RO119882B1 - Derivaţi de fenilalanină, cu activitate inhibitoare a metalopeptidazei - Google Patents

Derivaţi de fenilalanină, cu activitate inhibitoare a metalopeptidazei Download PDF

Info

Publication number
RO119882B1
RO119882B1 RO98-01109A RO9801109A RO119882B1 RO 119882 B1 RO119882 B1 RO 119882B1 RO 9801109 A RO9801109 A RO 9801109A RO 119882 B1 RO119882 B1 RO 119882B1
Authority
RO
Romania
Prior art keywords
phenylalanine
mercapto
phenylmethylpropionyl
thiazolyl
group
Prior art date
Application number
RO98-01109A
Other languages
English (en)
Inventor
Franco Pellacini
Mario Fantucci
Gabriele Norcini
Stefano Romagnano
Francesco Santangelo
Claudio Semeraro
Original Assignee
Zambon Group S.P.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zambon Group S.P.A. filed Critical Zambon Group S.P.A.
Publication of RO119882B1 publication Critical patent/RO119882B1/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/26—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/55—Acids; Esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/12—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/22—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/30—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/38—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D307/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/06—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D333/24—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Treatment Of Fiber Materials (AREA)
  • Preliminary Treatment Of Fibers (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

Prezenta invenţie se referă la compuşi cu formula (I), în care R, R1, R2 şi R3 au semnificaţiile prezentate în descriere, procedee pentru prepararea lor şi compoziţii farmaceutice care îi conţin ca ingredienţi activi.Compuşii cu formula (I) sunt înzestraţi cu o activitate combinată inhibatoare a ACE şi inhibatoare a NEP şi sunt folositori în tratamentul bolilor cardiovasculare. ŕ

Description

Prezenta invenție se referă la derivați de fenilalanină cu activitate inhibitoare a metalopeptidazei, folositori în tratamentul bolilor cardiovasculare.
Interesul farmacologic pentru studiul moleculelor inhibitoare ale metalopeptidazei derivă din rolul pe care enzimele menționate îl exercită la nivelul sistemului cardiovascular.
Este bine cunoscut faptul că, compușii cu activitate inhibitoare a enzimei care transformă angiotensina (ACE) sunt folositori în principal pentru tratamentul hipertensiunii, insuficienței cardiace și post-infarct-ului, în care ei inhibă formarea angiotensinei II, o substanță care produce mai multe efecte, printre care și creșterea tensiunii arteriale.
Compușii cu activitate inhibitoare a enzimei care transformă endotelina (ECE) sunt folositori ca antivasoconstrictori, întrucât ei inhibă formarea endotelinei, o peptidă 21 aminoacizi cu activitate vasoconstrictoare.
în locul lor, se folosesc ca vasodilatatori compușii cu activitate inhibitoare a enzimei neutre endopeptidaza (NEP), numită de asemenea enkefalinaza, deoarece enzima NEP este responsabilă pentru inactivarea, nu numai a enkefalinei endogene, dar și a unor factori natriuretici precum, de exemplu, factorul atrial (ANF), un hormon secretat de inimă, care crește vasodilatarea și, la nivelul renal, crește diureza și natriureza.
Prin urmare, chiar exercitând acțiunea lor asupra sistemului cardiovascular cu diferite mecanisme de acțiune, compușii cu activitate inhibitoare a metalopeptidazei sunt folosiți în general, singuri sau în combinații, în tratamentul hipertensiunii, insuficienței renale, insuficienței cardiace congestive și cardiopatologiilor ischemice.
Printre tiol derivații inhibitori ai metalopeptidazelor, Thiorphanul [(DL-(3-mercapto-2benzilpropanoil)glicina], descris pentru prima oară de Roques și colab. în Nature, voi. 288, pag. 286-288, (1980), și Captoprilul (Indexul Mercks, ed.XI., No. 1773, pag. 267) sunt considerați compușii-mamă ai inhibitorilor NEP și respectiv inhibitorilor ACE.
Alte molecule având structură tiolică, înzestrate cu activitate inhibitoare a metalopeptidazei sunt descrise în literatură.
Brevetele US 4401677 și 4199512 (ambele având ca titular E.R. Squibb & Sons, Inc.) descriu mercaptoalcanoil amino acizi înzestrați cu activitate inhibitoare a enkefalinazei și respectiv activitate inhibitoare a ACE.
Cererea Europeană de Brevet 0419327 (Societe Civile Bioproject) descrie derivați de amino acizi înzestrați cu activitate inhibitoare a enkefalinazei și respectiv ACE.
Cererea Europeană de Brevet 0449523 (E.R. Squibb & Sons, Inc.) descrie mercapto sau aciltio trifluormetilamide cu activitate inhibitoare a NEP.
Publicația Cererii Internaționale de Brevet WO 93/08162 [Rhone-Poulenc Rorer S.A. - Institut Național de la Sânte et de la Recherche Medicale (INSERM)] descrie a-mercaptometilpropionilamide β,β-disubstituite înzestrate cu activitate inhibitoare combinată ACE/NEP.
Cererea Europeană de Brevet 0524553 [Institut Național de la Sânte et de la Recherche Medicale (INSERM)] descrie acilmercaptoalcanoildipeptide înzestrate cu activitate inhibitoare a endopeptidazei neutre și peptidildipeptidazei A.
Cererea Europeană de Brevet 0566157 (Schering Corporation) descrie tiol derivați precum, de exemplu, N-mercaptoacil amino-acizi, înzestrați cu activitate inhibitoare a NEP.
α-mercaptoacil dipeptidele dotate cu activitate inhibitoare a ACE și inhibitoare a NEP sunt de asemenea descrise de S.S. Bhagwat și colab. în Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7, 735-738, 1995.
în această ultimă lucrare autorul conchide că, în timp ce prezența unei grupări bifenilmetil conferă o activitate inhibitoare combinată ACE/NEP interesantă a moleculelor având o structură α-mercaptoacil dipeptidică, substituția grupării bifenil cu grupări precum a- sau β-naftil cauzează o pierdere semnificativă a activității.
RO 119882 Β1
Acum au fost descoperiți derivații N-mercaptoacil fenilalaninei care sunt înzestrați cu 1 o activitate inhibitoare remarcabilă asupra enzimei care convertește angiotensina, precum și asupra enzimei neutre, endopeptidaza (activitate inhibitoare combinată sau duală 3
ACE/NEP), care îi face folositori în special în terapia patologiilor cardiovasculare.
Obiectul prezentei invenții îl constituie compușii cu formula: 5
R,
I
R- CH2- CH- CONH-CH-COOR2(I) *I ch2- r3 în care R este o grupare mercapto sau o grupare R4COS convertibilă în organism într-o grupare mercapto;15
R, este o grupare alchil C2- C4 liniară sau ramificată sau o grupare arii sau arilalchil cu 1 la 6 atomi de carbon în restul alchil, în care arii este fenil sau heterociclu aromatic cu 17 5- sau 6- membri cu unul sau doi heteroatomi selectați din grupul constînd din azot, oxigen sau sulf, substituit cu unul sau mai mulți substituenți, aceiași sau diferiți, selectați din grupa 19 constituită din atomi de halogen, grupări hidroxi, alcoxi, alchil, alchiltio, alchilsulfonil sau grupări alcoxicarbonil având de la 1 la 6 atomi de carbon în restul alchil, grupările alchil C,- 21
C3 conținînd unul sau mai mulți atomi de fluor, grupări carboxi, grupări nitro, grupări amino sau aminocarbonil, grupări acilamino, grupări aminosulfonil, grupări mono-sau cf/-alchil- 23 aminocarbonil având de la 1 la 6 atomi de carbon, restul alchil;
R2 este un atom de hidrogen, o grupare alchil 0,-04 lineară sau ramificată sau o 25 grupare benzii;
R3 este o grupare fenil substituit cu un heterociclu aromatic cu 5- sau 6- membri, cu 27 unul sau doi heteroatomi selectați din grupa constituită din azot, oxigen sau sulf, grupările fenil și heterociclil fiind opțional substituite cu unul sau mai mulți substituenți, aceiași sau 29 diferiți, cum este indicat pentru R,;
R4 este o grupare alchil C,-C4 lineară sau ramificată sau o grupare fenil;31 și sărurile lor acceptabile farmaceutic.
Atomii de carbon marcați cu un asterisc sunt centri stereogeni.33
Un alt obiect al prezentei invenții îl constituie procedeul de preparare a compușilor cu formula I, cuprinzînd reacția dintre un compus cu formula:35
R,37
I
R- CH2 - CH - COOH (II)39 *
în care R și R, au semnificațiile menționate mai sus;
și un derivat de fenilalanină cu formula:43 *45
H2N - CH -COOR2(III)
I47 ch2-r3
R2 și R3 au semnificațiile menționate mai sus.
RO 119882 Β1
Invenția se referă și la o compoziție farmaceutică care conține o cantitate eficientă terapeutic dintr-un compus cu formula I, în asociere cu un purtător acceptabil farmaceutic, pentru utilizare farmaceutică.
Un alt obiect al prezentei invenții îl constituie utilizarea compușilor cu formula I la fabricarea unui medicament pentru tratamentul bolilor cardiovasculare
Prin aplicarea invenției se obțin avantaje care decurg din capacitatea acestor derivați de N-mercaptoacil fenilalaninei de a inhiba atât enzima ACE, cât și enzima NEP.
Compușii cu formula I conțin doi centri stereogeni și pot astfel exista sub formă de stereoizomeri.
Prin urmare, obiectul prezentei invenții îl constituie compușii cu formula I sub formă de amestec de stereoizomeri, precum și sub formă de stereoizomeri individuali.
Compușii cu formula I, care constituie obiectul prezentei invenții, sunt înzestrați cu o activitate inhibitoare combinată ACE/NEP și sunt folositori în tratamentul bolilor cardiovasculare.
Deși ambii termeni “combinată și duală” sunt folosiți în mod obișnuit, termenul duală este cel mai acceptat în mod obișnuit în literatura pentru compușii înzestrați în prezent cu activitate inhibitoare ACE și NEP.
în contextul actual, termenii “combinată și duală” sunt considerați echivalenți.
în descrierea prezentă, dacă nu se specifică altfel, prin termenul grupare alchil lineară sau ramificată se înțelege o grupare alchil, precum metil, etil, n-propil, izopropil, nbutil, sec-butil, tert-butii, izobutil, n-pentil, 2-pentil, 3-pentil, izopentil, tert-pentil n-hexil și izohexil; prin termenul grupare alcoxi lineară sau ramificată se înțelege o grupare alcoxi, precum metoxi, etoxi, n-propoxi și izopropoxi; prin termenul atom de halogen se înțelege un atom de fluor, clor, brom sau iod; prin termenul acil se înțelege o grupare acil derivând de la un acid alifatic sau aromatic carboxilic precum acidul acetic, propionic, butiric, și benzoic; prin termenul heterociclu aromatic cu 5 sau 6 membri conținând 1 sau 2 heteroatomi selectați dintre azot, oxigen și sulf se înțelege o grupare precum tiazol, izoxazol, oxazol, izotiazol, pirazol, imidazol, tiofen, pirol, piridină, pirimidină, pirazină, piridazină și furan, opțional benzocondensată.
Exemple de săruri acceptabile farmaceutic ale compușilor cu formula I sunt sărurile cu metale alcaline sau alcalino-pământoase și sărurile cu baze organice, acceptabile farmaceutic.
Compușii preferați cu formula I sunt compușii în care R3 este o grupare fenil substituită în poziția 4 cu o grupare heterociclică.
Compușii mai preferați, în această clasă, sunt compușii cu formula I, în care R1 reprezintă o grupare arilalchil substituită opțional cu unul sau mai mulți substituenți, aceiași sau diferiți, selectați din grupul alcătuit din atomi de halogen, hidroxi, alchil sau alcoxi.
Compușii mai preferați, din această clasă, sunt compușii cu formula I, în care R,, reprezintă o grupare fenilalchil substituită opțional cu unul sau mai mulți substituenti, aceiași sau diferiți, selectați din grupul alcătuit din atomi de halogen, hidroxi, alchil, sau alcoxi.
Exemple preferate de săruri acceptabile farmaceutic ale compușilor cu formula I sunt sărurile cu metale alcaline precum sodiu, litiu și potasiu.
Pentru specialistul în domeniu este clar că, compușii cu formula I, în care R este o grupare R4COS convertibilă în organism într-o grupare mercapto, precum și compușii cu formula (I) în care R2 este o grupare alchil sau benzii, sunt precursorii biologici (pro-medicamente) ai compușilor corespunzători cu formula (I) în care R este o grupare mercapto (R=SH) sau R2 este respectiv, un atom de hidrogen (R2=H).
RO 119882 Β1
Exemple specifice de compuși preferați cu formula (I), obiect al prezentei invenții, 1 sunt: ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-tiazolil)-fenilalaninei;3 ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-piridil)-fenilalaninei; esterilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(3-piridil)-fenilalaninei;5 ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-furil)-fenilalaninei; ester etilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(5-pirimidinil)-fenilalaninei;7 ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-pirazinil)-fenilalaninei; ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-tienil)-fenilalaninei;9 ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(3-tienil)-fenilalaninei; ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(3-furil)-fenilalaninei;11 ester metilic al N-[3-fenilcarboniltio-2-(3-piridilmetil)propionil]-4-(2-tiazolil)-fenilalaninei; ester metilic al N-[3-acetiltio-2-(3-metoxifenil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-fenilalaninei;13 ester metilic al N-fS-acetiltio^-^-fluorfeniOmetil-propionilH-^-tiazoliQ-fenilalaninei; ester metilic al Ν-3-fenilcarboniltio -2-(2-tienil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-fenilalaninei;15 ester metilic al N-[2-(2-furil)metil-3-fenilcarboniltio-propionil]-4-(2-tiazolil)-fenilalaninei; ester metilic al N-[2-(3-meti l-5-izoxazol i l)metil-3-f enilcarboniltio-propion il]-4-(2-tiazoli I )-f enil-17 alaninei;
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-tiazolil)-fenilalanina;19
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-piridil)-fenilalanina;
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(3-piridil)-fenilalanina;21
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-furil)-fenilalanina;
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(5-pirimidinil)-fenilalanina;23
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-pirazinil)-fenilalanina;
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-tienil)-fenilalanina;25
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(3-tienil)-fenilalanina;
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(3-furil)-fenilalanina;27
N-[3-mercapto-2-(3-piridilmetil)propionil]-4-(2-tiazolil)-fenilalanina;
N-[3-mercapto-2-(3-metoxifenil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-fenilalanina;29
N-[3-mercapto-2-(2-tienil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-fenilalanina;
N-3-mercapto-2-(3-metil -5- izoxazolil)metil-propionil-4-(2-tiazolil)-fenil-alanina;31
N-[2-(2-fluorfenil)metil-3-mercapto-propionil]-4-(2-tiazolil)-fenilalanina;
N-[2-(2-furil)metil-3-mercapto-propionil]-4-(2-tiazolil)-fenilalanina.33
Prepararea compușilor cu formula I, obiect al prezentei invenții, se realizează conform unui procedeu sintetic cuprinzând reacția între un compus cu formula:35
R,
I
R- CH2 - CH - COOH(II) în care:
- R și Rj au semnificațiile menționate mai sus; și un derivat de fenilalanină cu formula:
H2N - CH -COOR2
I
CH2-R3 (III)
RO 119882 Β1 în care:
• Și R3 θυ semnificațiile menționate mai sus.
Reacția de condensare se realizează conform tehnicilor convenționale ale chimiei peptidelor.
înainte de realizarea reacției poate fi utilă protejarea corespunzătoare a grupărilor funcționale opționale, care ar putea interfera cu reacția.
Protecția optimă se realizează conform tehnicilor obișnuite.
în acest scop, compușii în care R este o grupare R4COS sunt folosiți preferabil ca intermediari cu formula I, obținând astfel compușii corespunzători cu formula I, în care R = R4COS, din care, prin hidroliză, pot fi obținuți compușii cu formula I, în care R=SH.
Evaluarea utilității protecției opționale, precum și alegerea tipului de protecție adoptată, conform reacției care urmează să fie realizată și grupărilor funcționale care vor fi protejate, fac parte din cunoștințele normale ale unui specialist în domeniu.
îndepărtarea grupărilor protectoare opționale se realizează conform tehnicilor obișnuite.
Pentru o referire generală asupra utilizării grupărilor protectoare în chimia organică vezi Theodora W. Greene și Peter G.M. Wuts Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Inc., Ed. II, 1991.
Compușii cu formula II sunt cunoscuți sau ușor de preparat conform metodelor obișnuite după cum s-a descris, de exemplu, în brevetul englezesc 1576161 având ca titular
E.R. Squibb & Sons Inc.
în mod alternativ, compuși cu formula II pot fi preparați conform metodelor de sinteză descrise de M.C. Foumie-Zalusky și al. în J. Med. Chem. 1994, 3Z, 1070-1083.
De asemenea, compușii intermediari cu formula III sunt cunoscuți sau ușor de preparat conform metodelor cunoscute.
De exemplu, compușii cu formula III pot fi preparați conform metodelor sintetice descrise de W.C. Shieh și al. în J. Org. Chem. 1992. 57. 379-381.
în mod alternativ, compușii cu formula III pot fi preparați prin cuplarea metodelor (cuplare încrucișată) pornind de la compuși heterociclici halogenati și derivați de stanil fenilalanină, așa cum este descris de către D.S. Wilbur și al. în Bioconjugate Chem., 1993, 4, 574-580.
Compușii cu formula I, sub formă de stereoizomeri individuali, sunt preparați prin sinteza stereoselectivă sau prin separarea amestecului stereoizomeric conform tehnicilor obișnuite.
De asemenea, prepararea sărurilor compușilor cu formula I, obiectai prezentei invenții, se realizează conform tehnicilor obișnuite.
Compușii cu formula I, obiect al prezentei invenții, sunt înzestrați cu o activitate inhibitoare combinată ACE/NEP și sunt utili în tratamentul bolilor cardiovasculare.
Activitatea inhibitoare a compușilor cu formula I a fost evaluată cu ajutorul testelor in vitro (exemplul 8).
în particular, activitatea inhibitoare a compușilor cu formula I a fost evaluată în comparație cu Thiorphan și Captopril, menționați anterior.
Activitatea inhibitoare in vitro a compușilor cu formula I, exprimată ca valoare IC50 a rezultat la concentrații nM.
Activitatea menționată a rezultat ca fiind comparabilă cu cea a Captoprilului, în ceea ce privește activitatea inhibitoare a ACE, și mai mare decât cea a Thiorphanului, în ceea ce privește activitatea inhibitoare-a-NEP.
RO 119882 Β1 în plus, activitatea inhibitoare a compușilor cu formula I, pe deasupra, a fost evaluată 1 de asemenea, cu ajutorul testelor ex-vivo comparativ cu compuși cunoscuți (exemplul 9).
în particular, N-[3-mercapto-2-(3,4-metilendioxifenil)metil--propionil]-(S)-fenilalanina 3 și N-[3-mercapto-2-(3,4-metilendioxifenil)metil-propionil]-(S)-tirosina, descrise ca inhibitori ai enkefalinazei și ACE în cererea europeană de brevet No. 0419327, sus-menționată, și la 5 care se face referire în continuare, drept compușii R-1 și respectiv R-2, precum și N-(3mercapto-2-metilpropanoil)-L-tirosina și N-(3-mercapto-2-metilpropanoil)-L-triptofanul, des- 7 criși ca inhibitori ACE în US 4199512 și ca inhibitori de enkefalinaza în US 4401677, și la care se face referire în continuare ca la compușii R-3 și respectiv R-4, au fost utilizați drept 9 compuși de comparație.
Activitatea inhibitoare ACE/NEP ex-vivo a fost determinată, în particular, prin 11 evaluarea activității enzimatice în omogenate de țesuturi (plămân și rinichi, pentru activitatea ACE și respectiv NEP) din șobolani hipertensivi în mod spontan (SHR) tratați cu compușii 13 testați pe cale intravenoasă sau orală.
Nu are valoare faptul că activitatea arătată de compușii cu formula (I) în testele ex- 15 vivoconfirmă activitatea combinată (activitate duală) arătată în testele in vitro, de asemenea după administrare orală. 17
Activitatea menționată, în plus, rezultă a fi semnificativ mai mare decât a compușilor de comparație.19
Pentru utilizare practică în terapie, compușii cu formula I pot fi preparați în compoziții farmaceutice solide sau lichide, potrivite pentru administrare orală sau parenterală.21
Prin urmare, compozițiile farmaceutice conținând o cantitate eficientă terapeutic dintr-un compus cu formula J în amestec cu un suport pentru folosire farmaceutică constituie23 în continuare un obiect al prezentei invenții.
Exemple specifice de compoziții farmaceutice conform prezentei invenții sunt table- 25 tele, tabletele acoperite, capsulele, granulele, soluțiile și suspensiile potrivite administrării orale, soluțiile și suspensiile potrivite administrării parenterale. 27
Compozițiile farmaceutice obiect al prezentei invenții sunt preparate conform tehnicilor obișnuite. 29
Doza zilnică a compusului cu formula I sau a precursorului corespunzător depinde de mai mulți factori precum gravitatea bolii, răspunsul individual al pacientului sau tipul 31 compoziției, dar ea este uzual cuprinsă între 0,1 mg și 10 mg per kg de greutate corporală, divizată într-o singură doză sau în mai multe doze zilnice. 33
Dacă nu se specifică altfel, cromatografiile “rapidă” au fost realizate prin utilizare de silicagel pentru cromatografie “rapidă” de la firma Baker (cod 7024-00). 35
Se dau în continuare exemple de realizare a prezentei invenții.
Exemplul 1. Prepararea esterului etilic al N-terț-butoxicarbonil-4-(5-pirimidinil)-L- 37 fenilalaninei
Un amestec de 850 mg (2 mmoli) acid 5-pirimidinilboric, 450 mg (2,2 mmoli) de ester 39 etilic al N-tert-butoxicarbonil-4-trifluormetilsulfonil-L-fenilalaninei, o soluție de carbonat de sodiu (530 mg) în apă (2,59 ml) și 20 ml de amestec de toluen:etanol = 10:4,5 este degazat 41 cu azot timp de 30 de min.
Ulterior se adaugă 120 mg (0,06 mmoli) tetrakis(trifenilfosfină) de paladiu(O) și 43 amestecul de reacție este încălzit la 90’C și păstrat sub agitare timp de 3 h.
Amestecul este apoi păstrat la temperatura camerei și se adaugă din nou 112 mg 45 ester metilic al N-tert-butoxicarbonil-4-trifluormetilsulfonil-L-fenilalaninei și 30 mg tetrakis (trifenilfosfină) de paladiu(O). 47
Amestecul este în continuare încălzit la temperatura de 90‘C si ținut sub agitare alte
h. 49
RO 119882 Β1
După răcirea amestecului de reacție la temperatura camerei, se adaugă 100 ml etil acetat și 40 ml apă.
Se separă fazele și faza organică este uscată pe sulfat de sodiu și evaporată sub vid.
Reziduul obținut este purificat prin cromatografie rapidă (silicagel, eluent hexan:acetat de etil 7:3, presiune de azot 0,1 atm) obținând astfel esterul etilic al N-tertbutoxicarbonil-4-(5-pirimidinil)-L-fenilalaninei (130 mg, randament 14%) sub forma unui ulei incolor.
1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,24 (t, 3H, CH2-CH3); 1,40 [s, 9H, C(CH3)3]; 3,01-3,25 (m, 2H, CH2-CH); 4,19 (q, 2H, CH2-CH3); 4,52-4,65 (m, CH-COO); 5,06 (d, 1H, NH), 7,25-7,52 (m, 4H, fenilen); 8,91 (s, 2H, N-CH-C-CH-N); 9,19 (s, 1H, N-CH-N).
Exemplul 2. Prepararea esterului metilic al N-terț-butoxicarbonil-4-(2-tiazolil)-Lfenilalaninei
Se adaugă 8 g (32,3 mmoli) ester metilic al N-tert-butoxicarbonil-4-(trifluormetilsuIfoniI)-L-fenilalaninei și 2,3 g clorură de paladiu-b/s(trifenilfosfină)de paladiu-b/sla o soluție de 13,8 g (32,3 mmoli) 2-trimetilstanil-tiazol într-un amestec de tetrahidrofuran:toluen = 10:1 (50 ml), degazat în prealabil cu azot.
Amestecul este încălzit cu recirculare timp de 24 de h și, ulterior se adaugă din nou 2 g de 2-trimetilstanil-tiazol.
După 6 h cu reflux se adăugă ester metilic al N-teȚ-butoxicarbonil-4-(trifluormetilsulfonil)-L-fenilalaninei (2g) și 700 mg clorură de bis(trifenilfosfină)de paladiu.
Amestecul de reacție rezultat este ținut sub agitare la 70’C timp de 16 h și ulterior răcit la temperatura camerei.
Amestecului i se adaugă apoi 200 ml apă și este extras cu clorură de metilen (4 x 200 ml).
Fazele organice colectate sunt uscate pe sulfat de sodiu și evaporate sub vid.
Reziduul obținut este purificat prin cromatografie rapidă (silicagel, eluent clorură de metilen:acetat de etil 9:1, presiune de azot=0,1 atm), obținându-se astfel esterul metilic al N-tert-butoxicarbonil-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei (2,3 g; randament 20%).
1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,40 [s, 9H, C(CH3)3]; 3,00-3,21 (m, 2H, CH2).
3,70 (s, 3H, COOCH3); 4,42-4,65 (m, 1H, CH-COO); 5,02 (bd, 1H, NH), 7,30 (d, 1H, S-CHCH-N) 7,81 (d, 1H, S-CH-CH-N); 7,15-7,90 (m, 4H, fenilen).
Exemplul 3. Prepararea esterului metilic al N-terț-butoxicarbonil-4-(3-piridil)-Lfenilalaninei
Se adaugă 1,67 g (10 mmoli) 3-brompiridină și 370 mg (0,219 moli) paladiu(O)tetrakis(trifenilfosfină) la o soluție de 4g (7,03 mmoli) ester metilic al N-tert-butoxicarbonil-4(tributilstanil)-L-fenilalaninei, preparată după cum s-a descris de D.S. Wilbur și colab. în Bioconjugate Chem., 1973, 4, 574-580, în dimetilformamidă anhidră (30 ml), degazată în prealabil cu azot.
Amestecul de reacție este menținut sub agitare 10 min la temperatura camerei și, ulterior, încălzit la 105°C timp de 6 h.
Se adaugă din nou (O)tetrakis(trifenilfosfină) paladiu (0,0035 mmoli) și amestecul este ținut sub agitare la 105’C timp de 8 h și apoi răcit la temperatura camerei.
Se adaugă apoi apă (100 ml) și amestecul de reacție este extras cu hexan (3 x 150 ml).
Fazele organice colectate sunt spălate cu o soluție apoasă saturată de fluorură de potasiu, uscate pe sulfat de sodiu și evaporate sub vid.
Reziduul obținut este colectat cu acetat de etil și filtrat. --8
RO 119882 Β1
Soluția rezultată este evaporată sub vid și reziduul este purificat prin cromatografie 1 rapidă (silicagel, eluent hexan/acetat de etil =8:2, presiune de azot 0,1 at) obținându-se esterul metilical N-terț-butoxicarbonil-4-(3-piridil)-L-fenilalaninei (1,5 g; randament 60%) sub 3 forma unui ulei incolor.
Masa (CI.): (M + H)+ =357 5 ’H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,40 [s, 9H, C(CH3)3]; 3,00-3,20 (m, 2H, CH2).
3,71 (s, 3H, COOCH3); 4,55 (m, 1H, CH-COO); 5,05 (bd, 1H, NH), 7,19-7,51 (m, 4H,7 fenilen); 7,30-8,82 (bm, 4H, piridil).
Lucrând într-un mod analog sunt preparați următorii compuși:9
Esterul metilic al N-terț-butoxicarbonil-4-(2-piridil)-L-fenilalaninei
Masa (CI.): (M+H)+=35711 ’H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,40 [s, 9H, C(CH3)3]; 3,03-3,21 (m, 2H, CH2CH); 3,70 (s, 3H, COOCH3); 4,54-4,65 (m, 1H, CH-COO); 4,98 (d, 1H, CONH), 7,16-7,2113 (m, 1H, N-C-CH-CH); 7,65-7,77(m, 2H, N-CH-CH-CH); 7,19-7,93 (m, 4H, fenilen), 8,63-8,68 (m, 1H, N-CH).15
Esterul metilic al N-terț-butoxicarbonil-4-(2-pirazinil)-L-fenilalaninei ’H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,40 [s, 9H, C(CH3)3]; 3,02 (m, 2H, CH2); 3,7017 (s, 3H, COOCH3); 4,53-4,70 (m, 1H, CH-COO); 5,03 (bd, 1H, NH), 7,21-7,98 (m, 4H, fenilen); 8,49 și 8,62 [2(bs, 2H, N-CH-CH-N)]; 9,00 (s, 1H, CH-N-CH-CH);19
Esterul metilic al N-terț-butoxicarbonil-4-(2-tienil)-L-fenilalaninei ’H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,41 [m, 9H, C(CH3)3]; 2,98-3,18 (m, 2H, CH2);21
3,71 (s, 3H, COOCH3); 4,53-4,64 (m, 1H, CH-COO); 4,98 (bd, 1H, NH); 7,02-7,28 (m, 3H, tienil); 7,10-7,54 (m, 4H, fenilen).23
Exemplul 4. Prepararea diclorhidratului esterului metilic al 4-(3-piridil)-L-fenilalaninei
Se adaugă 0,85 ml (4,78 mmoli)clorură de tionil prin picurare, la o soluție de 1,4 g 25 (3,93 mmoli) ester metilical N-terf-butoxicarbonil-4-(3-piridil)-L-fenilalaninei în 30 ml metanol, preparată după cum s-a arătat în exemplul 3, menținând temperatura la 0‘C. 27
La sfârșitul adăugării, amestecul de reacție este adus la temperatura camerei și menținut sub agitare timp de 8 h.29
Solventul este apoi evaporat sub vid obținându-se 820 mg (randament 71%) diclorhidrat al esterului metilic al 4-(3-piridil)-L-fenilalaninei utilizat ca atare în reacțiile următoare. 31
Masa (CI.): (M + H)+ =257 (baza liberă) ’H-NMR (200 MHz, D2O): δ (ppm): 3,11-3,32 (m, 2H, CH2); 3,67 (s, 3H, CH3); 4,31-33
4,37 (m, 1H, CH); 7,30-7,63 (m, 4H, fenilen); 7,97 (dd, 1H, CH-N-CH-CH-CH); 8,59 (d, 1H, CH-N-CH-CH-CH); 8,65-8,71 (m, 1H, CH-N-CH-CH); 8,89 (d, 1H, CH-N-CH-CH-CH).35
Lucrând intr-un mod analog sunt preparați următorii compuși:
Diclorhidratul esterului metilic al 4-(2-piridil)-L-fenilalaninei37
Masa (CI.): (M+H)+ = 257 (baza liberă) ’H-NMR (200 MHz, D2O): δ (ppm): 3,12-3,33 (m, 2H, CH2); 3.64 (s, 3H, CH3); 4,30-39
4,37 (m, 1H, CH); 7,36-7,73 (m, 4H, fenilen); 7,78-8,58 (m, 4H, piridil);
Diclorhidratul esterului etilic al 4-(5-pirimidinil)-L-fenilalaninei41 ’H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,11 (t, 3H, CH2-CH3); 3,10-3,35 (m, 2H, CH2-CH), 4,04-4,20 (m, 2H, CH2-CH3); 4,22-4,35 (m, 1H, CH); 7,40-7,84 (m, 4H, fenilen); 43 9,15 (s, 2H, N-CH-C-CH-N); 9,19 (s, 1H, N-CH-N);
Diclorhidratul esterului metilic al 4-(2-pirazinil)-L-fenilalaninei 45
Masa (CI.): (M+H)+ = 258 (baza liberă) ’H-NMR (200 MHz, DCI 1N): δ (ppm): 3,45-3,67 (m, 2H, CH2); 3,98 (s, 3H, CH3); 47
4,65-4,72 (m, 1H, CH); 7,68-8,26 (m, 4H, fenilenă); 9,02 (d, 1H, CH-N-CH-CH); 9,44 (dd,
1H, CH-N-CH-CH); 9,54 (d, 1H, CH-N-CH-CH). -- 49
RO 119882 Β1
Clorhidratul esterului metilic al 4-(2-tienil)-L-fenilalaninei
Masa (CI.): (M+H)+ = 262 (baza liberă) ’H-NMR (200 MHz, D2O): 3 (ppm): 2,98-3,19 (m, 2H, CH2); 3,65 (s, 3H, CH3); 4,214,28 (m, 1H, CH); 6,96-7,28 (m, 3H, tienil); 7,08-7,52 (m, 4H, fenilen);
Diclorhidratul esterului metilic al 4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei 1H-NMR (200 MHz, D2O): δ (ppm): 3,10-3,32 (m, 2H, CH2-CH); 3,68 (s, 3H, CH3); 4,30-4,38 (m, 1H, CH); 7,30-7,80 (m, 4H, fenilenă); 7,70-7,91 (m, 2H, tiazolil).
Exemplul 5. Prepararea acidului 2-izobutil-3-fenilcarboniltio-propionic
Un amestec de 6,34 g (49 mmoli) acid 2-izobutilacrilic și acid tiobenzoic (5,96 ml; 51 mmoli) este încălzit la 10O’C sub agitare timp de 2 ore. Amestecul de reacție este apoi tratat cu eter de petrol 4O...6O°C (100 ml) și răcit la -70°C pe o baie uscată de gheață/acetonă.
Prin filtrare și spălare cu eter de petrol la -70°C este colectat un reziduu, care uscat la presiune redusă furnizează acidul 2-izobutil-3-fenilcarboniltio-propionic sub forma unui solid alb (11,12 g, randament 85%).
1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 0,90-1,00 (m, 6H); 1,40-1 90 (m, 3H), 2,70-2,90 (m, 1H); 3,10-3,40 (m, 2H); 7,35-7,62 (m, 3H); 7,90-8,00 (d, 2H).
Lucrând în mod analog sunt preparați următorii compuși:
Acidul 2-(3-metoxifenil)metil-3-fenilcarboniltio-propionic 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,32 (s, 3H); 2,80-315 (m, 5H), 3,77 (s, 3H); 6,70-6,80 (m, 3H); 7,14-7,25 (m, 1H).
Acidul 3-acetiltio-2-(2-fluorfenil)metil-propionic
Ή-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,31 (s, 3H); 2,90-3,20 (m, 5H); 6,95-7,30 (m, 4H).
Sarea de benzilamină a acidului 3-fenilcarboniltio-2-(2-tienil)metil-propionic 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 2,45-3,25 (m, 5H, S-CH2-CH-CH2); 3,90 (s, 2H, CHa-fenil); 6,85-7,91 (m, 13H, arii).
Exemplul 6. Prepararea esterului metilic al N-[(2S)-3-fenHcarboniltio-2-fenilmetil propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenllalaninei (compusul 1)
O soluție de 0,54 g (4 mmoli) hidroxibenztriazol în tetrahidrofuran (30 ml) și, ulterior, o soluție de 0,825 g (4 mmoli) diciclohexilcarbodiimida în 15 ml clorură de metilen sunt adăugate, la 0’C sub agitare, la un amestec de 1,2 g (4 mmoli) acid (2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionic, 1,34 g (4 mmoli) ester metilic al diclorhid râtul ui de 4-(2-tiazolil)-L-f enilalani nei preparat după cum se arată în exemplul 4,1,11 ml (8 mmoli) trietilamină în 20 ml tetrahidrofuran și 30 ml clorură de metilen.
Amestecul de reacție este menținut sub agitare 20 h, apoi se îndepărtează prin filtrare diciclohexil ureea și solventul este evaporat la presiune redusă.
Reziduul este colectat cu etil acetat și soluția este spălată cu o soluție apoasă de clorura de sodiu 20%, bicarbonat de sodiu 5% și din nou cu clorură de sodiu 20%.
După separarea fazelor și evaporarea fazei organice, solidul alb rezultant este purificat prin cromatografie rapidă (silicagel, eluent etil acetat:hexan=40:60, presiune de azot 0,1 atm) obținând astfel esterul metilic al N-[(2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil]-4-(2tiazolil)-L-fenilalaninei (1,5 g). m.p. 98-100’C.
Masa (CI.): (M+H)+ = 545 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,63-3,35 (m, 7H, CH2-CH-CH2, CH2-C6H4tiazolil); 3,68 (s, 3H, COOCH3); 4,75-4,85 (m, 1H, CH-COO); 5,78 (d, 1 Η, NH), 7,10-8,00 (m,
16H, arii).
RO 119882 Β1
Lucrând intr-un mod analog, pornind de la compuși cunoscuți sau preparați după cum 1 s-a arătat în exemplele 4 și 5, s-au obținut următorii compuși:
Esterul metilic al N-[(2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil]-4-(2-furil)-L-fenil- 3 alaninei (compusul 2)
m.p.132-134“C 5
Masa (CI.): (M+H)+ = 528 ’H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,60-3,35 (m, 7H, CH2-CH-CH2, CH2-C6H4-furil); 7
3,58 (s, 3H, COOCH3); 4,71-4,81 (m, 1H, CH-COO); 5,73 (d, 1H, NH), 6,40-8,00 (m, 17H, arii);9
Esterul metilic al N-[(2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil]-4-(5-pirimidinil)-Lfenilalaninei (compusul 3)11
m.p.117-119‘C
Masa (CI.): (M+H)+= 55413 ’H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,18 (t, 3H, CH3-CH2); 2,65-3,35 (m, 7H, CH2CH-CH2, CH2-C6H4-pirimidinil); 3,95-4,20 (m, 2H, COOCH2); 4,70-4,80 (m, 1H, CH-COO); 15 5,78 (d, 1H, NH), 7,05-8,00 (m, 14H, fenil, fenilen); 8,68 (s, 2H, CH-N-CH-N-CH); 9,11 (s,
1H, N-CH-N);17
Esterul metilic al N-[(2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil]-4-(2-pirazinil)-L-fenilalaninei (compusul 4)19
m.p.145-147’C
Masa (CI.): (M+H)+ = 54021 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,65-3,35 (m, 7H, CH2-CH-CH2, CH2-C6H4pirazinil); 3,61 (s, 3H, COOCH3); 4,75-4,85 (m, 1H, CH-COO); 5,78 (d, 1H, NH), 7,10-8,0023 (m, 14H, fenil, fenilen); 8,48-8,75 (m, 3H, CH-N-CH-CH-N);
Esterul metilic al N-[(2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil]-4-(3-piridil)-L- 25 fenilalaninei (compusul 5)
m.p.132-134°C27
Masa (CI.): (M + H)+ = 539 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,66-2,79 (m, 1H, CH2-CH-CH2); 2,88-3,35 (m,29
6H, CH2-CH-CH2, CH2-C6H4-piridil); 3,61 (s, 3H, COOCH3); 4,75-4,85 (m, 1H, CH-COO);
5,77 (d, 1H, NH), 7,07-7,99 (m, 16H, CH-CH-CH-N, fenil, fenilen); 8,51 -8,64 (m, 2H, CH-N- 31 CH);
Esterul metilic al N-[(2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenHmetilpropionil]-4-(2-piridil)-L-fenH-33 alaninei (compusul 6)
m.p.123-125°C35
Masa (CI.): (M+H)+ = 539
Ή-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,63-2,77 (m, 1H, CH2-CH-CH2); 2,85-3,35 (m,37
6H, CH2-CH-CH2, CH2-C6H4-piridil); 3,56 (s, 3H, COOCH3); 4,75-4,85 (m, 1H, CH-COO);
5,75 (d, 1H, NH), 7,09-7,99 (m, 16H, CH-CH-CH-N, fenil, fenilen); 8,61 -8,65 (m, 1H, N-CH-39
CH);
Esterul metilic al N-[(2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil]-4-(2-tienil)-L-fenil- 41 alaninei (compusul 7)
Masa (CI.): (M+H)+ = 544 43 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,64-3,36 (m, 7H, CH2-CH-CH2, CONH-CHCH2); 3,58 (s, 3H, COOCH3); 4,74-4,83 (m, 1H, CH-COO); 5,74 (d, 1H, NH), 6,97-7,99 (m, 45
17H, arii);
RO 119882 Β1
Esterul metilic al N-[(2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil]-4-(3-tienil)-L-fenilalaninei (compusul 8)
Masa (CI.): (M+H)+ = 544 ’H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,63-3,35 (m, 7H, CH2-CH-CH2, NH-CH-CH2);
3,58 (s, 3H, COOCH3); 4,73-4,85 (m, 1H, CH-COO); 5,70-5,76 (bd, 1 Η, NH), 7,00-7,62 (m, 15H, fenil, fenilen, CH-CH-S); 7,93-8,00 (m, 2H, CH-S-CH);
Esterul metilic al N-[(2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil]-4-(3-furil)-L-fenilalaninei (compusul 9)
m.p. 115-117°C
Masa (CI.): (M+H)+ = 528
Ή-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,62-3,36 (m, 7H, CH2-CH-CH2, NH-CH-CH2);
3,58 (s, 3H, COOCH3); 4,71-4,82 (m, 1H, CH-COO); 5,72 (bd, 1H, NH), 6,50-8,00 (m, 17H, arii);
Esterul metilic al N-[3-fenilcarboniltio-2-(3-piridilmetil)propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei - stereoizomer A (compusul 10)
Masa (CI.): (M+H)* = 546
CSS (etil acetat:eter de petrol=95:5), Rf=0,33
Ή-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,60-3,38 (m, 7H, CH2-CH-CH2, NH-CH-CH2); 3,60 (s, 3H, COOCH3); 4,79-4,90 (m, 1H, CH-COO); 6,21 (bd, 1H, NH), 7,29-7,81 (m, 2H, tiazolil); 6,75-8,48 (m, 13H, fenil, fenilen, piridil);
Esterul metilic al N-[3-fenilcarboniltio-2-(3-piridilmetil)propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei - stereoizomer B (compusul 11)
Masa (CI.): (M + H)+ = 546
CSS (etil acetat.eter de petrol =95:5), Rf=0,24
Ή-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,61-3,25 (m, 7H, CH2-CH-CH2, NH-CH-CH2); 3,60 (s, 3H, COOCH3); 4,80-4,91 (m, 1H, CH-COO); 6,09 (bd, 1H, NH), 7,27-7,80 (m, 2H, tiazolil); 7,10-8,40 (m, 13H, fenil, fenilen, piridil);
Esterul metilic al N-[2-izobutil-3-fenilcarboniltio-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei (compusul 12)
Ή-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 0,80-0,95 (m, 6H); 1,30-1,80 (m, 3H); 2,40-2,60 (m, 1H); 3,00-3,30 (m, 4H); 3,70 (d, 3H); 4,90-5,05 (m, 1H); 6,00-6,15 (bt, 1H); 7,10-8,00 (m, 11H);
Esterul metilic al N-[3-acetiltio-2-(3-metoxifenil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei (compusul 13)
Ή-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,30 (d, 3H); 2,45-3,20 (m, 7H); 3,63 (d, 3H); 3,75 (d, 3H); 4,70-4,93 (m, 1H); 5,70-5,90 (dd, 1H); 6,60-6,85 (m, 4H); 7,17-7,32 (m, 3H); 7,68-7,90 (m, 3H);
Esterul metilic al N-[3-acetiltio-2-(3-fluorfenil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei (compusul 14)
Ή-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,29 (m, 3H); 2,55-3,20 (m, 7H); 3,65 (2s, 3H); 4,70-4,90 (m, 1H); 5,80-6,00 (2d, 1H); 6,70-7,32 (m, 3H);
Esterul metilic al N-[3-fenilcarboniltio-2-(2-tienil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenHalaninei (compusul 15)
Ή-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,68-3,37 (m, 7H); 3,60-3,61 (2s, 3H, COOCH3); 4,31-4,45 (m, 1H, CH-COOCH3); 6,01-6,10 (2d, 1H, NH); 6,80-8,00 (m, 14H);
Exemplul 7. Prepararea N-[(2S)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(2-tiazolil)-Lfenilalaninei (compusul 16)
Esterul metilic al N-[(2S)-3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei (1,4g; 2,57 mmoli), preparat după cum s-a arătat în exemplul 6, este suspendat în etanol (30 ml), degazat prin barbotare de azot pentru a elimina oxigenul.
RO 119882 Β1
Suspensiei i se adaugă, prin picurare la 5°C, o soluție apoasă degazată de hidroxid 1 de sodiu 1N (7,7 ml) și, la sfârșitul adăugării, în continuare, etanol degazat (20 ml).
Amestecul de reacție este menținut sub agitare timp de 4 h la temperatura camerei, 3 apoi răcit la 0*0 și acidulat cu acid clorhidric 5% (10 ml).
Amestecul de reacție este evaporat până la sec și reziduul este colectat cu acetonitril 5 și apă și ulterior este filtrat, obținându-se N-[(2S)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(2tiazolil)-L-fenilalanina (1 g). 7
m.p. 180-182°C
Masa (CI.): (M + H)+ = 4279 ’H-NMR (200 MHz, DMSO-dG): δ (ppm): 1,80-1,88 (m, 1H, SH); 2,22-2,84 (m, 5H, CH2-CH-CH2); 2,86-3,18 (m, 2H, CH2-CH-COO); 4,46-4,57 (m, 1H, CH-COO); 7,10-7,25 (m,11
5H, fenil); 7,32-7,84 (m, 4H, fenilen); 7,74 (d, 1H, N-CH=CH-S); 7,89 (d, 1H, N-CH=CH-S);
8,35 (d, 1H, NH); 12,76 (s, 1H, COOH);13
Lucrând în mod analog, sunt preparați următorii compuși:
N-[(2R)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanina (compusul 17)15 ’H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 2,15-2,23 (m, 1H, SH); 2,31-2,74 (m, 5H, CH2-CH-CH2); 2,78-3,07 (m, 2H, CH2-CH-COO); 4,42-4,53 (m, 1H, CH-COO); 7,02-7,80 (m,17
9H, fenil și fenilen); 7,75 (d, 1H, N-CH=CH-S); 7,90 (d, 1H, N-CH=CH-S); 8,36 (d, 1H, NH);
N-[(2S)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(2-furil)-L-fenilalanina (compusul 18)19
m.p. 153-155°C
Masa (CI.): (M + H)+= 41021 ’H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,40 (t, 1H, SH); 2,45-3,25 (m, 7H, CH2-CHCH2, CH2-CH-COO); 4,80-4,90 (m, 1H, CH-COO); 5,86 (d, 1H, NH); 6,42-7,42 (m, 3H, furii);23
7,07-7,57 (m, 9H, fenil, fenilen);
N-[(2S)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(5-pirimidinil)-L-fenilalanina (compusul 19)25
m.p. 193-195’C
Masa (CI.): (M + H)+ = 42227 ’H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,81 (bm, 1H, SH); 2,21-3,20 (m, 7H, CH2CH-CH2, CH2-C6H4-pirimidinil); 4,46-4,57 (m, 1H, CH-COO); 7,06-7,29 (m, 5H, fenil); 7,36-29
7,72 (m, 4H, fenilen); 8,33 (d, 1H, NHCO); 9,08 (s, 2H, N-CH-C-CH-N); 9,15 (s, 1H, N-CHN);31
N-[(2S)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(2-pirazinil)-L-fenilalanina (compusul 20)
m.p. 176-178’C33
Masa (CI.): (M+H)+ = 422 ’H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,84 (m, 1H, SH); 2,21-3,21 (m, 7H, CH2- 35 CH-CH2, CH2-CH-COO); 4,48-4,59 (m, 1H, CH-COO); 7,10-7,26 (m, 5H, fenil); 7,37-8,05 (m, 4H, fenilen); 8,37 (d, 1H, NHCO); 8,58 (d, 1H, CH-N-CH-CH-N); 8,68-8,70 (m, 1H, CH-N- 37
CH-CH-N); 9,21 (d, 1H, C-CH-N); 12,78 (b, 1H, COOH);
N-[(2S)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(3-piridil)-L-fenilalanina (compusul 21)39
m.p. 146-148°C
Masa (CL): (M + H)+ = 42141 ’H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,69-1,89 (b, 1H, SH); 2,22-3,18 (m, 7H, CH2-CH-CH2, CH2-fenilen); 4,45-4,56 (m, 1H, CH-COO); 7,09-7,26 (m, 5H, fenil); 7,42-7,4843 (m, 1H, CH-N-CH-CH-CH); 7,62-7,33 (m, 4H, fenilen); 7,98-8,04 (m, 1H, CH-N-CH-CH-CH.);
8,30 (d, 1H, CONH); 8,53 (dd, 1H, CH-N-CH-CH-CH); 8,83 (d, 1H, CH-N-CH-CH-CH);45
N-[(2S)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(2-piridil)-L-fenilalanina (compusul 22)
----- m.p. 157-159’C47
RO 119882 Β1
Masa (CI.): (M+H)+ = 421 ’H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,87 (b, 1H, SH); 2,23-3,19 (m, 7H, CH2-CHCH2, CONH-CH-CH2); 4,44-4,45 (m, 1H, CH-COO); 7,09-7,93 (m, 8H, N-CH-CH-CH-CH, fenil); 7,30-7,99 (m, 4H, fenilen); 8,29 (d, 1H, CONH); 8,61-8,65 (m, 1H, C-N-CH);
N-[(2S)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(2-tienil)-L-fenilalanina (compusul 23) m.p. 152-154°C 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,34-1,43 (m, 1H, SH); 2,44-3,26 (m, 7H, SCH2-CH-CH2> CONH-CH-CH2); 4,80-4,89 (m, 1H, NH-CH-COO); 5,81 (d, 1H, NH); 7,02-7,52 (m, 12H, arii);
N-[(2S)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(3-tienil)-L-fenHalanina (compusul 24)
m.p. 169-171’0
Masa (CI.): (M+H)+ = 426
CSS (etil acetat: hexan: acid acetic=50:50:5), Rf=0,44 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,84 (bs, 1H, SH); 2,23-3,13 (m, 7H, S-CH2-CHCH2, NH-CH-CH2); 4,42-4,53 (m, 1H, NH-CH-COO); 7,12-7,80 (m, 12H, arii); 8,30 (d, 1H, JHH=8,2 Hz, NH);
N-[(2S)-3-mercapto-2-fenilmetilpropionil]-4-(3-furil)-L-fenilalanina (compusul 25)
m.p. 140-142°C
Masa (CI.): (M+H)+ = 410
CSS (etil acetat: hexan:acid acetic=50:50:5), Rf=0,42 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ(ρριυ): 1,79-1,90 (m, 1H, SH); 2,22-3,11 (m, 7H, S-CH2CH-CH2, NH-CH-CH2); 4,41-4,53 (m, 1H, NH-CH-COO); 7,11-7,50 (m, 9H, fenil, fenilen); 6,91-8,12 (m, 3H, furii); 8,30 (d, 1H, JHH=8,2 Hz, NH);
N-[-3-mercapto-2-(3-piridilmetil)propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanina-stereoizomerA (compusul 26)
m.p. 193-196’C
Masa (CI.): (M+H)+ = 428
CSS (clorură de metilen:metanol:acid acetic=80:15:1,5), Rf=0,53 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 2,37-3,05 (m, 7H, S-CH2-CH-CH2, NH-CHCH2); 4,36-4,47 (m, 1H, NH-CH-COO); 7,76-7,90 (m, 2H, tiazolil); 7,10-8,33 (m, 9H, NH, piridil, fenilen);
N-[3-mercapto-2-(3-piridilmetil)propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanina-stereoizomerB (compusul 27)
Masa (CI.): (M + H)+= 428
CSS (clorură de metilen:metanol:acid acetic =80:15:1,5), Rf=0,47 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 2,28-3,20 (m, 7H, S-CH2-CH-CH2) NH-CHCH2); 4,20-4,35 (m, 1H, NH-CH-COO); 7,70-7,90 (m, 2H, tiazolil); 7,17-8,40 (m, 9H, NH, piridil, fenilen);
N-(2-izobutil-3-mercapto-propionil)-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanina (compusul 28)
Masa (CI.): (M + H)+ = 393 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 0,50-1,44 (m, 9H); 1,68-2,25 (m, 4H); 2,793,22 (m, 2H); 4,50-4,63 (m, 1H); 7,34-7,85 (m, 4H); 7,73-7,90 (m, 2H); 8,27-8,39 (2d, 1H);
N-[3-mercapto-2-(3-metoxifenil)metil-propionil-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanina (compusul 29)
Masa (CI.): (M+H)+ = 457 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6+D2O): δ (ppm): 2,20-3,21 (m, 7H); 3,70 (d, 3H); 4,48 (m, 1H); 6,55-6,86 (m, 3H); 7,00-7,40 (m, 3H); 7,65-7,95 (m, 4H); 8,27-8,45-(btreONH);
RO 119882 Β1
N-[3-mercapto-2-(2-fluorfenil)metilpropionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanina (compusul 30) 1
Masa (CI.): (M+HȚ = 445 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 2,20-3,18 (m, 8H); 4,35-4,55 (m, 1H); 6,85- 3
7,35 (m, 6H); 7,65-7,90 (m, 4H); 8,35 (d, 1H);
N-[3-mercapto-2-(2-tienH)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenHalanina (compusul 31) 5
Ή-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,82-3,19 (m, 8H, CH2-CH2-CH2; NH-CHCH2); 4,44-4,59 (m, 1H, CH-COO); 6,62-7,91 (m, 9H, arii); 8,42 (d, 1H, NH); 7
N-[3-mercapto-2-(2-furil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanina (compusul 32) 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,79-3,18 (m, 8H, S-CH2-CH2-CH2; NH-CH- 9 CH2); 4,43-4,58 (m, 4H, CH-NH); 5,79-7,47 (m, 3H, furii); 7,30-7,85 (m, 4H, fenilen);7,737,91 (m, 2H, tiazoslil), 8,40-8,46 (2d, 1H, NH); 11
N-[3-mercapto-2-(3-metil-5-izoxazolil)metH-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanina (compusul 33)13 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 2,00-2,12 (2s, 3H, CH-izoxazolil); 2,28-3,19 (m, 8H, S-CH2-CH2-CH2; CH2-fenilen); 4,43-4,59 (m, 1H, CH-NH); 5,75-6,03 (2s, 1H,15 izoxazolil); 7,29-7,86 (m, 4H, fenilen); 7,74-7,90 (m, 2H, tiazolil); 8,46-8,53 (2d, 1H, NH);
Exemplul 8. Evaluarea in vitro a activității farmacologice17
a) activitatea inhibitoare a NEP
Activitatea inhibitoare a NEP este evaluată în membrane cortex de rinichi de șobolan 19 preparate conform procedurii descrise de T. Maeda și colab. în Biochim. Biophys. Acta 1983, 731(1),115-120.21
Rinichii sunt extrași de la șobolani masculi rasa Sprague-Dawley, cântărind aproximativ 300 g și sunt păstrați la 4'C.23
Cortexul de rinichi este disecat cu grijă, și suspendat într-o soluție tampon de omogenizare (10 mM fosfat de sodiu pH 7,4 conținând 1 mM MgCI2,30 mM NaCI, 0,02% NaN3) 25 1:15 greutate/volum.
Țesutul este apoi omogenizat la rece timp de 30 s, utilizând un omogenizator Ultra- 27 Turrax.
Aproximativ 10 ml de substanța omogenizată este întinsă peste 10 ml de zaharoză 29 (41 % greutate/volum) și centrifugată la 31200 rpm timp de 30 de min la 4’C într-un rotor cu unghi fix.31
Membranele sunt colectate la interfața dintre soluția tampon/zaharoză, spălate de două ori cu 50 mM soluție tampon TRIS/HCI (pH 7,4) și resuspendate în aceeași soluție 33 tampon pentru stocare în porțiuni mici la -80’C, până la folosire.
Activitatea inhibitoare a NEP este evaluată prin utilizarea metodei descrise de C. 35 Llorens și colab. în Eur. J. Pharmacol., 69, (1981), 113-116, așa cum se menționează în continuare.37
Porții alicote de suspensie de membrane preparate cum s-a descris mai sus (concentrație 5 pg/ml de proteine) sunt preincubate în prezența unui inhibitor de aminopeptidaza 39 (Bestatin-1 mM) timp de 10 min la 30’C.
S-au adăugat [3H][Leu5]-enkefalina (15 nM) și soluție tampon TRIS/HCI pH 7,4 (5041 mM) pentru a obține un volum final de 100 pl.
Incubarea (20 de min la 30°C) este oprită prin adăugare de HCI 0,1 Μ (100//I).43
Formarea metabolitului [3H]Tyr-Gly-Gly este cuantificată prin cromatografie pe coloane cu polistiren (Porpak Q).45
Procentul inhibării formării metabolitului în preparatele de membrane tratate cu compușii cu formula I și cu compușii de comparație, cu referire la preparatele de membrane 47 netratate este exprimat prin valoarea IC50(nM).
b) activitatea inhibitoare a ACE49
Activitatea inhibitoarea ACE este evaluată conform metodei menționate în literatură de B. Holmquist și colab., în Analytical Biochemistry 95, 540-548 (1979).51
RO 119882 Β1 μΜ de ACE (250 mU/ml purificat de plămân de iepure, EC 3.4.15.1 SIGMA) sunt preincubați cu 50 μΙ de compus cu formula I sau de compus de referință sau de agent purtător menționat, în cuve termostatate la 37’C.
Reacția este inițiată prin adăugare de furilacriloilfenilalanil-glicilglicină 0,8 mM (FAPGG-SIGMA).
Concomitent, utilizând un spectrofotometru Beckman DU-50 prevăzut cu un program pentru calcularea delta A/min și coeficienții de regresie ai curbelor cineticilor enzimelor, s-a înregistrat continuu absorbanta la 340 nm, timp de 5 min.
Procentul inhibării enzimei în preparatele tratate cu compușii cu formula I sau cu compușii de comparație, cu referire la preparatele netratate este exprimat prin valoarea IC50(nM).
Valorile IC50(nM) referitoare la activitatea inhibitoare a ACE și activitatea inhibitoare a NEP a compușilor 16,18-25, 27-33 și a compușilor de comparație Thiorphan și Captopril sunt prezentate în tabelul 1 care urmează.
Activitatea inhibitoare a ACE și activitatea inhibitoare a NEP expimate prin valoarea IC50 (nM) a compușilor 16, 18-25, 27-33 și a Thiorphanului și Captoprilului
Tabelul 1
Compusul Activitatea inhibitoare a ACE IC5Q(nM) Activitatea inhibitoare a NEP IC50(nM)
16 3,2 1,8
18 1,8 1,8
19 1,9 1,8
20 1,5 2,5
21 1,7 2,6
22 1,8 2,0
23 1,6 0,6
24 2,5 1,3
25 2,4 1
27 9,1 17,3
28 5,8 1,8
29 4,6 9,0
30 10,7 11,2
31 8,6 1,2
32 8,6 4,0
33 7,9 4,5
Thiorphan 99 18
Captopril 4,6 inactiv
Datele prezentate în tabelul 1 arată că, respectiv, compușii cu formula I, obiect al prezentei invenții, sunt înzestrați cu o importantă activitate inhibitoare combinată ACE/NEP.
Activitatea menționată este comparabilă cu aceea a Captoprilului, în ceea ce privește activitatea inhibitoare a ACE și mai mare decât cea a Thiorphanului în ceea ce privește activitatea inhibitoare a NEP.
Exemplul 9. Evaluarea “ex vivoa activității farmacologice
a) activitatea inhibitoare a NEP
Activitatea inhibitoare “ex vivo” a NEP este evaluată conform procedurii menționate în literatura de M. Orlowsky și col., în Biochemistry 1981,20, 4942-4950.
Activitatea inhibitoare a compușilor cu formula I este evaluată în rinichi de șobolani hipertensivi în mod spontan (SHR), 5 min după injecția i. v. (0,6 și 21 pmoli/kg) și 30 de min, de min și 4 h după administrarea orală (30 pmoli/kg) a compușilor testați.
RO 119882 Β1
După extragerea rinichilor din SHR, țesutul renal este omogenizat și incubat timp de 1 min la 37°C în prezența Glutaril-Ala-Ala-Phe-2-naftilamidei (GAAP), ca substrat și a aminopeptidazei M la un pH de 7,6. 3
Reacția este oprită prin adăugarea unei soluții apoase de 10% acid tricloracetic.
2-naftilamina eliberată este determinată prin adăugarea unui colorant rapid gârneț 5 dye (2 ml).
Vitezele de reacție ale enzimelor sunt determinate prin măsurarea creșterii densității7 optice la 524 nm (OD524) cu referire la un standard obținut cu 2-naftilamina complexată cu gârneț dye.9
Activitatea inhibitoarea NEP a compușilor testați este exprimată prin procentul inhibării a NEP în rinichi SHR.11
b) activitatea inhibitoare a ACE
Activitatea inhibitoare “ex vivo a ACE este evaluată prin utilizarea unei metode de13 testare radiometrică, după cum se menționează în literatură de J. W. Ryan și col. în Biochem. J. (1977), 167, 501-504.15
Activitatea inhibitoare a compușilor cu formula I este evaluată în plămâni de șobolani hipertensivi în mod spontan (SHR), 5 min după injecția i. v. (0,6 și 21 pmoli/kg) și 30 de min, 17 60 de min și 4 h după administrarea orală (30 pmoli/kg) a compușilor testați.
După extragerea plămânilor din SHR, țesutul de plămân este omogenizat și incubat 19 timp de 2 h la 37°C în prezenta [3H]Hyp-Gly-Gly, ca substrat.
Reacția este oprită prin adăugare de acid clorhidric.21
Acidul hipuric radiomarcat eliberat este extras cu acetat de etil și numărat prin spectrometrie de lichid cu scintilație, conform metodelor obișnuite.23
Activitatea inhibitoare ACE a compușilor testați este exprimată prin procentajul inhibării ACE în plămâni de SHR.25
Pentru exemplificare, procentajele activităților enzimatice de bază obținute în testele “ex v/vodupă administrarea intravenoasă sau orală a compusului 16 și a compușilor de 27 comparație R-1, R-2, R-3 și R-4 sunt prezentate în tabelul 2 care urmează.
Procentele inhibării ACE și inhibării NEP “ex vivo” ale compusului 16 și compușilor R-1,
R-2, R-3 și R-4 31
Tabelul 2
Compusul Tratamentul Inhibare ACE (plămâni) Inhibare NEP (rinichi)
5 min 60 min 5 min 60 min
16 i.v. (0,6 pmoli/Kg) 15% 34%
16 i.v. (0,6 pmoli/Kg) 72% 49%
16 oral (0,6 pmoli/Kg) 36% 39%
30 min 4 ore 60 min 4 ore
16 oral (30 pmoli/Kg) 60% 45% 55% 40%
R-1 oral (30 pmoli/Kg) 25% 20% 5% inactiv
R-2 oral (30 pmoli/Kg) 30% 25% 30% inactiv
R-3 oral (30 pmoli/Kg) 25% 20% 10% 5%
R-4 oral (30 pmoli/Kg) 25% 10% inactiv inactiv
RO 119882 Β1
Datele prezentate în tabelul 2 confirmă faptul că, compușii cu formula I, obiect al prezentei invenții, sunt înzestrați cu o importantă activitate inhibitoare ACE/NEP după administrare intravenoasă precum și după administrare orală.
în plus, activitatea inhibitoare ex vivo ACE/NEP a compușilor cu formula I rezultă a fi semnificativ mai puternică decât a compușilor de comparație.

Claims (5)

1 Θ. Compoziție farmaceutică, caracterizată prin aceea că aceasta conține o cantitate eficientă terapeutic dintr-un compus cu formula I, definit în revendicarea 1, în asociere cu
1. Derivați de fenilalanină cu formula:
R,
I
R- CH2- CH- CONH-CH-COOR2 (I) * I ch2- r3 caracterizați prin aceea că R este o grupare mercapto sau o grupare R4COS convertibilă în organism într-o grupare mercapto;
R, este o grupare alchil C2-C4 liniară sau ramificată sau o grupare arii sau arilalchil cu 1 la 6 atomi de carbon în restul alchil, în care arii este fenil sau heterociclu aromatic cu 5- sau 6- membri cu unul sau doi heteroatomi selectați din grupa constînd din azot, oxigen sau sulf, substituit opțional cu unul sau mai mulți substituenți, aceiași sau diferiți, selectați din grupa constituită din atomi de halogen, grupări hidroxi, alcoxi, alchil, alchiltio, alchilsulfonil sau grupări alcoxicarbonil avînd de la 1 la 6 atomi de carbon, restul alchil, grupările alchil CrC3 conținînd unul sau mai mulți atomi de fluor, grupări carboxi, grupări nitro, grupări amino sau aminocarbonil, grupări acilamino, grupări aminosulfonil, grupări mono-sau dialchilaminocarbonil avînd de la 1 la 6 atomi de carbon, restul alchil;
R2 este un atom de hidrogen, o grupare alchil C,-C4 lineară sau ramificată sau o grupare benzii;
R3 este o grupare fenil substituit cu un heterociclu aromatic cu 5- sau 6- membri, cu unul sau doi heteroatomi selectați din grupa constituită din azot, oxigen sau sulf, grupările fenil și heterociclil fiind opțional substituite cu unul sau mai mulți substituenți, aceiași sau diferiți, cum este indicat pentru R,;
R4 este o grupare alchil C,-C4 lineară sau ramificată sau o grupare fenil; și sărurile lor acceptabile farmaceutic.
2. Derivat de fenilalanină cu formula I, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că R3 este o grupare fenil substituită în poziția 4 cu o grupare heterociclică.
3 un purtător acceptabil farmaceutic pentru utilizare farmaceutică.
9. Utilizare a unui compus cu formula I la fabricarea unui medicament pentru
3. Derivat de fenilalanină cu formula I, conform revendicării 2, caracterizat prin aceea că R, reprezintă o grupare arilalchil substituită opțional cu unul sau mai mulți substituenți, aceiași sau diferiți, selectați dintre grupările constituite din atomi de halogen, hidroxi, alchil sau alcoxi.
4. Derivat de fenilalanină cu formula I, conform revendicării 3, caracterizat prin aceea că R, reprezintă o grupare fenilalchil substituită opțional cu unul sau mai mulți substituenți, aceiași sau diferiți, selectați din grupa constituită din atomi de halogen, hidroxi, alchil sau alcoxi.
5. Derivat de fenilalanină cu formula I, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este sub formă de sare cu un metal alcalin selectat din grupa constituită din sodiu, litiu și potasiu.
RO 119882 Β1
6. Derivat de fenilalanină conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este1 selectat dintre următorii compuși:
ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei;3 ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-piridil)-L-fenilalaniei;
ester benzilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(3-piridil)-L-fenilalaninei;5 ester etilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-furil)-l_-fenilalaninei;
ester etilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(5-pirimidinil)-L-fenilalaninei;7 ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-pirazinil)-L- fenilalaninei;
ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenil metilpropionil)-4-(2-tienil)-L-fenilalaninei;9 ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenil metilpropionil)-4-(3-tienil)-L-fenilalaninei;
ester metilic al N-(3-fenilcarboniltio-2-fenilmetilpropionil)-4-(3-furil)-L-fenilalaninei.11 ester metilic al N- [3-fenilcarboniltio-2-(3-piridilmetil)propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei;
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanină;13
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)4-(2-piridil)-L-fenilalanină;
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(3-piridil)-L-fenilalanină;15
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-furil)-L-fenilalanină;
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(5-pirimidinil)-L-fenilalanină;17
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-pirazinil-L-fenilalanină;
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(2-tienil-L-fenilalanină;19
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(3-tienil)-L-fenilalanină;
N-(3-mercapto-2-fenilmetilpropionil)-4-(furil)-L-fenilalanină;21
N-[3-mercapto-2-(3-piridil-metil)propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanină;
ester metilic al N-[3-acetiltio-2-(3-metoxifenil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei;23 ester metilic al N-[3-acetiltio-2-(2’fluorfenil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei;
ester metilic al N-[3-fenilcarboniltio-2-(2-tienil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei;25 ester metilic al N-[2-(2-furil)metil-3-fenilcarboniltio-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalaninei;
ester metilic al N-[2-(3-metil-5-izoxazolil)metil-3-fenilcarboniltio-propionil]-4-(2-tiazolil-L-27 fenilalaninei;
N-[3-mercapto-2-(3-metoxifenil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanină;29
N-[3-mercapto-2-(2-tienil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanină;
N-[3-mercapto-2-(3-metil-5-izoxazolil)metil-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanină;31
N-[2-(2-fluorfenil)metil-3-mercapto-propionil]-4-(2-tiazolil)-L-fenilalanină;
N-[2-(2-furil)metil-3-mercapto-propionil]-4-(2-tizolil)-L-fenilalanină;33 și stereoizomeri (2S) sau (2R) ai acestuia.
7. Procedeu pentru prepararea unui compus cu formula I, definit în revendicarea 1,35 caracterizat prin aceea că acesta cuprinde reacția dintre un compus cu formula:
Ri
I
R- CH2 - CH - COOH *
în care R și R, au semnificațiile menționate mai și un derivat de fenilalanină cu formula:
*
H2N - CH -COOR2
I ch2-r3
R2 și R3 au semnificațiile menționate mai su&— sus;
RO 119882 Β1
5 tratamentul bolilor cardiovasculare.
RO98-01109A 1995-12-28 1996-12-17 Derivaţi de fenilalanină, cu activitate inhibitoare a metalopeptidazei RO119882B1 (ro)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT95MI002773A IT1277737B1 (it) 1995-12-28 1995-12-28 Derivati tiolici ad attivita' inibitrice delle metallopeptidasi
PCT/EP1996/005663 WO1997024342A1 (en) 1995-12-28 1996-12-17 Thiol derivatives with metallopeptidase inhibitory activity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RO119882B1 true RO119882B1 (ro) 2005-05-30

Family

ID=11372827

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RO98-01109A RO119882B1 (ro) 1995-12-28 1996-12-17 Derivaţi de fenilalanină, cu activitate inhibitoare a metalopeptidazei

Country Status (31)

Country Link
EP (1) EP0877740B1 (ro)
JP (1) JP2000502687A (ro)
KR (1) KR19990076809A (ro)
CN (1) CN1071325C (ro)
AP (1) AP1186A (ro)
AR (1) AR004413A1 (ro)
AT (1) ATE292123T1 (ro)
AU (1) AU713156B2 (ro)
BG (1) BG63942B1 (ro)
BR (1) BR9612373A (ro)
CA (1) CA2241414A1 (ro)
CZ (1) CZ204698A3 (ro)
DE (1) DE69634543D1 (ro)
EA (1) EA000991B1 (ro)
EE (1) EE03766B1 (ro)
GE (1) GEP19991871B (ro)
HK (1) HK1018008A1 (ro)
IL (1) IL124915A (ro)
IS (1) IS1885B (ro)
IT (1) IT1277737B1 (ro)
NO (1) NO310914B1 (ro)
NZ (1) NZ325785A (ro)
OA (1) OA10704A (ro)
PL (1) PL188151B1 (ro)
RO (1) RO119882B1 (ro)
SK (1) SK282977B6 (ro)
TR (1) TR199801229T2 (ro)
UA (1) UA62923C2 (ro)
UY (1) UY24425A1 (ro)
WO (1) WO1997024342A1 (ro)
ZA (1) ZA9610891B (ro)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1289522B1 (it) * 1996-12-24 1998-10-15 Zambon Spa Processo per la preparazione di eteroaril-fenilalanine
MY153569A (en) 1998-01-20 2015-02-27 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Inhibitors of ?4 mediated cell adhesion
US8168616B1 (en) 2000-11-17 2012-05-01 Novartis Ag Combination comprising a renin inhibitor and an angiotensin receptor inhibitor for hypertension
GB0203665D0 (en) * 2002-02-15 2002-04-03 Glaxo Group Ltd Process
MY140707A (en) 2002-02-28 2010-01-15 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Process for preparing a phenylalanine derivative and intermediates thereof
EP1481967B1 (en) 2002-03-05 2011-05-04 Sumitomo Chemical Company, Limited Process for the preparation of biaryl compounds
TW200407310A (en) * 2002-06-07 2004-05-16 Glaxo Group Ltd Compounds
GB0213122D0 (en) * 2002-06-07 2002-07-17 Glaxo Group Ltd Compounds
US7045653B2 (en) 2002-12-23 2006-05-16 Pfizer, Inc. Pharmaceuticals
GB0327839D0 (en) 2003-12-01 2003-12-31 Novartis Ag Organic compounds
US20080161321A1 (en) 2004-03-17 2008-07-03 David Louis Feldman Use of Renin Inhibitors in Therapy
EP2414625B1 (en) 2009-04-03 2014-05-07 Statoil Petroleum AS Equipment and method for reinforcing a borehole of a well while drilling
CN102811989A (zh) 2010-02-03 2012-12-05 Meh联合公司 作为具有选择性和生物活性的等排物的多取代氟甲烷
TW201136582A (en) 2010-03-16 2011-11-01 Novartis Ag Improved pharmaceutical compositions of aliskiren and methods of delivery

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4401677A (en) * 1981-10-09 1983-08-30 E. R. Squibb & Sons, Inc. Enkephalinase inhibitors
FR2652087B1 (fr) * 1989-09-15 1993-10-15 Bioprojet Ste Civile Derives d'amino-acides, leur procede de preparation et leurs applications therapeutiques.
FR2682952B1 (fr) * 1991-10-25 1993-12-03 Institut Nal Sante Recherc Medic Nouveaux n-(mercaptoacyl) amino-acides, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
IT1273455B (it) * 1995-01-27 1997-07-08 Zambon Spa Derivati tiolici ad attivita' inibitrice delle metallopeptidasi

Also Published As

Publication number Publication date
AP9801264A0 (en) 1998-06-30
PL327580A1 (en) 1998-12-21
NZ325785A (en) 1999-09-29
AP1186A (en) 2003-07-07
KR19990076809A (ko) 1999-10-15
SK88998A3 (en) 1998-12-02
EE03766B1 (et) 2002-06-17
JP2000502687A (ja) 2000-03-07
CA2241414A1 (en) 1997-07-10
DE69634543D1 (de) 2005-05-04
AR004413A1 (es) 1998-11-04
IL124915A (en) 2001-10-31
EP0877740A1 (en) 1998-11-18
HK1018008A1 (en) 1999-12-10
GEP19991871B (en) 1999-12-06
BR9612373A (pt) 1999-07-13
AU713156B2 (en) 1999-11-25
PL188151B1 (pl) 2004-12-31
EP0877740B1 (en) 2005-03-30
ATE292123T1 (de) 2005-04-15
IS4780A (is) 1998-06-22
CN1071325C (zh) 2001-09-19
EA199800544A1 (ru) 1999-02-25
ZA9610891B (en) 1997-06-27
SK282977B6 (sk) 2003-01-09
CZ204698A3 (cs) 1998-11-11
OA10704A (en) 2002-11-28
ITMI952773A1 (it) 1997-06-28
NO982977D0 (no) 1998-06-26
WO1997024342A1 (en) 1997-07-10
AU1301897A (en) 1997-07-28
IS1885B (is) 2003-08-15
ITMI952773A0 (ro) 1995-12-28
NO310914B1 (no) 2001-09-17
IL124915A0 (en) 1999-01-26
EA000991B1 (ru) 2000-08-28
CN1206411A (zh) 1999-01-27
IT1277737B1 (it) 1997-11-12
BG102553A (en) 1999-04-30
NO982977L (no) 1998-08-27
BG63942B1 (bg) 2003-07-31
EE9800192A (et) 1998-12-15
TR199801229T2 (xx) 1998-09-21
UA62923C2 (en) 2004-01-15
UY24425A1 (es) 1997-01-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RO119882B1 (ro) Derivaţi de fenilalanină, cu activitate inhibitoare a metalopeptidazei
WO1995035315A1 (en) Gem-disubstituted amino acid derivatives
AU750048B2 (en) Certain heteroaryl substituted thiol inhibitors of endothelin-converting enzyme
EP0636621B1 (en) Beta-mercapto-propanamide derivatives useful in the treatment of cardiovascular diseases
US5994539A (en) Mercapto acyl aminoacid derivatives endowed with dual ACE-NEP inhibitory activity, useful in the treatment of cardiovascular diseases
EP0535042B1 (en) Angiotensis converting enzyme inhibitors
EP0868428B1 (en) Phosphonic acid derivatives with metallopeptidase inhibitory activity
EP0883612B1 (en) Thiol derivatives with metallopeptidase (ace/nep) inhibitory activity
JPH10512870A (ja) メタロペプチダーゼ阻害活性を有するチオール誘導体
AU638588C (en) Angiotensin converting enzyme inhibitors
EP0557303A1 (en) N- (2-THENOYLMERCAPTO-3-METHYLE) -BUTANOYLE] -HOMOCYSTEINE THIOLACTONE, A PROCESS FOR ITS PREPARATION AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING IT.
AU2260500A (en) Protease inhibitors - III