RU2005124996A - Способ диагностики сердечно-сосудистых заболеваний и диагностический набор для его осуществления - Google Patents

Claims (3)

1. Способ диагностики мультифакториальных заболеваний, включающий выделение ДНК, проведение полимеразной цепной реакции для определения мутаций и/или полиморфизма гена, состоящей из первичной денатурации, цикла из денатурации, отжига и синтеза и заключительного синтеза, проведение гидролиза продуктов полимеразной цепной реакции эндонуклеазами рестрикции Msp I и Hinf I и электрофорез в полиакриламидном геле, отличающийся тем, что проводят мультиплексную полимеразную цепную реакцию с использованием n пар праймеров, где n≥4, и диагностического набора, при этом первичную денатурацию проводят в течение 7 мин при температуре 94°С, далее проводят цикл от 28 до 32 раз, включающий денатурацию при 94-96°С в течение от 1 мин до 1 мин 10 с, отжиг при температуре от 58 до 60°С в течение от 1 мин до 1 мин 10 с, синтез при температуре 72°С в течение от 1 мин до 1 мин 20 с, заключительный синтез в течение 5 мин при температуре 72°С, а электрофорез продуктов гидролиза проводят в 7,5% полиакриламидном геле до выхода маркера из геля.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве маркера используют крезол и электрофорез проводят до выхода маркера из лунок геля на расстояние 3-7 см.

3. Диагностический набор, включающий компоненты 67 мМ трис-HCl, рН 8,8 при 25°С; 16,6 мМ (NH₄)₂SO₄; 6,7 мМ MgCl₂; 6,7 мкм ЭДТА; 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 170 мкг БСА, смесь четырех основных dNTP в концентрации 1,0 мМ каждого и термостабильную ДНК-полимеразу 0,2 ед./мкл, отличающийся тем, что все компоненты для проведения мультиплексной полимеразной цепной реакции смешаны в одной объеме, все компоненты для проведения энзиматической рестрикции смешаны в другом объеме, а в набор дополнительно включены крезол, набор из ДНК для проведения положительного контроля полимеразной цепной реакции и энзиматической рестрикции, вода ампулированная и олигопраймеры

5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'

5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'

5'-AGGCCCTATGGTAGTGCCTT-3'

5'-TCTCTTAGTGCTGTGGTCAC-3'

5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3'

5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3'

5'-AGGAGGTAGAGAGTCGCCAT-3'

5'-AAAGAGTCCCAGCCCTACCT-3'.