RU2010116849A

RU2010116849A - Профилактическая вакцина против вич, основанная на вич-специфических антителах

Info

Publication number: RU2010116849A
Application number: RU2010116849/10A
Authority: RU
Inventors: Елена Ю. ФИЛИНОВА (RU); Елена Ю. Филинова
Original assignee: Текнолоджи Интеграл Лтд. (Gb); Текнолоджи Интеграл Лтд.
Priority date: 2007-10-09
Filing date: 2008-10-09
Publication date: 2011-11-20
Also published as: MX2010003762A; EP2205736B1; BRPI0818354A2; CN101970659A; CA2701948A1; AU2008309940B2; JP2010540674A; AU2008309940A1; US20100215695A1; ZA201002445B; KR20100098597A; RU2505604C2; EP2205736A1; WO2009046984A1

Abstract

1. Метод получения вакцины против ВИЧ, предотвращающей развитие инфекции посредством иммунизации неинфицированных людей, включающий этапы: ! i) создание фагмидной библиотеки моноклональных антител, последовательности которых содержатся в мРНК В-лимфоцитов, полученных от нескольких больных, инфицированных ВИЧ-1 субтипа А или В, ! ii) обогащение фагмидной библиотеки антител с помощью панинга на нативных или рекомбинантных пептидах ВИЧ-1, ! iii) сбор материала пептидов/полипептидов/белков ВИЧ-1 с помощью метода обратного панинга с использованием ВИЧ-1 специфичной фагмидной библиотеки, закрепленной на твердом носителе, ! iv) идентификация и количественная оценка пептидного материала, полученного на этапе iii) и его вариабельности с использованием масс-спектрометрического (PEAKS-LC-MS) анализа и ! (v) использование результатов анализа этапа iv) для получения гликозилированных рекомбинантных пептидов env ВИЧ-1 в индуцируемой системе экспрессии с эукариотическим гликозилированием (Leishmania tarentolae, дрожжи), ! (vi) очистка рекомбинантных пептидов env ВИЧ-1 и приготовление иммуноактивирующего состава для вакцинирования с использованием подходящего адъюванта в качестве системы доставки (стерически стабилизированных липосом, виросом). ! 2. Метод по п.1, при котором носители ВИЧ, используемые для получения биоматериала, инфицированы ВИЧ одного или разных субтипов. ! 3. Метод по п.1, при котором ВИЧ-инфицированные для получения вирусного материала могут быть как нелечеными, так и подвергавшимися лечению антиретровирусными препаратами. ! 4. Метод по п.1, когда полученный вирусный материал когорты ВИЧ-инфицированных размножается как пул (множе�

Claims

1. Метод получения вакцины против ВИЧ, предотвращающей развитие инфекции посредством иммунизации неинфицированных людей, включающий этапы:

i) создание фагмидной библиотеки моноклональных антител, последовательности которых содержатся в мРНК В-лимфоцитов, полученных от нескольких больных, инфицированных ВИЧ-1 субтипа А или В,

ii) обогащение фагмидной библиотеки антител с помощью панинга на нативных или рекомбинантных пептидах ВИЧ-1,

iii) сбор материала пептидов/полипептидов/белков ВИЧ-1 с помощью метода обратного панинга с использованием ВИЧ-1 специфичной фагмидной библиотеки, закрепленной на твердом носителе,

iv) идентификация и количественная оценка пептидного материала, полученного на этапе iii) и его вариабельности с использованием масс-спектрометрического (PEAKS-LC-MS) анализа и

(v) использование результатов анализа этапа iv) для получения гликозилированных рекомбинантных пептидов env ВИЧ-1 в индуцируемой системе экспрессии с эукариотическим гликозилированием (Leishmania tarentolae, дрожжи),

(vi) очистка рекомбинантных пептидов env ВИЧ-1 и приготовление иммуноактивирующего состава для вакцинирования с использованием подходящего адъюванта в качестве системы доставки (стерически стабилизированных липосом, виросом).

2. Метод по п.1, при котором носители ВИЧ, используемые для получения биоматериала, инфицированы ВИЧ одного или разных субтипов.

3. Метод по п.1, при котором ВИЧ-инфицированные для получения вирусного материала могут быть как нелечеными, так и подвергавшимися лечению антиретровирусными препаратами.

4. Метод по п.1, когда полученный вирусный материал когорты ВИЧ-инфицированных размножается как пул (множество) не дольше трех недель перед контактированием с носителем.

5. Метод по п.1, когда носитель презентирует множество различных ВИЧ-специфических антител и/или фрагментов антител, отобранных как фагмидная библиотека.

6. Метод по п.1, когда фагмидная библиотека создается на этапах:

a) получения фрагментов ДНК из нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельные области легкой и тяжелой цепей иммуноглобулинов соответственно, экспрессирующихся в В-лимфоцитах, полученных от группы ВИЧ-инфицированных;

b) объединения фрагментов ДНК, кодирующих легкую и тяжелую цепи иммуноглобулинов, чтобы получить экспрессию полипептида, состоящего из вариабельных участков тяжелой и легкой цепей иммуноглобулинов соответственно, для того чтобы создать множество различных по специфичности вариантов;

c) клонирования объединенных фрагментов в фагмидном векторе и трансформации бактериального штамма для получения экспрессии на поверхности бактериофага.

7. Метод по п.1, когда амплификация при получении фрагментов ДНК, кодирующих легкую и тяжелую цепи иммуноглобулинов, проводится с любой комбинацией праймеров, перечисленных в таблицах 1-7.

8. Метод по п.1, когда полученные фагмидные рекомбинантные scFv библиотеки антител специфичны к резистентным вариантам ВИЧ, циркулирующим в организме пациентов, подвергшихся ВААРТ- или любой другой антиретровирусной терапии.

9. Метод по п.1, когда этап i) дополнительно включает обогащение фагмидной библиотеки с презентированными ScFv фрагментами антител в ходе процедуры панинга, связывания ВИЧ-специфических антител с рекомбинантными gp120-, gp41- и нативными полипептидами ВИЧ, выделенными из различных изолятов доноров.

10. Метод по п.1, когда выделение и обогащение пептидов/полипептидов/белков env ВИЧ-1 осуществляется с использованием обратного панинга.

11. Метод по п.1, когда жидкостная хроматография-масс-спектрометрия с подходящим программным обеспечением используется для количественного анализа, идентификации и/или секвенирования gp120 ВИЧ-1, его консервативных и вариабельных фрагментов.

12. Метод по п.1, когда этап произодства включает получение рекомбинантных пептидов/полипептидов/белков ВИЧ-1 в клетках подходящего организма-хозяина с типом гликозилирования, близким к эукариотическому.

13. Метод по п.1, который включает приготовление состава профилактической вакцины против ВИЧ путем добавления/связывания с дополнительными иммуногенными стимуляторами, адъювантами или носителями, в частности стерически стабилизированными липосомами.

14. Вакцина против ВИЧ, которую получают в соответствии с любым из пунктов формулы изобретения, тестированную in vivo на породе мышей с тяжелым комбинированным Т- и В- иммунодефицитом (SCID) на формирование иммунного ответа по человеческому типу, а также иммунизацию, способную предотвратить развитие ВИЧ-инфекции в человеческих лимфоцитах.

15. Применение вакцины против ВИЧ по п.1 для иммунизации неинфицированных людей против заражения и развития ВИЧ-инфекции и СПИДа.