PT98023B

PT98023B - Processo para a preparacao de novos polipeptidos

Info

Publication number: PT98023B
Application number: PT98023A
Authority: PT
Inventors: Toshiro Iwamoto; Akihiko Fujie; Kumiko Nitta; Yasuhisa Tsurumi; Nobuharu Shigematsu; Chiyoshi Kasahara; Motohiro Hino; Masakuni Okuhara; Kazuo Sakane; Kohji Kawabata
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co
Priority date: 1990-06-18
Filing date: 1991-06-18
Publication date: 1998-11-30
Also published as: ES2093658T3; CA2044746C; DE69122432T2; NO912347D0; IE990233A1; DK0462531T3; EP0462531B1; KR920000788A; NO912347L; IE912046A1; HU912014D0; JPH04352799A; CN1040541C; DE69122432D1; AU7843591A; ATE143671T1; GR3021780T3; HUT58108A; FI912873A; PT98023A

Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇAO DE

NOVOS POLIPEPTIDOS

A presente invenção refere-se a novos compostos polipeptídicos e aos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. Mais particularmente refere-se a novos compostos polipeptídicos e aos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico que têm actividade antimicrobiana (especialmente actividade antifúngica), a um processo para a sua preparação, a composições farmacêuticas que os contêm e a um método para tratamento e prevenção de doenças infecciosas nos seres humanos ou nos animais.

Deste modo, constitui um objectivo da presente invenção proporcionar os compostos polipeptídicos e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico que são muito activos contra numerosos microrganismos patogénicos nos seres humanos e nos animais.

Outro objectivo da presente invenção é proporcionar um processo para a preparação dos novos compostos polipeptídicos e dos seus sais.

E ainda um objectivo da presente invenção proporcionar

-2composições farmacêuticas contendo, como componente activo, um composto polipeptídico dos compostos referidos ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

E ainda objectivo da presente invenção proporcionar um método de tratamento ou prevenção de doenças infecciosas causadas por microrganismos patogénicos, o qual consiste em administrar um composto polipeptídico, como citado, a um ser humano ou animal.

Os compostos polipeptídicos da presente invenção são novos e podem ser representados pela fórmula geral £* 1 J:

na qual representa um átomo de hidrogénio ou um grupo acilo,

representa	um	grupo	hidroxi ou aciloxi,
representa	um	átomo	de hidrogénio ou um grupo hidroxis-
sulfoniloxi	e
representa	um	átomo	de hidrogénio ou um grupo carbamoílo,

com a condição de:

i) Rg representar um grupo aciloxi, quando Rg representar um átomo de hidrogénio e ii) R^ não representar um grupo palmitoílo quando Rg representar um grupo hidroxi, Rg representar um grupo hidroxissulfoniloxi e R^ representar um grupo carbamoílo.

Podem preparar-se geral f 1J da presente esquemas seguintes.

os compostos polipeptídicos de fórmula invenção pelos processos ilustrados nos

Processo 1

(II) (Ia) ou um seu sal ou um seu sal

Processo 2

(Ia) (Ib) ou um seu sal ou um seu sal

Processo 3

HO OH

(Ic) (Id) ou um seu sal ou um seu sal

Processo 4

(Ie) ou um seu sal (If) ou um seu sal

Processo 5

ou um seu sal

dg) ou um seu sal

-6-.

em que

Rg e R₄ têm os significados definidos antes, ^la representa um grupo acilo com exclusão de palmitoílo,

R_lb representa um grupo aralcanoílo inferior, contendo um grupo alcoxi superior e amino protegido,

R^ representa um grupo aralcanoílo inferior, contendo um grupo alcoxi superior e amino,

R^ representa um grupo halogeno-alcanoílo inferior,

R^ representa um grupo piridiltio-alcanoílo inferior contendo eventualmente um grupo alquilo superior, lf

2a representa um grupo acilo, representa um grupo aciloxi, e

Rg representa um grupo acilo.

Os compostos iniciais de fórmula geral [fé II J ou os seus sais são novos e podem preparar-se pelos processos de fermentação seguintes:

PROCESSO A

Fermentação de uma estirpe pertencente a Coloeforna capaz de produzir um composto de fórmula geral [fé II J ou um seu sal.

Alguns dos compostos de partida de fórmula geral [fé IV fé} são novos e podem preparar~se de acordo com os Processos 1 a 4 descritos anteriormente.

Os sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico apropriados dos compostos referidos de fórmula geral £ ~í J são monoou di-sais não tóxicos, convencionais, e incluem os sais de um metal tal como de um metal alcalino, £ por exemplo sal de sódio, sal de potássio, etc.J e os sais dos metais alcalino-terrosos, /7 por exemplo sal de cálcio, de magnésio, etc.J7 θ um sal de amónio, um sal com uma base orgânica, /7 P^or exemplo um sal de trimetilamina, trietilamina, piridina, picolina, ou um sal de diciclo-hexilamina, Ν,N-dibenziletilenodiamina, etc.J um sal de adição de um ácido orgânico, C por exemplo um formato, acetato, trifluoroacetato, maleato, tartarato, metanossulfonato, benzenossulfonato, toluenossulfonato, etc. J, um sal de adição de um ácido inorgânico, £ por exemplo cloridrato, bromidrato, iodidrato, sulfato, fosfato, etc.J, um sal com um aminoácido, /7 por exemplo sal de arginina, sal do ácido aspártico, do ácido glutâmico, etc. .7 e semelhantes.

Na descrição anterior e na descrição subsequente desta memória descritiva, os termos gerais utilizados possuem as significações seguintes:

termo inferior refere-se a um grupo possuindo entre í a 6 átomos de carbono, salvo quando especificado de outro modo.

A designação superior refere-se a um grupo possuindo entre 7 a 20 átomos de carbono, salvo quando especificado de outro modo.

um grupo acilo alifá, acilo arilalifático de ácido carboxílico ácido sulfónico, e grupo acilo apropriado pode ser tico, acilo aromático, acilo heterocíclico ou acilo alifático heterocíclico derivado de ácido carbónico, de ácido carbâmico, de semelhantes.

Os exemplos apropriados de grupo acilo, como descrito anteriormente, podem ser:

alcanoílo inferior P^or exemplo formilo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, valerilo, hexanoílo, pivaloílo, etc.J7 que podem conter um ou vários (de preferência 1 a 3) substituin tes apropriados tais como átomos de halogeneo (por exemplo flúor cloro, bromo ou iodo); arilo (por exemplo fenilo, naftilo, antrilo, etc.) que podem conter um ou vários (de preferência 1 a 3) substituintes apropriados tais como hidroxi, alcoxi superior conforme adiante descrito, arilo, como citado anteriormente, ou semelhantes; alcoxi inferior conforme adiante descrito; amino; amino protegido, de preferência acilamino tal como (alcoxi infe rior), carbonilamino (por exemplo metoxicarbonilamino, etoxicar bonilamino, propoxicarbonilamino, butoxicarbonilamino, t~butoxi carbonilamino, pentiloxicarbonilamino, hexiloxicarbonilamino, etc.); e semelhantes; dialquil(inferior)-amino (por exemplo dimetilamino, N-metiletilamino, dietilamino, N-propilbutilamino, dipentilamino, di-hexilamino, etc.); alcoxi(inferior)-imino (por exemplo metoximino, etoximino, propoximino, butoximino, t-butoximino, pentiloximino, hexiloximino, etc.); aralcoxi(infe rior)-imino, tal como fenilalcoxi(inferior)-imino (por exemplo benziloximino, fenetiloximino, benzidriloximino, etc.) que podem comportar um ou vários (de preferência 1 a 3) substituintes apropriados tal como alcoxi superior, como explicado posteriormente, ou semelhantes; heterocíclico-tio, de preferência piridil tio, que pode conter um ou vários (de preferência 1 a 3) substituintes apropriados, tais como alquilo superior (por exemplo heptilo, octilo, 2-etil-hexilo, nonilo, decilo, 3,7-dimetilocti~ lo, undecilo, dodecilo, tridecilo, tetradecilo, pentadecilo, 3-metil-10~etildodecilo, hexadecilo, heptadecilo, octadecilo, nonadecilo, icosilo, etc.) e semelhantes; grupos heterocíclicos (por exemplo tienilo, imidazolilo, pirazolilo, furilo, tetrazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, etc.) que podem conter um ou vários (de preferência 1 a 3) substituintes apropriados tais como amino, o grupo amino protegido citado anteriormente, alquilo superior, citado antes, ou semelhantes; e outros;

alcanoílo superior /7 por exemplo heptanoílo, octanoílo, nonanoílo, decanoílo, undecanoílo, lauroílo, tridecanoílo, miristoílo, pentadecanoílo, palmitoílo, 10,12-dimetiltetradecanoílo, heptadecanoílo, estearoílo, nonadecanoílo, icosanoílo, etc.J; alquenoílo inferior £por exemplo acriloílo, metacriloílo, croto noílo, 3-pentenoílo, 5~hexenoílo, etc.J que podem comportar um ou vários (de preferência 1 a 3) substituintes apropriados tais como o grupo arilo, citado antes, que pode conter um ou vários (de preferência 1 a 3) substituintes apropriados tais como alcoxi superior como descrito posteriormente, ou semelhantes; e outros ;

alquenoílo superior [fé por exemplo 4~heptenoílo, 3~octenoílo, 3,6— -decadienoílo, 3,7,ll-trimetil-2,6,10~dodecatrienoílo, 4,10-heptadecadienoílo, etc.J;

(alcoxi inferior) carbonilo [fé por exemplo metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo, butoxicarbonilo, t~butoxicarboni~ lo, pentiloxicarbonilo, hexiloxicarbonilo, etc. 27;

(alcoxi superior) carbonilo [fé por exemplo heptiloxicarbonilo, octiloxicarbonilo, 2-etil-hexiloxicarbonilo, noniloxicarbonilo, deciloxicarbonilo, 3,7-dimetiloctiloxicarbonilo, undeciloxicarbonilo, dodeciloxicarbonilo, trideciloxicarbonilo, tetradeciloxicarbonilo, pentadeciloxicarbonilo, 3-metil-10~etildodeciloxicar~ bonilo, hexadeciloxicarbonilo, heptadeciloxicarbonilo, octadeciloxicarbonilo, nonadeciloxicarbonilo, icosiloxicarbonilo, etc. 27; ariloxicarbonilo [fé por exemplo fenoxicarbonilo, naftiloxicarbonilo , etc. J ;

arilglioxiloílo [fé por exemplo fenilglioxiloílo, naftilglioxiloílo , etc . 27 ;

(aralcoxi inferior)-carbonilo pode conter um ou vários substituintes adequados tais como fenil-(alcoxi inferior)-carbonil que pode conter um grupo nitro ou alcoxi inferior [fé por exemplo benziloxicarbonilo, fenetiloxicarbonilo, p-nitrobenziloxicarbonilo, p-metoxibenziloxicarbonilo, etc. 27;

(alquil inferior)sulfonilo [fé por exemplo, metilsulfonilo, etilsulfonilo, propilsulfonilo, isopropilsulfonilo, pentilsulfonilo, butilsulfonilo, etc. J;

arilsulfonilo £ por exemplo fenilsulfonilo, naftilsulfonilo, etc.J7 que podem conter um ou vários (de preferência 1 a 3) substituintes

-12apropriados tais como o alquilo inferior como descrito posteriormente, alcoxi superior como descrito posteriormente, ou semelhantes ;

(aralquil inferior)sulfonilo tal como fenil (alquil inferior)sulfonilo 27 por exemplo benzilsulfonilo, fenetilsulfonilo, benzidrilosulfonilo, etc._7, ou semelhantes;

aroilo /7 P°^r exemplo, benzoílo, naftoílo, antrilcarbonilo, etc.J7 que podem conter um ou vários (de preferência 1 a 5) substituintes adequados tais como um átomo de halogéneo, conforme mencionado anteriormente; alquilo inferior (por exemplo metilo, etilo, propilo, butilo, t~butilo, pentilo, hexilo, etc.); alquilo superior, citado antes; alcoxi inferior (por exemplo metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, t~butoxi, pentiloxi, hexiloxi, etc.) que podem conter um ou vários, (de preferência 1 a 10) substituintes apropriados tais como um alcoxi inferior citado anteriormente, átomos de halogéneo, grupos arilo referidos antes, ou outros; alcoxi superior (por exemplo heptiloxi, octiloxi, 2-etilhexiloxi, noniloxi, deciloxi, 3,7~dimetiloctiloxi, undeciloxi, dodeciloxi, trideciloxi, tetradeciloxi, pentadeciloxi, 3~metil~10~etildodeciloxi, hexadeciloxi, heptadeciloxi, octadeciloxi, nonadeciloxi, icosiloxi, etc.) que podem conter um ou vários (de preferência 1 a 17) substituintes apropriados tais como os átomos de halogéneo citados antes; (alquenil superior)oxi (por exemplo, 3~hepteniloxi, 7-octeniloxi, 2,6-octadieniloxi, 5~noneniloxi, 1-deceniloxi,

3,7-dimetil-6-octeniloxi, 3,7-dimetil~2,6-octadieniloxi, 8-undeceniloxi, 3,6,8-dodecatrieniloxi, 5-trideceniloxi, 7-tetradeceniloxi, 1,8~pentadecadieniloxi, 15-hexadeceniloxi, 11-heptadeceniloxi, 7~octadeceniloxi, 10~nonadeceniloxi, 18-icoseniloxi, etc.); carboxi; arilo, como citado antes, que pode conter um ou vários (de preferência 1 a 3) substituintes apropriados tal como um alcoxi superior citado antes; ariloxi (por exemplo, fenoxi, naftiloxi, antriloxi, etc.) que pode conter um ou vários (de preferência 1 a 3) substituintes apropriados tais como os grupos alcoxi inferior citados antes ou os grupos alcoxi superior também mencionados antes, ou semelhantes; e outros;

Entre os grupos acilo referidos são preferências os grupos alcanoilo inferior; halogeno-alcanoílo inferior; grupos aralcanoílo inferior que podem conter um ou vários (de preferência 1 a 3) grupos hidroxi, alcoxi inferior, alcoxi superior, arilo, amino, amino eventualmente protegido, (dialquil inferior)amino, (alcoxi inferior)imino ou (aralcoxi inferior)imino que podem conter um ou vários (de preferência 1 a 3) grupos alcoxi superior; heterocíclico-tioalcanoílo inferior contendo eventualmente um ou vários (de preferência 1 a 3) grupos alquilo superior;

heterocíclico-alcanoílo inferior que pode conter um ou vários (de preferência 1 a 3) grupos (alcoxi inferior)imino, alquil superior ou amino eventualmente protegido;

aril(alcoxi inferior)imino-alcanoílo inferior contendo eventualmente um ou vários (de preferência 1 a 3) grupos alcoxi superior; alcanoilo superior;

aralquenoílo inferior contendo eventualmente um ou vários (de preferência 1 a 3) grupos alcoxi superior;

alquenoílo superior; (alcoxi inferior) carbonilo; (alcoxi superior) carbonilo; ariloxicarbonilo;

-14arilsulfonilo contendo eventualmente um ou vários (de preferência 1 a 3) grupos alquilo inferior ou alcoxi superior; aroilo contendo eventualmente um ou vários (de preferência 1 a 5) átomos de halogéneo, ou grupos alquilo inferior, alquilo supe rior, carbôxi, alcoxi inferior, contendo eventualmente um ou vários (de preferência 1 a 10) átomos de halogéneo, grupos alcoxi inferior-alcoxi inferior, aralcoxi inferior, alcoxi superior contendo eventualmente um ou vários (de preferência 1 a 17) átomos de halogéneo, grupos (alquenil superior) oxi, arilo contendo eventualmente um ou vários (de preferência 1 a 3) grupos alcoxi superior ou ariloxi que podem conter um ou vários (de prefe rência 1 a 3) grupos alcoxi inferior ou alcoxi superior; em que o mais preferido pode ser o grupo alcanoilo inferior; halogeno-alcanoílo inferior;

fenil-alcanoílo inferior ou naftil-alcanoílo inferior que podem comportar 1 a 3 grupos hidroxi, alcoxi inferior, alcoxi supe rior, fenilo, amino, (alcoxi inferior)carboniloamino, (dialquilo inferior)amino, (alcoxi inferior)imino, ou fenil -(alcoxi inferior)imino, contendo eventualmente um a três grupos alcoxi superior;

piridiltio-alcanoílo inferior que pode conter um a três grupos alquilo superior; imidazolil-alcanoílo inferior, ou tiazolil-alcanoílo inferior que pode conter um a três grupos (alcoxi inferior)imino, alquilo superior, amino ou (alcoxi inferior) c ar bonil-amino;

fenil-(alcoxi inferior)imino-alcanoílo inferior que pode conter um a três grupos alcoxi superior;

alcanoílo superior;

fenil-alquenoílo inferior contendo eventualmente um a três grupos alcoxi superior;

alquenoílo superior; (alcoxi inferior) carbonilo, (alcoxi superior) carbonilo, fenoxicarbonilo;

fenilsulfonilo ou naftilsulfonilo, cada um dos quais podendo conter um a três grupos alquilo inferior ou alcoxi superior; benzoílo, naftoílo ou antrilcarbonilo, podendo cada um conter um a cinco átomos de halogéneo, grupos alquilo inferior, alquilo superior, carboxi, alcoxi inferior contendo eventualmente 6 a 10 átomos de halogéneo, grupos alcoxi inferior-alcoxi inferior, fenil-alcoxi inferior, alcoxi superior contendo eventualmente 12 a 17 átomos de halogéneo, ou grupos (alquenil superior) oxi, fenilo contendo eventualmente 1 a 3 grupos alcoxi inferior ou alcoxi superior, fenoxi contendo eventualmente 1 a 3 grupos alcoxi superior;

sendo mais preferenciais os grupos alcanoílo(C^-C^); halogeno-alcanoílo(C^-C^);

fenil-alcanoílo(C^-C^) contendo eventualmente 1 a 3 grupos hidroxi, alcoxi(C^-C^), alcoxi(Cy-C^g), fenilo, amino, alcoxi(C^~ -C^)carbonil-amino, dialquil(C^-C^)amino, alcoxi(C^-C^)imino ou fenil-alcoxi(C^-C^)imino que pode eventualmente conter um grupo alcoxi(Cy-C^g);

naftil-alcanoílo(C^-C^) contendo eventualmente 1 a 3 grupos alcoxi (C^-C^)carbonil-amino;

í-alquil(Cy~C^g)piridiníotio~alcanoílo(C^-C^);

imidazolil-alcanoílo(C^-C^) contendo eventualmente 1 a 3 grupos

alquil(Cy-C^g) ou alcoxi(C^-C^)-carbonil-amino;

tiazolil-alcanoílo(C^-C^) contendo eventualmente 1 a 3 grupos alcoxi(C^-C^)imino ou amino;

fenil-alcoxi(C^-C₄)imino-alcanoílo(C^-C^) contendo eventualmente 1 a 3 grupos alcoxi(Cy~C^g); alquilo(Cy~C₁₇);

fenil-alquenoílo(C^-C^ contendo eventualmente 1 a 3 grupos alcoxi(C₇-C₁₆);

alquenoílo(C₇~C₁g); alcoxi(Cg-Cg)carbonilo; alcoxi(C₇~C^g)carbonilo; fenoxicarbonilo;

fenilsulfonilo contendo eventualmente um grupo alquilo(C^-C^) ou alcoxi(C₇~C^g);

naftilsulfonilo contendo eventualmente um grupo alcoxi(C^-C^g); benzoilo que pode conter um a cinco átomos de halogéneo ou grupos alquilo (Cg-Cg), alquilo (C₇~C^g), carboxi, alcoxi(C^-Cg) contendo eventualmente 6 a 10 átomos de halogéneo, grupos alcoxi (C^-C^) -alcoxi(C^—C₄) , fenil-alcoxi (Cg-Cg), alcoxi (C^C^g) contendo eventualmente 12 a 17 átomos de halogéneo, fenilo contendo eventualmente 1 a 3 grupos alcoxi(C₇~C^g) ou fenoxi que podem conter 1 a 3 grupos alcoxi(Cg-Cg) ou alcoxi(C₇-C^g); naftoílo contendo eventualmente 1 a 3 grupos alcoxi(Cg-Cg), alcoxi(C_?~C lg) ou alquenil(C₇~C^g)oxi;

antrilcarbonilo;

sendo mais preferencial um grupo acetilo,

2-bromoacetilo, 2-(4~bifenilil)acetilo,

2-(4-octiloxifenil)acetilo, 3-(4~octiloxifenil)propionil, 2-amino-2-(4-octiloxifenil)acetilo, 2-(t-butoxicarbonilamino)~

-2-(4-octiloxifenil)acetilo,

2-amino~3-(4~octiloxifenil)propionilo,

2-(t~butoxicarbonilamino)-3-(4-octiloxifenil)propionilo,

2-dimetilamino-3-(4-octiloxifenil)propionilo,

2- (t-butoxicarbonilamino) -2-(2-naftil) acetilo,

2-metoxi-2-(4-octiloxifenil)acetilo,

2-metoxiimino-2-(4-octiloxifenil)acetilo,

2-(4-octiloxibenziloxiimino)-2-(4-hidroxifenil)acetilo, 2-(4-octiloxibenziloxiimino)~2~fenilacetilo,

2-(4-octiloxibenziloxiimino)acetilo,

2-(l-octil-4-piridinio)tioacetilo,

2-metoxiimino-2~(2-aminotiazol-4-il)acetilo,

2-(t-butoxicarbonilamino)-3-(l~octil-4-imidazolil)propionilo, 3-(4-octiloxifenil)acriloilo, 3,7,ll-trimetil-2,6,10-dodecatrienoilo, t-butoxicarbonilo, octiloxicarbonilo, fenoxicarbonilo, p-tolilsulfonilo, 4-octiloxifenilsulfonilo, 6-octiloxi-2-naftilsulfonilo,

4-(t-butil)benzoilo, 4-oetilbenzoilo,

2,3,5,6-tetrafluoro-4-(2,2,3,3,4,4,5,5-octafluoropentiloxi)benzoilo, 4-(2-butoxietoxi)benzoilo,

4-(4~fenilbutoxi)benzoilo, 4-octiloxibenzoilo, 2-carboxi~4-octiloxibenzoilo, 3-metoxi-4-octiloxibenzoilo, 4-(2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-pentadecafluorooctiloxi)2,3,5,6-tetrafluorobenzoilo, 4-(4~octiloxifenil)benzoilo, 4-(4-octiloxifenoxi)benzoilo, 6-butoxi-2~naftoilo, 6-hexiloxi-2-naftoil, 6-octiloxi-2-naftoilo, 6-(2~etilhexiloxi)-2~naftoilo, 6-deciloxi-2~naftoilo,

6- (3,7-dimetiloctiloxi)-2-naftoilo, 6-dodeciloxi-2-18^

-naftoílo, 6-(3,7-dimetil-6-octeniloxi)-2-naftoílo, 6-(3,7-dimetil-2,6-octadieniloxi)-2-naftoílo,

2-antrilcarbonilo, 4-(4~heptiloxifenil)-benzoil e 4-(4-hexiloxifenoxi)-benzoil.

Como exemplos adequados de grupos acilo adequados com a excepção do palmitoílo indica-se os mesmos grupos exemplificados para grupos acilo com a excepção do grupo palmitoílo.

Como exemplos adequados de radicais aralcanoílo inferior em grupos aralcanoílo inferior contendo um grupo alcoxi superior e um grupo amino protegido e em grupos aralcanoílo inferior contendo grupos alcoxi superior e amino indica-se os que foram exemplificados antes para os grupos acilo e como exemplos apropriados dos substituintes alcoxi superior e amino protegido indica-se os que foram exemplificados antes para os grupos acilo.

Como exemplos adequados de grupos halogeno-alcanoílo inferior indica-se os que foram referidos antes para os grupos acilo.

Como exemplos adequados de grupos piridiltio-alcanoílo inferior nos grupos piridiltio-alcanoílo inferior que podem conter um grupo alquilo superior indica-se os que foram referidos antes para os grupos acilo e como exemplos apropriados dos substituintes alquilo superior indica-se os que foram referidos antes para os grupos acilo.

Os grupos aciloxi apropriados podem incluir os hidroxissulfoniloxi, fosfonooxi, e semelhantes.

grupos

De entre os compostos da presente invenção de fórmula geral considera-se especialmente preferúncial o composto seguinte de fórmula geral

HO (Ih) na qual R^ representa um átomo de hidrogénio com a condição de não representar o grupo ou um grupo acilo palmitoílo.

agente de acilação apropriado para a reacção de acilação representada no Processo 2 pode ser um composto ácido que corresponda ao grupo acilo que se pretende introduzir ou seus derivados reactivos no grupo carboxi ou seus sais e como exemplo adequado, o agente de acilação anteriormente referido é representado pela fórmula geral la

OH (V)

-20^ na qual R^_a tem os significados definidos antes, ou um seu derivado reactivo no grupo carboxi ou um seu sal.

De entre os compostos com as fórmulas estruturais de fórmula geral (V) os compostos seguintes são novos

ou o seu derivado reactivo no grupo carboxi ou um seu sal

ou um seu derivado reactivo no grupo carboxi ou um seu sal em que Rg representa um grupo alcoxi inferior, alcoRi superior ou (alquenil-superior)-oxi;

representa um grupo -COOH ou -SO^H, representa i a 4 átomos de halogéneo, representa um grupo alcoxi inferior, possuindo um ou mais átomos de halogéneo, alcoxi superior o qual possui um ou mais átomos de halogéneo.

Os compostos de fórmulas gerais (V-l) e (V-2) podem prepa rar-se pelos processos seguintes:

Processo B

(VI) (VII) (V-l) ou um seu sal ou um seu sal ou um seu sal

Processo C

R_u - OH

(VIII) ou um seu sal (ix) ou um seu sal (V-2) ou um seu sal em que Rg, R?, Rg e Rg têm cada um os significados definidos antes,

Rθ representa um grupo alquilo inferior, alquilo superior ou alquenilo superior,

R^ representa um grupo alquilo inferior possuindo um ou mais átomos de halogéneo ou um grupo alquilo superior possuindo um ou mais átomos de halogéneo, e

X e Y representam individualmente um grupo removível.

Nas definições anteriores, como grupos adequados alcoxi inferior, alcoxi superior, (alquenil superior)-oxi, halogéneo, alquilo inferior e alquilo superior indicam-se os exemplificadas antes.

Como grupos alquenilo superior apropriados indica-se os

grupos 3-heptenilo, 7-octenilo, 2,6~octadienilo, 5-nonenilo, 1-decenil, 3,7~dimetil~6~octenilo, 3,7-dimetil-2,6~octadienilo, 8-undecenilo, 3,6,8-dodecatrienilo, 5-tridecenilo, 7-tetradecenilo, 1,8~pentadecadienilo, 15-hexadecenilo, 11-heptadecenilo, 7~octadecenilo, 10-nonadecenilo, 18-icosenilo e semelhantes em que o preferido pode ser alquenilo (C?-C^g) .

Tal como definido para o radical Rg, um grupo alcoxi inferior contém um ou mais (de preferência 1 a 10, com maior preferência 6 a 10) átomos de halogéneo e um grupo alcoxi superior contém um ou mais (de preferência 1 a 17, mais preferencialmente 12 a 17) átomos de halogéneo.

Tal como definido para o radical R^, um grupo alquilo inferior contém um ou mais (de preferência 1 a 10, mais preferencialmente 6 a 10) átomos de halogéneo e um grupo alquilo superior contém um ou mais (de preferência 1 a 17, mais preferencialmente 12 a 17) átomos de halogéneo.

Tal como definido para o radical Rg, um grupo preferencial alcoxi inferior pode ser um grupo alcoxi (C^-Cg).

Um grupo removível apropriado pode incluir os já referidos átomos de halogéneo ou grupos (alcanoíl inferior)-oxi (por exemplo acetoxi, etc.), sulfoniloxi (por exemplo mesiloxi, tosiloxi, etc.), e outros.

No que se refere a sais apropriados e derivados reactivos no grupo carboxi dos compostos de fórmulas gerais (V-l) e (V-2), indicam-se os exemplificados adiante para o composto de fórmula geral (V).

As reacções dos Processos B e C podem realizar-se de acordo com os métodos adiante descritos nas Preparações, na presente memória descritiva ou por métodos idênticos a estes.

Nos compostos de fórmula geral (V) há compostos novos além dos compostos de fórmula geral (V-l) e (V-2) e podem preparar-se, por exemplo, pelos métodos adiante descritos nas Preparações.

No Processo 4, o grupo piridinotiona apropriado, pode incluir 1,2-di-hidropiridino~2-tiona, 1,4-di-hidropiridino-4-tiona, e semelhantes, e o referido piridinotiona pode conter um grupo alquilo superior, citado anteriormente.

Os processos para a preparação dos presentes compostos de fórmula geral £*IJ ou dos seus sais, da presente invenção, são descritos pormenorizadamente em seguida.

Processo 1

Os compostos de fórmula geral flj ou os seus sais podem preparar-se submetendo um composto de fórmula geral £ 11 J ou um

seu sal a uma reacção de eliminação do grupo N~acilo.

Esta reacção realiza-se de acordo com um método convencional tal como a hidrólise, redução, reacção com uma enzima ou semelhantes .

A hidrólise é realizada de preferência na presença de uma base ou de um ácido incluindo um ácido de Lewis. Uma base apropriada pode incluir um base inorgânica ou uma base orgânica tal como um metal alcalino por exemplo de sódio ou de potássio, etc.J, um metal alcalino-terroso £ por exemplo de magnésio, cálcio, etc.J7, seus hidróxidos ou carbonatos ou bicarbonatos, trialquilamina £ por exemplo trimetilamina, trietilamina, etc.J, picolina, 1,5~diazabiciclo/4.3.07non-5-eno , 1,4~diazabiciclo/ £2.. 2.2J7 octano , 1,8-diazabiciclo£5,4.07undec-7-eno , ou outros.

Um ácido apropriado pode abranger um ácido orgânico 8 por exemplo ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido tricloroacético, ácido trifluoroacético, etc.J7 ^e um ácido inorgânico £ por exemplo ácido clorídrico aquoso, ácido bromídrico aquoso, ácido sulfúrico, ácido clorídrico, ácido bromídrico, etc/7. A eliminação utilizando um ácido de Lewis tal como os ácidos tri-haloacéticos £ por exemplo ácido tricloroacético, ácido trifluoroacético, etc.J ou semelhante realiza-se de preferência na presença de agentes capturadores de catiões £ por exemplo anisol, fenol, etc. J7

A reacção realiza-se habitualmente num solvente tal como a água, um álcool £ por exemplo, metanol, etanol, etc.J7, cloreto de metileno, tetra-hidrofurano, uma sua mistura ou qualquer outro solvente que não influencie de modo indesejável a reacção. Pode ainda utilizar-se uma base líquida ou um ácido líquido como solventes. A temperatura reaccional não é crítica e a reacção realiza-se habitualmente sob condições de arrefecimento ou de aquecimento.

método de redução aplicável para a reacção de eliminação pode incluir a redução química e a redução catalítica.

Os agentes de redução apropriados para utilização na redução química são uma combinação de um metal £ por exemplo estanho, zinco, ferro, etc. J ou de um composto metálico £ por exemplo cloreto de crómio, acetato de crómio, etc.J e de um ácido orgânico ou inorgânico £*por exemplo ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido trifluoroacático, ácido p-toluenossulfó~ nico, ácido clorídrico, ácido bromídrico, etc._7.

Os catalisadores apropriados a utilizar na redução catalítica são os catalisadores convencionais tais como os catalisadores de platina £*por exemplo lâminas de platina, platina esponjosa, negro de platina, platina coloidal, óxido de platina, fio de platina etc._7, catalisadores de paládio £ por exemplo paládio esponjoso, negro de paládio, óxido de paládio, paládio-sobre-carvão, paládio coloidal, paládio sobre sulfato de bário, paládio

sobre carbonato de bário, etc. 7; catalisadores de níquel 7 por exemplo níquel reduzido, óxido de níquel, níquel de Raney etc. 7; catalisadores de cobalto 7 por exemplo cobalto reduzido, cobalto de Raney, etc. 7, catalisadores de ferro /7 por exemplo ferro reduzido, ferro de Raney, etc. 7» catalisadores de cobre 7 P^orexemplo cobre reduzido, cobre de Raney, cobre de Ullman, etc.7i e semelhantes.

A redução realiza-se usualmente num solvente convencional que não prejudique a reacção tal como a água, o metanol, o etanol, o propanol, a Ν,Ν-dimetilformamida ou uma sua mistura. Adicionalmente, no caso de serem líquidos os ácidos mencionados antes, utilizados na redução química, então também podem ser utilizados como solventes. Além disso um solvente apropriado para utilizar na redução catalítica pode ser um solvente mencionado anteriormente ou outro solvente convencional tal como o éter dietílico, dioxano, tetra-hidrofurano, etc. ou uma sua mistura.

A temperatura reaccional desta redução não é crítica e de um modo geral a reacção realiza-se sob condições de arrefecimento ou de aquecimento.

A reacção com uma enzima pode realizar-se fazendo reagir um composto de fórmula geral II ou um seu sal com uma enzima apropriada para a reacção de eliminação do grupo N-acilo.

Como exemplo apropriado da referida enzima indica-se a que é produzida por certos microrganismos da estirpe Actinoplanaceae, por exemplo, Actinoplanes utahensis IFO-13244, Actinoplanes utahensis ATCC 12301, Actinoplanes missourienses NRRL 12053, ou semelhantes; e outros.

Esta reacção de eliminação realiza-se habitualmente num solvente, tal como um tampão de fosfato, tampão Tris-HCl ou qualquer solvente que não prejudique a reacção.

A temperatura da reacção não é crítica e esta realiza-se a temperatura ambiente ou sob aquecimento.

Processo 2

Os compostos de fórmula geral Ib ou os seus sais podem preparar-se submetendo um composto de fórmula geral Ia ou um seu sal a uma reacção de acilação.

A reacção de acilação deste processo pode realizar-se fazendo reagir um composto dé fórmula geral Ia ou um seu sal com um agente de acilação, citado antes, por exemplo, o composto de fórmula geral V ou um seu derivado reactivo no grupo carboxi ou um seu sal.

Como derivado reactivo apropriado no grupo carboxi, de um

composto de fórmula geral V, indica-se um halogeneto de ácido, um anidrido de ácido, uma amida activada, um éster activado, etc. como exemplos apropriados de derivados reactivos indica-se um cloreto de ácido; uma azida de ácido; um anidrido de ácido misto com um ácido tal como o ácido fosfórico substituído, por exemplo ácido dialquilfosfórico, ácido fenilfosfórico, ácido difenilfosfórico, ácido dibenzilfosfórico, ácido fosfórico halogenado, etc., ácido dialquilfosforoso, ácido sulforoso, ácido tiossulfórico, ácido sulfúrico, ácido sulfónico, por exemplo ácido metanossulfó~ nico, etc., ácido carboxílico alifático, por exemplo ácido acético, ácido propiónico, ácido butírico, ácido isobutírico, ácido pivárico, ácido pentanóico, ácido isopentanóico, ácido 2~etilbu~ tírico, ácido tricloroacético, etc., ou ácido carboxílico aromático, por exemplo ácido benzóico; um anidrido de ácido simétrico; uma amida activada com imidazol, imidazol 4-substituído, dimetilpirazol, triazol, tetrazol ou l-hidroxi-lH-benzotriazol; ou um éster activado, por exemplo éster cianometílico, éster metoxime+ tílico, éster dimetilaminometílico, ΖΓ (CHg)2N=CH-_7, éster vinílico, éster propargílico, éster p-nitrofenílico, éster 2,4-dinitrofenílico, éster triclorofenílico, éster pentaclorofenílico, éster mesilfenílico, éster fenilazofenílico, tioéster fenílico, tioéster p-nitrofenílico, tioéster p-cresílico, tioéster carboximetílico, éster piranílico, éster piridílico, éster piperidílico, tioéster 8-quinolílico, etc., ou um éster com um composto N-hidroxi, por exemplo N,N-dimetil-hidroxilamina, l-hidroxi-2~(1H)-piridona, N-hidroxissuccinimida, N-hidroxiftalimida, 1-hidroxi-lH-benzotriazol, etc., etc. Estes derivados reactivos podem

ser seleceionados facultativamente de acordo com o tipo de composto de fórmula geral V que se vai utilizar.

Como exemplos adequados de sais dos compostos de fórmula geral V e seus derivados reactivos indicam-se os que foram exemplificados para os compostos de fórmula geral I.

A reacção realiza-se habitualmente num solvente convencional, tal como a água, álcool, por exemplo metanol, etanol, etc., acetona, dioxano, acetonitrilo, clorofórmio, cloreto de metileno, cloreto de etileno, tetra-hidrofurano, acetato de etilo, N,N-di~ metilformamida, piridina ou qualquer solvente orgânico que não influencie de forma indesejável a reacção. Estes solventes convencionais podem ser utilizados misturados com a água.

Nesta reacção, quando o composto de fórmula geral V é utilizado sob a forma de ácido livre ou de um seu sal, a reacção de preferência realiza-se na presença de um agente de condensação convencional, tal como Ν,N*-diciclo-hexilcarbodiimida; N~ciclo~ -hexil-N'-morfolinoetilcarbodiimida; N-ciclo-hexil-N(4~dietila~ minociclo-hexil)-carbodiimida; Ν,N ^z-dietilcarbodiimida; Ν,N ^x-diisopropilcarbodiimida; N-etil-N^z~(3~dimetilaminopropil)~carbodiimida; Ν,N^z-carbonil-bis-(2-metilimidazol); pèntametilenoceteno-N-ciclo-hexilimina; difenilceteno-N-ciclo~hexilimina; etoxiacetileno; 1-alcoxi-l-cloroetileno; fosfito de trialquilo; polifosfato de etilo; polifosfato de isopropilo; oxicloreto de fosforo (cloreto de fosforilo); tricloreto de fosforo; cloreto de tionilo;

cloreto de oxalilo; halogenoformato de alquilo inferior, por exemplo, cloroformato de etilo, cloroformato de isopropilo, etc.; trifenilfosfina; sal de 2-etil-7~hidroxibenzisoxazólio; sal intramolecular do hidróxido de 2-etil-5-(m-sulfofenil)-isoxazólio;

1-(p-clorobenzenossulfoniloxi)-6-cloro-lH-benzotriazol; o designado reagente de Vilsmeier preparado pela reacção de N,N~dimetilformamida com cloreto de tionilo, fosgénio, cloroformato de triclorometilo, oxicloreto de fosforo, cloreto de metanossulfonilo , etc.; etc.

Pode realizar-se também a reacção na presença de uma base inorgânica ou orgânica como um carbonato de metal alcalino, bicarbonato de um metal alcalino (trialquil inferior)-amina, piridina, (dialquil inferior)-aminopiridina, por exemplo, 4-dimetilaminopiridina, etc., N~(alquil inferior)-morfolina, N , N-(dialquil inferior)-benzilamina , e outros.

A temperatura reaccional não é crítica e a reacção realiza-se habitualmente sob condições de arrefecimento ou de aquecimento.

Processo 3

Os compostos de fórmula geral Id ou os seus sais podem preparar-se submetendo um composto de fórmula geral Ic ou um seu sal a uma reacção de eliminação do grupo de protecção amino.

Como exemplos adequados de sais dos compostos de fórmulas gerais Ic e Id indicam-se os que foram exemplificados para os compostos de fórmula geral I.

Esta reacção de eliminação pode realizar-se de acordo com um método convencional como explicado anteriormente para o Processo 1.

Processo 4

Os compostos de fórmula geral If ou os seus sais podem preparar-se fazendo reagir um composto de fórmula geral Ie ou um seu sal com um composto de fórmula geral III ou com um seu sal.

Como exemplo adequado de sal dos compostos de fórmula geral If indica-se os que foram exemplificados para os compostos de fórmula geral I.

Como exemplo adequado de sal dos compostos de fórmula geral III indica-se os sais de adição de ácido como exemplificado para os compostos de fórmula geral I.

A presente reacção pode realizar-se num solvente tal como a água, tampão fosfato, acetona, clorofórmio, acetonitrilo, nitrobenzeno, cloreto de metileno, cloreto de etileno, formamida,

N,N-dimetilformamida, metanol, etanol, éter dietílico, tetra-hi-33drofurano, dimetilsulfóxido ou qualquer outro solvente orgânico que não prejudique a efectivação da reacção, de preferência os que têm forte polaridade. Entre os solventes, podem utilizar-se os solventes hidrofílicos numa mistura com água. Quando o composto de fórmula geral III é um líquido, pode este também servir como solvente.

A reacção é conduzida de preferência na presença de uma base, por exemplo de uma base inorgânica tal como um hidróxido de metal alcalino, um carbonato de metal alcalino, um bicarbonato de um metal alcalino, uma base orgânica como a trialquilamina, etc.

A temperatura da reacção não é crítica e a reacção realiza-se geralmente sob arrefecimento, à temperatura ambiente, sob temperatura moderada ou sob aquecimento.

A presente reacção realiza-se de preferência na presença de um halogeneto de metal alcalino, por exemplo iodeto de sódio, iodeto de potássio, etc., de um tiocianato de metal alcalino, por exemplo tiocianato de sódio, tiocianato de potássio, etc., ou outro.

Processo 5

Os compostos de fórmula geral Ig ou os seus sais podem preparar-se submetendo um composto de fórmula geral IV ou um seu sal a uma reacção de acilação.

X

-34Como exemplos adequados de sais dos compostos de fórmulas gerais lg e IV indicam-se os que foram exemplificados para os compostos de fórmula geral I.

Um agente de acilação apropriado para o Processo V pode ser um composto ácido correspondendo ao grupo acilo a introduzir, por exemplo, ácido fosfórico e os seus derivados, por exemplo cloreto de fosforilo, difenilfosforocloridrato, etc., ácido sulfúrico e seus derivados, por exemplo, sulfotrióxido-piridina, sulfotrióxido-(trialquil inferior)- amina, por exemplo trimetilamina, trietilamina, etc.; ácido clorossulfónico e outros.

Esta reacçâo pode realizar-se de um modo convencional.

processo para a preparação dos compostos iniciais de fórmula geral II ou os seus sais da presente invenção é descrito pormenorizadamente em seguida.

Processo A

Os compostos de fórmula geral II ou os seus sais podem preparar-se por processos de fermentação.

processo de fermentação é descrito em pormenor posteriormente .

Os compostos de formula geral II ou os seus sais da presente invenção podem ser produzidos por fermentação de uma estirpe produtora de compostos de fórmula geral II ou dos seus sais, pertencente ao género Coleophoma tal como a Coleophoma sp. F-11899, num meio nutriente.

(i) Microrganismo:

Em seguida são descritas particularidades do microrganismo utilizado para a produção de compostos de fórmula geral II ou dos seus sais.

A estirpe F-11899 foi isolada inicialmente a partir de uma amostra de solo recolhida no Japão, Iwaki-shi, Fukushima-ken. Este organismo desenvolveu-se razoavelmente em diversos meios de cultura e formou colónias de côr variável entre cinzento escuro e cinzento acastanhado. Produziu-se a forma anamorfa (conidiomata) num segmento de folha estirilizado pelo vapor fixada sobre uma placa LCA da Miura (1) ou numa placa de selose com farinha de milho por inoculação de uma amostra isolada, não tendo havido formação de teliomorfos nem de anamorfos no meio constituído por gelose.

As suas características morfológicas, culturais e fisiológicas são as seguintes:

As características culturais em vários meios de selose estão resumidas no Quadro 1. As culturas em gelose de dextrose de batata, desenvolveram-se bastante mais rapidamente, atingindo 3,5 a

4,0 cm de diâmetro após duas semanas, à temperatura de 25°C. A superfície destas colónias era plana, felpuda, um pouco rugosa e cinzentas-acastanhadas. 0 centro das colónias era de cinzento pálido a cinzento acastanhado e coberto de hifas aéreas. Na parte inversa eram de cor cinzenta escura. As colónias sobre selose de extracto de malte desenvolveram-se mais restritamente, atingindo 2,5 a 3,0 cm de diâmetro, sob as mesmas condições. A superfície era plana, entre delgada e felpuda e castanho-azeitona. 0 centro das colónias era cinzento amarelado e coberto por hifas aéreas. A parte inversa era cinzento acastanhado.

As características morfológicas foram determinadas com base nas culturas sobre uma folha esterilizada fixada a uma placa de LCA da Miura. Houve formação de conideos apenas no segmento de folha. Eram picnóticas, superficiais, separadas, entre discóides e ampuliformes, lisas na base, uniloculares, de parede delgada, escura, com 90-160(-200) yUm de diâmetro e 40-70 yfcm de altura. 0 ostíolo era frequentemente único, circular, central, com papilas, com 10-30 yw-m de diâmetro e 10-20 ^m de altura.

Os conidióforos formaram-se a partir da camada inferior do interior das paredes picnóticas. Eram hialinos, simples ou pouco ramificados, com septos e lisos. As células formadas de conideos eram enteroblásticas, alongadas, determinadas, entre ampoliformes e opiriformes, hialinas, lisas, de 5-8 x 4-6 com uma forma dilatada (collarette). Estas ”collarettes variavam entre campanuladas a cilíndricas e tinham 14-18 x 3-5 yUm. Os conideos eram hialinos, cilíndricos, de parede fina, sem septos, lisos e com 14-16(18) x 2-3 Jlm.

As hifas vegetativas eram com septos, castanhas, lisas e ramificadas. As células das hifas eram cilíndricas com 2-7 /ím de espessura. Não havia clamidósporos.

A estirpe F-11899 desenvolveu-se a uma temperatura variando entre 0 e 31°C e com uma temperatura óptima entre 23 e 27°C no caso da selose de dextrose de batata.

As caracteristicas descritas anteriormente indicaram que a 21 3) 41 estirpe F-11899 pertence à ordem dos Coelomycetes ⁷ ’ ' ’ ’ .

Assim, designamos por estirpe Coelomycetes F-11899.

Quadro í Caracteristicas de cultura da estirpe F-11899

Meio

Gelose de extracto de malte (Blakeslee 1915)

Caracteristicas de cultura

Bastante limitado, 2,5-3,0 cm

Circular, plana, de delgada a felpuda, castanho-azeitona (4F5), com hifas aéreas nascidas no centro (cinzento amarelado (4B2))

Cinzento acastanhado (4F2)

Quadro 1 (continuação)

Meio

Características de cultura

Gelose de dextrose de batata G;

(Difco 0013) S:

	R:
Gelose de solução de Czapeck	G;
(Raper e Thom 1949)	S:
	R:
Gelose de dextrose de Sabouraud	G:
(Difco 0109)	S:

R:

Gelose de farinha de aveia G:

S:

R:

(Difco 0552)

Bastante rápido, 3,5-4,0 cm Circular, plana, felpuda, um pouco rugosa, cinzenta acastanhada (4F2), hifas aéreas no centro (cinzenta pálida (4B1) a cinzenta acastanhada (4F2)

Cinzento escuro (4F1)

Muito restritamente, 1,0-1,05 cm Irregular, fina, escassa, imersa, sub-hialina a branca

Sub-hialino a branco

Restritamente, 2,0-2,5 cm Circular, plana, delgada, branca, em sector, castanha clara (6D5) , no centro das colónias

Amarelo pálido (4A3)

Razoavelmente rápido, 4,0-4,5 cm Circular, plana, felpuda a algodeada, cinzenta escura (4F1) a cinzenta acastanhada (4F2)

Cinzento acastanhado (4D2)

Quadro 1 (continuação)

Meio

Característícas de cultura

Gelose Ss Yp Emerson (Difco 0739)

G: Restritamente, 2,0-2,5 cm

S: De circular a irregular, plana, felpuda, cinzenta escura (4F1) a cinzento acastanhado (4F2)

R: Cinzento médio (4E1) a cinzento escuro (4F1)

Gelose de farinha de milho (Difco 0386)

Bastante limitado, 2,5-3,0 Circular, plana, de delgada da, cinzenta escura (2F1) a azeitona (2F3)

Cinzento escuro (2F1) a cor tona (2F3) cm a felpucor de de azeiGelose MY20

G: Restritamente, 1,5-2,0 cm S: Circular a irregular, delgada, com sectores, branca amarelada (4A2)

R: Amarelo pálido (4A3) a branco alaranjado (5A2)

Abreviaturas: G: crescimento, medindo o tamanho da colónia em diâmetro

S: superfície da colónia

R: inverso

Estas características foram observadas após 14 dias de incubação à temperatura de 25°C. As descrições da cor estão basea51 das no Methuen Handbook of Colour ' .

1) Miura, K. and Μ. Y. Kudo: An agar-medium for aquatic

Hyphomycetes., Trans. Ycolo. Soc. Japan, 11:116-118, 1970.

2) Arx, J. A. von: The Genera of Fungi - Sporulating in

Pure Culture (3rd ed.), 315 p., J. Cramer, Vaduz,

1974.

3)

Sutton, B. C.: The Coelomycetes - Fungi with Pycnidia, Acervuli and Stromata. Commonwealth Mycological Institute, Kew

Imperfecti 696 p.,

1980.

4) Hawksworth, D. L., B. C. Sutton and G. C. Ainsworth: Dictionary of the Fungi (7th ed.), 445 p.,

Commonwealth Mycological Institute, Kew, 1983.

5)

Kornerup, A Colour (3rd and Wanscher, J. H.: Methuen Handbook ed.), 252 p., Methuen, London, 1983.

of

Uma cultura da estirpe designada por Coelomycetes F-11899 foi depositada em Fermentation Research Institute Agency of Industrial Science and Technology (1-3, Higashi 1 chome, Tsukuba-shi, IBARAKI 305, Japão) em 26 de Outubro de 1989 com o número de aceitação FERM BP-2635.

-41Contudo, depois, estudou-se ainda mais a classificação da estirpe F-11899 e verificou-se que a estirpe F-11899 se assemelhava a Coleophoma empetri (Rostrup) Petrak 1929 2), 3), 4) pertencente à ordem dos Coelomycetes, mas diferia em algumas características picnóticas: globosa ou alisada na base, imersa e não papilosa.

Considerando estas características, classificou-se esta estirpe mais pormenorizadamente e ficou designada por Coleophoma sp. F-11899.

Nesta circunstância, fez-se a correcção da designação, Coelomycetes estirpe F-11899 para Coleophoma sp. F-11899, em Fermentation Research Institute Agency of Industrial Science and Technology, em 21 de Setembro de 1990.

(ii) Produção do composto de fórmula geral II ou de um seu sal.

Os compostos de fórmula geral II ou um seu sal, da presente invenção são produzidos quando uma estirpe produtora de um composto de fórmula geral II ou de um seu sal pertencente ao genes Celeophoma se desenvolve num meio nutriente contendo fontes assimiláveis de carbono e azoto, sob condições aeróbicas (por exemplo cultura agitada, cultura submersa, etc.). As fontes preferidas de carbono, no meio nutriente, são os hidratos de carbono como a glicose, sacarose, amido, fructose ou glicerina, etc.

As fontes preferidas de azoto são extracto de levedura, peptona, farinha de glúten, farinha de sementes de algodão, farinha de soja, licor de infusão de milho, leveduras secas, gérmen de trigo, etc., assim como compostos inorgânicos e orgânicos de azoto tais como os sais de amónio, por exemplo nitrato de amónio, sulfato de amónio, fosfato de amónio, etc., ureia ou aminoácidos, etc. As fontes de azoto e carbono, que se consideram vantajosas para usar em associação, não necessitam estar sob a forma pura porque os materiais menos puros, que contém vestígios de factores de crescimento e quantidades consideráveis de nutrientes minerais, são adequados para esta aplicação. Quando apropriado, podem adicionar-se ao meio, sais minerais como carbonato de sódio ou carbonato de cálcio, fosfato de sódio ou fosfato de cálcio, cloreto de sódio ou cloreto de potássio, iodeto de sódio ou iodeto de potássio, sais de magnésio, sais de cobre, sais de zinco ou sais de cobalto, etc.

Se apropriado, especialmente quando o meio de cultura forma muita espuma, pode adicionar-se um agente anti-espumante, tal como parafina líquida, um óleo gordo, um óleo vegetal ou um óleo mineral, ou silicone, etc.

Como no caso dos métodos preferidos utilizados para a produção de outras substâncias biologicamente activas em quantidades maciças, as condições de cultura aeróbicas submersas são preferidas para a produção de compostos de fórmula geral II ou dos seus sais em quantidades maciças.

Para a preparação de pequenas quantidades utilizou-se uma cultura agitada ou de superfície num balão ou numa garrafa.

Além disso quando o desenvolvimento se realiza em grandes tanques é preferível utilizar a forma vegetativa do organismo para inoculação nos tanques de produção a fim de evitar retardamento no desenvolvimento no processo de produção do composto de fórmula geral II ou de um seu sal. Deste modo é desejável primeiro produzir um inoculo vegetativo do organismo, por inoculação de uma quantidade relativamente pequena de um meio de cultura com esporos ou com micélios do organismo e cultivar o meio inoculado citado e em seguida transferir o inoculo vegetativo cultivado para grandes tanques. 0 meio, em que se produziu o inoculo vegetativo ou é substancialmente igual ou diferente do meio utilizado para a produção do composto de fórmula geral II ou de um seu sal.

A agitação e arejamento da mistura da cultura pode ser realizada por várias formas. Por um agitador em hélice ou por um equipamento de agitação mecânica idêntico, rodando ou agitando o fermentador, utilizando diverso equipamento de bombagem ou por passagem de ar estéril através de um meio. 0 arejamento pode efectuar-se fazendo passar ar estéril através da mistura de fermentação .

A fermentação é de um modo geral efectuada a uma temperatura entre 10°C e 40°C aproximadamente, de preferência entre

20°C e 30°C por um período de 50 a 150 horas aproximadamente que pode variar de acordo com as condições e escalas de fermentação.

Quando se completa a fermentação, o caldo de cultura é submetido, para recuperação do composto de fórmula geral II ou de um seu sal, a vários processos convencionais utilizados para recuperar e purificar substâncias biologicamente activas, por exemplo, extracção por solvente com um solvente apropriado ou com uma mistura de vários solventes, cromatografia ou recristalização a partir de um solvente adequado ou de uma mistura de vários solventes, etc.

De acordo com a presente invenção, em geral, o composto de fórmula geral II ou um seu sal encontra-se nos micélios de cultura e no caldo de cultura. Deste modo, o composto de fórmula geral II ou um seu sal é em seguida removido do caldo total por meio de extracção utilizando-se um solvente orgânico apropriado, como por exemplo, a acetona ou o acetato de etilo ou uma mistura destes solventes e outros.

extracto é tratado de um modo convencional para proporcionar o composto de fórmula geral II ou um seu sal, por exemplo, o extracto é concentrado por evaporação ou por destilação até se obter uma quantidade pequena e o resíduo resultante, contendo um material activo, isto é, o composto de fórmula geral II ou um seu sal, é purificado por processos de purificação convencionais, por exemplo por cromatografia ou recristalização a partir de um

solvente apropriado ou de uma mistura de alguns solventes.

Quando o composto é isolado sob a forma de um sal do composto de fórmula geral II este pode converter-se no composto livre ou no outro sal do composto de fórmula geral II, de acordo com métodos convencionais.

Propriedades biológicas do composto polipeptídico de fórmula geral I da presente invenção

A fim de demonstrar a aplicação do composto polipeptídico de fórmula geral I da presente invenção, em seguida são descritos alguns resultados biológicos dos compostos representativos.

Teste 1 Actividade antimicrobiana (1):

Mediu-se a actividade antimicrobiana do composto do Exemplo 2 descrito posteriormente (referido aqui como substância FR131535) pelo método da monodiluição do caldo em multiplacas de 96 cavidades utilizando-se meio de azoto de levedura base dextrose.

A uma amostra de 50 yul de solução com diluição em série dupla adicionou-se 50 yu.1 de uma suspensão de microrganismos em 5 solução salina para se obter uma concentração final de 1x10 unidades formadoras de colónias/ml. Incubaram-se culturas de Candida à temperatura de 37°C durante 22 horas. Após incubação, determinou-se o desenvolvimento dos microrganismos em cada cavi-

dade por medição turbidimétrica. Os resultados foram expressos sob a forma do valor da ΟΙ^θ em que a concentração de turvação era metade da obtida na cavidade sem amostra. Os resultados estão

apresentados no Quadro 2.
Quadro 2
	organismo	^CI50
Candida	albicans FP578	0,31
Candida	tropicalis YC118	0,47

Teste 2 Toxicidade aguda da substância FR131535:

Determinou-se a toxicidade aguda da substância FR131535 para murganhos ICR, fêmeas com 4 semanas, por injecção endovenosa única. Não se observaram sintomas tóxicos com a dose de 500 mg/Kg.

Teste 3 Actividade antimicrobiana (2) :

Determinou-se a actividade antimicrobiana in vitro do composto do Exemplo 12 descrito posteriormente (aqui referido como substância FR139687) pelo método da diluição de série dupla em placa de gelose como descrito em seguida.

Uma ansa de uma cultura nocturna de cada microrganismo de ensaio em caldo de Sabouraud contendo 2% de glicose (105 células viáveis por ml) foi semeada em agar dextrose base de azoto de levedura (YNBDA) contendo concentrações graduais da substância FR139687 e expressou-se a concentração inibidora mínima (CIM) por após incubação à temperatura de 30°C durante 24 horas.

organismo

CIM ( /zg/ml)

Candida albicans YU-1200

0,05

Dos resultados dos testes concluiu-se que o composto polipeptídico de fórmula geral I da presente invenção, tem actividade antimicrobiana, em especial antifúngica.

Podem-se utilizar as composições farmacêuticas da presente invenção sob a forma de uma preparação farmacêutica, por exemplo, no estado sólido, semi-sólido ou líquido contendo um composto polipeptídico de fórmula geral I ou um seu sal aceitável sob ponto de vista farmacêutico, contendo um componente activo, em mistura com um veículo ou excipiente orgânico ou inorgânico apropriado para aplicação rectal, pulmonar (nasal ou inalação bocal), nasal, ocular, externo (tópica), oral ou parentérica (incluindo subcutânea, endovenosa e intramuscular) ou por insuflação. 0 componente activo pode ser formado, por exemplo, com veículos

aceitáveis em farmácia não tóxicos habituais para comprimidos, grânulos, drageias, cápsulas, supositórios, cremes, pomadas, aerossóis, pós para insuflação, soluções, emulsões, suspensões e outras formas apropriadas. E, se necessário, podem-se adicionar agentes auxiliares de estabilização de espessamento e de coloração e aromas. 0 composto polipeptídico de fórmula geral I ou um seu sal aceitável em farmácia é/são incluídos na composição farmacêutica numa quantidade suficiente para produzir o efeito antimicrobiano pretendido sob o processo ou estado de doença.

Para a aplicação da composição a seres humanos é preferível recorrer à administração por via endovenosa, intramuscular, pulmonar ou oral ou por insuflação. Embora a dose da quantidade terapeuticamente eficaz do composto polipeptídico de fórmula geral I varie e também dependa da idade e do estado de cada indivíduo a tratar, no caso da administração endovenosa considera-se adequada uma dose diária entre 0,01 e 20 mg do composto polipeptídico de fórmula geral I por Kg de massa corporal do ser humano; no caso da administração intramuscular considera-se adequada uma dose diária entre 0,01 e 20 mg do composto polipeptídico de fórmula geral I por Kg de massa corporal do ser humano; e no caso da administração oral considera-se adequada uma dose diária entre 0,5 e 50 mg do composto polipeptídico de fórmula geral I por Kg de massa corporal do ser humano para o tratamento ou prevenção de doenças infecciosas.

As Preparações e Exemplos seguintes são fornecidos com o

fim de ilustrar a presente invenção de forma mais pormenorizada.

Preparação 1

A 50 ml de metanol adicionaram-se 8,73 ml de cloreto de tionilo à temperatura de -5°C e agitou-se a mistura durante 10 minutos e em seguida adicionaram-se 5 g de D-2-(hidroxifenil)glicina sob arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura durante 12 horas à temperatura ambiente. Evaporou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida para se obter o cloridrato do éster metílico de D-2-(p-hidroxifenil)glicina, 6,3 g.

IV (Nujol) : 3380, 1720, 1580, 1250 cm'¹

RMN (DMSO-dg, á ) : 3,70 (3H, s), 5,11 (ÍH, s),

6,83 (2H, d, J=8,6Hz), 7,28 (2H, d, J=8,6Hz),

8,91 (2H, s), 9,93 (ÍH, s)

Preparação 2

A uma solução de 6,3 g do cloridrato do éster metílico de D-2-(p-hidroxifenil)glicina e 8,71 ml de trietilamina em 100 ml de tetra-hidrofurano adicionaram-se 6,82 g de dicarbonato de di-t-butilo. Agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente. Adicionou-se a mistura reaccional a 1 1 de éster dietílico e filtrou-se um material insolúvel formado e evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 6,83 g do éster metílico de N-(t~butoxicarbonil)-D-2-(p-hidroxifenil)glicina .

IV (Nujol) : 3420, 3350, 1720,	1660 cm
RMN (DMSO-dg, S )	: 1,38 (9H, s) ,	3,59	(3H, s),
5,05 (1H, d,	J=7,9Hz), 6,70	(2H,	d, J=8,5Hz),
7,16 (2H, d,	J=8,5Hz), 7,60	(1H,	d, J=7,9Hz),
9,48 (1H, s)

Preparação 3

A uma suspensão de 6,8 g do éster metílico de N-(t~butoxicarbonil)-D-2-(p-hidroxifenil)glicina e 1,84 g de carbonato de hidrogénio e potássio em 34 ml de dimetilformamida adicionaram-se 4,176 ml de brometo de octilo. Agitou-se a mistura durante 6 horas à temperatura de 60°C, Adicionou-se à mistura reaccional uma mistura de água e acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica e secou-se sob sulfato de magnésio. Filtrou-se o sulfato de magnésio e evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 6,96 g do éster metílico de N~(t~butoxicarbonil)-D-2-(p-octiloxifenil)-glicina.

IV (Nujol) : 1710, 1490, 1240, 1160 cm¹

RMN (DMSO-dg, á ) : 0,859 (3H, t, J=6,2Hz), 1,17-1,33 (10H, m), 1,38 (9H, s), 1,60-1,80 (2H, m),

3,59 (3H, s), 3,93 (2H, t, J=6,3Hz), 5,11 (1H, d, J=7,9Hz), 6,87 (2H, d, J=8,7Hz), 7,27 (2H, d,

J=8,7Hz), 7,68 (1H, d, J=7,9Hz)

Preparação 4

A uma solução aquosa de hidróxido de sódio 4N, 8,77 ml, adicionaram-se 6,9 g éster metílico de N-(t-butoxicarbonil)-D-2-(p-octiloxifenil)glicina e agitou-se durante 1 hora 30 minutos à temperatura ambiente. Adicionou-se à mistura reaccional uma mistura de água e acetato de etilo e adicionou-se em seguida ácido clorídrico IN para corrigir o pH da mistura para 3. Separou-se a fase orgânica e secou-se sob sulfato de magnésio. Filtrou-se o sulfato de magnésio e evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 3,9 g de N~(t-butoxicarbonil)-D-2-(p-octiloxifenil)-glicina.

RMN (DMSO-dg, S ) : 0,860 (3H, t, J=6,8Hz),

1,17-1,33 (10H, m), 1,38 (9H, s), 1,60-1,80 (2H,

m), 3,93 (2H, t, J=6,4Hz), 5,10 (1H, d,

J=8,2Hz), 6,87 (2H, d, J=8,7Hz), 7,28 (2H, d,

J = 8,7Hz) , 7,46 (1H, d, J = 8,2Hz)

Preparação 5

A uma solução de 1 g N-(t-butoxicarbonil)-D-2-(p-octiloxi~ fenil)glicina em 10 ml de acetonitrilo e 0,213 ml de piridina em 10 ml de acetonitrilo adicionaram-se 0,675 g de carbonato de Ν,N'-succinimidilo. Agitou-se a mistura durante 12 horas à temperatura ambiente. Adicionou-se à mistura reaccional uma mistura de água e acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica e secou-se sob sulfato de magnésio. Separou-se o sulfato de

magnésio por filtração e evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 0,92 g do éster succinimídico de N-(t-butoxicarbonil)-D-2~(p~octiloxifenil)-glicina.

IV (Nujol) : 3350, 1810, 1730, 1680 cm¹

RMN (DMSO-dg, £ ) : 0,862 (3H, t, J=6,7Hz), 1,17-1,33 (10H, m), 1,40 (9H, s), 1,60-1,80 (2H, m), 2,77 (4H, s), 3,97 (2H, t, J=6,5Hz), 5,54 (1H, d,

J=8,lHz), 6,91 (2H, d, J=8,7Hz), 7,39 (2H, d,

J=8,7Hz), 8,05 (1H, d, J=8,lHz)

Preparação 6

De um modo idêntico ao descrito na Preparação 2 obteve-se □ éster metílico de N-(t-butoxicarbonil)-L-tirosina.

IV (Nujol) : 3430, 3360, 1730, 1670, 1170 cm'¹

RMN (DMSO-dg, á ) : 1,33 (9H, s), 2,90 (2H, m),

3,59 (3H, s), 4,05 (1H, m), 6,65 (2H, d,

J=8,4Hz), 7,00 (2H, d, J=8,4Hz), 7,21 (1H, d,

J=8,0Hz), 9,22 (1H, s)

Preparação 7

De um modo idêntico ao descrito na Preparação 3 obteve-se 4 o ester metílico de 0 ~0ctil~N~(t-butoxicarbonil)-L-tirosina.

IV (Nujol) : 3350, 1735, 1685, 1250, 1170 cm

RMN (DMSO-dg, : 0,859 (3H, t, J = 6,7Hz),

1,20-1,30 (10H, m), 1,68 (2H, quinteto, J=7,3Hz),

2,82 (2H, m), 3,60 (3H, s), 3,91 (2H, t,

J=7,3Hz), 4,08 (1H, m), 6,81 (2H, d, J=8,6Hz),

7,12 (2H, d, J=8,6Hz), 7,25 (1H, d, J=8,0Hz)

Preparação 8

De um modo idêntico ao descrito na Preparação 4 obteve-se o4-Octil~N~(t~butoxicarbonil)-L-tirosina.

IV (Nujol) : 3400-2900 (br), 1700, 1240, 1160 cm’¹

RMN (DMSO-dg, á ) : 0,859 (3H, t, J=6,8Hz),

1,20-1,30 (10H, m), 1,32 (9H, s), 1,68 (2H, quinteto, J=7,0Hz), 2,67-2,95 (1H, m), 3,90 (2H, t, J=7,0Hz), 4,01 (1H, m), 6,81 (2H, d,

J=8,6Hz), 7,02 (1H, d, J=8,3Hz), 7,13 (2H, d,

J=8,6Hz)

Preparação 9

De um modo idêntico ao descrito na Preparação 5 obteve-se , 4 ester succinimidico de 0 -0ctil-N-(t-butoxicarbonil)-L-tirosina

IV (Nujol) : 3350, 1780, 1720, 1690 cm’¹

RMN (DMSO-dg, S ) : 0,860 (3H, t, J=6,7Hz),

1,20-1,30 (10Η, m), 1,32 (9H, s), 1,68 (2H, quinteto, J=7,0Hz), 2,82 (4H, s), 2,80-3,20 (1H,

m) , 3,92 (2H, t, J = 7,0Hz), 4,44 (1H, m), 6,81 (2H, d, J=8,5Hz), 7,22 (2H, d, J=8,5Hz), 7,60 (1H, d, J=8,3Hz)

Preparação 10 (1) Introduziu-se em 2 balões Erlenmeyer de 500 ml um meio de sementeira, 160 ml constituído por 4% de sacarose, 2% de farinha de semente de algodão, 1% de levedura seca, 1% de peptona, 0,2% de monofosfato de potássio, 0,2% de carbonato de cálcio e 0,1% de Tween (preparado em NAKARAI CHEMICAL LTD.) e esterilizou-se durante 30 minutos à temperatura de 121°C. Inoculou-se por meio de uma ansa sobre cultura inclinada Coleophoma sp. F-11899, em cada um dos meios e cultivou-se sob condições de agitação à temperatura de 25° C durante 4 dias.

Num fermentador de 30 litros verteu-se um meio de produção, 20 litros, constituído por 3% de Pine Dex #3 (Fabricado por Matsutani Chemical Ltd.) 1% de glicose, 1% de gérmen de trigo, 0,5% de farinha de semente de algodão, 2% de monofosfato de potássio, 1,5% de Na₂HP0₄.12H₂0, 0,01% de ZnS0₄.7H₂0 e 0,05% de Adekanol (agente anti-espuma preparado por Asahi Denka Co.,

Ltd.), e esterilizou-se à temperatura de 121°C durante 30 minutos .

Num meio de produção inocularam-se 320 ml do caldo resultante da cultura da sementeira e cultivou-se à temperatura de 25°C durante 4 dias sob agitação a 200 rpm e arejamento com 20 litros por minuto. Ao caldo de cultura assim obtido (20 litros) adicionou-se igual volume de acetona.

Após agitação ocasional à temperatura ambiente durante algum tempo, filtrou-se o caldo. Concentrou-se o filtrado in vacuo para eliminar a acetona. 0 filtrado aquoso, 10 litros, lavou-se com igual volume de acetato de etilo e extraiu-se por 2 vezes com 10 litros de n-butanol. A fase de n-butanol reunida foi concentrada in vacuo e o resíduo aplicado a uma coluna de 300 ml de gel de sílica 60, fabricado por E. Merck, e eluiu-se com uma mistura de solvente orgânico, por fases, constituída por diclorometano/metanol. Eluiram-se as fracções com actividade anti-Candida com a mistura solvente desde 3:1 até 1:1. Reuniram-se as fracções activas e concentraram-se in vacuo até à secagem. Dissolveu-se o resíduo em 15 ml de metanol aquoso a 50% e aplicou~se a uma coluna de 250 ml de ODSYMC GEL (fabricado por Yamamura Chemical Lab). Lavou-se a coluna com metanol aquoso a 50% e eluiu-se com metanol aquoso a 80%. Concentrou-se o eluato e purificou-se em seguida por cromatografia fraccional centrífuga CFC, utilizando um sistema solvente constituído por n-butanol/metanol/água (4:1:5) da fase estacionária superior e da fase móvel inferior em sentido descendente. As fracções reunidas que continham o composto pretendido, o composto principal, concentraram-se in vacuo e aplicaram-se a uma colurua de 35 ml de gel de sílica 60. Desenvolί-r

56veu-se a coluna com n-butanol/ácido acético/água (6:1:1). Reuniram-se as fracções activas e concentrou-se in vacuo até à secagem e dissolveu-se em seguida num pequeno volume de metanol aquoso a 50%. Fez-se passar a solução através de uma coluna de 3,5 ml de ODS YMC GEL. Lavou-se a coluna com metanol aquoso a 50% e eluiu-se com metanol. Concentrou-se o eluato até à secagem, dissolveu-se num pequeno volume de água e ajustou-se o pH para 7 com hidróxido de sódio 0,01N. Liofilizou-se a solução para se obter um pó branco do referido composto sob a forma do seu sal de sódio, aqui referido posteriormente como substância FR901379 (11 mg) .

A substância FR901379, tal como se obteve, apresentou as seguintes propriedades físico-químicas:

Aspecto:

Pó branco

Comportamento:

Substância neutra

Ponto de fusão:

215-221°C (dec.)

Rotação específica:

[ -20,3 (C: 0,5 , HgO)

Fórmula molecular:

Análise elementar:

Calculada : para	C	Η N 15ⁿ81 8	SO	21^Na
	C	51,17,	H	6,77,	N	9,36,	S	2	,68	(%)
Determinada :	C	49,61,	H	7,58,	N	7,65,	S	2	,14	(%)

Peso molecular:

EM-BARRE : 1219,5078 (Calculada para Cg^HggNgSOg^ + 2Na - H: 1219,5032)

Solubilidade:

Solúvel: metanol e água

Ligeiramente solúvel: acetato de etilo e acetona

Insolúvel: clorofórmio e n-hexano

Reacção de coloração:

Positiva: reacção ao vapor de iodo, reacção ao sulfato de cério, reacção ao cloreto férrico e reacção à ninidrina

Negativa: reacção de Dragendorff e reacção de Ehrlich

Cromatografia em camada fina (CCF):

Fase estacionária	Solvente de processamento	Valor de RF
Gel de sílica *	n-butanol: ácido acético;
	água (3:1:1)	0,36
	acetato de etilo: álcool
	isopropílico: água (5:3:1)	0,31

* Gel de sílica 60 (preparado por E. Merck)

-58Espectro de absorção no Ultravioleta:

(Ej'_c ^um) : 207(169), 276(13,5), 225(sh),

283(sh) nm 'lcm' λ:metanol+0,OlN-NaOH _(£1% ₎ . _2Qg(232)j 244(59,5), ^{max lcm} 284(13,5), 294(sh) nm

Espectro de absorção no infravermelho:

KBr max

3350, 2920, 2840, 1660, 1625, 1530, 1510,

1435, 1270, 1240, 1070, 1045, 800, 755,

710 cm

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica:

(CD_qOD, 400MHz) á

7,30	(1H,	d, J	= 2Hz)	, 7,	03 (1H, dd, J=8 e 2H	z) ,
6,85	(1H,	d, J	= 8Hz)	, 5,	23 (1K, d, J=3Hz),
5,06	(1H,	d, J	= 4Hz)	i 4,	93 (1H, d, J=3Hz),
4,59-	4,51	(3H,	m) ,	4,47	-4,35 (5H, m), 4,29	(1H,
dd, J	= 6 e	2Hz)	, 4,	17 (1	H, m), 4,07 (1H, m),
3,95-	3,89	(2H,	m) ,	3,76	(1H, d largo, J=llHz	) ,
3,36	(1H,	m) ,	2,75	(1H,	dd, J=16 e 4Hz),
2,50	(1H,	m) ,	2,47	(1H,	dd, J = 16 e 9Hz) ,
2,38	(1H,	m) ,	2,21	(2H,	m), 2,03-1,93 (3H,	m) ,
1,57	(2H,	m) ,	1,45	-1,20	(24H, m) , 1,19 (3H,	d,
J = 6Hz	:) ,	1,08	(3H,	d, J =	6Hz) , 0,90 (3H, t, J	=7Hz)

A partir da análise das propriedades físicas e químicas citadas anteriormente e dos resultados de posterior investigação quanto à identificação da estrutura química, identificou-se a substância FR901379 como apresentando a estrutura química designada em seguida:

Exemplo 1

Eliminou-se o grupo N-acilo da substância FR901379 por reacção com uma enzima. Em seguida ê pormenorizado este processo de eliminação.

(1) Fermentação de Actinoplanes utahensis

A enzima útil para a eliminação do grupo N-acilo da substância FR901379 ê produzida por certos microrganismos das Actinoplanaceae, de preferência um microrganismo Actinoplanes utahensis IFO-13244.

Preparou-se a cultura de stock de Actinoplanes utahensis IFO-13244 e manteve-se em agar inclinado. Inoculou-se uma ansa de cultura inclinada em meio de sementeira constituído por 1% de amido, 1% de sacarose, 1% de glicose, 1% de farinha de semente

-60de algodão, 0,5% de peptona, 0,5% de farinha de soja, e 0,1% de carbonato de cálcio. Inoculou-se um meio vegetativo e incubou-se num balão Erlenmeyer de boca larga de 225 ml, à temperatura de 30°C durante cerca de 72 horas, num agitador rotativo.

Este meio vegetativo incubado foi utilizado directamente para inocular no meio de produção constituído por 2% de sacarose, 1% de amendoim em pó, 0,12% de fosfato dipotássico, 0,05% de fosfato monopotássico, e 0,025% de MgSO^./HgO. 0 meio de produção inoculado foi mantido a fermentar num fermentador de 30 litros a uma temperatura de 30°C durante cerca de 80 horas. Agitou-se um meio de fermentação com um agitador convencional a 250 rpm e arejou-se com 20 litros por minuto. Recolheu-se o micélio vegetativo do caldo de fermentação por filtração e lavou-se 1 vez com água. 0 micélio lavado foi utilizado directamente como fonte de enzima para eliminar grupo N~acilo da substância

FR901379.

(2) Eliminação

Dissolveu-se a substância FR901379 em tampão de fosfato 0,25M a pH 6,5 com uma concentração de 0,9 mg/ml. A uma solução de 36 litros adicionaram-se 2 Kg de micélio lavado (peso húmido) de Actinoplanes utahensis IFO-13244. Realizou-se a reacção de eliminação à temperatura de 37°C durante 23 horas. A redução da substância FR901379 e o aumento de substância FR901379 desacilada (posteriormente referida aqui como substância FR133303) foi

avaliada por CLER de fase inversa. 30 g da substância FR901379 permitiu a obtenção de 22,2 g de substância FR133303 que se formou na mistura reaccional.

(3) Isolamento da substância FR133303

A mistura reaccional descrita anteriormente foi filtrada através de um dispositivo de filtração. Separou-se a placa de micélio. 0 filtrado obtido deste modo fez-se passar através duma coluna de carvão activado (2L). Lavou-se a coluna com 6 1 de água e eluiu~se com 12 1 de acetona aquosa a 50%. Evaporou-se o eluato sob vácuo para eliminar a acetona e em seguida fez-se passar através de uma coluna de 4 1 de GEL YMC ODS-AM 120-S50 (Yamamura Chemical Labs). Lavou-se a coluna com água e eluiu-se com acetonitrilo aquoso a 2% contendo fosfato monossódico 50 mM. Controlou-se a eluição por CLER utilizando-se uma coluna LiChrospher 100 RP-18 (Cica-MERCK) e um sistema de solventes de acetonitrilo aquoso a 3% contendo di-hidrogeno fosfato de amónio, com um débito de 1 ml/rnin, detectando-se a substância FR133303 por ultravioleta a 210 nm. Reuniram-se as fracções contendo a substância FR133303 e fizeram-se passar através de uma coluna de 400 ml de carvão activado. Lavou-se a coluna com água e eluiu-se com acetona a 50%. Concentrou-se □ eluato in vácuo para se eliminar a acetona e liofilizou-se obtendo-se 16,4 g da substância FR133303 sob a forma de um pó branco.

A substância FR133303 apresentou as propriedades químicas seguintes:

-62Aspecto:

Pó branco

Ponto de fusão:

150-160°C (dec.)

Rotação específica:

£<* 7²⁴D -31,17 (C:l,0, H₂0)

Fórmula molecular:

^C35^H51^N8^S020^Na

Análise elementar:

Calculado : para CggHg^NgS02gNa

C 43,84, H 5,36, N 11,69, S 3,34 (%) Determinado : C 41,14, H 5,74, N 10,88, S 3,10 (%)

Solubilidade:

Solúvel: água

Ligeiramente solúvel: metanol

Insolúvel: n-hexano

Reacções de coloração:

Positiva: reacçâo ao vapor de iodo, reacçâo ao sulfato de cério, reacçâo à ninidrina

Negativa: reacçâo de Molish

Cromatografia em camada fina (CCF):

Fase estacionária	Solvente de processamento	Valor de RF
Gel de sílica *	n-butanol: ácido acético;
	água (3:1:2)	0,15

* Gel de sílica 60 (preparado por E. Merck)

Espectro de absorção no Ultravioleta: χ^Η2° max ^{: 201(340)}> 273(18), 224(sh),

281(sh) nm

H₂0+0,01N-Na0H max ^(El^%cm^{) : 207}<⁴¹⁴)’ 243(122),

292 (34)

Espectro de absorção no infravermelho:

KBr

V : 3350, 2920, 1660, 1625, 1515, 1440, 1270, max

1080, 1045, 800, 755, 715 cm¹

Espectro de ressonância magnética nuclear protónico:

(D₂0, 400MHz) & : 7,31 (1H, d, J=2Hz), 7,12 (1H, dd, J=2Hz e

8Hz), 7,06 (1H, d, J=8Hz), 5,40 (1H, d, J=3Hz),

5,04 (1H, d, J=3,5Hz), 4,94 (1H, d, J=6Hz),

4,73-4,55 (3H, m), 4,51-4,38 (4H, m), 4,31-4,23

-64(3Η, m), 4,11-4,06 (2H, m) , 3,94-3,89 (2H, m) , 3,41 (ÍH, m), 2,60-2,34 (5H, m) , 2,14 (1H, m), 2,03 (ÍH, m), 1,28 (3H, d, J = 6Hz) , 1,01 (3H, d, J=6,5Hz)

Espectro de ressonância magnética nuclear C :

(D₂0, 100MHz)

178,3	(s)	, 175,	9 (s)	, 174	,3 (s), 17	4,2 (s),
174,0	(s)	, 171,	8 (s)	, 171	,3 (s), 15	0,9 (s),
141,5	(s)	, 134,	4 (s)	, 128	,2 (d), 12	4,5 (d),
120,3	(d)	, 78,1	(d),	77,0	(d), 76,9	(d), 76,6
(d) ,	72,9	(d) ,	72,8	(d) ,	71,2 (d),	69,3 (d),
69,2	(d) ,	63,7	(d) ,	60,1	(d), 58,3	(t), 58,0
(d),	56,9	(d),	55,3	(d),	54,7 (t),	41,8 (t),
39,7	(d) ,	39,5	(t) ,	33,5	(t), 21,4	(q), 13,3 (q)

A estrutura química da substância FR133303 foi identificada e apresenta-se como segue:

Exemplo 2 (1) Adicionou-se uma solução de 19,2 g de ácido 4-hidroxibenzóico em 120 ml de hidróxido de sódio a 10%, gota a gota, a 480 ml de dimetil sulfóxido, durante 30 minutos mantendo-se a temperatura da mistura reaccional controlada entre 30 e 40°C. Após a adição, arrefeceu-se a solução para uma temperatura entre 17 e 20°C. Adicionou-se à solução 28,95 g de 1-bromooctano, gota a gota, durante 30 minutos e agitou-se a mistura reaccional fortemente durante 4 horas à temperatura ambiente. Verteu-se a mistura reaccional sobre 1200 ml de água arrefecida com gelo e acidificou-se com 40 ml de ácido clorídrico concentrado. Após agitação vigorosa durante mais uma hora eliminou-se por filtração o sólido resultante e dissolveu-se em 60 ml de acetonitrilo. Submeteu~se a solução a refluxo durante 30 minutos e manteve-se durante a noite à temperatura ambiente obtendo-se 13,8 g de ácido 4-octiloxibenzóico, sob a forma de cristais P. F. 96°C, Anal. Calcd. para : C 71,97, H 8,86,

Determ.: C 71,30, H 8,89.

A uma solução de 13,8 g de ácido 4-octiloxibenzóico em 552 ml de éter dietilico adicionaram-se 10,87 g de 2,4,5-tricloro~ fenol e 11,37 g de N,N'-diciclo-hexilcarbodiimida.

Agitou-se a solução sob atmosfera de azoto durante 18 horas à temperatura ambiente. Retirou-se o precipitado por filtração e concentrou-se o filtrado in vacuo. Dissolveu-se o resíduo c

-66em éter do petróleo e manteve-se em água arrefecida com gelo. Os cristais resultantes, 15,2 g, filtraram-se e dissolveram-se em 150 ml de n-hexano aquecido. Após repouso durante a noite à temperatura ambiente, retirou-se por filtração os cristais resultantes. Concentrou-se o filtrado até obtenção de um óleo que se purificou por cromatografia em coluna sobre gel de sílica utilizando-se uma mistura de acetato de etilo e n-hexano para se obterem 7,58 g de 4-octiloxibenzoato de 2,4,5-triclorofenilo.

P. F. 53°C, Anal. Calcd. para C^HggOgClg : Cl 24,75,

Determ. : Cl 24,05.

(2) A uma solução de 2,04 g da substância FR133303 em 60 ml de dimetilformamida adicionaram-se 2,04 g de 4-octiloxibenzoato de 2,4,5-triclorofenilo e 0,283 g de 4-dimetilaminopiridina. Agitou-se a solução sob atmosfera de azoto à temperatura ambiente durante 15 horas. Adicionaram-se 0,20 g de 4-dimetilaminopiridina a esta solução e agitou-se a mistura durante mais 24 horas. Verteu-se a mistura reaccional em 600 ml de água e ajustou-se o pH para 6. Lavou-se a mistura por duas vezes com igual volume de acetato de etilo e concentrou-se para 30 ml. Aplicou-se o concentrado sobre uma coluna de 150 ml de DEAE-Toyopearl (tipo Cl, preparado por Tosoh). Lavou-se a coluna com metanol aquoso a 50% e desenvolveu-se com metanol aquoso a 50% contendo uma solução aquosa de cloreto de sódio 1M. Analizou-se o produto de diluição pelo mesmo sistema de CLER como descrito no Exemplo 1(3) excepto na concentração do acetonitrilo em solvente que foi de 40%. Reuniram-se as fracções contendo o composto pretendido e evaporaram-se

in vacuo para se eliminar o metanol. A solução foi absorvida por uma coluna de 1 1 de YMC GEL ODS-AM 120-S50 a fim de eliminar o sal. Lavou-se a coluna com água e eluiu-se com acetonitrilo aquoso a 30%. Evaporou-se o eluato in-vacuo para eliminar o acetonitrilo e liofilizou-se para se obter o composto pretendido, aqui referido posteriormente como substância FR131535, 1,4 g sob a forma de um pó branco.

A substância FR131535 apresentou as seguintes:

propriedades químicas

Aspecto:

pó branco

Ponto de fusão:

170-189°C (com decomposição)

Rotação específica:

foO²°D -14,4° (C:10, H₂0)

Fórmula molecular:

^C50^H71^N8^S°22^Na

Análise elementar:

Calcd. : para CggH^NgSO^Na. 6H₂0

C 46,22, H 6,44, N 8,62, S 2,46, Na 1,77 (%) Determ.: C 46,80, H 6,13, N 8,78, S 1,96, Na 1,81 (%)

Solubilidade :

Solúvel: água

Ligeiramente solúvel: acetona

Insolúvel: n-hexano

Reacções de coloração:

Positivas: reacção ao vapor de iodo, reacção ao sulfato de cério

Cromatografia em camada fina (CCF):

Fase estacionária	Solvente de processamento	Valor de RF
Gel de sílica*	n-butanol: ácido acético: água (6:1:1)	0,21

* Gel de sílica 60 (preparado por E. Merck)

Espectro de absorção no infravermelho:

KBr

: 3330,	2900,	2850,	1620,	1500,	1430,	1270,
max
1250,	1170,	1110,	1080,	1040,	960,	940,
880,	840,	800, 750	, 710	cm”¹

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica: (CDgOD, 200MHz)

7,78	(2H, d, J=8Hz) ,	7,31 (1H, d, J=2Hz),	7,03
(1H,	dd, J=2Hz e 8Hz),	6,96 (2H, d, J=8Hz)
6,87	(1H, d, J=8Hz),	5,33 (1H, d, J = 3Hz) ,	5,08

(1Η, d, J=4Hz), 4,99 (1H, d, J=3Hz), 4,80-3,20 (17H, m), 2,83 (1H, m) , 2,65-2,30 (4H, m),

2,22-1,90 (2H, m) , 1,79 (2H, m), 1,56-1,25 (10H, m) , 1,19 (3H, d, J = 6Hz), 1,06 (3H, d, J = 6,5Hz),

0,90 (3H, t, J=5Hz)

A estrutura química da substância FR131535 foi identificada e designada como segue:

HO

Em seguida apresentam-se as estruturas dos compostos consignados nos Exemplos de 3 a 11.

Exemplo N⁹	Composto N⁹	R
3	FR138260	-COCH-^^-O (CH₂) _?CH₃NHCOO^Bu
4	FR138727	-COCH-^^-O (CH₂) ₇CH₃nh₂
5	FR138364	-COCHCH₂-^2^“° c CH₂ ⁾ 7^CT3 NHCOO^u
6	FR138261	-COO^Bu
7	FR138363	-coch₃

8	FR138728	-COCH₂Br
9	FR138538	-coo-θ
10	FR138539	-COC —,-N ¹ t Jk CH₃O-N nh₂
11	FR138365	-°2^SO-^CS3

Exemplo 3

A uma solução de 1 g da substância FR133303 e 0,596 g do éster succinimídico de N-(t-butoxicarbonil)-D-2-(p-octiloxifenil)-glicina em 3 ml de dimetilformamida adicionaram-se 0,165 g de dimetilaminopiridina. Agitou-se a mistura durante 12 horas à temperatura ambiente. Adicionou-se a mistura reaccional a 30 ml de água e em seguida ajustou-se o pH para 6. Lavou-se a solução aquosa com acetato de etilo e submeteu-se a uma cromatografia de permuta ióhica em DEAE-Toyopearl (Cl Q ) (60 ml) e eluiu-se com metanol a 50% numa solução aquosa IN de cloreto de sódio. Reuniram-se as fracções contendo o composto pretendido e evaporaram-se sob pressão reduzida para se eliminar o metanol. Corrigiu-se o pH da solução aquosa para 4,5 com ácido clorídrico IN e submeteu-se a uma cromatografia em coluna Diaion HP-20 (Marca Registada, preparada por Mitsubishi Chemical Industries) de 130 ml e eluiu-se com metanol

aquoso a 80%. As fracções que continham o composto pretendido foram reunidas e evaporadas sob pressão reduzida para eliminar o metanol. Liofilizou-se o resíduo para se obterem 0,77 g do composto acilado aqui referido posteriormente como substância FR138260.

IV (Nujol) : 3300, 1660, 1500, 1240, 1045, 800,

720 cm~l

RMN (CDgOD, & ) : 0,92 (3H, t, J=6,8Hz), 1,05 (3H, d,

J = 6,8Hz), 1,17-1,33 (13H, m), 1,43 (9H, s) ,

1.6- 1,8 (2H, m), 1,9-2,1 (3H, m), 2,50 (3H, m) ,

2,75 (1H, dd, J=16Hz e 4Hz), 3,35 (1H, m),

3.7- 3,8 (1H, m), 3,93 (2H, t, J=6,2Hz), 3,9-4,2 (5H, m), 4,3-4,5 (5H, m), 4,5-4,7 (3H, m), 4,97 (1H, d, J=3Hz), 5,05 (1H, d, J=4Hz), 5,11 (1H,

s), 5,30 (1H, d, J = 3Hz) , 6,85 (1H, d, J = 8,3Hz),

6,86 (2H, d, J=8,6Hz), 7,02 (1H, d, J=8,3Hz),

7,26 (2H, d, J=8,6Hz), 7,31 (1H, s)

EM-BAR : e/z = 1343 (M + Na)

Exemplo 4

Adicionaram-se 0,25 g da substância FR138260, obtida no Exemplo 3, a 1,25 ml de ácido trifluoroacético e agitou-se durante 10 minutos. Adicionou-se a mistura reaccional a 30 ml de água e ajustou-se o pH para 4,5 com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. Submeteu-se a solução aquosa a cromato-

grafia em coluna Diaion HP-20 (100 ml) e eluiu-se com metanol aquoso a 80%. Reuniram-se as fracções que continham o composto pretendido e evaporaram-se sob pressão reduzida para eliminação do metanol. Liofilizou-se o resíduo para se obterem 15 ml do composto pretendido, referido aqui posteriormente como substância FR138727.

RMN (CDgOD, b ) : 0,90 (3H, t, J=6,8Hz), 1,05 (3H, d, J=6,8Hz), 1,17-1,33 (13H, m), 1,6-1,8 (2H, m), 1,9-2,1 (3H, m), 2,50 (ÍH, m), 2,75 (1H, dd,

J=16Hz e 4Hz) , 3,40 (1H, m), 3,7-3,8 (1H, m),

3,98 (2H, t, J=6,2Hz), 3,9-4,2 (5H, m), 4,3-4,5 (5H, m) , 4,5-4,7 (3H, m), 4,97 (1H, d, J = 3Hz),

5,06 (ÍH, s), 5,20 (1H, d, J = 3Hz) , 5,40 (1H, d,

J = 3Hz) , 6,85 (ÍH, d, J = 8,3Hz), 6,95 (2H, d,

J = 8,5Hz) ,	7,02	(1H,	d, J=8,3Hz), 7,30 (ÍH, d,
J=8,5Hz),	7,44	(1H,	s)
EM-BAR : e/z =	1259	(M +	K)

Exemplo 5

Obteve-se a substância FR138364 fazendo-se reagir a substân4 cia FR133303 com o éster succinimídico de 0 -octil-N-(t-butoxi~ carbonil)-L-tirosina, por um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1660, 1620, 1240, 1050 cm

RMN (CDgOD, & ) : 0,904 (3H, t, J=6,8Hz), 1,06 (3H, d, J=6,8Hz), 1,17 (3H, d, J=6,7Hz), 1,20-1,30 (10H, m), 1,35 (9H, s), 1,74 (2H, quinteto,

J = 6,5Hz), 1,9-2,1 (3H, m), 2,45 (3H, m) , 2,76 (1H, dd, J = 16Hz e 4Hz) , 3,0-3,1 (2H, m) , 3,37 (1H, m), 3,77 (1H, d, J=llHz), 3,92 (2H, t,

J = 6,8Hz), 3,9-4,2 (7H, m), 4,3-4,5 (5H, m) ,

4,5-4,6 (3H, m) , 4,94 (1H, d, J = 3Hz) , 5,05 (1H, d, J = 3,8Hz), 5,31 (1H, d, J = 3Hz) , 6,79 (2H, d, J=8,5Hz), 6,85 (1H, d, J=8,3Hz), 7,03 (1H, dd,

J=8,3Hz e 2Hz), 7,12 (2H, d, J=8,5Hz), 7,31 (1H, d, J=2Hz)

EM-BAR : e/z = 1357 (M + Na)

Exemplo 6

Preparou-se uma solução de 0,5 g da substância FR133303 numa mistura de 5 ml de água e 5 ml de tetra-hidrofurano e ajustou-se o pH para o valor 7 com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e em seguida adicionaram-se 0,114 g de carbonato de N,N-di~t-butilo à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura durante 5 horas à temperatura ambiente mantendo-se o pH 7 com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. Adicionou-se a mistura reaccional à água e corrigiu-se o pH para 6. Lavou-se a solução aquosa com acetato de etilo e submeteu-se a uma crornato-

grafia de permuta iónica em DEAE-Toyopearl (Cl~), 30 ml e eluiu~se com metanol a 50% em solução aquosa 1M de cloreto de sódio. Reuniram-se as fracções que continham composto pretendido e evaporaram-se sob pressão reduzida para eliminar o metanol. Corrigiu~se o pH da solução aquosa para 4,5 com ácido clorídrico IN e submeteu-se a uma cromatografia em coluna de Diaion HP-20 (100 ml) e eluiu-se com metanol aquoso a 50%. Reuniram-se as fracções que continham o composto pretendido e evaporaram-se sob pressão reduzida para eliminar o metanol. Liofilizou-se o resíduo para se obterem 0,145 g do composto acilado, referido aqui posteriormente como substância FR138261.

IV (Nujol) : 3300, 1660, 1620, 1240, 1050 cm'¹

RMN (CD₃0D, 8 ) : 1,06 (3H, d, J=6,8Hz), 1,18 (3H, d, J=6,0Hz), 1,40 (9H, s), 1,9-2,1 (3H, m), 2,44

(3H,	m), 2,82	(1H,	dd, J=16Hz e 4Hz),	3,37
(1H,	m) , 3,75	(1H,	d, J=llHz), 3,89-4	(2H, m),
4,10	(1H, m) ,	4,15	(1H, m), 4,29 (1H,	dd, J=6Hz

e 2Hz), 4,36-4,45 (5H, m), 4,5-4,6 (3H, m), 4,97 (1H, d, J=3Hz), 5,06 (1H, dd, J=8,2Hz e 4Hz) , 5,33 (1H, d, J = 3Hz), 6,85 (1H, d, J=8,3Hz), 7,03 (1H, dd, J=8,3Hz e 2Hz), 7,30 (1H, d, J=2Hz), 7,50 (1H, d, J=8,2Hz)

EM-BAR : e/z = 1081 (M + Na)

Exemplo 7

Obteve-se a substância FR138363 fazendo-se reagir a substância FR133303 com cloreto de acetilo aplicando-se um método idêntico ao descrito no Exemplo 6.

IV (Nujol) : 3300, 1620, 1250, 1040 cm'¹

RMN (CDgOD, & ) : 1,06 (3H, d, J=6,8Hz), 1,20 (3H, d,

J=6Hz), 1,78-2,05 (3H, m), 1,96 (3H, s),

2,21-2,54 (3H, m), 2,95 (1H, m), 3,35-3,42 (1H, m), 3,58-4,42 (11H, m), 4,50-5,05 (5H, m), 5,23 (1H, m), 6,88 (1H, d, J=8,3Hz), 7,05 (1H, dd,

J=8,3Hz e 2Hz), 7,35 (1H, d, J=2Hz)

EM-BAR : 1023 (M + Na)

Exemplo 8

Obteve-se a substância FR138728 fazendo-se reagir a substância FR133303 com cloreto de 2-bromoacetilo aplicando-se um método idêntico ao decrito no Exemplo 6.

IV (Nujol) : 3300, 1660, 1620, 1500, 1220, 1040 cm'¹

RMN (CDgOD, & ) : 1,06 (3H, d, J=6,9Hz), 1,17 (3H, d, J=6,lHz), 1,9-2,1 (3H, m), 2,50 (3H, m), 2,80 (1H, dd, J=16Hz e 4Hz), 3,37 (1H, m), 3,6-4,0 (5H, m) , 4,09 (1H, m), 4,16 (1H, m), 4,29 (1H, dd, J=6Hz e 2Hz), 4,36-4,45 (5H, m), 4,5-4,7

(3Η, m), 4,97 (1H, d, J=3Hz), 5,04 (1H, dd, J = 8,6Hz e 4Hz) , 5,25 (1H, d, J = 3,lHz), 6,85 (1H, d, J=8,3Hz), 7,03 (1H, dd, J=8,3Hz e 2,1Hz), 7,31 (1H, d, J = 2Hz) , 7,52 (1H, d, J=8,6Hz)

FAB-MS : e/z = 1103 (M + Na)

Exemplo 9

Obteve-se a substância FR138538 fazendo-se reagir a substância FR133303 com cloreto de benzoílo aplicando-se um método idêntico ao descrito no Exemplo 6

IV (Nujol) : 3300, 1640, 1240 cm'¹

RMN (CDgOD, é ) : 1,05 (3H, d, J = 6,8Hz), 1,18 (3H, d,

J = 6Hz) , 1,89-2,12 (3H, m), 2,31-2,53 (3H, m) ,

2.75 (1H, dd, J=12Hz e 4Hz), 3,38 (1H, m),

3.76 (1H, d, J=llHz), 3,87-3,98 (1H, m) ,

4,02-4,18 (2H, m), 4,22-4,32 (4H, m), 4,37-4,40 (3H, m), 4,49-4,62 (3H, m), 4,98 (1H, m), 5,02 (1H, m), 5,37 (1H, d, J=3Hz), 6,85 (1H, d,

J=8,3Hz),	7,04	(1H,	dd, J=8,3Hz e 2Hz),
7,11-7,50	(6H,	m)
EM-BAR : e/z =	1101	(M +	Na)

Exemplo 10

Obteve-se a substância FR138539 fazendo-se reagir a substância FR133303 com ácido 2-(2-aminotiazol-4-il)-2-metoxiiminoacé~ tico aplicando-se um método idêntico ao descrito no Exemplo 6.

IV (Nujol) : 3300, 1650, 1620, 1520, 1260, 1040 cm

RMN (CDgOD, b ) : 1,05 (3H, d, J=6,8Hz), 1,21 (3H, d, J=5,9Hz), 1,89-2,21 (3H, m), 2,29-2,61 (3H, m),

2,78-2,89 (1H, m), 3,32-3,42 (1H, m), 3,76-3,82
(1H, m), 3,91-4,01	(2H, m), 3	,95	(3H,	s) , 4,13
(1H, m), 4,16 (1H ,	m), 4,24-4	,27	(1H,	m) ,
4,32-4,43 (5H, m) ,	4,46-4,62	(3H,	m) ,	4,97-4,99

(1H, m), 5,08 (1H, m), 5,41 (1H, m), 6,79 (1H, s) , 6,86 (1H, d, J = 8,lHz), 7,04 (1H, dd, J = 8,ÍHz e 2Hz), 7,31 (1H, d, J=2Hz), 7,51 (1H, d,

J=7Hz)

EM-BAR : e/z = 1143 (M⁺)

Exemplo 11

Obteve-se a substância FR138365 fazendo-se reagir a substância FR133303 com cloreto de tosilo aplicando-se um método idêntico ao descrito no Exemplo 6

IV (Nujol) : 3300, 1650, 1620, 1260, 1060 cm

RMN (CDgOD, <$ ) : 0,75 (3H, d, J = 6,8Hz), l',07 (3H, d, J = 6,0Hz), 1,61-1,79 (1H, m), 1,91-2,05 (3H, m) , 2,30-2,59 (3H, m), 3,36 (1H, m), 3,68 (1H, d,

J = llHz), 3,81-4,07 (4H, m), 4,22 (1H, m) , 4,32-4,40 (5H, m) , 4,42-4,60 (3H, m), 4,7 (1H, m), 5,0 (1H, m), 5,42 (1H, d, J = 3Hz) , 6,85 (1H, d, J = 8,3Hz), 7,03 (1H, dd, J = 8,3Hz e 2Hz) , 7,29-7,33 (3H, m), 7,75 (1H, d, J=8,3Hz)

EM-BAR : e/z = 1135 (M + Na)

Preparação 11

A uma solução de 1 g de ácido 6-hidroxi-2-naftóico numa mistura de 4,25 ml de solução aquosa de hidróxido de sódio a 10% em 17 ml de dimetilsulfóxido adicionou-se 0,918 ml de brometo de octilo. Agitou-se a mistura durante 6 horas à temperatura de 60°C.

Adicionou-se a mistura reaccional a uma mistura de acetato de etilo e água e corrigiu-se o pH para 3 com ácido clorídrico concentrado. Separou-se a fase orgânica e secou-se com sulfato de magnésio. Separou-se o sulfato de magnésio por filtração e evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 0,91 g de ácido 6-octiloxi~2-naftóico.

IV (Nujol) : 1670, 1620, 1210 cm

RMN (DMSO-dg,^) : 0,86 (3H, t, J=6,7 Hz), 1,2 - 1,6 (10H, m), 1,78 (2H, m), 4,10 (2H, t, J=6,7 Hz), 7,19 (1H, dd, J=2,3 e 8,8 Hz), 7,36 (1H, d, J=2,3 Hz), 7,83 (1H, d, J=8,8 Hz), 7,97 (2H, d, J=8,8 Hz), 8,52 (1H, s)

Preparação 12

A uma solução de 0,85 g de ácido 6-octiloxi-2~naftóico e de 0,382 g de 6-hidroxi-lH-benzotriazol em 26 ml de acetato de etilo, adicionaram-se 0,703 g de cloridrato de l-etil~3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. Agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente.

Adicionou-se a mistura reaccional à água e separou-se a fase orgânica que se lavou com água e com uma solução aquosa de cloreto de sódio. Em seguida secou-se a fase orgânica sob sulfato de magnésio e separou-se o sulfato de magnésio por filtração evaporando-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 0,74 g de 3~óxido de 1-(6-octiloxi-2-naftoil)-lH-benzotriazol.

IV (Nujol) : 1770, 1740, 1620, 1190, 1020, 740 cm¹

RMN (CDClg, á ) : 0,90 (3H, t, J=6,8Hz), 1,2 - 1,6 (10H, m), 1,89 (2H, m), 4,14 (2H, t, J=6,8Hz),

7,1-7,3 (2H, m), 7,4-7,6 (3H, m) , 7,8-8,0 (2H, m), 8,1-8,2 (2H, m), 8,80 (1H, s)

Apresenta-se em seguida a descrito no Exemplo 12

fórmula de estrutura do composto

Exemplo 12

Uma solução de 0,5 g da substância FR133303 e 0,271 g de 3-óxido de 1-(6-octiloxi~2-naftoil)-IH-benzotriazol em 1,5 ml de Ν,Ν-dimetilformamida adicionaram-se 0,0828 de 4-dimetilaminopiridina. Agita-se a mistura durante 12 horas à temperatura ambiente .

Adicionou-se a mistura reaccional à água e corrigiu-se o pH para 6. Lavou-se a solução aquosa com acetato de etilo e submeteu-se a uma cromatografia de permuta iónica sobre 30 ml de DEAE-Toyopearl (Cl~), que se eluiu com uma solução de metanol a 50% em solução de cloreto de sódio 1M. Reuniram-se as fracções que continham o composto pretendido e evaporaram-se sob pressão reduzida para eliminar o metanol. Corrigiu-se o pH da solução aquosa para 4,5 com ácido clorídrico IN e submeteu-se a uma coluna de cromatografia Diaion HP-20 (65 ml) eluindo-se com metanol aquoso a 80%. Reuniram-se as fracções contendo o composto pretendido e evaporaram-se sob pressão reduzida para eliminar o metanol. Liofilizou-se o resíduo para se obterem 0,214 g do composto acilado, referido aqui posteriormente como substância FR139687.

IV (Nujol) : 3300, 1620, 1500 cm^-1

RMN (DMSO-dg + D₂0, & ) : 0,86 (3H, t, J=6,8Hz), 0,97 (3H, d, J=6,8Hz), 1,06 (3H, d, J=6,8Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,6-2,0 (5H, m), 2,2-2,5 (3H, m),

2,4-2,6 (1H, m), 3,18 (1H, m), 3,6-3,9 (1H, m) ,

4,0-4,6 (15H, m), 4,84 (1H, d, J=3Hz) ,

4,90 (1H, d, J = 3Hz) , 5,11 (1H, d, J = 3Hz), 6,76 (1H, d, J=8,3Hz), 6,93 (1H, d, J=8,3Hz), 7,13 (1H, s) , 7,25 (1H, d, J = 8,3Hz), 7,39 (1H, s), 7,8-8,0 (3H, m), 8,44 (1H, s)

EM-BAR e/z = 1264 (M+Na)

Os compostos que seguem (Preparações de 13 a 16) foram obtidos de uma forma idêntica à descrita na Preparação 5.

Preparação 13

Ester succinimídico de N-(t~butoxicarbonil)-L-2-(2-naftil)glicina

IV (Nujol) : 3350, 1800, 1770, 1730, 1680, 1500,

1200 cm'¹

Preparação 14

Acetato succinimídico de 2-4~bifenililo

IV (Nujol) : 1800, 1770, 1720, 1200 cm¹

RMN (DMSO-dg, 8 ) : 2,82 (4H, s), 4,17 (2H, s),

7,30-7,50 (5H, m), 7,45 (2H, d, J=8,lHz),

7,67 (2H, d, J=8,lHz)

Preparação 15

4-t-butilbenzoato de succinimida

IV (Nujol) : 1760, 1730, 1200, 1070, 990 cm¹

RMN (DMSO-dg, 8 ) : 1,33 (9H, s), 2,89 (4H, s), 7,68 (2H, d, J=8,5Hz), 8,03 (2H, d, J=8,5Hz)

Preparação 16

-844-(4-fenilbutoxi)benzoato de succinimida

IV (Nujol) : 1730, 1600, 1240, 1170, 1070 cm¹

RMN (DMSO-dg, £ ) : 1,75 (4H, m), 2,65 (2H, m) ,

4,14 (2H, m), 7,15 (2H, d, J=8,9Hz),

7,13-7,35 (5H, m), 8,03 (2H, d, J=8,9Hz)

Preparação 17

Em 5 ml de 3,7~dimetiloctanol, tal qual, adicionaram-se 1,01 ml de tribrometo fosforoso. Agitou-se a mistura durante 4 horas à temperatura de 60°C. Adicionou-se a mistura reaccional a uma mistura de água e n~hexano. Separou-se a fase orgânica e secou-se com sulfato de magnésio que se eliminou por filtração e evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 4,40 g de brometo de 3,7-dimetiloctilo

IV (puro) : 2900, 1450 cm¹

RMN (CDClg, è ) : 0,87 (6H, d, J=6,6Hz), 0,89 (3H, d,

J = 6,4Hz), 1,1-1,3 (6H, m) , 1,5-1,9 (4H, m) ,

3,3-3,5 (2H, m)

Os compostos seguintes das Preparações de 18 a 23 foram obtidos mediante a aplicação de um método idêntico ao descrito na Preparação 11.

Preparação 18

Acido 4-£ 4-(octiloxi)fenoxi Jbenzoico

IV (Nujol) : 1680, 1600, 1240, 840 cnf¹

RMN (DMSO-dg, & ) : 0,87 (3H, t, J=6,7Hz), 1,1-1,6 (10H, m), 1,71 (2H, m), 3,96 (2H, t, J=6,4Hz), 6,9-7,1 (6H, m), 7,92 (2H, d, J=8,7Hz), 12,8 (1H, br s)

Preparação 19

Acido 6-(butoxi)-2~naftoico

IV (Nujol) : 1660, 1610, 1205 cm^-1

RMN (DMSO-dg, <5 ) : 0,96 (3H, t, J=7,29Hz), 1,48 (2H, qt, J=7,29Hz e 7Hz), 1,78 (2H, tt, J=7Hz e 6,45Hz), 4,12 (2H, t, J=6,45Hz), 7,24 (1H, dd,

J=9,0Hz	e 2,3Hz) ,	7,40	(1H,	d,	J=2,3Hz),	7,86
(1H, d,	J=8,7Hz),	7,94	(1H,	d,	J=8,7Hz),	8,01
(1H, d,	J = 9,0Hz) ,	8,52	(1H,	s)

Preparação 20

Acido 6-deciloxi-2-naftoico

IV (Nujol) : 1670,	1620,	1210	cm
RMN (DMSO-dg, b ) :	0,85	(3H, t,	J=6,7Hz),
1,2-1,6 (14H,	m) , 1,	78 (2H,	m), 4,11 (2H, t,
J=6,4Hz), 7,23	(1H,	dd, J=8	,9Hz e 2,4Hz), 7,39

(1Η, d, J=2,4Hz), 7,86 (1H, d, J=8,7Hz), 7,93 (1H, d, J=8,7Hz), 8,01 (1H, d, J=8,9Hz), 8,5 (1H, s)

Preparação 21

Acido 6-hexiloxi~2-naftoico

IV (Nujol) : 1660, 1620, 1290, 1210 cm

RMN (DMSO-dg, & ) : 0,89 (3H, t, J=6,8Hz), 1,2-1,6 (6H, m), 1,78 (2H, quinteto, J=6,5Hz), 4,11 (2H, t, J=6,5Hz), 7,23 (1H, dd, J=9,0Hz e 2,4Hz), 7,39 (1H, d, J=2,4Hz), 7,86 (1H, d, J=8,7Hz), 7,94 (1H, d, J=8,7Hz), 8,01 (1H, d, J=9,0Hz), 8,52 (1H, s)

Preparação 22

Acido 6-doceciloxi-2-naftoico

IV (Nujol) : 1670, 1620, 1210 cm'¹

RMN (DMSO-dg, 6) : 0,85 (3H, t, J=6,7Hz), 1,20-1,60 (18H, m), 1,78 (2H, m), 4,11 (2H, t, J=6,5Hz),

7,22 (1H, dd, J=9,0Hz e 2,4Hz), 7,39 (1H, d, J=2,4Hz), 7,85 (1H, d, J=8,7Hz), 7,93 (1H, d, J=8,7Hz), 8,00 (1H, d, J=9,0Hz), 8,51 (1H, s),

12,90 (1H, s)

Preparação 23

Acido 6-(3,7-dimetiloctiloxi)-2-naftoico

IV (Nujol) : 1660, 1610, 1290, 1210 cm'¹

RMN (DMSO-dg, á ) : 0,84 (6H, d, J=6,6Hz), 0,94 (3H, d, J = 6,lHz), 1,1-1,4 (6H, m) , 1,4-1,9 (4H, rn) ,

4,15 (2H, t, J=6,7Hz), 7,22 (ÍH, dd, J=9,0Hz e 2,4Hz), 7,41 (ÍH, d, J=2,4Hz), 7,86 (1H, d,

J=8,6Hz), 7,93 (ÍH, d, J=8,6Hz), 8,01 (ÍH, d, J=9,0Hz), 8,52 (1H, s)

Os compostos seguintes, Preparações 24 a 31 foram obtidos por um processo idêntico ao descrito na Preparação 12.

Preparação 24

1-7 4-(4-octiloxi)fenoxi 7benzoil-lH-benzotriazole-3~

-óxido

IV (Nujol) : 1770, 1730, 1600, 1500, 1230, 980 cm l-(6-butoxi-2~naftoil)-lH-benzotriazole-3-óxido IV (Nujol) : 1760, 1610, 1260, 1180, 1020 cm’¹

Preparação 26

l-(6-deciloxi~2-naftoil)-lH-benzotriazole-3-óxido IV (Nujol) : 1780, 1620, 1190, 1000 cm^-1

Preparação 27 l-(6-hexiloxi-2-naftoil)-lH-benzotriazole-3-óxido

IV (Nujol) : 1780, 1610, 1190 cm'¹

RMN (DMSO-dg, á ) : 0,89 (3H, t, J=6,7Hz), 1,2-1,6 (6H, m), 1,79 (2H, m), 4,12 (2H, t, J=6,5Hz), 7,24 (1H, dd, J=9,0Hz e 2,4Hz), 7,39 (1H, d, J=2,4Hz), 7,41 (1H, t, J=8Hz), 7,54 (1H, t, J=8Hz), 7,72 (1H, d, J=8Hz) , 7,88 (1H, d, J=8,7Hz), 7,90 (1H, d, J=8,7Hz), 7,97 (1H, d, J=8Hz), 8,02 (1H, d, J=9,0Hz), 8,51 (1H, s)

Preparação 28 l-(6-dodeciloxi-2-naftoil)-lH-benzotriazole-3-óxido

IV (Nujol) : 1770, 1620, 1190, 1030, 730 cm’¹

RMN (DMSO-dg, & ) : 0,85 (3H, t, J=6,7Hz), 1,2-1,3 (18H, m), 1,78 (2H, m), 4,11 (2H, t, J=6,5Hz),

7,22 (1H, dd, J=9,0Hz e 2,4Hz), 7,39 (1H, d,

J = 2,4Hz), 7,40 (1H, t, J = 8Hz) , 7,55 (1H, t, J=8Kz), 7,73 (1H, d, J=8Hz), 7,85 (1H, d, J=8,7Hz), 7,93 (1H, d, J=8,7Hz), 7,99 (1H, d, J=8Hz), 8,00 (1H, d, J=9,0Hz), 8,51 (1H, s)

Preparação 29

1-Γ6 -(3,7-dimetiloctiloxi)-2-naftoilJ7~lH-benzotriazole~ -3~óxido

IV (Nujol) : 1780, 1620, 1190 cm'¹

Preparação 30

1-/7 (2E , 6E) -3,7, ll-trimetil-2,6,10-dodecatrienoil/7‘lH-benzotriazole-3~óxido

IV (puro) : 2900, 1780, 1620, 1420, 1070 cm'¹

Preparação 31

Obteve-se o brometo de 3,7-dimetil-6~octenilo de acordo com o método da Preparação 17

IV (puro) : 2900, 1440, 1380 cm'¹

RMN (DMSO-dg, 6 ) : 0,86 (3H, d, J=6,3Hz), 1,0-1,5 (2H, m), 1,57 (3H, s), 1,65 (3H, s), 1,7-2,1 (5H, m) , 3,4-3,7 (2H, m), 5,08 (1H, m)

Preparação 32

A uma suspensão de 2,04 g de hidreto de sódio e 50 ml de N,N~dimetilformamida adicionaram-se 5 g de 4-hidroxipiridina à temperatura ambiente. Em seguida adicionaram-se 9,08 ml de brometo de octilo. Agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura

-90de 50°C. Adicionou-se a mistura reaccional a uma mistura de 100 ml de solução saturada de cloreto de sódio, 100 ml de tetra-hidrofurano e 100 ml de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica e secou-se com sulfato de magnésio. Separou-se o sulfato de magnésio por filtração e evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 14,7 g de brometo de l-octil-4-piridona.

RMN (DMSO-dg, è } : 0,86 (3H, t, J = 6Hz) , 1,1-1,4 (10H, m), 1,4-1,8 (2H, m), 3,81 (2H, t, J = 7Hz) ,

6,05 (2H, d, J=8Hz), 7,63 (2H, d, J=8Hz)

Preparação 33

A uma solução de 10,9 g de l-octil-4-piridona em 100 ml de piridina adicionaram-se 8,65 g de pentassulfureto fosforoso à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura durante 3 horas à temperatura de 80°C. Adicionou-se a mistura reaccional a uma mistura de 200 ml de água e 200 ml de cloreto de metileno. Separou-se a fase orgânica e secou-se com sulfato de magnésio. Separou-se o sulfato de magnésio por filtração e evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 5,27 g de 1-octil-l,4-di-hidropiridina-4-tiona.

IV (puro) : 2910, 2850, 1620, 1460, 1110 cm¹

RMN (DMSO-dg, & } : 0,86 (3H, t, J = 6Hz) , 1,1-1,4 (10H, m), 1,5-1,9 (2H, m), 3,95 (2H, t, J = 7Hz) ,

7,13 (2H, d, J=7Hz), 7,60 (2H, d, J=7Hz)

Os compostos seguintes, Preparações de 34 a 36, obtiveram~se aplicando um método idêntico ao descrito na Preparação 1.

Preparação 34

2-(4-hidroxifenil)-2~metoxiacetato de metilo

IV (Nujol) : 3350, 1740, 1610, 1600, 1220, 1100 cm

RMN (DMSO-dg, £ ) : 3,23 (3H, s), 3,60 (3H, s), 4,73 (1H, s), 6,72 (2H, d, J=8,9Hz), 7,15 (2H, d, J=8,9Hz)

EM-IE (e/z) = 196 (M⁺)

Preparação 35

Cloridrato do éster metílico de D-tirosina

IV (Nujol) : 3300, 1740, 1220 cm'¹

RMN (DMSO-dg, <5 ) : 3,02 (2H, m) , 3,67 (3H, s) , 4,16 (1H, t, J=6,7Hz), 6,72 (2H, d, J=8,4Hz), 7,01 (2H, d, J=8,4Hz), 8,58 (2H, s), 9,47 (1H, s)

Preparação 36 (4-hidroxifenil)glioxilato de metilo

IV (Nujol) : 3380, 1730, 1700, 1600, 1580, 1220 cm

RMN (DMSO-dg, è ) : 3,91 (3H, s), 6,94 (2H, d,

J=8,8Hz), 7,83 (2H, d, J=8,8Hz), 10,9 (1H, s)

Preparação 37

Por um método idêntico ao descrito na Preparação 2, obteve-se o éster metílico de N-(t-butoxicarbonil)-D-tirosina

IV (Nujol) : 3360, 1700, 1680, 1290, 1270, 1250 cm¹

RMN (DMSO-dg, 8 ) : 1,33 (9H, s), 2,73 (2H, m), 3,59 (3H, s), 4,05 (1H, m), 6,65 (2H, d, J=8,4Hz),

7,00 (2H, d, J=8,4Hz), 7,23 (1H, d, J=7,9Hz),

9,23 (1H, s)

Preparação 38

A uma solução de 1 g de cloridrato do éster metílico de L-tirosina em 1,5 ml de água adicionaram-se 0,363 g de bicarbonato de sódio sob arrefecimento com gelo e agitação durante 10 minutos e em seguida adicionou-se 7 ml de acetonitrilo, 0,637 ml de solução aquosa de formaldeído a 37% e 0,182 g de cianoboro-hidreto de sódio duma só vez à temperatura de -5°C. Agitou-se a mistura durante 2 horas a essa temperatura e retirou-se por filtração o material insolúvel resultante. Extraiu-se o filtrado com acetato de etilo, separou-se a fase orgânica e secou-se com sulfato de magnésio. Retirou-se o sulfato de magnésio por filtração e evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 0,21 g do éster metílico de Ν,N-dimetil~L~tirosina.

-93IV (Nujol) : 1730, 1260, 1010 cm *·

RMN (DMSO-dg, 8 ) : 2,24 (6H, s), 2,72 (2H, m), 3,34 (1H, m), 3,53 (3H, s), 6,64 (2H, d, J=8,4Hz),

6,97 (2H, d, J=8,4Hz), 9,18 (1H, s)

Os compostos seguintes, Preparações de 39 a 44, obtiveram-se por um processo idêntico ao descrito na Preparação 3.

Preparação 39

2-(4~octiloxifenil)acetato de metilo

IV (puro) : 2910, 2850, 1730, 1240 cm'¹

RMN (DMSO-dg, 8 ) : 0,86 (3H, t, J=6,3Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,6-1,9 (2H, m), 3,58 (2H, s), 3,59 (3H, s), 3,92 (2H, t, J=6,4Hz), 6,85 (2H, d,

J=8,7Hz), 7,15 (2H, d, J=8,7Hz)

Preparação 40

3-(4~octiloxifenil)propionato de etilo

IV (puro) : 2920, 2850,

1730,

1240 cm

RMN (DMSO-dg, 8 )

0,86 (3H, t, J=6,7Hz), 1,15 (3H,

t, J =	= 7,1Ηζ) ,	1,2-1,5	(10H,	m) , 1,	,6-1,8 (2H, m),
2,55	(2H,	t,	J=7,2Hz)	, 2,77	(2H,	t, J = 7,2Hz) ,
3,90	(2H,		J=6,4Hz)	, 4,03	(2H,	q, J=7,lHz),
6,81	(2H,	d,	J=8,6Hz)	, 7,11	(2H,	d, J=8,6Hz)

Preparação 41

Lf.

-942-(4-octiloxifenil)-2-metoxiacetato de metilo

IV (puro) : 2910, 2850, 1740, 1600, 1240, 1100 cm¹

RMN (DMSO-dg, é ) : 0,86 (3H, t, J=6,8Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,6-1,8 (2H, m) , 3,26 (3H, s), 3,62 (3H, s), 3,94 (2H, t, J = 6,4Hz), 4,83 (1H, s) ,

6,91 (2H, d, J=8,7Hz), 7,27 (2H, d, J=8,7Hz)

EM-IE (e/z) = 308 (M⁺)

Preparação 42

Ester metílico de 0 -octil-N-(t-butoxicarbonil)-D-tirosina

IV (Nujol) : 3350, 1730, 1680, 1510, 1240, 1160 cm¹

RMN (DMSO-dg, á ) : 0,86 (3H, t, J=6,7Hz), 1,2-1,3 (10H, m), 1,68 (2H, m), 2,82 (2H, m), 3,60 (3H, s), 3,91 (2H, t, J=7,3Hz), 4,08 (1H, m), 6,81 (2K, d, J=8,6Hz), 7,12 (2H, d, J=8,6Hz), 7,25 (1H, d, J=8,0Hz)

Preparação 43

Ester metílico de 0 -octil-N,N-dimetil~L~tirosina

IV (puro) : 2930, 2860, 1730, 1250 cm”¹

RMN (DMSO-dg, <5 ) : 0,86 (3H, t, J = 6,6Hz), 1,26 (10H, m), 1,68 (2H, m), 2,80 (2H, m), 3,33 (6H, s) , 3,37 (1H, m), 3,53 (3H, s), 3,89 (2H, t,

J=6,4Hz), 6,79 (2H, d, J=8,6Hz), 7,08 (2H, d,

J=8,6Hz)

Preparação 44 (4-octiloxifenil)glioxilato de metilo

IV (Puro) : 2930, 1210,

2850, 1730, 1670, 1600, 1260,

1160 cm¹

RMN (DMSO-dg, 6 ) : 0,86 (3H, t, J = 6,3Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,6-1,9 (2H, m), 3,93 (3H, s), 4,10 (2H, t, J=6,5Hz), 7,12 (2H, d, J=8,9Hz), 7,92 (2H, d, J=8,9Hz)

Os compostos seguintes, Preparações 45 a 51, obtiveram-se por um processo idêntico ao descrito na Preparação 4.

Preparação 45

Acido 4-(2~butoxietoxi)benzoico

IV (Nujol) : 1670, 1610, 1260 cm¹

RMN (DMSO-dg, b ) : 0,87 (3H, t, J=7,2Kz), 1,2-1,6 (4H, m), 3,45 (2H, t, J=6,4Hz), 3,70 (2H, t, J=4,4Hz), 4,16 (2H, t, J=4,4Hz), 7,02 (2H, d, J=8,9Hz), 7,88 (2H, d, J=8,9Hz), 12,63 (1H, s)

Preparação 46

Acido 2-(4~octiloxifenil)acético

IV (Nujol) : 1680, 1240, 820, 780 cm'¹

RMN (DMSO-dg, à ) : 0,86 (3H, t, J=6,8Hz), 1,1-1,5 (10H, m), 1,6-1,8 (2H, m), 3,47 (2H, s) , 3,92 (2H, t, J=6,4Hz), 6,84 (2H, d, J=8,6Hz), 7,14 (2H, d, J=8,6Hz)

Preparação 47

Acido 3~(4~octiloxifenil)propiónico

IV (Nujol) : 1680, 1500, 1200 cm¹

RMN (DMSO-dg, 6 ) : 0,86 (3H, t, J=6,3Hz), 1,1-1,5 (10H, m), 1,6-1,8 (2H, m), 2,47 (2H, t, J=7,2Hz), 2,74 (2H, t, J=7,2Hz), 3,90 (2H, t, J=6,4Hz), 6,81 (2H, d, J=8,6Hz), 7,11 (2H, d, J=8,6Hz), 12,10 (1H, s br)

Preparação 48

Acido 2-(4~octiloxifenil)-2-metoxiacético

IV (Nujol) : 1760, 1720, 1600, 1500, 1240, 1180,

1100, 830 cm'¹

RMN (DMSO-dg, ô ) : 0,86 (3H, t, J=6,7Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 2,6-2,8 (2H, m), 3,26 (3H, s), 3,94 (2H, t, J=6,4Hz), 4,67 (1H, s), 6,90 (2H, d, J=8,6Hz), 7,27 (2H, d, J=8,6Hz)

Preparação 49

0₄~octil-N~(t~butoxicarbonil)~D~tirosina

IV (Nujol) : 3400-2900, 1700, 1500, 1240, 1160 cm

RMN (DMSO-dg, 6 ) : 0,859 (3H, t, J=6,8Hz), 1,20-1,30 (10H, m), 1,32 (9H, s), 1,68 (2H, m), 2,67-2,95 (1H, m), 3,90 (2H, t, J = 7Hz) , 4,01 (1H, m) , 6,81 (2H, d, J=8,6Hz), 7,02 (1H, d, J=8,3Hz), 7,13 (2H, d, J=8,6Hz)

Preparação 50

O^-octil-N,N~dimetil~L-tirosina

IV (Puro) : 2940, 2860, 2600, 1620, 1240 cm'¹

RMN (DMSO-dg, 6 ) : 0,86 (3H, t, J=6,6Hz), 1,26 (10H, m) , 1,68 (2H, m), 2,67 (6H, s), 2,8-3,6 (3H, m) , 3,91 (2H, t, J=6,4Hz), 6,85 (2H, d, J=8,5Hz), 7,16 (2H, d, J=8,5Hz)

Preparação 51

Acido 0₄~octiloxifenil)glioxílico

IV (Puro) : 1730, 1670, 1600, 1260, 1160 cm'¹

RMN (DMSO-dg, 6 ) : 0,86 (3H, t, J=6,8Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,65-1,85 (2H, m), 4,09 (2H, t, J=6,5Hz), 7,12 (2H, d, J=8,9Hz), 7,89 (2H, d, J=8,9Hz)

Preparação 52 •Τ'

Obteve-se Ν -octil~N-(t-butoxicarbonil)-L-histidina a partir do éster metílico N~(t-butoxicarbonil)-L-histidina por um processo idêntico aos descritos nas Preparações 3 e 4.

RMN (DMSO-dg, & ) : 0,85 (3H, t, J=6,3Hz), 1,23 (10H, m) , 1,35 (9H, s), 2,83 (2H, m), 3,90 (2H, t,

J=7Hz), 4,0-4,2 (1H, m), 6,36 (1H, s), 7,02 (1H, d, J = 8Hz) , 7,75 (1H, s)

Os compostos seguintes, Preparações 53 a 60, obtiveram-se por um processo idêntico ao descrito na Preparação 11,

Preparação 53

Acido 4~octiloxiftálico

IV (Puro) : 2930, 2860, 2500, 1700, 1600, 1260 cm

RMN (DMSO-dg, b ) : 0,86 (3H, t, J=6,8Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,5-1,8 (2H, m), 4,05 (2H, t,

J=6,2Hz), 7,03 (1H, d, J=2,6Hz), 7,06 (1H, dd, J=8,4Hz e 2,6Hz), 7,72 (1H, d, J=8,4Hz)

Preparação 54

Acido 3-metoxi-4-octiloxibenzóico

IV (Nujol) : 2600, 1680, 1600, 1270, 1230 cm’¹

RMN (DMSO-dg, & ) : 0,86 (3H, t, J=6,8Hz), 1,2-1,5

(10Η, m) , 1,6-1,8 (2H, m), 3,80 (3H, s), 4,01 (2H, t, J=6,5Hz), 7,03 (1H, d, J=8,5Hz), 7,44 (1H, d, J=l,9Hz), 7,54 (1H, dd, J=8,5Hz e 1,9Hz)

Preparação 55

Acido 4-(4~octiloxifenil)benzóico

IV (Nujol) : 1670, 1600, 830, 770 cm¹

RMN (DMSO-dg, <5 ) : 0,87 (3H, t, J=6,7Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,6-1,8 (2H, m) , 4,01 (2H, t, J=6,4Hz), 7,04 (2K, d, J=8,8Hz), 7,68 (2H, d, J=8,8Hz), 7,75 (2H, d, J=8,5Hz), 7,99 (2H, d, J=8,5Hz)

Preparação 56

Acido 6-(2-etilhexiloxi)-2~naftóico

IV (Nujol) : 1660, 1610, 1280, 1200 cm¹

RMN (DMSO-dg, b ) : 0,88 (3H, t, J=7,3Hz), 0,92 (3H, t, J=7,3Hz), 1,2-1,6 (8H, m), 1,7-1,9 (1H, m), 4,01 (2H, d, J=5,7Hz), 7,23 (1H, dd, J=8,9 e 2,4Hz), 7,42 (1H, d, J=2,4Hz), 7,86 (1H, d, J=8,7Hz), 7,94 (1H, d, J=8,7Hz), 8,01 (1H, d, J=8,9Hz), 8,51 (1H, s), 12,9 (1H, s)

Preparação 57

-100Acido 6-(3,7-dimetil~6-octeniloxi)naftóico

IV (Nujol)		1660,	1610, 1290,	1200 cm	±
RMN (DMSO-	dg,	6 ) :	0,95 (3H, d,	J=6,lHz) ,	1,1-1,5
(2H,	m) ,	1,57	(3H, s), 1,64	(3H, s),	1,6-2,1
(5H,	m) ,	4,15	(2H, t, J = 6,7Hz) , 5,10	(1H, t,

(J=7,lHz), 7,22 (1H, dd, J=8,9Hz e 2,3Hz), 7,42 (1H, d, J=2,3Hz), 7,86 (1H, d, J=8,6Hz), 7,94 (1H, d, J=8,6Hz), 8,01 (1H, d, J=8,9Hz), 8,52 (1H, s), 1289 (1H, s)

Preparação 58

Acido 6-(3,7-dimetil-2,6~octadieniloxi)naftóico

IV (Nujol) : 1660, 1620, 1210 cm’¹

RMN (DMSO-dg, <$ ) : 1,57 (3H, s) , 1,60 (3H, s) , 1,76 (3H, s), 2,07 (4H, m) , 4,70 (2H, d, J=6,5Hz),

5,07 (1H, m), 5,51 (1H, t, J=6,5Hz), 7,24 (1H, dd, J=8,9Hz e 2,4Hz), 7,41 (1H, d, J=2,4Hz),

7,85 (1H, d, J=8,7Hz), 7,94 (1H, d, J=8,7Hz),

8,01 (1H, d, J=8,9Hz), 8,52 (1H, s), 12,88 (1H, s)

Preparação 59

Acido (2E)-3-(4-octiloxifenil)acrílico IV (Nujol) : 1660, 1600, 1240 cm’¹

-101RMN (DMSO-dg, á ) : 0,86 (3H, t, J=6,7Hz), 1,2-1,5

(10H, m),	1,6-1	,8 (2H,	m), 4,00	(2H,	t,
J=6,4Hz),	6,36	(1H, d,	J = 16Hz) ,	6,95	(2H, d,
J=8,7Hz),	7,54	(1H, d,	J = 16Hz) ,	7,61	(2H, d,
J=8,7Hz),	12,20	(1H, bi	’ s)

Preparação 60

6-octiloxi-2~naftaleno-sulfonato de sódio

IV (Nujol) : 1230, 1180, 860, 820 cm^-1

RMN (DMSO-dg, ó ) : 0,86 (3H, t, J = 6Hz) , 1,1-1,6 (10H, m), 4,06 (2H, t, J=5Hz), 7,08 (1H, d,

J = 9Hz) , 7,21 (1H, s) , 7,79 (1H, d, J = 9Hz), 8,00 (1H, s)

Preparação 61

A uma solução de 0,692 g de cloreto de tionilo e 0,022 ml de N,N~dimetilformamida adicionaram-se 1 g de 6-octiloxi-2-naftalenossulfonato de sódio, sob arrefecimento com gelo e agitação durante 1 hora e 30 minutos à temperatura de 95°C. Evaporou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida para se obter 1 g do cloreto 6-octiloxi~2-naftilsulfonilo.

IV (Nujol) : 1610, 1260, 1160 cm'¹

RMN (CDClg, & ) : 0,90 (3H, t, J=6,2Hz), 1,2-1,7 (10H, m), 1,8-2,0 (2H, m), 4,12 (2H, t,

J=6,5Hz), 7,20 (ÍH, d, J=2,2Hz), 7,32 (ÍH, dd, J=9,0Hz e 2,2Hz), 7,84-7,97 (3H, m), 8,49 (ÍH, s)

Os compostos seguintes, Preparações de 62 a 71, obtiveram-se de um modo idêntico ao do processo decrito na Preparação 12.

Preparação 62 l-(4-octilbenzoil)-lH-benzotriazole-3-óxido

IV (Puro) : 2930, 2850, 1780, 1610, 1240, 990 cm^-1

Preparação 63

1-ΖΓ 4-(4~octiloxifenil)benzoil_7-lH~benzotriazole-3-óxido IV (Nujol) : 1770, 1600, 980 cm'¹

Preparação 64

1-/7 6-(2-etilhexiloxi) -2-naftoil.7~lH~benzotriazole-3-óxido

IV (Nujol) : 1770, 1620, 1270, 1180 cm'¹

RMN (CDClg, b ) : 0,93 (3H, t, J=7,lHz), 0,98 (3H, t, J=7,4Hz), 1,3-1,7 (8H, m), 1,7-2,0 (ÍH, m), 4,03 (2H, d, J=5,7Hz), 7,22 (1H, d, J=2,2Hz), 7,29 (ÍH, dd, J=8,9Hz, 2,2Hz), 7,4-7,7 (3H, m), 7,87 (ÍH, d, J=9,5Hz), 7,92 (1H, d, J=9,5Hz), 8,1-8,2 (2H, m), 8,80 (ÍH, s)

Preparação 65

1-7 6-(3,7~dimetil-6-octeniloxi)-2-naftoíl7~lH-benzotriazole-3-óxido

IV (Puro) : 2900, 1770, 1620, 1180 cm¹

Preparação 66

1-7 θ- £ (E)-3,7-dimetil-2,6-octadieniloxiJ -2-naftoíl_7~

-1H-benzotriazole-3-óxido

IV (Nujol) : 1770, 1620, 1270, 1180 cm¹

Preparação 67 l-(2~antrilcarbonil)~lH-benzotriazole-3~óxido IV (Nujol) : 1780, 1200, 720, 740 cm¹

Preparação 68 l~7 2-(4~octiloxifenil)acetil_7-lH-benzot;riazole-3-óxido IV (Nujol) : 1730, 1460, 1420, 1250, 1130 cm¹

Preparação 69

1-7 3-(4-0ctiloxifenil)propionilJ-ΙΗ-benzotriazole-3-óxido IV (Nujol) : 1730, 1420, 1340, 1240, 950 cm¹

Preparação 70 l-£ (E)~3-(4-octiloxifenil)acriloil27-lH-benzotriazole~3~

-óxido

IV (Nujol) : 1770, 1600, 1260, 1080 cm'¹

Preparação 71

1-(0^-octil-N, N-dimetil-L-tirosil)-lH-benzotriazole-3-óxido

IV (Puro) : 2930, 2850, 1800, 1610 cm'¹

Preparação 72

A uma suspensão de 4,05 g de hidreto de alumínio e lítio em 475 ml de tetra-hidrofurano adicionou-se, gota a gota, uma solução de 25 g de 4-octiloxibenzaldeído em 25 ml de tetra-hidrofurano a uma temperatura aproximadamente entre 55 e 60°C. Agitou-se a mistura reaccional sob refluxo durante 1 hora e em seguida adicionou-se 35,84 g de cloreto de sódio e 11,52 ml de água sob arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura durante 30 minutos e filtrou-se. Evaporou-se o filtrado in vacuo para se obterem 25,1 g de álcool 4-octiloxibenzílico sob a forma de cristais.

IV (Nujol) : 3200, 1605, 1510 cm'¹

RMN (DMSO-dg, à ) : 0,86 (3H, t, J=6,7Hz), 1,26-1,38 (10H, m), 1,62-1,72 (2H, m), 3,92 (2H, t,

J=6,5Hz), 4,40 (2H, d, J=5,7Hz), 5,03 (1H, t,

J=5,7Hz), 6,85 (2H, d, J=8,6Hz), 7,20 (2H, d, J=8,6Hz)

Preparação 73

A uma suspensão de 25 g de álcool 4~octiloxibenzílico, 17,15 g de N-hidroxiftalimida e 27,74 g de trifenilfosfina em 250 ml de tetra-hidrofurano adicionaram-se, gota a gota, 18,4 g de azodicarboxilato de dietilo sob arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas e evaporou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em gel de sílica para se obterem 33,45 g de N-(4~octiloxibenziloxi)ftalimida sob a forma de cristais.

IV (Nujol) : 1780, 1725, 1605, 1580, 1505 cm'¹

RMN (DMSO-dg, <5 ) : 0,86 (3H, m), 1,26 (10H, m),

1,70 (2H, m), 3,95 (2H, t, J=6,5Hz), 5,08 (2H, s), 6,93 (2H, d, J=8,6Hz), 7,40 (2H, d,

J=8,6Hz), 7,85 (4H, s)

Preparação 74

A uma solução de 4,13 g de N-(4-octiloxibenziloxi)ftalimida em 16 ml de tetra-hidrofurano adicionaram-se 0,53 ml de hidrato de hidrazina à temperatura ambiente. Após agitação da mistura a essa temperatura durante uma hora, filtrou-se o precipitado. Adicionaram-se 6 ml de água ao filtrado e 1,5 g de ácido 4-hidroxifenilglioxílico à temperatura ambiente. Manteve-se a

mistura a pH entre 4-4,5 com solução aquosa de bicarbonato de sódio durante duas horas, adicionou-se de seguida acetato de etilo e corrigiu-se o pH para 2 com ácido clorídrico IN. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com solução saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. Evaporou-se o solvente orgânico in vacuo para se obterem 3,4 g do ácido 2-(4-hidroxifenil)-2-(4-octiloxibenziloxiimino)-acético

IV (Nujol) : 3400, 1715, 1605, 1590, 1505 cm^-1

RMN (DMSO-dg, S ) : 0,86 (3H, m), 1,25 (10H, m), 1,69 (2H, m), 3,94 (2H, t, J=6,4Hz), 5,07 (2H, s),

6,82 (2H, d, J=8,7Hz), 6,90 (2H, d, J=8,6Hz),

7,29 (2H, d, J=8,6Hz), 7,35 (2H, d, J=8,7Hz)

Os compostos seguintes, Preparações de 75 a 76, obtiveram-se de um modo idêntico ao do processo descrito na Preparação 74.

Preparação 75

Acido 2-fenil~2~(4-octiloxibenziloxiimino)acético

IV (Nujol) : 1720, 1610, 1585, 1515 cm^-1

RMN (DMSO-dg, à ) : 0,86 (3H, t, J=6,7Hz), 1,26 (10H, m) , 1,69 (2H, m), 3,94 (2H, t, J = 6,5Hz), 5,13 (2H, s), 6,91 (2H, d, J=8,6Hz), 7,22-7,49 (7H, m)

Preparação 76

Acido 2-(4-octiloxibenziloxiimino)acético

IV (Nujol) : 1700, 1670, 1600 cm¹

RMN (DMSO-dg, é ) : 0,86 (3H, t, J=6,2Hz), 1,26 (10H, m), 1,70 (2H, m), 3,95 (2H, t, J=6,5Hz), 5,13 (2H, s) , 6,91 (2H, d, J = 8,6Hz), 7,29 (2H, d,

J = 8,6Hz) , 7,56 (1H, s)

Preparação 77

A uma solução de 0,935 g de ácido 4-octiloxifenilglioxílico numa mistura de 9 ml de água e 18 ml de tetra-hidrofurano foi submetido à correcção de pH com ácido clorídrico IN para um valor de 3,5 a 4 e adicionada em seguida 0,337 g de cloridrato de metoxamina, à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente mantendo-se o pH entre 3,5 e 4 com ácido clorídrico IN. Adicionou-se a acetato de etilo à mistura de reacção. Separou-se a fase orgânica e secou-se sobre sulfato de magnésio retirando-se o sulfato de magnésio por filtração e evaporando-se o filtrado sob pressão reduzida obtendo-se 0,57 g de ácido 2-(4-octiloxifenil)-2-metoxiimino acético.

IV (Nujol) : 1700, 1600, 1250, 1030 cm¹

RMN (DMSO-dg, 6 ) _: 0,86 (3H, t, J=6,3Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,6-1,8 (2H, m), 3,89 (3H, s), 3,99 (2H, t, J=6,4Hz), 7,00 (2H, d, J=8,9Hz), 7,45

-108(2Η, d, J=8,9Hz), 14,05 (1H, s)

Preparação 78

A uma mistura de 1 g de ácido 2,3,4,5,6-pentafluorobenzóico e 1,18 g de 2,2,3,3,4,4,5,5-octafluoropentanol em 5 ml de Ν,N-dimetilformamida , adicionaram-se 0,39 g de hidreto de sódio a 62%, à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura a essa temperatura durante 1 hora e adicionou-se de seguida uma mistura de água e acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica que se lavou com água e com uma solução saturada de cloreto de sódio, secou-se com sulfato de magnésio e evaporou-se no vácuo. Purificou-se o resíduo por cromatográfia em gel de sílica para se obterem 923 g do ácido 4-(2,2,3,3,4,4,5,5-octafluoropentiloxi)-2,3,5,6-tetrafluorobenzóico.

IV (Nujol) : 1700, 1580 cm^-1

RMN (DMSO-dg, á ) _: 4,96 (2H, t, J=14,2Hz), 7,10 (1H, tt, J=5,6Hz e 50,2Hz)

Preparação 79

Acido 4-(2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-pentadecafluorooctiloxi)-2,3,5,6-tetrafluorobenzóico

IV (Nujol) : 3400, 1640, 1560 cm'¹

RMN (DMSO-dg, S ) : 4,95 (2H, t, J=14,0Hz)

Os compostos seguintes, Preparações 80 a 90, obtiveram-se por um processo idêntico ao descrito na Preparação 5.

Preparação 80

2-(4-hidroxifenil)-2-(4-octiloxibenziloxiimino)acetato de succinimida

IV (Nujol) : 1800, 1770, 1700, 1600 cm¹

Preparação 81

2-fenil-2-(4-octiloxibenziloxiimino)acetato de succinimida

IV (Nujol) : 1780, 1730, 1605 cm’¹

RMN (DMS0-d₆, b ) : 0,86 (3H, m), 1,26 (10H, m), 1,69 (2H, m) , 2,90 (4H, m), 3,94 (2H, t, J = 6,4Hz),

5,30 (2H, s), 6,91 (2H, d, J=8,6Hz), 7,25-7,56 (7H, m)

Preparação 82

2-(4-octiloxibenziloxiimino)acetato de succinimida

IV (Nujol) : 1760, 1725, 1600, 1580 cm¹

RMN (DMSO-dg, á ) : 0,86 (3H, t, J=6,7Hz), 1,26 (10H, m), 1,70 (2H, m), 2,85 (4H, s), 3,96 (2H, m),

5,28 (2H, s), 6,91 (2H, d, J=8,6Hz), 7,33 (2H, d, J=8,6Hz), 8,12 (1H, s)

-110Preparagão 83

4-(2,2,3,3,4,4,5,5-octafluoropentiloxi)-2,3,5,6-tetraflurobenzoato de succinimida

IV (Nujol) : 3500, 1770, 1740, 1640 cm^-1

RMN (DMSO-dg, b ) : 2,90 (4H, s), 5,23 (2H, t,

J=13,8Hz), 7,11 (1H, tt, J=50,2Hz e 5,6Hz)

Preparagão 84

4-(2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-pentadecafluorooctiloxi)-2,3,5,6-tetrafluorobenzoato de succinimida

IV (Nujol) : 1735, 1620, 1600 cm'¹

RMN (DMSO-dg, b ) : 2,90 (4H, s), 5,12 (2H, t,

J=13,8Hz)

Preparagão 85

3-metoxi-4-octiloxibenzoato de succinimida

IV (Nujol) : 1760, 1730, 1600, 1280, 1200, 880 cm'¹

RMN (DMSO-dg, <5 ) : 0,86 (3H, t, J = 6,7Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,6-1,9 (2H, m), 2,88 (4H, s), 3,84 (3H, s), 4,09 (2H, t, J=6,5Hz), 7,19 (1H, d,

J=8,6Hz), 7,49 (1H, d, J=2,0Hz), 7,73 (1H, dd,

J=8,6 e 2,0Hz)

-111Preparação 86

4-(2-butoxietoxi)benzoato de succinimida

IV (Nujol) : 1730, 1600, 1250, 1060 cm¹

RMN (DMSO-dg, δ ) : 0,87 (3H, t, J=7,2Hz), 1,2-1,6

(4H,	m), 2,89 (4H, s) ,	3,46	(2H,	t,	J=6,3Hz),
3,73	(2H, t, J=4,4Hz),	4,25	(2H,	T,	J=4,4Hz),
7,18	(2H, d, J = 9,0Hz) ,	8,04	(2H,	d,	J=9,0Hz)

Preparação 87

2-(4-octiloxifenil)~2~metoxiacetato de succinimida

IV (Nujol) : 1810, 1740, 1610, 1250, 1210, 1100 cm

RMN (DMSO-dg, 8 ) : 0,86 (3H, t, J=6,7Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,6-1,8 (2H, m), 2,80 (4H, s), 3,35 (3H, s), 3,97 (2H, t, J=6,4Hz), 5,35 (1H, s),

6,96 (2H, d, J=8,7Hz), 7,38 (2H, d, J=8,7Hz)

Preparação 88

Ester-O^-octil-N-(t-butoxicarbonil)-D~tirosina-succinimídico

IV (Nujol) : 3370, 1780, 1730, 1700, 1250, 1200 cm

Preparação 89

2-(4-octiloxifenil)~2~metaxiiminoacetato de succinimida

IV (Nujol) : 1800, 1780, 1730, 1600, 1250, 1180,

1130 cm^-1

RMN (DMSO-dg, £ ) : 0,86 (3H, t, J=6,6Hz), 1,2-1,5 (10H, m) , 1,6-1,8 (2H, m) , 2,89 (4H, s), 4,01 (3H, s), 4,03 (2H, t, J=6,4Hz), 7,08 (2H, d, J=8,9Hz), 7,68 (2H, d, J=8,9Hz)

Preparação 90

Ester N-octil-N(t~butoxicarbonil)-L~histidina succinimídico

IV (Puro) : 1810, 1780, 1730, 1500, 1360, 1200,

1160 cm^-1

Preparação 91

Obteve-se o anidrido 4-octiloxiftálico a partir do ácido 4-octiloxiftálico por um processo idêntico ao descrito na Preparação 5.

IV (Puro)

2910, 2850, 1840, 1760, 1640, 1610,

1290, 1260 cm'¹

RMN (DMSO-dg, £ ) : 0,86 (3H, t, J=6,8Kz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,6-1,9 (2H, m), 4,19 (2H, t,

J=6,5Hz), 7,47 (ÍH, dd, J=8,4Hz e 2,2Hz), 7,57 (ÍH, d, J=2,2Hz), 7,98 (1H, d, J=8,4Hz)

Preparação 92

Obteve~se N-octiloxicarboniloxisuccinimida por um processo idêntico ao descrito na Preparação 5.

IV (Puro) : 2960, 2850, 1780, 1740, 1260, 1230 cm¹

RMN (CDClg, á ) : 0,89 (3H, t, J=6,7Hz), 1,2-1,4 (10H, m), 1,6-1,8 (2H, m), 2,84 (4H, s), 4,32 (2H, t, J=6,7Hz)

Preparação 93

A uma solução de 1,53 g do éter octil~fenílico em 6 ml de clorofórmio, adicionou-se ácido clorossulfónico, à temperatura de 0°C. Agitou-se a mistura a essa temperatura durante 30 minutos e em seguida verteu-se numa mistura de água e tetra-hidrofurano.

Separou-se a fase orgânica, lavou-se com solução aquosa de cloreto de sódio, secou-se com sulfato de magnésio e em seguida evaporou-se o solvente no vácuo. Submeteu-se o resíduo a uma coluna de cromatografia de gel de sílica para se obter 1,25 g de cloreto de 4-octiloxifenilsulfonilo.

IV (Nujol) : 1600, 1580, 1500, 1380, 1180 cm

RMN (CDClg, S ) : 0,89 (3H, t, J=6,6Hz), 1,20-1,50 (10H, m), 1,80 (2H, m), 4,06 (2H, t, J=6,4Hz),

7,03 (2H, d, J=9,0Hz), 7,96 (2H, d, J=9,0Hz)

Os compostos seguintes, Preparações 94 e 95, obtiveram-se de acordo com um método idêntico ao descrito na Preparação 5.

Preparação 94

4-(4-heptiloxifenil)benzoato de succinimida

IV (Nujol) : 1760, 1740, 1600 cm'¹

RMN (CDClg, 6 ) : 0,87 (3H, t, J=6,8Hz), 1,2-1,7 (8H, m), 1,7-1,9 (2H, m), 2,92 (4H, s), 4,01 (2H, t, J=6,5Hz), 7,00 (2H, d, J=8,8Hz), 7,58 (2H, d, J=8,8Hz), 7,69 (2H, d, J=8,5Hz), 8,17 (2H, d, J=8,5Hz)

Preparação 95

4-(4-hexiloxifenoxi)benzoato de succinimida

IV (Nujol) : 1760, 1720, 1600 cm'¹

RMN (CDClg, 6 ) : 0,92 (3H, t, J=6,8Hz), 1,2-1,5 (6H, m), 1,7-1,9 (2H, m), 2,90 (4H, s), 3,96 (2H, t, J=6,3Hz), 6,9-7,1 (6H, m), 8,07 (2H, d, J=9Hz)

Em seguida, apresentam-se as estruturas dos compostos incluídos nos Exemplos 13 a 53.

HO OH

T

Nas fórmulas seguintes, Bu representa t-butilo e p-TsOH representa ácido p-toluenossulfónico.

Exemplo N°	Composto N°	R
13	FR139835	-coo(ch₂)_?ch₃
14	FR139537	-coO-^u
15	FR141145	-00-0-0( CH₂) ₂0( CH₂) ₃CH₃
16	FR139538

-116-

Exemplo N°	Composto N°	R
17	FR140215	ch₂ ) ₇ch₃ COOH
18	FR140216	-co-Qo (CH₂) ₇ CH₃och₃
19	FR140727	F F \/ -CO-/ V°^CH2(^CF2)4^H F F
20	FR143301	F F -co-^2^-°ch₂ ( cf₂ ) ₆cf₃ F F
21	FR140495	-coch^Q
22	FR139503	OCH₃ -COCH-^^~O{ CH₂) _?CH₃
23	FR139500	NHCOO^Bu -cochch₂-^J^-o( ch₂ ) ₇ch₃(D)
24	FR139501	NHCOoSu -co (L)

Exemplo N°	Composto N°	R
25	FR139502	NHCOO^tBu -COCHCH₂-^^Ss .^N_ t ^CH2 ^7^CH3 (L)
26	FR138959	OCH<> ^J N -co-c<)-o₍ch₂>₇ch₃
27	FR140291	o-ch₂^.-o(ch₂)₇ch₃ N -CQ-C-<^^-OH
28	FR141580	^^CH2-O-^0(CH2’7^CH3 -co-έ^}
29	FR141579	^^CH2^O-^0(CH2>7^CH3 N 11 -CO-CH
30	FR141146	0
31	FR140731	-^C0-O-^(CH2’7^CH3
32	FR140217	-co-0-o£)-o( ch₂ ) ₇CH₃

-118-

Exemplo N°	Composto N°	R
33	FR142472	( ^ch2 > 7^CH3
34	FR140496	y-o(cH₂)₃cH₃
35	FR140497	-co/Λ^ \=/ \\-O(CH₂)₅CH₃
36	FR143483
37	FR140728	-CoZV. \=/ >0{CH₂>₉CH₃
38	FR142172
39	FR143326
40	FR142390	-^coC>j.o^A^a
41	FR140729	-co/Λ-Ά \=/J>-0(ch₂)₁₁ch₃
42	FR140730

-119-

Exemplo N°	Composto N°	R
43	FR143020	-coch₂ch₂ ) ₇ch₃
44	FR143021	-CO (CH₂) ₂ 0 (CH₂ ^} 7^CH3
45	FR141315	^} 7^CH3
46	FR140105	N(CH₃) -CO-CHCHj-C )>-O(CH₂)₇CH₃
47	FR141564	-^SO2O-°^lCH2’7^CH3
48	FR143170	-SO -/{ \ \=/ y-O(CH₂)₇CH₃
49	FR138912	NH₂ p-TsOH -CO-CHCH₂-/ yO(CH₂)₇CH₃(L) “
50	FR138960	Br θ /O ® -C0CH₂S-C N-(CH₂)₇CH₃
51	FR138727	nh₂ -COCH-^ Vo(CH₂)_?CH₃(D)^

Exemplo NS	Composto NS	R
52	FR138912	ΝΉ₂ P-TsOH -CO-CHCH₂-C Vo(CH₂)₇CH₃(L)
53	FR138960	Br θ -COCH₂S-<^J^ CH₂) _?CH₃

Exemplo 13

Qbteve~se a substância FR139835 fazendo-se reagir a substância FR133303 com N-octiloxicarboniloxissuccinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm”¹

EM-BAR e/z = 1137 (M + Na)

Exemplo 14

Obteve-se a substância FR139537 fazendo-se reagir a substância FR133303 com 4-t-butilbenzoato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm”¹

RMN (D₂0, â ) : 1,05 (3H, d, J=6,9Hz), 1,15 (3H, d,

J=5,9Hz), 1,33 (9H, s), 2,0-2,3 (3H, m) , 2,4-2,6 (3H, m), 2,7-2,9 (1H, m), 3,4-3,6 (1H, m) , 3,8-4,9 (12H, m) , 5,07 (2H, m), 5,40 (1H, d, J=3Hz), 7,06 (1H, d, J=8,2Hz), 7,08 (1H, dd, J=8,2Hz e 2Hz), 7,27 (1H, d, J=2Hz), 7,60 (1H, d, J=8,6Hz), 7,75 (1H, d, J=8,6Hz)

Exemplo 15

Obteve-se a substância FR141145 fazendo-se reagir a substância FR133303 com 4-(2~butoxietoxi)-benzoato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1620cm~¹

RMN (DMSO-dg, + D₂0, & } : 0,88 (3H, t, J=7,3Hz),

0,96 (3H, d, J=6,7Hz), 1,04 (3H, d, J=5,7Hz),

1,2-1,6 (4H, m), 1,7-2,0 (3H, m), 2,1-2,65 (4H,

m) , 3,16 (1H,	m) ,	3,7-4,5 (20H, m),	4,78	(1H, d,
J=3Hz), 4,86	(1H,	d, J = 3,8Hz) , 5,02	(1H,	d,
J=3Hz), 6,74	(1H,	d, J=8,2Hz), 6,79	(1H,	d,

J=8,2Hz), 7,00 (2H, d, J=8,9Hz), 7,06 (1H, s), 7,87 (2H, d, J=8,9Hz)

EM-BAR e/z = 1201 (M + Na)

Exemplo 16

Obteve-se a substância FR139538 fazendo-se reagir a substân-122cia FR133303 com 4-(4~fenilbutoxi)-benzoato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm’¹

EM-BAR e/z 1233 (M + Na)

Exemplo 17

Obteve-se a substância FR140215 fazendo-se reagir a substância FR133303 com anidrido 4~octiloxiftálico, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm’¹

EM-BAR e/z = 1257 (M + Na)

Exemplo 18

Obteve-se a substância FR140216 fazendo-se reagir a substância FR133303 com 3-metoxi~4-octiloxibenzoato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm’¹

EM-BAR e/z = 1243 (M + Na)

Exemplo 19

Obteve-se a substância FR140727 fazendo~se reagir a substância FR133303 com 4-(2,2,3,3,4,4,5,5-octafluoropentiloxi)2,3,5,6~te~

trafluorobenzoato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1630 cm'¹

EM-BAR e/z : 1387 (M + Na)

Exemplo 20

Obteve-se a substância FR143301 fazendo-se reagir a substância FR133303 com 4-(2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-pentadecafluorooctiloxi)-2,3,5,6-tetrafluorobenzoato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1630 cm¹

EM-BAR e/z = 1534 (M⁺)

Exemplo 21

Obteve-se a substância FR140495 fazendo-se reagir a substância FR133303 com 2-(4-bifenilil)-acetato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm'¹

RMN (CD₃0D, á ) ; 1,0-1,1 (6H, m), 1,9-2,2 (3H, m) ,

2,3-2,6 (3H, m), 2,7-2,85 (ÍH, m), 3,35 (1H, m),

3,58 (2H, s), 3,65-4,7 (13H, m), 4,93 (ÍH, d,

J=3Hz), 5,04 (ÍH, d, J=3,8Hz), 5,25 (1H, d,

J=3Hz), 6,85 (ÍH, d, J=8,3Hz), 7,01 (1H, dd,

J=8,3Hz e 2Hz), 7,3-7,6 (10H, m)

Exemplo 22

Obteve-se a substância FR139503 fazendo-se reagir a substância FR133303 com 2-(4-octiloxifenil)-2-metoxiacetato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3330, 1620 cm'¹

FAB-MS e/z = 1257 (M + Na)

Exemplo 23

Obteve-se a substância FR139500 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o éster succinimídico de 0⁴-octil-N-(t-butoxicarbonil)-D-tirosina, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm¹

(CDgOD, b	) =	0,90 (	3H, t, J:	=6,8Hz),	1,06 (3H, d,
J = 6,8Hz) ,	1,	17 (3H,	d, J = 6,'	7Hz), 1,2	0-1,30 (10H,
m), 1,35	(9H	, s), 1	,74 (2H,	m), 1,9-	2,1 (3H, m),
2,45 (3H,	m)	, 2,76	(1H, m) ,	3,0-3,1	(1H, m),
3,37 (1H,	m)	, 3,7-4	,6 (18H,	m), 4,94	(1H, d,

J=3Hz), 5,01 (1H, d, J=3,8Hz), 5,25 (1H, d, J=3Hz), 6,79 (2H, d, J=8,5Hz), 6,83 (1H, d,

J = 8,3Hz), 7,03 (1H, dd, J=8,3Hz e 2Hz) , 7,12 (2H, d, J=8,5Hz), 7,31 (1H, d, J=2Hz)

Exemplo 24

Obteve-se a substância FR139501 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o éster succinimídico de N-(t-butoxicarbonil)-L-2-(2-naftil)-glicina, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm'¹

Exemplo 25

Obteve-se a substância FR139502 fazendo-se reagir a substânT cia FR133303 com o éster succinimídico de N -octil-N~(t-butoxicarbonil) -L-histidina , por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) ; 3300, 1620 cm'¹

EM-BAR e/z = 1330 (M + Na)

Exemplo 26

Obteve-se a substância FR138959 fazendo-se reagir a substância FR133303 com 2-(4~octiloxifenil)-2-metoxiiminoacetato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm'¹

RMN (CDgOD, & ) ; 0,91 (3H, t, J=6,6Hz), 1,06 (3H, d,

-126J=6,8Hz), 1,25 (3H, d, J=6,3Hz), 1,25-1,6 (10H, m), 1,65-1,9 (2H, m) , 1,9-2,2 (3H, m) , 2,3-2,65 (3H, m), 1,75-1,9 (1H, m) , 3,3-3,5 (1H, m), 3,95 (3H, s), 3,7-4,75 (16H, m), 5,03 (1H, d,

J=3,0Hz), 5,11 (1H, d, J=3,7Hz), 5,46 (1H, d, J=2,7Hz), 6,86 (1H, d, J=8,2Hz), 6,89 (2H, d,

J = 8,9Hz), 7,01 (1H, dd, J=8,2Hz e 2Hz) , 7,31 (1H, d, J=2Hz), 7,54 (2H, d, J=8,9Hz)

EM-BAR e/z = 1270 (M + Na)

Exemplo 27

Obteve-se a substância FR140291 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 2-(4~hidroxifenil)-2-(4-octiloxibenziloxiimino)-acetato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3250, 1650, 1620 cm'¹

EM-BAR e/z = 1363 (M + Na)

Exemplo 28

Obteve-se a substância FR141580 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 2-fenil-2-(4-octiloxibenziloxiimino)-acetato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3300, 1646 cm

EM-BAR e/z = 1346 (M + Na)

Exemplo 29

Obteve-se a substância FR141579 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 2-(4-octiloxibenziloxiimino)-acetato de succinimida, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

IV (Nujol) : 3250, 1650 cm'¹

FAB-MS e/z = 1270 (M + Na)

Exemplo 30

Obteve-se a substância FR141146 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-/7 (2E,6E)-3,7,ll~trimetil~2,6,10-dode~ catrienoilJ7~lH-benzotriazolo~3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620, 1040 cm’¹

RMN (CDgOD, â> ) _: 1,06 (3H, d, J = 6,8Hz), 1,19 (3H, d, J=5,9Hz), 1,60 (3H, s), 1,62 (3H, s), 1,66 (3H, s), 1,9-2,2 (11H, m) , 2,05 (3H, s), 2,3-2,6 (3H, m), 2,7-2,9 (1H, m), 3,35 (1H, m), 3,7-5,0 (14H, m) , 5,08 (4H, m), 5,27 (1H, d, J = 2,8Hz), 5,77 (1H, s), 6,86 (1H, d, J=8,3Hz), 7,04 (1H, dd,

J=8,3Hz e 1,9Hz), 7,32 (1H, d, J=l,9Hz)

Exemplo 31

Obteve-se a substância FR140731 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-(4-octilbenzoíl)-lH-benzotriazolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620, 1040 cm¹

RMN (CDgOD, í ) : 0,86 (3H, t, J=6,8Hz), 1,06 (3H, d, J=6,8Hz), 1,21 (3H, d, J=5,8Hz), 1,25-1,45 (10H, m) , 1,55-1,75 (2H, m), 1,9-2,25 (3H, m),

2,35-2,6 (3H, m), 2,65 (2H, t, J=7,5Hz), 2,81 (1H, m), 3,32 (1H, m), 3,7-4,8 (14H, m), 4,98 (1H, d, J=3Hz), 5,09 (1H, d, J=3,9Hz), 5,31 (1H, d, J=3Hz), 6,86 (1H, d, J=8,3Hz), 7,03 (1H, dd,

J=8,3Hz e 2Hz), 7,24 (2H, d, J=8,2Hz), 7,33 (1H, d, J=2Hz), 7,74 (2H, d, J=8,2Hz)

EM-BAR e/z = 1197 (M + Na)

Exemplo 32

Obteve-se a substância FR140217 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-^f 4-(4-octiloxi)-fenoxiJ7-benzoíl-lH-benzotriazolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm¹

EM-BAR e/z = 1305 (M + Na)

Exemplo 33

Obteve-se a substância FR142472 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o l-^*4-(4-octiloxifenil)-benzoilJ7~lH-benzotriazolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm'¹

RMN (CDgOD, & ) : 0,88 (3H, t, J=6,7Hz), 1,06 (3H, d, J=6,8Hz), 1,23 (3H, d, J=6,lHz), 1,3-1,6 (10H, m) , 1,8-1,9 (2H, m), 1,9-2,3 (3H, m) , 2,3-2,7

(3H, m) , 2,9-3,0 (1H, m), 3,39	(1H, m), 3,7-4,
(16K, m), 4,99	(1H,	d,	J=3,0Hz)	, 5,10	(1H,	d,
J=3,7Hz), 5,35	(1H,	d,	J=2,7Hz)	, 6,87	(1H,	d,
J=8,3Hz), 6,99	(2H,	d,	J=8,8Hz)	, 7,04	(1H,	dd,

J=8,3Hz e 1,9Hz), 7,33 (1H, d, J=l,9Hz), 7,58 (2H, d, J=8,8Hz), 7,62 (2H, d, J=8,4Hz), 7,87 (2H, d, J=8,4Hz)

EM-BAR e/z = 1289 (M + Na)

Exemplo 34

Obteve-se a substância FR140496 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-(6~butoxi~2~naftoil)-lH-benzotriazolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm¹

EM-BAR e/z = 1207 (M + Na)

-130-

Exemplo 35

Obteve-se a substância FR140497 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-(6-hexiloxi~2-naftoil)-lH-benzotriazolo~3~ -óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm'¹

RMN (DMSO-dg + DgO, 8 ) : 0,89 (3H, t, J=6,6Hz), 0,97 (3H, d, J=6,9Hz), 1,08 (3H, d, J=5,9Hz), 1,2-1,6 (6H, m) , 1,7-2,1 (5H, m), 2,1-2,5 (3H, m),

2,5-2,7 (1H, m), 3,19 (1H, m), 3,73 (2H, m) ,

3,8-4,5 (12H, m), 4,80 (1H, d, J=3Hz), 4,88 (1H, d, J=3,8Hz), 5,08 (1H, d, J=3Hz), 6,74 (1H, d, J=8,2Hz), 6,80 (1H, dd, J=8,2Hz e 2Hz), 7,08 (1H, d, J = 2Hz) , 7,26 (1H, dd, J = 8,9Hz e 2,4Hz), 7,39 (1H, d, J=2,4Hz), 7,85 (1H, d,

J=8,7Hz), 7,89 (1H, d, J=8,7Hz), 7,93 (1H, d, J=8,9Hz), 8,44 (1H, s)

EM-BAR e/z = 1236 (M + Na)

Exemplo 36

Obteve-se a substância FR143483 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-/76-(2-etil-hexiloxi)-2~naftoil_7~lH-benzotriazolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3250, 1620 cm ^x

RMN (CDgOD, <5 ) : 0,93 (3H, t, J=7,4Hz), 0,98 (3H, t, J=7,4Hz), 1,06 (3H, d, J=6,8Hz), 1,24 (3H, d,

J=6,0Hz), 1,3-1,7 (8H, m), 1,7-1,9 (1H, m),

1,9-2,3 (3H, m), 2,3-2,7 (3H, m), 2,8-3,0 (1H, m) , 3,39 (1H, m), 3,7-4,7 (16H, m), 5,00 (1H, d, J=4,4Hz), 5,11 (1H, d, J=3,7Hz), 5,37 (1H, d,

J=2,6Hz), 6,87 (1H, d, J=8,3Hz), 7,04 (1H, dd,

J=8,3Hz e 2Hz), 7,17 (1H, dd, J=8,9Hz e 1,9Hz), 7,22 (1H, d, J=2Hz), 7,33 (1H, d,

J=l,9Hz), 7,7-7,9 (3H, m), 8,29 (1H, s)

EM-BAR e/z = 1263 (M + Na)

Preparação 37

Obteve-se a substância FR140728 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-(6-deciloxi-2-naftoil)-lH-benzotriazolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm'¹

RMN (DMSO-dg + D₂0, S ) : 0,86 (3H, t, J=6,6Hz), 0,97 (3H, d, J=6,7Hz), 1,07 (3H, d, J=5,9Hz), 1,2-1,6 (14H, m), 1,7-2,1 (5H, m), 2,1-2,5 (3H, m),

2,5-2,7 (1H, m), 3,19 (1H, m), 3,45 (1H, m),

3,73 (2H, m), 3,9-4,5 (12H, m), 4,79 (1H, d,

J=3Hz), 4,87 (1H, d, J=3,8Hz), 5,07 (1H, d,

J=3Hz), 6,74 (1H, d, J=8,2Hz), 6,79 (1H, dd,

J = 8,lHz e 2Hz), 7,06 (1H, d, J = 2Hz) , 7,23 (1H, dd, J=8,9Hz e 2,4Hz), 7,38 (1H, d, J=2,4Hz),

7,85 (1H, d, J=8,7Hz), 7,89 (1H, d, J=8,7Hz),

7,93 (1H, d, J=8,9Hz), 8,45 (1H, s)

EM-BAR e/z = 1291 (M + Na)

Exemplo 38

Obteve-se a substância FR142172 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-/6—(3,7-dimetiloctiloxi)~2~naftoilJ7-1H~benzotriazolo~3~óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1610 cm’¹

RMN (DMS0-d₆ + DgO, 8 ) : 0,85 (6H, d, J=6,6Hz), 0,95 (3H, d, J=5,9Hz), 0,97 (3H, d, J=6,7Hz), 1,08 (3H, d, J=5,9Hz), 1,1-1,4 (6H, m), 1,4-2,1 (7H, m) , 2,1-2,5 (3H, m) , 2,5-2,7 (1H, m) , 3,19 (1H, m), 3,74 (2H, m), 3,9-4,6 (12H, m), 4,81 (1H, d,

J = 3Hz) , 4,87 (1H, d, J=3,8Hz), 5,07 (1H, d,

J=3Hz), 6,74 (1H, d, J=8,2Hz), 6,83 (1H, dd,

J = 8,lHz e 2Hz), 7,06 (1H, d, J = 2Hz) , 7,23 (1H, dd, J=8,9Kz e 2,4Hz), 7,40 (1H, d, J=2,4Hz),

7,85 (1H, d, J=8,7Hz), 7,89 (1H, d, J=8,7Hz),

7,93 (1H, d, J=8,9Hz), 8,45 (1H, s)

EM-BAR e/z = 1291 (M + Na)

Exemplo 39

Obteve-se a substância FR143326 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o l-£ 6-(3,7-dimetil~6-octeniloxi) -2~naftoil J~ -lH~benzotriazolo~3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620, 1260, 1040 cm’¹

RMN (CDgOD, b ) : 1,00 (3H, d, J=6,2Hz), 1,06 (3H, d, J=6,8Hz), 1,25 (3H, d, J=5,9Hz), 1,2-1,6 (2H, m), 1,61 (3H, s), 1,67 (3H, s), 1,63-2,3 (8H, m), 2,3-2,7 (3H, m) , 2,8-3,0 (1H, m) , 3,39 (1H, m), 3,7-4,8 (16H, m), 5,00 (1H, d, J=5,lHz),

5,08-5,2 (2H, m), 5,37 (1H, d, J=2,5Hz), 6,87 (1H, d, J=8,3Hz), 7,04 (1H, d, J=8,3Hz), 7,15 (1H, d, J=8,9Hz), 7,21 (1H, s), 7,33 (1H, s),

7,71 (1H, d, J=8,7Hz), 7,77-7,85 (2H, m) , 8,28 (1H, s)

Exemplo 40

Obteve-se a substância FR142390 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-/7 θ~ (E)-3,7-dimetil~2,6-octadieniloxiJ -2-naftoilJ-lH-benzotriazolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm

RMN (DMSO-dg + D₂0, £ ) : 0,97 (3H, d, J=6,7Hz), 1,07 (3H, d, J = 6,0Hz), 1,57 (3H, s), 1,61 (3H, s) , 1,76 (3H, s), 1,8-2,5 (9H, m) , 2,5-2,7 (1H, m) , 3,19 (1H, m), 3,45 (1H, m), 3,73 (2H, m),

3,9-4,6 (11H, m), 4,70 (2H, d, J=6,5Hz), 4,80 (1H, d, J=3Hz) , 4,87 (1H, d, J = 3,8Hz), 5,07 (2H, m), 5,51 (1H, t, J=6,5Hz), 6,74 (1H, d,

J = 8,3Hz), 6,83 (1H, dd, J = 8,3Hz e 2Hz) , 7,07 (1H, d, J=2Hz), 7,24 (1H, dd, J=8,9Hz e 2,4Hz), 7,40 (1H, d, J=2,4Hz), 7,8-8,0 (3H, m) , 8,45 (1H, s)

FAB-MS e/z = 1287 (M + Na)

Exemplo 41

0bteve~se a substância FR140729 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-(6-dodeciloxi~2-naftoil)-lH-benzotriazolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1610 cm’¹

RMN (DMSO-dg + D₂0, <£ ) : 0,85 (3H, t, J = 6,6Hz), 0,97 (3H, d, J=6,7Hz), 1,07 (3H, d, J=5,9Hz), 1,2-1,6 (18H, m), 1,7-2,1 (5H, m), 2,1-2,5 (3H, m) ,

2,5-2,7 (1H, m) , 3,19 (1H, m), 3,45 (1H, m),

3,73 (2H, m), 3,9-4,5 (12H, m), 4,79 (1H, d,

J=3Hz), 4,87 (1H, d, J=3,8Hz), 5,07 (1H, d, J=3Hz), 6,74 (ÍH, d, J=8,lHz), 6,78 (1H, dd, J=8,lHz e 2Hz), 7,06 (1H, d, J = 2Hz) , 7,23 (1H, dd, J=8,9Hz e 2,4Hz), 7,38 (1H, d, J=2,4Hz),

7,85 (1H, d, J=8,7Hz), 7,89 (1H, d, J=8,7Hz), 7,93 (1H, d, J=8,9Hz), 8,44 (1H, s)

EM-BAR e/z = 1320 (M + Na)

Exemplo 42

Obteve-se a substância FR140730 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-(2-antrilcarbonil)-lH-benzotriazolo-3~óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm¹

FAB-MS e/z = 1185 (M + Na)

Exemplo 43

Obteve-se a substância FR143020 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-/7 2-(4-octiloxifenil) -acetil J7-lH-benzotria~ zolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm¹

RMN (CDgOD, h ) : 0,87 (3H, t, J=6,8Hz), 1,0-1,2 (6H, m), 1,2-1,6 (10H, m) , 1,6-1,85 (2H, m) , 1,85-2,1 (3H, m), 2,3-2,6 (3H, m), 2,7-2,85 (1H, m), 3,32

(1H, m), 3,46 (2H, s) ,	3,7-	4,7	(16H, m),	5,04
(1H, d, J=3,7Hz) , 5,23	(1H,	d,	J=2,7Hz),
6,75-6,9 (3H, m), 7,01	(1H,	d,	J=8,3Hz),	7,15
(2H, d, J = 8,5Hz) , 7,30	(1H,	s)
EM-BAR e/z = 1227 (M + Na)

Exemplo 44

Obteve-se a substância FR143021 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-/7 3-(4-octiloxifenil)-propionil/7~lH-benzo~ triazolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm'¹

EM-BAR e/z = 1241 (M +Na)

Exemplo 45

Obteve-se a substância FR141315 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o l-£*(E)-3-(4-octiloxifenil)-acriloilJ-1H-benzotriazolo-3-óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm'¹

RMN (DMS0-d₆ + DgO, b ) : 0,86 (3H, t, J=6,7Hz), 0,97 (3H, d, J=6,7Hz), 1,04 (3H, d, J=5,4Hz), 1,2-1,5 (10H, m), 1,6-2,0 (5H, m) , 2,1-2,5 (3H, m) ,

2,5-2,6 (ÍH, m) , 3,17 (ÍH, m), 3,3-4,5 (15H, m) ,

4,79 (1H, d, J = 3Hz) , 4,86 (ÍH, d, J = 3,8Hz), 5,01 (ÍH, d, J = 3Hz) , 6,57 (ÍH, d, J = 15,8Hz), 6,74 (ÍH, d, J=8,2Hz), 6,82 (ÍH, d, J=8,2Hz), 6,97 (2H, d, J=8,8Hz), 7,09 (ÍH, s), 7,34 (1H, d,

J=15,8Hz), 7,52 (2H, d, J=8,8Hz)

EM-BAR e/z = 1239 (M + Na)

Exemplo 46

0bteve~se a substância FR140105 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o 1-(O^-octil-N,N-dimetil-L-tirosil)-lH-benzo~ triazolo-3~óxido, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 12.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm’¹

RMN (CDgOD, 5 ) : 0,91 (3H, t, J=6,8Hz), 1,06 (3H, d, J~6,8Hz), 1,12 (3H, d, J=6,lHz), 1,33 (10H, m) ,

1,74 (2H, m), 1,98 (3H, m), 2,40 (6H, s),

2.3- 2,6 (3H, m), 2,8 (2H, m), 2,9-3,1 (ÍH, m),

3.3- 3,5 (2H, m), 3,6-4,7 (16H, m), 5,06 (ÍH, d, J=3,8Hz), 5,33 (ÍH, d, J=3Hz) , 6,77 (2H, d,

J=8,6Hz), 6,86 (1H, d, J=8,3Hz), 7,03 (1H, dd,

J = 8,3Hz e 2Hz) , 7,07 (2H, d, J = 8,6Hz), 7,31 (ÍH, d, J=2Hz)

Exemplo 47

Obteve-se a substância FR141564 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o cloreto de 4~octiloxifenilsulfonilo, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 6.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm¹

RMN (DMS0-d₆ + D₂0, h ) : 0,87 (3H, t, J=6,7Hz), 0,97 (3H, d, J = 6,8Hz), 1,04 (3H, d, J = 5,7Hz) , 1,1-1,5 (10H, m), 1,6-2,1 (5H, m), 2,45 (3H, m), 2,5-2,7 (1H, m), 3,19 (1H, m), 3,7-4,5 (16H, m) , 4,80 (1H, d, J = 3Hz) , 4,88 (1H, d, J=4Hz) , 5,08 (1H, d, J=3Hz), 6,74 (1H, d, J=8,2Hz), 6,82 (1H, d, J=8,2Hz), 6,84 (2H, d, J=8,7Hz), 7,07 (1H, s),

7,51 (2H, d, J=8,7Hz)

EM-BAR e/z = 1249 (M + Na)

Exemplo 48

Obteve-se a substância FR143170 fazendo-se reagir a substância FR133303 com o cloreto de 6~octiloxi-2~naftilsulfonilo, por meio de um processo idêntico ao descrito no Exemplo 6.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm¹

RMN (CDgOD, á ) : 0,29 (3H, d, J=6,0Hz), 0,91 (3H, t, J=6,7Hz), 1,07 (3H, d, J=6,9Hz), 1,25-1,6 (10H, m), 1,7-2,2 (5H, m), 2,2-2,6 (4H, m), 3,37 (1H, m) , 3,55-4,65 (17H, m), 4,97 (1H, m)', 5,54 (1H,

m) , 6,84 (1H, d, J = 8,3Hz), 7,01 (1H, dd, J = 8,4Hz e 2Hz), 7,15-7,3 (3H, m), 7,75-8,0 (3H, m),

8,35 (1H, s)

EM-BAR e/z = 1299 (M + Na)

Exemplo 49

A uma solução de 0,24 g da substância FR138364, obtida no Exemplo 5, em 5 ml de acetonitrilo, adicionaram-se 0,132 g de ácido p-toluenossulfónico e agitou-se durante 8 horas à temperatura ambiente. Adicionou-se a mistura reaccional com água e corrigiu-se o pH da fase aquosa para 4,5 com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. Submeteu-se a solução aquosa a uma cromatografia em coluna Diaion HP-20 e eluíu~se com metanol aquoso a 80%. Reuniram-se as fracções contendo o composto pretendido e evaporaram-se sob pressão reduzida para eliminar o metanol. Liofilizou-se o resíduo para se obterem 0,15 g da substância FR138912.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm¹

EM-BAR e/z = 1272 (Μ + K)

Exemplo 50

Agitou-se uma mistura de 0,15 g da substância FR138728, obtida no Exemplo 8, com 0,031 g de l-octil~l,4-di-hidropiridina-4-tiona em N,N-dimetilformamida durante 1 hora e trinta minu-

tos sob arrefecimento com gelo. Pulverizou-se a mistura reaccional com 50 ml de éter dietílico. Filtrou-se o precipitado e secou-se sobre pentóxido de fósforo sob pressão reduzida. Adicionou-se o pó a 300 ml de água e corrigiu-se o pH para 4,5. Submeteu-se a solução aquosa a uma cromatografia em coluna Diaion HP-20 (50 ml) e eluíu-se com metanol aquoso a 80%. Reuniram-se as fracções contendo o composto pretendido e evaporaram-se sob pressão reduzida para eliminar o metanol. Liofilizou~se o resíduo para se obterem 0,15 g da substância FR138970.

IV (Nujol) : 3300, 1620 cm’¹

EM-BAR e/z = 1222 (M livre + Na)

Os compostos seguintes, do Exemplo 51 a 53, obtiveram-se de acordo com um processo idêntico ao descrito no Exemplo 3.

Exemplo 51

Substância FR138727

RMN (CDgOD, 8 ) : 0,90 (3H, t, J=6,8Hz), 1,05 (3H, d, J=6,8Hz), 1,17-1,33 (13H, m), 1,6-1,8 (2H, m),

1,9-2,1 (3H, m), 2,50 (1H, m), 2,75 (1H, dd,

J=16Hz e 4Hz), 3,40 (1H, m), 3,7-3,8 (1H, m),

3,98 (2H, t, J=6,2Hz), 3,9-4,2 (5H, m), 4,3-4,5 (5H, m), 4,5-4,7 (3H, m), 4,97 (1H, d, J=3Hz),

5,06 (1H, s), 5,20 (1H, d, J = 3Hz) , 5,40 (1H, d,

J = 3Hz) , 6,85 (1H, d, J = 8,3Hz), 6,95 (2H, d

-141J=8,5Hz), 7,02 (1H, d, J=8,3Hz), 7,30 (1H, d, J=8,5Hz), 7,44 (1H, s)

Exemplo 52

Substância FR138912 IV (Nujol) : 3300, 1620 cm”¹

Exemplo 53

Substância FR138960 IV (Nujol) : 3300, 1620 cm”¹

Em seguida apresenta-se a fórmula geral de estrutura dos compostos descritos nos Exemplos 54 e 55.

HO. OH

0H

Exemplo N°	Composto N°	R
54	FR144274	-^C°-O~O-°^<CH2>6^CH3
55	FR144271	-^C0HO-⁰O'^0ÍCH2^)5CH3

Os exemplos seguintes (54 e 55) foram obtidos de acordo com o método idêntico ao descrito no Exemplo 3.

Exemplo 54

Substância FR144274

IV (Nujol) : 3300, Í620 cm¹

Anal. Calcd. para CggHygNgSO^Na 6H₂0

C : 48,53, H : 6,29, N : 5,23, S : 2,35 Determ. C : 48,36, H : 6,34, N : 8,15, S : 2,30

EM-BAR e/z 1275 (M+Na)

Exemplo 55

Substância FR144271

Anal. Calcd. para C^Hy^NgSO^Na 6K₂0

C : 47,57, H : 6,14, N : 8,22, S : '2,35 C : 47,56, H : 6,05, N : 8,18, S : 2,27

EM-BAR-EM e/z + (M+Na)

-143mula geral

Claims

REIVINDICAÇÕES

1.- Processo para a preparação de compostos de fórsn r-

Cil

-144- na qual

R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo acilo;

r₂ representa um grupo hidroxi ou aciloxi;

Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxisulfoniloxi; e r₄ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo carbamoílo;

com as condições de:

(i) Rg representar um grupo aciloxi quando Rg representa um átomo de hidrogénio; e (ii) não representar um grupo palmitoílo quan do Rg representa um grupo hidroxi;

Rg representa um grupo hidroxisulfoniloxi; e R^ representa um grupo carbamoílo, ou dos seus sais, caracterizado pelo facto (i) de se submeter o composto de fórmula j

/ Cz ⁰ •Ui]

-145- ou um seu sal a uma reacçao de eliminação do grupo N-acilo para se obter o composto de fórmula ou um seu sal, ou (ii) de se submeter o composto de fórmula Ia preparado em (i) ou um seu sal a uma reacçâo de acilação para se obter um composto de fórmula geral

-146- na qual

R_la representa um grupo acilo excepto um grupo palmitoílo, ou um seu sal, ou (iii) de se submeter um composto de fórmula geral na qual ^Rlb ^reP^resenta çpmpo aralcanoílo inferior que comporta um grupo alcoxi superior e amino protegido, ou um seu sal a uma reacção de eliminação do grupo protector do radical amino para se obter um composto de fórmula geral

-147- na qual representa um grupo aralcanoílo inferior que comporta um grupo alcoxi superior e amino, ou um seu sal, ou (ív) de se fazer reagir um composto de fórmula geral

Cie]

-148na qual representa um grupo halogeno-alcanoílo inferior, ou um seu sal com piridinotiona comportando, eventualmente um grupo alquilo superior ou um seu sal para se obter um composto de fórmula geral na qual representa um grupo piridil-tio-alcanoxlo in ferior comportando, eventualmente, um grupo alquilo superior, ou um seu sal, ou (v) de se submeter um composto de fórmula geral

-149- na qual ou um seu sal to de fórmula

Rg e têm os significados definidos antes; e representa um grupo acilo, a uma reacçâo de acilação para se obter um compos-

-150- na qual

Hg e R^ têm os significados definidos antes; R-j-f representa um grupo acilo; e R_2a representa um grupo aciloxi, ou um seu sal.

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-151-

-- R E S OMQ

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS POLIPÉPTIDOS

Descreve-se um processo para a preparação de compostos de fórmula geral *2 Cl] ou dos seus sais que consiste, por exemplo, em submeter o composto de fórmula

-152- ou um seu sal a uma reacção de eliminação do grupo N-acilo para se obter o composto de fórmula