RU2009114691A - Связывающие молекулы - Google Patents

Abstract

1. Способ получения антитела, имеющего только тяжелую цепь, включающий: ! стимуляцию антигеном не относящегося к человеку млекопитающего, имеющего локус тяжелой цепи, который: ! содержит множество генных сегментов V, которые кодируют одну или более аминокислотных мутаций (i) на границе контакта с VL для снижения гидрофобности и (ii) в других положениях для преодоления структурной нестабильности; ! содержит, по меньшей мере, один генный сегмент D и, по меньшей мере, один генный сегмент J; ! лишен генных сегментов, кодирующих домен CH1, или сконструирован для предотвращения экспрессии функционального домена CH1; и ! при экспрессии в ответ на стимуляцию антигеном обеспечивает продукцию антитела, имеющего только тяжелую цепь, лишенного CH1, имеющего растворимый VH-домен, кодируемый геном VH, который включает предпочтительный генный сегмент V, включенный в указанный ген VH в результате реаранжировки VDJ и созревания аффинности. ! 2. Способ по п.1, где предпочтительный генный сегмент V и необязательно предпочтительные сегменты D и J далее модифицированы посредством созревания аффинности, приводящего к повышенной стабильности и растворимости полученного VH-домена, включенного в антитело, имеющее только тяжелую цепь. ! 3. Способ по п.1 или 2, где указанное не относящееся к человеку млекопитающее получают посредством: ! получения трансгена in vitro, включающего указанный локус; и ! внесения указанного трансгена в пригодную клетку, из которой предстоит получить указанное не относящееся к человеку млекопитающее. ! 4. Способ по п.3, где клетка представляет собой эмбриональную стволовую клетку или овоцит. ! 5. Способ по п.1 или 2, где указанное не от�

Claims (25)

1. Способ получения антитела, имеющего только тяжелую цепь, включающий:

стимуляцию антигеном не относящегося к человеку млекопитающего, имеющего локус тяжелой цепи, который:

содержит множество генных сегментов V, которые кодируют одну или более аминокислотных мутаций (i) на границе контакта с V_L для снижения гидрофобности и (ii) в других положениях для преодоления структурной нестабильности;

содержит, по меньшей мере, один генный сегмент D и, по меньшей мере, один генный сегмент J;

лишен генных сегментов, кодирующих домен CH1, или сконструирован для предотвращения экспрессии функционального домена CH1; и

при экспрессии в ответ на стимуляцию антигеном обеспечивает продукцию антитела, имеющего только тяжелую цепь, лишенного CH1, имеющего растворимый V_H-домен, кодируемый геном V_H, который включает предпочтительный генный сегмент V, включенный в указанный ген V_H в результате реаранжировки VDJ и созревания аффинности.

2. Способ по п.1, где предпочтительный генный сегмент V и необязательно предпочтительные сегменты D и J далее модифицированы посредством созревания аффинности, приводящего к повышенной стабильности и растворимости полученного V_H-домена, включенного в антитело, имеющее только тяжелую цепь.

3. Способ по п.1 или 2, где указанное не относящееся к человеку млекопитающее получают посредством:

получения трансгена in vitro, включающего указанный локус; и

внесения указанного трансгена в пригодную клетку, из которой предстоит получить указанное не относящееся к человеку млекопитающее.

4. Способ по п.3, где клетка представляет собой эмбриональную стволовую клетку или овоцит.

5. Способ по п.1 или 2, где указанное не относящееся к человеку млекопитающее получают посредством гомологичной рекомбинации, при которой указанное множество мутантных генных сегментов V и, необязательно, указанных генных сегментов D и J заменяют эквивалентные генные сегменты в эндогенной локусе тяжелой цепи, причем указанные локусы тяжелой цепи лишены функциональности CH1 у не относящегося к человеку млекопитающего.

6. Способ по п.1, где не относящееся к человеку млекопитающее включает множество локусов тяжелой цепи, по меньшей мере, один из которых является таким, как определено в п.1, и все из которых находятся на разных хромосомах.

7. Способ по п.6, где один или более локусов содержат природные генные сегменты V и остальные локусы содержат один или несколько сконструированных генных сегментов V.

8. Способ по п.6, где локусы на каждой хромосоме отличаются.

9. Способ по п.6, где локусы на каждой хромосоме являются одинаковыми.

10. Способ по п.1, где генные сегменты V представляют собой мутированные генные сегменты V человека.

11. Способ по п.1, где локус включает множество генных сегментов D.

12. Способ по п.1, где локус включает множество генных сегментов J.

13. Способ по п.1, где локус содержит, по меньшей мере, один генный сегмент, кодирующий константный участок.

14. Способ по п.13, где в локусе содержится множество генных сегментов, кодирующих константные участки.

15. Способ по п.13, где генные сегменты, кодирующие константный участок, являются человеческими.

16. Способ по п.1, где каждый генный сегмент D и J является человеческим.

17. Способ по п.1, где каждый генный сегмент V кодирует белок, который имеет мутацию в одном или нескольких из положений 37, 44, 45 и 47.

18. Способ по п.17, где каждый генный сегмент V кодирует белок, который имеет мутации во всех из положений 37, 44, 45 и 47.

19. Способ по п.17, где генный сегмент V кодирует белок, где в положении 37 остаток представляет собой фенилаланин, в положении 44 остаток представляет собой глутаминовую кислоту, в положении 45 остаток представляет собой глутамин и/или в положении 47 остаток представляет собой глицин.

20. Способ по п.1, где каждый генный сегмент V кодирует белок, который имеет мутацию в любом из положений 5 и 14.

21. Способ по п.20, где каждый генный сегмент V кодирует белок, который имеет мутации в обоих из положений 5 и 14.

22. Способ по п.20, где генный сегмент V кодирует белок, где в положении 5 остаток представляет собой глутамин и/или в положении 14 остаток представляет собой аланин.

23. Антитело, имеющее только тяжелую цепь, обладающее V_H-доменом, кодируемым частично любым из генных сегментов V, указанных на фигуре 3.

24. Способ по п.1, дополнительно включающий выделение антителопродуцирующих клеток из указанного трансгенного не относящегося к человеку млекопитающего и получение гибридом для продукции антител, имеющих только тяжелую цепь.

25. Антитело, имеющее только тяжелую цепь, полученное способом по п.24.