RU2304775C2 - Способ диагностики сердечно-сосудистых заболеваний и диагностический набор для его осуществления - Google Patents
Способ диагностики сердечно-сосудистых заболеваний и диагностический набор для его осуществления Download PDFInfo
- Publication number
- RU2304775C2 RU2304775C2 RU2005124996/15A RU2005124996A RU2304775C2 RU 2304775 C2 RU2304775 C2 RU 2304775C2 RU 2005124996/15 A RU2005124996/15 A RU 2005124996/15A RU 2005124996 A RU2005124996 A RU 2005124996A RU 2304775 C2 RU2304775 C2 RU 2304775C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- chain reaction
- polymerase chain
- carried out
- kit
- diagnostic kit
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к молекулярно-генетическим исследованиям, например к области диагностики сердечно-сосудистых заболеваний. В основу изобретения положена задача создания диагностического набора (ДН) для проведения медико-генетического анализа предрасположенности к мультифакториальным, в том числе сердечно-сосудистым заболеваниям, универсального вследствие смешивания компонент и добавления в набор широкой группы олигопраймеров, и разработка способа диагностики, который вследствие оптимизации условий полимеразной цепной реакции и анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) характеризуется: простотой и удобством в применении; высокой скоростью анализа: 2-3 дня (за счет стандартизации протокола анализа); снижением затрат на диагностические операции. Данное решение позволяет в короткие сроки проводить диагностику многофакторных заболеваний в короткие сроки, а также возможность применения диагностического набора как в специализированных клиниках, так и в лабораториях широкого спектра. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к молекулярно-генетическим исследованиям, например к области диагностики сердечно-сосудистых заболеваний.
Одним из наиболее перспективных и успешно развивающихся направлений мировой и отечественной науки являются молекулярно-биологические технологии - основа для проведения медико-генетического анализа. Эти технологии представляют собой обширную и очень разнообразную группу методов, предназначенных для исследования и анализа генома организмов (от бактерии до человека), выявления и идентификации вариаций в структуре исследуемого участка нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) вплоть до расшифровки и установления первичной последовательности его оснований. Основой молекулярно-биологических методов диагностики являются различной степени сложности технологические манипуляции с нуклеиновыми кислотами, предварительно экстрагированными из клеток и тканей организма.
Большое значение в современной медицине имеет персонализированный подход к человеку. Он заключается, прежде всего, в выборе вполне определенных диагностических маркеров, необходимых для анализа конкретной патологии. Кроме того, не меньшее значение имеет совершенствование и упрощение методов анализа биологического материала, что выражается в создании целого ряда диагностических наборов, основанных на современных технологиях и направленных на упрощение работы по диагностике заболеваний без потери качества и точности полученного результата.
Известен способ исследования генетических маркеров, включающий выделение ДНК, постановку полимеразной цепной реакции (ПЦР), проведение энзиматической рестрикции и электрофореза в полиакриламидном геле (И.Е.Зазерская и др. Анализ ассоциации генов VDR3 и COLIA1 с постменуальным остеопорозом, Остеопороз и остеопатии, 2002, №2, с.3).
Недостатком этого способа является то, что анализ в этом случае осуществляется в несколько этапов, что усложняет и удорожает диагностику.
Известен способ диагностики мультифакториальных заболеваний, включающий выделение ДНК, проведение ПЦР для определения мутаций и/или полиморфизма гена, состоящей из первичной денатурации, цикла из денатурации, отжига и синтеза, заключительного синтеза, а также соответствующий диагностический набор, включающий 67 мМ трис-HCl, рН 8.8 при 25°С; 16.6 мМ (NH4)2SO4; 6.7 мМ MgCl2; 6.7 мкм ЭДТА; 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 170 мкг БСА, смесь четырех основных dNTP в концентрации 1.0 мМ каждого и термостабильную ДНК-полимеразу 0,2 ед/мкл (Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, USA, 1989, с.5.3-5.31, с.6.36-6.45, 9.14-9.23, 14.14-14.19).
Недостатком этого способа и набора является то, что с их помощью невозможно осуществить мультиплексный анализ сразу нескольких генов, что приводит к замедлению процесса анализа, увеличению трудозатрат при проведении анализа, усложнению протокола диагностики заболеваний.
В основу изобретения положена задача создания диагностического набора (ДН) для проведения медико-генетического анализа предрасположенности к мультифакториальным заболеваниям, универсального вследствие смешивания компонент и добавления в набор широкой группы олигопраймеров; разработка способа диагностики, который вследствие оптимизации условий полимеразной цепной реакции и анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) характеризуется простотой и удобством в применении, высокой скоростью анализа: 2-3 дня (за счет стандартизации протокола анализа), снижением затрат на диагностические операции, в результате чего создается методика проведения анализа, позволяющая использовать вышеуказанный диагностический набор как в специализированных клиниках, так и в лабораториях широкого спектра.
Достижение вышеупомянутой технической задачи обеспечивается тем, что в диагностическом наборе для определения предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям, включающем компоненты для проведения мультиплексной полимеразной цепной реакции и компоненты для проведения энзиматической рестрикции, компоненты для проведения мультиплексной полимеразной цепной реакции (67 мМ трис-HCl, рН 8.8 при 25°С; 16.6 мМ (NH4)2SO4; 6.7 мМ MgCl2; 6.7 мкм ЭДТА; 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 170 мкг БСА, смесь четырех основных dNTP в концентрации 1.0 мМ каждого и термостабильная ДНК-полимераза 0,2 ед/мкл) смешаны в одном объеме, а компоненты для проведения энзиматической рестрикции (эндонуклеазы Msp I и Hinf I) смешаны в другом объеме, а в набор дополнительно включены крезол, набор из ДНК для проведения положительного контроля полимеразной цепной реакции и энзиматической рестрикции, вода ампулированная и олигопраймеры
5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'
5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'
5'-AGGCCCTATGGTAGTGCCTT-3'
5'-TCTCTTAGTGCTGTGGTCAC-3'
5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3'
5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3'
5'-AGGAGGTAGAGAGTCGCCAT-3'
5'-AAAGAGTCCCAGCCCTACCT-3'.
В способе диагностики предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям, включающем выделение ДНК, проведение полимеразной цепной реакции для определения мутаций и/или полиморфизма гена, состоящей из первичной денатурации, цикла из денатурации, отжига и синтеза, и заключительного синтеза, проведение гидролиза продуктов полимеразной цепной реакции эндонуклеазами рестрикции Msp I и Hinf I, и электрофорез в полиакриламидном геле, проводят мультиплексную полимеразную цепную реакцию с использованием n пар праймеров, где n≥4, и диагностического набора по п.1, при этом первичную денатурацию проводят в течение 7 минут при температуре 94°С, далее проводят цикл от 28 до 32 раз, включающий денатурацию при 94-96°С в течение от 1 минуты до 1 минуты 10 секунд, отжиг при температуре от 58 до 60°С в течение от 1 минуты до 1 минуты 10 секунд, синтез при температуре 72°С в течение от 1 минуты до 1 минуты 20 секунд, заключительный синтез в течение 5 минут при температуре 72°С, гидролиз продуктов полимеразной цепной реакции проводят смесью эндонуклеаз рестрикции, а электрофорез продуктов гидролиза проводят в 7,5% полиакриламидном геле до выхода маркера из геля, а затем определяют полиморфизм генов АСЕ, eNOS, MTHFR, GPIIIa. В качестве маркера используют крезол, а электрофорез проводят до выхода маркера из лунок геля на расстояние 3-7 см.
Наличие смеси компонент, дополнительное введение крезола, набора из ДНК для проведения положительного контроля полимеразной цепной реакции и энзиматической рестрикции, воды ампулированной и олигопраймеров в диагностический набор позволяет значительно ускорить процесс анализа, удешевить процедуру диагностики, сделать ее более доступной независимо от условий проведения.
Предложенные условия проведения анализа позволяют с помощью диагностического набора быстро, дешево и точно осуществить диагностику предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям.
Состав набора можно представить в виде следующей схемы, которая показана на чертеже. В набор входят следующие компоненты:
1 - упаковочная коробка для набора,
2 - комплект №1 для проведения ПЦР (смесь для
мультиплексной ПЦР с крезолом - 100 шт.(РС))-
состав и количество веществ в одном комплекте смеси:
67 мМ трис-HCl, рН 8.8 при 25°С; 16.6 мМ (NH4)2SO4; 6.7 мМ MgCl2; 6.7 мкм ЭДТА; 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 170 мкг БСА, смесь четырех основных dNTP в концентрации 1.0 мМ каждого и олигопраймеры 0.001 оптической единицы каждого
TaqAHK полимераза -концентрация 0,2 ед/мкл (П)),
объем смеси для одной реакции - от 10 до 25 мкл,
3 - комплект №2 для проведения энзиматической рестрикции (буфер для эндонуклеазы рестрикции (БР) - это смесь 1:1 однократных буферов О и G (фирмы производителя эндонуклеаз - «Сибэнзим»), смесь(и) эндонуклеаз рестрикции (Р)) - это смесь эндонуклеаз рестрикции Hinf l и Msp l в конечных концентрациях 0,5 ед/мкл,
объем смеси для одной реакции - 5 мкл,
4 - положительный контроль для ПЦР и энзиматической рестрикции (К) - это образец(ы) ДНК с известными генотипами, например тетрагетерозигота
По гену АСЕ - I/D
По гену NOS3 - 4/5
По гену MTHFR - С/T
Погену Gpllla - А1/А2
5 - вода ампулированная (В).
В заявляемом изобретении предлагается новый модифицированный вариант идентификации аллелей генов путем использования набора олигопраймеров и, что особенно важно, температурного режима, позволяющих проводить мультиплексную полимеразную цепную реакцию.
Характеристика изученных полиморфных вариантов генов и последовательности олигопраймеров приведены в таблице 1.
| Таблица 1. Список олигонуклеотидных праймеров, использованных для проведения ПЦР. |
||
| Ген, локализация | Полиморфизм | Структура олигопраймеров |
| АСЕ | del/ins Alu-повтора 287 п.н. в 16 интроне | 5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3' 5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3' |
| eNOS | 4 и 5 повторов по 27 п.н. в 5 интроне | 5'-AGGCCCTATGGTAGTGCCTT-3' 5'-TCTCTTAGTGCTGTGGTCAC-3' |
| MTHFR | 677 С/T | 5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3' 5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3' |
| GPllla | А1/А2 | 5'-AGGAGGTAGAGAGTCGCCAT-3' 5'-AAAGAGTCCCAGCCCTACCT-3' |
Способ состоит их VI этапов и осуществляется следующим образом. Объясним это на примере осуществления способа с использованием заявляемого диагностического набора для четырех пар праймеров.
1) На первом этапе выделяют ДНК пациента по стандартному протоколу (Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, USA, 1989, с.9.14-9.23).
2) Далее проводят мультиплексную полимеразную цепную реакцию с использованием n пар праймеров, где n≥4, и диагностического набора (добавляют комплект №1 и ампулированную воду к образцам: анализируемого ДНК и положительного контроля для ПЦР и энзиматической рестрикции), при этом первичную денатурацию проводят в течение 7 минут при температуре 94°С, далее проводят цикл от 28 до 32 раз, включающий денатурацию при 94-96°С в течение от 1 минуты до 1 минуты 10 секунд, отжиг при температуре от 58 до 60°С в течение от 1 минуты до 1 минуты 10 секунд, синтез при температуре 72°С в течение от 1 минуты до 1 минуты 20 секунд, заключительный синтез в течение 5 минут при температуре 72°С (таблица 2). Для амплификации использовали программируемый термоциклер фирмы «ДНК-технология» (Москва).
| Таблица 2 Условия проведения ПЦР |
||||
| Денатурация | 28-32 цикла | Синтез | ||
| Денатурация | Отжиг | Синтез | ||
| 94°С - 7 мин | 94 - 96°С 1 мин - 1 мин 10 сек |
58 - 60°С 1 мин - 1 мин 10 сек |
72°С 1 мин - 1 мин 20 сек | 72°С - 5 мин |
3) После окончания ПЦР специфичность амплификации и количество амплификата (анализируемого образца и положительного контроля) проверяли методом электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) по стандартному протоколу (Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, USA, 1989, с.6.36-6.45).
4) Далее осуществляли гидролиз амплифицированных фрагментов ДНК (анализируемого образца и положительного контроля) эндонуклеазами рестрикции Msp I и Hinf I по стандартному протоколу (Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, USA, 1989, с.5.28-5.32), используя комплект №2 и ампулированную воду.
5) Продукты гидролиза (анализируемого образца и положительного контроля) разделяли в 7,5% неденатурирующем полиакриламидном геле, приготовленном на трис-боратном буфере (ТБЕ) в аппарате для вертикального электрофореза с длиной стекла 20 см. Для получения 30% раствора акриламида смешивали 29 г акриламида с 1 г N,N-метилен-бис-акриламида и растворяли смесь в 100 мл дистиллированной воды. 10-кратный раствор ТБЕ готовили, растворяя 54 г триса, 27,5 г борной кислоты и 20 мл 0,5М ЭДТА рН 8,0 в 0,5 л дистиллированной воды. Для приготовления 20 мл 7,5% полиакриламидного геля смешивали 5 мл 30% акриламида, 2 мл 10-кратного ТБЕ, 13 мл дистиллированной воды, 200 мкл 10% раствора персульфата аммония и 25 мкл тетраметилэтилендиамина. Перед заливкой раствор тщательно перемешивали. Пробы (образцы) наносили в гель в объеме 5 мкл каждого продукта гидролиза в свою лунку. Электрофорез проводили в 1-кратном ТБЕ при напряжении электрического поля 120 В, пока образцы не входили в гель и не проходили около 1 см от лунок. После этого напряжение увеличивали до 180-200 В. Останавливали электрофоретическое разделение, когда до выхода крезола из геля оставалось 3-7 см.
6) Гель с продуктами гидролиза (анализируемого образца и положительного контроля) окрашивали водным раствором бромистого этидия (0,5 мкг/мл), просматривали в ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе и фотографировали на системе видео-гель-документации. Сравнивали наличие «полос» анализируемого образца с таковыми у положительного контроля. Определяли генотип пациента. Выдавали заключение по результатам анализа.
Например, нами с помощью диагностического набора получены следующие результаты:
По гену АСЕ - D/D
По гену NOS3 - 4/4
По гену MTHFR - С/С
По гену Gpllla - А1/А1
На основании теста у пациента выявлен риск группы с-с заболеваний, связанных с регуляцией давления - ИБС, инфаркт миокарда, эссенциальная гипертензия (гипертоническая болезнь), атеросклероз.
Claims (3)
1. Диагностический набор для определения предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям, включающий компоненты для проведения мультиплексной полимеразной цепной реакции и компоненты для проведения энзиматической рестрикции, отличающийся тем, что компоненты для проведения полимеразной цепной реакции: 67 мМ трис-HCl, рН 8,8 при 25°С; 16.6 мМ (NH4)2SO4, 6.7 мМ MgCl2, 6.7 мкм ЭДТА; 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 170 мкг БСА, смесь четырех основных dNTP в концентрации 1.0 мМ каждого и термостабильная ДНК-полимераза в концентрации 0,2 ед/мкл смешаны в одном объеме, а компоненты для проведения энзиматической рестрикции - эндонуклеазы Msp I и Hinf I смешаны в другом объеме, а набор дополнительно включает крезол, набор из ДНК для проведения положительного контроля полимеразной цепной реакции и энзиматической рестрикции, вода ампулированная и олигопраймеры
5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'
5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'
5'-AGGCCCTATGGTAGTGCCTT-3'
5'-TCTCTTAGTGCTGTGGTCAC-3'
5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3'
5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3'
5'-AGGAGGTAGAGAGTCGCCAT-3'
5'-AAAGAGTCCCAGCCCTACCT-3'.
2. Способ определения предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям, включающий выделение ДНК, проведение полимеразной цепной реакции для определения мутаций и/или полиморфизма генов, состоящей из первичной денатурации, цикла из денатурации, отжига и синтеза и заключительного синтеза, проведение гидролиза продуктов полимеразной цепной реакции эндонуклеазами рестрикции Msp I и Hinf I, и электрофорез в полиакриламидном геле, отличающийся тем, что проводят полимеразную цепную реакцию с использованием диагностического набора по п.1, при этом первичную денатурацию проводят в течение 7 мин при температуре 94°С, далее проводят цикл от 28 до 32 раз, включающий денатурацию при 94-96°С в течение от 1 мин до 1 мин 10 с, отжиг при температуре от 58 до 60°С в течение от 1 мин до 1 мин 10 с, синтез при температуре 72°С в течение от 1 мин до 1 мин 20 с, заключительный синтез в течение 5 мин при температуре 72°С, гидролиз продуктов полимеразной цепной реакции проводят смесью эндонуклеаз рестрикции, а электрофорез продуктов гидролиза проводят в 7,5% полиакриламидном геле до выхода маркера из геля, а затем определяют полиморфизм генов АСЕ, eNOS, MTHFR, GPIIIa.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве маркера используют крезол, и электрофорез проводят до выхода маркера из лунок геля на расстояние 3-7 см.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005124996/15A RU2304775C2 (ru) | 2005-07-27 | 2005-07-27 | Способ диагностики сердечно-сосудистых заболеваний и диагностический набор для его осуществления |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005124996/15A RU2304775C2 (ru) | 2005-07-27 | 2005-07-27 | Способ диагностики сердечно-сосудистых заболеваний и диагностический набор для его осуществления |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005124996A RU2005124996A (ru) | 2007-02-10 |
| RU2304775C2 true RU2304775C2 (ru) | 2007-08-20 |
Family
ID=37862346
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005124996/15A RU2304775C2 (ru) | 2005-07-27 | 2005-07-27 | Способ диагностики сердечно-сосудистых заболеваний и диагностический набор для его осуществления |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2304775C2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD707Z (ru) * | 2013-01-18 | 2014-07-31 | Институт Зоологии Академии Наук Молдовы | Метод идентификации полиморфных последовательностей 4а/4б гена эндотелиальной синтетазы оксида азота |
| RU2641568C1 (ru) * | 2016-12-28 | 2018-01-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ кардиологии" Минздрава России) | Способ определения генетической предрасположенности к атеросклерозу, ишемической болезни сердца и инфаркту миокарда |
-
2005
- 2005-07-27 RU RU2005124996/15A patent/RU2304775C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| LECLERC D. et al. Molecular cloning, expressoin and phisical mapping of the human methionine synthase reductase gene. Gene, 1999, Nov. 15, 240(1), pp.75-88. MUSTAFINA O.E. et al. Endothelial nitric Oxide synthase gene minisatellite polymorphism: Study in populations in Volga-Ural region and analysis of associations with myocardial infarct and essential hypertension. Genetica, 2001, May, 37(5), p.668-674. * |
| SAMBRUK J. et al. Molecular cloning a Laboratory manual., Cold Spring Harbor Laboratory Press, USA, 1989, с.5.3-5.31, 6.36-6.45, 9.14-9.23, 14.14-14.19. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD707Z (ru) * | 2013-01-18 | 2014-07-31 | Институт Зоологии Академии Наук Молдовы | Метод идентификации полиморфных последовательностей 4а/4б гена эндотелиальной синтетазы оксида азота |
| RU2641568C1 (ru) * | 2016-12-28 | 2018-01-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ кардиологии" Минздрава России) | Способ определения генетической предрасположенности к атеросклерозу, ишемической болезни сердца и инфаркту миокарда |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2005124996A (ru) | 2007-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2736351C2 (ru) | Способы дискретной амплификации полного генома | |
| CN107604078B (zh) | 与绵羊羊毛纤维直径性状相关的分子标记及其特异性引物对和应用 | |
| US10253376B2 (en) | DNA-based detection and identification of eight mastitis pathogens | |
| WO2016066070A1 (zh) | 具有增强鉴别能力的y染色体str基因座荧光标记复合扩增试剂盒及其应用 | |
| CN104046700A (zh) | 一种快速鉴定驴皮、马皮和骡子皮的检测试剂盒 | |
| CN113981048B (zh) | 一种基于二代测序技术检测微单倍型基因座的引物组合物、试剂盒和方法及其应用 | |
| WO2016023397A1 (zh) | 一种淋球菌检测用引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用 | |
| CN106191311B (zh) | 一种快速检测豚鼠LCMV、SV、PVM、Reo-3病毒的多重液相基因芯片方法及试剂 | |
| RU2304775C2 (ru) | Способ диагностики сердечно-сосудистых заболеваний и диагностический набор для его осуществления | |
| RU2296328C1 (ru) | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям и диагностический набор для его осуществления | |
| KR100785011B1 (ko) | 쌍이온 화합물을 이용한 핵산 혼성화 특이성을 증가시키는방법 | |
| Schmalenberger et al. | Profiling the diversity of microbial communities with single-strand conformation polymorphism (SSCP) | |
| CN107988334B (zh) | 口腔拭子直接pcr进行snp分型的方法 | |
| KR102219895B1 (ko) | 쯔쯔가무시병 진단용 조성물 및 이를 포함하는 키트 | |
| US7049070B2 (en) | Materials and methods for detection and characterization of nucleic acid sequence variability | |
| Graham et al. | DNA: an overview | |
| CN107557456B (zh) | 解脲脲原体的lamp检测引物组及试剂盒 | |
| KR20120086028A (ko) | 웨스트나일바이러스와 일본뇌염바이러스의 감별 진단 | |
| CN107630095B (zh) | 与绵羊羊毛弯曲数性状相关的分子标记及其特异性引物对和应用 | |
| RU2528742C2 (ru) | Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления генотипов для идентификации личности с помощью системы микросателлитных днк-маркеров y-хромосомы | |
| CN114164296B (zh) | 一种用于检测寡雄腐霉菌的引物探针组合物、试剂盒及应用和检测方法 | |
| US20050048524A1 (en) | Molecular biological identification techniques for microorganisms | |
| CN111424102B (zh) | 一种化妆品特定菌多重pcr快速检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN109852704B (zh) | 一种同时检测32个y染色体基因座的复合扩增试剂盒 | |
| CN115058493B (zh) | 一种用于多重核酸检测的dna探针、crispr-反向点杂交核酸检测系统及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20090219 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090728 |