PT90635B

PT90635B - Processo para a preparacao de derivados do acido n-(5,6,7,8-tetra-hidropirido-{2,3-d}pirimidin-6-il-alcanoil)glutamico

Info

Publication number: PT90635B
Application number: PT90635A
Authority: PT
Inventors: Edward C Taylor; Chuan Shin
Original assignee: Univ Princeton; Lilly Co Eli
Priority date: 1988-05-25
Filing date: 1989-05-23
Publication date: 1994-10-31
Also published as: DK215289A; EP0343801A3; IL90179A0; ES2057116T3; JP2818198B2; HUT50342A; RU2002747C1; PT90635A; CN1038098A; NZ229242A; EP0343801B1; DK215289D0; DE68917211D1; AU611027B2; ATE109480T1; KR0131589B1; KR900018100A; IE891767L; CY2055B1; HU205356B

Description

DERIVADOS DO ACIDO N-(5,6,7,8-TETRA-HIDROPIRIDOÍ2,3-dJ PIRIMIDIN- 6-IL-ALCANOIL)-GLUTÂMICO

O invento em consideração diz res peito aos diastereómeros individuais e à mistura diastereomérica de derivados do ácido glutâmico da fórmula:

CHc;

•CH₀CH_o-R³cnhchch₂ ch₂ COR²

COOR“

ΙΔ

N

R⁴NH

R^J

cl „ * V

CH₂CH₂-R³-CNHCHCH₂CH₂COR^{2 2} 1 ·>

COOR² em que:

R1 é -OH ou -NH₂;

R é hidrogénio ou um grupo de protecção de carboxi;

r3 é uma ligação de carbono-carbono, alquileno de 1 a 4 át£ mos de carbono, ciclo-hexileno ou

R²* é hidrogénio ou um grupo de protecção de amino;

Q é S ou -0-;

R^ é hidrogénio, cloro ou fluor; e a configuração à volta do átomo de carbono designado por*é S

Os compostos de Fórmula IA e IB têm um efeito inibitório sobre uma ou mais enzimas que utilizem o ácido fólico e, em particular, os derivados metabólicos do ácido fólico como um substracto. Os compostos, deste modo, podem ser empregados isoladamente, ou em combinação, para inibir o desenvolvimento daqueles neoplastas que, de outro modo, dependeriam das enzimas assim inibidas.

invento diz também respeito aos sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos das Fórmulas IA e IB, aos processos para a preparação destes compostos e dos seus sais, a um processo para o combate ao desenvolvimen to neoplástico num mamífero, e às composições farmacêuticas contendo estes compostos ou os seus sais.

termo alquileno, tal como o empregado aqui, designa um grupo alifático bivalente, ramificado ou linear de 1 a 4 átomos de carbono, incluindo o meti leno, o etileno, o trimetileno, o tetrametileno , o 1,1-prop_i lideno, o 2,2-propi1ideno , o 1 ,2-propanodi-i1 ο , o 2,3-butanodi-ilo, etc. Analogamente, o ciclohexileno designa um grupo de cicloalcano bivalente de 6 átomos de carbono, incluindo o 1 ,2-cico-hexileno , o 1 , 3-ciclo-hexileno e o 1 , 4-ciclo-hexileno .

Os grupos de protecção, designados por R e R^ e empregados aqui, designam grupos que, de um modo geral, não se encontram nos compostos terapêuticos finais, mas que são introduzidos , intencionalmente, durante a fase da síntese, para proteger um grupo que, de outro modo, poderia reagir, no decurso das manipulações químicas, sendo subsequentemente removido, numa fase posterior da síntese. Visto que os compostos que transportam tais grupos de protec ção, são de importância essencialmente como intermediários químicos (conquanto alguns derivados exibam, também, activi dade biológica), a sua precisa estrutura não constituí pormenor para criar problemas. Numerosas reacções, para a forma

ção e remoção de tais grupos de protecção, encontram-se de£ critos , numa diversidade de obras normalizadas, incluindo por exemplo, Grupos de Protecção em Química Orgânica, Revista Plenum, Londres e Nova Iorque, 1973; Greene, Th.W.Gru pos de Protecção, em Síntese Orgânica, Wiley, Nova Iorque, 1981; Os Péptidos, Volume I, Schroder e Lubke, Revista Aca démica, Londres e Nova Iorque, 1965; Methoden der organischen Chemie, Houben-Weyl, 43. Edição, Vol.15/1, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974.

Um grupo de carboxi pode ser protegido, como um grupo de éster que seja amovível selectiva mente sob condições bastante moderadas, para não desfazer a estrutura desejada da molécula, especialmente um éster de alquilo inferior, tal como o metilo ou o etilo e, particular mente, um que seja ramificado na posição 1, tal como o t.butilo; e um tal éster de alquilo inferior, substituído na posição 1 ou 2, por (i) alcoxi inferior, tal como, por exem pio, metoximetilo , 1-metoxietilo e etoximetilo, (ii) alquil_ tio inferior, tal como, por exemplo, metiltiometilo e 1-etil^ tioetilo; (iii) halogénio, tal como 2,2,2-tricloroetilo , 2bromoetilo e 2-iodoetoxicarbonilo ; (iv) um ou dois grupos de fenilo, cada um dos quais pode não ser substituído, ou ser mono-substituído, di-substituído ou tri-substituído por exem pio, um alquilo inferior tal como o tert .-butilo , alcoxi iri ferior tal como o metoxi, o hidroxi, o halo tal como o cloro e o nitro, tal como por exemplo o benzilo, o 4-nitrobenzi1 o , o difenilmetilo e o di-(4-metoxifeni1 ) meti1 o ; ou (v) aroílo, tal como o fenacilo. Um grupo de carboxi pode também, ser protegido na forma de um grupo de sililo orgânico, tal como o tri-inferior alquilssililo , como por exemplo, o trimetil£ sililo, como por exemplo, o trimeti1ssi1i1oxicarboni1o .

Grupos de amino podem, de um modo semelhante, ser protegidos, como uma amida, empregando-se um grupo de acilo, que seja selectivamente amovível, sob con dições moderadas, especialmente o formilo, um grupo de alca noílo inferior, que seja ramificado na posição 1, particularg mente o alcanoilo terciário, tal como o pivaloilo, ou um gru po de alcanoilo inferior, que seja substituído na posição 1, como por exemplo o trifluoracetilo.

Um primeiro grupo de compostos pre feridos são aqueles em que R^ é -OH, e cada um de R^ _e r4 q hidrogénio. Um subgrupo preferido em primeiro lugar dentro deste grupo, ê constituído por aqueles compostos em que R^ é uma ligação carbono-carbono, metileno, etileno, trimetileno ou 1,4-ciclohexileno. As espécies preferidas, no âmbito deste subgrupo, incluem os diastereómeros (R,S) e (S,S) do ácido N-í3-(2-amino-4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropiridoí2,3 — d_7piri_ midin-6-i1)proprioi17-L-glutâmico ; do ácido N-- (2-amino-4 hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropiridoZ*2,3-d7pirimidin-6-il )butiril7-L-glutâmico; do ácido N--(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8tetra-hidropiridoZ2,3-d7pirimidirr-6-il )pentanoíl7-L-glutâmico do ácido N-f6-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido [2,3-d pirimidin-6-il )hexanoíl7-b-glutâmico ; do ácido N-Í7 - ( 2-amino -4-hidroxi-5,6 ,7 ,8-tetrahidropiridoÍ2 ,3-d7pirimidin-6-il )he£ tanoíl7-L-glutâmico; e do ácido N-£4-(2-(2-amino-4-hidroxi5,6,7 ,8-tetra-hidropiridoZ2 , 3-d7pirimidin-6-il )etil ) ciclohex-l-ilcarbonil7-L-glutâmico.

Uma segunda subclasse preferida, é constituída por aqueles compostos em que R^ é

R⁵

Q em que R^ é hidrogénio e Q é -S-. As espécies preferidas, no âmbito deste subgrupo, incluem os diastereómeros (R,S) e (S,S) do ácido N - Í5-( 2-(2-amino-4-hidr oxi-5,6 , 7 , 8-t et r a-hi_ dropirido [2,3-d7pirimidin-6-il )etil )tien-2-ilcarbonil_7-L-glu tâmico; do ácido N-75-(4-(2-a-mino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetrahidropirido72,3-d7pirimidin-6-il)etil)tien-2-ilcarbonil7-Lglutâmico; do ácido N-75-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropiridozT2,3-d7pirimidin-6-il)etil)tien-3-ilcarbonil7 L-glutâmico; do ácido N - 74 - (2- (2-amino-4-hidr oxi-5 , 6 , 7 , 8tetra-hidropirido72,3-d7pirimidin-6-il )etil )tien-3-ilcarbonil7 L-glutâmico; do ácido N-73-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8tetra-hidropirido72,3-d7pirimidin-6-il)eti1)tien-2-ilcarbonil7 L-glutâmico; do ácido N-[2-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8tetra-hidropirido72,3-d7pirimidin-6-il )etil )tien-3~ilcarbonil7 L-glutâmico; do ácido N-75-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8tetra-hidropirido72,3-d7pirimidin-6-il )etil )fur-2-ilcarbonil7 L-glutâmico .

Os compostos do invento em conside ração podem ser empregados, muitas vezes, com vantagem, na forma de um sal farmaceuticamente·aceitável. Tais formas, in eluindo os seus hidratos, são muitas vezes, cristalinas e pro veitosas para formarem soluções, ou para formularem composições farmacêuticas. Os sais farmacêuticamente aceitáveis, com bases, incluem os formados com os metais alcalinos, com os metais alcalino terrosos, com os metais não tóxicos, com o amónio, e com as aminas mono-, di- e tri- substituídas, tais como, por exemplo, com os sais de sódio, de potássio, de lítio, de cálcio, de magnésio, de alumínio, de zinco, de amónio, de trimeti1amónio , de trietanolamónio , de piridínio e de piridínio substituído. Os sais de mono e de dissódio, pa£ ticularmente o sal de dissódio, são proveitosos.

Os compostos deste invento, em que r3 é alquileno ou

podem ser preparados por meio de hidrogenação catalítica de um composto da fórmula

C=C-R

2¼² ⁰ O il * II cnhçhch₂ch₂cor²'

COOR²'

II e m q u e :

Z¹ e Z² , considerados individualmente são cada um hidrogénio, ou considerados em conjunto são Uma ligação carbono-carbono; g1 é o que foi já estabelecido no precedente;

R² ' é um grupo de protecção de carboxi;

r3' é um alquileno de ligação de carbono-carbono, de 1 a 4 átomos de carbono, ou

Os catalisadores de hidrogenação adequados incluem os metais nobres, tais como o paládio ou o óxido de platina, o óxido de ródio, e os precedentes num apoio tal como o carbono ou o óxido de cálcio.

Conseguiu-se uma mistura de diast£ reomeros de Fórmulas IA e IB, em que R e um grupo de prote£ ção de amino. Estes grupos de protecção podem ser removidos por meio da hidrólise acídica ou básica, como por exemplo, com o hidróxido de sódio, dando origem aos compostos da Fórp h mula I, em que cada um de R e R é hidrogénio.

Os compostos de Fórmula II podem ser preparados utilizando-se processos análogos aos descritos no Pedido da Patente Europeia NS.8730892 1 . 3 - Deste modo, num primeiro processo de realização, um composto da fórmula:

OH

III „ 4 ' em que X e bromo ou iodo e R e o que foi estabelecido nesta Memória Descritiva, foi deixado a reagir-se com um composto não saturado da fórmula:

ζ-'-ζ²

H-OC-R³

O O

II II ₂ cnhchch₂ch₂cor^z iy

2 2 2 τ o i em que Z Z , R , R e são o que foi estabelecido nesta

Memória Descritiva na presença de um catalisador de paládio/ fosfina trisubstituida do tipo descrito por Sakamoto, Síntese

1983, 312 e seguintes.

Os compostos deste invento, em que

O

R^J é ciclohexileno, podem ser preparados por meio de uma hidrogenação catalítica in-i-G-ial de um composto de fórmula:

— 4 ·

R NH

COOH

-em que ' é um grupo de protecção de amino, e R³ é o que fi. cou estabelecido nesta Memória Descritiva. Os compostos da fórmula V, em que R³ e -OH, são preparados analogamente aos processos descritos no Pedido de Patente Europeia N2. 87308921.3, e os compostos correspondentes em que R¹ é -NHp, são produzidos a partir deles, pela maneira descrita no pr£ cedente .

Os catalisadores adequados, para a hidrogenação dos compostos de fórmula V, incluem os metais nobres e os óxidos de metais nobres, tais como o paládio ou o óxido de platina. E, deste modo, se produz um composto da f órmula:

r⁴'nh

H

CH-CH₂CH₂-C₆H₁₀-COOH ch₂

VI

Os compostos de fórmula VI são, em seguida, associados a um derivado do ácido glutâmico protegi_ do, da fórmula:

h₂nchch₂ch₂cor²

COOR²

YII em que R²' é um grupo de protecçzo de carboxi, pela maneira descrita, de um modo geral, no Pedido de PCT WO 86/05181, empregando-se as técnicas de condensação convencionais, para a formação de ligações de péptidos, tais como a activação do grupo de carboxi, por meio da formação de um anidrido misto, do tratamento com DCC, ou do emprego de difeni1 clorofosfonato. Os grupos de protecção, designados por R² ’ e R²⁴ ' , são então, removidos pela màneira descrita no precedente.

Num terceiro processo de realização, os compostos de fórmula II podem, ser preparados empregando-se os processos análogos aos descritos no Pedido de Patente Europeia N2.8730892 1 . 3 - Deste modo, um composto não saturado da fórmula:

em que Z¹, Z² _e R²* são o que ficou estabelecido nesta Memória Descritiva, é deixado a reagir-se com um composto da fórmula:

em que X é bromo ou iodo, e , R^J e Q são o que ficou estabelecido nesta Memória Descritiva, na presença de um cata lisador de paládio/fosfina trisubstituída, do tipo descrito por Sakamoto, S íntese, 1983, 312 e seguintes.

Conseguiu-se obter de acordo com os processos precedentes, um composto de fórmula II, em que é -OH. Quando se deseja um composto, em que R^ é -NH^ , e£ te produto pode ser tratado com 1 , 2 , 4-triazol e(4-clorofenil) diclorofosfato, e o produto desta, reacção e, em seguida, tra tado com amónia concentrada.

Os compostos de fórmula IX são pre parados associando-se um composto da fórmula:

COOH em que X, R e Q são o que ficou estabelecido nesta Memória Descritiva, com um derivado do ácido glutâmico protegido de fórmula VII, pela maneira descrita no precedente, empregando -se as técnicas convencionais da condensação, para a formação de ligações de peptidos.

A mistura de diastereómeros indivi_ duais, representados pelas fórmulas IA e IB, pode ser empre-13-

gada terapeuticamente como tal, ou pode ser separada mec ani. camente, como pela cromatográfia. Alternativamente, os dia£ tereómeros individuais podem ser separados formando-se sais diastereoméricos, com um ácido quiral, tais como os enantió meros individuais do ácido 10 - canforssulfónico, do ácido canfórico, do ácido alfa-bromocanfórico, do ácido metoxiacé tico do ácido tartárico, do ácido diacetiltartár ico, do áci^ do málico, do ácido pirrolidona-5-carboxί1ico e de outros idênticos e, em seguida, libertando uma ou ambas as bases diastereoméricas individuais, repetindo facultativamente o processo, de modo a obterem-se uma ou ambas, substancialmen te libertas da outra; isto é, numa forma que tenha uma pure za óptica superior a 95%. Esta separação pode ser efectuada antes ou depois da remoção de quaisquer grupos de protecção.

Como foi observado, os compostos deste invento produzem um efeito em uma ou mais enzimas, que utili^ zam o ácido fólico e, em particular, os derivados metabólicos do ácido fólico, como um substracto. Os compostos podem ser utilizados, sob a supervisão de profissionais qualificados, para inibir o desenvolvimento de neoplasmas, incluindo o cor iocarcinoma, a leucemia, o adenocarcinoma do seio femini^ no, os cancros epidérmicos da cabeça e do pescoço, o cancro do pulmão de células pequenas ou escamoso, e diversos linfosarcomas. Os compostos podem também ser empregados para o tratamento dos fungóides da micose e da psoríase.

Os compostos podem ser administrados pela via oral, mas de preferência são administrados pela via parenteral, isoladamente ou em combinação com outros agentes terapêuticos, incluindo outros agentes anti-neo piásticos, esteróis, etc., a um mamífero padecendo de neoplasmo, e em necessidade de tratamento. Vias parenterais de administração incluem a intramuscular, a intratecal , a intravenosa e a intra arterial. Os regimes de dosagem devem ser titulados em relação ao neoplasmo específico, ao estado de saúde do paciente e à sua reacção, mas de um modo geral, as doses s£ rão de cerca de 10 a cerca de 100mg/dia, durante 5 a 10 dias, ou uma única administração diária de 250 a 500mg, repetida periodicamente, por exemplo de 14 em 14 dias. Embora a toxi_ cidade seja reduzida, quando comparada com outras anti-meta. bolites actualmente em uso, uma reacção tóxica pode, muitas vezes ser eliminada, quer reduzindo a dose diária, quer adm£ nistrando o composto era dias alternativos, ou em intervalos maiores, tais como de três em três dias. As formas de dosagem oral incluem os comprimidos e as cápsulas, contendo de 1 a 10 mg do medicamento por dose unitária. As soluções salinas isotónicas, contendo de 20 a 100mg/ml, podem ser empregadas para a administração parenteral.

Os exemplos que se seguem, servirão para esclarecer mais ainda, o invento. Nos dados da ressonân cia magnética nuclear, s designa singleto d designa dobleto, t designa tripleto, q designa quarteto, m designa multipleto, e br designa um pico amplo.

EXEMPLO 1

N-Y'6-(2-Pivaloílamino-4-hidroxipiridoZ~2,3-d7pirimidin-6-il ) hex-5-inoíl7-L-glutamato de dimetilo.

Uma mistura de 1,94 gramas (6 mmo les ) de 2-pi vai ο ί 1 amino-4-h i d r ox i - 6-br omopi r ido [2. , 3-d7 pi r i_ midina de 1,6 gramas (6 mmoles) de N-(hex-5-inoíl)-L-glutamato de dimetilo, de 0,11 gramas de cloreto de paládio, de 0,32 gramas de trifeni1fosfina , de 0,05 grama de iodeto cuproso e de 2,6 ml de trietilamina em 150ml de acetonitrilo, foi aquecida, ao refluxo, durante 3 horas e, em seguida, foi arrefecida até à temperatura ambiente. 0 solvente foi removido, sob uma pressão reduzida, e o resíduo foi cromatografado sobre o gel de sílica com metanol: cloreto de metileno,

na proporção de 1:9, dando origem a N-76-(2-pivaloílamino-4hidroxipirido 72,3-d7pirimidin-6-il)hex-5-inoí17-L-glutamato de dimetilo, com o ponto de fusão de 159 a 160^qc. Análise de ^c25^h31^N5°7^: Calculada: C, 58,47; H, 6,08; N, 13,64; Verifica da: 58,23; H, 5,97; N, 13,43.

De uma maneira semelhante, substituindo o N-(hex-5-inoíl)-L-glutamato de dimetilo por uma quantidade equivalente de N-(pent-4-inoíl)-L-glutamato de dimetilo, no processo precedente, pode obter-se o N-75-(2-pivaloílamino-4-hidroxipirido<f2,3-d_7pirimidin-6-il)pent-4-inoíl7-L-gluta mato de dimetilo. Numa experiência representativa, obtiveram -se as constantes físicas seguintes, para este composto: pon to de fusão 162 a 1ó3°C. Análise de C2qH2gN^0y: Calculada;

C, 57,71; H, 5,84; N,14,O2. Verificada: c, 57,94; H, 5,72;

N, 13,99.

De um modo semelhante, a partir de N-acriloil-L-glutamato de dimetilo e de N-(but-3-inoí1 )-Lglutamato de dimetilo, obtiveram-se respectivamente, N-73( (2-pivaloílamino-4-hidroxipirido/‘2 ,3-d_7pirimidin-6-il )acri1 o í 17-L-g 1 ut ama t o de dimetilo e N - 74 - ( 2-pi vai ο ί 1 amin o-4-h i d r o_ xipirido/~2 ,3-d7pirimidin-6-il )but-3-inoí17-L-glutamato de dimetilo.

Substituindo o N-(hex-5-inoί1)-Lglutamato de dimetilo, por uma quantidade equivalente de N(hept-6-enoíl)-L-glutamato de dimetilo, no processo preceden te, pode obter-se o N-Π-(2-pivai οί1amino-4-hidroxipirido 72 , 3-d7 pir imid in-6-i 1 ) he pt - 6-enoí l7-L-glut amat o de dimetilo. Numa experiência representativa, obtiveram-se as constantes físicas seguintes, para este composto: ponto de fusão 79 a 81°C. Análise de C„_cH__N_cO„: Calculada: C, 58,01; H, 6,82;

N, 13,53. Verificada: C, 58,47; H, 6,48; N,12,80

Ν-(hex-5-inoíl)-L-glutamato de dimetilo pode ser obtido deixando-se o cloreto do ácido hex-5inóico (obtido tratando-se o ácido hex-5-inoico com o cloreto de tionilo) reagir com o L-glutamato de dimetilo, na presença de um receptor de ácidos, tal como a trietilamina. 0 ácido hex-5-inóico, por sua vez, pode ser preparado, por exemplo, pela hidrólise alcalina de 5-cianopent- 1-ina.

N-acri1ói1-L-g1utamato de dimeti^ lo, o N-(pent-4-inóil)-L-glutamato de dimetilo, o N-(but-3inóil)-L-glutamato de dimetilo, e o N-(hept-6-inói1)-L-glutamato de dimetilo, são obtidos de um modo semelhante, a par tir dos cloretos de ácidos do ácido acrílico, do ácido pent4-inóico, do ácido but-3-inóico e do ácido hept-6-inóico res pectivamente, e de L-glutamato de dimetilo.

EXEMPLO 2

N-Z'6-(2-Pivaloílamino-4-hidroxi-5,6 ,7 ,8-tetra-hidropiridoZ'

2,3-d_Z pi r im id in - 6-i 1 ) hexanó i 17-L-gl ut amat o de dimetilo .

A uma solução de 1,0 grama de NZ‘6-(2-pivalóilamino-4-hidroxipiridoZ”2,3-d7pirimidin-6-il )hex -5-inóilJ7-L-glutamato de dimetilo, em 20 ml de ácido acético cristalizado, adicionaram-se 300 mg de óxido de platina. A mistura foi hidrogenada, sob uma pressão de uma atmosfera, com agitação durante 4 horas, o catalisador foi removido por filtração, e o filtrado foi concentrado, sob uma pressão reduzida. A cromatografia sobre o gel de sílica, eluindo-se com metanol: clorofórmio na proporção de 1:19, deu origem a 0,84 grama (82,7%) de N-[6-(2-pivaiοί1amino-4-hidroxi-5,6,7,8-1etra-hidropiridoíí? , 3-d7pirimidin-6-il )hexanoílj- L- glutamato de dimetilo, com o ponto de fusão de 162 a 166°C. Análise de Ο₂₅Η₃₉Ν₅Ο_γ: Calculada: C, 57,57; H, 7,54; N, 13,43; Verifi cada: C , 57 , 3 1 ; H , 7,25 ; N , 14 , 1 5 .

De um modo semelhante foi preparado, a partir de N-Z’5-(2-pivalóilamino-4-hidroxipirido,/2,3-d7 pirimidin-6-i1)pent-4-inoiI/-L-glutamato de dimetilo, o N-f5 (2-pivaloílamino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropiridof2,3-d7 pirimidin-6-i1 ) pentanoíl7-L-glutamato de dimetilo. Numa expe riência representativa, obtiveram-se as constantes físicas seguintes para este composto: ponto de fusão 151 a 159°C. Análise de ^^Η^γΝ^Ογ : Calculada: C, 56,79; H, 7,35; N, 13,80. Verificada: C, 57,06; H, 7,22; N, 13,86.

De um modo semelhante preparam-se o N-f3-(2-pivalóilamino-4-hidroxi-5,6,7 ,8-tetra-hidropirido [2,3-d_7 p ir imid in - 6 - i 1 ) pr opi on i 17-L-gl ut amat o de dimetilo e N-f4-(2-pivalóilamino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido Z2,3-d7 pir imid in-6-il ) but ir il7-L-glut amato de dimetilo, a partir de N -/3-(2 - pi valói 1 amino-4-h i d r oxi pi r i do f2,3-d7 pir imi^ din-6-il ) acrilóil7-L-glutamato de dimetilo e de N-£4-(2-pivalóilamino-4-hidroxipiridoZ‘2,3-d7pirimidin-6-il)but-3-inóil.7 -L-glutamato de dimetilo, respectivamente.

Empregando-se uma quantidade equi^ valente de N - Cl - (2-p i vai ο ί 1 amino-4-h i d r ox i p ir i d o [2,3-d 7 p i r i_ midin-6-il)hept-6-inoíl7-L-glutamato de dimetilo, obteve-se N-^~7-(2pivaloílamino-4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido [2,3-d7 pir im i d in-6-i 1 ) he pt ano í lj/-L-gl ut amat o de dimetilo.

Numa experiência representativa, obtiveram-se as constantes físicas seguintes, para este composto; ponto de fusão 152 a 16O°^C- Análise de ^c ₂ θ H .4 η N 0 y : Calculada: c, 58,30 H,7,72;

N, 13,08. Verificada: C,58,51; H, 7,61; N, 12,87

EXEMPLO 3

N- /4 - (2 - (2-Pivaloílamino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido Z~2,3-d_7pirimidin-6-il )eti 1 )ciclo-hex-l-il7-L-glutamato de dietilo.

A. Cinco gramas de 2-pivalοί1amino-4-hidroxi-6-(4-car boxifeniletinil ) pirido/2,3-d7pirimidina (descrita no Pedido de Patente Europeia N2.87308921 . 3 ) e 1,60 gramas de óxido de platina em 200ml de ácido trifluoracetico, fóram hidrogenados, num aparelho de Parr , à temperatura ambiente e a 60 psi, duran te 24 horas. A remoção do catalisador, por filtração e por concentração do filtrado, deu origem à 2 - pivaloί1amino-4 hidroxi-6-£2-(carboxiciclohex-1-il ) e t i 17 5,6,7 ,8-tetra-hidropiridor2,3-djpirimidina, como um sólido branco, que foi, mais tarde purificado pela cromatografia de coluna (Waters 200), eluindo-se com metanol: diclorometano na proporção de 1:9, com o ponto de fusão de 218 a 234 C. Analise de Cj H ^pNq 0 q : Calculada: C, 63,35; H, 7,97; N, 13,85. Verificada: C, 63,30; H, 7,48; N, 13,57B. A uma solução de 2,40 gramas de 2-pivaloílamino-4hidroxi-6-<f2-(4-carboxiciclo-hex-1-il )e t i17-5 ,6 ,7 ,8-tetrahidropirido f2,3-d7pirimidina, em 50 ml de N-metilpirrolidona seca e 2,25 ml de N-metilmorfolina adicionaram-se 2,75 gramas de N-fenilfosfoaminocloridrato de fenilo. Esta mistura foi agitada a 0°C, sob nitrogénio durante 45 minutos, adicionaram-se-lhe então 2,45 gramas de L-glutamato de dietilo e, em seguida continuou-se a agitação à temperatura ambiente, durante 72 horas. 0 solvente foi removido por destilação a 0,2mir /60°C, e o resíduo foi cromatografado sobre gel de sílica, eluindo-se com metanol: clorofórmio, na proporção de 1:19, dando origem a 1,67 gramas (48%) de N-Í4-(2-(2-pivalοί1amino4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido [2. ,3-d7pirimidin-6-il ) e t i 1 ) ciclo-hex-1-i17-L-glutamato de dietilo com o ponto de fusão de 160 a 170°C. Análise de Ε^θΗ^γΝ^Ο^: Calculada: C, 61,10;

Η, 8,03; Ν, 11,87. Verificada: C, 61,38; Η, 7,90; Ν, 11,84.

EXEMPLO 4

N-/~6-(2-Amino-4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido/2 , 3- d7pirimidin-6-il)hexanoíL7-L-Àcido glutâmico.

Uma solução de 0,5 grama de Ν-Γ6(2-pivaloílamino-4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido/~2, 3 - d_? pirimidin-6-il7-L-glutamato de dimetilo, em 75 ml de hidróxido de sódio aquoso a 1,0N, foi agitada à temperatura amb_i ente durante 120 horas, e o ph foi, em seguida, ajustado a 7,0 por meio de uma adição cuidadosa de ácido clorídrico a 5,0N. A água foi retirada sob pressão reduzida, e a solução concentrada foi em seguida arrefecida num banho de gelo.

sólido, que se formou, foi reunido por filtração e foi seco a 80°C , dando origem ao ácido N-76(2-amino-4-hidroxi5,6,7,8-tetra-hidropiridoZ2,3-d7pirimidin-6-il)hexanoílJL-glutâmico, espumando a 135°C e fundido a 180 a 195°C.

NMR	(dmso-d₆	300 MHz)	delta	: 9,80	( s , br, 1H )	, 7,90	( s , J - 8
Hz ,	1H), 6,20	(s ,	1H ) ,	5,95	(s ,	2H )	, 4,08 (m ,	1H) , 3,	10 (m ,
1H ) ,	6,20 (s ,	1H )	, 5,95 (s,	2H )	, 4,	08 (m,1H ) ,	3,10 (m	, 1H),
2,63	(t , J= 10	Hz ,	1H ) ,	2 ,40	(m ,	1H )	, 2,20 (t ,	J=8 Hz , 2H ) ,
2,05	(t, J=8H	z , 2H ) , 1	,84 (m	, 1H) ,	1,70 (m , 2H ) , 1,55	(m, 3H)

1,20 (m, 6H ) .

De um modo semelhante, foi preparado o ácido N-C5-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidro-p£ r id o Z2,3-dj pi r imid in-6-i 1 ) pen t ano í lJ-L-gl ut âmi co a partir do N-7’5-(2-pivaloílamino-4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido 72,3-dj pi r imi d i n-6 - i 1 ) pen t ano í 1(7-Irg lu t amat o de dimetilo.

Numa experiência representativa, obtiveram-se as constantes físicas seguintes, para este composto: ponto de fusão 144°C (amolecimento e espuma);

NMR(DMSO-d₆ 300 MHz) delta: 9,70 (s,br, 1H), 8,01 (d, J=6 Hz,

1H), 6,17 (s, 1H), 5,88 (s,2H) 4,13 (m,1H), 3,17 (m, 1H),

2,68	(t ,	J = 6	Hz ,	1H ) ,	2,42 (m,	1H ) ,	2,22	(t ,	J = 5 Hz , 2H) ,
2,07	(t ,	J = 5	Η z ,	2H ) ,	1,88 (m ,	1H ) ,	1 ,70	(m ,	2H), 1,44 (m, 3H)
1 ,24	(m ,	4H ) ;

Analogamente se preparam o ácido N-f3-(2-amino-4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropiridof2, 3-dJpir_i midin-6-il ) propionilJ-L-glutâmico e o ácido N-A-(2-amino-4hidroxi-5,6,7 ,8-tetra-hidropirido Z”2 , 3-d_7pirimidin-6-il ) but iril_7-L-glutâmico , a partir do N - [3-( 2-pi vai ο 11 amino-¹)-hidr oxi5,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido£2 ,3-d7pirimidin-6-ilpropionil_7Lglutamato de dimetilo e do N-/4-(2-pivaloílamino-4-hidroxi5,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido72,3-d7pirimidin-6-il )butiril.7-Lglutamato de dimetilo, respectivamente.

De uma maneira semelhante, se pr£ para o ácido N-ΖΎ-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-1etra-hidropirido[2 ,3-d7pirimidin-6-il)heptanoílJ-L-glutâmico a partir de N-Z7-(2-pivaloílamino-4-hidroxi-5,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido /2,3-d pirimidin-6-il )heptanoíl_7-L-glutamato de dimetilo.

Numa experiência representativa, obtiveram-se as constantes físicas seguintes para este composto: ponto de fusão 185 a 195°C (espuma): NMR (DMS0-d₆ 300 MHz) delta: 9,68 (s, br,1H) 8,01 (d, J=10 Hz, 1H), 6,20 (s, 1H), 5,88 (s, 2H), 4,14 (m, 1H), 2,20 (t, J=( Hz, 2H), 2,05 (t, J=5 Hz, 2H), 1,89 (m, 1H), 1,67 (m, 2H), 1,45 (m, 3H ) , 1,20 (m, 8H ) .

De uma maneira análoga, empregando -se o N-/4 - ( 2 - ( 2-pi vai oí 1 amin o-4-h id r ox i - 5,6 , 7 , 8-t e t r a-h id r£ pi r i d o[2,3-d7pirimidin-6-il)etil)ciclo-hex-1-il7-L-glutamato de dimetilo, obteve-se o ácido N-/4 - (2 - ( 2-amino-4-hidr ox i5,6,7,8-tetra-hidropirido/’2,3-d7pirimidin-6-il)etil)ciclohex- 1 -i 1/7-L-glutâmico . Numa experiência representativa, obti_ veram-se as constantes físicas seguintes para este composto: ponto de fusão 210-225°C. NMR (DMSO-dg 300 MHz) delta:

9,70 (s, br, 1H), 7,90 (m, 1H), 6,23 (s, 1H), 5,92 (s, 2H ) ,

4,17 (m, 1H), 3,18 (m, 1H), 2,72 (t, J=9 Hz, 1H), 2,45 (m,

1H ) , 1,74 (m, 3H), 1,45 (m, 5H), 1,27 (m, 8H).

-2 1 EXEMPLO 5

N-fô-^-Pivaloílamino^-hidroxipirido/Y;,3-d7pirimidin-6-il) etinil )tien-2-ilcarbonil_7-L-glutamato de dimetilo.

A. Uma solução de 1,5 gramas (7,25 mmoles) de ácido 5bromo-2-tiofenocarboxílico, várias gotas de dimeti1formamida e 2,21 ml de cloreto de tionilo, foi aquecida, ao refluxo, durante 2,5 horas. 0 solvente foi retirado sob uma pressão reduzida, e o resíduo foi novamente dissolvido em 10 ml de cloreto de metileno seco. Esta solução foi adicionada gota a gota e lentamente, a uma solução arrefecida no gelo de 1,62 gramas de cloridrato de L-glutamato de dimetilo, de 10 mg de dimetilaminopiridina e de 2,11 ml de trietilamina em 25 ml de cloreto de metileno seco. Quando a adição se completou, a mistura foi agitada, à temperatura ambiente durante 12 horas e, em seguida, foi diluída com água e extraída com o cloreto de metileno. Os extractos orgânicos foram lavados com o ácido clorídrico a 1,0 N e com uma solução de bicarbonato de só dio saturada, e, em seguida foram evaporados dando origem a 2,71 gramas (100%) de N-í5-bromotien-2-i1-carboni17-L-gluta mato de dimetilo, como um óleo viscoso, que pôde ser empregado no processo a seguir, sem qualquer outra purificação.

N-Z5-bromofur-2-ilcarbonilJ-Lglutamato de dimetilo, também um óleo viscoso, é preparado de um modo análogo a partir do ácido 5 - br orno-2-f ur an c ar box ílico .

N-(5-bromotien-3-ilcarbonil)-L-glu tamato de dimetilo pode ser preparado de um modo análogo, a partir do ácido 5-brorno-3-tieni1carboxί1ico.

B. Uma mistura de 1,70 gramas (6,32 mmoles) de 2-pivaloí. 1amino-4-hidroxi-6-etini1 pirido [2 ,3-àjpirimidina, 2,30 gramas (6,32 mmoles) de N-(5-bromotien-2-il-carbonil)-L-glutamato de dimetilo, 44 mg de cloreto de paládio, 130 mg de trifenil

fosfina, 25mg de iodeto cuproso, e 1,13 ml de trietilamina em 30 ml de acetonitrilo, foi aquecida ao refluxo durante 3 horas e, em seguida, foi arrefecida até à temperatura ambi^ ente. 0 solvente foi retirado, sob pressão reduzida, e a coluna do resíduo foi cromatografada (Waters 500), eluindo-se com metanol: cloreto de metileno, na proporção de 1:19, dan. do origem a N -/5-( 2-p i val oí 1 amino-4-hi d r ox i pi r id o/2 , 3-dJ p i r i_ mi din-6-i1 ) etini1 ) tien-2-i1-carbonilj-L-glutamato de dimetilo com o ponto de fusão de 228 a 230°C. Análise de C₂ g^^çN^-O^S : Calculada: C, 56,41; H, 4,92; N, 12,65; S, 5,79;

Verificada: C, 56,64; H, 4,77; N, 12,88; S, 5,58.

De um modo análogo, substituindo-se N-(5-brornotien-2-i1-carboni1)-L-glutamato de dimetilo por uma quantidade equivalente de N-(5-bromofur-2-il-carbonil) -L-glutamato de dimetilo, no processo precedente, pode obte£ -se o N-/‘5-(2-pivaloílamino-4-hidroxipirido/'2,3-d7pirimidin6-i1 ) etini1 ) fur-2-il-carbonilJ-L-glutamato de dimetilo.

Numa experiência representativa, obtiveram-se as constantes físicas seguintes, para este composto: ponto de fusão 135°C (escurece), 181°C (com decomposição). Análise de ^gH^N^Og: Calculada: C, 58,32; H, 4,71; N, 13,08.

Verificada: C, 58,58; H, 4,92; N, 13,11De um modo idêntico, substituindo-se N-( 5-bromot.ien-2-ilcarbonil )-L-glutaraato de dimetilo por uma quantidade aquivalente de N-(5-brorno-tien-3-i1-carboni1)L-glutamato de dimetilo, no processo precedente, pode obter-se N-/’5-(2-pivaloílamino-4-hidroxipiridoZ’2,3-d/pirimidin-6il )etini1 )tien-3-i1-carboni17-L-glutamato de dimetilo.

EXEMPLO 6

N-75-(2-(2-Pivaloílamino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido Z2,3-d_7pirimidin-6-il )etil )tien-2-ilcarbonil7-L-glutamato de dimetilo.

A uma solução de 0,5 grama de N-75(2-pivaloílamino-4-hidroxipirido72,3-d7pirimidin-6-il )etinil ) tien-2-il-carbonil7-L-glutamato de dimetilo, em 30 ml de ácido acético cristalizado, adicionaram-se 1,5 gramas de paládio a 5% sobre o carbono. A mistura foi hidrogenada, sob uma pres são de uma atmosfera, com agitação durante 18 horas, o cata lisador foi retirado por filtração, e o filtrado foi concentrado sob uma pressão reduzida. A cromatografia sobre o gel de sílica, eluindo-se com metano1:cloroformio, na proporção de 1:19, deu origem a 100 mg (19,7%) de N-/5-(2-(2-pi valoί1 a mino-4-hidroxipirido72 ,3-d7pirimidin-6-il ) et il )tien-2-ilcarbonil7-L-glutamato de dimetilo, e 204 mg (40,2%) do desejado N-/'5-(2-(2-pivaloílamino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidr£ pir ido 72,3-d7pirimidin-6-il )etil )tien-2-il-carbonil7-L-glu_ tamato de dimetilo, com o ponto de fusão de 152 a 1óO°c. Análise de Cp ç-N0?S : Calculada; c, 55,60; H, 6,28; N,

12,47.

Verificada: C, 55,76; H, 6,23; N, 12,26.

sub-produto hidrogenado parcialmente, pode ser hidrogenado novamente, para se obter o produto final suplementar.

Preparado de um modo semelhante , a partir de N-75-(2-pivaloílamino-4-hidroxipirido 72,3-d7pir_;L midin-6-i1 )etini1)fur-2-ilcarboni17-L-glutamato de dimetilo é o N-75-(2-(2-pivai οί1amino-4-hidroxi-5,6,7,8-1etra-hidropir id o 72 , 3-d7pirimidin-6-il)etil )fur-2-il-carbonil7-L-gluta mato de dimetilo. Numa experiência representativa, obtiveram -se as constantes físicas seguintes, para este composto: ponto de fusão 155 a 162°C. Análise de ^ρ^Η^Ν^Οθ:

Calculada: C, 57,45; H, 6,12; N, 12,88;

Verificada: C, 57,22; H, 6,08; N, 12,66.

De um modo idêntico, N-Z”5 - (2 - (2-p i vai ο ί 1 am ino-4-h i d r ox i-5,6 ,

7,8-tetra-hidropirido/’2,3-d7pirimidin-6-il)etil)tien-3-ilcarboni17-L-glutamato de dimetilo pode ser preparado a partir de N-75-(2-pivaloílamino-4-hidroxipirido72,3-d7pir’imidin-6-il) etini1 ) tien-3-i1-carboni17-L-glutamato de dimetilo.

EXEMPLO 7

Acido N-/~5-(2-(2-amino-4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido Z~2,3-d7pirimidin-6-il )etil )tien-2-il-carbonil7-L-glutâmico.

Uma solução de 100 mg de N-75-(2(2-pivaloílamino-4-hidroxi-5,6,7 ,8-tetrahidropirido72,3-d7 pir im id in - 6-i 1 ) e t i 1 ) t ien-2 - i 1-car bon i l7-L-g lu t amat o de dime. tilo, em 15 ml de hidróxido de sódio aquoso a 1,0 N, foi agitada à temperatura ambiente, durante 120 horas, e o pH foi, em seguida, ajustado a 7,0 por meio da adição cuidadosa de ácido clorídrico a 5,0 N. 0 sólido, que se formou, foi reuni do por filtração e foi seco, a 80°C, para dar origem a 61,5 mg (76,8%) de ácido N-75-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-1etra -hidropirido72,3-d7pirimidin-6-il)etil )tien-2-il-carbonil7Lglutâmico, com o ponto de fusão de 226 a 240°C (com espuma e decomposição). NMR (DMSO-dg 300 MHz) delta: 9,80 (s, br, 1H),

8,45 (d, J=9 Hz, 1H), 7,62 (d, J=3 Hz, 1H), 6,87 (d, J=3 Hz, 1H), 6,30 (s, 1H), 6,04 (s, 2H), 4,28 (m, 1H), 3,12 (m, 1H), 2,84 (m, 3H), 2,36 (m, 1H), 2,02 (m, 1H), 1,83 (m, 2H), 1,57 (m, 3H).

Preparado a partir do N-75-(2-(2pivaloílamino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido72,3-d7pir£ midin-6-i1 ) etul ) fur-2-i1-carboni17-L-glutamato de dimetilo, é o ácido N-75-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropir_i do [2 , 3-d7 pirimidin-6-il)etil)fur-2-ilcarbonil7-L-glutâmico. Numa experiência representativa, obtiveram-se as constantes físicas seguintes, para este composto: ponto de fusão 204 a 230°C. Espuma. NMR (DMSO-dg 300 MHz) delta: 9,80 (s, br, 1H)

(s , 1Η ) ,

3,16 (m, 1Η )

2,01 (m, 2Η )

8,27	(d,	J=9 Hz, 1H), 7,03	(d,	J=4 Hz, 1H ) ,	6,30
6,25	(d,	J=4 Hz, 1H), 6,04	(s ,	2H ) , 4,30 (m.	, 1H )
2 ,65	(m ,	3H ) , 2,42 (m, 1H),	, 2,	16 (t, J=7Hz,	2H ) ,
1 ,57	(m ,	3H ) .

ácido Ν-C5-(2-(2-amino-4-hidroxi5,6 ,7 ,8-tetra-hidropiridoZ'2,3-d7pirimidin-6-il)etil)tien-3-il carbonil7-L-glutâmico pode ser preparado de um modo semelhan te, a partir do N-/5-(2-(2-pivaloílamino-4-hidroxi-5,5,6,7,8tetrahidropiridoZ2,3-d7pirimidin-6-il )etil )tien-3-il-carboni17-L-glutamato de dimetilo.

EXEMPLO 8 θ Ιθ50’ ^nas linhas de células de leucemia humana de todas as células, CCRF-CEM, do ácido N-£5(2-(2-amino-4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido/2 ,3-d7pirim.i din-6-i1 )eti1)tien-2-i1-carboni17-L-glutâmico é 0,0015 ug/ml.

IC_cn do ácido N- Z5- ( 2- ( 2-amino-4-hid r ox i-5 , 6 , 7 , 8 -1etr a-hi5 u dropiridoZ~2,3-d7pirimidin-6-il )etil )fur-2-ilcarbonil7-L-glu tâmico, é 0,010 ug/ml. 0 IC^g do ácido N-[4-(2-(2-amino-4 hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido C2 ,3-d7pirimidin-6-il )etil ) tien-2-i1-carbonil7-L-glutâmico é 0,0756 ug/ml.

IC5o , nas linhas de células de leucemia humana de todas as células, CCRF-CEM, de outros compostos deste invento, é como se segue:

R¹	R²	R³	R⁴	ug/mL
OH	H	-(ch₂)₂-	Η	0.023
OH	H	-(ch₂)₃-	H	0.0075
OH	H	-<ch₂)₄-	H	0.034
OH	H	ch₂-ch₂ -CH CH-	H	0.007

ch₂-ch₂

A avaliação in vivo em comparação contra os diversos neoplasmas, exibiu os valores que se seguem:

a) Acido N - Z”5-( 2-( 2-amino-4-hid r oxi - 5 , 6 , 7 , 8 -1 e t r a-h i dr op ridof2,3-d7pirimidin-6-il)etil ) t ien-2 - i 1 - car bon i 1_7-L-gl ut âm i_ co .

Tumores de linfo sarcoma 6C3HED, nos ratos :

(intraperitonal , administração diária, um dia).

Dose mg /Kg	% Inibição	Toxicidade
400	100	6/10
200	99	2/10
100	94	1/10
50	88	0/10

b) Acido N-Γ5-(2-( 2-amino-4-hidroxi-5 , 6 , 7 , 8-tetra-hidr op_i rido/2,3-d7pirimidin-6-il)etil)tien-2-ilcarbonil7 -L -glut âmi_ co.

Tumores de 1infossarcoma 6C3HED, nos ratos:

(Intraperitonal, administração diária, 10 dias).

Dose mg /Kg	% Inibição	Toxicidade
6.25	Tóxico	10/10
3-12	100	6/10
1.56	100	0/10
0.78	93	0/10

c) Acido N-£5-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidro p i r i d o 72,3-d7pirimidin-6-il )etil)tien-2-il-carbonil7-L-glu tâmico .

Tumores de melanoma B-16, nos ratos (Intraperitonal, administração diária, dias 1, 7).

Dose mg/kg	% Inibição	Toxicidade
200	93	4/10
100	73	3/10
50	38	0/9

d) Acido N-Z5-(2-( 2-amino-4-hidroxi-5 , 6 , 7 , 8-tetr a-hidr opi_ ridof2,3-d7pirimidin-6-il)etil)tien-2-ilcarbonil7-L-glutâmico

Tumores de adenocarcinoma mamário C3H, nos ratos :

(Intraperitonal , administração diária, dias

1,4,7,10).

Dose mg/kg	% Inibição	Toxicidade
40	100	0/10
20	100	0/10
1 0	94	0/10
5	90	1/10
2.5	71	0/10

e) Acido N-/5-( 2-( 2-amino-4-hidroxi-5,6 , 7 , 8-tetra-hidro pirido [2,3-d7pirirai din-6-i1)eti1)tien-2-ilcarboni17-L-glutâ mico .

Tumores de adenocarcinoma CA-755, nos ratos (Intraperitonal, administração diária, dias

1,4,7,10).

Dose mg /kg	% Inibição	Toxicidade
40	83	0/10
20	78	0/10

f) Acido N - 75 - ( 2 - ( 2 - am i η o - 4-h i d r o x i - 5 , 6,7 , 8 -1 e t r a-h id r o p .i rido 72,3-d7pirimidin-6-il)etil)tien-2-il-carbonil7-L-glutâ mico .

Xenografia do cólon CX-1, nos ratos: (Intraperitonal, administração diária, dias, 1,4,7,10)

Dose mg /kg	% Inibição	Toxicidade
40	tóxico	10/10
20	91	9/10
10	94	6/10
5	90	3/10

g) Ãcido N-75-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropir i d o 72 , 3-d7pirimidin-6-il )etil )tien-2-il-carbonil7-L-glti tâmico

Xenografia do pulmão LX-1, nos ratos: (Intraperitonal, administração diária, dias 1,4,7,10.

Dose mg/kg	% Inibição	Toxicidade
40	tóxico	8/8
20	100	4/8
1 0	98	0/8

h) Acido N-Y5-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidro piridoZ~2,3-d7pirimidin-6-il )etil )tien-2-il-carbonil7-L-glutâ mico .

Xenografia mamária MX-1, nos ratos:

(Intraperitonal , administração diária, dias 1,

4,7,10).

Dose mg/KG	% Inibição	Toxicidade
40	tóxico	10/10
20	tóxico	9/9
10	96	5/10
5	84	3/10

i) Acido N-75-(2-(2-amino-4-hidroxi, 5-6-7-8-tetra-hi dropirido72,3-d7pirimidin-6-il)et il)fur-2-il-carbonil7-L-glu t ami co .

Tumores de linfosarcoraa 6C3HED, nos ratos;

(Intraperitonal , administração diária, oito dias).

Dose mg/kg	% Inibição	Toxicidade
100	89	0/10
50	69	0/10
25	59	0/10

j) Acido Ν-75- (2- (2-amino-4-hidrοχi-5,6,7,8-1etra-hidrο pir ido 72,3-d_7pirimidin-6-il )etil )fur-2-il-carbonil_7-L-glut£ mico.

Tumores de linfossarcoma 6C3HED, nos ratos: (Intraperitonal, administração diária, dias

13,7).

Dose mg/kg	% Inibição	Toxicidade
20	100	0/10
10	100	0/10
5	97	0/10
2.5	98	0/10
1 .25	29	0/10
0,625	1	0/10

k) Acido N-74-(2-amino-4-hidroxi-5 , 6 , 7 , 8-tetra-hidrop_i rido 72,3-d7pirimidin-6-il)butirilJ-L-glutâmico.

Tumores de linfossarcoma 6C3HED, nos ratos: (Intraperitonal, administração diária, oito dias ) .

Dose mg/kg	% Inibição	Toxicidade
50	98	1/10
25	88	0/10
12.5	62	0/10
6.25	1 1	0/10
3.12	0	0/10

1) Acido N-( 4-[2-( 2-amino-4-hidroxi-5 , 6 , 7 , 8-tetra-hidropi^ rido [2,3-dJpirimidin-6-il)etil7ciclohexilcarbonil) - L-glu tâmico.

Tumores de 1infossarcoma 6C3HED, nos ratos: (Intraperitonal, administração diária, oito dias ) .

Dose mg /kg	% Inibição	Toxicidade
1 00	22	0/9
50	5	0/10
25	4	0/10
12.5	18	0/10

Claims

REINVINDICAÇÕES

13. - Processo para a preparação de um composto seleccionado do grupo constituído por um derivado do ácido glutâmico, da fórmula:

R^J

R*NH

N'

C

C\^

I H CH, N^ ²H .ch₂ch₂-r³-cnhçhch₂ch₂cor^:

COOR or

CHR NH

Ν' •H ' ⁰ ° , II * II ₂ *CH₂CH₂-R³-CNHCHCH₂CH₂COR^,á • I o

COOR² em que:

R1 é -OH ou -NH2;

R² é hidrogénio ou um grupo de protecção de carboxi:

R3 é uma ligação carbono-carbono, alquileno de 1 a 4 átomos de carbono, ciclo hexileno ou

R^ é hidrogénio ou um grupo de protecção de amino;

Q é -S- ou -0-;

r5 é hidrogénio, cloro ou fluoro; e a configuração à volta do átomo de carbono designado por x é S; e dos seus sais farmacêuticamente aceitáveis, caracteriza do por compreender a hidrólise de um composto da fórmula

Cl

CHO .ch₂ch₂-r³-cnhchch,ch,cor²’
2 «-«2' 2'

COOR ou

R^J n/ c;

CHch₂ ch₂-r^j-cnhchch₂ch₂ COR'

NH

COOR' ou de uma sua mistura, em que

R¹ , ^r3 , Q e R5 são o que ficou estabelecido no precedente; r2 ' é hidrogénio ou um grupo de protecção de carboxi;

r4 ' e hidrogénio ou um grupo de protecção de amino; e a con figuração à volta do átomo de carbono designado porχ é S, e p ι h i , pelo menos um de.R e R não e hidrogénio.

23. _ Processo de acordo com a reivindica ção 1, caracterizado por ser -OH e cada um de R² e R^ ser hidrogénio .
3^a. - Processo de acordo com a reivindica ção 2, caracterizado por R^ ser metileno etileno ou trimetileno .
4a. - Processo de acordo com a reivindica ção 3i caracterizado por se preparar o ácido (S,S)-N-73-(2amino-4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido72 ,3-d7pirimidin-6-il)propanoil7-L-glutâmico ou o ácido (R , S )-N-73-(2-amino-4hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido72,3-d7pirimidin-6-il ) propanoilj-glutâmico.
5^a. - Processo de acordo com a reivindica ção 3, caracterizado por se preparar o ácido (S,S)-N-74-(2amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido72,3-d7pirimidin-6— i 1 ) butanoi 17-L-g 1 utâmico ou o ácido ( R , S )-N- 74 - ( 2-amino-4 hidroxi-5 ,6 ,7 , 8-tetra-hidropirido72 ,3-d7pirimidin-6-il ) buta noil7-L-glutâmico.
6a. _ Processo de acordo com a reivindica ção 3, caracterizado por se preparar o ácido (S , S )-N- 75-(2amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido72,3-d7pirimidin-6-il ) pentanoíl7-L-glutâmico ou o ácido ( R ,S )-N-73-(2-amino5-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido( 72,3-d7pirimidin-6-il ) pentanoíl7-L-glutâmico.
7^a. - Processo de acordo com a reivindica ção 3, caracterizado por se preparar o ácido (S , S )-N-76-(2amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido72,3-d7pirimidin-6i1)hexanoí17-L-glutâmico ou o ácido (R,S)-N-73-(2-amino-6hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido72,3-d7pirimidin-6-il)hexa noí17-L-glutâmico.
8a. - Processo de acordo com a reivindica ção 2, caracterizado por R^ ser cic1o-hexa-1 , 4-di-i1o.
9^a. - Processo de acordo com a reivindica ção 8, caracterizado por se preparar o ácido (S , S )-N-£4 - (2(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido£2,3-dJpirimidin -6 - i 1 ) e t i 1 ) c i c 1 o-hex - 1 - i 1 car bon i 1_7-L-gl u t âmi c o ou o ácido (R,S),-N-£4-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido £2 ,3-d7pirimidin-6-il )-etil )ciclo-hex-1-ilcarbonil_7-L-glut£ mico .
10³i - Processo de acordo caracterizado por R^ ser com a reivindica ção
1 1 a

10, caracterizado

- Processo de acordo por r5 ser hidrogénio com a reivindica e Q ser -S-.
12a. _ Processo de acordo com a reivindica ção 11, caracterizado por se preparar o ácido (S , S )-N- £5-( 2(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido£2,3-dJpirimidin -6-il)etil)tien-2-ilcarbonil7-L-glutâmico ou o ácido (R,S)N-/)5-(2-(2-amino-4-hidroxi-5 ,6 ,7 ,8-tetra-hidropirido £2 , 3- d7-pirimidin-6-il ) et i1)tien-2-ilcarbonil7-L-glutâmico.
13^a- - Processo de acordo com a reivindica ção 10, caracterizado por R^ ser hidrogénio e Q ser -0-.

-3714a. - Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por se preparar o ácido (S,S)-N-Í5(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropiridoZ2,3-d7 pir imi. din-6*il ) etil ) furan-2-i1carboni17-L-glutâmico ou o ácido (R,S) -N-75-(2-(2-amino-4-hidroxi-5,6,7,8-tetra-hidropirido72,3-d7 pirimidin-6-il )etil )furan-2-ilcarboni17-L-glutâmico.
15^a. - Processo para combater o crescimen to neoplástico, num mamífero, caracterizado por compreender a administração a um mamífero, num regime de dose única ou múltipla, de uma quantidade eficaz de um composto obtido de acordo com a reivindicação 1, sendo a gama de dosagem de 10 a 100 mg por dia, durante 5 a 10 dias, ou no caso de dose única de 250 a 500 mg, repetida periodicamente.
16^a. - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, para combater o desenvolvimento neo plástico, num mamífero, caracterizado por se incluir na refe. rida composição uma quantidade de um composto obtido de acor do com a reivindicação 1, o qual, mediante a administração, ao mamífero, num regime de dose única, ou múltipla, e eficieri te no combate ao referido desenvolvimento, em combinação com um veículo farmacêuticamente aceitável.