토그래피를 사용함으로써 달성될 수 있다. 그 후 펩타이드 측쇄 탈보호 및 과량의 퀀치된 DSPE-PEG-SPA의 분리는 허용가능한 순도의, 원하는 컨쥬게이트가 단리되도록 한다.

PEG화 및 팔미토일화된 항원

실시예 3: 구조 및 배좌 분석

3.1 재구성된 항원의 배좌 분석

리포좀 표면에 항원 Aβ1-15를 앵커링하기 위해 이전에 기술한 바와 같이 팔미토일화된 라이신 탠덤(tandem)이 펩타이드의 각 말단에서 사용되었다 (Nicolau.C. 등, 2002).

지방산인 팔미트산은 리포좀 이중층 내부로의 안정적인 삽입을 위한 적절한 길이를 갖는 것으로 나타난 16개의 탄소 원자를 함유한다. 이 구조체에서 펩타이드는 실제로 C16 지방산 모이어티의 길이에 기인하여 리포좀의 표면에 놓여진다. 상이한 배좌의 리포좀-지질 A와 관련된 항원성 펩타이드를 갖도록 하기 위해, 다른 앵커/스페이서, 즉 폴리에틸렌글리콜 (77 반복단위를 갖는 PEG)이 리포좀 내에서 펩타이드 Aβ1-16 (ACI-01)를 재구성하기 위해 사용되어 왔다. 리포좀 앵커와 Aβ 펩타이드 사이의 상기 스페이서의, 리포좀 내에서 재구성된 아밀로이드 서열의 2차 배좌에의 영향은 원편광 이색성 분광분석(Circular Dichroism)에 의해 측정하였다 (도 1a). PEG화된 Aβ1-16은 랜덤 코일 또는 비구조화된(unstructured) 단백질 배좌로 나타나는 반면 (210nm에서의 네가티브 신호이고, 260nm까지 제로축에 천천히 접근함), 팔미토일화된 펩타이드 Aβ1-15는 상당한 비율의 β-시트 배좌를 함유한다 (210 nm까지 포지티브 신호이고, 그 후 제로축을 가로지른 후 260nm까지 제로축으로 접근함). 따라서 리포좀 표면에 대한 팔미토일화된 펩타이드의 더욱 가까운 근접성은 정해진 이차 배좌를 갖도록 할 수 있는 것으로 나타난다. 이는 펩타이드와 리포좀 표면의 정전기적 상호작용에 잠재적으로 기인하며, 이는 명백히 PEG화된 펩타이드로는 가능하지 않다.

3.2 리포좀 내에서 재구성된 팔미토일화된 β-아밀로이드 1-15의 구조 분석

리포좀 내에서 재구성된 β-아밀로이드 1-15 펩타이드의 배좌 상의 상이한 링커 분자의 영향을 분석하기 위해 NMR 분석을 수행하였다 (도 1b 및 1c). 여기서 팔미토일산 및 폴리에틸렌글리콜(n=77을 갖는 PEG) 각각은 링커 분자 또는 리포좀에 대한 앵커로서 사용하였다.

NMR 연구를 위해 리포좀 내에서 재구성된 PEG화된 Aβ_1-16항원(ACI-01) 펩타이드와 팔미토일화된 아밀로이드 1-15(ACI-24)를 포함하는 샘플들은 볼텍싱(vortexing)에 의해 균질화(homogenize)하였으며, 용액의 농도는 원심분리(4℃에서 3^*90 분 동안 3000 rpm)에 의해 증가시켰으며, 결과물인 젖은 펠렛은 MAS 로터 내로 옮겼다. 추가적인 샘플은 링커없는 펩타이드 서열의 ACI-01 및 ACI-24 펩타이드 제제를 pH 7.2의 PBS 완충액에 1mM의 농도로, 뿐만 아니라 동일 완충액에 4mM 용액으로 부유시켜 준비하였다. 10%의 D₂O를 각 샘플에 첨가하였다.

¹H HR-MAS NMR 스펙트럼은, 4mm 삼중 공명 (¹H/¹³C/²H) HR-MAS 프로브가 장착된, 500.13 MHz (11.4T)의 주파수에서 작동하는 Bruker Avance 500 분광분석기에서 기록하였다. 각 샘플은 50μL 원통형 인서트(insert)가 설비된 4mm ZrO₂ 로터 내에 도입시켰다. 모든 NMR 실험 샘플은, 스펙트럼으로부터의 회전 곁띠(spinning sideband)를 제거하는 스펙트럼 폭(6250Hz)과 동일한 주파수에서 스핀시켰다. 일차원 양성자 NMR 스펙트럼은 사전포화(presaturation) 및 워터게이트 서열(Watergate sequence) 모두를 사용하여 (Piotto.M.등 (1992);.Piotto,M.,등 (2005)) 또한 1000-1500 스캔(scan)의 축적에 의해 수득하였다. 프로브 내부로 흐르는 베어링 공기(bearing air)의 온도는 샘플 내의 298K를 보증하기 위해 295K로 설정하였다.

도 1b 및 1c는 팔미토일화된 및 PEG화된 β-아밀로이드 펩타이드의 일차원 NMR 스펙트럼에서의 차이점을 증명한다. 8.00 및 8.25 ppm에서의 두개의 현저한 차이점을 관찰할 수 있었다. 두 펩타이드 모두, 16^th 라이신을 제외하고, 완전히 동일한 아미노산 서열을 가진다는 사실 때문인, 8.00 및 8.25 ppm에서의 이들 차이점은, 이 방향족 아미노산 잔기의 스펙트럼 영역에서 라이신이 포지티브 신호를 주어서는 안되는 이차 구조에서의 차이점을 지시한다.

본 발명의 초분자적 구조체의 특정 설계가 상이한 링커 분자로 상이한, 리포좀 내에서 재구성되었을 때 독특한, 고도로 특이적인 또한 유의한 이차 구조를 갖는 아밀로이드 항원성 펩타이드를 야기함은, 방향족 아미노산 잔기의 구역에서의 일차원적 양성자 NMR 스펙트럼에 의해 증명될 수 있다. 이는 링커/앵커 포스(force) 및 일정한(certain) 또는 정해진 이차 구조로의 펩타이드의 고정은 사용된 링커 분자에 의존적임을 의미할 수 있다. 능동 면역화를 위한 백신으로서 이들 분자를 사용하는 경우 이들 구조적으로 상이한 항원에 대해 생성된 항체는 항원-특이적 및 배좌-특이적일 것이다.

팔미토일화된 Aβ_1-15및 PEG화된 Aβ_1-15항원의 APP×PS-1 마우스의 면역화 후의 ELISA 및 물체 인식 과제 인지 기억 테스트(object recognition task a cognitive memory test; ORT)로 수득된 종래의 데이터는 모두 동일한 면역원성을 나타냄에도 불구하고 팔미토일화된 항원만이 이 알츠하이머병 질환 모델에서의 기억 장애를 회복시키는 것을 나타낸다. 동일한 펩타이드를 제시하는 두 항원이, 인 비보에서 두 상이한 작용적 항체를 야기하는 잠재적 메카니즘은 아마도 링커 기술에 의해 야기된, 제시된 펩타이드의 상이한 이차 구조에 링크될 것이다.

실시예 4: 외부- 및 내부-지향적으로 재구성된 펩타이드의 정량

ACI-01 및 ACI-24 내에서 재구성된 펩타이드의 양은 일차 아민과 특이적으로 반응하여 고도의 형광 공유 부가물을 형성하는 플루오레스카민(fluorescamine; FLA)-기반 어세이에 의해 입증되었다 (Udenfriend, S. 등, 1972). ACI-24 내의 Pal1-15 펩타이드의 N-말단의 반응 및 ACI-01 내의 Lys-16과 FLA의 반응이 예상된다.

리포좀 내의 이들로부터 자유 펩타이드를 분리하기 위해, 샘플을 초원심분리하여 결과물인 상청액은 FLA 어세이를 이용하여 펩타이드 함량을 분석하였다. ACI-01 또는 ACI-24 상청액 모두에서 어떠한 자유 펩타이드도 검출될 수 없었다.

FLA를 가진 펠렛화된 분획의 표지(labeling)는 ACI-24 및 ACI-01 모두에 대해 리포좀 내의 펩타이드와의 반응에 대해 매우 높은 선택성을 나타내었다. 리포좀 표면에 제시된 총 펩타이드를 측정하기 위해, 지질 이중층을 붕괴하기 위한 트리톤(Triton) X-100의 존재하에 상기 어세이를 되풀이하였다. 이는 표지의 현저한 증가를 이루며, 펩타이드의 약 63%가 외부막 표면상에 노출됨을 나타낸다. 반면에, FLA를 가진 ACI-01의 표지는, 어세이가 트리톤 X-100이 존재하에 수행되거나 부재하에 수행되어도 방사(emission)가 동일한 농도인 1.2mM FLA의 평탄부(plateau)에 이를 뿐이다. 이는 모든 펩타이드가 PEG화된 백신 ACI-01의 표면상에 노출됨을 증명한다.

실시예 5: 야생형 C57BL /6 마우스에서의 PEG화된 및 팔미토일화된 항원의 면역원성 비교 (ELISA)

리포좀 항원은 기술된 바와 같이 준비하였다 (Nicolau 등, 2002). 항원 PEG화된 Aβ_1-16(Δ14), Aβ_4-11및 팔미토일화된 Aβ_1-15(ACI-24)은 40mg/mM 인지질에서 모노포스포릴 지질 A (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)를 함유하는, 디미리스토일 포스파티딜 콜린(dimyristoyl phosphatidyl choline; DMPC), 디미리스토일 포스파티딜 에탄올아민(dimyristoyl phosphatidyl ethanolamine; DMPEA), 디미리스토일 포스파티딜 글리세롤(dimyristoyl phosphatidyl glycerol; DMPG) 및 콜레스테롤(0.9: 0.1: 0.1: 0.7 몰비)로 제조된 리포좀으로 구성된 구조체 내에서 재구성되었다.

PEG화된 Aβ_1-16(Δ14), Aβ_4-11및 팔미토일화된 Aβ_1-15(ACI-24) 항원은 C57BL/6 마우스에서의 면역화를 위해 2주 간격으로 사용하였다. 10-12마리의 동물들을 각 항원으로 면역화시켰다. 추가접종(boosting)하고 5일 후 혈청을 수득하였으며, 혈청의 여러 희석물로 ELISA를 수행하였다. 상이한 항원의 면역성을 나타내는 비교 결과가 제시된다.

ELISA 데이터는 리포좀성 PEG-Aβ_1-16(Δ14)이 팔미토일화된 Aβ_1-15보다 현저하게 더욱 면역원성인 것을 나타내었다. 추가적인 ALUM은 마우스에서의 PEG-Aβ_1-16(Δ14)의 면역원성을 향상시키지 않았다. PEG-Aβ_4-11에 의해 유도된 항체 반응은 PEG-Aβ_1-16(Δ14)에 비교하여 보다 느렸다.

보다 빠른 면역 반응의 보다 높은 기억 능력으로의 전이(translation)의 의문에 기인하여, PEG화된 항원은 2배의 유전자전이 알츠하이머병 마우스 모델에서 팔미토일화된 항원과 비교되었다.

US6843942 및 EP1337322에 기술된 바와 같은 다른 방법이 사용될 수 있다.

실시예6 : 알츠하이머 질환 마우스 모델에서의 PEG화된 항원 대 팔미토일화된 항원의 면역원성 비교 (ELISA)

6.1 인 비보 면역화 연구를 위해 APP717 C57BL /6 x PS -1 A246E FVB 마우스 (APP×PS-1 마우스)는 개별적으로 가두었으며, 이중 블라인드 무작위배정하였으며, 연령을 일치시켰으며 또한 PCR에 의해 유전자형 분석하였다.

변이 인간 아밀로이드 전구체 단백질 (APP-V717I) 및 변이 인간 프레세닐린-1(PS1-A246E) 모두를 마우스 thy1 유전자 프로모터의 제어하에 발현하는 이중 유전자전이 마우스 스트레인(strain)인, F1 (FVB x C57BI) 유전적 배경의 어린 (3-4달) 자성 마우스를 사용하였다. 모든 마우스는 3주령에서 중합효소 연속 반응(PCR)에 의해 유전자형 분석하였으며, 각 마우스는 독특하게 표지시켰다. 모든 마우스는 연구의 착수 시, 및 상이한 실험군으로의 블라인드 무작위배정(blind randomization) 전에 수행된 두번째 PCR에 의해 그들의 수명동안 두 번 유전자형 분석하였다. 마우스는 물 및 규격 마우스 사료(Muracon-G, Trouw Nutrition, Gent, 벨기에)에 자유로이 접근할 수 있었다. 마우스는 동물 복지의 지방법에 따라 규격 금속 우리에서 역전된 밤-낮 리듬 하에서 길렀다. 행동 테스트의 착수 5일 전, 마우스는 마크로론(macrolon) 타입 2 우리에 가두었으며, 테스트-실험실 환경에 순응하고 길들여지도록 행동 실험실로 옮겼다.

6.2 면역화

지질 A를 갖는 리포좀을 항-아밀로이드 백신을 조제하기 위한 보조제로서 사용하였다 (Nicolau 등, 2002). 디미리스토일포스파티딜-콜린, -글리세롤 및 콜레스테롤을 0.9:1.0:0.7의 몰비로 혼합하였다. 강력한 면역조절물질인 모노포스포릴 지질 A는 인지질 mmol 당 40mg 농도로 첨가하였다. 팔미토일화된 및 PEG화된 펩타이드는 1 :100의 펩타이드 대 인지질의 몰비로 첨가하였다. 용매는 증발시켰으며, 결과물인 필름은 4 mmol의 최종 인지질 농도까지 멸균 PBS (pH7.3)로 수화시켰다.

팔미토일화된 (ACI-24, Aβ_1-15) 및 PEG화된 (ACI-01, Aβ_1-16) 항원은 APP×PS-1 마우스에서의 면역화를 위해 2주 간격으로 사용하였다 (이주 간격으로 5회 복막내 접종). 각 실험군에서, 10마리의 동물들은 복막내 접종에 의해 각 항원으로 면역화시켰다 (접종당 200㎕, 8 nmole의 펩타이드 함유). 빈 리포좀을 대조군으로 사용하였다. 일정 간격(이주간격)으로 및 또한 추가접종하고 5일 후 혈청을 수득하였으며, 여러 혈청 희석물로 항-아밀로이드 ELISA를 수행하였다. 상이한 항원의 면역원성을 나타내는 비교 결과가 제시된다.

팔미토일화된 및 PEG화된 리포좀/Aβ 항원으로 면역화된 APP×PS-1 마우스에서 여섯번째 항원 접종하고 5일 후에 유의한 면역 반응이 달성될 수 있었다. 그러나 건강한 C57BL/6 마우스에서의 면역 반응과는 대조적으로, 질환 모델에서 PEG화된 항원은 팔미토일화된 항원보다 더 높은 항체 역가를 생성하지 못했다.

항 Aβ-특이적 IgG 면역 반응은 ACI-24로 보다 빠르게 증가되어, 5주 후 정점에 달했다. 더 많은 IgM 클래스의 항체를 이끌어내는 PEG화된 ACI-01에 반하여 팔미토일화된 ACI-24 항원은 더 높은 역가의 IgG₁를 야기하여 두 백신 모두 현저하게 상이한 면역글로불린 클래스 및 이소타입을 이끌어냈다. 모든 동물로부터의 최종 혈액 샘플도 그들의 IgG 이소타입에 대해 분석되었다. (도 2)

Aβ_1-42-특이적 IgG 및 IgM 항체가 ELISA로 확인되었다. 플레이트는 4℃에서 10 ㎍/ml의 아밀로이드 β_1-42로 코팅하였다. 각 웰을 PBS-0.05% 트윈 20으로 세척한 후, 1% BSA로 블로킹한 후, 혈청의 연속 희석물을 상기 플레이트에 첨가하고 37℃에서 2시간동안 인큐베이트하였다. 세척 후, 플레이트는 포스파타아제-컨쥬게이트된 항-마우스 Ig(IgG, 전체 항체, Sigma-Aldrich St. Louis, MO, 미국) 또는 이소타입 특이적 항체(IgM, IgG1, IgG2a 및 IgG3, Pharmingen BD로부터 구입, San Diego, CA, USA 및 Ig2b, Zymed Laboratories로부터 구입, San Francisco, CA)로 37℃에서 2시간 동안 인큐베이트하였다. 최종 세척 후, 플레이트는 포스파타아제 기질인 PNPP(파라-니트로-페닐-포스페이트)와 인큐베이트하였으며, ELISA 플레이트 리더를 이용하여 405nm에서 리딩하였다. 결과는 상업화되어 입수가능한 항체(6E10, Chemicon International, Temecula, CA, 미국)의 연속 희석물로부터의 또는 면역화된 성체 마우스로부터의 혈청의 적정된 풀(titrated pool)의 연속 희석물에 대한 기준에 의해 나타내어진다. 또는, 결과는 어떠한 혈청도 포화 수준에 있지 않은 희석물에서의 O.D.로서 나타내어진다 (표 1).

표 1.

ACI-24는 양쪽 모두 주된 비염증성 Th2 서브타입인 이소타입 IgG1 및 IgG2b, 및 T-세포 비의존적 IgG 서브클래스인 IgG3를 주로 야기한다. ACI-24로 백신접종된 한 동물을 제외하고, 두 백신 모두 단지 매우 낮은 수준의 IgG2a (Th1)를 유도했다.

결과물인 항체의 에피토프-맵핑(Epitope-mapping)은, 비오틴화된 완전한 β 펩타이드를 양성 대조군으로 하고, Aβ1-42의 완전한 아미노산 서열을 덮는 총 33개의 비오틴화된 펩타이드를 포함하는 펩타이드 라이브러리를 사용하는 ELISA에 의해 수행하였다. 두 백신, ACI-01 및 ACI-24로의 면역화는 Aβ의 아미노산 1-9(펩타이드 1)로 정해진 동일한 에피토프를 갖는 항-Aβ 항체를 야기한다. 추가로, 본 발명자들은 Aβ1-42 섬유에 대한 ELISA 어세이를 변경함으로써 결과물인 항-Aβ 항혈청의 폴리머성 Aβ에의 특이적 결합을 측정함으로써 결과적인 배좌의 의존성을 분석하였다. ACI-24 면역화는, ACI-01로 면역화된 마우스에 의해 생산된 항혈청보다 현저하게 보다 높은 역가의 Aβ1-42 섬유를 인식하는 항-Aβ 항체를 상승시킨다 (표 2). 수득된 결과로부터 ACI-01 및 ACI-24로 면역화는 그들의 역가, 서브클래스 및 Ig-이소타입에서뿐만 아니라 그들의 배좌 특이성에서도 상이한 면역 반응을 생성하는 것임에 틀림없다.

표 2.

실시예 7: 알츠하이머병 마우스 모델에서의 인식능에서의 PEG화된 대 팔미토일화된 항원의 비교 (ORT)

7.1 APP × PS1 알츠하이머병 마우스 모델에서의 비공간적 ( non - spatial ), 해마(hippocampus)-의존적 기억능의 향상에의 영향

3달의 시간에 걸친 팔미토일화된 (ACI-24, Aβ_1-15) 및 PEG화된 (ACI-01, Aβ_1-16) 항원을 사용하는 활성 항-Aβ1-16/1-15 백신접종에 의한 면역화의, APP×PS1 알츠하이머병 마우스 모델에서의 비공간적, 해마-의존적 기억능의 향상에의 영향을 분석하기 위해, 물체 인식 테스트(ORT)를 기술된 바와 같이 본질적으로 수행하였다 (Tang 등 1999; Rampon 등 2000). 통계학적 분석은 분산분석(ANOVA) Turkey-Kramer 다중 비교 테스트를 이용하여 기술된 바와 같이 수행하였다 (Moechars.D.등 (1999) 및 (1996)). 이 테스트는 Windows용 GraphPad InStat version 3.06(GraphPad Software, San Diego California USA, www.graphpad.com)을 이용하여 수행하였다.

간단히 말해서, 3달 면역화 일정은 ACI-01 및 ACI-24로의 2주 간격으로 여섯번의 접종으로 인스톨(install)되었다. 일군의 마우스는 대조군으로서의 빈 리포좀을 수용하였으며, 상기 마우스는 상자 아래에 둔 램프에 의해 어둡게 비추어지는 투명한 바닥과 검은 수직벽을 갖는 플렉시유리 개방장(open-field) 상자 (52 × 52 × 40㎝)에 대해 1 시간동안 익숙해지도록 했다. 다음날 상기 동물들은 동일 상자에 두고 10분의 획득 시험(acquisition trial)을 받도록 했다. 이 시험동안 마우스는 물체 A(구슬 또는 주사위)의 존재하에 개방장에 개별적으로 두었고, (동물의 주둥이를 거리 < 1 cm 의 물체를 향하도록 두었을 때의) 물체 A를 탐구하며 소비한 시간을 측정하였다. 3시간 이후에 수행된 10분간의 기억력(retention) 시험 (두번째 시험) 동안 상기 개방장에 신규한 물체 (물체 B: 구슬 또는 주사위)를 친숙한 물체 (물체 A)와 함께 두었다. 상기 동물이 상기 두 물체를 탐구하며 소비한 시간(tA 및 tB)을 기록하였다. 신규한 물체를 탐구하는데 소비한 시간 나누기 두 물체를 탐구하는데 소비한 시간의 비율[(tB/(tA + tB)) x 100]로서 정의되는, 인식 지수 (RI)는 비공간적 기억을 측정하기 위해 사용되었다. 통계학적 분석은 기술된 바와 같이 일원분산분석(ANOVA single factor)를 이용하여 수행되었다 ((Moechars 등 1999; Moechars 등 1996)).

팔미토일화된 (ACI-24) 및 PEG화된 (ACI-01) 항원은 APP×PS-1 마우스에서의 면역화를 위해 2주일 간격으로 사용하였다. 10마리의 3개월령 동물은 각 항원으로 복막내 면역화시켰으며 (각 복막내 주사 당 200 ㎕ 및 100 ㎍ 펩타이드) 빈 리포좀은 대조군으로 사용하였다. 추가접종하고 5일 후 혈청을 수득하였으며, 상기 혈청의 연속 희석물로 ELISA를 수행하였다. 비교 결과는 상이한 항원의 면역원성을 나타낸다.

팔미토일화된 (ACI-24) 및 PEG화된 (ACI-01)의 Aβ 항원으로 면역화된 APP×PS-1 유전자전이 마우스의 인지 능력은 그들을 해마 활성에 의존적인 것으로 알려진 물체 인식 과제를 받도록 함으로써 비공간적 시각 인지 기억의 패러다임으로 평가하였다 ((Tang 등 1999), (Rampon 등 2000)). 근본적으로, 모든 마우스가 주어진 물체에 친숙해지도록 훈련시키고 3시간 후, 마우스들은 친숙한 물체 옆의 및 이에 추가된 신규한 물체와 대면시킴으로써 기억력에 대해 테스트하였다.

*APP×PS-1 마우스의 기억력 또는 인지 기억 능력은 대조군 치료된 APP×PS-1 마우스에 비교하여 팔미토일화된 Aβ_1-15항원 (ACI-24)으로의 면역화에 의해 현저하게 증가될 수 있었다 (대조군에 대한 49.1 ± 4.5% 대 76.1 ± 3.9%; 표 3). 이는 ACI-24 면역화된 마우스가 최초의 물체를 적어도 3시간 동안 인식하고 기억했음을 입증하며, 따라서 건강한, 치료되지 않은 및 비유전자전이 야생형 마우스와 비교할 때, 그들의 동기 부여 및 그들의 탐구 능력은 건강한 연령-, 성-, 및 스트레인-일치되는 마우스와 같이 변하지 않음을 이끌어낸다 (61.8 ± 5.1 %). 비록 ACI-01 펩타이드는 ACI-24 펩타이드보다 C-말단 아미노산 하나가 더 길뿐이고(16^th 라이신), 이들 백신간에 상이한 것은 링커 기술뿐이지만, PEG화된 Aβ_1-16 항원(ACI-01) 으로의 면역화는 ACI-24에 비교하여 어떤 기억 회복도 증명하지 않았다.

표 3.

7.2 인지 작용성에 대한 상이한 항체 클래스 IgM 및 IgG 의 잠재적 기여

인지 작용성에 대한 상이한 항체 클래스 IgM 및 IgG의 잠재적 기여를 분석하기 위해, 상관 분석을 수행하였다.

두 상(phase)에서, IgM 항체는 기억 능력과 상관하지 않았으나 (r²=0.2333), 결과물인 IgG 클래스의 항체는 기억 능력의 등급(ORT 지수)과 대략 상관하였다(r²=0.857). 0 내지 20의 ORT 지수 사이에서는 보다 직선인 관계가 관찰되었으나, 20을 초과하는 ORT 지수에서는 상관(correlation)이 포화상으로 진입한다. 이는 혈액뇌장벽(blood-brain-barrier)을 통과하지 않는 IgM 항체가 기억의 회복에 기여하지 않음을 나타낼 수 있다. 반대로, IgG 항체는 그들의 서브클래스에 따라 혈액뇌장벽을 교차하고 기억 향상에 링크된다.

APP×PS-1 마우스의 뇌 내 가용성 및 불용성 아밀로이드 펩타이드, 인간 Aβ1-40 및 Aβ1-42의 양을 변경시키는 ACI-24 면역화의 능력은 뇌 균질물의 가용성 분획물에서 특정 ELISA에 의해 측정하였다. 상업적으로 입수 가능한 ELISA 키트(아밀로이드 β40 또는 β42 ELISA, The Genetics Company, Zurich, 스위스)를 사용하였다. ELISA는 제조사의 프로토콜에 따라 수행하였다. 샘플의 Aβ 함량의 정량은 합성 Aβ1-40 또는 Aβ1-42로 제조된 표준 곡선에 대한 흡광도를 비교함으로써 수득하였다 (표 4) .

표 4.

ACI-24로의 면역화는 불용성, 플라크-관련-Aβ1-40 및 Aβ1-42를 현저하게 감소시켰다. 가용성 Aβ1-42 수준 또한 현저하게 감소하였으나, 가용성 Aβ1-40의 수준은 감소하려는 경향만을 나타내었다.

실시예 8: ACI -01 및 -24로의 면역화는 염증을 유발하지 않는다

리포좀 백신인 ACI-01 및 ACI-24 모두의 안전성은 염증성 사이토카인 IL-1β, IL-6, IFN-γ 및 TNF α의 국부적 생산을 특정 ELISA에 의해 측정하는 것으로 평가하였다. TNF-α, IFN-γ, IL-6 및 IL-1β의 수치는 샌드위치 ELISA를 이용하여 제조자의 설명서에 따라 총 뇌 균질물에서 측정하였다 (모두 R&D Systems, Minneapolis, MN, 미국). 결과는 재조합 사이토카인의 연속 희석물을 기준으로 하여 pg/ml로 나타내었다. 해마이행부(subiculum) 영역 내의 뇌 내에서 활성화된 미세아교 세포(microglial cell, MHCⅡ) 및 성상교세포증(astrogliosis, GFAP)의 범위는 정량적 면역조직화학에 의해 평가하였다.

ACI-01 또는 ACI-24로의 면역화는 어느 것이든 뇌 내에서의 IL-1β, IL-6, IFN-γ 및 TNF α의 수치를 현저하게 증가시키지 않았다. 유사하게, ACI-24로의 면역화 후 성상교세포증에서의 차이점은 관찰되지 않았으나, 반면 면역화 기간인 3달 후 활성화된 미세아교 세포의 범위는 감소하는 경향을 나타내었다.

실시예 9: mAb 의 제조

팔미토일화된 항원(ACI-24, Aβ_1-15)은 C57BL/6 마우스에서의 면역화를 위해 2주 간격으로 사용하였다. 10-12마리의 동물은 각 항원으로 면역화시켰다 (주사 부피: 8 nmole 펩타이드를 함유하는 200㎕). 마지막 주사는 동물을 희생시키기 4일 전에 수행하였다. 5회 추가접종한 후 치료적 역가(ELISA에서 혈청을 1:5,000 희석했을 때 양성)를 갖는 마우스를 융합을 위해 선별하였다. 면역화된 동물로부터 비장 세포를 수합하였으며, 감작된 비장 세포를 골수종(myeloma) 세포주와 융합함으로써 하이브리도마를 생성하였다. 마우스의 비장으로부터의 B-림프구와 골수종 세포주 SP2-0. (ATCC, Manassas, VA)의 세포의 융합은 Kohler와 Milstein (Nature 256: 495-497 (1975)) 및 Harlow와 Lane (Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory, New York 1988))의 공지된 과정을 이용하여 수행하였다.

폴리에틸렌 글리콜을 첨가하여 상기 세포가 융합되도록 유도하였다. 결과물인 하이브리드 세포는 그 후 예를 들어, 한계 희석(limiting dilution)을 이용하는 통상적인 방식으로 클론(clone)하여, IgG를 생산하는 하이브리도마 클론을 선별하였으며, ELISA로 Aβ_1-42펩타이드에의 특이적 결합에 대해 테스트하였고, 상기 결과물인 희망하는 단일클론성 항체를 생산하는 클론을 배양하였다.

이렇게 수득된 하이브리도마는 하이포크산틴(hypoxanthine), 아미노프테린( aminopterin) 및 티미딘(thymidine)을 함유하는 선별 배지(HAT)에 세포를 플레이팅하여 화학적으로 선별하였다.

하이브리도마는 특정 아밀로이드-관련 질환 또는 장애에 대한 단일클론성 항체를 생산하는 능력에 대해 스크린하였다. 관심있는 항체를 생산하는 하이브리도마는 클론하고, 수를 늘리고 또한 이후의 생산을 위해 동결하여 보관하였다. 바람직한 하이브리도마는 IgG 이소타입, 보다 바람직하게는 IgG2 이소타입을 갖는 단일클론성 항체를 생산한다.

실시예 10: 항체 mACI -24- Ab4 에 대한 특이성 측정

항체 ACI-24-Ab4의 특이성을 분석하기 위해, 상이한 농도의, 미리 형성된 아밀로이드 1-42, 1-40 및 1-38 원섬유를 Hybond ECL 니트로셀룰로오스 막(Amersham Biosciences) 상에 블롯(blot)하였다. 10% 건조 밀크 및 0.7% 트윈 20으로의 블로킹 후, 막은 20 ㎍/ml의 일차 항체와 RT에서 2h동안 인큐베이트하였다. 세척 후, 막은 서양 고추냉이 페록시다아제가 컨쥬게이트된 양(sheep) 항-마우스 IgG 항체(Amersham Biosciences)와 RT에서 1 h동안 인큐베이트하였으며, 세척하고 화학발광 용액과 인큐베이트한 후, 상기 막을 X-선 필름에 노출시켰다. mAb (mACI-24-Ab4)의 아밀로이드β1-42 섬유로의 결합을 측정하기 위해, Aβ 1-42, 1-40 및 1-38 섬유는 7일간 37℃에서 미리-형성시켰으며, 막 상에 블롯하였다. 20 ㎍/ml 항체는 결합 능력을 측정하기 위해 사용하였으며, 결합된 항체는 서양 고추냉이 페록시다아제가 컨쥬게이트된 양 항-마우스 IgG 항체로 20분간 방치하여 검출하였다.

도트 블롯(Dot Blot) 분석에 의해 증명할 수 있던 바와 같이, 항체 mACI-24-Ab4는 상이한 미리-형성된 Aβ 섬유에 상이한 민감도로 결합한다. 상기 항체는 Aβ_1-40 또는 Aβ_1-38보다 Aβ_1-42섬유에 대해 가장 높은 결합 민감도를 나타낸다. 이는 적어도 0.001㎍의 Aβ_1-42섬유를 검출할 수 있으나 반면 Aβ_1-40섬유에 대한 항체의 검출 한계는 적어도 0.1㎍이고, Aβ_1- ₃₈섬유에 대해서는 1㎍으로, 이는 아밀로이드 섬유의 이들 유형에 대한 민감도가 100배 내지 1000배 더 낮다는 것을 의미한다. 이 데이터는 상기 항체 ACI-24-Ab4가 이차 배좌의 변화에 의해 불용성이 되어 알츠하이머병 환자의 뇌 내 아밀로이드 플라크의 주요부가 되는 것으로 알려진 아밀로이드 형태 (1-42)에 적어도 100배 더 민감한 것을 증명한다.

실시예 11 : 농도- 구배 초원심분리에 의한 분획화( Fractionation )

Aβ_1-42섬유 중합(polymerization)을 억제하고 Aβ_1-42-섬유를 해체시키는 단일클론성 항체의 특성은, 항체와 함께 및 항체 없이 인큐베이트한 후 미리 형성된 구배(OptiPrep™) 상에서의 SDS-PAGE 침강 분석의 결과물인 상이한 크기의 펩타이드 섬유 사이의 분포에 대한 원리를 기초로 하는 농도-구배 초원심분리(Rzepecki 등, 2004)에 의해 연구되었다. 미리형성된 Aβ-섬유 개체수의 동시 분석, 공동-인큐베이트된 항체의 결집 특성의 억제 및 해체, 및 상기 섬유에 대한 항체의 결합은 이 방법의 분명한 이점이다.

Aβ_1-15에 대해 생성된 단일클론성 항체(mACI-24-Ab4)는 해체 및 억제 어세이에서 모두 분석되었다.

Aβ_1-42결집의 억제에 대해, Aβ_1-42모노머는 상이한 두 몰비(MAb보다 30배 또는 100배 더 높은 모노머 Aβ_1-42의몰비)의 mAb와, 최종 농도 50 μM의 Aβ와 함께 인큐베이트하였다. 37℃에서 24 hr 인큐베이트한 후, 샘플은 Optiprep™의 불연속 구배 상에 오버레이(overlay)하고 튜브를 4℃에서 3 hr동안 259 000 g에서 회전시켰다. 15개 분획물을 획득하였으며(각 140 ㎕), 분획물 1은 구배의 상부(top)로부터의 가장 농도 낮은 분획물이었으며, 분획물 15는 구배의 저부(bottom)로부터의 가장 농도 높은 분획물이었다. 펠렛도 수득하였다. 수합된 분획물은 은 염색(silver staining)을 한 SDS-PAGE에 의해 분석하였다. 억제 어세이를 위한 Aβ_1-42농도는 해체 어세이를 위한 농도의 5배 미만으로, 이는 아밀로이드 결집 동역학을 감소시키고 선상(linear phase) 내에서의 측정을 보장한다.

mAb의 첨가 없이, Aβ 펩타이드는 인큐베이트 시간 24 hr 후 결집되고, 대부분의 단백질은 분획물 13 내지 펠렛(12에서 매우 적은 펠렛)에서 발견되며, 이는 Aβ 펩타이드 모노머의 완전한 중합을 증명한다. 결집의 성공적이고도 현저한 억제는, 더 낮은 농도의 분획물에서 발견되어야 하는, 더 적은 섬유 또는 올리고머를 야기해야한다. 결집 어세이에서, mACI-24-Ab4는 대다수에 대한 밴드(가장 강한 밴드)에서의 13에서 11 및 12로의 시프트(shift) 및 분획물 13 내지 펠렛에서 런(run)한 밴드의 현저한 가용화를 야기한다. 이는, mACI-24-Ab4가 Aβ펩타이드 모노머의 섬유로의 중합을 억제하는 강한 능력을 나타내고, 또한 (분획물 11 및 12 내의) Aβ섬유에 대한 특이적 결합이 밝혀짐을 의미한다.

(MAb + Aβ 최종 농도 246μM의 모노머 Aβ_1-42, 상이한 두 몰비 1:30 및 1:100인) MAb와의 공동-인큐베이션의, 미리형성된 Aβ_1-42원섬유의 해체를 위해, 샘플은 37℃에서 24hr동안 인큐베이트하였다. 24 hr 후 샘플을 초원심분리로 분획시키고, 상기한 및 전술한 바와 같이 SDS-PAGE로 분리하였다 (Rzepecki 등, 2004).

결집 어세이와 유사하게, 완전한 섬유 중합은 분획물 12 내지 P(펠렛)에서의 Aβ_1-42원섬유 단독의 분포에 의해 증명될 수 있었다. 여기서 더 낮은 농도의 분획물로의 섬유의 시프트는, 공동-인큐베이트되었을 때 미리 형성된 섬유에 대한 항체의 해체 활성을 지시할 것이다. 몰비 1:100의 mACI-24-Ab4의 첨가는 아밀로이드 섬유의 대다수의 12에서 11로의 시프트를 나타내었다. 따라서 mACI-24-Ab4는 강한 해체 활성 또한 나타낸다.

실시예 12: 알츠하이머병 마우스 모델에서의 인식 능력 보유 시험에서의 팔미토일화된 항원 및 보체 활성화 억제제의 조합 적용 (ORT)

이미 과활성화된 보체 시스템의 백신접종을 통한 추가의 자극에 의해 야기된 신경계 합병증과 같은 잠재적인 부작용을 예방하기 위해, TP10 (가용성 인간 보체 수용체 1), 에쿨리주마브(Eculizumab) (항-인간 보체 단백질 C5), 펙셀리주마브(Pexelizumab) (항-C5 보체), 천연 C1 억제제 Cetor？(C1-esteraseremmer- N) 및 천연 인간 C1 억제제로 구성되는 그룹으로부터 선택된 보체 억제제와 조합하여, 팔미토일화된 (ACI-24, Aβ_1-15) 항원을 투여한다.

상기 보체 억제제는 인간 환자의 팔미토일화된 항원으로의 백신접종 이전에 또는 그 직후에 투여한다.

적용 계획에서 상기 보체 억제제는 팔미토일화된 (ACI-24, Aβ_1-15) 항원으로의 백신접종 이전에 투여하고, 억제제 화합물은 백신접종하기 20시간 전부터 시작하고 백신접종 직전에 끝나는 타임 윈도우 내에 투여한다 (적용 계획 1).

적용 계획에서 상기 보체 억제제는 팔미토일화된 (ACI-24, Aβ_1-15) 항원으로의 백신접종에 이어서 투여하고, 억제제 화합물은 백신접종한 직후로부터 시작하고 백신접종하고 1일 후에 끝나는 타임 윈도우 내에 투여한다 (적용 계획 2).

12.1 TP10 (가용성 인간 보체 수용체 1)

TP10로의 인간 시험에서 CPB 후 24시간 동안 100 ㎍/mL 내지 160 ㎍/mL 범위의 TP10 농도를 유지하는 것이 바람직함을 발견하였다. 상기 농도 범위를 달성하기 위해 0.5시간에 걸쳐 10 mg/kg의 초기 용량을 주고, 그 후 23.5시간에 걸쳐 10 mg/kg을 주는 것이 가장 적절하다.

팔미토일화된 (ACI-24, Aβ_1-15) 항원으로의 백신접종은, 적용 계획 1에 따라 바람직한 TP10농도가 달성된 후 수행되거나, 또는, 달리하면, 적용 계획 2에 따라 10 mg/kg TP10의 초기 용량이 적용되기 전에 수행된다.

12.2 에쿨리주마브 (항-인간 보체 단백질 C5 )

에쿨리주마브 (600 mg)는 4주간 매주 주입하여 투여하였으며, 1주 후 900mg-용량으로, 또한 이후 격주로 900mg-용량으로 12주까지 투여하였다 (Hillmen P, N Engl J Med. 2004 Feb 5;350(6):552-9.).

장기간 치료를 위해 에쿨리주마브는 매 12 내지 14일에 900 mg의 용량으로 투여될 수 있다. (Hill A, Blood. 2005 Oct 1 ;106(7):2559-65. Epub 2005 Jun 28.)

팔미토일화된 (ACI-24, Aβ_1-15) 항원으로의 백신접종은, 적용 계획 1에 따라 제1 용량인 600 mg의 에쿨리주마브가 투여된 후 수행되거나, 또는, 달리하면, 적용 계획 2에 따라 600 mg 에쿨리주마브의 초기 용량 전에 수행된다.

*일부 경우에서는, 에쿨리주마브 투여의 최초 4회가 종료되었을 때 및 안정된 항정상태가 인간 신체에서 달성되었을 때인, 4주 후에 적용 계획 1을 적용하는 것이 보다 적절할 것이다.

12.3 펙셀리주마브 (항- C5 보체 )

펙셀리주마브는 10분에 걸쳐 2.0 mg/kg 환(bolus)으로 정맥내로 투약하고, 상기 환 투여 후 20시간에 걸친 1.0 mg/kg의 주입(http://circ.ahajournals.org/cgi/content/full/ 106/23/2986-a) 또는 24시간 동안의 0.05 mg/kg/시간의 주입이 뒤따를 것이다.

팔미토일화된 (ACI-24, Aβ_1-15) 항원으로의 백신접종은, 적용 계획 1에 따라 최초 2.0 mg/kg 펙셀리주마브의 환이 투여된 후 수행되거나, 또는, 달리하면, 적용 계획 2에 따라 초기 2.0 mg/kg 펙셀리주마브의 환의 투약 전에 수행된다.

일부 경우에서는, 주입에 의한 두번째 적용이 완료된 후 및 안정된 항정상태 농도가 인간 신체에서 달성되었을 때에 적용 계획 1을 적용하는 것이 보다 적절할 것이다.

12.4 천연 인간 C1 억제제

C1 억제제는 6.25 내지 100 U/kg의 용량으로 투여된다 (van Doom MB, , Allergy Clin Immunol. 2005 Oct;116(4):876-83. Epub 2005 Aug 8.)

또는, 500-1000 IU 사이인 용량의 저온 살균된 C1 에스테라아제 억제제 농축물이 투여될 수 있다 (De Serres J, Transfus Apher Sci. 2003 Dec;29(3):247- 54.); (Bork K, Arch Intern Med. 2001 Mar 12;161(5):714-8.)

C1-억제제는 또한 6000 IU로 시작하는 1-hr 주입으로 정맥내로 투약될 수 있으며, 뒤따라 12-hr 간격으로 3000 IU, 2000 IU, 및 1000 IU로 투약될 수 있다 (Caliezi C.Crit Care Med. 2002 Aug;30(8): 1722-8.)

마지막으로, C1-억제제는 체중의 킬로그램 당 25 혈장 단위 농도의 증기-가열된 억제제 농축물로서 매 3일마다 정맥 내로 투여될 수 있다. (Waytes AT, N Engl J Med. 1996 Jun 20;334(25):1630-4.).

팔미토일화된 (ACI-24, Aβ_1-15) 항원으로의 백신접종은, 적용 계획 1에 따라 C1 억제제가 투여된 후 수행되거나, 또는, 달리하면, 적용 계획 2에 따라 초기 투여량인 C1 억제제의 투약 전에 수행된다.

12.5 천연 C1 억제제 Cetor ？ ( C1 - esteraseremmer -N)

C1-esterasehemmer-N 또는 Cetor？는 1,000 U, 1,500 U 또는 2,000 U의 투여량으로 투여되고, 후에는 다른 제품과 동량으로 투여된다.

팔미토일화된 (ACI-24, Aβ_1-15) 항원으로의 백신접종은, 적용 계획 1에 따라 2^nd용량의 투여 후 수행되거나, 또는, 달리하면, 적용 계획 2에 따라 1,000 U, 1,500 U 또는 2,000 U C1-esterasehemmer-N 또는 Cetor？의 초기 투여량 전에 수행된다.

기탁:

이하의 하이브리도마 세포주는 부다페스트 조약의 규정 하에, 브라운슈바이그 38124, 마쉐로데르 베그 1 비, 브라운슈바이그(Braunschweig, Mascheroder Weg 1 B, 38124 Braunschweig) 소재 "Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ)"에 기탁되었다:

인용문헌

Alving 등, Infect . Immun . 60:2438-2444, 1992

Bork K, Arch Intern Med. 2001 Mar 12;161(5):714-8

Caliezi C,Crit Care Med. 2002 Aug;30(8):1722-8.

De Serres J, Transfus Apher Sci. 2003 Dec;29(3):247-54

Doom MB van, , Allergy Clin Immunol. 2005 Oct;116(4):876-83. Epub 2005 Aug 8

Harlow 및 Lane (Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory, New York 1988)

FYLAKTAKIDOU, K.C., LEHN, J.-M. GREFERATH, R. NICOLAU, C, "Inositol tripyrophosphate: a new membrane permeant allosteric effector of haemoglobin", Bioorg. Med. Chem. Lett., 15, 1605-1608, 2005.

Hodgson 등, Bio/Technoloy, 9:421 (1991)

Khaw, B. A. 등 J. Nucl. Med. 23:1011-1019 (1982)

Kohler 및 Milstein (Nature 256: 495-497 (1975)

Moechars.D., Dewachter.l., Lorent.K., Reverse.D., Baekelandt.V., Naidu.A., Tesseur.l., Spittaels.K., Haute.C.V., Checler.F., Godaux.E., Cordell.B. 및 Van Leuven.F.: 1999, J. Biol. Chem. 274, 6483-6492.

Moechars.D., Lorent.K., De Strooper.B., Dewachter.l., & Van Leuven.F. Expression in brain of amyloid precursor protein mutated in the alpha-secretase site causes disturbed behavior, neuronal degeneration and premature death in transgenic mice. EMBO J. 15, 1265-1274 (1996).

Hill A, Blood. 2005 Oct 1 ;106(7):2559-65. Epub 2005 Jun 28.

Hillmen P, N Engl J Med. 2004 Feb 5;350(6):552-9.

Li JS, Am Heart J. 2004 Jan; 147(1): 173-80

Moechars.D., Lorent.K., De Strooper.B., Dewachter.l. 및 Van Leuven.F.: 1996, EMBO J. 15, 1265-1274.

Nicolau, C₁ Greferath, R., Balaban, T. S., Lazarte, J. E., 및 Hopkins, R. J. (2002). Proc Natl Acad Sci U S A 99, 2332-2337.

Piotto.M., Saudek.V., & Sklenar.V. Gradient-tailored excitation for single-quantum NMR spectroscopy of aqueous solutions. J. Biomol . NMR 2, 661-665 (1992).

Piotto.M., Elbayed.K., Wieruszeski.J.M., & Lippens.G. Practical aspects of shimming a high resolution magic angle spinning probe. J. Magn Reson . 173, 84-89 (2005).

Queen 등, Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989)

Rampon.C, Tang.Y.P., Goodhouse.J., Shimizu.E., Kyin.M. 및 Tsien.J.Z.: 2000, Nat. Neurosci. 3, 238-244.

Rzepecki 등, 2004

Rousseaux 등 Methods Enzymology, 121 :663-69, Academic Press, 1986

Tang.Y.P., Shimizu.E., Dube.G.R., Rampon.C. , Kerchner.G.A., Zhuo.M., Liu, G. 및 Tsien.J.Z.: 1999, Nature 401, 63-69.

B Teisseire, C Ropars, M C Villereal, 및 C Nicolau, ? Long-term physiological effects of enhanced O2 release by inositol hexaphosphate-loaded erythrocytes." Proc Natl Acad Sci U S A. 1987 October; 84(19): 6894-6898

Teisseire B, Ropars C, Villereal MC, Nicolau C. Long-term physiological effects of enhanced O2 release by inositol hexaphosphate-loaded erythrocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 1987 Oct; 84(19) 6894-6898.

Udenfriend.S. 등 Fluorescamine: a reagent for assay of amino acids, peptides, proteins, and primary amines in the picomole range. Science 178, 871-872 (1972).

Wagner 등 (2002) Journal of Liposome Research Vo1 12(3), pp 259 - 270

Waytes AT, N Engl J Med. 1996 Jun 20; 334(25): 1630-4

US-P 6843942

EPA 1337322

DSMZ

DSMACC02756

20051208

SEQUENCE LISTING <110> AC Immune S.A. <120> Therapeutic Vaccine <130> L3018 PCT <150> EP 05027091.7 <151> 2005-12-12 <150> EP 06009098.2 <151> 2006-05-02 <160> 6 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> antigenic peptide A� 1-15 <400> 1 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln 15 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> antigenic peptide A� 1-16 <400> 2 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys 16 <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> antigenic peptide A� 1-16(?14) <400> 3 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His Gln Lys 15 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> antigenic peptide A� 4-11 <400> 4 Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu 8 <210> 5 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> antigenic peptide A� 22-35 <400> 5 Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu 13 <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> antigenic peptide A� 29-40 <400> 6 Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val 12

Claims

Aβ 항원성 펩타이드 절편을 포함하는 항원성 구조체 생산 방법으로서, 하기 단계:
(a) 수지상 표준 자동화 펩타이드 합성에 의해 상기 Aβ 펩타이드 항원을 미리 형성하는 단계, 및
(b) 친지성 또는 소수성 모이어티를 상기 미리 형성된 Aβ 펩타이드의 말단 아미노산 잔기에 수지상 그래프팅 함에 의해 상기 미리 형성된 Aβ 펩타이드 항원을 변형하는 단계,
를 포함하는 항원성 구조체 생산 방법에 의해 생산된 항원성 구조체.
청구항 1에 있어서, 아밀로이드-관련 질환 또는 병태의 치료를 위한, Aβ 펩타이드의 N-말단 절편 1-16 또는 1-17로부터의 13 내지 15개의 연속 아미노산 잔기의 단일 또는 반복 스트레치로 구성되는 변형된 Aβ 항원성 펩타이드 절편을 포함하고, 여기에서 상기 Aβ 펩타이드 항원은 수지상 표준 자동화 펩타이드 합성에 의해 미리 형성되고 친지성 또는 소수성 모이어티를 상기 미리 형성된 Aβ 펩타이드의 말단 아미노산 잔기에 수지상 그래프팅 함에 의해 변형되는 것인 항원성 구조체.
청구항 2에 있어서, 잔기 1-15, 1-14, 및 1-13으로 구성되는 그룹으로부터 선택된 Aβ 펩타이드의 N-말단부로부터의 13 내지 15개의 연속 아미노산 잔기의 단일 또는 반복 스트레치로 구성되는 Aβ 항원성 펩타이드 절편을 포함하는 것인 항원성 구조체.
청구항 3에 있어서, 서열식별번호: 1로 주어진 Aβ_1-15펩타이드 항원 및 서열식별번호: 3으로 주어진 Aβ_1-16(Δ14)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 단일 또는 반복적 Aβ 펩타이드 절편을 포함하는 것인 항원성 구조체.
청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Aβ 펩타이드 항원은 α-나선부 및 β-시트부 또는 랜덤 코일부의 균형 비율 또는 α-나선부 및 β-시트부 및 랜덤 코일부의 균형 비율을 특징으로 하는 정해진 배좌를 갖는 것인 항원성 구조체.
청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Aβ펩타이드 항원은 담체 또는 보조제 내에 재구성되어 또는 이에 부착되어 제시되는 것인 항원성 구조체.
청구항 6에 있어서, 상기 Aβ 펩타이드 항원은 리포좀 내에서 재구성되어 제시되는 것인 항원성 구조체.
청구항 7에 있어서, 상기 Aβ펩타이드 항원은 상기 리포좀 담체의 지질 이중층 내부로의 삽입을 용이하게 하는 친지성 또는 소수성 모이어티에 의해 변형되는 것인 항원성 구조체.
청구항 8에 있어서, 상기 친지성 또는 소수성 모이어티는 지방산, 트리글리세리드 또는 인지질인 것인 항원성 구조체.
청구항 9에 있어서, 상기 소수성 모이어티는 팔미트산인 것인 항원성 구조체.
청구항 7에 있어서, 상기 리포좀 제제는 보조제 또는 면역조절물질 또는 둘다를 함유하는 것인 항원성 구조체.
청구항 11에 있어서, 상기 면역조절물질은 지질 A인 것인 항원성 구조체.
청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 기재된 항원성 구조체를 포함하는 백신 조성물.
청구항 13에 있어서, 상기 리포좀 제제는 보조제 또는 면역조절물질 또는 둘다를 함유하는 것인 백신 조성물.
청구항 14에 있어서, 상기 면역조절물질은 무독화된 지질 A인 것인 백신 조성물.
청구항 13에 있어서, 아밀로이드-관련 질환 또는 병태의 치료를 위한 면역원성 항원성 펩타이드를 포함하는 백신 조성물로서, 여기서 β-아밀로이드 펩타이드 항원은, 리포좀 내에서 재구성된 펩타이드의 각 말단에 공유적으로 부착된 팔미토일 잔기에 의해 변형된 팔미토일화된 Aβ_1-15펩타이드 항원인 것인 백신 조성물.
청구항 16에 있어서, 펩타이드의 각 말단에 공유적으로 부착된 팔미토일 잔기에 의해 변형된 2개 이상의 팔미토일화된 Aβ_1-15펩타이드 항원 분자가 단일 리포좀 내에서 재구성되는 것인 백신 조성물.
청구항 13에 있어서, 동물 또는 인간에게 투여시 비염증성 서브타입(subtype)의 항체의 발생을 야기하는 것인 백신 조성물.
청구항 18에 있어서, 상기 항체는 비염증성 Th2 서브타입의 항체인 것인 백신 조성물.
청구항 13에 있어서, 동물 또는 인간에게 투여시, T-세포 비의존성(independent) IgG 서브클래스(subclass)의 항체의 발생을 야기하는 것인 백신 조성물.
청구항 20에 있어서, 상기 항체는 IgG3 이소타입인 것인 백신 조성물.
청구항 18에 있어서, 상기 항체는 2005년 12월 08일에 기탁된, DSM ACC2756인 하이브리도마 세포주 EJ 7H3에 의해 생산된 항체의 특성을 갖는 것인 백신 조성물.
청구항 13에 있어서, 포유류로 이루어진 그룹에서 선택된 동물 또는 인간에게 투여시 뇌 내에서 염증성 마커를 현저히 증가시키지 않는 것인 백신 조성물.
청구항 23에 있어서, 상기 마커는 IL-1-β, IL-6, IFN-γ 및 TNF-α로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것인 백신 조성물.
청구항 13에 있어서, 동물 또는 인간에게 투여시 뇌 내의 불용성, 플라크-관련-Aβ_1-40 및 Aβ_1-42를 현저히 감소시키는 것인 백신 조성물.
청구항 13에 있어서, 동물 또는 인간에게 투여시 뇌 내의 가용성 Aβ_1-42수치를 현저히 감소시키는 것인 백신 조성물.
청구항 13에 있어서, 아밀로이드-관련 병태에 걸린 동물 또는 인간에서, 아밀로이드-관련 질환 또는 병태의 치료를 위한 것인 백신 조성물.
청구항 13에 있어서, 상기 아밀로이드 관련 질환 또는 병태는 동물 또는 인간에서 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 것인 백신 조성물.
청구항 13에 있어서, 상기 아밀로이드 관련 질환 또는 병태는 신경계 장애인 것인 백신 조성물.
청구항 27에 있어서, 상기 아밀로이드 관련 질환 또는 병태는,
알츠하이머병(AD), 경증 인지 장애(MCI), 루이 소체 치매, 다운증후군, 아밀로이드증성 유전성 뇌출혈(네덜란드형); 괌 파킨슨-치매 복합증; 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증; 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 근육위축가쪽경화증, 성인 발병형 당뇨병; 노인성 심아밀로이드증; 내분비 종양, 및 황반 변성
으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 하나인 것인 백신 조성물.
청구항 30에 있어서, 상기 아밀로이드 관련 질환 또는 병태는 알츠하이머병인 것인 백신 조성물.
청구항 28에 있어서, 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 아밀로이드-관련 병태에 걸린 동물 또는 인간에게 투여시, 인지 기억 능력의 보유를 증가시키는 것인 백신 조성물.
청구항 28에 있어서, 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 아밀로이드-관련 병태에 걸린 포유동물 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 동물 또는 인간에게 투여시, 인지 기억 능력을 완전 회복시키는 것인 백신 조성물.
아밀로이드-관련 질환 또는 병태에 걸린 동물 또는 인간에서 그러한 질환 또는 병태의 치료를 위한, 청구항 2에 기재된 항원성 구조체를 동물 또는 인간에의 투여시 생성되는 비염증성 서브타입 항체를 포함하는 약학 조성물.
청구항 34에 있어서, 상기 항체는 단일클론성 항체인 것인 약학 조성물.
청구항 35에 있어서, 상기 항체는 DSM ACC2756로서 2005년 12월 8일 기탁된 하이브리도마 세포주 EJ7H3에 의해 생산된 항체의 특성을 갖는 것인 약학 조성물.
청구항 34에 있어서, 상기 항체는 인간화된 항체인 것인 약학 조성물.
청구항 11에 기재된 항체 구조체를 포함하는 백신 조성물.