RS61536B1 - Kombinacije fgfr- i cmet-inhibitora za lečenje kancera - Google Patents

Description

Opis

Oblast pronalaska

[0001] Pronalazak se odnosi na kombinaciju prvog jedinjenja odabranog od N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata; i drugog jedinjenja koje je cMet inhibitor.

[0002] Kombinacija je za upotrebu u lečenju proliferativnog poremećaja, posebno za upotrebu u lečenju kancera.

[0003] FGFR inhibitor (N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, i N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido [2,3-b]pirazin-6-amin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat) i cMet inhibitor mogu se primenjivati istovremeno, odvojeno ili uzastopno.

[0004] Pronalazak se dodatno odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i kombinaciju u skladu sa pronalaskom.

Sažetak pronalaska

[0005] Predmetni pronalazak se odnosi na kombinaciju prvog jedinjenja odabranog od N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamina (jedinjenje A) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amina (jedinjenje B) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata; i drugog jedinjenja koje je cMet inhibitor.

Pozadina pronalaska

[0006] N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamin (jedinjenje A) je predstavljen sledećom formulom

[0007] N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amin (jedinjenje B) je predstavljen sledećom formulom

[0008] Jedinjenja N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamin (jedinjenje A) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, i N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amin (jedinjenje B) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, i njihova hemijska sinteza opisani su u WO2011/135376 i WO2013/061080. Ona su opisana kao inhibitori ili modulatori aktivnosti određenih proteina tirozin kinaza, posebno FGFR, pa su stoga jedinjenja korisna u lečenju ili profilaksi, posebno u lečenju, bolesnih stanja ili stanja posredovanih tim tirozin kinazama, posebno FGFR. Jedinjenja su korisna u lečenju ili profilaksi, posebno u lečenju, kancera.

[0009] U WO2011/135376 predmetno jedinjenje A takođe je predstavljeno kao hidrohloridna so. U WO2013/061080 predmetno jedinjenje B takođe je predstavljeno kao sulfatna so, kao hidrohloridna so, kao fosfatna so, kao laktatna so, kao fumaratna so.

FGFR

[0010] Porodica receptora protein tirozin kinaze (PTK) faktora rasta fibroblasta (FGF) reguliše raznolik niz fizioloških funkcija uključujući mitogenezu, zarastanje rana, diferencijaciju ćelija i angiogenezu, i razviće. Bilo normalan ili maligni ćelijski rast kao i proliferacija su pod uticajem promena lokalne koncentracije FGF, vanćelijskih signalnih molekula koji deluju kao autokrini kao i parakrini faktori. Autokrina FGF signalizacija može biti posebno važna u progresiji kancera koji su zavisni od steroidnih hormona u stanje nezavisno od hormona. FGF i njihovi receptori se eksprimiraju u povećanim nivoima u nekoliko tkiva i ćelijskih linija i veruje se da prekomerna ekspresija doprinosi malignom fenotipu. Osim toga, brojni onkogeni su homologi genima koji kodiraju receptore faktora rasta, i postoji potencijal za aberantnu aktivaciju signalizacije zavisne od FGF u humanom kanceru pankreasa (Knights et al., Pharmacology and Therapeutics 2010 125:1 (105-117); Korc M. et al., Current Cancer Drug Targets 20099:5 (639-651)).

[0011] Dva prototipska člana su kiseli faktor rasta fibroblasta (aFGF ili FGF1) i bazni faktor rasta fibroblasta (bFGF ili FGF2), i do danas, identifikovano je najmanje dvadeset različitih članova porodice FGF. Ćelijski odgovor na FGF se prenosi putem četiri tipa visoko afinitetnih transmembranskih protein tirozin kinaza receptora faktora rasta fibroblasta (FGFR) numerisana 1 do 4 (FGFR1 do FGFR4).

Poremećaj FGFR1 puta treba da utiče na proliferaciju tumorskih ćelija pošto se ova kinaza aktivira u mnogim tipovima tumora pored proliferišućih endotelskih ćelija. Prekomerna ekspresija i aktivacija FGFR1 u vaskulaturi povezanoj sa tumorom sugerisala je ulogu ovih molekula u tumorskoj angiogenezi.

[0012] Nedavna studija je pokazala vezu između FGFR1 ekspresije i tumorigenosti klasičnih lobularnih karcinoma (CLC). CLC čine 10-15% svih kancera dojke i, generalno, nedostaje im p53 i Her2 ekspresija dok zadržavaju ekspresiju estrogenskih receptora. Genska amplifikacija 8p12-p11.2 je demonstrirana kod ~50% slučajeva CLC i pokazalo se da je ovo povezano sa povećanom ekspresijom FGFR1. Preliminarne studije sa siRNK usmerenom prema FGFR1, ili malom molekulskom inhibitoru receptora, pokazale su da su ćelijske linije koje nose ovu amplifikaciju posebno osetljive na inhibiciju ovog signalnog puta. Rabdomiosarkoma (RMS) je najčešći pedijatrijski sarkom mekog tkiva koji verovatno rezultuje iz abnormalne proliferacije i diferencijacije tokom skeletne miogeneze. FGFR1 je prekomerno eksprimiran u primarnim rabdomiosarkoma tumorima i povezan je sa hipometilacijom 5’ CpG ostrva i abnormalnom ekspresijom AKT1, NOG, i BMP4 gena. FGFR1 je takođe povezan sa pločastim kancerom pluća, kolorektalnim kancerom, glioblastomom, astrocitomima, kancerom prostate, sitnoćelijskim kancerom pluća, melanomom, kancerom glave i vrata, kancerom štitne žlezde, kancerom materice.

[0013] Receptor 2 faktora rasta fibroblasta ima visok afinitet za kisele i/ili bazne faktore rasta fibroblasta, kao i ligande faktora rasta keratinocita. Receptor 2 faktora rasta fibroblasta takođe propagira potentne osteogene efekte FGF tokom rasta i diferencijacije osteoblasta. Pokazano je da mutacije receptora 2 faktora rasta fibroblasta, koje dovode do kompleksnih funkcionalnih promena, indukuju abnormalno okoštavanje kranijalnih šavova (kraniosinostoza), što implicira glavnu ulogu FGFR signalizacije u formiranju intramembranske kosti. Na primer, kod Apertovog (AP) sindroma, okarakterisanog prevremenim okoštavanjem kranijalnih šavova, većina slučajeva je povezana sa tačkastim mutacijama koje stvaraju dobitak funkcije (gain-in-function) kod receptora 2 faktora rasta fibroblasta. Pored toga, pregled mutacija kod pacijenata sa sindromskim kraniosinostozama ukazuje da brojne ponovljene mutacije FGFR2 doprinose ozbiljnim oblicima Fajferovog (Pfeiffer) sindroma. Posebne mutacije FGFR2 uključuju W290C, D321A, Y340C, C342R, C342S, C342W, N549H, K641R u FGFR2.

[0014] Nekoliko ozbiljnih abnormalnosti u razviću humanog skeleta, uključujući Apertov, Krouzonov (Crouzon), Džekson-Vajsov (Jackson-Weiss), Ber-Stivensonov (Beare-Stevenson) cutis gyrata, i Fajferov sindrom, povezani su sa pojavom mutacija u receptoru 2 faktora rasta fibroblasta. Većina, ukoliko ne i svi slučajevi Fajferovog sindroma (PS) takođe su uzrokovani de novo mutacijom gena receptora 2 faktora rasta fibroblasta, i nedavno je pokazano da mutacije receptora 2 faktora rasta fibroblasta prekidaju jedno od kardinalnih pravila koja upravljaju specifičnošću liganda. Naime, dva mutirana splajs oblika receptora faktora rasta fibroblasta, FGFR2c i FGFR2b, stekla su sposobnost da se vezuju za i da budu aktivirani atipičnim FGF ligandima. Ovaj gubitak specifičnosti liganda dovodi do aberantne signalizacije i sugeriše da su ozbiljni fenotipovi ovih bolesti sindroma rezultat aktivacije receptora 2 faktora rasta fibroblasta zavisne od ektopičnog liganda.

[0015] Genetičke aberacije FGFR3 receptora tirozin kinaze, kao što su hromozomske translokacije ili tačkaste mutacije, rezultuju ektopički eksprimiranim ili deregulisanim, konstitutivno aktivnim, FGFR3 receptorima. Takve abnormalnosti su povezane sa podskupom multipla mijeloma i u karcinomu bešike, hepatocelularnom, karcinomu oralnih pločastih ćelija i karcinomu grlića materice. U skladu sa tim, FGFR3 inhibitori bili bi korisni u lečenju multipla mijeloma, karcinoma bešike i grlića materice. FGFR3 je takođe prekomerno eksprimiran kod kancera bešike, posebno invazivnog kancera bešike. FGFR3 je često aktiviran mutacijom kod urotelnog karcinoma (UC). Povećana ekspresija je povezana sa mutacijom (85% mutantnih tumora pokazalo je visoke nivoe ekspresije) ali takođe 42% tumora bez mutacije koju je moguće detektovati pokazalo je prekomernu ekspresiju, uključujući mnoge mišićno-invazivne tumore. FGFR3 je takođe povezan sa kancerom endometrijuma i štitne žlezde.

Prekomerna ekspresija FGFR4 je povezana sa lošim prognozama i kod karcinoma prostate i štitne žlezde. Pored toga polimorfizam germinativne linije (Gly388Arg) je povezan sa povećanom incidencom kancera pluća, dojke, kolona, jetre (HCC) i prostate. Pored toga, takođe je utvrđeno da je skraćeni oblik FGFR4 (uključujući kinazni domen) prisutan u 40% tumora hipofize ali nije prisutan u normalnom tkivu. Prekomerna ekspresija FGFR4 je uočena u tumorima jetre, kolona i pluća. FGFR4 je umešan u kolorektalni i kancer jetre gde je ekspresija njegovog liganda FGF19 često povišena. FGFR4 je takođe povezan sa astrocitomima, rabdomiosarkomom.

[0016] Fibrotička stanja su veliki medicinski problem koji je rezultat abnormalnog ili preteranog deponovanja vlaknastog tkiva. Ovo se javlja kod mnogih bolesti, uključujući cirozu jetre, glomerulonefritis, pulmonarnu fibrozu, sistemsku fibrozu, reumatoidni artritis, kao i prirodni proces zarastanja rana. Mehanizmi patološke fibroze nisu potpuno razjašnjeni ali se smatra da su rezultat delovanja različitih citokina (uključujući faktor nekroze tumora (TNF), faktore rasta fibroblasta (FGF), faktor rasta poreklom iz krvnih pločica (PDGF) i transformišući faktor rasta beta (TGFβ)) uključenih u proliferaciju fibroblasta i deponovanje proteina vanćelijskog matriksa (uključujući kolagen i fibronektin). Ovo rezultuje promenom strukture i funkcije tkiva i posledično patologijom.

[0017] Brojne predkliničke studije demonstrirale su povećanje faktora rasta fibroblasta u predkliničkim modelima fibroze pluća. Saopšteno je da su TGFβ1 i PDGF uključeni u fibrogeni proces i dodatno objavljeni rad sugeriše da povišavanje FGF i posledično povećanje proliferacije fibroblasta, može biti odgovor na povišeni TGFβ1. Potencijalna terapijska korist ciljnog delovanja na fibrotički mehanizam u stanjima kao što je idiopatska pulmonarna fibroza (IPF) sugeriše se saopštenim kliničkim efektom antifibrotičkog agensa pirfenidona. Idiopatska pulmonarna fibroza (takođe se označava kao kriptogeni fibrozirajući alveolitis) je progresivno stanje koje uključuje pojavu ožiljaka na plućima. Postepeno, vazdušne kesice pluća postaju zamenjene fibrotičkim tkivom, koje postaje deblje, uzrokujući nepovratan gubitak sposobnosti tkiva da prenosi kiseonik u krvotok. Simptomi stanja uključuju otežano disanje, hronični suvi kašalj, umor, bolove u grudima i gubitak apetita što rezultuje brzim gubitkom težine. Stanje je izuzetno ozbiljno sa približno 50% smrtnosti posle 5 godina.

[0018] Kao takva, jedinjenja koja inhibiraju FGFR biće korisna u obezbeđivanju načina za prevenciju rasta ili indukovanje apoptoze u tumorima, posebno inhibicijom angiogeneze. Zato se predviđa da će se jedinjenja pokazati korisnim u lečenju ili prevenciji proliferativnih poremećaja kao što su kanceri. Posebno tumori sa aktivirajućim mutantima receptora tirozin kinaza ili povećanjem receptora tirozin kinaza mogu biti posebno osetljivi na inhibitore. Pacijenti sa aktivirajućim mutantima bilo koje od izoformi specifičnih RTK (receptor tirozin kinaza) koje se ovde razmatraju takođe mogu uvideti da je lečenje sa RTK inhibitorima posebno korisno.

[0019] Ovde opisani inhibitori FGFR kinaze imaju diferencirani profil selektivnosti koji obezbeđuje novu priliku za upotrebu ovih ciljanih agenasa u podgrupama pacijenata čija je bolest pokrenuta deregulacijom FGFR. Ovde opisani inhibitori FGFR kinaze pokazuju smanjeno inhibitorno delovanje na dodatne kinaze, posebno VEGFR, tačnije VEGFR2, i PDGFR, posebno PDGFR-beta, i nude mogućnost da imaju diferencirani profil sporednih efekata ili toksičnosti i kao takvi omogućavaju efikasnije lečenje ovih indikacija. VEGFR2 i PDGFR-beta inhibitori povezani su sa toksičnostima kao što su hipertenzija ili edemi, respektivno. U slučaju VEGFR2 inhibitora, ovaj hipertenzivni efekat često ograničava dozu, može biti kontraindikovan kod određene populacije pacijenata i zahteva kliničko nadziranje.

Receptor faktora rasta vaskularnog endotela (VEGFR)

[0020] Faktor rasta vaskularnog endotela (VEGF), polipeptid, je mitogen za endotelske ćelije in vitro i stimuliše angiogene odgovore in vivo. VEGF je takođe povezan sa neodgovarajućom angiogenezom. VEGFR(ovi) su protein tirozin kinaze (PTK). PTK katalizuju fosforilaciju specifičnih ostataka tirozina u proteinima koji su uključeni u funkciju ćelija stoga regulišući ćelijski rast, preživljavanje i diferencijaciju.

[0021] Identifikovana su tri PTK receptora za VEGF: VEGFR-1 (Flt-1); VEGFR-2 (Flk-1 ili KDR) i VEGFR-3 (Flt-4). Ovi receptori su uključeni u angiogenezu i učestvuju u signalnoj transdukciji. Od posebnog interesa je VEGFR-2, koji je transmembranski receptor PTK eksprimiran prvenstveno na endotelskim ćelijama. Aktivacija VEGFR-2 od strane VEGF je kritičan korak u putu signalne transdukcije koji inicira tumorsku angiogenezu. VEGF ekspresija može biti konstitutivna za tumorske ćelije i takođe može biti povećana kao odgovor na određene stimuluse. Jedan takav stimulus je hipoksija, gde je VEGF ekspresija povećana i u tumoru i u povezanim tkivima domaćina. VEGF ligand aktivira VEGFR-2 vezivanjem za njegovo vanćelijsko VEGF vezujuće mesto. Ovo dovodi do dimerizacije receptora VEGFR i autofosforilacije ostataka tirozina na unutarćelijskom kinaznom domenu VEGFR-2. Kinazni domen deluje u prenosu fosfata sa ATP na ostatke tirozina, stoga obezbeđujući vezujuća mesta za signalizirajuće proteine nizvodno od VEGFR-2 što na kraju dovodi do inicijacije angiogeneze.

PDGFR

[0022] Maligni tumor je proizvod nekontrolisane proliferacije ćelija. Ćelijski rast kontroliše delikatna ravnoteža između faktora koji promovišu rast i inhibiraju rast. U normalnom tkivu proizvodnja i aktivnost ovih faktora rezultuje diferenciranim ćelijama koje rastu na kontrolisan i regulisan način koji održava normalan integritet i funkcionisanje organa. Maligna ćelija je izbegla ovu kontrolu; narušava se prirodna ravnoteža (putem različitih mehanizama) i dolazi do neregulisanog, poremećenog ćelijskog rasta. Faktor rasta koji je važan za razvoj tumora je faktor rasta poreklom iz krvnih pločica (PDGF) koji sadrži porodicu peptidnih faktora rasta koji signaliziraju preko receptora tirozin kinaze (PDGFR) ćelijske površine i stimulišu različite ćelijske funkcije uključujući rast, proliferaciju, i diferencijaciju.

cMet

[0023] Receptor faktora rasta hepatocita (HGF) (poznat i kao faktor rasejanja), c-Met (Met), je receptor tirozin kinaza koji reguliše proliferaciju ćelija, morfogenezu i pokretljivost. Gen c-Met se translatira u protein od 170 kD koji se obrađuje u receptor ćelijske površine koji se sastoji od 140 kD β transmembranske podjedinice i 50 kD glikozilovane vanćelijske α podjedinice.

Mutacije u c-Met, prekomerna ekspresija c-Met i/ili HGF/SF (faktor rasejanja), ekspresija c-Met i HGF/SF od strane iste ćelije, i prekomerna ekspresija i/ili aberantna c-Met signalizacija prisutne su u raznim humanim čvrstim tumorima i veruje se da učestvuju u angiogenezi, razvoju tumora, invaziji, i metastazi. Ćelijske linije sa nekontrolisanom cMet aktivacijom su, na primer, i visoko invazivne i metastatske. Primetna razlika između normalnih i transformisanih ćelija koje eksprimiraju c-Met receptor je da je fosforilacija tirozin kinaznog domena u tumorskim ćelijama često nezavisna od prisustva liganda.

[0024] Mutacije/promene c-Met su identifikovane u brojnim bolestima ljudi, uključujući tumore i kancere - na primer, nasledne i sporadične humane papilarne karcinome bubrega, kancer dojke, kolorektalni kancer opciono sa metastazama u jetri, karcinom želuca, gliom, kancer jajnika, hepatocelularni karcinom, karcinome pločastih ćelija glave i vrata, karcinom testisa, karcinom bazalnih ćelija, karcinom jetre, sarkom, maligni pleuralni mezoteliom, melanom, multipli mijelom, osteosarkom, kancer pankreasa, kancer prostate, sinovijalni sarkom, karcinom štitne žlezde, nesitnoćelijski kancer pluća (NSCLC) i sitnoćelijski kancer pluća, karcinom ćelija prelaznog epitela mokraćne bešike, karcinom testisa, karcinom bazalnih ćelija, karcinom jetre - i leukemije, limfome, i mijelome - na primer, akutnu limfocitnu leukemiju (ALL), akutnu mijeloidnu leukemiju (AML), akutnu promijelocitnu leukemiju (APL), hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL), hroničnu mijeloidnu leukemiju (CML), hroničnu neutrofilnu leukemiju (CNL), akutnu nediferenciranu leukemiju (AUL), anaplastični velikoćelijski limfom (ALCL), prolimfocitnu leukemiju (PML), juvenilnu mijelomonocitnu leukemiju (JMML), ALL T-ćelija odraslih, AML sa trolinijskom mijelodisplazijom (AML/TMDS), leukemiju mešovitih linija (MLL), mijelodisplastične sindrome (MDS), mijeloproliferativne poremećaje (MPD), multipli mijelom, (MM), mijeloidni sarkom, ne-Hočkinov limfom i Hočkinovu bolest (takođe nazvanu Hočkinov limfom).

Takođe se veruje da je prekomerna ekspresija c-Met potencijalno koristan prediktor za prognozu određenih bolesti, kao što su, na primer, kancer dojke, nesitnoćelijski karcinom pluća, endokrine neoplazme pankreasa, kancer prostate, adenokarcinom jednjaka, kolorektalni kancer, karcinom pljuvačnih žlezda, difuzni limfom velikih B-ćelija i karcinom endometrijuma.

Zbog uloge aberantnog HGF/SF-Met signaliziranja u patogenezi različitih humanih kancera, cMet inhibitori receptora tirozin kinaze imaju široku primenu u lečenju kancera kod kojih aktivnost Met doprinosi invazivnom/metastatskom fenotipu, uključujući i one kod kojih c-Met nije prekomerno eksprimiran ili na drugi način promenjen. c-Met inhibitori takođe inhibiraju angiogenezu i zato se veruje da imaju koristi u lečenju bolesti povezanih sa formiranjem nove vaskulature, kao što su reumatoidni artritis i retinopatija.

[0025] WO2007/075567 i WO2008/155378 opisuju cMet inhibitore, kao što su 6-{difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}kvinolin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, i 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b] piridazin-3-il)metil]kvinolin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, i njihovu hemijsku sintezu, i njihove polimorfe.

[0026] Oni su opisani kao modulatori protein tirozin kinaze, posebno c-Met inhibitori, i upotreba takvih jedinjenja da smanje ili inhibiraju kinaznu aktivnost c-Met u ćeliji ili subjektu, i moduliraju c-Met ekspresiju u ćeliji ili subjektu, i upotreba takvih jedinjenja za prevenciju ili lečenje ćelijskog proliferativnog poremećaja i/ili poremećaja povezanih za c-Met kod subjekta, posebno kancera.

[0027] 6-{difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}kvinolin (jedinjenje C) je predstavljen sledećom strukturom

[0028] 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il)metil]kvinolin (jedinjenje D) je predstavljen sledećom formulom

[0029] U WO2008/155378 kristalni oblici i hidrati jedinjenja C, posebno Oblik I, Oblik II, Oblik III, i oblik hidrata predmetnog jedinjenja C takođe su predstavljeni.

U WO2008/155378 predmetno jedinjenje C takođe je predstavljeno kao HBr so, kao HCl so, kao metansulfonatna (mezilatna) so, kao etansulfonatna (ezilatna) so i kao aptoluensulfonat (tozilat).

Jedinjenje C ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, i jedinjenje D ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, su selektivni cMet inhibitori.

[0030] WO2013/151913 se odnosi na kombinacije inhibitora tirozin kinaze i njihovu upotrebu.

[0031] EP-A-2 650 293 objavljuje [1,2,4]triazolo[4,3-b][1,2,4]triazin jedinjenja, uključujući njihovu upotrebu kao inhibitora protein tirozin kinaze, naročito kao c-Met inhibitora, u pripremi medikamenata za prevenciju i/ili lečenje bolesti povezanih sa c-Met abnormalnošću.

Opis slika

1

Slika 1: Western bloting proteinskih lizata poreklom iz roditeljskih i rezistentnih NCI-H1581 ćelija tretiranih bez (-) ili sa (+) Met inhibitorom, 300 nM jedinjenja C, tokom 30 minuta.

Slika 2: Incucyte grafikon (% konfluentnosti tokom vremena) koji predstavlja proliferaciju NCI-H1581 ćelija tretiranih jednim agensom (jedinjenje A [1 mikroM] ili jedinjenje D [1 mikroM]) ili kombinacijom i jedinjenja A [1 mikroM] i jedinjenja D [1 mikroM], i DMSO kao kontrole nosača.

Slika 3. Efikasnost jednog agensa, jedinjenja A, i kombinacije jedinjenja A i jedinjenja D u rezistentnim NCI-H1581 ksenograftima.

Slika 4. Incucyte grafikon (% konfluentnosti tokom vremena) koji predstavlja proliferaciju NCI-H1581 ćelija i NCI-H1581<Met(+)>ćelija tretiranih jedinjenjem A [0,1 mikroM] ili kombinacijom jedinjenja A [0,1 mikroM] i jedinjenja D [1 mikroM], i DMSO kao kontrole nosača.

Detaljan opis pronalaska

[0033] Predmetni pronalazak se odnosi na kombinaciju prvog jedinjenja odabranog od N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamina (jedinjenje A) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amina (jedinjenje B) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata; i drugog jedinjenja koje je cMet inhibitor, posebno cMet inhibitor kao što je ovde opisano.

[0034] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na kombinaciju N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamina (jedinjenje A) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i cMet inhibitora, posebno cMet inhibitora kao što je ovde opisano. U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na kombinaciju N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamina (jedinjenje A) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i 6-{difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}kvinolina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata.

U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na kombinaciju N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamina (jedinjenje A) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il)metil]kvinolina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata. U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na kombinaciju N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amina (jedinjenje B) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i cMet inhibitora, posebno cMet inhibitora kao što je ovde opisano.

U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na kombinaciju N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amina (jedinjenje B) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i 6-{difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}kvinolina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata.

U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na kombinaciju N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amina (jedinjenje B) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il)metil]kvinolina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata.

[0035] U jednom primeru izvođenja, FGFR inhibitor (jedinjenje A ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, ili jedinjenje B ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat) i cMet inhibitor, posebno cMet inhibitor kao što je ovde opisano, tačnije jedinjenje C ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, ili jedinjenje D ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, iz kombinacija predmetnog pronalaska primenjuju se istovremeno (npr. u odvojenim ili jedinstvenim kompozicijama) uzastopno u bilo kom redosledu, približno u isto vreme. U ovom slučaju, dva jedinjenja će se primenjivati u količini i na način koji su dovoljni da obezbede postizanje povoljnog ili sinergističkog efekta.

[0036] U jednom primeru izvođenja, FGFR inhibitor (jedinjenje A ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, ili jedinjenje B ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat) i cMet inhibitor, posebno cMet inhibitor kao što je ovde opisano, tačnije jedinjenje C ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, ili jedinjenje D ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat, iz kombinacija predmetnog pronalaska primenjuju se uzastopno u bilo kom redosledu, po odvojenim doznim rasporedima. U ovom slučaju, dva jedinjenja će se primenjivati u vremenskom periodu i u količini i na način koji su dovoljni da obezbede postizanje povoljnog ili sinergističkog efekta.

Podrazumevaće se da će poželjan postupak i redosled primene i respektivne količine i režimi doziranja za svaku komponentu kombinacije zavisiti od određenog hemioterapeutskog agensa koji se primenjuje, puta njegove primene, određenog tumora koji se leči i određenog domaćina koji se leči.

[0037] Optimalan postupak i redosled primene i količine i režim doziranja mogu lako utvrditi oni iskusni u struci upotrebom konvencionalnih postupaka i s obzirom na ovde iznete informacije.

U kombinacijama predmetnog pronalaska, FGFR inhibitor i cMet inhibitor mogu se formulisati u odvojene farmaceutske dozne oblike, koji se mogu prodavati nezavisno jedan od drugog, ali sa indikacijom ili uputstvom za njihovu kombinovanu upotrebu. Navedena indikacija ili uputstvo može biti u obliku letka za pacijenta, ili u bilo kom obliku komunikacije, na primer u pisanom ili usmenom obliku.

U kombinacijama predmetnog pronalaska, FGFR inhibitor i cMet inhibitor mogu se primenjivati putem istog puta primene ili putem različitih puteva primene.

U jednom primeru izvođenja, FGFR inhibitor i cMet inhibitor iz kombinacija predmetnog pronalaska primenjuju se putem istog puta primene, posebno putem oralnog puta.

Predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutski proizvod ili komercijalno pakovanje koje sadrži kombinaciju u skladu sa predmetnim pronalaskom, posebno zajedno sa uputstvima za istovremenu, odvojenu ili uzastopnu upotrebu u lečenju bolesti posredovane aktivnošću FGFR tirozin kinaze, naročito kancera.

[0038] U jednom primeru izvođenja, u kombinacijama predmetnog pronalaska, FGFR inhibitor i cMet inhibitor se primenjuju istovremeno.

U jednom primeru izvođenja, u kombinacijama predmetnog pronalaska, FGFR inhibitor i cMet inhibitor se primenjuju odvojeno, posebno u vremenskom intervalu koji je izabran tako da je efekat kombinovane upotrebe veći od efekta dobijenog prilikom primene FGFR inhibitora ili cMet inhibitora pojedinačno.

[0039] U slučaju kombinacije predmetnog pronalaska koja sadrži jedinjenje A ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat kao FGFR inhibitor, može biti korisno da se navedeno jedinjenje primenjuje ređe od cMet inhibitora, pošto jedinjenje A pokazuje lizozomotropna svojstva i produženo gašenje cilja.

[0040] FGFR inhibitor i cMet inhibitor iz kombinacija predmetnog pronalaska mogu takođe biti koformulisani u jednoj formulaciji.

1

U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i kao prvi aktivni sastojak jedinjenje odabrano od N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata; i kao drugi aktivni sastojak cMet inhibitor, posebno cMet inhibitor kao što je ovde opisano, tačnije jedinjenje odabrano od 6-{difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}kvinolina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il)metil]kvinolina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata.

[0041] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i kao prvi aktivni sastojak N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamin ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat, i kao drugi aktivni sastojak cMet inhibitor, posebno cMet inhibitor kao što je ovde opisano.

[0042] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i kao prvi aktivni sastojak N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamin ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat, i kao drugi aktivni sastojak 6-{difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}kvinolin ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat.

[0043] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i kao prvi aktivni sastojak N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamin ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat, i kao drugi aktivni sastojak 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il)metil]kvinolin ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat.

[0044] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i kao prvi aktivni sastojak N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amin ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat; i kao drugi aktivni sastojak cMet inhibitor, posebno cMet inhibitor kao što je ovde opisano.

[0045] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i kao prvi aktivni sastojak N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amin ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat; i kao drugi aktivni sastojak 6-{difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}kvinolin ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat.

[0046] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i kao prvi aktivni sastojak N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amin ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat; i kao drugi aktivni sastojak 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il)metil]kvinolin ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat.

[0047] U jednom primeru izvođenja, kombinacije farmaceutskih kompozicija predmetnog pronalaska primenjuju se oralno.

[0048] U jednom primeru izvođenja, kombinacije farmaceutskih kompozicija predmetnog pronalaska sadrže kao pojedinačne aktivne sastojke FGFR inhibitor i cMet inhibitor, uključujući one opisane u bilo kom od primera izvođenja predmetnog pronalaska.

[0049] U predmetnom pronalasku, u jednom primeru izvođenja, cMet inhibitor iz kombinacija ili farmaceutskih kompozicija predmetnog pronalaska može takođe biti odabran iz grupe od:

(E)-2-(1-(3-((7-fluorokvinolin-6-il)metil)imidazo[1,2-b]piridazin-6-il)etiliden) hidrazinkarboksamida (Primer 1 iz WO2011/018454); 2-fluoro-N-metil-4-[(7-kvinolin-6-il-metil)-imidazo[1,2-b]tiazin-2-il]benzamida (Primer 7 iz WO 2008/064157); krizotiniba; kabozantiniba; tivatiniba; foretiniba; MGCD-265; AMG-208; AMG-337; MK-8033; E-7050; EMD-1204831; EMD-1214063; amuvatiniba; BMS-817378; DP-3590; ASP-08001; HM-5016504; PF-4217903; SGX523; antitela ili srodnih molekula, kao što su na primer fiklatuzumab, onartuzumab, rilotuzumab, Tak-701, LA-480; ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili njihovog solvata.

[0050] U jednom primeru izvođenja, kombinacije predmetnog pronalaska ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska sadrže najmanje jedan dodatni terapeutski agens, posebno najmanje jedan antikancerski dodatni agens ili adjuvans, naročito za upotrebu kao lek, specifičnije za upotrebu u lečenju kancera ili srodnih bolesti. Primeri antikancerskih

1

agenasa ili adjuvanasa (podržavajući agensi u terapiji) koji mogu biti sadržani u kombinacijama ili farmaceutskim kompozicijama predmetnog pronalaska uključuju:

- jedinjenja sa koordinacijom platine na primer cisplatin opciono kombinovan sa amifostinom, karboplatin ili oksaliplatin;

- jedinjenja taksana, na primer paklitaksel, čestice paklitaksela vezane za protein (Abraxane™) ili docetaksel;

- inhibitore topoizomeraze I kao što su jedinjenja kamptotecina na primer irinotekan, SN-38, topotekan, topotekan hcl;

- inhibitore topoizomeraze II kao što su antitumorski epipodofilotoksini ili derivati podofilotoksina na primer etopozid, etopozid fosfat ili tenipozid;

- antitumorske vinka alkaloide na primer vinblastin, vinkristin ili vinorelbin;

- antitumorske derivate nukleozida na primer 5-fluorouracil, leukovorin, gemcitabin, gemcitabin hcl, kapecitabin, kladribin, fludarabin, nelarabin;

- alkilirajuće agense kao što su azotna slačica ili nitrosourea na primer ciklofosfamid, hlorambucil, karmustin, tiotepa, mefalan (melfalan), lomustin, altretamin, busulfan, dakarbazin, estramustin, ifosfamid opciono u kombinaciji sa mesnom, pipobroman, prokarbazin, streptozocin, telozolomid, uracil;

- antitumorske derivate antraciklina na primer daunorubicin, doksorubicin opciono u kombinaciji sa deksrazoksanom, doksil, idarubicin, mitoksantron, epirubicin, epirubicin hcl, valrubicin;

- derivate tetrakarcina na primer tetrokarcin A;

- glukokortikoide na primer prednizon;

- antitela na primer trastuzumab (HER2 antitelo), rituksimab (CD20 antitelo), gemtuzumab, gemtuzumab ozogamicin, cetuksimab, pertuzumab, bevacizumab, alemtuzumab, ekulizumab, ibritumomab tiuksetan, nofetumomab, panitumumab, tositumomab, CNTO 328;

- antagoniste receptora estrogena ili selektivne modulatore receptora estrogena ili inhibitore sinteze estrogena na primer tamoksifen, fulvestrant, toremifen, droloksifen, faslodeks, raloksifen ili letrozol;

- inhibitore aromataze kao što su eksemestan, anastrozol, letrazol, testolakton i vorozol; - agense za diferenciranje kao što su retinoidi, vitamin D ili retinoična kiselina i agensi koji blokiraju metabolizam retinoične kiseline (RAMBA) na primer akutan;

- inhibitore DNK metil transferaze na primer azacitidin ili decitabin;

1

- antifolate na primer premetreksed dinatrijum;

- antibiotike na primer antinomicin D, bleomicin, mitomicin C, daktinomicin, karminomicin, daunomicin, levamisol, plikamicin, mitramicin;

- antimetabolite na primer klofarabin, aminopterin, citozin arabinozid ili metotreksat, azacitidin, citarabin, floksuridin, pentostatin, tioguanin;

- agense koji indukuju apoptozu i antiangiogene agense kao što su Bcl-2 inhibitori na primer YC 137, BH 312, ABT 737, gosipol, HA 14-1, TW 37 ili dekanoična kiselina; - tubulin-vezujuće agense na primer kombrestatin, kolhicini ili nokodazol;

- inhibitore kinaze (npr. EGFR (receptor faktora rasta epitela) inhibitori, MTKI (višeciljni inhibitori kinaze), mTOR inhibitori) na primer flavoperidol, imatinib mezilat, erlotinib, gefitinib, dasatinib, lapatinib, lapatinib ditozilat, sorafenib, sunitinib, sunitinib maleat, temsirolimus;

- inhibitore farneziltransferaze na primer tipifarnib;

- inhibitore histon deacetilaze (HDAC) na primer natrijum butirat, suberoilanilid hidroksamidna kiselina (SAHA), depsipeptid (FR 901228), NVP-LAQ824, R306465, JNJ-26481585, trihostatin A, vorinostat;

- Inhibitore puta ubikvitin-proteazom na primer PS-341, MLN .41 ili bortezomib;

- Jondelis;

- inhibitore telomeraze na primer telomestatin;

- inhibitore matriksne metaloproteinaze na primer batimastat, marimastat, prinostat ili metastat.

- Rekombinantne interleukine na primer aldesleukin, denileukin diftitoks, interferon alfa 2a, interferon alfa 2b, peginterferon alfa 2b

- MAPK inhibitore

- Retinoide na primer alitretinoin, beksaroten, tretinoin

- Arsen trioksid

- Asparaginazu

- Steroide na primer dromostanolon propionat, megestrol acetat, nandrolon (dekanoat, fenpropionat), deksametazon

- Agoniste ili antagoniste gonadotropin oslobađajućeg hormona na primer abareliks, goserelin acetat, histrelin acetat, leuprolid acetat

- Talidomid, lenalidomid

- Merkaptopurin, mitotan, pamidronat, pegademazu, pegaspargazu, rasburikazu

- BH3 mimetike na primer ABT-737

1

- MEK inhibitore na primer PD98059, AZD6244, CI-1040

- analoge faktora stimulacije kolonije na primer filgrastim, pegfilgrastim, sargramostim; eritropoetin ili njegove analoge (npr. darbepoetin alfa); interleukin 11; oprelvekin; zoledronat, zoledronsku kiselinu; fentanil; bisfosfonat; palifermin.

- inhibitor steroidnog citohroma P450 17alfa-hidroksilaza-17,20-liaze (CYP17), npr. abirateron, abirateron acetat.

[0051] Kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska takođe imaju terapijske primene u senzibilisanju tumorskih ćelija za radioterapiju i hemioterapiju.

[0052] Otuda se kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu upotrebljavati kao "radiosenzibilizator" i/ili "hemiosenzibilizator" ili se mogu dati u kombinaciji sa drugim "radiosenzibilizator" jedinjenjem i/ili "hemiosenzibilizator" jedinjenjem.

[0053] Termin "radiosenzibilizator" ili "radiosenzibilizator" jedinjenje, kao što se ovde upotrebljava, definisan je kao kombinacija ili farmaceutska formulacija predmetnog pronalaska, ili molekul, poželjno molekul male molekulske mase, koji kada se primenjuje životinjama u terapijski efikasnim količinama povećava osetljivost ćelija na jonizujuće zračenje i/ili promoviše lečenje bolesti koje se mogu lečiti jonizujućim zračenjem.

[0054] Termin "hemiosenzibilizator" ili "hemiosenzibilizator" jedinjenje, kao što se ovde upotrebljava, definisan je kao kombinacija ili farmaceutska kompozicija predmetnog pronalaska, ili molekul, poželjno molekul male molekulske mase, koji kada se primenjuje životinjama u terapijski efikasnim količinama povećava osetljivost ćelija na hemioterapiju i/ili promoviše lečenje bolesti koje se mogu lečiti hemioterapeuticima.

[0055] U literaturi je predloženo nekoliko mehanizama za način delovanja radiosenzibilizatora, uključujući: radiosenzibilizatore hipoksičnih ćelija (npr. jedinjenja 2-nitroimidazola, i jedinjenja benzotriazin dioksida) koji oponašaju kiseonik ili se alternativno ponašaju kao bioredukujući agensi pod hipoksijom; radiosenzibilizatori nehipoksičnih ćelija (npr. halogenisani pirimidini) mogu biti analozi DNK baza i poželjno se inkorporišu u DNK ćelija kancera i na taj način promovišu prekidanje DNK molekula izazvano zračenjem i/ili sprečavaju normalne mehanizme DNK reparacije; razmatrani su i različiti drugi potencijalni mehanizmi delovanja za radiosenzibilizatore u lečenju bolesti. Mnogi protokoli za lečenje kancera trenutno koriste radiosenzibilizatore zajedno sa zračenjem rendgenskih zraka. Primeri rendgenski aktiviranih radiosenzibilizatora uključuju sledeće: metronidazol, misonidazol,

1

desmetilmisonidazol, pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomicin C, RSU 1069, SR 4233, EO9,

RB 6145, nikotinamid, 5-bromodezoksiuridin (BUdR), 5-jododezoksiuridin (IUdR), bromodezoksicitidin, fluorodezoksiuridin (FudR), hidroksiurea, cisplatin, i terapijski efikasne analoge i derivate istih.

Fotodinamička terapija (PDT) kancera koristi vidljivu svetlost kao aktivatorsko zračenje senzibilizatorskog agensa. Primeri fotodinamičkih radiosenzibilizatora uključuju sledeće: derivate hematoporfirina, fotofrin, derivate benzoporfirina, kalaj etioporfirin, feoborbid-a, bakteriohlorofil-a, naftalocijanine, ftalocijanine, cink ftalocijanin, i terapijski efikasne analoge i derivate istih. Radiosenzibilizatori se mogu primenjivati zajedno sa terapijski efikasnom količinom jednog ili više drugih jedinjenja, uključujući: jedinjenja koja promovišu inkorporaciju radiosenzibilizatora u ciljne ćelije; jedinjenja koja kontrolišu tok terapeutika, hranljivih sastojaka, i/ili kiseonika do ciljnih ćelija; hemioterapeutske agense koji deluju na tumor sa ili bez dodatnog zračenja; ili druga terapijski efikasna jedinjenja za lečenje kancera ili drugih bolesti.

[0056] Hemiosenzibilizatori se mogu primenjivati zajedno sa terapijski efikasnom količinom jednog ili više drugih jedinjenja, uključujući: jedinjenja koja promovišu inkorporaciju hemiosenzibilizatora u ciljne ćelije; jedinjenja koja kontrolišu tok terapeutika, hranljivih sastojaka, i/ili kiseonika do ciljnih ćelija; hemioterapeutske agense koji deluju na tumor ili druga terapijski efikasna jedinjenja za lečenje kancera ili drugih bolesti. Antagonisti kalcijuma, na primer verapamil, smatraju se korisnim u kombinaciji sa antineoplastičnim agensima za utvrđivanje hemioosetljivosti u tumorskim ćelijama rezistentnim na prihvaćene hemioterapeutske agense i za potenciranje efikasnosti takvih jedinjenja u malignitetima osetljivim na lekove.

[0057] Objavljuje se upotreba kombinacije predmetnog pronalaska za proizvodnju medikamenta za lečenje poremećaja posredovanog FGFR, posebno kancera. Objavljuje se upotreba farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska za proizvodnju medikamenta za lečenje poremećaja posredovanog FGFR, posebno kancera.

[0058] Objavljuje se upotreba kombinacije predmetnog pronalaska za proizvodnju medikamenta za prevenciju rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor kombinacije ili za odlaganje rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor kombinacije.

Objavljuje se upotreba farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska za proizvodnju medikamenta za prevenciju rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor farmaceutske

1

kompozicije ili za odlaganje rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor farmaceutske kompozicije.

[0059] Objavljuje se upotreba kombinacije predmetnog pronalaska za proizvodnju medikamenta za prevenciju pojave rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor kombinacije ili za odlaganje pojave rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor kombinacije.

Objavljuje se upotreba farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska za proizvodnju medikamenta za prevenciju pojave rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor farmaceutske kompozicije ili za odlaganje pojave rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor farmaceutske kompozicije.

[0060] Objavljuje se upotreba kombinacije predmetnog pronalaska za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili lečenje, posebno za lečenje, tumora ili kancera pri čemu je aktivacija Met signalnog puta mehanizam rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor. Objavljuje se upotreba farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili lečenje, posebno za lečenje, tumora ili kancera pri čemu je aktivacija Met signalnog puta mehanizam rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor.

[0061] Objavljuje se upotreba cMet inhibitora, posebno cMet inhibitora kao što je ovde opisano, tačnije jedinjenja C ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i jedinjenja D ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, kako bi se sprečila rezistencija, odložila rezistencija, sprečila pojava rezistencije ili odložila pojava rezistencije tumora ili kancera na FGFR inhibitor, posebno FGFR inhibitor kao što je ovde opisano.

[0062] Objavljuje se upotreba kombinacije predmetnog pronalaska za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili lečenje, posebno za lečenje, tumora ili kancera posredovanog FGFR kinazom i koji ima visoku Met ekspresiju. Objavljuje se upotreba farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska za proizvodnja medikamenta za profilaksu ili lečenje, posebno za lečenje, tumora ili kancera posredovanog FGFR kinazom i koji ima visoku Met ekspresiju.

[0063] Oblici soli jedinjenja iz kombinacija ili farmaceutskih kompozicija predmetnog pronalaska su tipično farmaceutski prihvatljive soli, i primeri farmaceutski prihvatljivih soli su razmatrani u Berge et al. (1977) "Pharmaceutically Acceptable Salts," J. Pharm. Sci., Vol.

66, pp.1-19. Međutim, soli koje nisu farmaceutski prihvatljive se takođe mogu pripremiti kao intermedijarni oblici koji se zatim mogu pretvoriti u farmaceutski prihvatljive soli. Objavljuju se takvi farmaceutski neprihvatljivi oblici soli, koji mogu biti korisni, na primer, u prečišćavanju ili separaciji jedinjenja pronalaska.

2

[0064] Soli predmetnog pronalaska se mogu sintetisati iz roditeljskog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli ostatak konvencionalnim hemijskim postupcima kao što su postupci opisani u Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (urednik), Camille G. Wermuth (urednik), ISBN: 3-90639-026-8, tvrde korice, 388 strana, avgust 2002. Generalno, takve soli se mogu pripremiti reakcijom slobodnih kiselih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa odgovarajućom bazom ili kiselinom u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ta dva; generalno, upotrebljavaju se nevodeni medijumi kao što su etar, etil acetat, etanol, izopropanol, ili acetonitril. Jedinjenja pronalaska mogu postojati kao mono- ili di-soli u zavisnosti od pKa kiseline od koje se formira so.

[0065] Kisele adicione soli se mogu formirati sa širokim spektrom kiselina, i neorganskih i organskih. Primeri kiselih adicionih soli uključuju soli formirane sa kiselinom odabranom iz grupe koja se sastoji od sirćetne, 2,2-dihlorosirćetne, adipinske, alginske, askorbinske (npr. L-askorbinske), L-asparaginske, benzensulfonske, benzojeve, 4-acetamidobenzojeve, butanske, (+)kamforne, kamfor-sulfonske, (+)-(1S)-kamfor-10-sulfonske, kaprinske, kaproinske, kaprilne, cimetne, limunske, ciklamične, dodecil-sumporne, etan-1,2-disulfonske, etansulfonske, 2-hidroksietansulfonske, mravlje, fumarne, galaktarinske, gentizične, glukoheptonske, D-glukonske, glukuronske (npr. D-glukuronske), glutaminske (npr. L-glutaminske), α-oksoglutarske, glikolne, hipurične, hidrobromne, hlorovodonične, jodovodonične, isetionske, mlečne (npr. (+)-L-mlečne, (±)-DL-mlečne), laktobionske, maleinske, jabučne, (-)-L-jabučne, malonske, (±)-DL-bademske, metansulfonske, naftalensulfonske (npr. naftalen-2-sulfonske), naftalen-1,5-disulfonske, 1-hidroksi-2-naftoične, nikotinske, azotne, oleinske, orotske, oksalne, palmitinske, pamoične, fosforne, propionske, L-piroglutaminske, piruvične, salicilne, 4-amino-salicilne, sebacinske, stearinske, jantarne, sumporne, taninske, (+)-L-vinske, tiocijanske, toluensulfonske (npr. ptoluensulfonske), undecilenske i valerične kiseline, kao i acilovanih amino-kiselina i katjon izmenjivačkih smola.

[0066] Jedna posebna grupa soli sastoji se od soli formiranih od sirćetne, hlorovodonične, jodovodonične, fosforne, azotne, sumporne, limunske, mlečne, jantarne, maleinske, jabučne, isetionske, fumarne, benzensulfonske, toluensulfonske, metansulfonske (mezilat), etansulfonske, naftalensulfonske, valerične, sirćetne, propanske, butanske, malonske, glukuronske i laktobionske kiseline. Druga grupa kiselih adicionih soli uključuje soli formirane od sirćetne, adipinske, askorbinske, asparaginske, limunske, DL-mlečne, fumarne, glukonske, glukuronske, hipurične, hlorovodonične, glutaminske, DL-jabučne, metansulfonske, sebacinske, stearinske, jantarne i vinske kiseline.

[0067] Ukoliko je jedinjenje anjonsko, ili ima funkcionalnu grupu koja može biti anjonska, tada se so može formirati sa pogodnim katjonom. Primeri pogodnih neorganskih katjona uključuju jone alkalnih metala kao što su Na<+>i K<+>, katjone zemnoalkalnih metala kao što su Ca2+ i Mg2+ , i druge katjone kao što je Al<3+>. Primeri pogodnih organskih katjona uključuju amonijum jon (tj. NH

4) i supstituisani amonijum jone (npr. NH3R+ , NH

2R2, NHR

3, NR4).

[0068] Primeri nekih pogodnih supstituisanih amonijum jona su oni poreklom iz: etilamina, dietilamina, dicikloheksilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, benzilamina, fenilbenzilamina, holina, meglumina, i trometamina, kao i trometamina, kao i amino-kiseline, kao što su lizin i arginin. Primer uobičajenog kvaternarnog amonijum jona je N(CH3)4<+>. U jednom primeru izvođenja, farmaceutski prihvatljive soli FGFR inhibitora ili cMet inhibitora iz kombinacija ili farmaceutskih kompozicija predmetnog pronalaska su kisele adicione soli.

U jednom primeru izvođenja, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska sadrže so jedinjenja A, jedinjenja B ili jedinjenja C kao što je ovde gore opisano u delu pozadina pronalaska.

U jednom primeru izvođenja, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska sadrže FGFR inhibitor u obliku slobodne baze.

U jednom primeru izvođenja, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska sadrže cMet inhibitor u obliku slobodne baze.

U jednom primeru izvođenja, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska sadrže FGFR inhibitor i cMet inhibitor u obliku slobodne baze.

[0069] Jedinjenja kombinacija ili farmaceutskih kompozicija predmetnog pronalaska mogu da formiraju solvate, na primer sa vodom (tj. hidrati) ili uobičajenim organskim rastvaračima. Kao što se ovde upotrebljava, termin "solvat" označava fizičku povezanost jedinjenja predmetnog pronalaska sa jednim ili više molekula rastvarača. Ova fizička povezanost uključuje različite stepene jonskog i kovalentnog vezivanja, uključujući vezivanje vodonika. U određenim slučajevima solvat će biti sposoban za izolaciju, na primer kada je jedan ili više molekula rastvarača inkorporisano u kristalnu rešetku kristalne čvrste supstance. Termin "solvat" je namenjen da obuhvati solvate i u fazi rastvora i solvate koji se mogu izolovati. Neograničavajući primeri pogodnih solvata uključuju jedinjenja pronalaska u kombinaciji sa vodom, izopropanolom, etanolom, metanolom, DMSO, etil acetatom, sirćetnom kiselinom ili etanolaminom. Jedinjenja pronalaska mogu da ispoljavaju svoje biološke efekte dok su u rastvoru. Solvati farmaceutski prihvatljivih soli jedinjenja kombinacija ili farmaceutskih kompozicija predmetnog pronalaska takođe su obuhvaćeni terminom "solvat".

[0070] Solvati su dobro poznati u farmaceutskoj hemiji. Oni mogu biti važni za procese pripreme supstance (npr. u odnosu na njihovo prečišćavanje), skladištenje supstance (npr. njenu stabilnost) i jednostavnosti rukovanja supstancom i često se formiraju kao deo faze izolacije ili prečišćavanja hemijske sinteze. Osoba iskusna u struci može pomoću standardnih i dugo korišćenih tehnika da utvrdi da li je hidrat ili drugi solvat formiran uslovima izolacije ili uslovima prečišćavanja koji se upotrebljavaju za pripremu datog jedinjenja. Primeri takvih tehnika uključuju termogravimetrijsku analizu (TGA), diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC), rendgensku kristalografiju (npr. monokristalna rendgenska kristalografija ili rendgenska difrakcija praha) i NMR u čvrstom stanju (SS-NMR, takođe poznata kao Magic Angle Spinning NMR ili MAS-NMR). Takve tehnike su deo standardnog analitičkog alata iskusnog hemičara kao NMR, IR, HPLC i MS. Alternativno, stručnjak može namerno da formira solvat upotrebljavajući uslove kristalizacije koji uključuju količinu rastvarača potrebnu za određeni solvat. Nakon toga standardni gore opisani postupci, mogu se upotrebiti za utvrđivanje da li su solvati formirani. Takođe obuhvaćeni jedinjenjima kao što je ovde opisano su bilo koji kompleksi (npr. inkluzioni kompleksi ili klatrati sa jedinjenjima kao što su ciklodekstrini, ili kompleksi sa metalima) jedinjenja.

[0071] Osim toga, jedinjenja kombinacija ili farmaceutskih kompozicija predmetnog pronalaska mogu imati jedan ili više polimorfnih (kristalin) ili amorfnih oblika i kao takvi su namenjeni da budu uključeni u pronalazak. U jednom primeru izvođenja, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska sadrže polimorf ili solvat jedinjenja C kao što je ovde gore opisano u delu pozadina pronalaska.

[0072] Kao što se ovde upotrebljava, termin "modulacija", primenjen na aktivnost kinaze, namenjen je da definiše promenu nivoa biološke aktivnosti protein kinaze. Stoga, modulacija obuhvata fiziološke promene koje utiču na povećanje ili smanjenje aktivnosti relevantne protein kinaze. U potonjem slučaju, modulacija se može opisati kao "inhibicija". Modulacija može nastati direktno ili indirektno, i može biti posredovana bilo kojim mehanizmom i na bilo kom fiziološkom nivou, uključujući na primer na nivou ekspresije gena (uključujući na primer transkripciju, translaciju i/ili post-translacione modifikacije), na nivou ekspresije gena koji kodiraju regulatorne elemente koji deluju direktno ili indirektno na nivoe aktivnosti kinaze. Stoga, modulacija može podrazumevati povišenu/potisnutu ekspresiju ili preteranu ili nedovoljnu ekspresiju kinaze, uključujući amplifikaciju gena (tj. više kopija gena) i/ili povećanu ili smanjenu ekspresiju transkripcionim efektom, kao i hiper- (ili hipo-) aktivnost i (de)aktivaciju protein kinaze(a) (uključujući (de)aktivaciju) mutacijom(ama). Termine "modulisani", "modulirajući" i "modulirati" treba tumačiti u skladu sa tim.

2

[0073] Kao što se ovde upotrebljava, termin "posredovan", kao što se upotrebljava npr. zajedno sa kinazom kao što je ovde opisano (i primenjeno kao primer na razne fiziološke procese, bolesti, bolesna stanja, stanja, terapije, lečenja ili intervencije) namenjen je da deluje ograničeno tako da su različiti procesi, bolesti, bolesna stanja, stanja, tretmani i intervencije na koje se termin primenjuje oni u kojima kinaza ima biološku ulogu. U slučajevima kada se termin primenjuje na bolest, bolesno stanje ili stanje, biološka uloga koju igra kinaza može biti direktna ili indirektna i može biti neophodna i/ili dovoljna za ispoljavanje simptoma bolesti, bolesnog stanja ili stanja (ili njegove etiologije ili progresije). Stoga, aktivnost kinaze (i posebno aberantni nivoi aktivnosti kinaze, npr. prekomerna ekspresija kinaze) ne mora nužno biti neposredni uzrok bolesti, stepena bolesti ili stanja: već se smatra da bolesti, bolesna stanja ili stanja posredovana kinazom uključuju ona koja imaju multifaktornu etiologiju i složene progresije u koje je kinaza u pitanju samo delimično uključena. U slučajevima kada se termin primenjuje na lečenje, profilaksu ili intervenciju, uloga koju igra kinaza može biti direktna ili indirektna i može biti neophodna i/ili dovoljna za sprovođenje lečenja, profilakse ili ishoda intervencije. Stoga, bolesno stanje ili stanje posredovano kinazom uključuje razvoj rezistencije na bilo koji određeni lek ili lečenje za kancer.

[0074] Stoga, na primer, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne u ublažavanju ili smanjenju incidence kancera.

[0075] FGFR inhibitori kombinacija i farmaceutskih kompozicija imaju aktivnost prema FGFR1, FGFR2, FGFR3, i/ili FGFR4, i posebno prema FGFR1, FGFR2, FGFR3 i FGFR4.

[0076] Kao posledica njihove aktivnosti u modulaciji ili inhibiciji FGFR, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska biće korisne u obezbeđivanju načina za prevenciju rasta ili indukovanje apoptoze neoplazija, posebno inhibicijom angiogeneze. Zato se predviđa da će se kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska pokazati korisnim u lečenju ili prevenciji proliferativnih poremećaja kao što su kanceri. Pored toga, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne u lečenju bolesti kod kojih postoji poremećaj proliferacije, apoptoze ili diferencijacije.

[0077] Primeri kancera koji se mogu lečiti (ili inhibirati) kombinacijama ili farmaceutskim kompozicijama predmetnog pronalaska uključuju karcinom, na primer karcinom bešike, dojke, kolona (npr. kolorektalni karcinomi kao što su adenokarcinom kolona i adenom kolona), bubrega, urotela, materice, epiderma, jetre, pluća (na primer adenokarcinom, sitnoćelijski kancer pluća i nesitnoćelijske karcinome pluća, pločasti kancer pluća), jednjaka, glave i vrata, žučne kese, jajnika, pankreasa (npr. karcinom egzokrinog pankreasa), želuca, gastrointestinalni (poznat i kao želudačni) kancer (npr. gastrointestinalni stromalni tumori), grlića materice, endometrijuma, štitne žlezde, prostate, ili kože (na primer karcinom pločastih ćelija ili dermatofibrosarkom protuberans); kancer hipofize, hematopoetski tumor limfoidne loze, na primer leukemija, akutna limfocitna leukemija, hronična limfocitna leukemija, limfom B-ćelija (npr. difuzni limfom velikih B-ćelija), limfom T-ćelija, Hočkinov limfom, ne-Hočkinov limfom, limfom dlakastih ćelija, ili Burketov (Burkettꞌs) limfom; hematopoetski tumor mijeloidne loze, na primer leukemije, akutne i hronične mijelogene leukemije, hronična mijelomonocitna leukemija (CMML), mijeloproliferativni poremećaj, mijeloproliferativni sindrom, mijelodisplastični sindrom, ili promijelocitna leukemija; multipli mijelom; folikularni kancer štitne žlezde; hepatocelularni kancer, tumor mezenhimskog porekla (npr. Juingov (Ewingꞌs) sarkom), na primer fibrosarkom ili rabdomiosarkom; tumor centralnog ili perifernog nervnog sistema, na primer astrocitom, neuroblastom, gliom (kao što je glioblastom multiforme) ili švanom; melanom; seminom; teratokarcinom; osteosarkom; kseroderma pigmentosum; keratoakantom; folikularni kancer štitne žlezde; ili Kapošijev (Kaposiꞌs) sarkom. Posebno, pločasti kancer pluća, kancer dojke, kolorektalni kancer, glioblastom, astrocitome, kancer prostate, sitnoćelijski kancer pluća, melanom, kancer glave i vrata, kancer štitne žlezde, kancer materice, kancer želuca, hepatocelularni kancer, kancer grlića materice, multipli mijelom, kancer bešike, kancer endometrijuma, urotelni kancer, kancer kolona, rabdomiosarkom, kancer hipofize.

[0078] Primeri kancera koji se mogu lečiti (ili inhibirati) uključuju kancer bešike, urotelni kancer, metastatski urotelni kancer, hirurški neresektabilan urotelni kancer, kancer dojke, glioblastom, kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kancer pločastih ćelija pluća, adenokarcinom pluća, pulmonarni adenokarcinom, sitnoćelijski kancer pluća, kancer jajnika, kancer endometrijuma, kancer grlića materice, sarkom mekog tkiva, karcinom pločastih ćelija glave i vrata, kancer želuca, kancer jednjaka, karcinom pločastih ćelija jednjaka, adenokarcinom jednjaka, holangiokarcinom, hepatocelularni karcinom.

[0079] Određeni kanceri su rezistentni na lečenje posebnim lekovima. Ovo može biti usled tipa tumora ili može nastati usled lečenja jedinjenjem. S tim u vezi, pozivanje na multipli mijelom uključuje multipli mijelom osetljiv na bortezomib ili refraktorni multipli mijelom. Slično, pozvanje na hroničnu mijelogenu leukemiju uključuje hroničnu mijelogenu leukemiju osetljivu na imitanib i refraktornu hroničnu mijelogenu leukemiju. Hronična mijelogena leukemija je poznata i kao hronična mijeloidna leukemija, hronična granulocitna leukemija ili CML. Slično tome, akutna mijelogena leukemija se naziva i akutna mijeloblastna leukemija, akutna granulocitna leukemija, akutna nelimfocitna leukemija ili AML.

2

[0080] Kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu se takođe upotrebljavati u lečenju hematopoetskih bolesti abnormalne proliferacije ćelija bilo premalignih ili stabilnih kao što su mijeloproliferativne bolesti. Mijeloproliferativne bolesti ("MPD") su grupa bolesti kostne srži kod kojih se proizvodi višak ćelija. Povezane su, i mogu prerasti u, mijelodisplastični sindrom. Mijeloproliferativne bolesti uključuju policitemia vera, esencijalnu trombocitemiju i primarnu mijelofibrozu. Dodatni hematološki poremećaj je hipereozinofilni sindrom. Limfoproliferativne bolesti T-ćelija uključuju one poreklom od ćelija prirodnih ubica.

[0081] Pored toga, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu se upotrebljavati za lečenje gastrointestinalnog (poznat i kao želudačni) kancera npr. gastrointestinalnih stromalnih tumora. Gastrointestinalni kancer se odnosi na maligna stanja gastrointestinalnog trakta, uključujući jednjak, želudac, jetru, bilijarni sistem, pankreas, creva, i anus.

[0082] Stoga, u kombinacijama ili farmaceutskim kompozicijama, ovog pronalaska za lečenje bolesti ili stanja koje sadrži abnormalni ćelijski rast, bolest ili stanje koje sadrži abnormalni ćelijski rast u jednom primeru izvođenja je kancer.

[0083] Posebni podskupovi kancera uključuju multipli mijelom, karcinom bešike, grlića materice, prostate i štitne žlezde, kancere pluća, dojke, i kolona.

[0084] Dodatni podskup kancera uključuje multipli mijelom, karcinom bešike, hepatocelularni, karcinom oralnih pločastih ćelija i karcinome grlića materice.

[0085] Dodatni podskup kancera uključuje bešike, pluća, dojke, želuca, hepatocelularni, kolona, hematološke malignitete, jajnika, glioblastom.

[0086] Dodatni podskup kancera uključuje bešike, pluća, dojke, želuca i hepatocelularni.

[0087] Kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska, koje imaju FGFR kao što je FGFR1 inhibitornu aktivnost, mogu biti posebno korisne u lečenju ili prevenciji kancera dojke, posebno klasičnih lobularnih karcinoma (CLC).

[0088] Kako kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska imaju FGFR4 aktivnost takođe će biti korisne u lečenju kancera prostate ili hipofize, ili će biti korisne u lečenju kancera dojke, kancera pluća, kancera prostate, kancera jetre (HCC) ili kancera pluća.

[0089] Posebno su kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska koje sadrže FGFR inhibitore korisne u lečenju multipla mijeloma, mijeloproliferativnih poremećaja, kancera endometrijuma, kancera prostate, kancera bešike, kancera pluća, kancera jajnika, kancera dojke, kancera želuca, kolorektalnog kancera, i karcinoma oralnih pločastih ćelija.

2

[0090] Dodatni podskupovi kancera su multipli mijelom, kancer endometrijuma, kancer bešike, kancer grlića materice, kancer prostate, kancer pluća, kancer dojke, kolorektalni kancer i karcinomi štitne žlezde.

[0091] Posebno su kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska korisne u lečenju multipla mijeloma (posebno multipli mijelom sa t(4; 14) translokacijom ili prekomernom ekspresijom FGFR3), kancera prostate (hormonski refraktorni karcinomi prostate), kancera endometrijuma (posebno tumori endometrijuma sa aktivirajućim mutacijama u FGFR2) i kancera dojke (posebno lobularni kancer dojke).

[0092] Posebno su kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska korisne u lečenju lobularnih karcinoma kao što je CLC (klasični lobularni karcinom).

[0093] Kako kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska imaju aktivnost prema FGFR3, one će biti korisne u lečenju multipla mijeloma i kancera bešike.

[0094] Posebno, jedinjenja imaju aktivnost protiv tumora sa FGFR3-TACC3 translokacijom, posebno tumora bešike ili mozga sa FGFR3-TACC3 translokacijom.

[0095] Posebno su kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska korisne za lečenje multipla mijeloma pozitivnog na t(4; 14) translokaciju.

[0096] U jednom primeru izvođenja kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne za lečenje sarkoma. U jednom primeru izvođenja kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne za lečenje kancera pluća, npr. karcinoma pločastih ćelija.

[0097] Kako kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska imaju aktivnost prema FGFR2, one će biti korisne u lečenju kancera endometrijuma, jajnika, želuca, hepatocelularnog, materice, grlića materice i kolorektalnog. FGFR2 je takođe prekomerno eksprimiran kod kancera epitela jajnika, zato kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti specifično korisne u lečenju kancera jajnika kao što je kancer epitela jajnika.

[0098] U jednom primeru izvođenja, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne za lečenje kancera pluća, posebno NSCLC (nesitnoćelijski kancer pluća), karcinoma pločastih ćelija, kancera jetre, kancera bubrega, kancera dojke, kancera kolona, kolorektalnog kancera, kancera prostate.

[0099] Kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu takođe biti korisne u lečenju tumora prethodno tretiranih sa VEGFR2 inhibitorom ili VEGFR2 antitelom (npr. Avastin).

2

[0100] Posebno kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne u lečenju tumora rezistentnih na VEGFR2. VEGFR2 inhibitori i antitela se upotrebljavaju u lečenju karcinoma štitne žlezde i bubrežnih ćelija, zato kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne u lečenju karcinoma štitne žlezde i bubrežnih ćelija rezistentnih na VEGFR2.

[0101] Kanceri mogu biti kanceri koji su osetljivi na inhibiciju bilo kog ili više FGFR odabranih od FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, na primer, jedog ili više FGFR odabranih od FGFR1, FGFR2 ili FGFR3.

[0102] Da li je određeni kancer onaj koji je osetljiv na inhibiciju FGFR signalizacije ili ne, može se utvrditi pomoću testa ćelijskog rasta kao što je izneto ispod ili postupkom iznetim u delu naslovljenom "Postupci dijagnoze".

[0103] Jedinjenja pronalaska, i posebno ona jedinjenja koja imaju FGFR inhibitornu aktivnost, mogu biti posebno korisna u lečenju ili prevenciji kancera tipa koji je povezan sa ili koji karakteriše prisustvo povišenih nivoa FGFR, na primer kancera na koje se poziva u ovom kontekstu u uvodnom delu ove prijave.

[0104] Kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne za lečenje adultne populacije. Kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne za lečenje pedijatrijske populacije.

[0105] Kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne u lečenju drugih stanja koja su rezultat poremećaja proliferacije kao što su tip II ili dijabetes melitus koji nije zavisan od insulina, autoimunske bolesti, trauma glave, moždani udar, epilepsija, neurodegenerativne bolesti kao što su Alchajmerova (Alzheimerꞌs) bolest, bolest motornih neurona, progresivna supranuklearna paraliza, kortikobazalna degeneracija i Pikova (Pickꞌs) bolest na primer autoimunske bolesti i neurodegenerativne bolesti.

[0106] Jedna podgrupa bolesnih stanja i stanja u kojima kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne sastoji se od inflamatornih bolesti, kardiovaskularnih bolesti i zarastanja rana.

[0107] Takođe je poznato da FGFR igra ulogu u apoptozi, angiogenezi, proliferaciji, diferencijaciji i transkripciji, pa bi zato jedinjenja, kombinacije, farmaceutske kompozicije pronalaska takođe mogle biti korisne u lečenju sledećih bolesti drugih nego što je kancer; hronične inflamatorne bolesti, na primer sistemski eritemski lupus, autoimunski posredovani glomerulonefritis, reumatoidni artritis, psorijaza, inflamatorna bolest creva, autoimunski dijabetes melitus, ekcemske reakcije preosetljivosti, astma, HOBP, rinitis, i bolest gornjih disajnih puteva; kardiovaskularne bolesti, na primer srčana hipertrofija, restenoza,

2

ateroskleroza; neurodegenerativni poremećaji, na primer Alchajmerova bolest, demencija povezana sa AIDS-om, Parkinsonova (Parkinsonꞌs) bolest, amiotrofična lateralna skleroza, retinitis pigmentosa, spinalna mišićna atrofija i cerebelarna degeneracija; glomerulonefritis; mijelodisplastični sindromi, infarkti miokarda povezani sa ishemijskom povredom, moždani udar i povreda reperfuzije, aritmija, ateroskleroza, bolesti jetre izazvane toksinom ili alkoholom, hematološke bolesti, na primer, hronična anemija i aplastična anemija; degenerativne bolesti mišićno-skeletnog sistema, na primer, osteoporoza i artritis, rinosinusitis osetljiv na aspirin, cistična fibroza, multipla skleroza, bolesti bubrega i bol usled kancera.

[0108] Pored toga, mutacije FGFR2 povezane su sa nekoliko ozbiljnih abnormalnosti u razviću humanog skeleta i stoga bi jedinjenja pronalaska mogla biti korisna u lečenju abnormalnosti u razviću humanog skeleta, uključujući abnormalno okoštavanje kranijalnih šavova (kraniosinostoza), Apertov (AP) sindrom, Krouzonov sindrom, Džekson-Vajsov sindrom, Ber-Stivensonov cutis gyrata sindrom, i Fajferov sindrom.

[0109] Kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska, koje imaju FGFR kao što je FGFR2 ili FGFR3 inhibitornu aktivnost, mogu biti posebno korisne u lečenju ili prevenciji bolesti skeleta. Posebne bolesti skeleta su ahondroplazija ili tanatoforni smanjeni rast (poznat i kao tanatoforna displazija).

[0110] Kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska, koje imaju FGFR kao što je FGFR1, FGFR2 ili FGFR3 inhibitornu aktivnost, mogu biti posebno korisne u lečenju ili prevenciji kod patologija kod kojih je simptom progresivna fibroza. Fibrotička stanja u kojima jedinjenja pronalaska mogu biti korisna u lečenju uključuju bolesti koje pokazuju abnormalno ili prekomerno deponovanje vlaknastog tkiva na primer kod ciroze jetre, glomerulonefritisa, pulmonarne fibroze, sistemske fibroze, reumatoidnog artritisa, kao i prirodnog procesa zarastanja rana. Posebno jedinjenja, kombinacije, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu takođe biti korisne u lečenju fibroze pluća, posebno kod idiopatske pulmonarne fibroze.

[0111] Prekomerna ekspresija i aktivacija FGFR u vaskulaturi povezanoj sa tumorom takođe sugeriše ulogu kombinacija ili farmaceutskih kompozicija predmetnog pronalaska u prevenciji i ometanju inicijacije tumorske angiogeneze. Posebno kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne u lečenju kancera, metastaza, leukemija kao što je CLL, okularnih bolesti kao što je starosna degeneracija makule, posebno vlažni oblik starosne degeneracije makule, ishemijske proliferativne retinopatije kao što su

2

retinopatija nedonoščadi (ROP) i dijabetička retinopatija, reumatoidnog artritisa i hemangioma.

[0112] U jednom primeru izvođenja, obezbeđena je kombinacija ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde definisano za upotrebu u terapiji, za upotrebu kao lek. U dodatnom primeru izvođenja, obezbeđena je kombinacija ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju, posebno u lečenju, bolesnog stanja ili stanja posredovanog FGFR kinazom.

[0113] Stoga, na primer, kombinacije ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne u ublažavanju ili smanjenju incidence kancera. Zato je, u dodatnom primeru izvođenja, obezbeđena kombinacija ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju, posebno u lečenju, kancera. U jednom primeru izvođenja, kombinacija ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde definisano je za upotrebu u profilaksi ili lečenju kancera zavisnog od FGFR. U jednom primeru izvođenja, kombinacija ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde definisano je za upotrebu u profilaksi ili lečenju kancera posredovanog FGFR kinazama.

U skladu sa tim, specifikacija inter alia objavljuje:

- Postupak za profilaksu ili lečenje bolesnog stanja ili stanja posredovanog FGFR kinazom, postupak sadrži primenu subjektu kom je to potrebno kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano.

- Postupak za profilaksu ili lečenje bolesnog stanja ili stanja kao što je ovde opisano, postupak sadrži primenu subjektu kom je to potrebno kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano.

- Postupak za profilaksu ili lečenje kancera, postupak sadrži primenu subjektu kom je to potrebno kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano.

- Postupak za ublažavanje ili smanjenje incidence bolesnog stanja ili stanja posredovanog FGFR kinazom, postupak sadrži primenu subjektu kom je to potrebno kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano.

- Postupak inhibicije FGFR kinaze, postupak sadrži dovođenje u kontakt kinaze sa kombinacijom ili farmaceutskom kompozicijom koja inhibira kinazu kao što je ovde definisano.

- Postupak modulacije ćelijskog procesa (na primer ćelijske deobe) inhibicijom aktivnosti FGFR kinaze upotrebom kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano.

- Kombinacija ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde definisano za upotrebu kao modulator ćelijskog procesa (na primer ćelijske deobe) inhibicijom aktivnosti FGFR kinaze.

- Kombinacija ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju kancera, posebno u lečenju kancera.

- Kombinacija ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde definisano za upotrebu kao modulator (npr. inhibitor) FGFR.

- Upotreba kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili lečenje bolesnog stanja ili stanja posredovanog FGFR kinazom.

- Upotreba kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili lečenje bolesnog stanja ili stanja kao što je ovde opisano.

- Upotreba kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili lečenje, posebno za lečenje, kancera.

- Upotreba kombinacije ili farmaceutske farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano za proizvodnju medikamenta za modulisanje (npr. inhibiciju) aktivnosti FGFR.

- Upotreba kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano u proizvodnji medikamenta za modulisanje ćelijskog procesa (na primer ćelijske deobe) inhibicijom aktivnosti FGFR kinaze.

- Upotreba kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili lečenje bolesti ili stanja koje karakteriše povećanje FGFR kinaze (npr. FGFR1 ili FGFR2 ili FGFR3 ili FGFR4).

- Upotreba kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili lečenje kancera, kancer je onaj koji se karakteriše povećanjem FGFR kinaze (npr. FGFR1 ili FGFR2 ili FGFR3 ili FGFR4). - Upotreba kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili lečenje kancera kod pacijenta odabranog iz podpopulacije koja poseduje genetičke aberacije FGFR3 kinaze.

- Upotreba kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano za proizvodnju medikamenta za profilaksu ili lečenje kancera kod pacijenta kom je dijagnostikovano da čini deo podpopulacije koja poseduje genetičke aberacije FGFR3

1

kinaze, posebno FGFR3-TACC3 translokaciju, tačnije kancer bešike sa FGFR3-TACC3 translokacijom.

- Postupak za profilaksu ili lečenje bolesti ili stanja koje karakteriše povećanje FGFR kinaze (npr. FGFR1 ili FGFR2 ili FGFR3 ili FGFR4), postupak sadrži primenu kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano.

- Postupak za ublažavanje ili smanjenje incidence bolesti ili stanja koje karakteriše povećanje FGFR kinaze (npr. FGFR1 ili FGFR2 ili FGFR3 ili FGFR4), postupak sadrži primenu kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisano.

- Postupak za profilaksu ili lečenje (ili ublažavanje ili smanjenje incidence) kancera kod pacijenta koji boluje ili se sumnja da boluje od kancera; postupak sadrži (i) podvrgavanje pacijenta dijagnostičkom testu kako bi se utvrdilo da li pacijent poseduje genetičke aberacije FGFR3 gena, posebno FGFR3-TACC3 translokaciju, tačnije kancer bešike sa FGFR3-TACC3 translokacijom; i (ii) gde pacijent poseduje navedenu varijantu, posle toga pacijentu se primenjuje kombinacija ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde definisano koja ima aktivnost inhibicije FGFR3 kinaze.

- Postupak za profilaksu ili lečenje (ili ublažavanje ili smanjenje incidence) bolesnog stanja ili stanja koje karakteriše povećanje FGFR kinaze (npr. FGFR1 ili FGFR2 ili FGFR3 ili FGFR4); postupak sadrži (i) podvrgavanje pacijenta dijagnostičkom testu kako bi se detektovao marker karakterističan za povećanje FGFR kinaze (npr. FGFR1 ili FGFR2 ili FGFR3 ili FGFR4) i (ii) gde dijagnostički test ukazuje na povećanje FGFR kinaze, posle toga pacijentu se primenjuje kombinacija ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde definisano koja ima aktivnost inhibicije FGFR3 kinaze.

[0114] U jednom primeru izvođenja, bolest posredovana FGFR kinazama je bolest povezana sa onkologijom (npr. kancer). U jednom primeru izvođenja, bolest posredovana FGFR kinazama je bolest koja nije povezana sa onkologijom (npr. bilo koja bolest objavljena ovde isključujući kancer). U jednom primeru izvođenja, bolest posredovana FGFR kinazama je ovde opisano stanje. U jednom primeru izvođenja, bolest posredovana FGFR kinazama je skeletno stanje ovde opisano. Posebne abnormalnosti u razviću humanog skeleta uključuju abnormalno okoštavanje kranijalnih šavova (kraniosinostoza), Apertov (AP) sindrom, Krouzonov sindrom, Džekson-Vajsov sindrom, Bar-Stevensonov cutis gyrata sindrom, Fajferov sindrom, ahondroplaziju i tanatoforni smanjeni rast (poznat i kao tanatoforna displazija).

2

Mutirane kinaze

[0115] Mutacije kinaze otporne na lekove mogu nastati u populaciji pacijenata lečenih inhibitorima kinaze. One se javljaju, delom, u regionima proteina koji se vezuju za ili interaguju sa određenim inhibitorom koji se upotrebljava u terapiji. Takve mutacije smanjuju ili povećavaju kapacitet inhibitora da se vezuje za i inhibira kinazu u pitanju. To se može dogoditi na bilo kom od amino-kiselinskih ostataka koji interaguju sa inhibitorom ili su važni za podršku vezivanju navedenog inhibitora za cilj. Na inhibitor koji se vezuje za ciljnu kinazu bez potrebe za interakcijom sa mutiranim amino-kiselinskim ostatkom verovatno neće uticati mutacija i ostaće efikasan inhibitor enzima.

[0116] Studija na uzorcima pacijenata sa kancerom želuca pokazala je prisustvo dve mutacije u FGFR2, Ser167Pro u egzonu IIIa i mutacija mesta splajsovanja 940-2A-G u egzonu IIIc. Ove mutacije su identične aktivirajućim mutacijama germinativne linije koje uzrokuju sindrome kraniosinotoze i uočene su kod 13% proučavanih tkiva primarnog kancera želuca. Pored toga aktivirajuće mutacije u FGFR3 uočene su kod 5% testiranih uzoraka pacijenata i prekomerna ekspresija FGFR je bila u korelaciji sa lošom prognozom kod ove grupe pacijenata.

[0117] Pored toga, postoje hromozomske translokacije ili tačkaste mutacije koje su uočene u FGFR koje dovode do dobitka funkcije, prekomernih, ili konstitutivno aktivnih bioloških stanja.

[0118] Jedinjenja, kombinacije ili farmaceutske kompozicije pronalaska bi zato pronašle posebnu primenu u odnosu na kancere koji eksprimiraju mutirani molekularni cilj kao što je FGFR. Dijagnoza tumora sa takvim mutacijama mogla bi se izvesti upotrebom tehnika poznatih osobi iskusnoj u struci i kao što je opisano ovde kao što su RTPCR i FISH.

[0119] Sugerisano je da bi mutacije konzerviranog ostatka treonina na ATP vezujućem mestu FGFR rezultirale rezistencijom na inhibitor. Amino-kiselina valin 561 je mutirana u metionin u FGFR1 što odgovara prethodno saopštenom mutacijama pronađenim u Abl (T315) i EGFR (T766) za koje je pokazano da daju rezistenciju na selektivne inhibitore. Podaci testiranja za FGFR1 V561M pokazali su da je ova mutacija dala rezistenciju na inhibitor tirozin kinaze u poređenju sa onim divljeg tipa.

Postupci dijagnoze

[0120] Pre primene kombinacije ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde opisano, pacijent se može pregledati kako bi se utvrdilo da li je bolest ili stanje od kog pacijent pati ili može patiti ono koje bi bilo podložno lečenju jedinjenjem koje ima aktivnost prema FGFR.

[0121] Na primer, biološki uzorak uzet od pacijenta može se analizirati kako bi se utvrdilo da li je stanje ili bolest, kao što je kancer, od koje pacijent pati ili može patiti ona koju karakteriše genetička abnormalnost ili abnormalna ekspresija proteina koja dovodi do povećanja nivoa ili aktivnosti FGFR, ili do senzibilizacije puta do normalne FGFR aktivnosti, ili do povećanja ovih signalnih puteva faktora rasta kao što su nivoi liganda faktora rasta ili aktivnost liganda faktora rasta ili do povećanja biohemijskog puta nizvodno od FGFR aktivacije. Primeri takvih abnormalnosti koje rezultuju aktivacijom ili senzibilizacijom FGFR signala uključuju gubitak, ili inhibiciju apoptotskih puteva, povećanje receptora ili liganada, ili prisustvo mutiranih varijanti receptora ili liganada npr. PTK varijante. Tumori sa mutantima FGFR1, FGFR2 ili FGFR3 ili FGFR4 ili povećanjem, posebno prekomernom ekspresijom FGFR1, ili mutantima sa dobitkom funkcije FGFR2 ili FGFR3 mogu biti posebno osetljivi na FGFR inhibitore.

[0122] Na primer, tačkaste mutacije koje izazivaju dobitak funkcije u FGFR2 identifikovane su u brojnim stanjima. Posebno su identifikovane aktivirajuće mutacije u FGFR2 kod 10% tumora endometrijuma.

[0123] Pored toga, identifikovane su genetičke aberacije FGFR3 receptora tirozin kinaze kao što su hromozomske translokacije ili tačkaste mutacije koje rezultuju ektopično ekprimiranim ili deregulisanim, konstitutivno aktivnim, FGFR3 receptorima i povezane su sa podskupom multipla mijeloma, karcinoma bešike i grlića materice. Posebna mutacija T674I PDGF receptora identifikovana je kod pacijenata lečenih imatinibom. Pored toga, genska amplifikacija 8p12-p11.2 je demonstrirana kod ~50% slučajeva lobularnog kancera dojke (CLC) i pokazalo se da je ovo povezano sa povećanom ekspresijom FGFR1. Preliminarne studije sa siRNK usmerenom prema FGFR1, ili malom molekulskom inhibitoru receptora, pokazale su da su ćelijske linije koje nose ovu amplifikaciju posebno osetljive na inhibiciju ovog signalnog puta.

[0124] Alternativno, biološki uzorak uzet od pacijenta može se analizirati na gubitak negativnog regulatora ili supresora FGFR. U predmetnom kontekstu, pojam "gubitak" obuhvata deleciju gena koji kodira regulator ili supresor, skraćivanje gena (na primer mutacijom), skraćivanje transkribovanog proizvoda gena, ili inaktivaciju transkribovanog proizvoda (npr. tačkastom mutacijom) ili sekvestraciju proizvodom drugog gena.

4

[0125] Termin povećanje uključuje povišenu ekspresiju ili prekomernu ekspresiju, uključujući amplifikaciju gena (tj. više kopija gena) i povećanu ekspresiju transkripcionim efektom, i hiperaktivnost i aktivaciju, uključujući aktivaciju mutacijama. Stoga, pacijent može biti podvrgnut dijagnostičkom testu kako bi se detektovao marker karakterističan za povećanje FGFR. Termin dijagnoza uključuje pregled. Pod markerom uključujemo genetičke markere uključujući, na primer, merenje DNK kompozicije kako bi se identifikovala mutacija FGFR. Termin marker takođe uključuje markere koji su karakteristični za povećanje FGFR, uključujući enzimsku aktivnost, nivoe enzima, stanje enzima (npr. fosforilisan ili ne) i nivoe iRNK prethodno pomenutih proteina.

[0126] Dijagnostički testovi i pregledi se tipično sprovode na biološkom uzorku odabranom od uzoraka biopsije tumora, uzoraka krvi (izolacija i obogaćivanje oslobođenih tumorskih ćelija), biopsija stolice, sputuma, analize hromozoma, pleuralne tečnosti, peritonealne tečnosti, bukalnih razmaz, biopsije ili urina.

Postupci identifikacije i analize mutacija i povećanja proteina poznati su osobi iskusnoj u struci. Postupci pregleda mogu da uključuju standardne postupke kao što je lančana reakcija polimeraze reverznom transkriptazom (RT-PCR) ili in situ hibridizacija kao što je fluorescentna in situ hibridizacija (FISH).

[0127] Identifikacija osobe koja nosi mutaciju u FGFR može značiti da bi pacijent bio posebno pogodan za lečenje FGFR inhibitorom. Tumori se mogu poželjno pregledati na prisustvo FGFR varijante pre lečenja. Proces pregleda tipično će uključivati direktno sekvenciranje, analizu genskih čipova (microarray) oligonukleotida, ili antitelo specifično za mutant. Pored toga, dijagnoza tumora sa takvim mutacijama mogla bi se izvesti upotrebom tehnika poznatih osobi iskusnoj u struci kao što je opisano ovde kao što su RT-PCR i FISH.

[0128] Pored toga, mutirani oblici, na primer FGFR, mogu se identifikovati direktnim sekvenciranjem, na primer, biopsija tumora upotrebom PCR i postupcima za direktno sekvenciranje PCR proizvoda, kao što je ovde prethodno opisano. Iskusan stručnjak će prepoznati da bi se sve takve dobro poznate tehnike za detekciju prekomerne ekspresije, aktivacije ili mutacija gore pomenutih proteina mogle primenljivati u predmetnom slučaju.

[0129] U pregledu pomoću RT-PCR, nivo iRNK u tumoru procenjuje se stvaranjem cDNK kopije iRNK, praćeno amplifikacijom cDNK pomoću PCR. Postupci PCR amplifikacije, odabir prajmera, i uslovi za amplifikaciju, poznati su osobi iskusnoj u struci. Manipulacije nukleinskom kiselinom i PCR izvode se standardnim postupcima, kao što je opisano na primer u Ausubel, F.M. et al., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., or Innis, M.A. et al., eds. (1990) PCR Protocols: a guide to methods and applications, Academic Press, San Diego. Reakcije i manipulacije koje uključuju tehnike nukleinske kiseline takođe su opisane u Sambrook et al., (2001), 3rd Ed, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Alternativno se može upotrebljavati komercijalno dostupan komplet za RT-PCR (na primer Roche Molecular Biochemicals), ili metodologija kao što je izneta u patentima Sjedinjenih Država 4,666,828; 4,683,202; 4,801,531; 5,192,659, 5,272,057, 5,882,864, i 6,218,529. Primer tehnike in situ hibridizacije za procenu ekspresije iRNK bila bi fluorescentna in situ hibridizacija (FISH) (videti Angerer (1987) Meth. Enzymol., 152: 649).

[0130] Generalno, in situ hibridizacija sadrži sledeće glavne korake: (1) fiksaciju tkiva koje se analizira; (2) prehibridizacioni tretman uzorka kako bi se povećala pristupačnost ciljne nukleinske kiseline, i smanjilo nespecifično vezivanje; (3) hibridizaciju smeše nukleinskih kiselina sa nukleinskom kiselinom u biološkoj strukturi ili tkivu; (4) post-hibridizaciona ispiranja kako bi se uklonili fragmenti nukleinske kiseline koji nisu vezani u hibridizaciji, i (5) detekciju fragmenata hibridizovane nukleinske kiseline. Probe koje se upotrebljavaju u ovakvim primenama su tipično obeležene, na primer, radioizotopima ili fluorescentnim reporterima. Poželjne probe su dovoljno dugačke, na primer, od 50, 100, ili 200 nukleotida do 1000 ili više nukleotida, kako bi se omogućila specifična hibridizacija sa ciljnom nukleinskom kiselinom(ama) pod strogim uslovima. Standardni postupci za izvođenje FISH opisani su u Ausubel, F.M. et al., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc i u Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview autora John M. S. Bartlett u Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2nd ed.; ISBN: 1-59259-760-2; mart 2004, pps.077-088; Serija: Methods in Molecular Medicine.

[0131] Postupke za profilisanje ekspresije gena opisali su (DePrimo et al. (2003), BMC Cancer, 3:3). Ukratko, protokol je sledeći: dvolančana cDNK se sintetiše iz ukupne RNK upotrebom (dT)24 oligomera za prajmiranje sinteze prvog lanca cDNK, praćene sintezom drugog lanca cDNK sa slučajnim heksamer prajmerima. Dvolančana cDNK se upotrebljava kao templat za in vitro transkripciju cRNK upotrebom biotinilizovanih ribonukleotida. cRNK je hemijski fragmentisana u skladu sa protokolima koje je opisao Affymetrix (Santa Clara, CA, SAD), i zatim hibridizovana preko noći na nizovima humanog genoma.

[0132] Alternativno, proteinski proizvodi eksprimirani iz iRNK mogu se testirati imunohistohemijom uzoraka tumora, imunotestom čvrste faze sa mikrotitarskim pločama, western blotovanjem, dvodimenzionalnom elektroforezom na SDS-poliakrilamidnom gelu, ELISA, protočnom citometrijom i drugim postupcima poznatim u struci za detekciju specifičnih proteina.

[0133] Postupci detekcije bi uključivali upotrebu antitela specifičnih za mesto. Stručnjak će prepoznati da bi sve takve dobro poznate tehnike za detekciju povećanja FGFR, ili detekciju FGFR varijanti ili mutanata mogle biti primenljive u predmetnom slučaju.

[0134] Abnormalni nivoi proteina kao što je FGFR mogu se izmeriti upotrebom standardnih enzimskih testova, na primer, onih testova opisanih ovde. Aktivacija ili prekomerna ekspresija takođe se mogu detektovati u uzorku tkiva, na primer, tkivu tumora. Merenjem aktivnosti tirozin kinaze testom kao što je onaj od Chemicon International. Tirozin kinaza od interesa bi se imunoprecipitirala iz uzorka lizata i izmerila bi se njena aktivnost.

[0135] Alternativni postupci za merenje prekomerne ekspresije ili aktivacije FGFR uključujući njegove izoforme, uključuju merenje gustine mikrosudova. Ovo se na primer može meriti upotrebom postupaka koje su opisali Orre i Rogers (Int J Cancer (1999), 84(2) 101-8).

[0136] Zato se sve ove tehnike takođe mogu upotrebljavati za identifikaciju tumora posebno pogodnih za lečenje kombinacijama ili farmaceutskim kompozicijama pronalaska.

[0137] Kombinacije ili farmaceutske kompozicije pronalaska su posebno korisne u lečenju pacijenta koji ima mutirani FGFR. Mutacija G697C u FGFR3 uočena je u 62% karcinoma oralnih pločastih ćelija i uzrokuje konstitutivnu aktivaciju kinazne aktivnosti. Aktivirajuće mutacije FGFR3 su takođe identifikovane u slučajevima karcinoma bešike. Ove mutacije su bile od 6 vrsta sa različitim stepenima rasprostranjenosti: R248C, S249C, G372C, S373C, Y375C, K652Q. Pored toga, utvrđeno je da je Gly388Arg polimorfizam u FGFR4 povezan sa povećanom incidencom i agresivnošću kancera prostate, kolona, pluća, jetre (HCC) i dojke.

[0138] Objavljuje se upotreba kombinacije ili farmaceutske kompozicije u skladu sa pronalaskom za proizvodnju medikamenta za lečenje ili profilaksu bolesnog stanja ili stanja kod pacijenta koji je pregledan i za kojeg je utvrđeno da pati od, ili da je u riziku da pati od, bolesti ili stanja koje bi bilo podložno lečenju jedinjenjem koje ima aktivnost prema FGFR.

[0139] Određene mutacije na koje se pacijent pregleda uključuju G697C, R248C, S249C, G372C, S373C, Y375C, K652Q mutacije u FGFR3 i Gly388Arg polimorfizam u FGFR4.

[0140] Objavljuje se jedinjenje, kombinacija ili farmaceutska kompozicija pronalaska za upotrebu u profilaksi ili lečenju kancera kod pacijenta odabranog iz podpopulacije koja poseduje varijantu FGFR gena (na primer G697C mutaciju u FGFR3 i Gly388Arg polimorfizam u FGFR4).

[0141] S obzirom na njihova korisna farmakološka svojstva, FGFR inhibitori i cMet inhibitori se mogu formulisati u različite farmaceutske oblike za svrhe primene.

[0142] U jednom primeru izvođenja, farmaceutska kompozicija (npr. formulacija) sadrži najmanje jedan FGFR inhibitor, ili najmanje jedan cMet inhibitor ili najmanje jedan FGFR inhibitor i jedan cMet inhibitor pronalaska zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, adjuvansa, ekscipijenasa, razblaživača, punila, pufera, stabilizatora, konzervanasa, lubrikanata, ili drugih materijala dobro poznatih iskusnima u struci i opciono drugim terapeutskim ili profilaktičkim agensima.

[0143] Kako bi se pripremile farmaceutske kompozicije ovog pronalaska, efikasna količina jedinjenja predmetnog pronalaska, kao aktivnog sastojka kombinuje se u prisnoj smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, nosač može imati široku paletu oblika, u zavisnosti od oblika preparata koji se želi za primenu. Farmaceutske kompozicije mogu biti u bilo kom obliku pogodnom za oralnu, parenteralnu, topikalnu, intranazalnu, oftalmološku, otičnu, rektalnu, intravaginalnu, ili transdermalnu primenu. Ove farmaceutske kompozicije su poželjno u jedinstvenom doznom obliku pogodnom, poželjno, za oralnu, rektalnu, perkutanu primenu, ili parenteralnom injekcijom. Na primer, u pripremi kompozicija u oralnom doznom obliku, može se koristiti bilo koji uobičajeni farmaceutski medijum, kao što je, na primer, voda, glikoli, ulja, alkoholi u slučaju oralnih tečnih preparata kao što su suspenzije, sirupi, eliksiri i rastvori; ili čvrsti nosači kao što su skrobovi, šećeri, kaolin, lubrikanti, veziva, agensi za dezintegraciju u slučaju prašaka, pilula, kapsula i tableta.

[0144] Zbog jednostavnosti primene, tablete i kapsule predstavljaju najpovoljniji oralni jedinični dozni oblik, u kom slučaju se očigledno koriste čvrsti farmaceutski nosači. Za parenteralne kompozicije, nosač će uobičajeno sadržati sterilnu vodu, najmanje u velikom delu, mada mogu biti uključeni i drugi sastojci, koji pomažu na primer rastvorljivost. Injekcioni rastvori na primer, mogu se pripremiti u kojima nosač sadrži fiziološki rastvor, rastvor glukoze ili smešu fiziološkog rastvora i rastvora glukoze. Injekcione suspenzije takođe se mogu pripremiti, u kom slučaju se mogu koristiti odgovarajući tečni nosači, suspenzijski agensi. U kompozicijama pogodnim za perkutanu primenu, nosač opciono sadrži agens za poboljšanje prodiranja i/ili pogodni agens za vlaženje, opciono kombinovane sa odgovarajućim aditivima bilo koje prirode u manjim razmerama, aditivi ne uzrokuju značajan štetan efekat na kožu. Navedeni aditivi mogu olakšati primenu na kožu i/ili mogu biti korisni za pripremu željenih kompozicija. Ove kompozicije se mogu primenjivati na različite načine, npr, kao transdermalni flaster, kao spot-on, kao mast. Naročito je povoljno formulisati prethodno pomenute farmaceutske kompozicije u jediničnom doznom obliku za jednostavnu primenu i uniformnost doza. Jedinični dozni oblik kao što se ovde upotrebljava u specifikaciji i patentnim zahtevima označava fizički diskretne jedinice pogodne kao jedinstvene doze, svaka jedinica sadrži unapred određenu količinu aktivnog sastojka izračunatu da proizvede željeni terapijski efekat zajedno sa potrebnim farmaceutskim nosačem. Primeri takvih jediničnih doznih oblika su tablete (uključujući one sa podeonom linijom ili obložene tablete), kapsule, pilule, paketići praška, vaferi, injekcioni rastvori ili suspenzije, za primenu kašičicom, za primenu kašikom, i njihovi odvojeni sadržaoci.

[0145] Naročito je povoljno formulisati prethodno pomenute farmaceutske kompozicije u jediničnom doznom obliku za jednostavnu primenu i uniformnost doze. Jedinični dozni oblik kao što se ovde upotrebljava u specifikaciji i patentnim zahtevima označava fizički diskretne jedinice pogodne kao jedinstvene doze, svaka jedinica sadrži unapred određenu količinu aktivnog sastojka, izračunatu da proizvede željeni terapijski efekat, zajedno sa potrebnim farmaceutskim nosačem. Primeri takvih jediničnih dozinih oblika su tablete (uključujući one sa podeonom linijom ili obložene tablete), kapsule, pilule, paketići praha, vaferi, injekcioni rastvori ili suspenzije, za primenu kašičicom, za primenu kašikom, i njihovi odvojeni sadržaoci.

[0146] Kombinacija ili farmaceutska kompozicija pronalaska primenjuje se u količini koja je dovoljna da ispolji svoju antitumorsku aktivnost.

[0147] Iskusni u struci mogu lako utvrditi efikasnu količinu FGFR inhibitora i cMet inhibitora kao što je ovde opisano. Generalno se smatra da bi terapijski efikasna količina bila od 0,005 mg/kg do 100 mg/kg telesne težine, i posebno od 0,005 mg/kg do 10 mg/kg telesne težine. Možda će biti prikladno primeniti potrebnu dozu u obliku jedne, dve, tri, četiri ili više poddoza u odgovarajućim intervalima tokom dana. Navedene poddoze mogu biti formulisane kao jedinični dozni oblici, na primer, koji sadrže 0,5 do 500 mg, posebno 1 mg do 500 mg, tačnije 10 mg do 500 mg aktivnog sastojka po jediničnom doznom obliku.

[0148] U zavisnosti od načina primene, farmaceutska kompozicija će poželjno sadržati od 0,05 do 99% po težini, poželjnije od 0,1 do 70% po težini, još poželjnije od 0,1 do 50% po težini FGFR inhibitora, cMet inhibitora ili kombinacije FGFR inhibitora i cMet inhibitora kao što je ovde opisano, i, od 1 do 99,95% po težini, poželjnije od 30 do 99,9% po težini, još poželjnije od 50 do 99,9% po težini farmaceutski prihvatljivog nosača, svi procenti su zasnovani na ukupnoj težini kompozicije.

[0149] Za lečenje gore navedenih stanja, kombinacije ili farmaceutske kompozicije pronalaska mogu se povoljno koristiti, kao što je navedeno iznad, u kombinaciji sa jednim ili više drugih lekovitih agenasa, tačnije, sa drugim antikancerskim agensima ili adjuvansima u terapiji kancera.

[0150] Predmetni pronalazak se zato takođe odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedan ili više drugih lekovitih agenasa i kombinaciju u skladu sa predmetnim pronalaskom zajedno sa farmaceutskim nosačem.

[0151] Objavljuje se upotreba kombinacije u skladu sa pronalaskom u proizvodnji farmaceutske kompozicije za inhibiciju rasta tumorskih ćelija.

[0152] Predmetni pronalazak se dodatno odnosi na proizvod koji sadrži kao prvi aktivni sastojak FGFR inhibitor u skladu sa pronalaskom, kao drugi aktivni sastojak cMet inhibitor, posebno cMet inhibitor kao što je ovde definisano, tačnije jedinjenje C ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat ili jedinjenje D ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov solvat, i kao dodatni aktivni sastojak jedan ili više antikancerskih agenasa, kao kombinovani preparat za istovremenu, odvojenu ili uzastopnu upotrebu u lečenju pacijenata koji pate od kancera.

[0153] Jedan ili više drugih lekovitih agenasa i kombinacija u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu se primenjivati istovremeno (npr. u odvojenim ili jedinstvenim kompozicijama) ili uzastopno bilo kojim redosledom. U potonjem slučaju, tri ili više jedinjenja će se primeniti u periodu i u količini i na način koji je dovoljan da se osigura da se postigne povoljan ili sinergistički efekat. Podrazumevaće se da će poželjan postupak i redosled primene i respektivne količine i režimi doziranja za svaku komponentu kombinacije zavisiti od određenog drugog lekovitog agensa i jedinjenja kombinacija predmetnog pronalaska koji se primenjuju, puta njihove primene, određenog tumora koji se leči i određenog domaćina koji se leči. Optimalan postupak i redosled primene i količine i režim doziranja mogu lako utvrditi oni iskusni u struci upotrebom konvencionalnih postupaka i s obzirom na ovde iznete informacije.

Odnos težine jedinjenja kombinacija u skladu sa predmetnim pronalaskom i jednog ili više drugih antikancerskih agenasa kada se daju kao kombinacija može utvrditi osoba iskusna u struci. Navedeni odnos i tačna doza i učestalost primene zavise od određenih jedinjenja kombinacija u skladu sa pronalaskom i drugog upotrebljenog antikancerskog agensa(asa), određenog stanja koje se leči, ozbiljnosti stanja koje se leči, starosti, težine, pola, ishrane, vremena primene i opšteg fizičkog stanja određenog pacijenta, načina primene kao i drugih medikamenata koje osoba može uzimati, kao što je dobro poznato onima iskusnim u struci. Osim toga, očigledno je da se efekikasna dnevna količina može smanjiti ili povećati u zavisnosti od odgovora lečenog subjekta i/ili u zavisnosti od procene lekara koji prepisuje kombinacije trenutnog pronalaska. Određeni težinski odnos za svaki par FGFR inhibitora,

4

cMet inhibitora i drugog antikancerskog agensa može biti u opsegu od 1/10 do 10/1, tačnije od 1/5 do 5/1, još tačnije od 1/3 do 3/1.

[0154] Jedinjenje sa koordinacijom platine se povoljno primenjuje u dozi od 1 do 500 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) telesne površine, na primer 50 do 400 mg/m<2>, posebno za cisplatin u dozi od 75 mg/m2 i za karboplatin u 300 mg/m2 po toku lečenja.

[0155] Jedinjenje taksana se povoljno primenjuje u dozi od 50 do 400 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) telesne površine, na primer 75 do 250 mg/m<2>, posebno za paklitaksel u dozi od 175 do 250 mg/m2 i za docetaksel u 75 do 150 mg/m2 po toku lečenja.

[0156] Jedinjenje kamptotecina se povoljno primenjuje u dozi od 0,1 do 400 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) telesne površine, na primer 1 do 300 mg/m<2>, posebno za irinotekan u dozi od 100 do 350 mg/m2 i za topotekan u 1 do 2 mg/m2 po toku lečenja.

[0157] Antitumorski derivat podofilotoksina se povoljno primenjuje u dozi od 30 do 300 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) telesne površine, na primer 50 do 250 mg/m<2>, posebno za etopozid u dozi od 35 do 100 mg/m2 i za tenipozid od 50 do 250 mg/m2 po toku lečenja.

[0158] Antitumorski vinka alkaloid se povoljno primenjuje u dozi od 2 do 30 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) telesne površine, posebno za vinblastin u dozi od 3 do 12 mg/m<2>, za vinkristin u dozi od 1 do 2 mg/m2 , i za vinorelbin u dozi od 10 do 30 mg/m2 po toku lečenja.

[0159] Antitumorski derivat nukleozida se povoljno primenjuje u dozi od 200 do 2500 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) telesne površine, na primer 700 do 1500 mg/m<2>, posebno za 5-FU u dozi od 200 do 500 mg/m2 , za gemcitabin u dozi od 800 do 1200 mg/m2 i za kapecitabin u 1000 do 2500 mg/m2po toku lečenja.

[0160] Agensi za alkilovanje kao što su azotna slačica ili nitrosourea se povoljno primenjuju u dozi od 100 do 500 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) telesne površine, na primer 120 do 200 mg/m2 , posebno za ciklofosfamid u dozi od 100 do 500 mg/m2 , za hlorambucil u dozi od 0,1 do 0,2 mg/kg, za karmustin u dozi od 150 do 200 mg/m2 , i za lomustin u dozi od 100 do 150 mg/m2 po toku lečenja.

[0161] Antitumorski derivat antraciklina se povoljno primenjuje u dozi od 10 do 75 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) telesne površine, na primer 15 do 60 mg/m<2>, posebno za doksorubicin u dozi od 40 do 75 mg/m2 , za daunorubicin u dozi od 25 do 45 mg/m2 , i za idarubicin u dozi od 10 do 15 mg/m2 po toku lečenja.

[0162] Antiestrogenski agens se povoljno primenjuje u dozi od 1 do 100 mg dnevno u zavisnosti od određenog agensa i stanja koje se leči. Tamoksifen se povoljno primenjuje oralno u dozi od 5 do 50 mg, poželjno 10 do 20 mg dva puta dnevno, nastavljajući terapiju dovoljno vremena da se postigne i održi terapijski efekat. Toremifen se povoljno primenjuje oralno u dozi od 60 mg jednom dnevno, nastavljajući terapiju dovoljno vremena da se postigne i održi terapijtski efekat. Anastrozol se povoljno primenjuje oralno u dozi od 1 mg jednom dnevno. Droloksifen se povoljno primenjuje oralno u dozi od 20-100 mg jednom dnevno. Raloksifen se povoljno primenjuje oralno u dozi od 60 mg jednom dnevno. Eksemestan se povoljno primenjuje oralno u dozi od 25 mg jednom dnevno.

[0163] Antitela se povoljno primenjuju u dozi od 1 do 5 mg po kvadratnom metru (mg/m2) telesne površine, ili kao što je poznato u struci, ukoliko se razlikuje. Trastuzumab se povoljno primenjuje u dozi od 1 do 5 mg po kvadratnom metru (mg/m<2>) telesne površine, posebno 2 do 4 mg/m2 po toku lečenja.

Ove doze se mogu primenjivati na primer jednom, dva puta ili više po toku lečenja, što se može ponoviti, na primer svakih 7, 14, 21 ili 28 dana.

[0164] Jedinjenja kombinacija ili farmaceutskih kompozicija predmetnog pronalaska mogu imati dragocena dijagnostička svojstva po tome što se mogu upotrebljavati za detektovanje ili identifikovanje formiranja kompleksa između obeleženog jedinjenja i drugih molekula, peptida, proteina, enzima ili receptora.

[0165] Postupci detektovanja ili identifikovanja mogu upotrebljavati jedinjenja koja su obeležena agensima za obeležavanje kao što su radioizotopi, enzimi, fluorescentne supstance, luminozne supstance, itd. Primeri radioizotopa uključuju<125>I,<131>I,<3>H i<14>C. Enzimi se uobičajeno čine detektabilnim konjugacijom odgovarajućeg supstrata koji, zauzvrat katalizuje detektabilnu reakciju. Primeri toga uključuju, na primer, beta-galaktozidazu, betaglukozidazu, alkalnu fosfatazu, peroksidazu i malat-dehidrogenazu, poželjno peroksidazu rena. Luminozne supstance uključuju, na primer, luminol, derivate luminola, luciferin, ekvorin i luciferazu.

Biološki uzorci se mogu definisati kao telesno tkivo ili telesne tečnosti. Primeri telesnih tečnosti su cerebrospinalna tečnost, krv, plazma, serum, urin, sputum, pljuvačka.

Eksperimentalni deo

[0166] Tokom procene gore opisanih jedinjenja A i B kao FGFR inhibitora, prilikom testiranja jedinjenja u testu proliferacije zasnovanom na ćelijama (alamar blue test, videti ovde ispod), utvrđeno je da čak i najosetljivije ćelijske linije kancera (IC50< 10 nM ), imaju podpopulaciju ćelija koje nisu osetljive na jedinjenja. To je na primer primećeno pomoću platoa u krivoj proliferacije oko ~10% DMSO kontrole (vrednost uočena u testu za DMSO uzima se kao 100%, i vrednosti uočene za doze tretmana sa jedinjenjem su izračunate kao % od 100% DMSO). Na primer, kada su NCI-H1581 ćelije, ćelijska linija krupnoćelijskog kancera pluća sa FGFR1 amplifikacijom, tretirane u testu proliferacije sa N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diaminom kriva je pokazala plato na ~10% DMSO kontrole, što sugeriše da postoji ~10% ćelija koje su neosetljive na tretman sa jedinjenjem.

[0167] Neosetljive ćelije su izolovane i profilisane sa ciljem da se utvrde aktivni signalni putevi koji deluju kao pokretači njihovog opstanka i/ili proliferacije. Zato su NCI-H1581 ćelije zasejane na ploče od 10 cm presvučene kolagenom I i stavljene u inkubator na 37 °C, 5% CO2. Ćelije su uzgajane u medijumu za rast (videti ispod), za roditeljske ćelije sa ili bez DMSO kontrole, ili u medijumu za rast suplementovanim sa visokom dozom jedinjenja A (1 mikroM krajnja koncentracija jedinjenja A u medijumu, jedinjenje A je dodato kao uzorak razblažen iz štok rastvora u DMSO), za rezistentne ćelije, tokom dužeg vremenskog perioda. Tokom vremena širenja ćelija neosetljivih na jedinjenje, medijum suplementovan sa jedinjenjem A [1 mikroM], menjan je dva puta nedeljno. U slučaju roditeljskih ćelija sa ili bez DMSO kontrole, kada su ćelije dostigle konfluencu blizu 100% bile su tripsinizovane i ponovo zasejane na ploču. U pločama tretiranim jedinjenjem uočeno je širenje rezustentnih klonova. Posle 3 nedelje od početnog tretmana, ćelije su izvađene iz ploče pomoću tripsinizacije i pasažirane na novu ploču radi daljeg širenja. Rezistentne ćelije, kao i roditeljske ćelije, pasažirane su dva puta nedeljno, ali je medijum rezistentnih ćelija uvek suplementovan sa jedinjenjem A [1 mikroM]. (test 1)

Medijum za rast

[0168] RPMI-1640 (Gibco, 31870-025) 500 ml; 10% FCS (Hyclone, SV30160.03) 57 ml; 1 mM natrijum piruvat (Gibco, 11360) 5,7 ml; 2 mM L-glutamin (Gibco, 25030) 5,7 ml; 50 μg/ml gentamicina (Gibco, 15750) 5,7 ml.

[0169] Rezistentne ćelije su profilisane za gene koji se diferencijalno eksprimiraju u poređenju sa roditeljskim ćelijama upotrebom tehnologije genskih čipova. Urađena su dva eksperimenta sa genskim čipovima. U prvom eksperimentu, roditeljske i rezistentne ćelije su profilisane kako bi se definisali geni i putevi različiti između dve populacije i razumeli putevi koji pokreću rezistenciju na jedinjenje A. U drugom eksperimentu sa genskim čipovima, profilisane su promene u ekspresiji gena tokom vremena posle tretmana sa jedinjenjem A. U

4

tu svrhu NCI-H1581 ćelije su tretirane sa DSMO ili 1 mikroM jedinjenja A ili su netretirane tokom vremenskog perioda od 1 dana, 1 nedelje i 2 nedelje.

[0170] U obe analize sa genskim čipovima, Met onkogen je identifikovan kao povećan na vremenski zavisan način u rezistentnim ćelijama.

[0171] Ovaj eksperiment je takođe urađen sa jedinjenjem B i takođe je i za jedinjenje B Met onkogen identifikovan kao povećan na vremenski zavisan način u rezistentnim ćelijama.

[0172] Zapažanje da je Met gen povećan podstaklo je eksperimente kako bi se proverilo da li je Met receptor povećan na nivou proteina i da li je aktiviran i da li Met pokretani signalni put deluje kao pokretač rezistencije. Zato su roditeljske i rezistentne ćelije profilisane na fosfoRTK (receptor tirozin kinaza) čipovima, i takođe za ukupnu ekspresiju i fosforilaciju Met proteina. Takođe je testirana osetljivost ćelija na odabrane Met inhibitore (jedinjenje C i D) u alamar blue testu proliferacije. Utvrđeno je da je ekspresija Met proteina povećana i da je Met protein fosforilisan samo u rezistentnim ćelijama, a ne u roditeljskim ćelijama, što sugeriše da je Met signalni put aktiviran u rezistentnim ćelijama. Pored ovog zapažanja, tretman rezistentnih ćelija potentnim i selektivnim Met inhibitorom, jedinjenjem C, smanjilo je značajno Met fosforilaciju. Roditeljske NCI-H1581 ćelije su imale vrlo niske detektabilne nivoe Met proteina, i nisu imale signal za fosforilaciju Met proteina (videti Sliku 1). Osim toga, u alamar blue testovima proliferacije roditeljskih i rezistentnih ćelija tretiranih Met inhibitorima jedinjenjem C i D, Met inhibitori snažno inhibiraju proliferaciju rezistentnih NCI-H1581 ćelija, ali ne i roditeljskih NCI-H1581 ćelija (videti Tabelu ispod, pokazani su rezultati ponovljenih eksperimenata).

[0173] Iz ovih podataka može se zaključiti da NCI-H1581 ćelije rezistentne na testirane FGFR inhibitore imaju aktiviran Met receptor i zavise od Met signalnog puta za svoju proliferaciju i opstanak.

[0174] Otkrivanje Met signalne aktivacije kao pokretača rezistencije na testirane FGFR inhibitore u NCI-H1581 podržava kombinovani tretman i sa FGFR i sa Met inhibitorom kako bi se prevazišlo pojavljivanje rezistencije na FGFR inhibitor u NCI-H1581 ćelijama. Eksperiment je izveden gde su dva agensa (FGFR inhibitor: 1 mikroM jedinjenja A, i Met inhibitor: 1 mikroM jedinjenja D) kombinovana od početka. Takođe je bilo tretmana ćelija sa jednim agensom (1 mikroM jedinjenja A ili 1 mikroM jedinjenja D) ili DMSO. Proliferacija ćelija praćena je upotrebom Incucyt mašine, merenjem konfluentnosti ćelija tokom vremena. U ovom eksperimentu koji je izveden na analogan način kao što je opisano iznad za test 1, uočeno je da tretman Met inhibitorom jedinjenjem D, kao i DMSO tretman, nisu uticali na proliferaciju NCI-H1581 ćelija. Tretman ćelija sa FGFR inhibitorom (1 mikroM jedinjenja A) u početku je blokirao proliferaciju, ali je posle tri nedelje uočena pojava širenja ćelija neosetljivih na jedinjenje, što se poklapa sa gore navedenim nalazom da je posle tri nedelje kontinuirane inhibicije FGFR puta sa jedinjenjem A neosetljiva rezistentna podpopulacija ćelija u NCI-H1581 ćelijama stekla sposobnost da se širi. Važno je da je kombinovani tretman FGFR inhibitora (jedinjenje A 1 mikroM) i Met inhibitora (jedinjenje D 1 mikroM) u potpunosti sprečio pojavu rezistencije. Pogledati Sliku 2.

In vivo studija

4

[0175] Atimični bezdlaki miševi inokulirani su sa rezistentnim NCI-H1581 ćelijama (10e<6>ćelija/200 μl sa matrigelom, odnos 1:1, u ingvinalni region miševa).

Svi miševi (84) su podeljeni u grupe (4) i tretirani od dana injekcije ćelijama.

[0176] Miševi su tretirani oralno (po), normalna zapremina (250 μl/25g) jednom dnevno i to tokom 37 dana (QDx37). Merenje zapremine tumora urađeno je na dan 0, 5, 12, 15, 20, 23, 27, 30, 33, 37.

Na dan 37 sve životinje su žrtvovane.

Tabela ispod ilustruje dizajn studije:

[0177] Rezultati ove in vivo studije pokazani su na Slici 3.

Svi testni agensi dobro su tolerisani tokom studije. Međutim, u kombinovanim grupama uočen je povećan gubitak telesne težine.

U ovoj studiji, uočeno je da tretman jedinjenjem A nije uticao na rast tumora, pošto su ove ćelije napravljene rezistentnim pre ovog tretmana. Zanimljivo, oba kombinovana tretmana su pokazala da utiču na rast tumora. Osim toga, najjači antiproliferativni efekat uočen je kada su dva agensa dozirana istovremeno. Činjenica da je ovaj model bio osetljiv na kombinaciju oba

4

ciljana agensa i neosetljiv na tretman samo jedinjenjem A, sugeriše da oba puta igraju značajne uloge u rastu ovih tumora.

ALAMAR BLUE TEST

[0178] Ćelije su zasejane u 180 μl medijuma sa optimizovanom gustinom ćelija u crne ploče sa 96 bunarića sa providnim ravnim dnom. Spoljni bunarići su napunjeni sa 180 μl medijuma. Ćelije su inkubirane 24 sata na 37 °C i 5% CO2.

[0179] Sledećeg dana su pripremljena razblaženja jedinjenja u ploči sa 96 bunarića sa oblim dnom (Corning #3365). 50x razblaženje jedinjenja je pripremljeno u medijumu, 4 μl štok jedinjenja u 196 μl medijuma u ploči sa 96 bunarića (Corning #3585). Ploče sa jedinjenjem/medijumom su postavljene na šejker tokom 10 minuta i zatim je ćelijama dodato 20 μl jedinjenja u medijumu (10x razblaženje). Ćelije su inkubirane na 37 °C i 5% CO2tokom 4 dana do alamarBlue® očitavanja.

AlamarBlue® priprema:

Materijal:

[0180]

Resazurin tablete (100 tableta) (PROLABO)

Kalijum ferocijanid (Sigma)

Kalijum fericijanid (Sigma)

KH2PO4(Sigma)

K2HPO4(Sigma)

Kalijum fosfatni pufer (PPB) 1 litar

[0181]

20 mM KH2PO42,72 g

80 mM K2HPO413,86 g

pH 7,4 (sa par kapi KOH 5M)

4

[0182] Dopuniti do 500 ml sa MilliQ

[0183] Dovesti rastvor do pH 7,4 i prilagoditi do 1 litra krajnje zapremine.

PPB-A reagens

[0184] 1 Resazurin tableta na ml PPB (1 tableta 800 μl PPB)

PPB-B reagens 30 mM kalijum feri cijanida u PPB

[0185] 0,987 g kalijum feri cijanida 100 ml PPB

Filter sterilisati preko 0,22 μm filtera i skladištiti na 4 °C

PPB-C reagens 30 mM kalijum fero cijanida u PPB

[0186] 1,266 g kalijum fero cijanida 100 ml PPB

Filter sterilisati preko 0,22 μm filtera i skladištiti na 4 °C

Alamar blue smeša spremna za upotrebu

[0187] 1 ml alternative PPB-A 1 ml PPB-B 1 ml PPB-C

dodati 57 ml PPB

Filter sterilisati preko 0,22 μm filtera i skladištiti na 4 °C

[0188] Posle 4 dana inkubacije sa jedinjenjem: Dodati 40 μl alamarBlue® smeše spremne za upotrebu u svaki bunarić. Inkubirati ploče na 37 °C i 5% CO2. Izmeriti ploče posle 4 ili 6 sati inkubacije (zavisi od ćelijske linije). Protresti ploče i izmeriti RFU na ex.:544 nm i em.:590 nm

[0189] Test alamarBlue® inkorporiše fluorometrijski/kolorimetrijski indikator rasta zasnovan na detekciji metaboličke aktivnosti. Specifično, sistem inkorporiše indikator za oksidacijuredukciju (REDOX) koji i fluorescira i menja boju kao odgovor na hemijsku redukciju medijuma za rast koja rezultuje iz rasta ćelija.

[0190] Inhibicija rasta H1581<MET(+)>ćelija kombinacijom FGFR i MET inhibitora. Roditeljske, nesortirane H1581 ćelije, i sortirane H1581<MET(+)>ćelije, podpopulacija H1581 ćelija koje imaju visoku Met ekspresiju, zasejane su pri 75000 ćelija po bunariću u ploču sa 24 bunarića.

4

Jedan dan kasnije, ćelije su tretirane jedinjenjem A (0,1 mM) ili kombinacijom jedinjenja A (0,1 mM) i jedinjenja D (1 mM), ili DMSO koji služi kao nosač, i proliferacija ćelija je procenjena merenjem konfluentnosti ćelija tokom perioda od četiri dana upotrebom Incucyte slikanja živih ćelija. Slike su dobijane svaka dva sata. Proliferacija ćelija je predstavljena kao srednja vrednost procenta konfluentnosti ±SD (n = 2).

Rast H1581 ćelija podjednako je inhibiran tretmanom jedinjenjem A ili kombinacijom jedinjenja A i jedinjenja D, što sugeriše da je inhibiciju rasta H1581 ćelija pokretao FGFR inhibitor. H1581MET(+) su pokazale malu osetljivost na jedinjenje A, i njihova proliferacija je bila snažno inhibirana kombinacijom jedinjenja A i jedinjenja D, što ukazuje da u ovoj ćelijskoj populaciji MET kinaza igra značajnu ulogu u rastu i proliferaciji. Ovi nalazi sugerišu da H1581MET(+) podpopulacija posreduje u unutrašnjoj rezistenciji na FGFR inhibitore u H1581 ćelijama.

4

Claims (19)

Patentni zahtevi

1. Kombinacija prvog jedinjenja odabranog od N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata; i drugog jedinjenja koje je cMet inhibitor.

2. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 1 naznačena time što je prvo jedinjenje N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat.

3. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 2 naznačena time što je prvo jedinjenje N-(3,5-dimetoksifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)kvinoksalin-6-il]etan-1,2-diamin baza.

4. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 1 naznačena time što je prvo jedinjenje N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat.

5. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 4 naznačena time što je prvo jedinjenje N-(2-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amin baza.

6. Kombinacija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva naznačena time što je cMet inhibitor odabran od 6-{difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}kvinolina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata, i 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b] piridazin-3-il)metil]kvinolina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegovog solvata.

7. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 6 naznačena time što je cMet inhibitor 6-{difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}kvinolin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat.

8. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 7 naznačena time što je cMet inhibitor 6-{difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}kvinolin baza.

9. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 6 naznačena time što je cMet inhibitor 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il)metil]kvinolin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov solvat.

10. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 9 naznačena time što je cMet inhibitor 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il)metil]kvinolin baza.

11. Farmaceutska kompozicija koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i kombinaciju kao što je zahtevano u bilo kom od prethodnih patentnih zahteva.

12. Kombinacija kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10 ili farmaceutska kompozicija kao što je zahtevano u patentnom zahtevu 11 za upotrebu kao lek.

13. Kombinacija kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10 ili farmaceutska kompozicija kao što je zahtevano u patentnom zahtevu 11 za upotrebu u profilaksi ili lečenju, posebno za upotrebu u lečenju, kancera.

14. Kombinacija ili farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju kancera u skladu sa patentnim zahtevom 13 naznačeno time što je kancer kancer pluća, bešike, dojke, želuca ili hepatocelularni kancer.

15. Kombinacija ili farmaceutska kompozicija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 14 naznačeno time što

(i) kancer je kancer bešike;

(ii) kancer je kancer bešike sa FGFR3 hromozomskom translokacijom; ili (iii) kancer je kancer bešike sa FGFR3 tačkastom mutacijom.

16. Kombinacija ili farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju kancera u skladu sa patentnim zahtevom 13 naznačeno time što

(i) kancer je tumor sa mutantom FGFR1, FGFR2, FGFR3 ili FGFR4; ili

1

(ii) kancer je tumor sa mutantom sa dobitkom funkcije FGFR2 ili FGFR3; ili (iii) kancer je tumor sa prekomernom ekspresijom FGFR1.

17. Kombinacija ili farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju kancera u skladu sa patentnim zahtevom 13 naznačeno time što je kancer kancer bešike, urotelni kancer, metastatski urotelni kancer, hirurški neresektabilan urotelni kancer, kancer dojke, glioblastom, kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kancer pločastih ćelija pluća, adenokarcinom pluća, pulmonarni adenokarcinom, sitnoćelijski kancer pluća, kancer jajnika, kancer endometrijuma, kancer grlića materice, sarkom mekog tkiva, karcinom pločastih ćelija glave i vrata, kancer želuca, kancer jednjaka, karcinom pločastih ćelija jednjaka, adenokarcinom jednjaka, holangiokarcinom, hepatocelularni karcinom.

18. Kombinacija ili farmaceutska kompozicija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 17 naznačeno time što je kancer urotelni kancer, metastatski urotelni kancer, hirurški neresektabilan urotelni kancer.

19. Farmaceutski proizvod koji sadrži kombinaciju u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 10 kao kombinovani preparat za istovremenu, odvojenu ili uzastopnu upotrebu u lečenju kancera.

2