RS65484B1 - Cd19 specifični himerni antigenski receptor i njegove primene - Google Patents

Cd19 specifični himerni antigenski receptor i njegove primene

Info

Publication number
RS65484B1
RS65484B1 RS20240486A RSP20240486A RS65484B1 RS 65484 B1 RS65484 B1 RS 65484B1 RS 20240486 A RS20240486 A RS 20240486A RS P20240486 A RSP20240486 A RS P20240486A RS 65484 B1 RS65484 B1 RS 65484B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
cell
cells
seq
domain
use according
Prior art date
Application number
RS20240486A
Other languages
English (en)
Inventor
Cècile Schiffer-Mannioui
Roman Galetto
Julianne Smith
Andrew Scharenberg
Original Assignee
Cellectis
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=51897790&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS65484(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from PCT/US2013/040766 external-priority patent/WO2013176916A1/en
Application filed by Cellectis filed Critical Cellectis
Publication of RS65484B1 publication Critical patent/RS65484B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
    • A61K40/31—Chimeric antigen receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/421—Immunoglobulin superfamily
    • A61K40/4211—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C12N5/0637—Immunosuppressive T lymphocytes, e.g. regulatory T cells or Treg
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases [RNase]; Deoxyribonucleases [DNase]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/39—Steroid hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/51—B7 molecules, e.g. CD80, CD86, CD28 (ligand), CD152 (ligand)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/515—CD3, T-cell receptor complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/599—Cell markers; Cell surface determinants with CD designations not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/99—Coculture with; Conditioned medium produced by genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)

Description

Opis
Oblast pronalaska
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na kompoziciju za upotrebu u kombinovanoj terapiji koja sadrži a) projektovanu T-ćeliju koja eksprimira CD19-specifičan himerni antigenski receptor koji sadrži najmanje jedan ekstracelularni i domen vezivanja liganda specifičan za CD19, transmembranski domen i najmanje jedan intracelularni signalizacioni domen; pri čemu pomenuti ekstracelularni domen sadrži jednolančani FV fragment dobijen iz monoklonskog antitela 4G7, specifičnog za CD19, pomenuti jednolančani FV fragment sadrži varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 imunoglobulina gama 1 teškog lanca SEQ ID NO: 3 i varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 imunoglobulina kapa lakog lanca SEQ ID NO: 4 ili SEQ ID NO: 5; i b) antitelo alemtuzumab. Predmetni pronalazak je definisan u priloženim patentnim zahtevima.
Pozadina pronalaska
[0002] Adoptivna imunoterapija, koja obuhvata prenos autolognih antigen-specifičnih T ćelija koje su stvorene ex vivo, predstavlja perspektivnu strategiju za lečenje virusnih infekcija i kancera. T ćelije koje se koriste za adoptivnu imunoterapiju mogu biti dobijene bilo ekspanzijom antigen-specifičnih T ćelije ili preusmeravanjem T ćelija pomoću genetskog inženjeringa (Park, Rosenberg i dr. 2011). Transfer T ćelija koje su specifične za virusni antigen je dobro poznata procedura koja se koristi za lečenje virusnih infekcija povezanih sa transplantatom i retkih maligniteta koji su povezani sa virusima. Slično tome, pokazalo se da je izolovanje i prenos T ćelija, koje su specifične za tumor, uspešno u lečenju melanoma.
[0003] Nove specifičnosti kod T ćelija su uspešno dobijene putem genetskog transfera transgenih receptora T ćelija ili himernih antigenskih receptora (CAR) (Jena, Dotti i dr.2010). CAR su sintetički receptori koji se sastoje od ciljajućeg ostatka koji je povezan sa jednim ili više signalnih domena u jednom fuzionom molekulu. Uopšteno, vezujući ostatak iz CAR se sastoji od antigen-vezujućeg domena jednolančanog antitela (scFv), koji sadrži laki i varijabilni fragment monoklonskog antitela povezane pomoću fleksibilnog linkera. Uspešno su korišćeni i vezujući ostaci koji se zasnivaju na domenima receptora ili liganda. Signalni domeni za prvu generaciju CAR su dobijeni od citoplazmatskog regiona CD3zeta ili gama lanaca Fc receptora. Pokazalo se da prva generacija CAR uspešno preusmerava T ćelijsku citotoksičnost, međutim, ne uspeva da obezbedi produženu ekspanziju i antitumorsku aktivnost in vivo. Signalni domeni iz kostimulatornih molekula, uključujući CD28, OX-40 (CD134) i 4-1BB (CD137), dodati su samostalno (druga generacija) ili u kombinaciji (treća generacija) kako bi se poboljšalo preživljavanje i povećala proliferacija T ćelija modifikovanih putem CAR. CAR su uspešno omogućili da se T ćelije preusmere na antigene koji su eksprimirani na površini tumorskih ćelija kod različitih maligniteta, uključujući limfome i solidne tumore (Jena, Dotti i dr.2010).
[0004] CD19 predstavlja privlačnu metu za imunoterapiju pošto velika većina B-akutnih limfoblastnih leukemija (B-ALL) ravnomerno eksprimira CD19, dok je ekspresija odsutna u nehematopoetskim ćelijama, kao i mijeloidnim, eritroidnim i T ćelijama, i u matičnim ćelijama koštane srži. U toku su klinička ispitivanja koja se bave ciljanjem CD19 na B-ćelijske malignitete, koja pružaju ohrabrujuće antitumorske odgovore. Većinom se putem infuzije primenjuju T ćelije genetski modifikovane da eksprimiraju himerni antigenski receptor (CAR) sa specifičnošću dobijenom od scFv regiona CD19-specifičnog mišjeg monoklonskog antitela FMC63 (Nicholson, Lenton i dr. 1997; Cooper, Topp i dr. 2003; Cooper, Jena i dr. 2012) (Međunarodna prijava: WO2013/126712). Na primer, Cooper, Jena i dr.2012 (Blood, sveska 119, br. 12, strane 2700-2702) daje pregled objavljenih kliničkih podataka o T ćelijama koje su modifikovane da eksprimiraju himerni antigenski receptor (CAR) sa specifičnošću dobijenom od CD19-specifičnog mišjeg monoklonskog antitela FMC63.
[0005] Međutim, i dalje postoji potreba da se poboljša konstruisanje CAR koji pokazuju bolju kompatibilnost sa proliferacijom T-ćelija, kako bi se omogućilo da ćelije koje eksprimiraju takve CAR daju značajne kliničke koristi.
Suština pronalaska
[0006] Predmetni pronalazači su stvorili CD19 specifičan CAR (4G7-CAR) koji sadrži scFV dobijen od CD19 specifičnog monoklonskog antitela 4G7, i iznenađujuće su otkrili da uvođenje dobijenog 4G7-CAR u primarne T ćelije može dovesti do produženog „aktiviranog“ stanja na transdukovanim ćelijama nezavisno od vezivanja antigena. Nakon nespecifične aktivacije in vitro (npr. sa anti CD3/CD28 premazanim perlicama i rekombinantnim IL2), ove ćelije su pokazale povećane ćelijske dimenzije (formiranje blasta), kao i ekspresiju markera aktivacije (CD25) u produženom vremenskom periodu u poređenju sa ćelijama koje su transdukovane sa sličnim CAR koji sadrži FMC63 scFV. Ova dugotrajna aktivacija omogućava produženu proliferaciju i daje mehanizam za ekspanziju 4G7-CAR ćelija in vitro nezavisan od antigena.
[0007] Predmetni pronalazak tako obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u kombinovanoj terapiji koja sadrži a) projektovanu T-ćelija koja eksprimira himerni antigenski receptor koji sadrži najmanje jedan ekstracelularni domen koji vezuje ligand, transmembranski domen i najmanje jedan domen transdukcije signala, pri čemu pomenuti ekstracelularni domen koji vezuje ligand sadrži scFV dobijen od specifičnog monoklonskog antitela 4G7, pri čemu pomenuti jednolančani FV fragment sadrži varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 teškog lanca imunoglobulina gama 1 SEQ ID NO: 3 i varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 kapa lakog lanca imunoglobulina SEQ ID NO: 4 ili SEQ ID NO: 5. Konkretno, CAR iz predmetnog pronalaska, kada se transdukuje u imunsku ćeliju, doprinosi aktivaciji i proliferaciji ćelije nezavisnoj od antigena.
Kratak opis slika
[0008]
Slika 1: Proliferacija TCR alfa inaktiviranih T ćelija (KO) koje su transdukovane pomoću 4G7-CAR lentivirusnog vektora u poređenju sa netransdukovanim KO T ćelijama (NTD). Proliferacija je praćena 30 dana posle koraka (IL2+CD28) ili ne (IL2) reaktivacije pomoću rastvorljivog anti-CD28.
Slika 2: Analiza ekspresije CD25 markera aktivacije na površini inaktiviranih TCR alfa T ćelija koje su transdukovane pomoću 4G7-CAR lentivirusnog vektora, koje su gejtovane na osnovu ekspresije 4G7-CAR (CAR+, CAR-) i upoređene sa ekspresijom CD25 na TCR alfa pozitivnim neelektroporisanim (NEP) ili TCR alfa ometanim ali netransdukovanim (NTD) ćelijama. Ekspresija CD25 je analizirana posle koraka (IL2+CD28) ili ne (IL2) reaktivacije sa rastvorljivim anti-CD28.
Slika 3: Analiza ekspresije CAR na površini T ćelija koje su transdukovane pomoću lentivirusnog vektora koji kodira 4G7-CAR ili FMC63-CAR. Analiza je obavljena putem protočne citometrije 3, 8 i 15 dana posle transdukcije. NT se odnosi na netransdukovane T ćelije.
Slika 4: Analiza ekspresije CD25 na površini T ćelija koje su transdukovane pomoću lentivirusnog vektora, koji kodira 4G7-CAR ili FMC63-CAR. Analiza je obavljena putem protočne citometrije 3, 8 i 15 dana posle transdukcije. NT se odnosi na netransdukovane T ćelije.
Slika 5: Analiza veličine T ćelija koje su transdukovane pomoću lentivirusnog vektora, koji kodira 4G7-CAR ili FMC63-CAR. Analiza je obavljena putem protočne citometrije 3, 8 i 15 dana posle transdukcije. NT se odnosi na netransdukovane T ćelije.
Slika 6: Proliferacija T ćelija koje su transdukovane pomoću 4G7-CAR u poređenju sa FMC63 lentivirusnim vektorom. Proliferacija je praćena 20 dana posle koraka (CD28) ili ne (-) reaktivacije pomoću rastvorljivog anti-CD28. NTD se odnosi na netransdukovane T ćelije.
Detaljan opis pronalaska
[0009] Osim ako ovde nije specifično definisano, svi tehnički i naučni termini koji se koriste imaju značenje koje je uobičajeno poznato stručnjaku za oblasti genske terapije, biohemije, genetike, i molekularne biologije.
[0010] Svi postupci i supstance koji su slični onima koji su ovde opisani mogu da se koriste u praktikovanju ili testiranju iz predmetnog pronalaska, pri čemu su pogodni postupci i supstance opisani ovde. U slučaju konflikta, prednost ima predmetna specifikacija, uključujući definicije. Nadalje, supstance, postupci i primeri služe samo kao ilustracija i ne treba ih tumačiti kao ograničenje, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0011] Praktikovanje predmetnog pronalaska će koristiti, osim ako nije drugačije naznačeno, uobičajene tehnike biologije ćelija, uzgajanja ćelija, molekularne biologije, transgene biologije, mikrobiologije, rekombinantne DNK i imunologije, koje su poznate stručnjaku za oblast. Takve tehnike su detaljno objašnjene u literaturi. Vidite, na primer, Current Protocols in Molecular Biology (Frederick M. AUSUBEL, 2000, Wiley and son Inc, Library of Congress, USA); Molecular Cloning: A Laboratory Manual, treće izdanje, (Sambrook et al, 2001, Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press);
Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed., 1984); Mullis i dr. U.S. pat. br.4,683,195; Nucleic Acid Hybridization (B. D. Harries & S. J. Higgins eds.1984); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins eds.1984); Culture Of Animal Cells (R. I. Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); serije, Methods In ENZYMOLOGY (J. Abelson i M. Simon, glavni urednici, Academic Press, Inc., New York), specifično, sveske 154 i 155 (Wu i dr. eds.) i sveska 185, "Gene Expression Technology" (D. Goeddel, ed.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller i M. P. Calos eds., 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer i Walker, eds., Academic Press, London, 1987); Handbook Of Experimental Immunology, sveske I-IV (D. M. Weir i C. C. Blackwell, eds., 1986); i Manipulating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1986).
CD19 specifični himerni antigenski receptor
[0012] Predmetni pronalazak se odnosi na kompoziciju za upotrebu u kombinovanoj terapiji koja sadrži a) T-ćeliju koja eksprimira himerni antigenski receptor (CAR) koji sadrži ekstracelularni domen koji vezuje ligand, transmembranski domen i domen transdukcije signala, pri čemu pomenuti ekstracelularni domen sadrži jednolančani FV fragment dobijen od monoklonskog antitela 4G7, specifičnog za CD19, pri čemu pomenuti jednolančani FV fragment sadrži varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 teškog lanca imunoglobulina gama 1 SEQ ID NO: 3 i varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 kapa lakog lanca imunoglobulina SEQ ID NO: 4 ili SEQ ID NO: 5; i b) antitelo alemtuzumab.
[0013] Termin „ekstracelularni domen koji vezuje ligand“, kako se ovde koristi, definiše se kao oligo- ili polipeptid koji je sposoban da vezuje ligand. Poželjno, domen će biti sposoban da interaguje sa molekulom ćelijske površine. Na primer, ekstracelularni domen koji vezuje ligand može biti izabran da prepoznaje ligand koji deluje kao marker ćelijske površine na ciljnim ćelijama koje su povezane sa određenim oboljenjem.
[0014] U poželjnom otelotvorenju, pomenuti ekstracelularni domen koji vezuje ligand sadrži fragment jednolančanog antitela (scFv) koji sadrži varijabilne fragmente CD19 monoklonskog antitela 4G7 teškog lanca imunoglobulina gama 1 SEQ ID NO: 3 i varijabilne fragmente CD19 monoklonskog antitela 4G7 kapa lakog lanca imunoglobulina SEQ ID NO: 4 ili SEQ ID NO: 5 povezane pomoću fleksibilnog linkera. U konkretnom otelotvorenju, pomenuti fleksibilni linker ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6.
[0015] Drugim rečima, CAR sadrži ekstracelularni domen koji vezuje ligand koji sadrži jednolančani FV fragment dobijen od CD19 specifičnog monoklonskog antitela 4G7 (Peipp, Saul i dr.2004). U konkretnom otelotvorenju, pomenuti scFV sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 ili SEQ ID NO: 8.
[0016] Domen transdukcije signala ili intracelularni signalni domen CAR prema predmetnom pronalasku odgovoran je za intracelularnu signalizaciju nakon vezivanja ekstracelularnog domena koji vezuje ligand sa ciljem, što dovodi do aktivacije imunske ćelije i imunskog odgovora. Drugim rečima, domen transdukcije signala je odgovoran za aktivaciju najmanje jedne od normalnih efektorskih funkcija imunske ćelije u kojoj je CAR eksprimiran. Na primer, efektorska funkcija T ćelije može biti citolitička aktivnost ili pomoćna aktivnost, uključujući sekreciju citokina. Tako, termin „domen transdukcije signala“ odnosi se na deo proteina koji transdukuje signal efektorske signalne funkcije i usmerava ćeliju da obavlja specijalizovanu funkciju.
[0017] Poželjni primeri domena transdukcije signala za upotrebu u CAR mogu biti citoplazmatska sekvenca T-ćelijskog receptora i koreceptora koji deluju zajedno tako da iniciraju transdukciju signala nakon angažovanja antigenskog receptora, kao i bilo koja varijanta ovih sekvenci i bilo koja sintetička sekvenca koja ima istu funkcionalnu sposobnost. Domen transdukcije signala obuhvata dve različite klase citoplazmatske signalne sekvence, one koje iniciraju primarnu aktivaciju zavisnu od antigena, i one koji deluju na način koji je nezavistan od antigena, da bi se obezbedio sekundarni ili kostimulatorni signal. Primarna citoplazmatska signalna sekvenca može da sadrži signalne motive koji su poznati kao aktivacioni motivi imunoreceptora na bazi tirozina ili ITAM. ITAM su dobro definisani signalni motivi koji se mogu naći u intracitoplazmatskom repu različitih receptora koji služe kao mesta vezivanja za syk/zap70 klasu tirozin kinaza. Primeri za ITAM koji se koristi u pronalasku mogu da uključuju kao neograničavajuće primere one dobijene od TCRzeta, FcRgamma, FcRbeta, FcRepsilon, CD3gamma, CD3delta, CD3epsilon, CD5, CD22, CD79a, CD79b i CD66d. U poželjnom otelotvorenju, domen transdukcije signalizacije CAR može da sadrži CD3zeta signalni domen koji ima aminokiselinsku sekvencu sa najmanje 70%, poželjno najmanje 80%, poželjnije najmanje 90%, 95%, 97% ili 99% identičnosti sekvence sa aminokiselinskom sekvencom izabranom iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 10.
[0018] U konkretnom otelotvorenju, domen transdukcije signala CAR iz predmetnog pronalaska sadrži kostimulatorni signalni molekul. Kostimulatorni molekul je molekul ćelijske površine osim antigenskog receptora ili njegovih liganda koji je potreban za delotvoran imunski odgovor. „Kostimulatorni ligand“ odnosi se na molekul na antigenu koji prezentuje ćeliju, koji se specifično vezuje za srodni kostimulatorni molekul na T-ćeliji, pri čemu se dobija signal koji, pored primarnog signala koji obezbeđuje, npr., vezivanje TCR/CD3 kompleksa sa MHC molekulom na koji je nanet peptid, posreduje u T ćelijskom odgovoru, uključujući, ali se ne ograničavajući na, aktivaciju proliferacije, diferencijaciju, i slično. Kostimulatorni ligand može da uključuje, ali nije ograničen na CD7, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), PD-L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, inducibilni kostimulatorni ligand (ICOS-L), intracelularni adhezioni molekul (ICAM, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, M1CB, HVEM, limfotoksinski beta receptor, 3/TR6, ILT3, ILT4, agonist ili antitelo koje se vezuje za receptor zvonastog liganda i ligand koji se specifično vezuje za B7-H3.
Kostimulatorni ligand takođe uključuje, između ostalog, antitelo koje se specifično vezuje za kostimulatorni molekul koji je prisutan na T ćeliji, kao što je, bez ograničenja, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, limfocitni antigen povezan sa funkcijom-1 (LFA-1), CD2, CD7, LTGHT, NKG2C, B7-H3, ligand koji se specifično vezuje za CD83.
[0019] „Kostimulatorni molekul“ se odnosi na srodnog vezujućeg partnera na T-ćeliji koji se specifično vezuje sa kostimulatornim ligandom, i tako posreduje u kostimulatornom odgovoru ćelije, kao što je, bez ograničenja, proliferacija. Kostimulatorni molekuli uključuju, ali nisu ograničeni na molekul MHC klase I, BTLA i receptor zvonastog liganda. Primeri za kostimulatorne molekula uključuju CD27, CD28, CD8, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, limfocitni antigen povezan sa funkcijom-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3 i ligand koji se specifično vezuje za CD83, i slično.
[0020] U poželjnom otelotvorenju, domen transdukcije signala CAR iz predmetnog pronalaska sadrži deo kostimulatornog signalnog molekula koji je izabran iz grupe koja se sastoji od fragmenta 4-1BB (GenBank: AAA53133.) i CD28 (NP_006130.1). Domen transdukcije signala CAR iz predmetnog pronalaska posebno sadrži aminokiselinsku sekvencu koja sadrži najmanje 70%, poželjno najmanje 80%, poželjnije najmanje 90%, 95%, 97% ili 99% identičnosti sekvence sa aminokiselinskom sekvencom izabranom iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
[0021] CAR prema predmetnom pronalasku eksprimira se na površinskoj membrani ćelije. Usled toga, CAR može da sadrži transmembranski domen. Istaknuta svojstva odgovarajućih transmembranskih domena uključuju sposobnost da se eksprimiraju na površini ćelije, u predmetnom pronalasku poželjno imunske ćelije, naročito limfocitne ćelije ili ćelije prirodne ubice (NK), i da međusobno interaguju da bi usmeravale ćelijski odgovor imunskih ćelija na prethodno definisane ciljne ćelije. Transmembranski domen može biti dobijen iz prirodnog ili iz sintetičkog izvora. Transmembranski domen može biti dobijen od bilo kog proteina vezanog za membranu ili transmembranskog proteina. U vidu neograničavajućih primera, transmembranski polipeptid može biti podjedinica T ćelijskog receptora kao što su α, β, y ili δ, polipeptid koji gradi CD3 kompleks, p55 (α lanac), p75 (β lanac) ili y lanac receptora IL2, podjedinica lanca Fc receptora, naročito Fcγ receptora III ili CD proteina. Alternativno, transmembranski domen može biti sintetički i može da sadrži pretežno hidrofobne ostatke, kao što su leucin i valin. U poželjnom otelotvorenju, transmembranski domen je dobijen od alfa lanca humanog CD8 (npr. NP_001139345.1). Transmembranski domen može dalje da sadrži region drške između pomenutog ekstracelularnog domena koji vezuje ligand i pomenutog transmembranskog domena. Termin „region drške“, koji se ovde koristi, uopšteno označava bilo koji oligo- ili polipeptid koji ima funkciju povezivanja transmembranskog domena sa ekstracelularnim domenom koji vezuje ligand. Konkretno, region drške se koristi da se obezbedi veća fleksibilnost i pristupačnost za ekstracelularni domen koji vezuje ligand. Region drške može da sadrži do 300 aminokiselina, poželjno od 10 do 100 aminokiselina, a najpoželjnije od 25 do 50 aminokiselina. Region drške može biti dobijen iz celine ili dela molekula koji se javljaju u prirodi, recimo iz celine ili dela ekstracelularnog regiona CD8, CD4 ili CD28, ili iz celine ili dela konstantnog regiona antitela. Alternativno, region drške može biti sintetička sekvenca koja odgovara sekvenci drške koja se javlja u prirodi, ili može biti u potpunosti sintetička sekvenca drške. U poželjnom otelotvorenju, pomenuti region drške je deo alfa lanca humanog CD8 (npr. NP_001139345.1). U drugom konkretnom otelotvorenju, pomenuti transmembranski domeni i domeni šarke sadrže deo alfa lanca humanog CD8, poželjno koji ima najmanje 70%, poželjno najmanje 80%, poželjnije najmanje 90%, 95%, 97% ili 99% identičnosti sekvence sa aminokiselinskom sekvencom koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 13.
[0022] U konkretnom otelotvorenju, pomenuti himerni antigenski receptor sadrži scFV koji sadrži varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 teškog lanca imunoglobulina gama 1 SEQ ID NO: 3 i varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 kapa lakog lanca imunoglobulina SEQ ID NO: 4 ili SEQ ID NO: 5, domen šarke i transmembranski domen alfa lanca humanog CD8, CD3 zeta signalni domen i 4-1BB signalni domen.
Poželjno, 4G7 CAR iz predmetnog pronalaska ima najmanje 70%, poželjno najmanje 80%, poželjnije najmanje 90%, 95%, 97% ili 99% identičnosti sekvence sa aminokiselinskom sekvencom koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 14 i 15.
[0023] Nishodna regulacija ili mutacija ciljnih antigena se uobičajeno primećuje kod ćelija kancera, što dovodi do varijanti spasa sa gubitkom antigena. Tako, da bi se nadomestio tumorski spas i da bi imunske ćelije postale specifičnije za cilj, CAR specifičan za CD19 može da sadrži ekstracelularne domene koji vezuju ligand, kako bi se istovremeno vezivali različiti elementi u cilju, što poboljšava aktivaciju i funkciju imunskih ćelija. U jednom otelotvorenju, ekstracelularni domeni koji vezuju ligand mogu u paru biti postavljeni na isti transmembranski polipeptid, i opciono mogu biti razdvojeni linkerom. U drugom otelotvorenju, pomenuti različiti ekstracelularni domeni koji vezuju ligand mogu biti postavljeni na različite transmembranske polipeptide koji grade CAR. U drugom otelotvorenju, predmetni pronalazak se odnosi na populaciju CAR, od kojih svaki sadrži različite ekstracelularne domene koji vezuju ligand. Pod populacijom CAR, misli se na najmanje dva, tri, četiri, pet, šest ili više CAR, od kojih svaki sadrži različite ekstracelularne domene koji vezuju ligand. Različiti ekstracelularni domeni koji vezuju ligand mogu poželjno istovremeno da vezuju različite elemente u meti, što dovodi do poboljšanja aktivacije i funkcije imunskih ćelija.
Polinukleotidi, vektori:
[0024] Opisani su polinukleotidi, vektori koji kodiraju prethodno opisane CAR. U poželjnom slučaju, polinukleotid koji sadrži sekvencu nukleinske kiseline SEQ ID NO: 17. U poželjnom slučaju, polinukleotid ima najmanje 70%, poželjno najmanje 80%, poželjnije najmanje 90%, 95%, 97% ili 99% identičnosti sekvence sa sekvencom nukleinske kiseline koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 17.
[0025] Polinukleotid može biti sadržan u ekspresionoj kaseti ili u ekspresionom vektoru (npr. plazmid za uvođenje u bakterijsku ćeliju domaćina, ili virusni vektor kao što je vektor bakulovirusa za transfekciju ćelije domaćina insekta, ili plazmid ili virusni vektor kao što je lentivirus za transfekciju u ćeliju domaćina sisara).
[0026] U konkretnom slučaju, različite sekvence nukleinskih kiselina mogu biti uključene u jedan polinukleotid ili vektor koji sadrži sekvencu nukleinske kiseline koja kodira sekvencu ribozomskog preskakanja, kao što je sekvenca koja kodira 2A peptid.2A peptidi, koji su identifikovani u aftovirusnoj podgrupi pikornavirusa, dovode do ribozomskog „preskakanja“ sa jednog kodona na sledeći, bez nastanka peptidne veze između dve aminokiseline koje kodiraju kodoni (vidite (Donnelly i Elliott 2001; Atkins, Wills i dr.2007; Doronina, Wu i dr.
2008)). „Kodon“ označava tri nukleotida u iRNK (ili u sens lancu molekula DNK) koji se pomoću ribozoma prevode u jedan aminokiselinski ostatak. Tako, dva polipeptida mogu biti sintetisana iz jednog, neprekinutog otvorenog okvira za čitanje u iRNK, kada su polipeptidi razdvojeni putem 2A oligopeptidne sekvence koja je u okviru. Takvi mehanizmi za ribozomsko preskakanje su dobro poznati u struci i poznato je da ih nekoliko vektora koristi za ekspresiju nekoliko proteina koje kodira jedna informaciona RNK.
[0027] Za usmeravanje transmembranskog polipeptida u sekretorni put ćelije domaćina, sekvenca sekretornog signala (poznata je i kao liderska sekvenca, prepro sekvenca ili predsekvenca) obezbeđena je u sekvenci polinukleotida ili u sekvenci vektora. Sekvenca sekretornog signala je operativno povezana sa sekvencom transmembranske nukleinske kiseline, tj. dve sekvence su spojene u odgovarajućem okviru za čitanje i pozicionirane su da usmeravaju novosintetisani polipeptid u sekretorni put ćelije domaćina. Sekvence sekretornog signala su uobičajeno pozicionirane 5' u odnosu na sekvencu nukleinske kiseline koja kodira polipeptid od interesa, mada određene sekvence sekretornog signala mogu biti pozicionirane na nekom drugom mestu u sekvenci nukleinske kiseline od interesa (vidite, npr. Welch et al., U.S. patent br.5,037,743; Holland et al., U.S. patent br.5,143,830). U poželjnoj realizaciji, signalni peptid sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 18 i 19.
[0028] Stručnjacima za ovu oblast će biti poznato da je, usled degeneracije genetskog koda, moguća znatna varijacija sekvence između ovih polinukleotidnih molekula. Poželjno, ovde opisane sekvence nukleinske kiseline su kodonski optimizovane za ekspresiju u ćelijama sisara, poželjno za ekspresiju u humanim ćelijama. Kodonska optimizacija se odnosi na razmenu u sekvenci od interesa kodona koji generalno imaju malo značajno eksprimiranih gena date vrste sa kodonima koji generalno imaju dosta značajno eksprimiranih gena te vrste, recimo kodoni koji kodiraju aminokiseline su kodoni koji se razmenjuju.
[0029] U poželjnom slučaju, polinukleotid sadrži sekvencu nukleinske kiseline koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od: SEQ ID NO: 17. Takođe su opisani polinukleotidi koji sadrže sekvencu nukleinske kiseline koja ima najmanje 70%, poželjno najmanje 80%, poželjnije najmanje 90%, 95 %, 97% ili 99% identičnosti sekvence sa sekvencom nukleinske kiseline koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 17.
Postupci za konstruisanje imunske ćelije:
[0030] Opisan je postupak za pripremu T ćelija za imunoterapiju koji obuhvata uvođenje CAR kako je opisano iznad u pomenute T ćelije i ekspanziju pomenutih ćelija. Naročito, opisan je postupak za konstruisanje T ćelije koji obuhvata obezbeđivanje T ćelije i ekspresiju na površini pomenute ćelije najmanje jednog CAR, kako je prethodno opisano. U konkretnom slučaju, postupak obuhvata transformisanje T ćelije sa najmanje jednim polinukleotidom koji kodira CAR, kao što je prethodno opisano, i ekspresiju pomenutih polinukleotida u pomenutoj ćeliji.
[0031] U poželjnom slučaju, pomenuti polinukleotidi su uključeni u lentivirusne vektore kako bi se stabilno eksprimirali u ćelijama.
[0032] U još jednom slučaju, pomenuti postupak dalje obuhvata korak genetske modifikacije pomenute ćelije putem inaktivacije najmanje jednog gena koji eksprimira jednu komponentu TCR, metu za imunosupresivni agens, HLA gena i/ili gena imunske kontrolne tačke kao što je PDCD1 ili CTLA-4. U poželjnom slučaju, pomenuti gen je izabran iz grupe koja se sastoji od TCRalpha, TCRbeta, CD52, GR, PD1 i CTLA-4. U poželjnom slučaju, pomenuti postupak dalje obuhvata uvođenje u pomenute T ćelije retke restrikcione endonukleaze koja može da vrši selektivnu inaktivaciju putem DNK cepanja pomenutih gena. U poželjnijem slučaju, pomenuta retka restrikciona endonukleaza je TALE-nukleaza ili Cas9 endonukleaza.
Postupci za isporuku
[0033] Različiti postupci koji su prethodno opisani obuhvataju uvođenje CAR u ćeliju. U vidu neograničavajućeg primera, CAR može da se uvede u obliku transgena koje kodira jedan plazmidni vektor. Pomenuti plazmidni vektor može takođe da sadrži selekcioni marker koji omogućava identifikaciju i/ili selekciju ćelija koje su primile pomenuti vektor.
[0034] Polipeptidi mogu biti sintetisani in situ u ćelijama kao posledica uvođenja polinukleotida koji kodiraju pomenute polipeptide u ćeliju. Alternativno, pomenuti polipeptidi mogu da se proizvedu izvan ćelije i da se zatim uvedu u nju. Postupci za uvođenje polinukleotidnog konstrukta u ćelije su poznati u struci i uključuju, u vidu neograničavajućih primera, postupke stabilne transformacije u kojima se polinukleotidni konstrukt integriše u genom ćelije, postupke prolazne transformacije u kojima polinukleotidni konstrukt nije integrisan u genom ćelije, i postupke koji su posredovani virusima. Pomenuti polinukleotidi mogu da se uvedu u ćeliju, na primer, pomoću rekombinantnih virusnih vektora (npr.
retrovirusi, adenovirusi), lipozoma, i slično. Na primer, postupci prolazne transformacije uključuju, na primer, mikroinjekciju, elektroporaciju ili bombardovanje česticama. Pomenuti polinukleotidi mogu biti uključeni u vektore, konkretnije plazmide ili viruse, kako bi se eksprimirali u ćelijama.
Konstruisane imunske ćelije
[0035] Predmetni pronalazak koristi T ćeliju koja sadrži najmanje jedan CAR kao što je gore opisano. Konkretno, navedena T ćelija sadrži egzogenu polinukleotidnu sekvencu koja kodira CAR. Genetski modifikovane T ćelije koje se koriste u skladu sa ovim pronalaskom se aktivišu i razmnožavaju nezavisno od mehanizama vezivanja antigena.
[0036] Pomenuta T ćelija se odnosi na ćeliju hematopoetskog porekla koja je funkcionalno uključena u započinjanje i/ili sprovođenje urođenog i/ili adaptivnog imunskog odgovora. Pomenuta T ćelija može da se dobije od matične ćelije. Matične ćelije mogu biti matične ćelije odraslih osoba, matične ćelije nehumanog embriona, konkretnije nehumane matične ćelije, matične ćelije iz krvi iz pupčane vrpce, progenitorske ćelije, matične ćelije iz koštane srži, indukovane pluripotentne matične ćelije ili hematopoetske matične ćelije.
Reprezentativne humane ćelije su CD34+ ćelije. Pomenuta T ćelija može da bude T ćelija koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od inflamatornih T-limfocita, citotoksičnih T-limfocita, regulatornih T-limfocita ili pomoćnih T-limfocita. U drugom otelotvorenju, pomenuta ćelija može da se dobije iz grupe koja se sastoji od CD4+ T-limfocita i CD8+ T-limfocita. Pre ekspanzije i genetske modifikacije ćelija iz pronalaska, izvor ćelija može da se dobije od ispitanika koristeći različite neograničavajuće postupke. Ćelije mogu da se dobiju iz više neograničavajućih izvora, uključujući mononuklearne ćelije periferne krvi, koštanu srž, tkivo limfnih čvorova, krv iz pupčane vrpce, timusno tkivo, tkivo sa mesta infekcije, ascites, pleuralnu efuziju, tkivo slezine i tumore. U određenim otelotvorenjima predmetnog pronalaska, može da se koristi bilo koji broj T ćelijskih linija koje su dostupne i poznate stručnjacima za oblast. U drugom otelotvorenju, pomenuta T ćelija može da se dobije od zdravog donora, od pacijenta kome je dijagnostikovan kancer ili od pacijenta kome je dijagnostikovana infekcija. U drugom otelotvorenju, pomenuta T ćelija je deo mešovite populacije ćelija koje pokazuju različite fenotipske karakteristike. Modifikovane T ćelije koje su otporne na imunosupresivno lečenje i koje mogu da se dobiju prethodnim postupkom obuhvaćene su opsegom predmetnog pronalaska.
[0037] U drugom otelotvorenju, pomenuta T ćelija korišćena prema predmetnom pronalasku sadrži polinukleotid koji kodira CAR.
Aktivacija i ekspanzija T ćelija
[0038] Bilo pre bilo posle genetske modifikacije T ćelija, čak i ako su genetski modifikovane imunske ćelije iz predmetnog pronalaska aktivirane i vrše proliferaciju nezavisno od mehanizama vezivanja antigena, imunske ćelije, naročito T ćelije iz predmetnog pronalaska, mogu se dalje aktivirati i ekspandovati generalno koristeći postupke koji su opisani, na primer, u U.S. patentima 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041; i U.S. publikaciji patentne prijave br.20060121005. T ćelije mogu da se ekspanduju in vitro.
[0039] Generalno, T ćelije korišćene u skladu sa pronalaskom se ekspanduju putem kontakta sa agensom koji stimuliše kompleks CD3 TCR i kostimulatornim molekulom na površini T ćelija kako bi se dobio signal za aktivaciju T ćelije.
[0040] Na primer, hemikalije kao što je kalcijum jonofor A23187, forbol 12-miristat 13-acetat (PMA), ili mitogeni lektini kao što je fitohemaglutinin (PHA), mogu da se koriste da se stvori signal za aktivaciju T ćelije.
[0041] U vidu neograničavajućih primera, populacije T ćelija mogu da se stimulišu in vitro, recimo putem kontakta sa anti-CD3 antitelom, ili njegovim antigen vezujućim fragmentom, ili sa anti-CD2 antitelom koje je imobilisano na površini, ili putem kontakta sa aktivatorom protein kinaze C (npr. briostatin) u konjunkciji sa kalcijum jonoforom. Za kostimulaciju pomoćnog molekula na površini T ćelija, koristi se ligand koji vezuje pomoćni molekul. Na primer, populacija T ćelija može da se dovede u kontakt sa anti-CD3 antitelom i anti-CD28 antitelom, u uslovima koji su odgovarajući za stimulaciju proliferacije T ćelija. Uslovi koji su odgovarajući za uzgajanje T ćelija uključuju odgovarajuće medijume (npr. minimalni esencijalni medijum ili RPMI medijum 1640 ili X-vivo 5 (Lonza)) koji mogu da sadrže faktore koji su neophodni za proliferaciju i vijabilnost, uključujući serum (npr. fetalni goveđi ili humani serum), interleukin-2 (IL-2), insulin, IFN-g , 1L-4, 1L-7, GM-CSF, -10, - 2, 1L-15, TGFp, i TNF- ili bilo koje druge aditive za rast ćelija koji su poznati stručnjaku. Drugi aditivi za rast ćelija uključuju, ali nisu ograničeni na, surfaktant, plazmanat i redukujuće agense kao što su N-acetil-cistein i 2-merkaptoetanol. Medijumi mogu da uključuju RPMI 1640, A1M-V, DMEM, MEM, a-MEM, F-12, X-Vivo 1 i X-Vivo 20, Optimizer, sa dodatkom aminokiselina, natrijum piruvata i vitamina, bilo da su bez seruma ili sa dodatkom odgovarajuće količine seruma (ili plazme) ili definisanog skupa hormona, i/ili količine citokina koja je dovoljna za rast i ekspanziju T ćelija. Antibiotici, npr. penicilin i streptomicin, uključeni su samo u eksperimentalne kulture, a ne i u ćelijske kulture koje će se infuzijom dati pojedincu. Ciljne ćelije se održavaju u uslovima koji su neophodni da se podrži rast, na primer, odgovarajuća temperatura (npr.37°C) i atmosfera (npr. vazduh plus 5% CO2). T ćelije koje su izložene različitom vremenu stimulacije mogu da ispolje različite karakteristike
[0042] Alternativno, pomenute ćelije mogu da se ekspanduju putem zajedničkog uzgajanja sa tkivom ili ćelijama.
Terapeutske primene
[0043] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje projektovanu T-ćeliju koja eksprimira CD19-specifičan himerni antigenski receptor (CAR), koji sadrži najmanje jedan ekstracelularni domen vezujući za ligand specifičan za CD19, transmembranski domen i najmanje jedan intracelularni signalni domen; pri čemu pomenuti ekstracelularni domen sadrži jednolančani FV fragment izveden iz monoklonskog antitela 4G7, specifičnog za CD19, pomenuti jednolančani FV fragment sadrži varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 imunoglobulina gama 1 teškog lanca SEQ ID NO: 3 i varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 imunoglobulina kapa lakog lanca SEQ ID NO: 4 ili SEQ ID NO: 5, za upotrebu u kombinaciji sa antitelom alemtuzumabom u postupcima za lečenje raka kod subjekta kome je to potrebno, pomenuti postupak obuhvata sledeće korake: (a) davanje subjektu antitela alemtuzumaba; (b) davanje pomenutom subjektu projektovane T ćelije.
[0044] Pomenuto lečenje može biti ameliorativno, kurativno ili profilaktičko. Ono može biti deo lečenja autolognom imunoterapijom ili alogenom imunoterapijom. Kod autologne imunoterapije, podrazumeva se da su ćelije, ćelijske linije ili populacija ćelija koje se koriste za lečenje pacijenata poreklom od pomenutog pacijenta ili od kompatibilnog donora humanog leukocitnog antigena (HLA). Kod alogene imunoterapije, podrazumeva se da ćelije ili populacija ćelija koje se koriste za lečenje pacijenata nisu poreklom od pomenutog pacijenta već od donora.
[0045] Kanceri koji mogu da se leče mogu da obuhvataju nesolidne tumore (kao što su hematološki tumori, uključujući, bez ograničenja, pre-B ALL (pedijatrijska indikacija) ALL kod odraslih, limfom ćelija plašta, difuzni B krupnoćelijski limfom, i slično. Vrste kancera koji će se lečiti sa CAR iz pronalaska uključuju, ali nisu ograničene na, određene leukemije ili limfoidne malignitete. Takođe su obuhvaćeni tumori/kanceri odraslih osoba i pedijatrijski tumori/kanceri.
[0046] Prema poželjnoj realizaciji pronalaska, pomenuto lečenje može da se primenjuje na pacijentima koji su podvrgnuti imunosupresivnom lečenju. Zaista, predmetni pronalazak se poželjno odnosi na ćelije ili populacije ćelija koje su načinjene otpornim na najmanje jedan imunosupresivni agens zahvaljujući inaktivaciji gena koji kodira receptor za takav imunosupresivni agens. U ovom aspektu, imunosupresivno lečenje treba da pomogne u odabiru i ekspanziji T ćelija prema pronalasku kod pacijenta.
[0047] Primena ćelija ili populacije ćelija prema predmetnom pronalasku može da se obavi na bilo koji pogodan način, uključujući inhalaciju aerosola, injekciju, gutanje, transfuziju, implantaciju ili transplantaciju. Kompozicije koje su ovde opisane mogu da se primenjuju na pacijentu supkutano, intradermalno, intratumorski, intranodalno, intramedularno, intramuskularno, intravenskom ili intralimfatičkom injekcijom, ili intraperitonealno. U jednom otelotvorenju, ćelijske kompozicije iz predmetnog pronalaska se poželjno primenjuju intravenskom injekcijom.
[0048] Primena ćelija ili populacije ćelija može da obuhvata primenu od 10<4>-10<9>ćelija po kg telesne težine, poželjno od 10<5>do 10<6>ćelija/kg telesne težine, uključujući sve cele vrednosti broja ćelija u tim rasponima. Ćelije ili populacija ćelija mogu da se primenjuju u jednoj ili u više doza. Pomenuta delotvorna količina ćelija može da se primenjuje kao jedna doza.
Pomenuta delotvorna količina ćelija može da se primenjuje kao više od jedne doze u određenom vremenskom periodu. Vreme primene je stvar procene nadležnog lekara, i zavisi od pacijentovog kliničkog stanja. Ćelije ili populacija ćelija mogu biti dobijeni iz bilo kog izvora, kao što je banka krvi ili donor. Mada se pojedinačne potrebe razlikuju, određivanje optimalnih raspona delotvorne količine za datu vrstu ćelija za konkretnu bolest ili stanje je poznato stručnjacima za oblast. Delotvorna količina označava količinu koja obezbeđuje terapeutsko ili profilaktičko dejstvo. Doza koja se primenjuje će zavisiti od starosti, zdravstvenog stanja i težine primaoca, vrste istovremenog lečenja, ako ga ima, učestalosti lečenja i prirode željenog dejstva.
[0049] Pomenuta delotvorna količina ćelija ili kompozicije koja sadrži te ćelije može da se primenjuje parenteralno. Pomenuta primena može biti intravenska primena. Pomenuta primena može da se vrši injekcijom neposredno u tumor.
Ostale definicije
[0050]
• Osim ako nije drugačije naznačeno, odrednice za jedninu i „najmanje jedan“ koriste se naizmenično i označavaju jedno ili više od jednog. Aminokiselinski ostaci u sekvencama polipeptida su ovde označeni u skladu sa njihovim jednoslovnim kodom, gde, na primer, Q označava Gln ili glutaminski ostatak, R označava Arg ili argininski ostatak, a D označava Asp ili ostatak asparaginske kiseline.
• Aminokiselinska supstitucija označava zamenu jednog aminokiselinskog ostatka drugim, na primer, zamena argininskog ostatka glutaminskim ostatkom u peptidnoj sekvenci predstavlja aminokiselinsku supstituciju.
• Nukleotidi se označavaju na sledeći način: jednoslovni kod se koristi za označavanje baze nukleozida: a je adenin, t je timin, c je citozin, a g je guanin. Kod degenerisanih nukleotida, r predstavlja g ili a (purinski nukleotidi), k predstavlja g ili t, s predstavlja g ili c, w predstavlja a ili t, m predstavlja a ili c, y predstavlja t ili c (pirimidinski nukleotidi), d predstavlja g, a ili t, v predstavlja g, a ili c, b predstavlja g, t ili c, h predstavlja a, t ili c, a n predstavlja g, a, t ili c.
• Kako se ovde koristi, „nukleinska kiselina“ ili „polinukleotidi“ označava nukleotide i/ili polinukleotide, kao što su dezoksiribonukleinska kiselina (DNK) ili ribonukleinska kiselina (RNK), oligonukleotide, fragmente koji su dobijeni pomoću lančane reakcije polimeraze (PCR), i fragmente koji su dobijeni putem ligacije, cepanja, dejstva endonukleaze i dejstva egzonukleaze. Molekuli nukleinske kiseline mogu biti sačinjeni od monomera koji su nukleotidi koji se javljaju u prirodi (kao što su DNK i RNK) ili od analoga nukleotida koji se javljaju u prirodi (npr. enantiomerni oblici nukleotida koji se javljaju u prirodi), ili od kombinacije oba prethodno navedena. Modifikovani nukleotidi mogu imati izmene u ostacima šećera i/ili u ostacima pirimidinske ili purinske baze. Modifikacije šećera uključuju, na primer, zamenu jedne ili više hidroksilnih grupa halogenima, alkil grupama, aminima i azido grupama, ili šećeri mogu biti funkcionalizovani kao etri ili estri. Štaviše, ceo ostatak šećera može da se zameni sterno i elektronski sličnim strukturama, kao što su azašećeri i karbociklični analozi šećera. Primeri za modifikacije baznog ostatka uključuju alkilovane purine i pirimidine, acilovane purine i pirimidine, ili druge dobro poznate heterociklične zamene. Monomeri nukleinske kiseline mogu biti povezani pomoću fosfodiestarskih veza ili analoga takvih veza. Nukleinske kiseline mogu biti jednolančane ili dvolančane.
Pod himernim antigenskim receptorom (CAR) misli se na molekule koji kombinuju vezujući domen za komponentu koja je prisutna na ciljnoj ćeliji, na primer, specifičnost na bazi antitela za željeni antigen (npr. tumorski antigen) sa intracelularnim domenom koji aktivira T ćelijski receptor za dobijanje himernog proteina koji ispoljava specifičnu ćelijsku imunsku aktivnost na cilj. Uopšteno, CAR se sastoji od ekstracelularnog jednolančanog antitela (ScFvFc) koje je fuzionisano sa intracelularnim signalnim domenom zeta lanca kompleksa T ćelijskog antigenskog receptora (scFvFc:ζ) i ima sposobnost, kada se eksprimira u T ćelijama, da preusmeri prepoznavanje antigena na osnovu specifičnosti monoklonskog antitela. Jedan primer CAR koji se koristi u predmetnom pronalasku je CAR koji vrši usmeravanje na CD19 antigen koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14.
Termin „endonukleaza“ odnosi se na bilo koji divlji tip ili varijantu enzima koji je sposoban da katalizuje hidrolizu (cepanje) veza između nukleinskih kiselina unutar molekula DNK ili RNK, poželjno molekula DNK. Endonukleaze ne cepaju molekul DNK ili RNK bez obzira na njegovu sekvencu, ali prepoznaju i cepaju molekul DNK ili RNK na specifičnoj polinukleotidnoj sekvenci, koje se dalje nazivaju „ciljne sekvence“ ili „ciljna mesta“. Endonukleaze mogu da se klasifikuju kao retke restrikcione endonukleaze kada tipično imaju mesto prepoznavanja polinukleotida dužine veće od 12 baznih parova (bp), poželjnije 14-55 bp. Retke restrikcione endonukleaze značajno povećavaju HR putem indukcije pucanja dvostrukog lanca DNK (DSB) na definisanom lokusu (Perrin, Buckle i dr.1993; Rouet, Smih i dr. 1994; Choulika, Perrin i dr.1995; Pingoud i Silva 2007). Retke restrikcione endonukleaze mogu, na primer, biti homing endonukleaza (Paques i Duchateau 2007), himerna nukleaza cinkov prst (ZNF) dobijena iz fuzije konstruisanih domena cinkovog prsta sa katalitičkim domenom restrikcionog enzima kao što je Fokl (Porteus i Carroll 2005), Cas9 endonukleaza iz CRISPR sistema (Gasiunas, Barrangou i dr.2012; Jinek, Chylinski i dr.2012; Cong, Ran i dr.2013; Mali, Yang i dr. 2013) ili hemijska endonukleaza (Eisenschmidt, Lanio i dr.2005; Arimondo, Thomas i dr.2006). Kod hemijskih endonukleaza, hemijski ili peptidni raskidač je konjugovan sa polimerom nukleinskih kiselina ili sa drugom DNK koja prepoznaje specifičnu ciljnu sekvencu, čime se cilja na aktivnost cepanja specifične sekvence. Hemijske endonukleaze takođe obuhvataju sintetičke nukleaze kao što su konjugati ortofenantrolina, molekul koji cepa DNK i oligonukleotidi koji grade tripleks (TFO), za koje je poznato da grade specifične sekvence DNK (Kalish i Glazer 2005). Takve hemijske endonukleaze su obuhvaćene terminom „endonukleaza“ prema predmetnom pronalasku.
Pod „TALE-nukleazom“ (TALEN) podrazumeva se fuzioni protein koji se sastoji od domena vezivanja nukleinske kiseline koji je obično dobijen od efektora nalik aktivatoru transkripcije (TALE) i jednog katalitičkog domena nukleaze za cepanje ciljne sekvence nukleinske kiseline. Katalitički domen je poželjno domen nukleaze, a poželjnije domen koji ima aktivnost endonukleaze, kao što je, na primer, I-Tevl, ColE7, NucA i Fok-I. U konkretnom otelotvorenju, TALE domen može da se fuzioniše sa meganukleazom, kao što je, na primer, I-Crel i I-Onul ili njihove funkcionalne varijante. U poželjnijem otelotvorenju, pomenuta nukleaza je monomerna TALE-nukleaza. Monomerna TALE-nukleaza je TALE-nukleaza koja ne zahteva dimerizaciju za specifično prepoznavanje i cepanje, kao što su fuzije konstruisanih TAL ponavljanja sa katalitičkim domenom I-Tevl kao što je opisano u WO2012138927. Efektor nalik aktivatoru transkripcije (TALE) su proteini iz bakterijske vrste Xanthomonas koji sadrže više ponovljenih sekvenci, pri čemu svako ponavljanje sadrži di-ostatke na poziciji 12 i 13 (RVD) koji su specifični za svaku nukleotidnu bazu ciljne sekvence nukleinske kiseline. Vezujući domeni sa sličnim modularnim svojstvima vezivanja nukleinske kiseline bazu po bazu (MBBBD) takođe se mogu dobiti od novih modularnih proteina koje su podnosioci patentne prijave nedavno otkrili kod druge vrste bakterija. Prednost novih modularnih proteina je što pokazuju veću raznovrsnost sekvenci nego TAL ponavljanja. Poželjno, RVD povezani sa prepoznavanjem različitih nukleotida su HD za prepoznavanje C, NG za prepoznavanje T, NI za prepoznavanje A, NN za prepoznavanje G ili A, NS za prepoznavanje A, C, G ili T, HG za prepoznavanje T, IG za prepoznavanje T, NK za prepoznavanje G, HA za prepoznavanje C, ND za prepoznavanje C, HI za prepoznavanje C, HN za prepoznavanje G, NA za prepoznavanje G, SN za prepoznavanje G ili A i YG za prepoznavanje T, TL za prepoznavanje A, VT za prepoznavanje A ili G i SW za prepoznavanje A. U još jednom otelotvorenju, ključne aminokiseline 12 i 13 mogu biti mutirane u druge aminokiselinske ostatke kako bi se njihova specifičnost modulisala ka nukleotidima A, T, C i G, i naročito da bi se ta specifičnost povećala. TALE-nukleaza je već opisana i korišćena za stimulaciju ciljanja gena i modifikacije gena (Boch, Scholze i dr.2009; Moscou i Bogdanove 2009; Christian, Cermak i dr.2010; Li, Huang i dr.2011). Konstruisane TAL-nukleaze su komercijalno dostupne pod trgovačkim imenom TALEN<™>(Cellectis, 8 rue de la Croix Jarry, 75013 Paris, Francuska).
[0051] Retka restrikciona endonukleaza prema predmetnom pronalasku takođe može biti Cas9 endonukleaza. Nedavno je razvijen novi alat za konstruisanje genoma na osnovu RNK navođene Cas9 nukleaze (Gasiunas, Barrangou i dr.2012; Jinek, Chylinski i dr.2012; Cong, Ran i dr.2013; Mali, Yang i dr.2013) iz tipa II prokariotskog CRISPR (grupisana kratka palindromska ponavljanja sa redovnim razmacima) adaptivnog imunskog sistema (za ovaj pregled, vidite (Sorek, Lawrence i dr.2013)). Sistem povezan sa CRISPR (Cas) prvi put je otkriven kod bakterija i deluje kao odbrana od strane DNK, bilo da je virusna ili plazmidna. Genomsko konstruisanje posredovano sa CRISPR prvo započinje odabirom ciljne sekvence koja je često okružena kratkim motivom sekvence, koji se naziva motiv susedan protospejseru (PAM). Nakon odabira ciljne sekvence, konstruisana je specifična crRNK koja je komplementarna sa ovom ciljnom sekvencom. Trans-aktivirajuća crRNK (tracrRNK) koja je potrebna u ovim CRISPR sistemima tipa II uparena je sa crRNK i vezala se za dati Cas9 protein. Cas9 deluje kao molekulsko sidro koje olakšava bazno sparivanje tracRNK sa cRNK (Deltcheva, Chylinski i dr.2011). U ovom ternarnom kompleksu, dvojna struktura tracrRNK:crRNK deluje kao RNK vodič koji usmerava endonukleazu Cas9 na srodnu ciljnu sekvencu. Prepoznavanje cilja od strane kompleksa Cas9-tracrRNK:crRNK započinje skeniranjem ciljne sekvence na homologiju između ciljne sekvence i crRNK. Pored komplementarnosti ciljne sekvence-crRNK, ciljanje DNK zahteva prisustvo kratkog motiva pored protospejsera (motiv susedan protospejseru - PAM). Nakon uparivanja dvojne RNK i ciljne sekvence, Cas9 uvodi pucanje dvostrukog lanca sa tupim krajem 3 baze ushodno od PAM motiva (Garneau, Dupuis i dr.2010).
[0052] Retke restrikcione endonukleaze mogu biti homing endonukleaze, koje su poznate i pod nazivom meganukleaze. Takve homing endonukleaze su dobro poznate u struci (Stoddard 2005). Homing endonukleaze prepoznaju ciljnu sekvencu DNK i dovode do pucanja jednostrukog ili dvostrukog lanca. Homing endonukleaze su veoma specifične, i prepoznaju ciljna mesta DNK sa dužinom u rasponu od 12 do 45 baznih parova (bp), obično sa dužnom u rasponu od 14 do 40 bp. Homing endonukleaza prema pronalasku može, na primer, da se odnosi na LAGLIDADG endonukleazu, na HNH endonukleazu, ili na GIY-YIG endonukleazu. Poželjna homing endonukleaza prema predmetnom pronalasku može biti I-Crel varijanta.
• Pod „vektorom za isporučivanje“ ili „vektorima za isporučivanje“ misli se na bilo koji vektor za isporučivanje koji može da se koristi u predmetnom pronalasku za dovođenje u ćelijski kontakt (tj. „kontaktiranje“) ili isporučivanje u ćelije ili subćelijske delove (tj. „uvođenje“) agensa/hemikalija i molekula (proteini ili nukleinske kiseline) koji su potrebni u predmetnom pronalasku. Oni obuhvataju, ali nisu ograničeni na vektore za isporučivanje lipozoma, vektore za isporučivanje virusa, vektore za isporučivanje lekova, hemijske nosače, polimerne nosače, lipoplekse, poliplekse, dendrimere, mikromehuriće (agensi za ultrazvučni kontrast), nanočestice, emulzije, ili druge odgovarajuće vektore za prenos. Ovi vektori za isporučivanje omogućavaju isporučivanje molekula, hemikalija, makromolekula, (geni, proteini) ili drugih vektora kao što su plazmidi, peptidi koje je razvila kompanija Diatos. U tim slučajevima, vektori za isporučivanje su molekulski nosači. Pod „vektorom za isporučivanje“ ili „vektorima za isporučivanje“ takođe se misli na postupke za isporuku za obavljanje transfekcije.
• Termini „vektor“ ili „vektori“ odnose se na molekul nukleinske kiseline koji je sposoban da transportuje drugu nukleinsku kiselinu sa kojom je povezan. „Vektor“ u predmetnom pronalasku uključuje, ali nije ograničen na, virusni vektor, plazmid, RNK vektor ili linearni ili cirkularni DNK ili RNK molekul koji može da se sastoji od hromozomskih, nehromozomskih, polu-sintetičkih ili sintetičkih nukleinskih kiselina. Poželjni vektori su oni koji su sposobni za autonomnu replikaciju (epizomalni vektori) i/ili ekspresiju nukleinskih kiselina za koje su vezani (ekspresioni vektori). Stručnjacima za oblast je poznat veliki broj pogodnih vektora, i oni su komercijalno dostupni.
[0053] Virusni vektori uključuju retrovirus, adenovirus, parvovirus (npr. adenoasocirani virus), koronavirus, viruse negativnog lanca RNK kao što je ortomiksovirus (npr. virus influence), rabdovirus (npr. besnilo i vezikularni stomatitis), paramiksovirus (npr. morbili i Sendai virus), viruse pozitivnog lanca RNK kao što je pikornavirus i alfavirus, i dvolančane DNK viruse uključujući adenovirus, herpes virus (npr. herpes simplex virus tipa 1 i 2, Epštajn-Barov virus, citomegalovirus) i poks virus (npr. vakcinija, poks virus živine i poks virus kanarinaca). Drugi virusi, na primer, uključuju norovirus, togavirus, flavivirus, reoviruse, papovavirus, hepadnavirus i virus hepatitisa. Primeri za retroviruse uključuju, ptičji leukoza-sarkom, viruse sisara tipa C, viruse tipa B, viruse tipa D, HTLV-BLV grupu, lentivirus, spumavirus (Coffin, J. M., Retroviridae: The viruses and their replication, In Fundamental Virology, treće izdanje, B. N. Fields, et al., Eds., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996).
• Pod „lentivirusnim vektorom“ misli se na lentivirusne vektore na bazi HIV koji su veoma perspektivni za isporuku gena zbog svog relativno velikog kapaciteta za pakovanje, smanjene imunogenosti i njihove sposobnosti da stabilno transdukuju veliki raspon različitih vrsta ćelija uz veliku efikasnost. Lentivirusni vektori se obično dobijaju nakon prolazne transfekcije tri (pakovanje, omotač i transfer) ili više plazmida u proizvodnu ćeliju. Poput HIV, lentivirusni vektori ulaze u ciljnu ćeliju putem interakcije glikoproteina površine virusa sa receptorima na ćelijskoj površini. Po ulasku, virusna RNK prolazi reversnu transkripciju, koja je posredovana kompleksom virusne reversne transkriptaze. Proizvod reversne transkripcije je dvolančana linearna virusna DNK, koja je supstrat za virusnu integraciju u DNK inficiranih ćelija. Pod „integrativnim lentivirusnim vektorom (ili LV)“ misli se, u vidu neograničavajućeg primera, na vektore koji su sposobni da integrišu genom ciljne ćelije. Nasuprot tome, pod „neintegrativnim lentivirusnim vektorom (ili NILV)“ misli se na efikasne vektore za isporučivanje gena koji ne integrišu genom ciljne ćelije putem dejstva virusne integraze.
• Vektori za isporučivanje i vektori mogu da se povezuju ili kombinuju bilo kojim tehnikama za permeabilizaciju, kao što su sonoporacija ili elektroporacija, ili derivati tih tehnika.
• Pod ćelijom ili ćelijama misli se na bilo koje žive eukariotske ćelije, primarne ćelije i ćelijske linije dobijene od tih organizama za in vitro uzgajanje.
• Pod „primarnom ćelijom“ ili „primarnim ćelijama“ misli se na ćelije koje su uzete direktno iz živog tkiva (tj. materijal iz biopsije) i predviđene za rast in vitro, koje su prošle veoma malo udvostručavanja populacije te su stoga reprezentativnije za glavne funkcionalne komponente i karakteristike tkiva iz kojih su dobijene, u poređenju sa neprekidno tumorigenim ili veštački imortalizovanim ćelijskim linijama.
[0054] U vidu neograničavajućih primera, ćelijske linije mogu biti izabrane iz grupe koja se sastoji od CHO-K1 ćelija; HEK293 ćelija; Caco2 ćelija; U2-OS ćelija; NIH 3T3 ćelija; NSO ćelija; SP2 ćelija; CHO-S ćelija; DG44 ćelija; K-562 ćelija, U-937 ćelija; MRC5 ćelija; IMR90 ćelija; Jurkatovih ćelija; HepG2 ćelija; HeLa ćelija; HT-1080 ćelija; HCT-116 ćelija; Hu-h7 ćelija; Huvec ćelija; Molt 4 ćelija.
[0055] Sve ove ćelijske linije mogu da se modifikuju postupkom iz predmetnog pronalaska da bi se dobili modeli ćelijskih linija za proizvodnju, ekspresiju, kvantifikaciju, detekciju, proučavanje gena ili proteina od interesa. Ti modeli takođe mogu da se koriste za ispitivanje biološki aktivnih molekula od interesa u istraživanju i proizvodnji i različitim oblastima kao što su hemikalije, biološka goriva, lekovi i agronomija, kao neki od primera.
• Pod „mutacijom“ se misli na supstituciju, deleciju, inserciju do jednog, dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset, jedanaest, dvanaest, trinaest, četrnaest, petnaest, dvadeset, dvadeset pet, trideset, četrdeset, pedeset ili više nukleotida/aminokiselina u sekvenci polinukleotida (kDNK, gen) ili polipeptida. Mutacija može da utiče na kodiranje sekvence gena ili njegove regulatorne sekvence. Ona takođe može da utiče na strukturu genomske sekvence ili na strukturu/stabilnost kodirane iRNK.
• Pod „varijantama“ se misli na ponovljenu varijantu, varijantu, DNK vezujuću varijantu, TALE-nukleaznu varijantu, polipeptidnu varijantu dobijenu mutacijom ili zamenom najmanje jednog ostatka u aminokiselinskoj sekvenci matičnog molekula.
• Pod „funkcionalnom varijantom“ se misli na katalitički aktivan mutant proteina ili domena proteina. Takav mutant može da ima istu aktivnost u poređenju sa svojim matičnim proteinom ili domenom proteina, ili dodatna svojstva, ili veću ili manju aktivnost.
• „Identičnost“ se odnosi na identitet sekvence između dva molekula nukleinske kiseline ili polipeptida. Identičnost može da se odredi putem poređenja pozicija u svakoj sekvenci koje mogu biti poravnate u svrhe poređenja. Kada se na poziciji koja se poredi nalazi ista baza, molekuli su onda identični na toj poziciji. Stepen sličnosti ili identičnosti između sekvenci nukleinske kiseline ili aminokiseline je funkcija broja identičnih ili poklapajućih nukleotida na pozicijama koje dele sekvence nukleinske kiseline. Različiti algoritmi i/ili programi za poravnavanje mogu da se koriste za izračunavanje identičnosti između dve sekvence, uključujući FASTA ili BLAST, koji su dostupni u okviru GGG paketa za analizu sekvenci (University of Wisconsin, Madison, Wis.), i mogu da se koriste, npr. sa podrazumevanim podešavanjima. Na primer, razmatrani su polipeptidi koji imaju najmanje 70%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% identičnosti sa specifičnim polipeptidima koji su ovde opisani, i poželjno pokazuju suštinski iste funkcije, kao i polinukleotid koji kodira takve peptide.
„Sličnost“ opisuje odnos između aminokiselinske sekvence dva ili više polipeptida. BLASTP takođe može da se koristi da se identifikuje aminokiselinska sekvenca koja ima najmanje 70%, 75%, 80%, 85%, 87,5%, 90%, 92,5%, 95%, 97,5%, 98%, 99% sličnosti sekvence sa referentnom aminokiselinskom sekvencom koristeći matricu sličnosti kao što je BLOSUM45, BLOSUM62 ili BLOSUM80. Osim ako nije drugačije naznačeno, ocena sličnosti će se zasnivati na upotrebi BLOSUM62. Kada se koristi BLASTP, procenat sličnosti se zasniva na BLASTP pozitivnoj oceni, a procenat identičnosti sekvence na BLASTP oceni identičnosti. BLASTP „identičnosti“ pokazuju broj i udeo ukupnih ostataka u visoko ocenjenim parovima sekvenci koji su identični, a BLASTP „pozitivne ocene“ pokazuju broj i udeo ostataka za koje ocene slaganja imaju pozitivne vrednosti i međusobno su slični. Razmatrane su aminokiselinske sekvence koje imaju ove stepene identičnosti ili sličnosti, ili bilo koji međustepen identičnosti ili sličnosti sa aminokiselinskim sekvencama koja su ovde otkrivene, i one su obuhvaćene ovim otkrićem. Polinukleotidne sekvence sličnih polipeptida se određuju koristeći genetski kod, i mogu da se dobiju uobičajenim putem. Polinukleotid koji kodira takvu funkcionalnu varijantu proizvodi se reversnom translacijom njegove aminokiselinske sekvence koristeći genetski kod.
„Domen transdukcije signala“ ili „kostimulatorni ligand“ odnosi se na molekul na antigenu koji prezentuje ćeliju koja se specifično vezuje za srodni kostimulatorni molekul na T-ćeliji, čime se dobija signal koji, pored primarnog signala koji obezbeđuje, npr. vezivanje TCR/CD3 kompleksa sa MHC molekulom na koji je nanet peptid, posreduje u T ćelijskom odgovoru, uključujući, ali se ne ograničavajući na, aktivaciju proliferacije, diferencijaciju, i slično. Kostimulatorni ligand može da uključuje, ali nije ograničen na CD7, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), PD-L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, inducibilni kostimulatorni ligand (ICOS-L), intracelularni adhezioni molekul (ICAM, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, M1CB, HVEM, limfotoksinski beta receptor, 3/TR6, ILT3, ILT4, agonist ili antitelo koje se vezuje za receptor zvonastog liganda i ligand koji se specifično vezuje za B7-H3.
Kostimulatorni ligand takođe uključuje, između ostalog, antitelo koje se specifično vezuje za kostimulatorni molekul koji je prisutan na T ćeliji, kao što je, bez ograničenja, CD27, CD28, 4-IBB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, limfocitni antigen povezan sa funkcijom-1 (LFA-1), CD2, CD7, LTGHT, NKG2C, B7-H3, ligand koji se specifično vezuje za CD83.
[0056] „Kostimulatorni molekul“ se odnosi na srodni vezujući partner na T ćeliji koji se specifično vezuje sa kostimulatornim ligandom, čime se posreduje kostimulatorni odgovor ćelije, kao što je, bez ograničenja, proliferacija. Kostimulatorni molekuli uključuju, ali nisu ograničeni na molekul MHC klase I, BTLA i receptor zvonastog liganda.
[0057] „Kostimulatorni signal“, kako se ovde koristi, odnosi se na signal koji, u kombinaciji sa primarnim signalom, kao što je TCR/CD3 ligacija, dovodi do T ćelijske proliferacije i/ili ushodne ili nishodne regulacije ključnih molekula.
Termin „ekstracelularni domen koji vezuje ligand“, kako se ovde koristi, definiše se kao oligo- ili polipeptid koji je sposoban da vezuje ligand. Poželjno, domen će biti sposoban da interaguje sa molekulom ćelijske površine. Na primer, ekstracelularni domen koji vezuje ligand može biti izabran da prepoznaje ligand koji deluje kao marker ćelijske površine na ciljnim ćelijama koje su povezane sa određenim oboljenjem. Tako, primeri markera ćelijske površine koji mogu da deluju kao ligand uključuju one koji su povezani sa virusnim, bakterijskim i parazitskim infekcijama, autoimunim bolestima i ćelijama kancera.
[0058] Termin „ispitanik“ ili „pacijent“, kako se ovde koristi, obuhvata sve pripadnike životinjskog carstva, uključujući nehumane primate i ljude.
[0059] Prethodno napisani opis ovog pronalaska daje način i postupak njegove proizvodnje i upotrebe na takav način da svaka osoba sa znanjem i veštinama u ovoj oblasti može da ga proizvede i koristi, i ta mogućnost je pre svega obezbeđena za sadržaj priloženih zahteva, koji čine deo originalnog opisa.
[0060] Kada je u ovom tekstu dato numeričko ograničenje ili raspon, obuhvaćene su i granične vrednosti. Takođe, sve vrednosti i podrasponi u okviru numeričkog ograničenja ili raspona su specifično uključeni kao da su izričito napisani.
[0061] Pošto smo generalno opisali ovaj pronalazak, dodatno razumevanje se može ostvariti uvidom u određene specifične primere, koji su ovde dati samo u svrhe ilustracije, i ne treba ih tumačiti kao ograničenje osim ako nije navedeno drugačije.
Primeri
Primer 1: Proliferacija TCRalfa inaktiviranih ćelija koje eksprimiraju 4G7-CAR.
[0062] Konstruisana je i proizvedena heterodimerna TALE-nukleaza koja cilja dve sekvence dužine 17 bp (nazivaju se poluciljevi) razdvojene spejserom od 15 bp unutar gena alfa lanca konstantnog regiona T-ćelijskog receptora alfa (TRAC). Svaki polucilj je prepoznat od strane ponavljanja pola TALE-nukleaza koje su navedene u Tabeli 1.
[0063] Svaki konstrukt TALE-nukleaze je potkloniran koristeći digestiju restrikcionog enzima u ekspresionom vektoru sisara pod kontrolom T7 promotera. iRNK koje kodiraju TALE-nukleazu, koja kodira TRAC genomske sekvence, sintetisane su od plazmida koji nosi kodirajuću sekvencu nishodno od T7 promotera.
[0064] Prečišćene T ćelije koje su prethodno aktivirane tokom 72 sata sa perlicama premazanim sa antiCD3/CD28 transficirane su sa 2 iRNK koje kodiraju obe polovine TRAC_T01 TALE-nukleaze. 48 sata nakon transfekcije, T ćelije su transdukovane lentivirusnim vektorom koji kodira 4G7-CAR (SEQ ID NO: 14).2 dana nakon transdukcije, CD3NEGnegativne ćelije su prečišćene koristeći anti-CD3 magnetne perlice, i, 5 dana nakon transdukcije, ćelije su ponovo aktivirane sa rastvorljivim anti-CD28 (5 µg/ml).
[0065] Ćelijska proliferacija je praćena do 30 dana nakon reaktivacije putem prebrojavanja ćelija 2 puta nedeljno. Slika 1 prikazuje red veličine indukcije ćelijskog broja u pogledu količine ćelija koje su prisutne 2. dana nakon reaktivacije za dva različita donora. Povećana proliferacija u ćelijama koje su inaktivirane sa TCR alfa i ekprimiraju 4G7-CAR, naročito kada su reaktivirane sa anti-CD28, uočena je u odnosu na netransdukovane ćelije.
[0066] Da bi se ispitalo da li humane T ćelije koje eksprimiraju 4G7-CAR pokazuju aktivirano stanje, ekspresija aktivacionog markera CD25 je analizirana putem FACS analize 7 dana nakon transdukcije. Kao što je naznačeno na Slici 2, prečišćene ćelije transdukovane lentivirusnim vektorom koje kodiraju 4G7-CAR eksprimirale su znatno više CD25 na svojoj površini nego netransdukovane ćelije. Povećana ekspresija CD25 je uočena i u uslovima CD28 reaktivacije i u uslovima bez reaktivacije.
Primer 2: Poređenje osnovne aktivacije primarnih humanih T ćelija koje eksprimiraju 4G7-CAR i klasični FMC63-CAR.
[0067] Kako bi se odredilo da li 4G7 scFV omogućava produženo „aktivirano“ stanje na transdukovanoj ćeliji, poređena je osnovna aktivacija T ćelija transdukovanih sa CAR koji ima 4G7 scFV (SEQ ID NO: 17 kodirani SEQ ID NO: 15) ili klasični FMC63 scFV (SEQ ID NO: 16).
[0068] Prečišćene humane T ćelije su transdukovane prema sledećem protokolu: ukratko, 1×10<6>CD3+ ćelija koje su prethodno aktivirane tokom 3 dana sa perlicama koje su premazane sa anti-CD3/CD28 i rekombinantnim IL2, transdukovano je sa lentivirusnim vektorima koji kodiraju 4G7-CAR (SEQ ID NO: 15) i FMC63-CAR (SEQ ID NO: 16) sa multiplicitetom infekcije (MOI) 5 u pločama sa 12 bunarčića koje nisu za uzgajanje tkiva, i premazane su sa 30 µg/ml retronektina.24 sata nakon transdukcije, medijum je uklonjen i zamenjen svežim medijumom. Ćelije su zatim održavane u koncentraciji od 1×10<6>ćelija/ml tokom celog perioda uzgajanja putem prebrojavanja ćelija na svaka 2 do 3 dana.
[0069] 3, 8 i 15 dana nakon transdukcije lentivirusnim vektorom koji kodira 4G7-CAR ili FMC63-CAR, procenat ćelija koje eksprimiraju CAR je procenjen pomoću protočne citometrije. Uočeno je da je efikasnost transdukcije relativno ista sa dva lentivirusna vektora Slika 3.
[0070] Zatim je ispitano da li su humane T ćelije koje eksprimiraju 4G7-CAR ispoljavale više aktivirano stanje nego humane T ćelije koje eksprimiraju FMC63-CAR. U tu svrhu, ekspresija aktivacionog markera CD25 je upoređena na površini T ćelija koje su transdukovane sa 2 lentivirusna vektora u različitim terminima. Kao što je naznačeno na Slici 4, 3 i 8 dana nakon transdukcije, ćelije koje su transdukovane sa lentivirusnim vektorom koji kodira 4G7-CAR eksprimirale su znatno više CD25 na svojoj površini nego ćelije koje su transdukovane sa lentivirusnim vektorom koji kodira FMC63-CAR.
[0071] Veličina ćelija koje su transdukovane sa 4G7-CAR ili FMC63-CAR takođe je procenjena pomoću protočne citometrije u različitim terminima. Uočeno je da su ćelije koje eksprimiraju 4G7-CAR bile veće nego ćelije koje eksprimiraju FMC63-CAR 3, 8 i 15 dana nakon transdukcije Slika 5.
[0072] Nakon nespecifične aktivacije in vitro, ćelije koje su transdukovane sa 4G7-CAR pokazuju povećanu veličinu ćelije (nastanak blasta) kao i ekspresiju aktivacionih markera (CD25) u dužem vremenskom periodu. Ova dugoročna aktivacija omogućava produženu proliferaciju u odnosu na ćelije koje su transdukovane sa sličnim CAR koji sadrži FMC63 ScFv.
Primer 3: Poređenje proliferacije primarnih humanih T ćelija koje eksprimiraju 4G7-CAR i klasični FMC63-CAR.
[0073] Kako bi se odredilo da li 4G7 scFV omogućava veću aktivnost proliferacije, proliferacija T ćelija koje su transdukovane sa CAR koji ima 4G7 scFV (SEQ ID NO: 17 kodirani SEQ ID NO: 15) ili klasični FMC63 scFV (SEQ ID NO: 16) praćena je do 20 dana putem prebrojavanja ćelija dva puta nedeljno. Prečišćene humane T ćelije su transdukovane prema sledećem protokolu: ukratko, 1×10<6>CD3+ ćelija koje su prethodno aktivirane tokom 3 dana sa perlicama koje su premazane sa anti-CD3/CD28 i rekombinantnim IL2 je transdukovano sa lentivirusnim vektorima koji kodiraju 4G7-CAR (SEQ ID NO: 15) i FMC63-CAR (SEQ ID NO: 16). Ćelije su zatim održavane u klasičnim uslovima i reaktivirane su 12. dana. Ćelije su zasejane sa istom gustinom, i prebrojavane su dva puta nedeljno tokom 20 dana. Kao što je prikazano na slici 6, proliferaciona aktivnost T ćelija koje eksprimiraju 4G7-CAR je dvostruko veća u poređenju sa aktivnošću ćelija koje eksprimiraju klasični FMC63-CAR.
REFERENCE
[0074]
Arimondo, P. B., C. J. Thomas, i dr. (2006). "Exploring the cellular activity of camptothecintriple-helix-forming oligonucleotide conjugates." Mol Cell Biol 26(1): 324-33.
Atkins, J. F., N. M. Wills, i dr. (2007). "A case for "StopGo": reprogramming translation to augment codon meaning of GGN by promoting unconventional termination (Stop) after addition of glycine and then allowing continued translation (Go)." Rna 13(6): 803-10.
Bierer, B. E., G. Hollander, i dr. (1993). "Cyclosporin A and FK506: molecular mechanisms of immunosuppression and probes for transplantation biology." Curr Opin Immunol 5(5): 763-73.
Boch, J., H. Scholze, i dr. (2009). "Breaking the code of DNA binding specificity of TAL-type III effectors." Science 326(5959): 1509-12.
Choulika, A., A. Perrin, i dr. (1995). "Induction of homologous recombination in mammalian chromosomes by using the I-Scel system of Saccharomyces cerevisiae." Mol Cell Biol 15(4): 1968-73.
Christian, M., T. Cermak, i dr. (2010). "Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases." Genetics 186(2): 757-61.
Cong, L., F. A. Ran, i dr. (2013). "Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems." Science 339(6121): 819-23.
Deltcheva, E., K. Chylinski, i dr. (2011). "CRISPR RNA maturation by trans-encoded small RNA and host factor RNase III." Nature 471(7340): 602-7.
Donnelly, M. i G. Elliott (2001). "Nuclear localization and shuttling of herpes simplex virus tegument protein VP13/14." J Virol 75(6): 2566-74.
Doronina, V. A., C. Wu, i dr. (2008). "Site-specific release of nascent chains from ribosomes at a sense codon." Mol Cell Biol 28(13): 4227-39.
Eisenschmidt, K., T. Lanio, i dr. (2005). "Developing a programmed restriction endonuclease for highly specific DNA cleavage." Nucleic Acids Res 33(22): 7039-47.
Garneau, J. E., M. E. Dupuis, i dr. (2010). "The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA." Nature 468(7320): 67-71.
Gasiunas, G., R. Barrangou, i dr. (2012). "Cas9-crRNA ribonucleoprotein complex mediates specific DNA cleavage for adaptive immunity in bacteria." Proc Natl Acad Sci U S A 109(39): E2579-86.
Henderson, D. J., I. Naya, i dr. (1991). "Comparison of the effects of FK-506, cyclosporin A and rapamycin on IL-2 production." Immunology 73(3): 316-21.
Jena, B., G. Dotti, i dr. (2010). "Redirecting T-cell specificity by introducing a tumor-specific chimeric antigen receptor." Blood 116(7): 1035-44.
Jinek, M., K. Chylinski, i dr. (2012). "A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity." Science 337(6096): 816-21.
Kalish, J. M. i P. M. Glazer (2005). "Targeted genome modification via triple helix formation." Ann N Y Acad Sci 1058: 151-61.
Li, T., S. Huang, i dr. (2011). "TAL nucleases (TALNs): hybrid proteins composed of TAL effectors and Fokl DNA-cleavage domain." Nucleic Acids Res 39(1): 359-72.
Liu, J., M. W. Albers, i dr. (1992). "Inhibition of T cell signaling by immunophilin-ligand complexes correlates with loss of calcineurin phosphatase activity." Biochemistry 31(16): 3896-901.
Mali, P., L. Yang, i dr. (2013). "RNA-guided human genome engineering via Cas9." Science 339(6121): 823-6.
Moscou, M. J. i A. J. Bogdanove (2009). "A simple cipher governs DNA recognition by TAL effectors." Science 326(5959): 1501.
Paques, F. i P. Duchateau (2007). "Meganucleases and DNA double-strand break-induced recombination: perspectives for gene therapy." Curr Gene Ther 7(1): 49-66.
Park, T. S., S. A. Rosenberg, i dr. (2011). "Treating cancer with genetically engineered T cells." Trends Biotechnol 29(11): 550-7.
Peipp, M., D. Saul, i dr. (2004). "Efficient eukaryotic expression of fluorescent scFv fusion proteins directed against CD antigens for FACS applications." J Immunol Methods 285(2): 265-80.
Perrin, A., M. Buckle, i dr. (1993). "Asymmetrical recognition and activity of the I-Scel endonuclease on its site and on intron-exon junctions." Embo J 12(7): 2939-47.
Pingoud, A. i G. H. Silva (2007). "Precision genome surgery." Nat Biotechnol 25(7): 743-4. Porteus, M. H. i D. Carroll (2005). "Gene targeting using zinc finger nucleases." Nat Biotechnol 23(8): 967-73.
Rouet, P., F. Smih, i dr. (1994). "Introduction of double-strand breaks into the genome of mouse cells by expression of a rare-cutting endonuclease." Mol Cell Biol 14(12): 8096-106. Sorek, R., C. M. Lawrence, i dr. (2013). "CRISPR-mediated Adaptive Immune Systems in Bacteria and Archaea." Annu Rev Biochem.
Stoddard, B. L. (2005). "Homing endonuclease structure and function." Q Rev Biophys 38(1): 49-95.

Claims (16)

Patentni zahtevi
1. Kompozicija za upotrebu u kombinovanoj terapiji koja sadrži: (a) projektovanu T-ćeliju koja eksprimira CD19-specifičan himerni antigenski receptor (CAR), koji sadrži najmanje ekstracelularni domen koji vezuje ligand specifičan za CD19, transmembranski domen i najmanje jedan intracelularni signalni domen; pri čemu navedeni ekstracelularni domen sadrži jednolančani FV fragment izveden iz monoklonskog antitela 4G7, specifičnog za CD19, pomenuti jednolančani FV fragment sadrži varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 imunoglobulinskog gama 1 teškog lanca SEQ ID NO: 3 i varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 imunoglobulinskog kapa lakog lanca SEQ ID NO: 4 ili SEQ ID NO: 5; i (b) antitelo alemtuzumab.
2. Kompozicija za upotrebu prema zahtevu 1, naznačena time što pomenuti jednolančani FV fragment sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 ili 8.
3. Kompozicija za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, naznačena time što je najmanje jedan intracelularni signalni domen CD19-specifičnog CAR-a CD3 zeta signalni domen koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10.
4. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 3, naznačena time što transmembranski domen CD19-specifičnog CAR-a obuhvata humani transmembranski CD8 alfa lanac i domen stabljike koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13.
5. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 4, naznačena time što CD19-specifičan CAR sadrži drugi intracelularni signalni domen.
6. Kompozicija za upotrebu prema zahtevu 5, naznačena time što drugi intracelularni signalni domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11.
7. Kompozicija za upotrebu prema zahtevu 1, naznačena time što CD19-specifičan CAR sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14 ili 15.
8. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 7, naznačena time što je projektovana T-ćelija genetski modifikovana inaktivacijom gena koji kodira TCRalfa, TCRbeta, CD52, GR, PD1 ili CTLA-4.
9. Konstruisana T-ćelija koja eksprimira CD19-specifičan himerni antigenski receptor (CAR), koji sadrži najmanje jedan ekstracelularni domen koji vezuje ligand specifičan za CD19, transmembranski domen i najmanje jedan intracelularni signalni domen; pri čemu pomenuti ekstracelularni domen sadrži jednolančani FV fragment izveden iz monoklonskog antitela 4G7, specifičnog za CD19, pomenuti jednolančani FV fragment sadrži varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 imunoglobulinskog gama 1 teškog lanca SEQ ID NO: 3 i varijabilni fragment CD19 monoklonskog antitela 4G7 imunoglobulinskog kapa lakog lanca SEQ ID NO: 4 ili SEQ ID NO: 5, za upotrebu u kombinaciji sa antitelom alemtuzumabom u postupku lečenja raka kod subjekta kom je to potrebno, te postupak obuhvata: davanje subjektu antitela alemtuzumaba; i davanje subjektu projektovane T-ćelije.
10. Konstruisana T-ćelija za upotrebu prema zahtevu 9, naznačena time što pomenuti jednolančani FV fragment sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 ili 8.
11. Konstruisana T-ćelija za upotrebu prema zahtevu 9 ili 10, naznačena time što je najmanje jedan intracelularni signalni domen CD19-specifičnog CAR-a CD3 zeta signalni domen koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10.
12. Konstruisana T-ćelija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 9 do 11, naznačena time što transmembranski domen CD19-specifičnog CAR obuhvata humani transmembranski CD8 alfa lanac i domen stabljike koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13.
13. Konstruisana T-ćelija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 9 do 12, naznačena time što CD19-specifičan CAR sadrži drugi intracelularni signalni domen.
14. Konstruisana T-ćelija za upotrebu prema zahtevu 13, naznačena time što drugi intracelularni signalni domen sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11.
15. Konstruisana T-ćelija za upotrebu prema zahtevu 9, naznačena time što CD19-specifičan CAR sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14 ili 15.
16. Konstruisana T-ćelija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 9 do 15, naznačena time što je projektovana T-ćelija genetski modifikovana inaktivacijom gena koji kodira TCRalfa, TCRbeta, CD52, GR, PD1 ili CTLA-4.
RS20240486A 2013-05-13 2014-05-12 Cd19 specifični himerni antigenski receptor i njegove primene RS65484B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US2013/040766 WO2013176916A1 (en) 2012-05-25 2013-05-13 Use of pre t alpha or functional variant thereof for expanding tcr alpha deficient t cells
PCT/US2013/040755 WO2013176915A1 (en) 2012-05-25 2013-05-13 Methods for engineering allogeneic and immunosuppressive resistant t cell for immunotherapy
US13/892,805 US11603539B2 (en) 2012-05-25 2013-05-13 Methods for engineering allogeneic and immunosuppressive resistant T cell for immunotherapy
US201361888259P 2013-10-08 2013-10-08
EP19161861.0A EP3546572B9 (en) 2013-05-13 2014-05-12 Cd19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS65484B1 true RS65484B1 (sr) 2024-05-31

Family

ID=51897790

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240486A RS65484B1 (sr) 2013-05-13 2014-05-12 Cd19 specifični himerni antigenski receptor i njegove primene
RS20221084A RS63798B1 (sr) 2013-05-13 2014-05-12 Cd19 specifični himerni antigenski receptor i njegove primene

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20221084A RS63798B1 (sr) 2013-05-13 2014-05-12 Cd19 specifični himerni antigenski receptor i njegove primene

Country Status (29)

Country Link
US (2) US20210000869A9 (sr)
EP (3) EP3546572B9 (sr)
JP (2) JP6491643B2 (sr)
KR (1) KR102248157B1 (sr)
CN (2) CN109897100A (sr)
AU (2) AU2014267436B2 (sr)
BR (1) BR112015028387B1 (sr)
CA (1) CA2911292C (sr)
DK (1) DK3546572T3 (sr)
EA (2) EA036200B1 (sr)
ES (2) ES2930431T3 (sr)
FI (2) FI2997141T3 (sr)
HR (2) HRP20221393T1 (sr)
HU (2) HUE060901T2 (sr)
LT (2) LT2997141T (sr)
MA (1) MA38630B2 (sr)
MX (1) MX374681B (sr)
MY (1) MY172897A (sr)
PH (1) PH12015502479B1 (sr)
PL (2) PL2997141T3 (sr)
PT (2) PT2997141T (sr)
RS (2) RS65484B1 (sr)
RU (1) RU2727447C2 (sr)
SA (1) SA515370135B1 (sr)
SG (2) SG11201508805UA (sr)
SI (2) SI3546572T1 (sr)
TW (1) TWI636992B (sr)
UA (1) UA118106C2 (sr)
WO (1) WO2014184143A1 (sr)

Families Citing this family (116)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2734621B1 (en) 2011-07-22 2019-09-04 President and Fellows of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
US10704021B2 (en) 2012-03-15 2020-07-07 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic perfusion devices
SG10201806573TA (en) 2012-05-25 2018-09-27 Cellectis Methods for engineering allogeneic and immunosuppressive resistant t cell for immunotherapy
US11077144B2 (en) 2013-05-13 2021-08-03 Cellectis CD19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
US9163284B2 (en) 2013-08-09 2015-10-20 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a Cas9 nuclease
US9359599B2 (en) 2013-08-22 2016-06-07 President And Fellows Of Harvard College Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof
US9322037B2 (en) 2013-09-06 2016-04-26 President And Fellows Of Harvard College Cas9-FokI fusion proteins and uses thereof
US9340800B2 (en) 2013-09-06 2016-05-17 President And Fellows Of Harvard College Extended DNA-sensing GRNAS
US9526784B2 (en) 2013-09-06 2016-12-27 President And Fellows Of Harvard College Delivery system for functional nucleases
JP2016536021A (ja) 2013-11-07 2016-11-24 エディタス・メディシン，インコーポレイテッド ＣＲＩＳＰＲ関連方法および支配ｇＲＮＡのある組成物
US20150165054A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Methods for correcting caspase-9 point mutations
EP3808410A1 (en) 2013-12-20 2021-04-21 Cellectis Method of engineering multi-input signal sensitive t cell for immunotherapy
US10189908B2 (en) 2014-02-05 2019-01-29 The University Of Chicago Chimeric antigen receptors recognizing cancer-specific TN glycopeptide variants
GB201405845D0 (en) 2014-04-01 2014-05-14 Ucl Business Plc Signalling system
CA2956224A1 (en) 2014-07-30 2016-02-11 President And Fellows Of Harvard College Cas9 proteins including ligand-dependent inteins
GB201415347D0 (en) 2014-08-29 2014-10-15 Ucl Business Plc Signalling system
WO2016062898A1 (en) * 2014-10-24 2016-04-28 Bcrt Holding Bv T cell-based immunotherapeutics
EP3233095A2 (en) * 2014-12-17 2017-10-25 Cellectis INHIBITORY CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (iCAR OR N-CAR) EXPRESSING NON-T CELL TRANSDUCTION DOMAIN
PT3560953T (pt) 2014-12-24 2024-03-26 Autolus Ltd Célula
JP7264592B2 (ja) 2015-01-26 2023-04-25 ザ ユニバーシティー オブ シカゴ ＩＬ１３Ｒα２結合剤及び癌治療におけるその使用
US20180002435A1 (en) 2015-01-26 2018-01-04 Cellectis mAb-DRIVEN CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR SYSTEMS FOR SORTING/DEPLETING ENGINEERED IMMUNE CELLS
WO2016123143A1 (en) 2015-01-26 2016-08-04 The University Of Chicago CAR T-CELLS RECOGNIZING CANCER-SPECIFIC IL 13Rα2
KR102632082B1 (ko) 2015-02-27 2024-02-02 아이셀 진 테라퓨틱스 엘엘씨 혈액 악성종양을 표적으로 하는 키메라 항원 수용체(car), 조성물 및 이의 용도
GB201503742D0 (en) * 2015-03-05 2015-04-22 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
JP6921001B2 (ja) 2015-04-13 2021-08-18 ファイザー・インク Ｂ細胞成熟抗原を標的にするキメラ抗原受容体
GB201507115D0 (en) * 2015-04-27 2015-06-10 Ucl Business Plc Nucleic Acid Construct
US11708572B2 (en) 2015-04-29 2023-07-25 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic cell separation techniques and processes
MX2017014822A (es) 2015-05-18 2018-04-30 Tcr2 Therapeutics Inc Composiciones y métodos para la reprogramación del tcr con proteínas de fusión.
CN104829733B (zh) * 2015-05-25 2018-06-05 广州百暨基因科技有限公司 抗原结合单元稳定的嵌合抗原受体及制备方法与应用
JP6961497B2 (ja) 2015-06-25 2021-11-05 アイセル・ジーン・セラピューティクス・エルエルシー キメラ抗体受容体（ＣＡＲｓ）の構成およびその使用方法
US11173179B2 (en) 2015-06-25 2021-11-16 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptor (CAR) targeting multiple antigens, compositions and methods of use thereof
WO2017001572A1 (en) * 2015-06-30 2017-01-05 Cellectis Methods for improving functionality in nk cell by gene inactivation using specific endonuclease
MX2018001776A (es) 2015-08-11 2018-06-06 Cellectis Celulas para inmunoterapia modificadas geneticamente para dirigirse al antigeno cd38 y para la inactivacion del gen cd38.
KR102739782B1 (ko) * 2015-09-11 2024-12-09 더 보드 오브 트러스티스 오브 더 리랜드 스탠포드 쥬니어 유니버시티 생물학적으로 관련된 직교 사이토카인/수용체 쌍
RU2757135C2 (ru) 2015-09-24 2021-10-11 АБВИТРО ЭлЭлСи Композиции антител к вич и способы их применения
EP4434589A3 (en) 2015-10-23 2025-05-14 President and Fellows of Harvard College Evolved cas9 proteins for gene editing
CN108472365A (zh) 2015-10-30 2018-08-31 艾丽塔生物治疗剂公司 用于肿瘤转导的组合物和方法
WO2017075537A1 (en) * 2015-10-30 2017-05-04 Aleta Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for treatment of cancer
GB201519900D0 (en) * 2015-11-11 2015-12-23 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
EA201891641A1 (ru) 2016-01-21 2019-01-31 Пфайзер Инк. Химерные антигенные рецепторы, нацеленные на вариант iii рецептора эпидермального фактора роста
CN107298715B (zh) 2016-04-15 2021-05-04 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 Slit2D2-嵌合抗原受体及其应用
US11214789B2 (en) 2016-05-03 2022-01-04 Flodesign Sonics, Inc. Concentration and washing of particles with acoustics
CN107446051B9 (zh) * 2016-05-31 2019-02-22 上海恒润达生生物科技有限公司 靶向cd19的嵌合抗原受体及其用途
JP7114490B2 (ja) * 2016-06-24 2022-08-08 アイセル・ジーン・セラピューティクス・エルエルシー キメラ抗体受容体（ＣＡＲｓ）の構成およびその使用方法
KR20190057275A (ko) 2016-07-18 2019-05-28 헬릭스 바이오파마 코포레이션 암을 치료하기 위한 암배아 항원 관련 세포 부착 분자 6에 대한 car 면역 세포
CA3032498A1 (en) 2016-08-02 2018-02-08 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
JP7231935B2 (ja) 2016-08-03 2023-03-08 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ アデノシン核酸塩基編集因子およびそれらの使用
US11661590B2 (en) 2016-08-09 2023-05-30 President And Fellows Of Harvard College Programmable CAS9-recombinase fusion proteins and uses thereof
WO2018039438A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
WO2018045034A1 (en) 2016-08-30 2018-03-08 Promab Biotechnologies, Inc. Chimeric antigen receptors having gitr intracellular domain as co-stimulatory domain
CN109715199A (zh) 2016-09-14 2019-05-03 詹森生物科技公司 包含bcma特异性iii型纤连蛋白结构域的嵌合抗原受体及其用途
CN108699163B (zh) * 2016-09-28 2021-11-19 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 一种多基因重组嵌合抗原受体分子及其应用
MX2019003899A (es) 2016-10-07 2019-08-14 Tcr2 Therapeutics Inc Composiciones y metodos para reprogramacion de receptores de linfocitos t mediante el uso de proteinas de fusion.
CA3039797A1 (en) * 2016-10-11 2018-04-19 Minerva Biotechnologies Corporation Humanized anti-muc1* antibodies and use of cleavage enzyme
AU2017342543B2 (en) 2016-10-14 2024-06-27 President And Fellows Of Harvard College AAV delivery of nucleobase editors
EP3544996A2 (en) 2016-11-22 2019-10-02 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
CN118581046A (zh) 2016-11-22 2024-09-03 新加坡国立大学 用于t细胞恶性肿瘤免疫疗法的cd7表达阻滞剂和嵌合抗原受体
WO2018119359A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 President And Fellows Of Harvard College Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection
TW201839136A (zh) 2017-02-06 2018-11-01 瑞士商諾華公司 治療血色素異常症之組合物及方法
CN110662556A (zh) 2017-03-09 2020-01-07 哈佛大学的校长及成员们 癌症疫苗
US11898179B2 (en) 2017-03-09 2024-02-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
JP2020510439A (ja) 2017-03-10 2020-04-09 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ シトシンからグアニンへの塩基編集因子
WO2018176009A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 President And Fellows Of Harvard College Nucleobase editors comprising nucleic acid programmable dna binding proteins
US11767512B2 (en) 2017-04-13 2023-09-26 Cellectis Sequence specific reagents targeting CCR5 in primary hematopoietic cells
US11560566B2 (en) 2017-05-12 2023-01-24 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide RNAs for use with CRISPR-Cas9 in genome editing and transcriptional activation
US12296012B2 (en) 2017-06-02 2025-05-13 Pfizer Inc. Chimeric antigen receptors targeting FLT3
EP3641768B1 (en) 2017-06-21 2025-12-31 iCell Gene Therapeutics LLC Chimeric Antigen Receptors (CARs), Compositions and Associated Methods
CA3067914A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Cellectis Cellular immunotherapy for repetitive administration
US11161897B2 (en) 2017-07-17 2021-11-02 Janssen Biotech, Inc. Antigen binding regions against fibronectin type III domains and methods of using the same
US11732274B2 (en) 2017-07-28 2023-08-22 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for evolving base editors using phage-assisted continuous evolution (PACE)
WO2019139645A2 (en) 2017-08-30 2019-07-18 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising gam
KR20200121782A (ko) 2017-10-16 2020-10-26 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 아데노신 염기 편집제의 용도
FI3703710T3 (fi) 2017-10-31 2024-10-09 Allogene Therapeutics Inc Menetelmiä ja koostumuksia allogeenisten kimeeristä antigeenireseptoria kantavien t-solujen annostelemiseksi refraktorisen ja/tai uusiutuneen suurisoluisen b-solulymfooman tai refraktorisen ja/tai uusiutuneen follikulaarisen lymfooman hoitamista varten
US11326156B2 (en) 2017-11-01 2022-05-10 Allogene Therapeutics, Inc. Modified caspase-9 polypeptides and methods of use thereof
WO2019106163A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Cellectis Reprogramming of genetically engineered primary immune cells
CN111465616B (zh) * 2017-12-06 2023-08-01 艾克隆株式会社 特异性识别恶性b细胞的抗体或其抗原结合片段、包含其的嵌合抗原受体及其用途
US12406749B2 (en) 2017-12-15 2025-09-02 The Broad Institute, Inc. Systems and methods for predicting repair outcomes in genetic engineering
MY202687A (en) * 2017-12-23 2024-05-15 Uwell Biopharma Inc Pharmaceutical chimeric receptor composition and method thereof
IL276396B2 (en) 2018-02-01 2026-01-01 Pfizer Chimeric antigen receptors against CD70
PE20210708A1 (es) 2018-02-01 2021-04-16 Pfizer Anticuerpos especificos para cd70 y sus usos
EP3759129A1 (en) 2018-02-28 2021-01-06 Pfizer Inc Il-15 variants and uses thereof
US12157760B2 (en) 2018-05-23 2024-12-03 The Broad Institute, Inc. Base editors and uses thereof
US12522807B2 (en) 2018-07-09 2026-01-13 The Broad Institute, Inc. RNA programmable epigenetic RNA modifiers and uses thereof
US20220177573A1 (en) * 2018-07-09 2022-06-09 Oslo Universitetssykehus Hf Two chimeric antigen receptors specifically binding cd19 and igkappa
AU2019327913A1 (en) 2018-08-29 2021-03-18 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Anti-mesothelin chimeric antigen receptor (CAR) constructs and uses thereof
US12529041B2 (en) 2018-09-07 2026-01-20 Beam Therapeutics Inc. Compositions and methods for delivering a nucleobase editing system
US12454694B2 (en) 2018-09-07 2025-10-28 Beam Therapeutics Inc. Compositions and methods for improving base editing
WO2020092453A1 (en) 2018-10-29 2020-05-07 The Broad Institute, Inc. Nucleobase editors comprising geocas9 and uses thereof
US12257286B2 (en) 2018-10-31 2025-03-25 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for treating cancer
WO2020092839A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for treating cancer
US20200268797A1 (en) 2018-11-30 2020-08-27 Janssen Biotech, Inc. Gamma delta t cells and uses thereof
WO2020154500A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 The Broad Institute, Inc. Supernegatively charged proteins and uses thereof
RU2742000C2 (ru) * 2019-03-13 2021-02-01 Общество С Ограниченной Ответственностью "Анабион" Выделенный альтернативный внутриклеточный сигнальный домен химерного антигенного рецептора и включающий его химерный антигенный рецептор
MX2021011426A (es) 2019-03-19 2022-03-11 Broad Inst Inc Metodos y composiciones para editar secuencias de nucleótidos.
WO2020214842A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 The Broad Institute, Inc. Adenine base editors with reduced off-target effects
CN114008076B (zh) * 2019-04-19 2025-08-15 艾洛基治疗公司 针对4g7衍生的嵌合抗原受体的抗体
TWI865517B (zh) 2019-04-26 2024-12-11 美商艾洛基因醫療公司 抗利妥昔單抗嵌合抗原受體及其用途
MX2022002363A (es) 2019-08-27 2022-06-14 Janssen Biotech Inc Sistema receptor de antígeno quimérico y usos de este.
US12435330B2 (en) 2019-10-10 2025-10-07 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for prime editing RNA
CN112079934B (zh) * 2019-12-17 2021-01-29 合源生物科技(天津)有限公司 一种靶向cd19的嵌合抗原受体及其用途
PE20230173A1 (es) 2020-03-03 2023-02-01 Janssen Biotech Inc CELULAS T (gama-delta) Y USOS DE ESTAS
US20230085724A1 (en) 2020-03-05 2023-03-23 Neotx Therapeutics Ltd. Methods and compositions for treating cancer with immune cells
WO2021226558A1 (en) 2020-05-08 2021-11-11 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence
CN116194488A (zh) 2020-07-21 2023-05-30 艾洛基治疗公司 具有增强的信号传导和活性的嵌合抗原受体和其用途
WO2022031597A1 (en) 2020-08-03 2022-02-10 Kyverna Therapeutics, Inc. Methods of producing t regulatory cells, methods of transducing t cells, and uses of the same
EP4196231A1 (en) 2020-08-14 2023-06-21 H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Inc. Chimeric antigen receptor t cells for treating autoimmunity
CN111944850B (zh) * 2020-08-28 2023-03-31 澳门大学 表达抗cd22嵌合抗原受体和pd-l1阻断蛋白的细胞的制备方法、表达载体及应用
WO2022067089A1 (en) 2020-09-25 2022-03-31 Beam Therapeutics Inc. Fratricide resistant modified immune cells and methods of using the same
CN116635064A (zh) 2020-12-18 2023-08-22 世纪治疗股份有限公司 具有适应性受体特异性的嵌合抗原受体系统
WO2022165419A1 (en) 2021-02-01 2022-08-04 Kyverna Therapeutics, Inc. Methods for increasing t-cell function
AU2022224066A1 (en) * 2021-02-19 2023-09-07 Angeles Therapeutics, Inc. Single-chain and multi-chain synthetic antigen receptors for diverse immune cells
WO2022234158A1 (es) * 2021-05-06 2022-11-10 Institut D'investigacions Biomèdiques August Pi I Sunyer (Idibaps) Terapia de células t con receptor de antígeno quimérico específico de cd19
WO2022266075A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Caribou Biosciences, Inc. Methods and materials for treating cancer using car constructs with an intracellular domain comprising a stap domain and a kinase domain or a stap domain and a phosphatase domain
EP4502177A4 (en) 2022-03-24 2026-03-18 Nanjing Legend Biotech Co Ltd METHOD FOR PREPARING A DNA BANK AND DETECTING A RETROVIRAL INTEGRATION SITE
WO2025051339A1 (en) 2023-09-05 2025-03-13 Tiber Biotech Srl SINGLE-CHAIN VARIABLE FRAGMENT AND MOLECULES DERIVING THEREFROM THAT BIND FRAGMENT TRVB5-1 OF THE β CHAIN OF HUMAN T-CELL RECEPTOR
EP4574838A1 (en) 2023-12-21 2025-06-25 Vilnius University Chimeric antigen receptor (car) with enhanced recruitment of signaling partners

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
GB8611832D0 (en) 1986-05-15 1986-06-25 Holland I B Polypeptide
US5037743A (en) 1988-08-05 1991-08-06 Zymogenetics, Inc. BAR1 secretion signal
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
AU4328801A (en) 2000-02-24 2001-09-03 Xcyte Therapies Inc Simultaneous stimulation and concentration of cells
CA2425862C (en) * 2000-11-07 2013-01-22 City Of Hope Cd19-specific redirected immune cells
JP5825756B2 (ja) * 2006-08-14 2015-12-02 ゼンコー・インコーポレイテッドＸｅｎｃｏｒ、 Ｉｎｃ． Ｃｄ１９を標的とする最適化抗体
US20080131415A1 (en) * 2006-11-30 2008-06-05 Riddell Stanley R Adoptive transfer of cd8 + t cell clones derived from central memory cells
DK2211904T3 (en) * 2007-10-19 2016-10-24 Seattle Genetics Inc Cd19-binding agents and uses thereof
WO2009091826A2 (en) * 2008-01-14 2009-07-23 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods related to a human cd19-specific chimeric antigen receptor (h-car)
EP4032552B1 (en) * 2008-08-26 2023-10-04 City of Hope Method and compositions for enhanced anti-tumor effector functioning of t cells
WO2012050374A2 (en) * 2010-10-13 2012-04-19 Innocell, Inc. Immunotherapy for solid tumors
PH12013501201A1 (en) * 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
BR112013018311A2 (pt) 2011-01-18 2017-03-21 Univ Pennsylvania sequência de ácido nucleico isolada, receptor de antígeno quimérico isolado, célula t geneticamente modificada, vetor, e, uso de uma célula t geneticamente modificada.
US20120245996A1 (en) 2011-03-22 2012-09-27 Jonathan Mendez System and method for intent-based content matching
RU2688185C2 (ru) * 2011-03-23 2019-05-21 Фред Хатчинсон Кэнсер Рисерч Сентер Способ и композиции для клеточной иммунотерапии
CA3111953C (en) 2011-04-05 2023-10-24 Cellectis Method for the generation of compact tale-nucleases and uses thereof
US20130071414A1 (en) * 2011-04-27 2013-03-21 Gianpietro Dotti Engineered cd19-specific t lymphocytes that coexpress il-15 and an inducible caspase-9 based suicide gene for the treatment of b-cell malignancies
CA2842368A1 (en) * 2011-07-29 2013-02-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Switch costimulatory receptors
CA2848410A1 (en) * 2011-09-16 2013-03-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Rna engineered t cells for the treatment of cancer
MX2014010183A (es) 2012-02-22 2015-03-20 Univ Pennsylvania Composiciones y metodos para generar una poblacion persistente de celulas t utiles para el tratamiento de cancer.

Also Published As

Publication number Publication date
RS63798B1 (sr) 2022-12-30
EA201990575A2 (ru) 2019-07-31
EP2997141B1 (en) 2022-10-12
EA036200B1 (ru) 2020-10-14
JP2016520074A (ja) 2016-07-11
US20190209616A1 (en) 2019-07-11
PH12015502479A1 (en) 2016-02-22
AU2014267436A1 (en) 2015-11-12
CN105431532B (zh) 2021-04-06
EP3546572A1 (en) 2019-10-02
HK1222678A1 (zh) 2017-07-07
EA201501109A1 (ru) 2016-06-30
BR112015028387B1 (pt) 2023-04-11
RU2015153250A (ru) 2017-06-19
PT2997141T (pt) 2022-11-23
AU2019201818A1 (en) 2019-04-04
EA201990575A3 (ru) 2019-11-29
LT2997141T (lt) 2023-02-10
HRP20221393T1 (hr) 2023-01-06
CA2911292A1 (en) 2014-11-20
SA515370135B1 (ar) 2020-12-14
FI3546572T3 (fi) 2024-05-06
PT3546572T (pt) 2024-05-08
CA2911292C (en) 2023-01-03
EP4364809A2 (en) 2024-05-08
AU2019201818B2 (en) 2021-09-09
SG10201708896WA (en) 2017-11-29
US20210000869A9 (en) 2021-01-07
US20240269178A1 (en) 2024-08-15
CN105431532A (zh) 2016-03-23
AU2014267436B2 (en) 2019-07-04
CN109897100A (zh) 2019-06-18
KR102248157B1 (ko) 2021-05-03
DK3546572T3 (da) 2024-05-06
JP6854307B2 (ja) 2021-04-07
HRP20240576T1 (hr) 2024-07-19
SI3546572T1 (sl) 2024-06-28
PH12015502479B1 (en) 2019-11-27
JP2019122382A (ja) 2019-07-25
UA118106C2 (uk) 2018-11-26
HUE067258T2 (hu) 2024-10-28
EP3546572B9 (en) 2024-06-26
LT3546572T (lt) 2024-05-27
HK1222679A1 (en) 2017-07-07
WO2014184143A1 (en) 2014-11-20
SI2997141T1 (sl) 2023-04-28
MY172897A (en) 2019-12-13
TW201502139A (zh) 2015-01-16
KR20160030480A (ko) 2016-03-18
MA38630A1 (fr) 2017-07-31
JP6491643B2 (ja) 2019-04-03
EP3546572B1 (en) 2024-03-13
HUE060901T2 (hu) 2023-04-28
ES2930431T3 (es) 2022-12-12
FI2997141T3 (fi) 2022-12-15
MX374681B (es) 2025-03-06
EP2997141A1 (en) 2016-03-23
ES2978123T3 (es) 2024-09-05
NZ714044A (en) 2021-08-27
MA38630B2 (fr) 2021-08-31
SG11201508805UA (en) 2015-11-27
BR112015028387A2 (pt) 2017-09-19
TWI636992B (zh) 2018-10-01
PL3546572T3 (pl) 2024-07-22
PL2997141T3 (pl) 2023-02-06
RU2727447C2 (ru) 2020-07-21
EP4364809A3 (en) 2024-07-24
MX2015015662A (es) 2016-09-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240269178A1 (en) Cd19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
US11007224B2 (en) CD19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
US11077144B2 (en) CD19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
KR102170533B1 (ko) 암 면역요법을 위한 cd33 특이적 키메라 항원 수용체들
HK40109143A (en) Cd19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
HK40010356A (en) Cd19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
NZ714044B2 (en) Cd19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
HK1222679B (en) Cd19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
HK1222678B (zh) Cd19特异性嵌合抗原受体及其用途