RU1772911C - Раствор для консервирования костного мозга млекопитающих при низкой температуре - Google Patents
Раствор для консервирования костного мозга млекопитающих при низкой температуре Download PDFInfo
- Publication number
- RU1772911C RU1772911C SU4829850A RU1772911C RU 1772911 C RU1772911 C RU 1772911C SU 4829850 A SU4829850 A SU 4829850A RU 1772911 C RU1772911 C RU 1772911C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bone marrow
- solution
- preservation
- mass
- percent
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к консервированию и трансплантации миелокарноцитов. Целью изобретения является повышение жизнеспособности костного мозга. Компоненты содержатся в растворе в следующих количествах, мас. % : гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 20,0 - 40,0; 1,2-пропандиол 1,0 - 2,0; этилендиаминтетраацетат натрия 0,05 - 0,15; лимонная кислота 0,5 - 1,5; бидистиллированная вода - остальное. Раствор представляет собой прозрачную, без запаха жидкость желтоватого цвета, имеющую рН 7,0 - 7,38, легко смешивается с нативным и стабилизированным костным мозгом, предотвращает конгломерацию костно-мозговых клеток. 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к консервированию миелокариоцитов.
Известны растворы, предложенные для низкотемпературного (-78 -90оС) консервирования костного мозга и содержащие криопротекторы низкомолекулярный поливинилпирролидон (ПВП), глицерин или диметилсульфоксид (ДМСО) (Пушкарь Н. С. Белоус А.М. Куцаева А.А. Шенберг М.Г. Лобынцева Г.С. Луговой В.И. Актуальные проблемы криоконсервирования костного мозга. Респ. межвед.сборник АН УССР "Криобиология и криомедицина", вып. 2, 1976, с.3-16; Лаврик С.С. "Консервирование костного мозга". Киев. Здоровье, 1975; Лаврик С.С. Афанасьева Е.Ю. Когут Г.И. Среда для консервирования лейкоцитов при низких температурах. А.с. N 254016, от 07.10.69).
На основании сведений, содержащихся в указанных публикациях, эти растворы при замораживании костного мозга обладают достаточно высоким хладоограждающим действием на костно-мозговые клетки (позволяют сохранить репродуктивную колониеобразующую способность стволовых клеток в среднем 37 (от 20-25 до 40-63%). В то же время применение глицерина и ДМСО в оптимальных для замораживания кроветворных клеток концентрациях (соответственно 15 и 10%) ввиду их токсичности для миелокариоцитов и макроорганизма требует отмывания криопротектора от костного мозга перед трансплантацией, что ведет к дополнительной потере гемопоэтических клеток и понижению их жизнеспособности. ПВП обладает не только менее выраженным защитным эффектом, чем глицерин и ДМСО, но и вызывает латентные повреждения значительного количества (до 20%) клеток в размороженной костно-мозговой взвеси.
Известен раствор для низкотемпературного консервирования костного мозга, содержащий этилендиаминтетраацетат натрия, натрий лимоннокислый трехзамещенный цитрат, глицерин, гемодез (Шишкина И.Д. Применение комбинированного криофилактического раствора для замораживания клеток костного мозга. Пробл. гем. и перел. крови, 1975). Однако этот раствор обеспечивает сохранение жизнеспособности менее 50% стволовых клеток костного мозга.
Цель изобретения повышение жизнеспособности за счет сохранения стволовых кроветворных клеток при замораживании до -80о -90оС.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
П р и м е р 1. Раствор готовят следующим образом. Взвешивают требуемые навески гексаметиленбистетраоксиэтил- мочевины, 1,2-пропандиола, этилендиаминтетраацетата натрия; лимонной кислоты и растворяют их в бидистиллированной воде, подогретой до +60оС. Полученные растворы сливают и доводят до окончательного объема бидистиллированной водой.
Приготовленный раствор фильтруют и разливают по 100 мл в стандартные бутылки вместимостью 250 мл по ГОСТ 10782-77. Бутылки укупоривают пробкой из резиновой смеси марки 25-П по ТУ 38-006269-80 и завальцовывают алюминиевыми колпачками по ОСТ 64-7-85-79. Затем бутылки завязывают в двойные бязевые мешки. Стерилизуют в автоклаве при 1,2 атм (122,7оС) в течение 30 мин. После стерилизации раствор хранят при -2-4оС в двойных бязевых мешках в течение 6 мес. (срок наблюдения) или при комнатной температуре (15-20)оС в течение 2 мес. (срок наблюдения).
Готовый раствор прозрачен, желтоватого цвета, без запаха, рН 7,0-7,38. Он хорошо смешивается с взвесью костно-мозговых клеток, предотвращает их конгломерацию, обеспечивает морфологическую сохранность ядросодержащих клеток при положительной температуре.
Раствор обладает выраженным хладозащитным действием при замораживании костного мозга до -90оС по трехэтапной программе: 1) охлаждение со скоростью 1о/мин до 7оС, 2) 10o/мин до -40оС, 3) 20о/мин до -90оС. Размораживают костно-мозговую взвесь в водяной ванне при температуре +39оС в течение 1 мин (до температуры биопродукта в контейнере +2оС). После оттаивания сохраняется достаточно высокий процент стволовых кроветворных клеток от 55,7-69,2 до 86,3% в среднем 80% Эти данные получены в исследованиях, проведенных в лаборатории консервирования крови и тканей Кировского НИИ гематологии и переливания крови на 400 мышах инбредной линии (СВА х С57В16) ˙F1 с клонированием стволовых гемопоэтических клеток в селезенках смертельно облученных животных (доза облучения 900 рад).
Результаты консервирования костного мозга с различными вариантами предложенного ограждающего раствора представлены в таблице.
Раствор для низкотемпературного (-80 -90оС) консервирования костного мозга, предназначенного для клинического применения, позволяет сохранить после замораживания-оттаивания в среднем 92% эозинорезистентных и 80% стволовых кроветворных клеток. Раствор нетоксичен, не требует отмывания криофилактиков из размороженной костно-мозговой взвеси, апирогенен. Средняя летальная доза (ЛД50) его для мышей составляет 15,5 г/кг массы животного.
Предлагаемый раствор не вызывает латентные повреждения костно-мозговых клеток, а также обеспечивает больший процент, чем прототип, сохраненных стволовых гемопоэтических клеток и не требует отмывания криопротекторов после размораживания биообъекта.
Указанные свойства предложенного ограждающего раствора создают удобства и делают раствор эффективным в практической работе по созданию банков замороженного костного мозга для клинических целей.
Claims (1)
- РАСТВОР ДЛЯ КОНСЕРВИРОВАНИЯ КОСТНОГО МОЗГА МЛЕКОПИТАЮЩИХ ПРИ НИЗКОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ, содержащий этилендиаминтетраустат натрий, антикоагулянт и бидистиллированную воду, отличающийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности за счет сохранения стволовых кроветворных клеток, он дополнительно содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину и 1,2 - пропандиол, в качестве антикоагулянта лимонную кислоту при следующем соотношении компонентов:
Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 20,0 40,0
1,2 Пропандиол 1,0 2,0
Этилендиаминтетраацетат натрия 0,05 0,15
Лимонная кислота 0,5 -1,5
Бидистиллированная вода Остальное.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4829850 RU1772911C (ru) | 1990-05-29 | 1990-05-29 | Раствор для консервирования костного мозга млекопитающих при низкой температуре |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4829850 RU1772911C (ru) | 1990-05-29 | 1990-05-29 | Раствор для консервирования костного мозга млекопитающих при низкой температуре |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU1772911C true RU1772911C (ru) | 1995-04-10 |
Family
ID=30441809
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU4829850 RU1772911C (ru) | 1990-05-29 | 1990-05-29 | Раствор для консервирования костного мозга млекопитающих при низкой температуре |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU1772911C (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2475760C2 (ru) * | 2006-05-05 | 2013-02-20 | Диагностика Стаго | Диагностика тромбоэмболических заболеваний вен путем определения содержания d-димеров и растворимого фибрина |
| CN109201035A (zh) * | 2018-07-18 | 2019-01-15 | 周口师范学院 | Bi24Ga2O39光催化剂的制备方法及应用 |
| RU2711152C1 (ru) * | 2019-01-17 | 2020-01-15 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80 oC с раствором Гекмолит |
-
1990
- 1990-05-29 RU SU4829850 patent/RU1772911C/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Проблемы гематологии, 1975, N 9, с.29-31. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2475760C2 (ru) * | 2006-05-05 | 2013-02-20 | Диагностика Стаго | Диагностика тромбоэмболических заболеваний вен путем определения содержания d-димеров и растворимого фибрина |
| CN109201035A (zh) * | 2018-07-18 | 2019-01-15 | 周口师范学院 | Bi24Ga2O39光催化剂的制备方法及应用 |
| RU2711152C1 (ru) * | 2019-01-17 | 2020-01-15 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80 oC с раствором Гекмолит |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4980277A (en) | Cryoprotectant solution and method | |
| Vishwanath et al. | Storage of bovine semen in liquid and frozen state | |
| US4965185A (en) | Method for low-temperature preservation of embryos | |
| US5071741A (en) | Cryoprotective agent and its use in cryopreservation of cellular matter | |
| EP1274302B1 (en) | Cyclohexanediol cryoprotectant compounds | |
| CA2112952A1 (en) | Methods, apparatus and perfusion-solutions for preservation of explanted organs | |
| US5827511A (en) | Preservative and embalming fluid | |
| JP5773347B2 (ja) | 血液細胞の凍結保存剤 | |
| JPS6242620B2 (ru) | ||
| JP3694730B2 (ja) | 組織の冷却保存液 | |
| Yang et al. | Effects of different cryoprotectants and freezing methods on post-thaw boar semen quality | |
| WO2001095717A2 (en) | Cryopreservation method using cryoprotective composition of propanediol and a vehicle solution | |
| WO1992008347A1 (en) | Cryoprotective agent | |
| RU1772911C (ru) | Раствор для консервирования костного мозга млекопитающих при низкой температуре | |
| US8865397B2 (en) | Method for cooling an organ with a transparent cooling gel | |
| JPH09504513A (ja) | 臓器および組織用リンス液 | |
| Stănescu et al. | Freezing of dog’s sperm: a review | |
| Chenier et al. | Evaluation of cryoprotective agents for use in the cryopreservation of equine spermatozoa | |
| KR101546487B1 (ko) | 저밀도 지질단백질과 항산화제를 포함하는 정자 동결보존용 조성물 및 이의 용도 | |
| EP0551359B1 (en) | Chemical compositions | |
| Denysova et al. | Cryopreservation of canine erythrocytes using dimethyl sulfoxide, polyethylene glycol and sucrose | |
| KR101821545B1 (ko) | 앙콜 소 정자 동결보존용 조성물 및 이의 용도 | |
| BE1014512A6 (nl) | Verdunner voor de bewaring van vers en diepgevroren sperma. | |
| Sergievich et al. | The effect of cryopreservation of bone marrow cells from donor mice that carry the egfp gene, on the lifespan of mice after syngeneic transplantation | |
| Rapatz et al. | Effect of concentration of ethylene glycol on the recovery of frog hearts after freezing to low temperatures |