CZ204698A3 - Thiolové deriváty a farmaceutický prostředek - Google Patents

Thiolové deriváty a farmaceutický prostředek Download PDF

Info

Publication number
CZ204698A3
CZ204698A3 CZ982046A CZ204698A CZ204698A3 CZ 204698 A3 CZ204698 A3 CZ 204698A3 CZ 982046 A CZ982046 A CZ 982046A CZ 204698 A CZ204698 A CZ 204698A CZ 204698 A3 CZ204698 A3 CZ 204698A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
phenylalanine
phenylmethylpropionyl
mercapto
thiazolyl
phenylcarbonylthio
Prior art date
Application number
CZ982046A
Other languages
English (en)
Inventor
Franco Pellacini
Mario Fantucci
Gabriele Norcini
Stefano Romagnano
Francesco Santangelo
Claudio Semeraro
Original Assignee
Zambon Group S. P. A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zambon Group S. P. A. filed Critical Zambon Group S. P. A.
Publication of CZ204698A3 publication Critical patent/CZ204698A3/cs

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/26Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/395Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425Thiazoles
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/55Acids; Esters
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/12Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/22Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/30Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/38Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D307/54Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/06Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D333/24Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Treatment Of Fiber Materials (AREA)
  • Preliminary Treatment Of Fibers (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

Oblast technikv
Předkládaný vynález se týká thiolových derivátů s inhibičním účinkem na metalopeptidázy a zvláště se týká N5 merkaptoacylfenylalaninových derivátů použitelných při léčení vaskulárních onemocnění.
Dosavadní stav technikv
Farmakologický zájem o studium molekul inhibujících io metalopeptidázy pramení z úlohy, které tyto enzymy mají na úrovni srdečně oběhového systému. Ve skutečnosti je dobře známo, že sloučeniny s inhibičním účinkem na enzym konvertující angiotensin (ACE) se používají hlavně na léčení zvýšeného krevního tlaku, srdečního selhání a stavů po infarktu, protože inhibují vytváření is angiotensinu II, látky, která vyvolává několik účinků, mezi jinými zvýšení krevního tlaku.
Sloučeniny s inhibiční aktivitou na enzym konvertující endothelin (ECE) jsou použitelné jako látky zužující cévy, protože inhibují vytváření endothelinu, peptidu o délce 21 aminokyselin
2o s vazokonstrikčním účinkem.
Naopak sloučeniny s účinkem inhibujícím enzym neutrální peptidázu (NEP) zvanou také enkefalinázu, jsou použité jako vazodilatační látky, protože enzym NEP je odpovědný za inaktivaci nejen endogenního enkefalinu, ale také některých natriuretických
2s faktorů, jako je například atriální faktor (ANF), hormon vylučovaný srdcem, který zvyšuje vazodilataci a na úrovni ledvin zvyšuje vylučování moči a sodíku.
- 2 • · · ·
Proto i když sloučeniny s inhibičním účinkem na metalopeptidázy vykonávají své účinky na kardiovaskulární systém různými mechanismy působení, obecně se používají samotné nebo v kombinaci při léčení zvýšeného krevního tlaku, selhání ledvin, městnavého onemocnění srdce a ischemických onemocnění srdce.
Mezi thiolovými deriváty inhibitorů metalopeptidáz jsou pokládány za mateřské sloučeniny pro inhibitory NEP, popřípadě ACE, thiorfan [(DL-(3-merkapto-2-benzylpropanoyl)glycin], popsaný poprvé v Roques a další, Nátuře, díl. 288, str. 286-288, (1980), a kaptopril io (The Merck Index, XI. vyd., No. 1773, str. 267). V literatuře se popisují také jiné molekuly s thiolovou strukturou, které mají inhibiční účinek na metalopeptidázu.
US patenty No. 4,401,677 a No. 4,199,512 (oba firmy E. R. Squibb & Sons, lne.) popisují merkaptoalkanoylové aminokyseliny s enkefalinázovou inhibiční aktivitou a ACE-inhibiční aktivitou.
Evropská patentová přihláška No. 0419327 (Société Civile Bioproject) popisuje deriváty aminokyselin s inhibiční aktivitou na enkefalinázu a ACE.
Evropská patentová přihláška No. 0449523 (E. R. Squibb 20 & Sons, lne.) popisuje merkapto nebo acylthiotrifluormethylamídy s inhibičním účinkem na NEP.
Mezinárodní patentová přihláška No. WO 93/08162 [RhonePoulenc Rorer S. A. - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)j popisuje β,β-disubstituované a25 merkaptomethylpropionylamidy se smíšeným inhibičním účinkem na ACE/NEP.
Evropská patentová přihláška No. 0524553 [Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)] popisuje acylmerkaptoalkanoyldipeptidy s inhibiční aktivitou na neutrální
3o endopeptidázu a peptidyldipeptidázu A.
- 3 • · » a » a • ·
Evropská patentová přihláška No. 0566157 (Schering Corporation) popisuje thiolové deriváty, jako například Nmerkaptoacylaminokyseliny s inhibičním účinkem na NEP.
α-merkaptoacyldipeptidy s inhibičním účinkem na ACE a NEP se 5 také popisují v S. S. Bhagwat a další, v Bioorganic & Medicinal
Chemistry Letters, 7, 735 - 738, 1995.
V této poslední práci předkládají autoři závěr, že přítomnost bifenylmethylové skupiny vykonává zajímavou smíšenou inhibiční aktivitu na ACE/NEP v molekulách s a-merkaptoacyldipeptidovou io strukturou, ale substituce bifenylové skupiny skupinami jako a- nebo β-naftyl způsobuje výrazné snížení účinku.
Autoři vynálezu nyní nalezli N-merkaptoacylfenylalaninové deriváty, které mají výrazný inhibiční účinek na enzym konvertující angiotensin stejně jako na enzym neutrální endopeptidázu (smíšený nebo dvojí inhibiční účinek ACE/NEP), čímž jsou zvláště užitečné při léčení srdečních chorob.
Podstata vynálezu
Předmětem předkládaného vynálezu jsou tedy sloučeniny 20 vzorce
Ri
R-CH2-C*H-CONH-C*H-COOR2 (I) ch2-r3 kde
R je merkaptoskupina nebo skupina R4COS v organismu na merkaptoskupinu přeměnitelná;
Ri je přímá nebo větvená C2-C4 alkylová skupina nebo arylová nebo arylalkylová s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, kde arylem
- 4 • · • · · · • · · · • · · · · • · · je fenyl nebo 5 nebo 6-členný aromatický heterocykl s jedním nebo dvěma heteroatomy zvolenými ze skupiny dusík, kyslík a síra, popřípadě substituovaná jedním nebo více substituenty, které jsou stejné nebo různé, zvolenými ze skupiny atomy halogenu, hydroxy, alkoxy, alkyl, alkylthio, alkylsulfonyl nebo alkoxykarbonyl, které mají od 1 do 6 atomů uhlíku v alkylové části, C1-C3 alkylová skupina obsahující jeden nebo více atomů fluoru, karboxylových skupin, nitro skupin, amino- nebo aminokarbonylových skupin, skupin acylamino, aminosulfonyl, mono- nebo dialkylamino nebo mono- nebo dialkylaminokarbonyl, které mají od 1 do 6 atomů uhlíku v alkylové části;
R2 je atom vodíku, přímý nebo větvený CU-C4 alkyl nebo benzyl;
R3 je fenyiová skupina substituovaná 5 nebo 6-členným aromatickým heterocyklem s jedním nebo dvěma heteroatomy zvolenými ze skupiny dusík, kyslík a síra, kde fenyl a heterocyklické skupiny jsou popřípadě substituovány jedním nebo více substituenty, stejnými nebo rozdílnými, jak je uvedeno pro Rn
R4 je přímá nebo větvená CU-C4 alkylová nebo fenyiová skupina;
atomy uhlíku označené hvězdičkou jsou stereogenní centra; a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Sloučeniny vzorce I obsahují dvě stereogenní centra a mohou proto existovat ve formě stereoizomerů.
Sloučeniny vzorce I podle předkládaného vynálezu mají smíšenou inhibiční aktivitu ACE/NEP a jsou použitelné pro léčení kardiovaskulárních onemocnění. Ačkoliv termíny smíšený a dvojí se používají bez rozdílu, termín dvojí se v literatuře běžně používá pro sloučeniny s inhibičním účinkem současně na ACE a NEP.
- 5 • ·
V předkládaném textu se termíny smíšený a dvojí pokládají za ekvivalentní.
V předkládaném popisu, pokud není specifikováno jinak, znamená termín přímý nebo větvený alkyl alkylovou skupinu, jako je methyl, ethyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, sek.-butyl, terc.-butyl, izobutyl, n-pentyl, 2-pentyl, 3-pentyl, izopentyl, terc.-pentyl, n-hexyl a izohexyl; termínem přímá nebo větvená alkoxylová skupina je zamýšlen alkoxyl jako je methoxy, ethoxy, n-propoxy a izopropoxy; termínem atom halogenu se označuje atom chloru, fluoru, bromu nebo jódu; termínem acyl je míněna acylová skupina odvozená z alifatické nebo aromatické karboxylové kyseliny jako je kyselina octová, propionová, máselná a benzoová; termínem 5 nebo 6-členný aromatický heterocykl obsahující 1 až 2 heteroatomy zvolené ze skupiny dusík, kyslík a síra se míní skupina sloučenin jako thiazol, is izoxazol, oxazol, izothiazol, pyrazol, imidazol, thiofen, pyrrol, pyridin, pyrimidin, pyrazin, pyridazin a furan, které jsou popřípadě kondenzovány benzenovým kruhem.
Příklady farmaceuticky přijatelných solí sloučenin vzorce I jsou soli s alkalickými kovy nebo kovy alkalických zemin a soli
2o s farmaceuticky přijatelnými organickými bázemi. Výhodné sloučeniny vzorce I jsou sloučeniny, kde R3 znamená fenylovou skupinu, substituovanou v poloze 4 heterocyklickou skupinou.
Výhodnější sloučeniny v této třídě jsou sloučeniny vzorce I, kde Ri znamená arylalkylovou skupinu popřípadě substituovanou jedním nebo více substituenty, stejnými nebo rozdílnými, zvolenými ze skupiny atomy halogenu, hydroxy, alkyl nebo alkoxy.
Ještě výhodnější sloučeniny v této třídě jsou sloučeniny vzorce I, kde R1 znamená fenylalkylovou skupinu popřípadě substituovanou jedním nebo více substituenty, stejnými nebo rozdílnými, zvolenými ze χ skupiny atomy halogenu, hydroxy, alkyl nebo alkoxy.
- 6 44 44
4 4 4
Výhodné příklady farmaceuticky přijatelných solí sloučenin vzorce I jsou soli s alkalickými kovy jako je sodík, lithium a draslík.
Odborníku v oboru je jasné, že sloučeniny vzorce I, kde R znamená skupinu R4COS jsou v organismu přeměnitelné na merkaptoskupinu stejně jako sloučeniny vzorce I, kde skupina R2 je alkylová nebo benzylová skupina, jsou biologické prekurzory (prodrugs) odpovídajících sloučenin vzorce I, kde R znamená merkaptoskupinu (R=SH) nebo R2 je atom vodíku (R2=H).
Konkrétními příklady výhodných sloučenin vzorce I podle io předkládaného vynálezu jsou:
methylester N-{3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2thiazolyl}-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2pyridyl)-fenylalaninu;
benzylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4-(3pyridyl)-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2-furyl)fenylalaninu;
ethylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4-(52o pyrimidinyl)-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2pyrazinyl)-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2thienyl)-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4-(3thienyl)-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4-(3-furyl)fenylalaninu;
• · ·
• · · · · · · • ··· · · · · • ······· · ··· methylester N-[3-fenylkarbonylthio-2-(3-pyridylmethyl)propionyl)-4-(2thiazolyl)-fenylalaninu;
methylester N-[3-acetylthio-2-(3-methoxyfenyl)methyl-propionyl]-4-(2thiazolyl-fenylalaninu;
methylester N-[3-acetylthio-2-(2-fluorfenyl)methyl-propionyl]-4-(2thiazolylj-fenylalaninu;
methylester N-[3-fenylkarbonylthio-2-(2-thienyl)methyl-propionyl]-4-(2 thiazolyl)-fenylalanin;
methylester N-[2-(2-furyl)methyl-3-fenylkarbonylthio-propionyl]-4-(210 thiazolyl)-fenylalaninu;
methylester N-[2-(3-methyl-5-izoxazolyl)methyl-3-fenylkarbonylthíopropionyl]-4-(2-thiazolyl)-fenylalaninu;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2-thiazolyl)-fenylalanin;
N-(3-merkapto-2-fenyimethylpropionyl)-4-(2-pyridyl)-fenylalanin;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(3-pyridyl)-fenylalanin; N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2-furyl)-fenylalanin; N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(5-pyrimidinyl)-fenylalanin; N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2-pyrazinyl)-fenylalanin; N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2-thienyl)-fenylalanin;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(3-thienyl)-fenylalanin;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(3-furyl)-fenylalanin;
N-[3-merkapto-2-(3-pyridylmethyl)propionyl]-4-(2-thiazolyl)fenylalanin;
N-[3-merkapto-2-(3-methoxyfenyl)methyl-propionyl)-4-(2-thiazolyl)25 fenylalanin;
N-[3-merkapto-2-(2-thienyl)methyl-propionyl]-4-(2-thiazolyl)fenylalanin;
- 8 • 0 • ·
: : 0 0 «
<
0
N-[3-merkapto-2-(3-methyi-5-izoxazolyl)methyl-propionyl]-4-(2thiazolylj-fenylalanin;
N-[2-(2-fluorfenyl)methyl-3-merkapto-propionyl]-4-(2-thiazolyl)fenylalanin;
N-[2-(2-furyl)methyl-3-merkapto-propionyl)-4-(2-thiazolyl)-fenylalanin.
Výroba sloučenin vzorce I podle předkládaného vynálezu se provádí syntetickým způsobem zahrnujícím reakci mezi sloučeninou vzorce
R!
R-CH2-C*H-COOH (II) kde
R a R, mají výše uvedené významy; a fenylalaninovým derivátem vzorce
H2N-C*H-COOR2 l
CH2-R3 (III) kde
R2 a R3 mají výše uvedené významy.
Kondenzační reakce se provádí způsoby běžnými v chemii 20 peptidů.
Před provedením reakce může být užitečné patřičně chránit případné funkční skupiny, které by mohly interferovat při reakci.
Případná ochrana skupin se provádí běžnými způsoby.
V tomto ohledu se sloučeniny, kde R znamená skupinu R4COS 25 s výhodou používají jako meziprodukty vzorce II, čímž se získají odpovídající sloučeniny vzorce I, kde R = R4C0S ze kterých je možno hydrolýzou získat sloučeniny vzorce I, kde R = SH.
- 9 • ·
I · · · » · · · • · · · · • · · • ·
Vyhodnocení použitelnosti případné ochrany stejně jako volba druhu použité ochrany podle prováděné reakce a funkčních skupin, které je třeba chránit patří do rámce obvyklých znalostí odborníka v oboru.
Odstranění případných ochranných skupin se provádí běžnými způsoby.
Obecné prameny popisující použití ochranných skupin v organické chemii viz Theodora W. Green a Peter G. M. Wuts, Protective Groups v Organic Synthesis, John Wiley & Sons. lne, II.
io vyd.,1991.
Sloučeniny vzorce II jsou známé nebo mohou být snadno připraveny běžnými způsoby, jak se popisuje například v britském patentu No. 1576161 firmy E. R. Squibb & Sons lne.
Alternativně mohou být sloučeniny vzorce li připraveny 15 metodami syntézy, popsanými v M. C. Fournié-Zalusky a další v J.
Med. Chem., 1994, 37, 1070 - 1083.
Rovněž meziprodukty sloučenin vzorce III jsou známé nebo mohou být snadno připraveny známými způsoby.
Například sloučeniny vzorce III je možno připravit postupy 20 syntézy popsanými v W. C. Shieh a další v J. Org. Chem. 1992, 57,
379 - 381.
Alternativně mohou být sloučeniny vzorce III připraveny způsoby vazby (křížové vazby) vycházeje z halogenovaných heterocyklických sloučenin a stannylfenylalaninových derivátů, jak se popisuje v D. S.
Wilbur a další v Bioconjugate Chem.,1993, 4, 574 -580.
Sloučeniny vzorce I ve formě jednotlivých stereoizomerů se připravují stereoselektivní syntézou nebo separací stereoizomerní směsi běžnými způsoby.
- 10 • ·
Také příprava solí sloučenin vzorce I podle předkládaného vynálezu se provádí běžnými způsoby.
Sloučeniny vzorce I podle předkládaného vynálezu mají smíšený inhibiční účinek na ACE/NEP a jsou použitelné při léčení kardiovaskulárních onemocnění.
Inhibiční účinek sloučenin vzorce I byl vyhodnocován v in vitro testech (příklad 8).
Inhibiční účinek sloučenin vzorce I byl vyhodnocován v porovnání s výše uvedenými léčivy thiorfan a kaptopril.
io Inhibiční účinek in vitro sloučenin vzorce I, vyjádřený jako hodnota lC5o, vycházel v koncentracích řádu nM.
Uvedená aktivita je srovnatelná s účinkem kaptoprilu, jehož se týká inhibiční účinek na ACE, a větší než u thiorfanu, jehož se týká inhibiční účinek na NEP.
Inhibiční účinek sloučenin vzorce I byl navíc také vyhodnocován v testech ex vivo v porovnání se známými sloučeninami (příklad 9).
Konkrétně, jako srovnávací sloučeniny byly použity N-[3merkapto-2-(3,4-methylendioxyfenyl)methyl-propionyl]-(S)-fenylalanin a N-[3-merkapto-2-(3,4-methylendioxyfenyl)methyl-propionyl]-(S)2o tyrozin, popisované jako inhibitory enkefalinázy a ACE ve výše uvedené evropské patentové přihlášce No. 0419327 a dále označované jako sloučeniny R-1 popřípadě R-2, stejně jako N-(3merkapto-2-methylpropanoyl)-L-tyrozin a N-(3-merkapto-2methylpropanoyl)-L-tryptofan, popisované jako inhibitory ACE v US
4,199,512 a jako inhibitory enkefalinázy v US 4,401,677 a dále označované jako sloučeniny R-3, popřípadě R-4.
Inhibiční účinek ex vivo ACE/NEP byl konkrétně určován vyhodnocením enzymatické aktivity ve tkáňových homogenátech (plíce pro aktivitu ACE a ledviny pro aktivitu NEP) spontánně hypertenzních
- 11 • · • · • · · krys (SHR), kterým byly podávány testované sloučeniny intravenózní nebo orální cestou.
Je samozřejmé, že aktivita sloučenin vzorce I v testech ex vivo potvrdila smíšenou aktivitu (dvojí aktivitu) ukázanou v testech in vitro také po orálním podávání.
Uvedená aktivita se navíc ukázala jako výrazně vyšší než aktivita srovnávacích sloučenin.
Pro praktické použití při léčení mohou být prostředky vzorce I v pevných nebo kapalných farmaceutických prostředcích vhodných pro orální nebo parenterální podávání.
Proto jsou dalším předmětem vynálezu farmaceutické prostředky obsahující terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce I ve směsi s nosičem pro farmaceutické použití.
Konkrétními příklady farmaceutických prostředků podle 15 předkládaného vynálezu jsou tablety, potahované tablety, kapsle, granule, roztoky a suspenze vhodné pro orální podávání, a roztoky a suspenze vhodné pro parenterální podávání.
Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu se vyrábějí známými způsoby.
Denní dávka sloučeniny vzorce I nebo odpovídajícího prekurzoru bude záviset na několika faktorech, jako je vážnost onemocnění, individuální reakce pacienta nebo druh prostředku, ale budou se obvykle pohybovat mezi 0,1 a 10 mg/kg tělesné hmotnosti rozdělených do jediné dávky nebo více denních dávek.
S cílem ilustrovat předkládaný vynález jsou nyní uvedeny následující příklady. Pokud není uvedeno jinak, bleskové chromatografie byly prováděny s použitím silikagelu pro bleskovou chromatografií firmy Baker (code 7024-00).
- 12 • · • · • · · • · · · • ·
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Výroba ethylesteru N-terc.-butoxvkarbonvl-4-(5-pyrimidinvl)-Lfenylalaninu
Směs kyseliny 5-pyrimidinylborité (850 mg; 2 mmol), ethylesteru
N-terc.-butoxykarbonyl-4-trifluormethylsulfonyl-L-fenylalaninu (450 mg; 2,2 mmol), a roztok uhličitanu sodného (530 mg) ve vodě (2,59 ml) a směs toluen:ethanol = 10:4,5 (20 ml) byla odplyňována dusíkem 30 min.
io Potom byl přidán paladium(0)tetrakis(tryfenylfosfin) (120 mg;
0,06 mmol) a reakční směs byla zahřáta na 90 °C a za míchání udržována 3 hod.
Směs byla potom udržována při pokojové teplotě a znovu byl přidán ethylester N-terc.-butoxykarbonyl-4-trifluormethylsufhonyl-L15 fenylalaninu (112 mg) a paladium(0)tetrakis-(trifenylfosfín) (30 mg).
Směs byla dále zahřívána při teplotě 90 °C a udržována za míchání dalších 18 hod.
Po ochlazení reakční směsi na pokojovou teplotu byl přidán ethylacetát (100 ml) a voda (40 ml).
Fáze byly rozděleny a organická fáze byla sušena na síranu sodném a odpařena ve vakuu. Získaný zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií (silikagel, eluent hexan:ethylaceát = 7:3, tlak dusíku 10 kPa) za získání ethylesteru N-terc.-butoxykarbonyl-4-(5-pyrimidinyl)-Lfenylalaninu (130 mg; 14 % výtěžek) jako bezbarvého oleje.
1H-NMR (200 MHz, CDCI3): 5 (ppm): 1,24 (t, 3H, CH2-CH3); 1,40 [s, 9H, C(CH3)3J; 3,01-3,25 (m, 2H, CH2-CH); 4,19 (q, 2H, CHz-CH,); 4,52-4,65 (m,1H. CH-COO); 5,06 (d, 1H, NH); 7,25-7,52 (m, 4H, fenylen); 8,91 (s, 2H, N-CH-C-CH-N); 9,19 (s, 1H, N-CH-N).
- 13 ·· ·
-'· · • i
Příklad 2
Výroba methylesteru N-terc.-butoxykarbonvl-4-(2-thiazolvQ-Lfenylalaninu
Methylester N-terc.-butoxykarbonyl-4-(trifluormethylsulfonyl)-L5 fenylalanínu (8 g; 32,3 mmol) a paladium-bis(trifenylfosfin) chlorid (2,3 g) byly přidány k roztoku 2-trimethylstannylthiazolu (13,8 g;
32,3 mmol) ve směsi tetrahydrofuran:toluen = 10:1 (50 ml), která byla předem odpiyněna dusíkem.
Směs byla vařena pod zpětným chladičem 24 hod a potom byl io znovu přidán 2-trimethylstannylthiazol (2 g).
Po 6 hod varu pod zpětným chladičem byly přidány methylester N-terc.-butoxykarbonyl-4-(trifluormethylsulfonyl)-L-fenylalaninu (2 g) a paladium-bis(trifenylfosfin)chlorid (700 mg).
Výsledná reakční směs byla udržována při 70 °C za míchání po 15 dobu 16 hod a potom ochlazena na pokojovou teplotu.
Potom byla ke směsi přidána voda (200 ml) a směs byla extrahována methylenchloridem (4x200 ml).
Spojené organické fáze byly sušeny na síranu sodném a odpařeny ve vakuu. Získaný zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií (silikagel, eluent methylenchlorid:ethylacetát = 9:1, tlak dusíku 10 kPa) za získání methylesteru N-terc.-butoxykarbonyl-4-(2thiazolyl-L-fenylalaninu (2,3 g; výtěžek 20 %).
1H-NMR (200 MHz, CDCI3): 5 (ppm): 1,40 [s, 9H, C(CH3)3j; 3,003,21 (m, 2H- CH2); 3,70 (s, 3H, COOCH3); 4,42-4,65 (m, 1H, CH25 COO); 5,02 (bd, 1H, NH); 7,30 (d, 1H, S-CH-CH-N); 7,81 (d, 1H, SCH-CH-N); 7,15-7,90 (m, 4H, fenylen).
- 14 • · · ·
Příklad 3
Výroba methylesteru N-terc.-butoxvkarbonvl-4-(3-pyridvl)-Lfenylaninu
3-brompyridin (1,67 g; 10 mmol) a paladium(O)tetrakis5 (trifenylfosfin) (370 mg; 0,219 mmol) byly přidány k roztoku methylesteru N-terc.-butoxykarbonyl-4-(tributylstannyl)-L-fenylalaninu (4 g; 7,03 mmol), připraveného podle popisu v D. S. Wilbur a další, v Bioconjugate Chem., 1973, 4, 574 - 580, v dimethylformamidu (30 ml), předem odplyněným dusíkem.
io Reakční směs byla udržována za míchání 10 min při pokojové teplotě a potom byla 6 hod zahřívána při 105 °C.
Znovu byl přidán paladium(0)tetrakís(trifenylfosfin) (0,0035 mmol) a směs byla za míchání udržována při teplotě 105 °C 8 hod a potom ochlazena na pokojovou teplotu.
Do směsi byla přidána voda (100 ml) a směs byla extrahována hexanem (3 x 150 ml).
Spojené organické fáze byly promyty nasyceným vodným roztokem fluoridu draselného, sušeny na síranu sodném a odpařeny ve vakuu. Získaný zbytek byl spojen s ethylacetátem a filtrován.
2o Výsledný roztok byl odpařen ve vakuu a zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií (silikagel, eluent hexan:ethylacetát = 8:2, tlak dusíku 10 kPa) za poskytnutí methylesteru N-terc.butoxykarbonyl-4-(3-pyridyl)-L-fenylalaninu (1,5 g; 60 % výtěžek) jako bezbarvého oleje.
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+ = 357 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,40 [s, 9H, C(CH3)3]; 3,003,20 (m, 2H CH2); 3,71 (s, 3H, COOCH3); 4,55 (m, 1H, CH-COO); 5,05 (bd, 1H, NH); 7,19-7,51 (m, 4H, fenylen); 7,30-8,82 (bm, 4H, pyridyl),
Analogickým způsobem byly připraveny následující sloučeniny:
- 15 Methylester N-terc.-butoxvkarbonyl-4-(2-pyridyl-L-fenvlalaninu
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+= 357 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,40 [s, 9H, C(CH3)3]; 3,033,21 (m, 2H, CI±>CH); 3,70 (s, 3H, COOCH3); 4,54-4,65 (m, 1H, CHs COO); 4,98 (d, 1H, CONH); 7,16-7,21 (m, 1H, N-C-CH-CH); 7,65-7,77 (m, 2H, N-CH-CH-CH); 7,19-7,93 (m, 4H, fenylen); 8,63-8,68 (m, 1H,
N-CH);
Methylester N-terc.-butoxvkarbonvl-4-(2-pyrazinvl)-L-fenylalaninu io 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm):1,40 [s, 9H, C(CH3)3]; 3,02 (m, 2H, CH2); 3,70 (s, 3H, COOCH3); 4,53-4,70 (m, 1H, CH-COO); 5,03 (bd, 1H, NH; 7,21-7,98 (m, 4H, fenylen); 8,49 a 8,62 [2(bs, 2H, NCH-CH-N)]; 9,00 (s,1H, CH-N-CH-CH);
Methylester N-terc.-butoxvkarbonvl-4-(2-thienvl)-L-fenylalaninu 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,41 [m, 9H, C(CH3)3]; 2,983,18 (m, 2H, CH2); 3,71 (s, 3H COOCH3); 4,53-4,64 (m, 1H. CH-COO); 4,98 (bd, 1H, NH); 7,02-7,28 (m, 3H thienyl); 7,10-7,54 (m, 4H, fenylen).
Příklad 4
Výroba dihydrochloridu methylesteru 4-(3-pvridyl)-Lfenylalaninu
Thionylchlorid (0,85 ml; 4,78 mmol) byl po kapkách přidáván 25 k roztoku methylesteru N-terc.-butoxykarbonyl-4-(3-pyridyl)-Lfenylalaninu (1,4 g; 3,93 mmol) v methanolu (30 ml), připravenému podle popisu v příkladu 3, při udržování teploty na 0 °C.
- 16 • · • · · · · · ·· • · · · · · · · · · · • · · · · · ·· · · · · · ·
Na konci přidávání byla teplota reakční směsi přivedena na pokojovou teplotu a směs byla za míchání udržována 8 hod.
Rozpouštědlo bylo potom odpařeno ve vakuu za získání dihydrochloridu methylesteru 4-(3-pyridyl)-L-fenylalaninu (820 mg;
71 % výtěžek), který byl použit bez úprav v následujících reakcích.
Hmotnostní spektrum: (C.I.):(M+H)+= 257 (volná báze) 1H-NMR (200 MHz, D2O): δ (ppm): 3,11-3,32 (m, 2H, CH2); 3,67 (s, 3H, CH3); 4,31-4,37 (m, 1H, CH); 7,30-7,63 (m, 4H, fenyien); 7,97 (dd, 1H, CH-N-CH-CH-CH); 8,59 (d, 1H, CH-N-CH-CH-CH) ; 8,65-8,71 io (m,1H, CH-N-CH-CH); 8,89 (d,1H, CH-N-CH-CH-CH).
Analogickým způsobem byly připraveny následující sloučeniny:
Dihydrochlorid methylesteru 4-(2-pvridyl)-L-fenylalaninu
Hmotnostní spektrum: (C.I.): (M+H)+= 257 (volná báze) 1H-NMR (200 MHz, D2O): δ (ppm): 3,12-3,33 (m, 2H, CH2); 3,64 (s, 3H, CH3); 4,30-4,37 (m, 1H, CH); 7,36-7,73 (m, 4H, fenyien); 7,788,58 (m, 4H, pyridyl);
Dihydrochlorid ethylesteru 4-(5-pyrimidinvl)-L-fenylalaninu so 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,11 (t, 3H, CH2-CH3);
3,10-3,35 (m, 2H, ChbCH); 4,04-4,20 (m, 2H, CH2-CH3); 422-4,35 (m, 1H, CH); 7,40-7,84 (m, 4H, fenyien); 9,15 (s, 2H, N-CH-C-CH-N); 9,19 (s,1H, N-CH-N);
Dihydrochlorid methylesteru 4-(2-pyrazinyl)-L-fenylalaninu
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+= 258 (volná báze)
- 17 • · 1H-NMR (200 MHz, DCI 1N): δ (ppm): 3,45-3,67 (m, 2H, CH2); 3,98 (s, 3H, CH3); 4,65-4,72 (m,1H, CH); 7,68-8,26 (m, 4H, fenylen); 9,02 (d, 1H, CH-N-CH-CH); 9,44 (dd, 1H, CH-N-CH-CH); 9,54 (d,1H, CH-N-CH-CH);
Hydrochlorid methylesteru 4-(2-thienvl)-L-fenylalaninu
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+= 262 (volná báze) 1H-NMR (200 MHz, D2O): δ (ppm): 2,98-3.19 (m, 2H, CH2); 3,65 (s, 3H, CH3); 4,21-4,28 (m, 1H, CH); 6,96-7,28 (m, 3H, thienyl); 7,Οδίο 7,52 (m, 4H; fenylen);
Dihydrochlorid methylesteru 4-(2-thiazolyl)-L-fenylalaninu 1H-NMR 200 MHz, D2O: δ (ppm): 3,10-3,32 (m, 2H, CI±>-CH); 3,68 (s, 3H, CH3); 4,30-4,38 (m,1H, CH); 7,30-7,80 (m, 4H, fenylen);
7,70-7,91 (m, 2H, thiazolyl).
Příklad 5
Výroba kyseliny 2-izobutvl-3-fenylkarbonylthiopropionové
Směs kyseliny 2-izobutylakrylové (6,34 g; 49 mmol) a kyseliny 20 thiobenzoové (5,96 ml; 51 mmol) byla zahřívána při 100 °C za míchání hod.
Reakční směs byla potom smísena s petroletherem 40 až 60 °C (100 ml) a ochlazena v lázni suchý led/aceton na - 70 °C.
Filtrací a promytím petroletherem při - 70 °C byl zbytek sloučen, 25 sušen za sníženého tlaku za poskytnutí kyseliny 2-izobutyl-3fenylkarbonylthiopropionové (11,12 g; 85 % výtěžek) jako bílé pevné látky.
- 18 • · • · · · · • · · · · • · ···· · • · · · 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 0,90-1,00 (m, 6H); 1,401,90 (m, 3H); 2,70-2,90 (m, 1H); 3,10-3,40 (m, 2H); 7,35-7,62 (m, 3H); 7,90-8,00 (d, 2H).
Analogickým způsobem byly připraveny následující sloučeniny:
Kyselina 2-(3-methoxvfenvl)methvl-3-fenvlkarbonylthiopropionová 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,32 (s, 3H); 2,80-3,15 (m, 5H); 3,77 (s, 3H); 6,70-6,80 (m, 3H); 7,14-7,25 (m, 1H).
io Kyselina 3-acetvlthio-2-(2-fluorfenvl)methylpropionová 1H-NMR (200 MHz. CDCI3): δ (ppm): 2,31 (s, 3H); 2,90-3,20 (m, 5H); 6,95-7,30 (m, 4H).
Benzylaminová sůl kyseliny 3-fenylkarbonylthio-2-(2-thienvl)15 methylpropionové 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 2,45-3,25 (m, 5H, SCH2-CH-CH2); 3,90 (s, 2H, Cl±>-fenyl); 6,85-7,91 (m, 13H, aryl).
Příklad 6
Výroba methylesteru N-í(2S)-3-fenylkarbonylthio-2-fenvlmethylpropionvn-4-(2-thiazolvl)-L-fenvlalaninu (sloučenina 1)
Roztok hydroxybenztriazolu (0,54 g; 4 mmol) v tetrahydrofuranu (30 ml) a potom roztok dicyklohexylkarbodiimidu (0,825 g; 4 mmol) v methylenchloridu (15 ml) byly přidány za míchání při 0 °C ke směsi kyseliny (2S)-3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionové (1,2 g; 4 mmol), dihydrochloridu methylesteru 4-(2-thiazolyl)-L-fenylalaninu (1,34 g; 4 mmol), připravenému podle popisu v příkladu 4, ι» > · « ·· · · triethylaminu (1,11 ml; 8 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml) a methylenchloridu (30 ml).
Reakční směs byla za míchání udržována 20 hod, potom byla odfiltrována dicyklohexylurea a rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku.
Zbytek byl spojen ethylacetátem a roztok byl promyt vodným roztokem 20 % chloridu sodného, 5 % roztokem hydrogenuhliČitanu sodného a opět 20 % roztokem chloridu sodného.
Po rozdělení fází a odpaření organické fáze byla výsledná bílá w pevná látka čištěna bleskovou chromatografií (silikagel, eluent ethylacetát:hexan = 40:60, tlak dusíku 10 kPa) za poskytnutí methylesteru N-[(2S)-3-fenylkarbonyithio-2-fenylmethylpropionyl]4-(2thiazolyl)-L-fenylalaninu (1,5 g).
Teplota tání 98 - 100 °C.
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+= 545 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,63-3,35 (m, 7H, CH2-CHCH2, CH2-C6H4-thiazolyl); 3,68 (s, 3H, COOCH3); 4,75-4,85 (m, 1H, CH-COO); 5,78 (d, 1H, NH); 7,10-8,00 (m, 16H, aryl).
Analogickým způsobem vycházeje ze sloučenin známých nebo 20 připravených podle popisu v příkladech 4 a 5 byly získány následující sloučeniny:
Methylester N-í(2S)-3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethvlpropionyl1-4-(2furvl)-L-fenvlalaninu (sloučenina 2)
Teplota tání 132 - 134 °C.
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+= 528
- 20 • · · • · 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,60-3,35 (m, 7H, CH2-CHCH2, CH2-C6H4-furyl); 3,58 (s, 3H, COOCH3); 4,71-4,81 (m, 1H, CHCOO); 5,73 (d, 1H, NH); 6,40-8,00 (m,17H, aryl);
Ethylester N-f(2S)-3-fenvlkarbonvlthio-2-fenylmethvlpropionvn-4-(5pyrimidinvD-L-fenylalaninu (sloučenina 3)
Teplota tání 117-119 °C.
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+ = 554 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,18 (t, 3H, CH3-CH-); 2,65io 3,35 (m, 7H, CH2-CH-CH2, CH2-C6H4-pyrimidinyl); 3,95-4,20 (m, 2H, COOCH2); 4,70-4,80 (m, 1H. CH-COO); 5,78 (d, 1H, NH); 7,05-8,00 (m, 14H, fenyl, fenylen); 8,68 (s, 2H, CH-N-CH-N-CH) ; 9,11 (s, 1H, NCH-N);
Methylester N-í(2S)-3-fenvlkarbonylthio-2-fenvlmethylpropionvn-4-(2pyrazinvD-L-fenylalaninu (sloučenina 4)
Teplota tání 145 - 147 °C
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+ = 540 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,65-3,35 (m, 7H, CH2-CH20 CH2, CH2-C6H4 pyrazinyl); 3,61 (s, 3H, COOCH3); 4,75-4,85 (m, 1H, CH-COO); 5,78 (d, 1H, NH); 7,10-8,00 (m, 14H, fenyl, fenylen); 8,488,75 (m, 3H, CH-N-CH-CH-N);
Methylester N-f(2S)-3-fenvlkarbonylthio-2-fenvlmethvlpropionvl1-4-(325 pyridvD-L-fenylalaninu (sloučenina 5)
Teplota tání 132 - 134 °C.
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+= 539
- 21 • · 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm); 2,66-2,79 (m, 1H, CH2-CHCH2); 2,88-3,35 (m, 6H, CH2-CH-CH2, CH2-C6H4-pyridyl); 3,61 (s, 3H, COOCH3); 4,75-4,85 (m, 1H, CH-COO); 5,77 (d, 1H, NH); 7,07-7,99 (m, 16H, CH-CH-CH-N, fenyl, fenylen); 8,51-8,64 (m, 2H, CH-N-CH);
Methylester N-f(2S)-3-fenvlkarbonvlthio-2-fenvlmethvlpropionyl1-4-(2pyridvl)-L-fenvlalaninu (sloučenina 6)
Teplota tání 123 - 125 °C.
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+= 539 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,63-2,77 (m, 1H, CH2-CH
CH2); 2,85-3,35 (m, 6H, CH2-CH-CH2, CR2-C6H4-pyridyl); 3,56 (s, 3H, COOCH3); 4,75-4,85 (m, 1H, CH-COO); 5,75 (d,1H, NH); 7,09-7,99 (m,16H, CH-CH-CH-N, fenyl, fenylen); 8,61-8,65 (m, 1H, N-CH-CH);
Methylester N-í(2S)-3-fenylkarbonylthio-2-fenvlmethvlpropionyl1-4-(2thienvl)-L-fenvlalaninu (sloučenina 7)
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)*= 544 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm); 2,64-3,36 (m, 7H, CH2-CHCH2, CONH-CH-CHa); 3,58 (s, 3H, COOCH3); 4,74-4,83 (m,1H, CH20 COO); 5,74 (d,1H, NH); 6,97-7,99 (m, 17H, aryl);
Methylester N-f(2S)-3-fenvlkarbonvlthio-2-fenylmethvlpropionvn-4-(3thienvl)-L-fenvlalaninu (sloučenina 8)
Hmotnostní spektrum (C.I.): (M+H)+= 544 1H-NMR (200 MHz, CDCI3); δ (ppm); 2,63-3,35 (m, 7H, CH2-CHCH2, NH-CH-CHs); 3,58 (s, 3H, COOCH3); 4,73-4,85 (m, 1H, CHCOO); 5,70-5,76 (bd, 1H, NH); 7,00-7,62 (m, 15H, fenyl, fenylen, CHCH-S); 7,93-8,00 (m, 2H, CH-S-CH);
- 22 • · · · • · · · • · ··· • · ·
99 ·· · • · · • · · · • ····· · • φ · ·· ·
99
9 9 · • · ·· • ··· · 9 • · · • e ··
Methylester N-f(2S)-3-fenvlkarbonylthio-2-fenvlmethvlpropionvn-4-(3furvD-L-fenylalaninu (sloučenina 9)
Teplota tání 115 -117 °C.
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+= 528 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,62-3,36 (m, 7H, CH2-CHCH2, NH-CH-Chh); 3,58 (s, 3H, COOCH3); 4,71-4,82 (m, 1H. CHCOO); 5,72 (bd, 1H, NH); 6,50-8,00 (m, 17H, aryl);
io Methylester N-f3-fenvlkarbonvlthio-2-(3-pvridvlmethv0propionvll-4-(2thiazolyD-L-fenylalaninu - stereoizomer A (sloučenina 10)
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+= 546
TLC (ethylacetát:petrolether = 95:5), Rf = 0,33 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,60-3,38 (m, 7H, CH2-CH15 CH2, NH-CH-ChU); 3,60 (s, 3H, COOCH3); 4,79-4,90 (m, 1H, CHCOO); 6,21 (bd, 1H, NH); 7,29-7,81 (m, 2H, thiazolyl); 6,75-8,48 (m,
13H, fenyl, fenylen, pyridyl);
Methylester N-í3-fenvlkarbonvlthio-2-(3-pyridvlmethyl)propionvn-4-(22o thiazolvl)-L-fenylalaninu - stereoizomer B (sloučenina 11)
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)*= 546
TLC (ethylacetát:petrolether = 95:5), Rf = 0,24 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,61-3,25 (m, 7H, CH2-CH CH2i NH-CH-CH2); 3,60 (s, 3H, COOCH3); 4,80-4,91 (m, 1H, CH25 COO); 6,09 (bd,1H, NH); 7,27-7,80 (m, 2H, thiazolyl); 7,10-8,40 (m, 13H, fenyl, fenylen, pyridyl);
- 23 • ·
Methylester N-í2-izobutvl-3-fenvlkarbonvlthiopropionvn-4-(2-thiazolyl)L-fenylalaninu (sloučenina 12) 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 0,80-0,95 (m, 6H); 1,301,80 (m, 3H); 2,40-2,60 (m, 1H); 3,00-3,30 (m, 4H); 3,70 (d, 3H); 4,90s 5,05 (m, 1H); 6,00-6,15 (bt, 1H); 7,10-8,00 (m, 11H);
Methylester N-í3-acetylthio-2-(3-methoxyfenvQmethvlpropionvn-4-(2thiazolvl)-L-fenvlalaninu (sloučenina 13) 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 2,30 (d, 3H); 2,45-3,20 (m, io 7H); 3,63 (d, 3H); 3,75 (d, 3H); 4,70-4,93 (m, 1H); 5,70-5,90 (dd, 1H);
6,60-6,85 (m, 4H); 7,17-7,32 (m, 3H); 7,68-7,90 (m, 3H);
Methylester_N-f3-acetylthio-2-(3-fluorfenyl)methvlpropionyn-4-(2thiazolvl)-L-fenvlalaninu (sloučenina 14) iš 1H-NMR (200 MHz, CDCb): δ (ppm): 2,29 (s, 3H); 2,55-3,20 (m,
7H); 3,65 (2s, 3H); 4,70-4,90 (m, 1H); 5,80-6,00 (2d, 1H); 6,70-7,32 (m, 3H);
Methylester N-f3-fenvlkarbonvlthio-2-(2-thienvl)methylpropionvH-4-(22o thiazolvl)-L-fenvlalaninu (sloučenina 15) 1H-NMR (200 MHz, CDCb): δ (ppm): 2,68-3,37 (m, 7H); 3,603,61 (2s, 3H, COOCH3); 4,31-4,45 (m, 1H, CH-COOCH3); 6,01-6,10 (2d, 1H, NH); 6,80-8,00 (m, 14H);
- 24 • · ·
Příklad 7
Výroba N-lY2S)-3-merkapto-2-fenvlmethylpropionvn-4-(2-thiazolvl)-Lfenylalaninu (sloučenina 16)
Methylester N-[(2S)-3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl]5 4-(2-thiazolyl)-L-fenylalaninu (1,4 g; 2,57 mmol), připraveného podle popisu v příkladu 6, byl suspendován v ethanolu (30 ml), a odplyněn probubláváním dusíkem pro odstranění kyslíku.
K suspenzi byl při teplotě 5 °C přidán po kapkách vodný odplyněný roztok hydroxidu sodného 1N (7,7 ml) a na konci přidávání io dále odplyněný ethanol (20 ml).
Reakční směs byla udržována za míchání 4 hod při pokojové teplotě, potom byla ochlazena na 0 °C a okyselena 5 % kyselinou chlorovodíkovou (10 ml).
Reakční směs byla odpařena dosucha a zbytek byl spojen 15 s acetonitrilem a vodou a potom filtrován za získání N-[(2S)-3merkapto-2-fenylmethylpropionyl]-4-(2-thiazolyl)-L-fenylalaninu (1 g).
Teplota tání 180 - 182 °C.
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+= 427 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm):1,80-1,88 (m, 1H, SH); 20 2,22-2,84 (m, 5H, CH2CH-CH2); 2,86-3,18 (m, 2H, Chb-CH-COO);
4,46-4,57 (m, 1H, CH-COO); 7,10-7,25 (m, 5H, fenyl); 7,32-7,84 (m, 4H, fenylen); 7,74 (d, 1H, N-CH=CH-S); 7,89 (d, 1H, NCH=CH-S); 8,35 (d,1H, NH); 12,76 (s, 1H, COOH);
Analogickým způsobem byly připraveny následující sloučeniny;
- 25 • · •« · • · ··
N-í(2R)-3-merkapto-2-fenvlmethylpropionvn-4-(2-thiazolvD-Lfenylalanin (sloučenina 17) 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 2,15-2,23 (m, 1H, SH); 2,31-2,74 (m, 5H, CH2-CH-CH2); 2,78-3,07 (m, 2H, CI±>-CH-COO); s 4,42-4,53 (m, 1H, CH-COO); 7,02-7,80 (m, 9H, fenyl a fenylen); 7,75 (d, 1H, N-CH=CH-S); 7,90 (d, 1H, N-CH=CH-S); 8,36 (d, 1H, NH);
N-f(2S)-3-merkapto-2-fenvlmethvlpropionvn-4-(2-furyl)-L-fenylalanin (sloučenina 18) io Teplota tání 153 - 155 °C.
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+= 410 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,40 (t, 1H, SH); 2,45-3,25 (m, 7H, CH2-CH-CH2, CHa-CH COO); 4,80-4,90 (m, 1H, CH-COO); 5,86 (d, 1H, NH); 6,42-7,42 (m, 3H, furyl); 7,07-7,57 (m, 9H, fenyl, fenylen);
N-f(2S)-3-merkapto-2-fenvlmethylpropionvn-4-(5-pvrimidinyl)-Lfenylalanin (sloučenina 19)
Teplota tání 193 - 195 °C.
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+= 422 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δθ (ppm): 1,81 (bm, 1H, SH);
2,21-3,20 (m, 7H, CH2-CH-CH2, Chb-CeH^pyrimidinyl); 4,46-4,57 (m, 1H. CH-COO); 7,06-7,29 (m, 5H, fenyl); 7,36-7,72 (m, 4H, fenylen); 8,33 (d, 1H, NHCO); 9,08- (s, 2H, N-CH-C-CH-N); 9,15 (s, 1H, N-CH25 N);
- 26 • ·
N-f(2S)-3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl1-4-(2-pyrazinyl)-Lfenylalanin (sloučenina 20)
Teplota tání 176 - 178 °C.
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)*= 422 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,84 (bt, 1H, SH); 2,213,21 (m, 7H, CH2-CH-CH2) CH2-CH-COO); 4,48-4,59 (m, 1H, CHCOO); 7,10-7,26 (m, 5H, fenyl); 7,37-8,05 (m, 4H, fenylen); 8,37 (d, 1H, NHCO); 8,58 (d, 1H, CH-N-CH-CH-N); 8,68-8,70 (m, 1H, CH-NCH-CH-N); 9,21 (d, 1H, C-CH-N); 12,78 (b, 1H, COOH);
N-f(2S)-3-merkapto-2-fenvlmethylpropionyn-4-(3-pvridvl)-L-fenylalanin (sloučenina 21)
Teplota tání 146 - 148 °C.
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+= 421 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,69-1,89 (b, 1H, SH);
2,22-3,18 (m, 7H, CH2-CH-CH2, CHb-fenylen); 4,45-4,56 (m, 1H, CHCOO); 7,09-7,26 (m, 5H, fenyl); 7,42-7,48 (m, 1H, CH-N-CH-CH-CH); 7,62-7,33 (m, 4H, fenylen); 7,98-8,04 (m, 1H, CH-N-CH-CH-CH); 8,30 (d, 1H, CONH); 8,53 (dd, 1H, CH-N-CH-CH-CH); 8,83 (d, 1H, CH-N20 CH-CH-CH);
N-í(2S)-3-merkapto-2-fenylmethvlpropionvH-4-(2-pvridyl)-L-fenvlalanin (sloučenina 22)
Teplota tání 157 - 159 °C.
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+= 421 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,87 (b, 1H, SH); 2,233,19 (m, 7H, S-CH2-CH-CH2, CONH-CH-CH2); 4,44-4,45 (m, 1H, CH- 27 • · • · • 4
COO); 7,09-7,93 (m, 8H, N-CH-CH-CH-CH, fenyl); 7,30-7,99 (m, 4H, fenylen); 8,29 (d, 1H, CONH); 8,61-8,65 (m, 1H, C-N-CH);
• 44 ·· -4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 ·
4 4 4 4 4 4 4 4
4444444 4 444*
4 4 ·
4 ·
4 4 4
N-f(2S)-3-merkapto-2-fenylmethvlpropionvH-4-(2-thienvl)-L-fenylalanin (sloučenina 23)
Teplota tání 152 - 154 °C.
1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,34-1,43 (m, 1H, SH); 2,44-3,26 (m, 7H, S-CH2CH-CH2, CONH-CH-CH2); 4,80-4,89 (m, 1H, NH-CH-COO); 5,81 (d, 1H, NH); 7,02-7,52 (m, 12H, aryl);
N-|(2S)-3-merkapto-2-fenvlmethvlpropionyn-4-(3-thienyl)-L-fenylalanin (sloučenina 24)
Teplota tání 169 - 171 °C.
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+ = 426
TLC (ethylacetát:hexan:kyselina octová = 50:50:5), Rf = 0,44 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,84 (bs, 1H, SH); 2,233,13 (m, 7H, S-CH2-CH-CH2, NH-CH-CH2); 4,42-4,53 (m, 1H, NH-CHCOO); 7,12-7,80 (m, 12H, aryl); 8,30 (d, 1H, JHH=8,2 Hz, NH];
N-[(2S)-3-merkapto-2-fenvlmethylpropionvn-4-(3-furyl)-L-fenvlalanin (sloučenina 25)
Teplota tání 140 - 142 °C.
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+= 410
TLC (ethylacetát:hexan:kyselina octová = 50:50:5), Rf = 0,42 1H-NMR (200 MHz, CDCI3): δ (ppm): 1,79-1,90 (m, 1H, SH);
2,22-3,11 (m, 7H, S-CH2CH-CH2, NH-CH-Chb); 4,41-4,53 (m, 1H, NH- 28 • · • ·
CH-COO); 7,11-7,50 (m, 9H, fenyl, fenylen); 6,91-8,12 (m, 3H. furyl);
8,30 (d, 1H, JHH=8,2 Hz, NH);
N-r3-merkapto-2-(3-pvridvlmethvl)propionyl1-4-(2-thiazolyl)-L5 fenylalanin - stereoizomer A (sloučenina 26)
Teplota tání 193 - 196 °C.
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+= 428
TLC (methylenchlorid:methanol:kyselina octová = 85:15:1,5), Rf = 0,53 io 1H-NMR (200 MHz, DMSO-de): δ (ppm): 2,37-3,05 (m, 7H, SCH2-CH-CH2, NH-CH-CH2); 4,36-4,47 (m, 1H, NH-CH-COO); 7,76-7,90 (m, 2H, thiazolyl); 7,10-8,33 (m, 9H, NH, pyridyl, fenylen);
N-f3-merkapto-2-(3-pvridvlmethvl)propionvl1-4-(2-thiazolyl)-L15 fenylalanin - stereoizomer B (sloučenina 27)
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+= 428
TLC (methylenchlorid:methanol:kyselina octová = 85:15: 1,5), Rf = 0,47 1H-NMR (200 MHz, DMSO-de): δ (ppm): 2,28-3,20 (m, 7H, S20 CH2CH-CH2, NH-CH-CH2); 4,20-4,35 (m, 1H, NH-CH-COO); 7,70-7,90 (m, 2H, thiazolyl); 7,17-8,40 (m, 9H, NH, pyridyl, fenylen);
N-(2-izobutvl-3-merkaptopropionvl)-4-(2-thiazolvl)-L-fenylalanin (sloučenina 28) 1H-NMR (200 MHz, DMSO-de): δ (ppm): 0,50-1,44 (m, 9H); 1,682,25 (m, 4H); 2,79-3,22 (m, 2H); 4,50-4,63 (m, 1H); 7,34-7,85 (m, 4H); 7,73-7,90 (m, 2H); 8,27-8,39 (2d, 1H);
- 29 • · • · ·
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)*= 393
N-f3-merkapto-2-(3-methoxvfenvl)methylpropionyn-4-(2-thiazolyl)-L· fenylalanin (sloučenina 29)
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+=457 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6-D-O): δ (ppm): 2,20-3,21 (m, 7H);
3,70 (d, 3H); 4,48 (m, 1H); 6,55-6,86 (m, 3H); 7,00-7,40 (m, 3H);
7,65-7,95 (m, 4H); 8,27-8,45 (bt, CONH);
io N-f3-merkapto-2-(2-fluorfenvl)methylpropionvl1-4-(2-thiazolvl)-Lfenylalanin (sloučenina 30)
Hmotnostní spektrum (C.l.) (M+H)+ = 445 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 2,20-3,18 (m, 8H); 4,354,55 (m, 1H); 6,85-7,35 (m, 6H); 7,65-7,90 (m, 4H); 8,35 (d, 1H);
N-f3-merkapto-2-(2-thienvl)methvlpropionvn-4-(2-thiazolyl)-Lfenylalanin (sloučenina 31) 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,82-3,19 (m, 8H, CH2CH2-CH2; NH-CH-CH2); 4,44-4,59 (m, 1H, CH-COO); 6,62-7,91 (m, 9H, aryl); 8,42 (d, 1H, NH);
N-f3-merkapto-2-(2-furvl)methvlpropionvH-4-(2-thiazolyl)-L-fenylalanin (sloučenina 32) 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 1,79-3,18 (m, 8H, S25 CH2CH2-CH2; NH-CH-Chb); 4,43-4,58 (m, 4H, CH-NH); 5,79-7,47 (m, 3H, furyl); 7,30-7,85 (m, 4H, fenylen); 7,73-7,91 (m, 2H, thiazolyl);
8,40-8,46 (2d, 1H, NH);
- 30 • · • · · · 0 · · • · · 0 · · · · • ······· · ··· • · 0 · · 0 • 0 « 0 · · ·
N-f3-merkapto-2-(3-methyl-5-izoxazolv0methylpropionvn-4-(2thiazolyl)-L-fenylalanin (sloučenina 33) 1H-NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 2,00-2,12 (2S, 3H, CH35 izoxazolyl); 2,28-3,19 (m, 8H, S-CH2-CH2-CH2; Cřh-fenylen); 4,43-4,59 (m, 1H, CH-NH); 5,75-6,03 (2s, 1H, izoxazolyl); 7,29-7,86 (m, 4H, fenylen); 7,74-7,90 (m, 2H, thiazolyl); 8,46-8,53 (2d, 1H, NH);
Příklad 8 io Vyhodnocení farmakologické účinnosti in vitro
a) Inhibiční účinek na NEP
Inhibiční účinek na NEP byl vyhodnocován v membránách ledvinové kůry krys připravených postupem popisovaným v T. Maeda a další, Biochim. Biophys. Acta 1983, 731(1), 115 - 120.
Ze samců krys Sprague-Dawley o váze přibližně 300 g byly odstraněny ledviny a udržovány při teplotě 4 °C.
Kůra ledvin byla opatrně odstraněna, jemně rozřezána a suspendována v homogenizačním pufru (10 mM fosforečnan sodný pH 7,4 s obsahem 1 mM MgCI2, 30 mM NaCl, 0,02 % NaN3) 1:15
2o hmotnost/objem.
Tkáň byla potom za studená homogenizována 30 s s použitím homogenizátoru Ultra-Turrax. Přibližně 10 ml homogenátu bylo navrstveno na 10 ml sacharózy (41 % hmotnost/objem) a centrifugováno při 31 200 ot/min 30 min při 4 ’C v úhlovém rotoru.
Membrány byly odebrány z rozhraní pufr/sacharóza, dvakrát promyty roztokem 50 mM TRIS/HCI (pH 7,4) a resuspendovány ve stejném pufru pro skladování v malých alikvotech při - 80 °C až do použití.
- 31 ·· ·· • ·
Inhibiční účinek na NEP byl vyhodnocován s použitím metody popisované v C. Llorens a další, v Eur. J. Pharmacol, 69, (1981), 113116, jak bude uvedeno dále.
Alikvoty suspenze membrán připravených podle výše popsaného postupu (koncentrace proteinů 5 pg/ml) byly předinkubovány v přítomnosti inhibitoru aminopeptidáz (Bestatin 1 mM) po dobu 10 min při 30 °C.
Byly přidány [3H][Leus]-enkefalin (15 nM) a pufr TRIS/HCI pH 7,4 (50 mM) pro získání konečného objemu 100 pl.
io Inkubace (20 min při 30 °C) byla zastavena přídavkem 0,1 M
HCI (100 pl).
Vytvoření metabolitu [3H]Tyr-Gly-Gly bylo kvantifikováno chromatograficky na polystyrénových kolonách (Porapak Q).
Procento inhibice tvorby metabolitu v membránových is preparátech ošetřených sloučeninami vzorce I a srovnávacími sloučeninami vzhledem k neošetřeným membránovým preparátům bylo vyjádřeno jako hodnota IC50 (nM). b) Inhibiční účinek na ACE
Inhibiční účinek na ACE byl vyhodnocován způsobem 20 popisovaným v literatuře v B. Holmquist a další, v Analytical
Biochemistry 95, 540 - 548 (1979).
pM ACE (250 mU/ml čištěného plící králíka EC 3.4.15.1 SIGMA) bylo předinkubována s 50 pl sloučeniny vzorce I nebo referenční sloučeniny nebo příbuzného vehikuia v termostatovaných kyvetách při 37 °C.
Reakce byla započata přídavkem furylakryloylfenylalanylglycylglycinu 0,8 mM (FAPGG-SIGMA).
Současně byla trvale v průběhu 5 min zaznamenávána absorbance při 340 nM přístrojem Beckman DU-50 spectrophotometer
- 32 • · • · ft · opatřeným programem pro výpočet delta A/min a regresních koeficientů křivek enzymové kinetiky.
Procento enzymové inhibice v preparátech ošetřených sloučeninami vzorce I nebo srovnávacími sloučeninami vzhledem k neošetřeným preparátům bylo vyjádřeno jako hodnota IC5o (nM).
Hodnoty IC50 (nM) vztažené na inhibiční účinek na ACE a inhibiční účinek na NEP sloučenin 16, 18 až 25, 27 až 33 a srovnávacích sloučenin thiorfanu a kaptoprilu jsou uvedeny v následující tabulce 1.
• · · ·
- 33 • · · · • · « · 1
Tabulka 1
Inhibiční účinek na ACE a NEP vyjádřeny jako hodnota ICso (nM) sloučenin 16, 18 až 25, 27 až 33 a thiorfanu a kaptoprilu
Sloučenina Inhibiční účinek na ACE IC50 (nM) Inhibiční účinek na NEP IC50 (nM)
16 3,2 1,8
18 1,8 1,8
19 1,9 1,8
20 1,5 2,5
21 1,7 2,6
22 1,8 2,0
23 1,6 0,6
24 2,5 1,3
25 2,4 1
27 9,1 17,3
28 5,8 1,8
29 4,6 9,0
30 10,7 11,2
31 8,6 1,2
32 8,6 4,0
33 7,9 4,5
thiorfan 99 18
kaptopril 4,6 neúčinný
Data uvedená v tabulce 1 ukazují, že sloučeniny vzorce I podle předkládaného vynálezu mají výraznou smíšenou inhibiční aktivitu vůči ACE/NEP.
- 34 • · β · • · • · · · 1 • · « • · · ·
Uvedená účinnost je srovnatelná s účinností Kaptoprilu, jehož se týká vzhledem k inhibiční aktivitě vůči ACE a větší než účinnost Thiorfanu, jehož se týká vzhledem k inhibiční aktivitě vůči NEP.
Příklad 9
Vyhodnocen? farmakologické účinnosti „ex vivo“
a) Inhibiční účinek na NEP
Inhibiční účinek na NEP ex vivo byl vyhodnocován postupem uvedeným v literatuře v M. Orlowsky a další, v Biochemistry 1981, 20, io 4942 - 4950.
Inhibiční účinek sloučenin vzorce I byl vyhodnocován v ledvinách spontánně hypertenzních krys (SHR) 5 minut po i. v. injekci (0,6 a 21 pmol/kg) a 30 min, 60 min a 4 hod po orálním podání (30 pmol/kg) testovaných sloučenin.
is Po odstranění ledvin z krys SHR byla ledvinová tkáň homogenizována a 15 min inkubována při 37 °C v přítomnosti glutarylAla-Ala-Phe-2-naftylamidu (GAAP), jako substrátu a aminopeptidázy M při pH 7,6.
Reakce byla přerušena přídavkem 10 % vodného roztoku kyseliny trichloroctové.
Uvolněný 2-naftylamin byl stanoven přídavkem barviva fast gamet dye (2 ml).
Rychlosti enzymatické reakce byly stanoveny měřením přírůstku optické hustoty při vlnové délce 524 nm (OD524) vzhledem ke standardu získanému s komplexem 2-naftylamin-barvivo fast garnet.
Inhibiční účinnost testovacích sloučenin byla vyjádřena jako procento inhibice NEP v ledvinách SHR.
- 35 • · · ·
b) Inhibiční aktivita vůči ACE
Inhibiční aktivita proti ACE ex vivo byla vyhodnocena s použitím radiometrického stanovení, popisovaného v literatuře u J. W. Ryan a další, Biochem. J. (1977), 167, 501 - 504.
Inhibiční účinnost sloučenin vzorce I byla vyhodnocována v plicích krys se spontánní hypertenzí (SHR) 5 min po injekci i. v. (0,6 a 21 pmol/kg) a 30 min, 60 min a 4 hod po orálním podání (30 pmol/kg) testovaných sloučenin.
Po vyjmutí plic z krys SHR byla plicní tkáň homogenizována io a inkubována 2 hodiny při 37 °C v přítomnosti [3H]Hyp-Gly-Gly, jako substrátu.
Reakce byla přerušena přídavkem kyseliny chlorovodíkové.
Uvolněná radioaktivně značená kyselina hippurová byla extrahována ethylacetátem a radioaktivita byla určena počítáním kapalnou scintilační spektrometrií obvyklým způsobem.
Inhibiční účinek vůči ACE u testovaných sloučenin byl vyjádřen jako procento inhibice ACE v plicích krys SHR.
Jako příklad jsou v následující tabulce 2 uvedena procenta bazální enzymatické aktivity získaná v testech ex vivo po
2o intravenózním nebo orálním podání sloučeniny 16 a srovnávacích sloučenin R-1, R-2, R-3 a R-4.
- 36 99 9 9
9 · «
Tabulka 2
Procenta inhibice ACE a NEP ex vivo sloučeniny 16 a srovnávacích sloučenin R-1, R-2, R-3 a R-4
Sloučenina Podávání Inhibice (plíce) ACE Inhibice (ledviny) NEP
5 min 60 min 5 min 60 min
16 i.v.(0,6 pmol/kg) 15 % 34 %
16 i.v. (21 pmol/kg) 72 % 49 %
16 p.o. (30 pmol/kg) 36 % 39 %
30 min 4 hod 30 min 4 hod
16 p.o. (30 pmol/kg) 60 % 45 % 55 % 40 %
R-1 p.o. (30 pmol/kg) 25 % 20 % 5 % neaktiv.
R-2 p.o. (30 pmol/kg) 30 % 25 % 30 % neaktiv.
R-3 p.o. (30 pmol/kg) 25 % 20 % 10 % 5 %
R-4 p.o. (30 pmol/kg) 25 % 10 % neaktiv. neaktiv.
Data uvedená v tabulce 2 potvrzují, že sloučeniny vzorce I podle předkládaného vynálezu mají po intravenózním, stejně jako po orálním podání výraznou inhibiční aktivitu vůči ACE/NEP.
Inhibiční účinnost ACE/NEP ex vivo sloučenin vzorce I je navíc výrazně vyšší, než účinnost srovnávacích sloučenin.
Zastupuje:

Claims (11)

1. Thiolové deriváty vzorce
Ri
I.
r-ch2-c H-CONH-C H-COOR2 (I)
I ch2-r3 kde
R je merkaptoskupina nebo skupina R4COS v organismu na merkaptoskupinu přeměnitelná;
Ri je přímá nebo větvená C2-C4 alkylová skupina nebo arylová nebo arylalkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, kde arylem je fenyl nebo 5 nebo 6-členný aromatický heterocykl s jedním nebo dvěma heteroatomy zvolenými ze skupiny dusík, kyslík a síra, popřípadě substituovaná jedním nebo více substituenty, které jsou stejné nebo různé, zvolenými ze skupiny atomy halogenu, hydroxy, alkoxy, alkyl, alkylthio, alkylsulfonyl nebo alkoxykarbonyl, které mají od 1 do 6 atomů uhlíku v alkylové části, Ci-C3 alkylová skupina obsahující jeden nebo více atomů fluoru, karboxylových skupin, nitro skupin, amino- nebo aminokarbonylových skupin, skupin acylamino, aminosulfonyl, mono- nebo di-alkylamino nebo mono- nebo dialkylaminokarbonyl, které mají v alkylové části od 1 do 6 atomů uhlíku;
R2 je atom vodíku, přímá nebo větvená Ci-C4 alkylová nebo benzylová skupina;
R3 je fenylová skupina substituovaná 5 nebo 6-členným aromatickým heterocyklem s jedním nebo dvěma • · • · heteroatomy zvolenými ze skupiny dusík, kyslík a síra, kde fenyl a heterocyklické skupiny jsou popřípadě substituovány jedním nebo více substituenty, stejnými nebo rozdílnými, jak je uvedeno pro R/
5 R4 je přímá nebo větvená C1-C4 alkylová skupina nebo fenylová skupina;
atomy uhlíku označené hvězdičkou jsou stereogenní centra; a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
10 2. Sloučenina vzorce I podle nároku 1, kde R3 je fenylová skupina substituovaná v poloze 4 heterocyklickou skupinou.
3. Sloučenina vzorce I podle nároku 2, kde R! znamená arylalkylovou skupinu popřípadě substituovanou jedním nebo
15 více substituenty, stejnými nebo různými, zvolenými ze skupiny atomy halogenu a skupiny hydroxy, alkyl nebo alkoxy.
4. Sloučenina vzorce I podle nároku 3, kde R! znamená fenylalkylovou skupinu popřípadě substituovanou jedním nebo
2o více substituenty, stejnými nebo různými, zvolenými ze skupiny atomy halogenu a skupiny hydroxy, alkyl nebo alkoxy.
5. Sloučenina vzorce 1 podle nároku 1 ve formě soli s alkalickým kovem zvoleným ze skupiny sodík, lithium a draslík.
6. Způsob výroby sloučeniny vzorce I podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje reakci mezi sloučeninou vzorce • 4 4 • 4 • · ··· · · 4 4 4444
4444 ·4·4 44 44 • 4444444 4 4444 4444 4
QQ 444 44 4 444 “ 057 * 44 4 44 44 44 44
Ri
I.
R-CH2-C H-C00H (II) kde
R a Ri mají výše uvedené významy;
a fenylalaninovým derivátem vzorce
H2N-C*H-COOR2
I
CH2-R3 (III) kde
R2 a R3 mají výše uvedené významy.
7. Farmaceutický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce I podle nároku 1 ve směsi s nosičem pro použití ve farmacii.
8. Farmaceutický prostředek podle nároku 6 pro léčení kardiovaskulárních onemocnění.
9. Způsob léčení kardiovaskulárních onemocnění zahrnující podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1.
10. Sloučenina zvolená ze skupiny methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4(2-thiazolyl)-L-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4(2-pyridyl)-L-fenylalaninu;
benzylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4 (3-pyridyl)-L-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4 5 (2-furyl)-L-fenylalaninu;
ethylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4-(5 pyrimidinyl)-L-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4 (2-pyrazinyl)-L-fenylalaninu;
10 methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4 (2-thienyl)-L-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4 (3-thienyl)-L-fenylalaninu;
methylester N-(3-fenylkarbonylthio-2-fenylmethylpropionyl)-4 is (3-furyl)-L-fenylalaninu;
methylester N-[3-fenylkarbonylthio-2-(3-pyridylmethyl) propionyl]-4-(2-thiazolyl)-L-fenyialaninu;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2-thiazolyl)-Lfenylalanin;
2o N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2-pyridyl)-Lfenylalanin;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(3-pyridyl)-Lfenylalanin;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2-furyl)-L25 fenylalanin;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(5-pyrimidinyl)-Lfenylalanin;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2-pyrazinyl)-Lfenylalanin;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(2-thienyl)-Lfenylalanin;
5 N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyl)-4-(3-thienyl)-Lfenylalanin;
N-(3-merkapto-2-fenylmethylpropionyi)-4-(3-furyl)-Lfenylalanin;
N-[3-merkapto-2-(3-pyridylmethyl)propionyl]-4-(2-thiazolyl)-L10 fenylalanin;
methylester N-[3-acetylthio-2-(3-methoxyfenyl)methyl propionyl]-4-(2-thiazolyl)-L-fenylalaninu;
methylester N-[3-acetylthio-2-(2-fluorfenyl)methyl-propionyl]-4 (2-thiazolyl)-L-fenylalaninu;
15 methylester N-[3-fenylkarbonylthio-2-(2-thienyl)methyl propionyl]-4-(2-thiazolyl)-L-fenylalaninu;
methylester N-[2-(2-furyl)methyl-3-fenylkarbonylthio-propionyl] 4-(2-thiazolyl)-L-fenylalaninu;
methylester N-[2-(3-methyl-5-izoxazolyl)methyl-3
20 fenylkarbonylthio-propionyl]-4-(2-thiazolyl)-L-fenylalaninu;
N-[3-merkapto-2-(3-methoxyfenyl)methylpropionyl)-4-(2thiazolyl)-L-fenylalanin;
N-(3-merkapto-2-(2-thienyl)methylpropionyl)-4-(2-thiazolyl)-Lfenylalanin;
25 N-(3-merkapto-2-(3-methyl-5-izoxazolyl)methylpropionyl)-4-(2thiazolyl)-L-fenylalanin;
N-[2-(2-fluorfenyl)methyl-3-merkapto-propionyl]-4-(2-thiazolyl)L-fenylalanin;
• · • ·
-42 N-[2-(2-furyl)methyl-3-merkapto-propionyl)-4-(2-thiazolyi)-Lfenylalanin a její (2S) nebo (2R) stereoizomery.
Zastupuje:
CZ982046A 1995-12-28 1996-12-17 Thiolové deriváty a farmaceutický prostředek CZ204698A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT95MI002773A IT1277737B1 (it) 1995-12-28 1995-12-28 Derivati tiolici ad attivita' inibitrice delle metallopeptidasi

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ204698A3 true CZ204698A3 (cs) 1998-11-11

Family

ID=11372827

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ982046A CZ204698A3 (cs) 1995-12-28 1996-12-17 Thiolové deriváty a farmaceutický prostředek

Country Status (31)

Country Link
EP (1) EP0877740B1 (cs)
JP (1) JP2000502687A (cs)
KR (1) KR19990076809A (cs)
CN (1) CN1071325C (cs)
AP (1) AP1186A (cs)
AR (1) AR004413A1 (cs)
AT (1) ATE292123T1 (cs)
AU (1) AU713156B2 (cs)
BG (1) BG63942B1 (cs)
BR (1) BR9612373A (cs)
CA (1) CA2241414A1 (cs)
CZ (1) CZ204698A3 (cs)
DE (1) DE69634543D1 (cs)
EA (1) EA000991B1 (cs)
EE (1) EE03766B1 (cs)
GE (1) GEP19991871B (cs)
HK (1) HK1018008A1 (cs)
IL (1) IL124915A (cs)
IS (1) IS1885B (cs)
IT (1) IT1277737B1 (cs)
NO (1) NO310914B1 (cs)
NZ (1) NZ325785A (cs)
OA (1) OA10704A (cs)
PL (1) PL188151B1 (cs)
RO (1) RO119882B1 (cs)
SK (1) SK282977B6 (cs)
TR (1) TR199801229T2 (cs)
UA (1) UA62923C2 (cs)
UY (1) UY24425A1 (cs)
WO (1) WO1997024342A1 (cs)
ZA (1) ZA9610891B (cs)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1289522B1 (it) 1996-12-24 1998-10-15 Zambon Spa Processo per la preparazione di eteroaril-fenilalanine
MY153569A (en) 1998-01-20 2015-02-27 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Inhibitors of ?4 mediated cell adhesion
US8168616B1 (en) 2000-11-17 2012-05-01 Novartis Ag Combination comprising a renin inhibitor and an angiotensin receptor inhibitor for hypertension
GB0203665D0 (en) * 2002-02-15 2002-04-03 Glaxo Group Ltd Process
MY140707A (en) 2002-02-28 2010-01-15 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Process for preparing a phenylalanine derivative and intermediates thereof
DE60336986D1 (de) 2002-03-05 2011-06-16 Sumitomo Chemical Co Verfahren zur herstellung von biarylverbindungen
WO2003104200A1 (en) * 2002-06-07 2003-12-18 Glaxo Group Limited N-mercaptoacyl phenyalanine derivatives, process for their preparation, and pharmaceutical compositions containing them
GB0213122D0 (en) * 2002-06-07 2002-07-17 Glaxo Group Ltd Compounds
US7045653B2 (en) 2002-12-23 2006-05-16 Pfizer, Inc. Pharmaceuticals
GB0327839D0 (en) 2003-12-01 2003-12-31 Novartis Ag Organic compounds
BRPI0508880A (pt) 2004-03-17 2007-09-04 Novartis Ag uso de compostos orgánicos
CA2757650C (en) 2009-04-03 2016-06-07 Statoil Asa Equipment and method for reinforcing a borehole of a well while drilling
CN102811989A (zh) * 2010-02-03 2012-12-05 Meh联合公司 作为具有选择性和生物活性的等排物的多取代氟甲烷
WO2011116115A1 (en) 2010-03-16 2011-09-22 Novartis Ag Aliskiren composition comprising a medium chain fatty acid, their process of manufacturing

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4401677A (en) * 1981-10-09 1983-08-30 E. R. Squibb & Sons, Inc. Enkephalinase inhibitors
FR2652087B1 (fr) * 1989-09-15 1993-10-15 Bioprojet Ste Civile Derives d'amino-acides, leur procede de preparation et leurs applications therapeutiques.
FR2682952B1 (fr) * 1991-10-25 1993-12-03 Institut Nal Sante Recherc Medic Nouveaux n-(mercaptoacyl) amino-acides, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
IT1273455B (it) * 1995-01-27 1997-07-08 Zambon Spa Derivati tiolici ad attivita' inibitrice delle metallopeptidasi

Also Published As

Publication number Publication date
OA10704A (en) 2002-11-28
TR199801229T2 (xx) 1998-09-21
ITMI952773A1 (it) 1997-06-28
GEP19991871B (en) 1999-12-06
EE03766B1 (et) 2002-06-17
EA199800544A1 (ru) 1999-02-25
NZ325785A (en) 1999-09-29
EP0877740A1 (en) 1998-11-18
EE9800192A (et) 1998-12-15
CN1206411A (zh) 1999-01-27
AR004413A1 (es) 1998-11-04
IL124915A0 (en) 1999-01-26
NO982977D0 (no) 1998-06-26
IT1277737B1 (it) 1997-11-12
SK282977B6 (sk) 2003-01-09
BG63942B1 (bg) 2003-07-31
JP2000502687A (ja) 2000-03-07
ZA9610891B (en) 1997-06-27
ITMI952773A0 (cs) 1995-12-28
NO982977L (no) 1998-08-27
PL188151B1 (pl) 2004-12-31
SK88998A3 (en) 1998-12-02
CN1071325C (zh) 2001-09-19
IS4780A (is) 1998-06-22
EA000991B1 (ru) 2000-08-28
BG102553A (en) 1999-04-30
BR9612373A (pt) 1999-07-13
RO119882B1 (ro) 2005-05-30
AU713156B2 (en) 1999-11-25
KR19990076809A (ko) 1999-10-15
AP1186A (en) 2003-07-07
NO310914B1 (no) 2001-09-17
AU1301897A (en) 1997-07-28
UA62923C2 (en) 2004-01-15
CA2241414A1 (en) 1997-07-10
ATE292123T1 (de) 2005-04-15
UY24425A1 (es) 1997-01-09
HK1018008A1 (en) 1999-12-10
PL327580A1 (en) 1998-12-21
EP0877740B1 (en) 2005-03-30
DE69634543D1 (de) 2005-05-04
WO1997024342A1 (en) 1997-07-10
AP9801264A0 (en) 1998-06-30
IL124915A (en) 2001-10-31
IS1885B (is) 2003-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ204698A3 (cs) Thiolové deriváty a farmaceutický prostředek
WO2008053913A1 (fr) Dérivé de sulfonylurée capable d&#39;inhiber sélectivement mmp-13
AU750048B2 (en) Certain heteroaryl substituted thiol inhibitors of endothelin-converting enzyme
US5760241A (en) Thiol derivatives with metallopeptidase inhibitory activity
US6548480B1 (en) Phosphonic acid derivatives with metallopeptidase inhibitory activity
EP0883612B1 (en) Thiol derivatives with metallopeptidase (ace/nep) inhibitory activity
AU713081B2 (en) Phosphinic acid derivatives with metallopeptidase inhibitory activity
EP0755405B1 (en) Phosphonyldipeptides useful in the treatment of cardiovascular diseases
PT805817E (pt) Derivados tiol com actividade inibidora da metalopeptidase

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic