RU2008142147A

RU2008142147A - Диагностика тромбоэмболических заболеваний вен путем определения содержания d-димеров и растворимого фибрина

Info

Publication number: RU2008142147A
Application number: RU2008142147/15A
Authority: RU
Inventors: Биби Шах Сольтан МИРШАХИ (FR); Биби Шах Сольтан МИРШАХИ; Джанет СОРИА (FR); Джанет СОРИА
Original assignee: Диагностика Стаго (Fr); Диагностика Стаго; Ассистанс Паблик-Хопитакс Де Париж (Fr); Ассистанс Паблик-Хопитакс Де Париж
Priority date: 2006-05-05
Filing date: 2007-05-03
Publication date: 2010-06-10
Also published as: EP2016422B1; AU2007247040A1; JP5613414B2; US20090305301A1; US7968302B2; FR2900734B1; BRPI0711145B8; CN101438169A; RU2475760C2; AU2007247040B2; CA2651230A1; FR2900734A1; JP2009536331A; BRPI0711145B1; WO2007128916A1; EP2016422A1; BRPI0711145A2; KR20090023369A; MX2008014138A; AR060857A1

Abstract

1. Способ in vitro диагностики активации свертывания крови в пробе крови, взятой у пациента, включающий: ! а) количественный анализ продуктов разрушения фибрина, содержащихся в тестируемой пробе, включающий определение содержания D-димеров, присутствующих в пробе и составляющих базовый уровень D-димеров; ! б) обработку пробы путем инкубирования с активатором плазминогена, обладающим высокой аффинностью к фибрину (PA-sFb), в условиях, обеспечивающих разрушение растворимого фибрина, содержащегося в пробе, с образованием продуктов разрушения, без разрушения фибриногена, и определение количества D-димеров, содержащихся в обработанной пробе; ! в) расчет разности между количеством D-димеров, определенным после активации активатором PA-sFb на стадии б), и содержанием D-димеров перед указанной активацией, определенным на стадии а), при этом полученная разность является показателем степени разрушения растворимого разрушаемого фибрина (РРФ); ! г) сравнение уровня D-димеров, измеренного на стадии а), с стандартным пороговым значением, определенным для указанных продуктов разрушения, и сравнение уровня РРФ, рассчитанного на стадии в), с граничным значением нормы, определенным для РРФ, ! при этом делают вывод, что риск возникновения тромбоэмболического заболевания существует, если по меньшей мере один из уровней: уровень D-димеров, измеренный на стадии а), или расчетный уровень РРФ, превышает соответствующее определенное нормальное значение, и указанный риск исключают, если уровень D-димеров, определенный на стадии а), и уровень РРФ, определенный на стадии в), ниже, чем соответствующие граничные значения нормы. ! 2. Способ по п.1, применяе

Claims

1. Способ in vitro диагностики активации свертывания крови в пробе крови, взятой у пациента, включающий:

а) количественный анализ продуктов разрушения фибрина, содержащихся в тестируемой пробе, включающий определение содержания D-димеров, присутствующих в пробе и составляющих базовый уровень D-димеров;

б) обработку пробы путем инкубирования с активатором плазминогена, обладающим высокой аффинностью к фибрину (PA-sFb), в условиях, обеспечивающих разрушение растворимого фибрина, содержащегося в пробе, с образованием продуктов разрушения, без разрушения фибриногена, и определение количества D-димеров, содержащихся в обработанной пробе;

в) расчет разности между количеством D-димеров, определенным после активации активатором PA-sFb на стадии б), и содержанием D-димеров перед указанной активацией, определенным на стадии а), при этом полученная разность является показателем степени разрушения растворимого разрушаемого фибрина (РРФ);

г) сравнение уровня D-димеров, измеренного на стадии а), с стандартным пороговым значением, определенным для указанных продуктов разрушения, и сравнение уровня РРФ, рассчитанного на стадии в), с граничным значением нормы, определенным для РРФ,

при этом делают вывод, что риск возникновения тромбоэмболического заболевания существует, если по меньшей мере один из уровней: уровень D-димеров, измеренный на стадии а), или расчетный уровень РРФ, превышает соответствующее определенное нормальное значение, и указанный риск исключают, если уровень D-димеров, определенный на стадии а), и уровень РРФ, определенный на стадии в), ниже, чем соответствующие граничные значения нормы.

2. Способ по п.1, применяемый для определения тромбоэмболического заболевания вен.

3. Способ по п.1, для применения в исследовании образования венозного тромба.

4. Способ по п.1, применяемый для диагностики тромбоза глубоких вен.

5. Способ по п.1, применяемый для диагностики эмболии легкого.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что проба крови представляет собой пробу плазмы.

7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что пробу крови берут у пациента, проходящего лечение методом антикоагуляционной терапии.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что активатор плазминогена PA-sFb представляет собой t-PA.

9. Способ по любому из пп.1-6 или 8, отличающийся тем, что разрушение фибриногена блокируют путем добавления ингибитора плазмина.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что ингибитор плазмина представляет собой апротинин, который добавляют после инкубирования пробы в течение 15 мин при 37°С с активатором плазминогена Pa-Fb.

11. Способ по любому из пп.1-6, 8 или 10, отличающийся тем, что перед инкубированием пробы с активатором плазминогена Pa-Fb в пробу добавляют антикоагулянт, в частности, состав, содержащий лимонную кислоту и трицитрат натрия.

12. Способ по любому из пп.1-6, 8 или 10, отличающийся тем, что включает дополнительно определение содержания продуктов разрушения растворимого разрушаемого фибрина в отрицательной контрольной пробе и в положительной контрольной пробе.

13. Способ по любому из пп.1-6 или 8, отличающийся тем, что содержание D-димеров определяют при помощи моноклонального антитела к D-димерам.

14. Способ диагностики по любому из пп.1-6 или 8, отличающийся тем, что включает дополнительно определение содержания РРФ, присутствующего в положительной контрольной пробе, которая представляет собой пробу нормальной плазмы, при этом указанный способ включает следующие стадии:

а) инкубирование пробы плазмы с активатором коагуляции, которое обеспечивает образование растворимого фибрина без образования фибринового сгустка, при этом активатор представляет собой, например, небольшое количество тромбина, способное вызвать образование растворимого фибрина;

б) инкубирование обработанной пробы с ингибитором свертывания в количестве, достаточном для блокирования свертывания, при этом ингибитор является, например, гепарином или гирудином;

в) осуществление контакта полученной пробы, содержащей мономеры растворимого фибрина с активатором плазминогена с высокой аффинностью к фибрину (PA-sFb), в частности t-PA, в условиях, обеспечивающих разрушение растворимого фибрина, содержащегося в пробе, с образованием продуктов его разрушения, в частности D-димеров, без разрушения фибриногена.

15. Способ диагностики по пп.1-6, 8 или 10, отличающийся тем, что граничное значение нормы содержания D-димеров составляет 500 нг/мл, а граничное значение нормы содержания РРФ составляет 300 нг/мл, при этом указанный способ диагностики исключает наличие тромбоэмболического заболевания, если результаты измерений указанных параметров в анализируемой пробе меньше, чем два соответствующих граничных значения.

16. Набор для диагностики тромбоэмболического заболевания способом по любому из пп.1-11, содержащий:

моноклональные антитела к D-димерам;

активатор плазминогена с высокой специфичностью к фибрину (PA-sFb);

положительную контрольную пробу растворимого фибрина и, в соответствующих случаях, отрицательную контрольную пробу.

17. Набор по п.16, отличающийся тем, что содержит также ингибитор плазмина.