PT96889A

PT96889A - Processo para a preparacao de novos sais de metais alcalino-terrosos de oxa-poliacidos e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT96889A
Application number: PT96889A
Authority: PT
Inventors: Yannis Tsouderos; Stanislas Czernecki; Claude Fugier
Original assignee: Adir
Priority date: 1990-02-27
Filing date: 1991-02-26
Publication date: 1991-10-31
Also published as: ZA911401B; OA09481A; US5075336A; IE910641A1; EP0445025A3; CA2036920A1; JPH04211631A; FR2658816A1; EP0445025A2; AU7137691A

Description

"PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS SAIS DE METAIS ALCALINO- TERROSOS DE OXA-POLIACIDOS E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTEM" A presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de novos sais alcalino-terrosos de oxo-poliácidos. 0 fornecimento de catiões divalentes é indispensável à vida dos organismos animais, particularmente os mamíferos como o homem. Este fornecimento é em geral assegurado pela alimeji tação.

Contudo, quando os metabolismos do organismo estão desequilibrados, é indispensável introduzir um suplemento de c£ tiões divalentes de modo a tratar doenças tais como: carências em oligoelementos, deficiências magnesianas e osteoporose.

Certas publicações da literatura como por exemplo: - Gastineau, "Poc. Straff. Mecting Mayo Climic" 35, 105 - 111 (1960) - Skoryna, "Can. Med. Assoe." 125 (7), 702 - 712 (1981) ou finalmente, - Skoryna, "Trace Subst. Environ. Health" 18_, 3 -23 (1984) referem aactividade do lactato, gluconato e carbonato de estrôji cio no tratamento da osteoporose. A requerente descobriu agora um novo processo para a preparação de sais de catiões divalentes de oxa-poliácidos cuja biodisponibilidade ê nitidamente melhor em relação a todos os outros sais conhecidos.

Alguns dos sais assim preparados, e em particular os sais de estrôncio, de cálcio e de magnésio, possuem uma a£ tividade surpreendente sobre o metabolismo ósseo sabendo-se que eles activam fortemente a osteoformação ao mesmo tempo que inibem paralelamente a osteo-reabsorção.

Certos sais alcalinos de oxa-poliácidos foram já descritos na literatura (DE 22 48 708 B2) pelas suas propriedades detergentes sem que se tenha demonstrado qualquer propriedade biológica.

Mais especificamente, a presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de sais de metais alcalino-terrosos de fórmula geral 0. /0R4 CR1R2 c ^ (I) I / (CHR5)í θ0| \ 0 co® li , 0 m2® na qual - R^, R2, R3 e R^ representam, cada um, independentemente um do outro um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior comportando 1 a 4 átomos de carbono ramificado ou não, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, carboxialquilo, -3-

- i pode tomar os valores 0 e 1, - representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior com 1 a 4 átomos de carbono ramificado ou não, arilo ou arilalquilo eventualmeri te substituído, carboxialquilo, com a condição de quando i = 0, R^ = H, R2= Ch^OH e quando i = 0, R^ = R2= R^=H então R^ não represente o grupo CH^, entendendo-se que o termo substituído associado às expressões arilo ou arialquilo significa que os nd cleos aromáticos podem ser substituídos por um ou mais átomos de halogéneo ou grupos alquilo, nitro, alcoxi, hidroxi ou trifluorometilo, - M representa um metal alcalino-terroso, preferencialmente o estrôncio, assim como dos seus isómeros, epímeros, diastereoisómeros e enari tiámeros isolados ou sob a forma de mistura, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um derivado de fórmula geral 0

(II) CHOH CHOH X /

CH

OH na qual R^, R^ e R^ têm os significados defini dos antes, comácido periódico para se obter um derivado de fórmula geral ο Ο - R4 CR1R2

/ NR3 (III)

CH Ο na qual R^, R^, R-j e R^ têm os significados definidos antes, que se submete, em solução de álcool de fórmula geral XOH, a uma reacção de oxidação com bromo para se obter o poliéster de fórmula geral \ 0 CR1R2

(IV) na qual R^, R2, e R^ têm os significados definidos antes e X representa um radical alquilo inferior comportando 1 a 4 átomos de carbono ramificado ou não, que se submete a uma reacção de saponificação, em meio hidroaJL cóolico, com um hidróxido de metal alcalino-terroso para se obter o sal de metal alcalino-terroso de fórmula geral CR1R2

CO® ®OC

(ΙΑ)

II II O m2® 0 na qual F^, R2> e M têm os significados defi nidos antes.

Os ácidos correspondentes podem obter-se mediante acidificação com ácido clorídrico.

Um caso particular do processo de acordo com a presente invenção é a preparação dos derivados de fórmula geral I na qual o símbolo i representa o número 1 - Estes derivados preparam-se a partir das alquil--4,6-0-benzilideno-glucopiranosidos de fórmula geral

OH (V) na qual F^, R^ e R^ têm os significados definidos an tes, que se fazem reagir com ácido periódico para se obter o dialdeí do que se desprotege, em seguida, para se obter o composto de fórmula geral ο hoch2

V / X X ' XR2 sQ - R4 ^r3

CH / \ HO CH

CH (VI) 0

0 na qual R2, R^ e R^ têm os significados definidos a£ t e s, que se submete, em solução de álcool de fórmula geral XOH, a uma reacção de oxidação com bromo para se obter o poliéster de fórmula geral HOCH? 2 \ 0

/0 - R4 ^R3 (VII) CH XOC / \

HO COX 0 na qual R2, R^ e R^ têm os significados definidos antes e X representa um radical alquilo inferior compor_ tando 1 a 4 átomos de carbono ramificado ou não, que se submete' a um.a reacção de saponificação em meio hidroal- cóolico com um hidróxido de metal alcalino-terroso para se obter o sal de metal alcalino-terroso de fórmula geral HOCH-- \ / HO X X n C J /0R4 lXR2 | S3 CH e0C \:οθ 0 0 M2® (IB) na qual F^, R^, R^ e M têm os significados definidos antes.

Os sais de metais alcalino-terrosos de fórmula geral I preparados pelo processo de acordo com a presente invenção possuem por um lado uma excelente biodisponibilidade e por outro lado uma actividade notável, estimulando fortemente a osteofor-mação ao mesmo tempo que inibem paralelamente a osteo-reabsorção, Estas propriedades particularmente interessantes permitem a sua utilização no tratamento de certas doenças ósseas e em particular as resultantes de distúrbios da mineralização como a osteo-porose ou tumores com metastases ósseas. Podem, igualmente, ser utilizados no tratamento do envelhecimento cutâneo e vascular das afecções hepáticas e das afecções dentárias. Os sais de cálcio e de magnésio podem ser utilizados no tratamento de certas afecções como as carências, que necessitam de um fornecimento terapêutico dè catioes divalentes. A presente invenção tem igualmente por objectivo um processo para a preparação de composições farmacêuticas conteji do como ingrediente activo um dos seus sais de fórmula geral I misturado ou associado com um excipiente inerte, não tóxico e aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, como por exemplo a água destilada, a glucose, a lactose, o amido, o talco, a etil-celulose, o estearato de magnésio, a sílica coloidal ou a manteiga de cacau.

As composições farmacêuticas assim obtidas apresentam -se geralmente sob forma doseada e podem conter, de acordo com as afecções tratadas a idade e o sexo do doente, entre 1 e 1000 mg de ingrediente activo.

Podem apresentar-se sob a forma de comprimidos, dra-geias, gélulas, soluções injectáveis ou bebíveis ou supositórios e ser, de acordo com o caso, administradas por via oral, rectal ou parenteral na dose compreendida entre 1 e 1000 mg uma a várias vezes por dia.

Os exemplos seguintes ilustram o processo de acordo com a presente invenção sem contudo a limitarem de modo algum. EXEMPLO 1: 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioato

de estrôncio (composto de fórmula geral I em que o símbolo i=0, o símbolo R^rCH^OH, 2 + 2 + R2 = R^ = H, R^ = C2H^, M · =Sr · preparado a pa:r tir do etil-j) -D-glucopiranosido) ESTÁDIO I: Etil-2,3,4,6-tetra-O-acétil-^ -D-glucopiranosido .

Em um reactor sob atmosfera de azoto introduzem-se um litro de tolueno e 23,8 g (0,517 mole) de etanol anidro. Adiciona-se em seguida, à temperatura ambiente a solução previamente

preparada de 200 g (0,513 mole) de ^-D-glucose-penta-acetato em 2 litros de tolueno. Aquece-se a 40°C e adiciona-se mais ou menos após 10 minutos, a solução previamente preparada de 30 ml (0,258 mole) de tetracloreto de estanho em 1 litro de tolu£ no. Mantém-se ainda durante 55 minutos a 40°C, hidrolisa-se com égua, seca-se sobre sulfato de magnésio e concentra-se depois sobre pressão reduzida.

Retoma-se o composto bruto obtido sob agitação vigor£ sa com 300 ml de uma mistura de etanol-água (50:50). Arrefece--se a suspensão a -10°C e filtra-se depois sob atmosfera de ár-gon.

Dissolve-se o composto sólido húmido a quente (~60°C) em 800 ml de uma mistura de etanol/água (60:40). Arrefece-se a -10°C, deixa-se cristalizar durante 1 hora e filtra-se depois sob atmosfera de árgon. Seca-se o composto sob vazio na presença de peso constante.

Obtém-se deste modo 79 g (41¾) de etil-2,3,4,6-tetra--0-acetil-^-D-glucopiranosido sob a forma de um pó branco fino. Ponto de fusão; 106°C. ESTÁDIO II: Etil-^-D-glucopiranosido.

Em um reactor sob atmosfera de azoto introduzem-se 67,68 g de etil-2,3,4,6-tetra-0-acetil-^-D-glucopiranosido e 382 ml de metanol anidro. Agita-se a suspensão à temperatura ambiente e adiciona-se depois, no decurso de 5 minutos, 18 ml (0,018 mole) de uma solução molar de metilato de sódio em metanol .

Agita-se durante 110 minutos a 23 - 24°C e neutrali- λ za-se depois mediante adição de 21,5 g de resina amberlite H , Elimina-se as resinas mediante filtração e seca-se depois o

meio reaccional sob pressão reduzida.

Obtêm-se deste modo 36,5 g (100¾) de etil-β-D-glu-copiranosido sob a forma de uma massa deliquescente amarela. ESTÁDIO III: 2-etoxi^4-hidroximetil-3-oxa-glutaral- deído.

Em um reactor sob atmosfera de azoto introduzem-se 35 g de etil--D-glucopiranosido e 424 ml de água. Agita-se fortemente e adiciona-se rapidamente, à temperatura ambiente, a solução previamente preparada de 81,2 g (0,356 mole) de ácido periódico em 900 ml de água. Agita-se durante 3 horas à teni peratura ambiente, arrefece-se depois e neutraliza-se mediante adição de 64 ml de hidróxido de sódio 10N. Elimina-se a água mediante destilação sob pressão reduzida. Retoma-se o composto sólido branco obtido com 828 ml de etanol e agita-se fortemente durante uma hora. Elimina-se o composto insolúvel mediante filtração e concentra-se o filtrado etanólico a 40°C sob pressão reduzida.

Obtém-se deste modo 30,1 g (90,4¾) de 2-etoxi-4-hidrot ximetil-3-oxa-glutaraldeído. ESTÁDIO IV: 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioa-to de metilo.

Em um reactor sob atmosfera de azoto introduzem-se 43,4 g de 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa—glutaraldeído, 220,5 g de hidrogenocarbonato de sódio e 221 ml de uma mistura de meta-nol/água (90:10). Agita -se à temperatura ambiente e adiciona--se no decurso de 2 horas a solução previamente preparada de 148 g de bromo em 773 ml de uma mistura de metanol/água (90:10). Agita-se em seguida durante 2 horas à temperatura ambiente e i£ troduz-se depois em várias vezes 33,75 g de tiossulfato de sódio *11-

Filtra-se a suspensão obtida, adicionam-ise 280 ml de água ao filtrado e elimina-se o metanol a 40°C sob pressão reduzida. Extrai-se o concentrado com 3 vezes 550 ml de clore to de metileno, lavam-se as fases das extracções com 226 ml de água, secam-se depois sobre sulfato de magnésio e levam-se à secura sob pressão reduzida.

Obtêm-se deste modo 25,5 g (69,8¾) de 2-etoxi-4-hidr£ ximetil-3-oxa-pentanodioato de metilo sob a forma de um composto xaroposo amarelo. RMN 200 MHz (CDCl-j, TMS) CH3O 1 8 1 ÇH2OH CH- -0 /' \ C IJ — / - c

4 OCH2CH3 5

H 0 3

1.1 ppm tripleto CH^ 5 3.2 ppm multipleto CH 6 3.6 ppm multipleto CH^ 4 3.6 a 3,7 ppm singuletos 2Ctij 1 e 2 3,8 ppm multipleto 7 4.3 ppm singuleto CH 3 5 ppm singuleto OH 8 Microanálise:

Calculado C 45,76 H 6,82 Encontrado C 45,80 H 6,86 ESTÁDIO V: 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioa- to de estrôncio (obtido a partir do etil-β--D-glucopiranosido).

Em um reactor sob atmosfera de azoto introduzem-se 10,53 g de hidróxido de estrôncio em 120 ml de água. Leva-se a refluxo durante 15 minutos e elimina-se o composto insolúvel mie diante filtração a quente. Adiciona-se então ao filtrado a solju ção previamente preparada de 9,45 g de 2-etoxi-4-hidroximetil--3-oxa-pentanodioato de metilo em 20 ml de metanol. Leva-se o meio reaccional a refluxo durante 1 hora, arrefece-se a 30°C, concentra-se sob pressão reduzida até 2/3 do volume inicial e gela-se, depois, a 0°C até que termine a cristalização do composto. Isola-se o sal de estrôncio mediante filtração e seca-se depois sob vazio a 30°C na presença de ^2^5*

Obtêm-se deste modo 6,36 g (65?ó) de 2-etoxi-4-hidroxi-metil-3-oxa-pentanodioato de estrôncio sob a forma de um pé braji co.

Ponto de fusão superior a 260°C. RMN 200 MHz (D20, TMS)

5 ÇH20H 1 CH — — 0 /* \ c\ ||V 0 / ®oc II 0 Sr2® C<\ \ H 2 1 OCH2CH3 1,10 ppm tripleto CH^ 1 3,60 - 3,45 ppm multipleto CH2 2 3,81 ppm multipleto CH2 5 4,15 ppm multipleto CH 4 4,80 ppm singuleto CH 3

Microanálise:

Calculado C 28,42 H4,09

Encontrado C 28,45 H 4,13

Poder rotatório: 20

CoU - + 42 (C = 5 mg em 1 ml de água)

D EXEMPLO 2 : 2-propiloxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioa-to de estrôncio (Composto de fórmula geral I em que 0 símbolo i = 0, 0 símbolo os símbolos R2 = R-5 = H, o símbolo R^C^t^CH^, o - 1 * 2φ . 2© preparado a partir do símbolo M = Sr propil- A -D-glucopiranosido)

Procede-se de acordo com o processo descrito no exem pio 1, substituindo no estádio I o etanol anidro pelo n-propa-nol anidro.

Ponto de fusão superior a 260°C RMN 200 MHz (CD30D, TMS) 6 7 CH20H 1 CH — — 0 / 5 \ llv / ®o-c 0 Sr2® .11 0 3 2 l

OCH2CH2CH3 H 4 0,90 ppm multipleto CH^ 1 1,6 ppm multipleto CH^ 2 3,36 ppm multipleto CH2 6 3,95 ppm multipleto 0H2 3 4,45 ppm multipleto CH 5 5,17 ppm singuleto CH 4 5,35 ppm singuleto OH 7 1 EXEMPLO 3: 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioa-to de estrôncio (composto de fórmula geral I em que o símbolo i=0, o símbolo =CH20H, os símbolos R2=^3=^’ 0 símbolo R^ = =C2H3 o símbolo ® = Sr ^ ® preparado a

partir do etil-O^-D-manopiranosido). ESTÁDIO I: Etil-¢(-D-manopiranosido

Em um reactor, sob atmosfera de azoto,, introduzem-se 100 ml de etanol absoluto, 12 g de resina amberlite H® e 18,02 g (0,100 mole) de D(+)-manose.

Aquece-se o meio reaccional a refluxo durante 7 horas, arrefece-se e elimina-se depois a resina mediante filtração.

Após lavagem da resina com etanol absoluto, reúne-se os filtrados e concentram-se sob pressão reduzida.

Seca-se para se obter 20,9 g (100¾) de etil-^-D-ma-nopiranosido. ESTÁDIO II: 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-glutaraldeí-do,

Em um reactor sob atmosfera de azoto introduzem-se 20 g de etil-^-D-manopiranosido e 242 ml de água. Agita-se forte-mente e adiciona-se rapidamente, à temperatura ambiente, a solução previamente preparada de 46,4 g (0,204 mole) de ácido periódico em 314 ml de água. Agita-se durante 3 horas à temperatura ambiente e arrefece-se depois, neutraliza-se mediante adição de 36,6 ml de hidróxido de sódio 10N e seca-se mediante des^ tilação sob pressão reduzida.

Retoma-se o resíduo com 473 ml de etanol e agita-se fortemente dunante uma hora. Elimina-se o composto insolúvel me diante filtração e concentra-se o filtrado etanólico a 40°C sob pressão reduzida.

Obtêm-se deste modo 16,8 g (88,3¾) de 2-etoxi-4-hi-droximetil-3-oxa-glutaraldeído, 5-

ESTADIO III: 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodio,a to de metilo

Em um balão sob atmosfera de azoto introduzem-se 0,7 g de 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-glutaraldeído, 6 g de hidro-genocarbonato de sódio e 10 ml de uma mistura de metanol/água (90:10). Agita-se durante 10 minutos à temperatura ambiente e adiciona-se depois, gota a gota, a solução previamente preparada de 3,2 g de bromo em 10 ml de uma mistura de metanol/água (90:10).

Agita-se em seguida durante 4 horas à temperatura aim biente e adiciona-se depois 0,55 g de tiossulfato de sódio. filtra-se a suspensão, adicionam-se 4,5 ml de água e elimina-se o metanol a 40°C sob pressão reduzida. Extrai-se o concentrado com 3 vezes 35 ml de cloreto de metileno, lavam-se as fases orgânicas com 10 ml de água, secam-se depois sobre sulfato de magnésio e levam-se à secura sob pressão reduzida.

Obtém-se deste modo 0,75 g (100%) de 2-etoxi-4-hidr£ ximetil-3-oxa-pentanodioato de metilo.

Microanálise:

Calculada: C 45,76 H 6,82 Encontrada: C 45,8 H 6,9 ESTÁDIO IV: 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioa-to de estrôncio (preparado a partir do etil-o^-D-manopiranosido)

Em um balão, sob atmosfera de azoto, introduz-se 0,89 g de hidróxido de estrôncio em 20 ml de água. Leva-se a refluxo durante 15 minutos e elimina-se o composto insolóvel mediante filtração a quente. Adiciona-se então ao filtrado a solução pr£ viamente preparada de 0,8 g de 2-etoxi-4-hidroxi-metil-3-oxa--pentanodioato de metilo em 2 ml de metanol. Leva-se o meio reac -16- » cional a refluxo durante 1 hora e seca-se depois mediante evaporação sob pressão reduzida.

Redissolve-se o resíduo seco a quente em 20 ml de água e filtra-se a solução a quente antes de se secar. Seca-se o o resíduo obtido sob vazio a 120 C durante 5 horas.

Obtém-se deste modo 0,7 g (74%) de 2-etoxi-4-hidroxi-metil-3-oxa-pentanodioato de estrôncio sob a forma de um pó bran^ co. RMN 200 MHz (D20, TMS) 9

2 1

OCH2CH3 H 3 1,10 ppm tripleto CH^ 1 3,60 - 3,47 ppm multipleto 2 3,92 - 3,77 ppm multipleto Cl·^ 5 4,20 ppm dupleto dividido CH 4 5,00 ppm singuleto CH 3

Poder rotatório: 20

Co(J = + 44 (C = 5 mg em 1 ml de água)

D

EXEMPLO 4: 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioa-to de magnésio (Composto de fórmula geral I em que o símbolo i=0, o símbolo R^=CH20H, os símbolos R2 = R-j = H, o símbolo R^=C2H^, o símbolo M^ Mg^ ® preparado a partir de etil-^3-D-glucopiranosido).

Procede-se de acordo com o processo descrito no exem pio 1 substituindo no estádio V o hidróxido de estrôncio pelo hidróxido de magnésio. EXEMPLO 5: 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioa-

to de cálcio (Composto de fórmula geral I em que o símbolo i=0, o símbolo R^=CH20H, os símbolos R2=R^=H, o símbolo R^=C2H^, o 2 q 2 â) símbolo M = Ca preparado a partir do etil-^-D-glucopiranosido).

Procede-se de acordo com o processo descrito no exemplo 1 mas substituindo no estádio V o hidróxido de estrôncio pelo hidróxido de cálcio EXEMPLO 6: Comprimido doseado com 500mg de 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodj.oato de estrôn cio preparado a partir do etil-p~D-gluco-piranosido. Fórmula para 10000 comprimidos 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioato de estrôn cio------ 5 Kg

Lactose------------------------------------------ 2,150 Kg

Estearato de magnésio---------------------------- 0,05 Kg Sílica coloidal ---------------------------------- 0,005 Kg

Amido de milho----------------------------------- 0,595 Kg £18-

EXEMPLO 7: Gélula doseada com 5 mg de 2-etoxi-4-hi-droximetil-3-oxa-pentanodiato de estrôncio preparado a partir do etil-β-D-gluco-piranosido. Fórmula para 1000 qélulas 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioato de estrôn cio------------------------------------------------ 5 g

Lactose-------------------------------------------- 13 g

Amido de milho------------------------------------- 25 g

Talco---------------------------------------------- 5 g EXEMPLO 8: Estudo farmacológico dos derivados preparados pelo processo de acordo com a presente invenção: activi-dade sobre a osteoformação e a osteo-reabsorção a) principio

Osteoblastos e osteoclastos têm entre eles sistemas de comunicação ainda mal conhecidos que explicam o sincronismo de suas actividades permitindo o renovamento ósseo.

Pode-se calcular que estes sistemas de comunicação são conservados nos ossos mantidos em cultura de tecidos e que se pode assim determinar a actividade de moléculas fisiológicas ou terapêuticas "in Vitro" sobre células ósseas em condições próximas das condições fisiológicas. A actividade sobre a formação óssea e a actividade an-ti-reabsorvente das moléculas potencialmente activas como medicamentos podem ser detectadas e medidas "in Vitro" em cultura de tecidos. b) Metodologia a) Formação óssea

Meias caveiras de murganhos recém-nascidos (1-2 dias) -19·* % são cultivadas sobre grades no meio BGJ contendo prolina tri-tiada. Os explantes são cultivados durante 48 horas na presença do composto a testar a 37°C e, uma vez terminada a cultura, os ossos são lavados com ácido tricloroacético contendo prolina não radioactiva para eliminar "^H-prolina não incorporada.

Após lavagem e dissolução em hidróxido de sódio, determina-se a incorporação do marcador no osso e a quantidade de proteínas totais.

Determina-se assim o efeito do composto sobre a incorporação de prolina no osso em cultura.

Cada meia-caveira tratada ê comparada com a meia-caveira não tratada que serve de controlo e calcula-se a relação T/C. T/C = formação óssea na presença do composto testado formação óssea do controlo

Uma estimulação da formação óssea traduz-se por uma incorporação de prolina tritiada superior na caveira tratada em relação ao controlo (T/C >1). Uma inibição da formação óssea ma- * nifesta-se por uma relação T/CZ1. -4

Os compostos foram ensaiados a concentrações de 10 10 -6 , IO-8, 10' •10 in-12M e 10

Foram realizadas 6 a 9 experiências por ponto ^-reabsorção óssea 45 de

Ratas grávidas de 18 dias são injectadas com 150 ucuries Ca por via sub-cutânea.

Ao 19Ξ dia as ratas são sacrificadas, os fetos são retirados e mergulhados em um banho de álcool a 70 C e depois 2 banhos de PBS e mortos mediante corte da cabeça. Os dois ante- braços são dissecados, libertados da pele, dos tendões e dos músculos e as extremidades cartilaginosas são cortadas. Os antebraços são cultivados em caixas de cultura de 24 alvélolos na presença de 1,5 ml de MEM durante 24 horas por equilibração. Ao fim destas 24 horas o meio é substituído por 1,5 ml de BGJB suplementado com 10% de soro fetal de vitela. A reabsorção ê estimulada em todas as amostras com 400 mg de PTH.Os ossos são cultivados durante dois períodos sucessivos de 72 horas c£ da um e os meios de cultura são colhidos para determinar a quantidade de ^Ca libertado ao fim de cada um destes dois períodos Ao fim do 22 periodo (7 dias depois do início da cultura) os ossos são mergulhados durante 24 horas em 1,5 ml de ácido fórmico a 10% e o ^^Ca libertado dos ossos ê igualmente medido em um contador de cintilação.

Os resultados são expressos para cada um dos 2 períodos de cultura pela relação tratada/controlo calculada da' seguinte forma: radioactividade do meio tratado radioactividade libertada dos ossos radioactividade do meio controlo radioactividade libertada dos ossos

Os compostos-fo-r-anfc-ensaiados sobre este modelo nas coti centrações de 5.10 ^ e 5.10 ^ M. c) Resultados a) Actividade do 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-penta-nodioato de estrôncio obtido a partir do etil-^-D-glucopirano-

sido sobre a formação óssea, 0 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioato de estrôncio exerce ^in Vitro". na concentração de 10~^ M uma estimulação importante e estatisticamente significativa de osteo-formação determinada por incorporação de prolina marcada (síntese de colagénio).

-2 T/C

(7) (7) (7) (7) (7) 1,5 1

I 0,5 10-12 M 10-10 M IU-8 M 10-0 M 10-« M 10-12 M 10-10 M 10-θ M 10-6 m 10-4 M η 7 7 7 7 7 Média 1,0582 0,9717 1,0305 1,0740 1,4961** ESB» 0,1381 0,0926 0,1139 0,2298 0,1905 Valor máximo 1,2822 1,0974 1,2092 1,4652 1,8034 Valor minimo 0,8988 0,8467 0,8511 0,8433 1,2095 β ) Actividade do 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pen-tanodioato de estrôncio, obtido a partir de etil-β-D-glucop_i ranosido sobre a reabsorção óssea. 0 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioato de estrôncio exerce uma importante actividade anti-reabsorvente "in

Vitro", estatisticamente significativa a partir da concentra-~ -4 çao de 5.10 M. Esta actividade ê dose dependente. Apesar da estimulação pela PTH, a concentração de 5.10 Μ (A) inibe a reabsorção óssea e leva a um nível nitidamente inferior à reabsor ção espontânea

Taxa de reabsorção óssea (¾) T/C 01 - -34 J1 - 07 01 - 04 04 - 07 Controlo absoluto 6,8 í 0,5 4,5 í 1,9 - - PTH 14,3 í 3,4 (a) 37,0 ± 7,6 (b) 1,00 1,00 (A) 5 10'4 14,5 Í 4,1 31,1 - 8,34 (c) 1,01 0,84 (A) 5 10"3 6,4 - 0,9 (c) 2,4 í 0,5 (d) 0,45 0,06 -2Α- * 9 determinações por ponto a - diferente do controlo a p ^ 0,05 b - diferente do controlo a p^ 0,0001 c - diferente de PTH a p £ 0,05 d - diferente de PTH a p ZÍ 0,0001 EXEMPLO 9: Estudo farmacológico dos derivados preparados pelo processo de acordo com a presente invenção: Biodisponibilidade. - A determinação ê feita sobre lotes de 5 ratos Wistar machos. 2 © - A administração faz-se na dose de 50 mg de sr por Kg sob a forma de mini-gélulas de gelatina, . - 0 doseamento efectua-se mediante espectrometria de absorção atómica com ionização em chama para as concentrações superiores a 1 jsg/ml e ionização em forno para as concentrações inferiores a 1 yug/ml. - A biodisponibilidade absoluta do 2-etoxi-4-hidroxi-metil-3-oxa-pentanodioato de estrôncio preparado a partir do etil-β -D-glucopiranosido em relação ao cloreto de estrôncio é de 60,5%.

Claims

REIVINDICAÇÕES

- ·* 1.- Processo para a preparação de sais de metais al calino-terrosos de fórmula geral / 0 - Ri CR1R5 I / (CHR5)i *00 0 to» na qual (I) - R^, 1^, R^ e Rs representam, cada um, independentemente um do outro, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior com 1 a 4 átomos de carbono de cadeia linear ou ramificada, hidroxi, hidro xialquilo, alcoxi, alcoxialquilo ou carboxialqui-lo; i pode tomar os valores 0 e 1; - representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior com 1 a 4 átomos de carbono de cadeia linear ou ramificada, arilo ou arilalquilo eventualmente substituído, carboxialquilo, com a condição de quando i=0, R]_=R3=fi, R2=CH20H e quando i=0, R]_=R2=R3=H, R4 n^° representa um grupo CH^, entendendo-se que o termo substituído associado às expressões arilo ou arilalquilo significa que os núcleos aromáticos podem ser substituídos por um ou mais grupos alquilo, nitro, alcoxi, hidroxi, halogéneo ou trifluorometilo? - M representa um metal alcalino-terroso, assim como dos seus enantiómeros, epímeros, isõmeros e diastereoisómeros isolados ou sob a forma de mistura, caracteri-zado pelo facto de se fazer reagir - quer um derivado de fórmula geral ο CRiR2 CHOH

h (II)

\ / CK I OH na qual r^, r2, R3 e R4 têm os significados definidos antes, com ácido periódico para se obter um derivado de fórmula geral

(III) na qual R^, R2, R^ e R4 têm os significados definidos antes, que se submete, em solução de álcool de fórmula geral XOH, a uma reacção de oxidação com bromo para se obter o poliéster de fórmula geral / 0R4 R\R? C \ ' / çox xoc (IV) O 0

:8- na qual R^, R2, R^ e R4 t®® os significados definidos antes e X representa um radical alquilo inferior com 1 a 4 átomos de carbono de cadeia linear ou ramificada, que se submete a uma reacção de saponificação em meio hidroal-cõolico com um hidróxido de metal alcalino-terroso para se obter o sal de metal alcalino-terroso de fórmula geral / OR4 CH1R2Vo© 6qc/ (IA) 0 m2S o na qual , R2, R3, R4 e m têm os significados definidos antes , - quer um alquil-4,6-0-benzilideno-glucopiranosido de fórmula geral

(V) na qual 1*2, Rj e R4 têm os significados definidos antes, que se faz reagir com ácido periódico para se obter, após elimi nação do grupo protector, um composto de fórmula geral HO CH2 0 HO / 1 \ \ n \ |XR2 U CH /\ CH HC II II 0 0

(VI) na qual R2, R^ e R^ têm os significados definidos antes, que se submete, em solução de álcool de fórmula geral XOH, a uma reacção de oxidação com bromo para se obter um poliéster de fórmula geral *3 (VII)

XOC COX " II o 0 HO na qual &2 / R3 e Rj têm os significados definidos antes e X representa um radical alquilo inferior com 1 a 4 átomos de carbono de cadeia linear ou ramificada que se submete a umareacção de saponificação em meio hidroal-cõolico com um hidróxido de metal alcalino-terroso para se obter 0 sal de metal alcalino-terroso correspondente de fórmula geral HOCH2 X HO 0 / \ cv c |\r2 1 CH \ . 5CC II /0 - R4 ^«3 co* 0 m25 (IB) na qual , R^, R^ e M têm os significados definidos antes
2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação do 2-etoxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioato de e£ trôncio e dos seus isõmeros SS, RR, SR e RS isolados ou sob a forma de mistura / CH \ \ co© / ©OC I! II 0 Sr©© 0 CH (OCH2CH3) H0CH2\^ caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais / correspondentemente substituídos.
3.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação do 2-propiloxi-4-hidroximetil-3-oxa-pentanodioato de estrôncio e dos seus isómeros SS, RR, SR, RS isolados ou sob a forma de mistura HOCH?\ η CH CH (OCH2CH2CH3) \o© ©oc li II 0 Sr©© 0 caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais cor respondenteraente substituídos.
4.- Processo para a preparação de composições farmacêu ticas úteis para o tratamento de doenças ósseas tais como a os-teoporose, o envelhecimento cutâneo e vascular, afecções dentárias e doenças hepáticas, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade efectiva de um sal de metal alcalino-terroso, preparado pelo processo de acordo com as reivindicações 1 a 3, como ingrediente activo, só ou em associação com um ou vários ex cipientes ou veículos inertes, não tóxicos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.
5.- Processo de acordo com a reivindicação 4, caracte-rizado pelo facto de o ingrediente activo ser o 2-etoxi-4-hidro-ximetil-3-oxo-pentanodioato de estrôncio. O Agente Oficial da Propriedade Indw^riat