PT87539B - Processo para a preparacao de inibidores da reductase de hmg-coa contendo fosforo e novos intermediarios - Google Patents

Description

ψ;1

- 2 - ção que é activo na inibição da biosíntese de colesterol. Este produto chamado compactin foi relatado por Brown et al., (j. Chern. Soc. Perkin 1. 1165 (1976) como tendo uma estrutura complexa de mevalonolactona. GB 1,586,152 revela um grupo de compostos sintéticos da fórmula

I 10 15

na qual E representa uma ligação directa, uma ponte alquileno ^ ou uma ponte vinileno e os vários R's representam uma variedade de substituintes, > A actividade referida na patente do U.K. é menos do que 1% da de compactin, A Patente dos EUA N8, 4.375.475 de Willard et al revela compostos hipocolesterolémicos e hipoli-pémicos tendo a estrutura

na qual A é H ou metiloj E é uma ligação directa, -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2-CII2-CH2- ou -CH=CH-; R^ R2 e R^ são escolhidos cada um de Ht halogéneo, alquilo ’ C^_^, haloalquilo fenilo, fenilo substituído por halogéneo, alcoxi Cj^, alcanoiloxi C2_g, alquilo C ou haloalquilo Cj^, e OR^ em que R^ é H, alcanoilo C2-8* benzoilo, fenilo, halofenilo, fenilo alquilo Calquilo cinnamilo, halo-

I alquilo alilo, cicloalquilo-alquilo C.^^» adamantilo-alquilo ou alquilo fenilo substituído em cada um dos quais os substituintes são escolhidos de halogéneo, alcoxi alquilo C1 ^ ou haloalquilo ^ 5 e os ácidos dihidroxi correspondentes resultantes da abertura hidrolitica do anel de lactona e os sais farmaceuticamente toleráveis dos referidos ácidos e o alquilo ^ e fenilo, esteres alquilo dimetilamino ou acetilamino subs tituídos dos ácidos dihidroxicosj sendo todos os compostos os enantiomeros que tem uma configuração 4 R na metade tetrahidropirano do racemato trans mostrado na formula acima*

I ¥0 84/02131 (PCT/EP83/00308) (baseada no pedido de registo dos EUA série nS# 443*668, depositado em 22 de Novembro de 1982 e o pedido de registo dos EUA série nS. 548.850, depositado em 4 de Novembro de 1983) depositado em nome de Sandoz AG revela análogos hetero— ciclicos de mevalono lactona e derivados desta tendo a estrutura 1 i

•x-z 30 3 35 - 4 -

e o outro

na qual um de R e R é alquilo primário ou secundário, cicloalquilo C3-6 ou fenil°-(CH2)m“» em que R^ é hidrogénio, alquilo alcoxi

Cl»4» (excepto t-butoxi), trifluorometilo, fluoro, cloro, fenoxi ou benziloxi,

Rj. é hidrogénio, alquilo alcoxi C1 y trifluorometilo, fluoro, cloro, fenoxi ou benziloxi, R^a é hidrogénio, alquilo alcoxi C.^, fluoro ou cloro, e mel, 2 ou 3» com as condições de que tanto R„ como R_ devem 5 5a ser hidrogénio quando R^ for hidrogénio, R^a deve ser hidrogénio quando fôr hidrogénio, não mais do que um de R^ e R,. é trifluorometilo, nao mais do que um de Rj^ e Rj é fenoxi e não mais do que um de e R^ é benziloxi, é hidrogénio, alquilo C^_^, cicloalquilo Calcoxi (excepto t-butoxi), trifluorometilo, fluoro, cloro, fenoxi ou benziloxi, R^ é hidrogénio, alquilo C1_^, alcoxi trifluorometilo, fluoro, cloro, fenxo ou benziloxi com as condições de que deve ser hidrogénio quando Rg fôr hidrogénio, não mais do que um de R2 e R3 ê trifluorometilo, não mais do que um de R e R é fe- m» * ^ ^ noxi e não mais do que um de R2 e R^ e benziloxi. 5 X é -(CH2)n-ou -CH=CH- (n=0, 1, 2 ou 3), *6 5 4 31 2 1

Z -CH-CH0—C—CH--COOH II , 2 I 2

5 OH OH em que é hidrogénio ou alquilo C, _ na forma de o 1-3 ácido livre ou na forma dum ester aceitavel e fisio-logicamente hidrolizavel ou uma lactona deste ou na forma de sal. GB 2162-179-A revela análogos de naftilo de mevalolactona uteis como inibádores da biosintese de colesterol tendo a estrutura

em que R1= alquilo 1-3 C; Z é um gp, da formula ou Z^x

(Z,) (z2) catião R^ s H, um gp ester hidrolizavel ou um 30 6 -

Λ Λ A Patente europzia Ν5« 164-698-Α revela a preparação de lactonas uteis como agentes anti-hiper-colesterolémicos tratando uma amida com um halogeneto sulfonlllco orgânico R^SO2Xf a seguir eliminando o grupo protector Pr,

em que X = halo ;

Pr a um grupo carbinol-protector; R1 = H ou Clly R^, R^ s H, alquilo 1-3C ou fenilo-(alquilo 1-3C), sendo fenilo substituído facultativamente por alquilo 1-3C, alcoxi 1-3C ou halo; R = um grupo da fórmula (A) ou (B);

I

-7 HX8b Q = R1 2 3 4 5 6-C- ou R6-CH ? * » ; i iHg 5 r6 = H ou OH; R = H ou CH3 ; a, b, o e d = ligações duplas facultativas; 7 R = fenilo ou benziloxi, sendo o anel em cada caso substituído facultativamente por alquilo 1-3C ou halo;

8 Q R , R = alquilo 1-3C ou halo; κ R a alquilo I-3C, fenxlo ou mono- ou di-(alquilo 1-3C)fenilo.

Anderson, Paul Leroy, Ger, Offen, DE 3.523»256 revela analogos de naftilo de mevalonolactonas da estrutura

1 17 2 na qual R é alquilo, Z = Q, Q ; R' = H, ou um grupo de 3 ester hidrolizavel util como xtibidor da biosintese do 4 colesterol e no tratamento de ateroesclerose. 5 WO 8402-903 (baseado no pedido de registo dos EUA serie ηδ, 460.600, depositado em 24 de Janeiro de 1983) em nome de Sandoz AG revela análogos de mevalono-lactona uteis como agentes hipolipoproteinaemicos tendo a estru 6 tura -β

ίο na qual os dois grupos Ro era conjunto formam ura radical da fórmula

8 7 6 5~1--C = C - C = C 4- _ i i —J ou -(=¾ >4' “2 3 em que Rg é hidrogénio, alquilo alcoxi (excepto t-butoxi), trifluorometilo, fluoro, cloro, fenoxi ou benziloxi, R^ é hidrogénio, alquilo alcoxi C1 trifluorometilo, fluoro, cloro, fenoxi ou benziloxi com as condições de que não mais do que um de Rg e R^ seja trifluorometilo, não mais do que um de Rg e R^ seja fenoxi e não mais do que um de Rg e R^ seja benziloxi, R^ é hidrogénio, alquilo fluoro, cloro, ou benziloxi, R^ ê hidrogénio, alquilo alcoxi (excepto t-butoxi), trifluorometilo, fluoro, cloro, fenoxi ou benziloxi, R,. é hidrogénio, alquilo alcoxi trifluorometilo, fluoro, cloro, fenoxi ou benziloxi, R^a ® hidrogénio, alquilo C^_g, alcoxi C^_g, fluoro ou cloro e com as condições de que não 9 nais do que um de R^ e seja trifluorometilo, nao liais do que um de e R^ seja fenoxi e não mais do l$re um de R^ e seja benziloxi, X e -(¾ )n-. H \ /C = C\ /(CH2)q -(CH2)g H na qual η I 0, 1 ou 3 e ambos os q's são 0 ou um é O e o outro é 1

z I 5 4

-CH-CH«—C-CHo-C00H I 2 | 2OH

II OH na qual R * .. . /. , 6 e hxdrogenxo ou alquxlo Cj, com a condição geral de que -X-Z e R^ que tenham o grupo fenil sejam orto em relação um com o outroj na forma de ácido livre ou na forma dum ester fisiologicamente hidrolizavel e aceitavel ou um lactona deste ou em forma de sal, O pedido de patente europeia 127 *8k8-A (Merck & Co, Inc,) revela derivados de ácidos 3-hidroxi-5-tia- -aril-alcanoicos tendo a formula estrutural: HO _ 0γ-γ I οχ^S<0). z -10- 5

n e Ο, 1 ou 2; Ε ο ~ch2“» -CH=CH-CII2-; -ch2-ch2-, -CH2-CH2-0H2-,

OU -CH2-CH=CH-; R,, R2 e R^ são, por ex. , hidrogénio, cloro, bromo, fluor, alquilo-C^, fenilo, fenilo substituído ou OR^, em que R^ é por ex,, hidrogénio. benzoilo, fenilo, fenilo subs-

alcanoilo C 2-8’ tituído, alquilo C.^^, cinamilo, haloalquilo alilo, cicloalquilo-alquilo C.^^* adamantilo-al-quilo C2-3 ou ^en:*--l-0 alquilo são hidrogénio, cloro, bromo, fluor 1-3’ e R4.

ou alquilo C X é por ex., hidrogénio, alquilo um catião derivado dum metal alcalino ou e amonio.

Estes compostos têm actividade anti-hipercoles-terolémica graças à sua capacidade em inibir a reductase de 3-hidroxi-3'-m®tilglutaril-coenzima A (HMG-CoA) e actividade antifungica. 0 pedido de patente francesa 2.596.393 A, depositado em 1 de Abril de 1986 (Sanofi SA) revela derivados do acido 3-carboxi-2-hidroxi-propano-fos-fonico incluindo sais deste que são uteis como agentes hipolipémicos e têm a formulai 11- R_ 0 XXBL· 12 \\ / 3 R., 00C-CHo-C-CHo-P 1 2 I 2 \ OH 0R4 na qual R^ e = H, alquilo inferior ou aralquilo facultativamente substituído; e = H, alquilo inferior ou aralquilo ou arilo facultativamente substituído.

Estes compostos são revelados como dando reduções maiores em colesterol, triglicéridos e niveis de fosfolipidos do que meglutol. 0 pedido de pateite europeia 142,146-A (Merck & Co,, Inc.) revela compostos como mevinolin da formula estrutural:

Z na qual: R·^· é por ex., hidrogénio ou alquilo E é -CH2CII2> -CH=CH-, ou e Z é 1) Ο ,Ά?

em que X e -O- ou -NR^ em que é hidrogénio ou alquilo C1 j R ^ é alquilo C„ Rj e δ R é hidrogénio ou CH^j 2)

10 11 12 em que R , R e R são independentemente, por ex., hidrogénio, halogéneo ou alquilo C^_^; 3)

De acordo com o presente invento, são apresentados compostos contendo-fosforo que inibem a reductase do - 13 - enzima 3-hidroxi-3-nietilglutaril-coenzima A (re-ductase HMG-CoA) e consequentemente são uteis como agentes hipocolesterolémicos e incluem a parte seguinte: 0 -P-CHo-CH-CHo-C0- 1 * * Δ

X OH w. na qual X e -0- ou -NH-, n é 1 ou 2 e Z é uma "ancora hidrofuga". 0 termo ancora hidrofuga conforme aqui usado, refere-se a um grupo lipofilico que quando ligado à cadeia lateral superior como-HMG da molécula pelo ligante apropriado ("X") se une a uma bolsa hidrofuga da enzima não utilizada na união do substrato HMG Coa, resultando numa potência maior em relação aos compostos em que Z=H,

Em formas de execução preferidas, os compostos do invento têm a fórmula I

O H

II I

25 I r-p-ch2-ç-ch2-co2h

X OH incluindo os seus sais, em que R é OH, alcoxi inferior ou alquilo inferior; RX é H ou alquilo inferior; - -

χ é -0- ou -NH-; η é 1 ou 2j Z é uma ancora hidrofuga; e incluindo 03 seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Os termos "sal" e "sais" referem-se a sais básicos formados com bases organicas e inorgânicas. Esses sais incluem sais de amónio, sais de metais alcalinos, como, sais de litio, sódio e potássio (que são os preferidos), sais de metais alcalino-terrosos, tais como, sais de cálcio e de magnésio, sais com bases organicas, como sais semelhantes a amina, por ex., sal de diciclohe-xilamina, benzatina, N-metil-D-glucamina, sais de hidra-bamina, sais com amino ácidos como arginina, lisina e análogos. Os sais farmaceuticamente toleráveis, não-tóxicos são os preferidos, embora também possam ser usados outros sais, por ex,, para isolar e purificar o produto.

Exemplos de ancoras hidrofugas que podem estar in-cluidas de acordo com o presente invento incluem, mas não estão limitados a

30 -15- \

em que as linhas a tracejado representam ligações duplas facultativas, por exemplo, 15 20

25 -16-

I : ' \-u

5 • 15 1 2 2a 2b em que R , R , R e R podem ser iguais ou diferentes e são cada um independentemente escolhidos de entre Hf halogéneo, alquilo inferior, haloalquilo, fenilo, fenilo substituído ou 0Ry em que I H, alcanoilo, benzoilo, fenilo, halofenilo, fenilo-alquilo inferior, alquilo inferior, cinamilo, haloalquilo, alilo, cicloalquilo-alquilo inferior, adamantilo-alquilo inferior ou fenilo substituído-alquilo inferior.

Quando Z for 6 -17

. R 25 I Ο

alquilo *> 5' « - ττ R e R sao iguais ou diferentes e sao H, alquilo inferior ou OH; 0 O 6 " L« R ê alquilo inferior-C tal como CHv~CH0-C-C-, o A/ \ η CH, R1 ou arilCH^-; 3 6a # 9 R é alquilo inferior, hidroxi, oxo ou halogéneo q é 0, 1, 2 ou 3, e R^ e H ou alquilo inferior; Assim, os compostos da fórmula I abragem

IA 0 l* x R-P-CH2-ÇH-CH2-C02Ra 0 ÕHz

IB O Η jr R-P-CH2-ÇH-CH2-C02Ra NH ÕHΉ'ηz O termo "alquilo inferior" ou' "alquilo, conforme aqui usado aé ou como parte de outro grupo inclue 30 18 hidrocarbonetos tanto de cadeia direita como ramificada, contendo 1 a 12 carbonos na cadeia normal, de preferencia 1 a 7 carbonos, tais como, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, he-xilo, isohexilo, heptilo, ^,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilpentilo, nonilo, decilo, undecilo, do-decilo, os seus vários isomeros de cadeia ramificada e análogos bem como grupos tais como os que incluem um substituinte-halo, tal como, F, Br, Cl ou I ou CF^, um substituinte alcoxi, um substituinte arilo, um substituinte alquil-arilo, um substituinte haloarilo, um substituinte cicloalquilo, um substituinte alquil-cicloalquilo, hidroxi e um substituinte alquilamino, um substituinte alcanoilamino, um substituinte aril-carbonilamino, um substituinte nitro, um substituinte ciano, um substituinte tiol ou um substituinte alquil-tio. 0 termo "cicloalquilo" conforme aqui usado só ou como parte de outro grupo inclue grupos de hidrocarbonetos ciclicos saturados contendo 3 a 12 carbonos, de preferencia 3 a 8 carbonos, que incluem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclojieptilo, cicloociilo, ciclodecilo e ciclododecilo, e qualquer destes grupos pode ser substituído por 1 ou 2 halogeneos, 1 ou 2 grupos alquilo inferior, 1 ou 2 grupos alcoxi inferior, 1 ou 2 grupos hidroxi, 1 ou 2 grupos alquilamino, 1 ou 2 grupos alcanoilamino, 1 ou 2 grupos arilcarbonilamino, 1 ou 2 grupos amino, 1 ou 2 grupos nitro, 1 ou 2 grupos ciano, 1 ou 2 grupos tiol, e/ou 1 ou 2 grupos al-quiltio. 0 termi "arilo" ou "Ar" conforme aqui usado re-fere-se a grupos aromáticos monociclicos ou biciclicos — 19 - contendo de 6 a 10 carbonos na parte do anel, tais como, fenilo, naftilo, fenilo substituído ou naftilo substituído em que o substituinte quer no fenilo quer no naftilo poder ser 1, 2 ou 3 grupos alquilos inferiores, halogéneos (cl, Br ou F), 1, 2 ou 3 grupos alcoxi inferiores, 1, 2 ou 3 grupos hidroxi, 1, 2 ou 3 grupos fenilos, 1, 2 ou 3 grupos alcanoiloxi, 1, 2 ou 3 grupos benzoiloxi, 1, 2 ou 3 grupos haloalquilos, 1,2 ou 3 grupos halofenilos, 1, 2 ou 3 grupos alilos, 1, 2 ou 3 grupos ciclo-alquilalquilos, 1, 2 ou 3 grupos adamantilalquilos, 1, 2 ou 3 grupos alquilaminos, 1, 2 ou 3 grupos al-canoilaminos, 1, 2 ou 3 grupos arilcarbonilaminos, 1, 2 ou 3 grupos aminos, 1, 2 ou 3 grupos nitros, 1 2 ou 3 grupos cianos, 1, 2 ou 3 grupos tiol, e/ou 1, 2 ou 3 grupos alquiltio, contendo o grupo arilo de preferencia 3 substituintes, 0 termo "aralquilo", "aril-alquilo" ou "aril--alquilo inferior” conforme aqui usado só ou como parte de outro grupo refere-se a grupos alquilo inferiores conforme os acima indicados tendo um substituinte arilo, tal como, benzilo, O termo ”alcoxi inferior”, "alcoxi” ou "aril-oxi” ou "aralcoxi" conforme aqui usados só ou como parte de outro grupo inclue quaisquer dos grupos acima indicados alquilo inferior, alquilo, aralquilo ou arilo, ligados a um atomo de oxigénio, 0 termo "alquilo inferior tio", "alquiltio", "ariltio" ou "aralquiltio" conforme aqui usado só ou como parte de outro grupo inclue quaisquer dos grupos acima indicados alquilo inferior, alquilo, aralquilo ou arilo, ligados a um atomo de enxofre. 20 - 0 termo "alquilo inferior amino", "alquilamino" "arilamino", "arilalquilamino" conforme aqui usado só ou como parte de outro grupo inclue quaisquer dos grupos acima indicados alquilo inferior, alquilo, arilo ou arilalquilo, ligados a um atomo de azoto. 0 termo "alcanoilo" conforme aqui usado como parte de outro grupo refere-se a alquilo inferior ligado a um grupo carbonilo. 0 termo "halogéneo" ou "halo" conforme aqui usado refere-se a cloro, bromo, fluor, iodo e CF^, sendo cloro ou fluor preferidos. São preferidos os compostos da fórmula I que têm a estrutura seguinte

15 II

R 0 ,CH_. H CH-v \»/ 2\ / 2N x P C C0oRX i - 2

CH0 OH I 2

Z

Li ou II; em que R é OH, OLij RX I X I 0 ou NIIj e Z é

1 * em que E é fenilo que inclue um substi-tuinte alquilo e/ou halo ou R1 é benziloxi que inclue um substituinte halo; 2 e R^ são iguais e são halogéneo ou alquilo inferior; 21 21

Z pode ser de preferencia também 1 2 a em que R e R tem o significado indicado imediatamente acima com respeito ao composto da formula II, ou 10 5

em que R

3

CH

ou fenilmetilo(substituído)

•V em que R‘ I H ou

Os compostos da formula I do invento podem ser preparados de acordo com a seguinte sequencia de reacção e descrição desta. 22

?6Η5 OSÍ-C(CH3) 3=6Κ5 R -P ι. (Oalquilo ),

III

-C-CH2“C02 alquilo dff Arbiizov H * (Rd= alquilo inferior, ou alcoxi inferior 0 a *' R -P-CH2-ÇH~CH2-C02 0aIJ|i4U^i-C (CH3). C6H5 C6H5 alquilo

IV 2. H20

'6H5 C6H5 I. (CH3)3— SiBr, CH2C12 -> clivagem de ester fosforoso 0

Ra‘-P-CH2-CH-CH2-C02alquilo

OH sí-c(ch3)3 VA, - ΚΛ =alquilo inferior quando Ra era alquilo inferior QI ^ VB, - R =0H quando R era alcoxi inferior

I - 23 - I ν·

A

VB(R a'

RbOH-DCC

O II 0H* (Rb = alquilo inferior) RbO-P-CH2-CH-CH2CC>2alquilo-1 i* l i Piridina Si-CÍCH^Í^ (Esterificação) /\ CA c6h5 i. > - 2h -

1) (C0C1)2» CH2C1? (Formação de Cl ácido) 2) Z-(CH2)n-XH (reacção de acoplamento) (C2H5)3N, DMAP 1) (n-C4H9)4NF, CH3COOH, THF (clivagem de eter sililico) 2) 0H~, ^ioxano (hidrólise)-> I'· -\~ί' R -£-CH2-ÇH-CH2COjilquil X Õ i l (aun si-ctcH^)-.i V\ 33 C6H5 C6H5 (Rc = 0 VII alquilo inferior ou alcoxi inferior R-P-CH0-CH-CH0-CO-RX| 2 - 2 2 Kt ÕH(™2fn Z I.

I - 25 Ο

Como se depreende da sequencia de raacção acima, os compostos da Formula I podem ser preparados subme-tendo-se o iodeto A a uma reacção de Arbuzov por aquecimento do iodeto A 5 ?6H5 0-SÍ-C(CH3)3

A 10

C6H5 I-CH2-C-CH2-C02 alquilo H

e fosfonite/fosfito III

III Ra-P(Oalquilo)2 em que Ra I alquilo inferior ou alcoxi inferior, usando condições è processos padrões de Arbuzov para formar fosfinato/fosfonato IV 20

IV

0a “ Ra-P I CH, -CH-CH2-C02 alquilo dalquijLo ^C>5i-C(CH3 )3ClC \^Hr '6 5 '6 5

Fosfinato/fosfonato ÍV é um composto novo e como tal é uma parte do presente invento.

Fosfinato/fosfonato IV é a seguir submetido a uma clivagem de ester fosforoso tratando uma solução do composto IV num solvente orgânico inerte, tal como, cloreto de metileno, em sequencia com bis(tri-metilsilil)trifluoroacetamida (BSTFA) e brometo de trimetilsililo, numa atmosfera inerte, tal como, argon — 26 — para formar o acido fosfinico VA quando Ra em IV fôr alquilo inferior, isto é, 0 ll 5 VAalquilo inferior .-^-CH2-ÇH-CH2“C02alquilo OH 0 ^^sí-c(ch3)3 C6H5 Vs

ou ácido fosfónico VB (em que Ra em IV é alcoxi inferior), isto S 0

II VB H0-^-CH2-ÇH-CH2-C02 alquilo 15 OH Ò ^sí-c(ch3)3 C6H5 C6H5

Os compostos VA e VB são intermediários novos e como parte fazem parte do presente invento. Quando for obtido ácido fosfónico VB, é este-rificado tratando VB em piridina seca com álcool t. VC R OH (quando R fôr alquilo inferior)

e diciclohexil carbodiimida e a mistura de reacção resultante é agitada numa atmosfera inerte, tal como, argon, para formar ester mono alquilico fosfónico VI 0 -27- VI Rb0-P-CH2-ÇH-CH2C02aIquilo OH Õ /Sí-c(ch3)3 5 C6H5 C6H5

Ester VI ou ácido fosfinico VA I a seguir dissolvido num solvente orgânico inerte, tal como, cloreto de metileno, benzeno ou tetrahidrofurano (THP) e tratado com trimetilsilildietilamina e agitado numa atmosfera inerte, tal como argon; A mistura é evaporada e subsequentemente dissolvida em cloreto de metileno (ou em outro solvente orgânico, inerte, apropriado)* A solução resultante á arrefecida atá uma temperatura no âmbito de aproximadamente 02 C a aproximadamente 25-C, tratada com cloreto de oxalilo e depois evaporada para dar fosfonocloridato em bruto, 0 fosfono-cloridato e dissolvido num solvente orgânico, inerte, tal como, cloreto de metileno, benzeno, piridina ou THP; a solução é arrefecida ate uma temperatura abrangida entre aproximadamente -202C e aproximadamente 02c e tratada com

B Z-(CH2)n-XI-I

empregando uma proporção molecular de VI ou VA:B dentro dos limites de aproximadamente 0,5.1 a aproximadamente 3:1 e de preferencia de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 2:1, seguida de trietilamina e 4-dimetilaminopiridina catalítica (DMAP) para formar aducto VII 5

VII -28— Ο r 1' R-P-CH0-CH-CH,-C0oalquilo I 2 = 22 X Õ «fVn ^sí-c(ch3)2 z c6h5 c6h5 f O ^ (em que R e alquilo inferior ou alcoxi inferior).

0 composto VII é submetido à clivagem do eter sililico tratando um VII num solvente orgânico, inerte, tal como, tetrahidrofurano, com ácido acético glacial e fluo-reto de tetrabutilamónio para formar o ester VIII 15 0 c II v VI11 R -P-CH2-ÇH-CH2-C02R alquilo

X ÕH «Κ'η

20 Z (RX = alquilo) O ester VIII pode ser depois hidrolisado no "sal de metal alcalino correspondente ou ácido, isto é, quando Rx fôr metal alcalino ou H por tratamento com uma base forte, tal como, hidróxido de litio, na presença de dioxano, tetrahidrofurano ou outro solvente orgânico, inerte, numa atmosfera inerte, tal como, argon, a 25®C, empregando uma proporção molecular de base:ester VIII dentro dos limites de aproximadamente 1:1 a aproximada-mente 1,1:1 para formar o sal de metal alcalino correspondente -29-

0 li VIIIA R-P-CHo-CH-CHo-C0,metal alcalino | 2 = 2 2

X ÕH 5 “jH2>n z em que li é alquilo inferior ou alcoxi inferior#

0 composto VlIIa pode ser tratado a seguir com ácido forte tal como HC1 para formar o ácido correspondente VIIIB 15 0

viiib r-^>-ch2-çh-ch2-co2h X ÕH 2?

0 ester VIII em que R é alcoxi inferior pode ser convertido no sal de metal di-alcalino correspondente tratando o ester VIII com uma base forte a 50-60®C empregando uma proporção molecular de base:ester VIII dentro dos limites de aproximadamente 2:1 a aproximadamente 4:1 para formar VIIIC

VIIIC metal alcalxno.lQ-P-CH2-ÇH-CH2-C02metal alcalino

X ÕH «?H2>n

Z 30 - 30 -

0 sal de metal di-alcalino VIIIC pode ser convertido no ácido correspondente em que R é OH por tratamento com ácido forte, tal como, IIC1 para for

mar VIIID 0

VIIID ho-p-ch2-çh-ch2-co2h

X ÕH 10

I I

z

0 material de partida A iodeto pode ser preparado partindo de brometo C

OH 2 Br-CH2-CH-CH2CC>2 alquilo

(preparado empregando processos conforme descritos em Tetrahedron Lett. 26, 2951 (1985)) que é dissolvido numa solução de dimetilformamida (DMF) como imidazol e ^-dimetilamino piridina e a solução resultante é tratada com cloreto de t-butil-difenil sililo numa atmosfera inerte, tal como, argon, para formar o eter sililico D

osí-c(ch3)3 Br-CH2-CH-CH2C02alquilo

D 30 31

Uma solução de eter sililico D num solvente orgânico, inerte, tal como, metil etil cetona ou DMF e tratada com iodeto de sódio numa atmosfera inerte, tal como, argon, para formar iodeto A.

0 composto de partida B

B Z-(CH2)n-XH pode ser preparado conforme a seguir está descrito dependendo da definição de Z e X.

Assim, os compostos da fórmula B na qual Z ó

e X e 0, isto ê, compostos da estrutura

podem ser preparados tratando o

aldeído E - 32 -Ε 5

com um agente de redução, tal como, hidreto de alu-minio litio ou borohidreto de sódio.

Os compostos da fórmula B quando Z for 15

e X fôr N, isto ó, compostos da estrutura

podem ser preparados oxidando o aldeído B tratando E em solução com acetona com, por exemplo, reagente de Jones, para formar o ácido F

F

r2í—( ο V- (CH2)n-rCOOH R2 o qual em suspensão com cloreto de metileno é tratado com cloreto de oxalilo para formar o cloreto ácido correspondente que é dissolvido num solvente orgânico, inerte, tal como, tetrahidrofurano e tratado com uma mistura de hidróxido de amónio concentrado em tetra-hidrofurano para formar uma amida da estrutura

G A amida G I reduzida a seguir à amida correspondente 2 w B tratando G com um agente de redução tal como, hidreto de aluminio litio.

Os compostos de partida da formula B em que Z é -34-15

quando X fôr O estão revelados por C.H. Heathcock et al, J. Orgt Chem. ^0, 1190 (1985)· Os compostos da formula II1 quando X for NII podem ser preparados pela aminação reductiva de 25

J

(preparada conforme revelado por C. II. Heathcock et al, supra) 30 - 35 tratando J com acetato de amónio e cianoborohidreto de sódio na presença dum solvente alcoólico, tal como, metanol. 0 composto de partida da fórmula B ein que Z é ,2a 10

estão revelados em ¥0 8402-903-.A e GB 2.162.179A ambos depositados em nome de Sandoz.

Os compostos de partida da formula B em que Z é -36- Η R2a R1

podem ser preparados pela aminação reductiva do aldeído 0

tratando 0 com acetato de amónio e cianoborohidreto de sódio na presença dum solvente alcoólico tal como metanol. 37 -

Os compostos do invento podem ser preparados como misturas racémicas e podem ser resolvidos posteriormen-te para se obter o isomero-S que é preferido. No entanto, os compostos do invento podem ser preparados direc-tamente na forma dos seus isomeros-S, conforme aqui descrito e nos exemplos operatórios a seguir descritos.

Os compostos do invento são inibidores da reducta-se de 3-hidroxi-3-metil-glutaril coenzima Λ (iíMG-CoA) e consequentemente são uteis na inibição da biosintese do colesterol, conforme demonstrado pelos testes seguintes, 1) Reductase de HMG-CoA hepática em ratazanas Ê medida a actividade da reductase de HMG-CoA hepática de rarazanas usando uma modificação do método descrito por Edwards (Edwards, P.A. , et al,, J. Lipid Res, 20:40, 1979). são usados microsomas hepáticos de ratazanas como fonte de enzima e a actividade enzimá- tica é determinada medindo a conversão do substrato 14 , lk * C-HMG-CoA em acxdo C-mevalonico, a. Preparação de microsomas São retirados fígados de 2-4 ratazanas Sprague Dawley, decapitadas, alimentadas com colestiramina, e homogeneizados em tampão de fosfato A (fosfato de potássio, 0,04 M, pll 7*2; KC1, 0,05 M; sucrose, 0,1 M; EDTA, 0,03 M; aprotinina, 500 Kl unidades/ml). 0 homo-genato é rodado a 16.000 x g durante 15 minutos a 4SC. 0 sobrenadante é retirado e recentrifugado nas mesmas condições uma segunda vez, 0 segundo sobrenadante 16,000 x g é rodado a 100.000 x g durante 70 minutos - 38 - a b-C» Microsomas em pequenas bolas são re-suspensos num volume minimo de tampaão A (3-5 rol por fígado) e homogeneizados num homogeneizador vidro/vidro, Ê adicionado ditiotreitol (10 mH) e a preparação é distribuída em aliquotas, congelada rapidamente em acetona/gelo sêco e guardada a -802C. A activi-dade especifica da primeira preparação microsomal foi 0,68 nmole ácido mevalónico/mg de proteina/mi-nuto. b. Ensaio de enzimas A reductase é ensaiada em 0,25 rol que contem os componentes seguintes nas concentrações finais indicadas ί 0,0½ M 0,05 M 0,10 M 0,03 M 0,01 M 3,5 mM li fosfato de potássio, píl 7,0 KC1 sucrose

EDTA ditiotreitol

NaCl dimetilsulfoxido 50-200pg proteína microssomal 100 μΜ lifC-/DL/HMG-CoA (0,05 uCi, 30-6o mCi/mmole) 2,7 ro^ NAJDPH (fosfato de nicotinamida adenina dinucleotide)

As misturas de reacção são incubadas a 37SC, Nas condições descritas, a actividade enzimática aumenta linearmente até 300 pg proteína microssomal por mistura de reacção e é linear com respeito ao tempo de - 39 - ! ι incubação até 30 minutos. O período de tempo de incubação padrão, escolhido para os estudos da droga é de 20 minutos, o que resulta em 12-15^ de conversão do substrato HMG^CoA no produto do ácido mevalonico, 0 substrato /DL-/lIMG-Coa é usado a 100 uM, duas vezes a concentração necessária para saturar a enzima nas condições descritas, NADPII é usado em excesso a um nivel de 2,7 vezes a concentração requerida para ser atingida a velocidade máxima de enzima# São realizados ensaios estandardizados para a avaliação de inibidores, de acordo com o seguinte processo. A enzima microssomal ê incubada na presença de NADPH a 37?C durante 15 minutos. 0 veículo DMSO I adicionado com ou sem o composto do teste e a mistura continua a ser incubada durante 15 minutos a 37-('· 0 ensaio da enzima é iniciado adioionando-se o 14 substrato C-IíMG-CoA. Passados 20 minutos de incubação a 37?'» a reacção é interrompida pela adição de 25 ul de KOH a 33/· É adicionado ácido ^H-meva-lonico (0,05 uCi) e a mistura de reacção é deixada ficar à temperatura ambiente durante 30 minutos. São adicionados cinquenta ul de IIC1 5N para lacto-nizar o ácido mevalonico, Ê adicionado azul de bro-mofenol como indicador do pH para vigiar uma queda adequada do pH. A lactonização é deixada prosseguir durante 30 minutos à temperatura ambiente. As misturas de reacção são centrifugadas durante 15 minutos a 2800 rpm. Os sobrenadantes são acamados em 2 gramas de resina permutadora de aniões AG 1-X8 (Biorad, forma do formato),deitados em colunas de vidro de 0,7 cm (id) e eluidos com 2,0 ml de H^O, 0 primeiro 0,5 ml 1 posto de parte e os seguintes 1,5 ml são recolhi- - 4θ - dos e contados tanto a respeito de tritio como de carbono 14 em 10,0 ml de fluido de cintilação Opti-fluor. Os resultados são calculados como nmoles de ácido mevalónico produzido por 20 minutos e são corrigidos a 100$ de recuperação de tritio. Os efeitos da droga são expressos como valores (concentração da droga que produz uma inibirão de 50$ da actividade do enzima) derivados da dose de composto que os dados de resposta indicaram com os 95$ de intervalo de confiança. A conversão das tfrogas em forma de lactona nos seus sais de sódio é realizada solubilizando a lactona em DMSO adicionado um excesso de NaOH 10-vezes molecular e deixando a mistura ficar à temperatua ambiente durante 15 minutos. A mistura a seguir ê parcialmente neutralizada (pH 7»5-8,0) usando HC1 IN e diluída na mistura de reac-ção da enzima. Z) Sintese de colesterol em hepatocitos de ratazana isolados recentemente_

Os compostos que demonstram actividade como ini- bidores de reductase de HMG-Coa são avaliados a respei-

- lU to da sua capacidade em inibir a incorporação de C-ace-tato em colesterol em suspensões de hepatocitos de rato iselados recentemente usando métodos originalmente descritos por Capuzzi et al. (Capuzzi, D.M. e Margolis, S», Lipids, 6:£02, 1971). a. Isolação de hepatocitos de rato Ratos Sprague Dawley (180-220 gramas) são anestesiados com Nembutol (50 mg/kg/. 0 abdómen é aberto e o primeiro reúno da veia portal e fechada atando-se. Ê in-jectada heparin (100-200 unidades) directamente na veia cava abdominal. Uma sutura única para fechar é colocada na secção distai da veia portal e a veia portal e canu-lada entre a sutura e a primeira veia de ramificação. 0 figado é perfurado a uma velocidade de 20 ml/minuto com tampão A oxigenado, pré-aquecido (37?c) (HBSS sem cálcio nem magnésio contendo 0,5 mM EDTA) depois de ser separada a veia cava para permitir a drenagem do efluente. 0 figado ê perfurado adicionalmente com 200 ml de tampão B pré-aquecido (HBSS contendo 0,05c- de colagenase bacteriana), A seguir à perfusão com tampão B, o figado é excitado e descapstilado em 60 ml de meio de Waymouth para deixar as células livres para se dispersarem no meio, 0d hepatoeitos são isolados por centrifugação a baixa velocidade durante 3 minutos a 50xg à temperatura ambiente, Hepatocitos em esferas são lavados uma vez em meio de Waymouth, contados e analisados a respeito da viabilidade por exclusão do azul de tripanose. Estas suspensões de células enriquecidas com hepatocitos vulgarmente apresentam 70-90f. de viabilidade. b. Incorporação de ^C-acetato no colesterol M / (5

Hepatocitos sao re—suspensos em células 5x10 por 2,0 ml de meio de incubação (IM) JÕ,Q2 M Tris-HCL (pH 7,^), KC1 0,1 M, citrato de sodio 3,3 mM, nicoti- namida 6,7 mM, 0,23 mM NADP, 1,7 mM glucose-6-fosfato_7· Os compostos do teste são dissolvidos rotineiramente em DMSO ou DMSOjHgO (1s3) e adicionados ao IM. A concentração de DMSO final no IM é _ 1,0ÇC e não tem qualquer efeito significativo na sintese do colesterol. I- h2 - A incubação e iniciada adicionado C-acetato (58 mCi/mmol, 2 uCi/ml) e colocando as suspensões de células (2,0 ml) em pratos de cultura de tecido com 35 mm a 37SC durante 2,0 horas. A seguir à incubação, as suspensões de células são transferidas para os tubos de centrifugação em vidro e centri-fugadas a 50xg durante 3 minutos à temperatura ambiente. As esferas de células são resuspensas e tratadas com lisina em 1,0 ml de II^O e colocadas num banho de gelo.

Os lipidos são extraídos essencialmente conforme descrito por Bligh, E.G. e ¥. J. Dyer, Can, J, Biochem. and Physiol., ^2.:911, 1959· A fase organica inferior é retirada· t e seca numa corrente de azoto e o residuo re-suspenso em (100 ul) de clorofórmio«metanol (2:1). A amostra total é posta em placas de camada fina de silica gel (LK6d) e desenvoldia em hexa-noseter etilico«ácido acético (75:25:1). As placas são observadas e contadas usando um sistema de observação automático BioScan, Ê determinado radiologicamente o pico do colesterol (RF 0,28) e expresso em contagens totais por pico e como percentagem da classificação no extracto de lipidos totais. Os picos de colesterol nas culturas de controlo contem rotineiramente 800-1000 cpm e são 9-2C$ da classificação presente no extracto de lipidos totais; resultados compatíveis com Capuzzi et al·, indicando 9$> da classificação extraída em colesterol.

Os efeitos da droga (^ de inibição da sintese do colesterol) são determinados comparando $ da classificação em colesterol com as culturas de controlo e tratadas com droga. As curvas da resposta da dose são construídas a partir dos dados do composto de dois ou mais estudos e os resultados são expressos como valores

- h3 -

I 50 cora um intervalo de confiança de 95$« 3)* Sintese do colesterol era estrutura fibrobíástica da pele humana A selectividade do composto que favoreça maior acti-vidade inibitória em tecido hepático seria um atributo para um inibidor da sintese do colesterol* Por isso, além de se avaliar os inibidores da sintese de colesterol em hepatocitos, estes compostos também foram analisados a respeito da sua actividade como inibidores da sintese de colesterol em estrutura fibroblásti-ca cultivada. a* Culturas fibroblásticas da pele humana

Culturas fibroblásticas de pele humana (passagem 7-27) são desenvolvidas num meio essencial minimo de Eagles (EM) contendo 10$ de soro de vitela fetal. Para cada experiencia, as culturas são tripsonizadas para dispersar a monocamada das células, contadas e colocadas em 35 mm de tecido de pontos de cultura (células 5xl0^/2,0 ml). As culturas são incubadas durante 18 horas a 37eC em 5$ 00^/95$ ar interior humidificado. Os enzimas biosintéticos de colesterol são induzidos ao ser retirado o meio que contem o soro, lavando as monocamadas de células e adicionando 1,0 ml de BH contendo 1,0$ de albumina do soro bovino livre de ácidos gordos e incubando as culturas durante 2^ horas adicionais, « 14 b. Incorporação de C-acetato no colesterol Culturas fibroblásticas induzidas são lavadas com EMEM100 (meio essencial minimo de Earle), Os compostos do teste são dissolvidos em DMS0 ou DMSOíEM (ls3) - kh - (concentração de DMSO final nas culturas das células __ 1,0$) adicionados às culturas e as culturas pré-incuba-das durante 30 minutos a 37*C em 5$ de CO2/95$ de ar interior humidificado. A seguir à pre-incubação com drogas I adicionado acetato de (2,0 uCi/ml, 58 mCi/mmo- le) e as culturas re-incubadas durante h horas. Depois da incubação, o meio de cultura é retirado e a monocamada de células (200 ug de proteina de células por cultura) é esfregado em 1,0 ml de H^O, Os lipidos na suspensão de células com lisina são extraídos em clorofórmiojmetanol conforme descrito para as suspensões de hepatocitos, A fase organica é seca sob azoto e o residuo re-suspenso em clorofórmiojmetanol (2:1)(100 ul) e a amostra total colocada em placas de camada fina de silica gel (LKÓD) e analisada conforme descrito para hepatocitos. A inibição da sintese de colesterol é determinada comparando a percentagem de classificação no pico de colesterol entre as culturas tratadas com droga e a de controlo. Os resultados são expressos como valores 1^ e são derivados das curvas das respostas da dose de compostos de duàs ou mais experiências. Um intervalo de confiança de 95$ para o valor também é calculado a partir das curvas de respostas das doses de composto.

Mais um outro aspecto do presente invento é uma composição farmacêutica consistindo de pelo menos um dos compostos da formula I em associação com um veículo ou diluente farmacêutico, A composição farmacêutica pode ser formulada empregando veículos ou diluentes sólidos ou líquidos, convencionais, e aditivos farmacêuticos dum tipo apropriado ao modo da administração desejada.

Os compostos podem ser administrados por via oral, por

X - *»5 - exemplo, na forma de comprimidos, cápsulas, granulados ou pos, ou podem ser administrados por uma via parenteral na forma de preparações injectaveis, essas formas de dosagem contendo de 1 a 2000 mg do composto activo por dosagem, para uso no tratamento, A dose a ser administrada depende da dose unitária, dos sintomas, da idade e do peso do corpo do paciente.

Os compostos da formula I podem ser administrados de maneira semelhante aos compostos conhecidos aconselhados para uso na inibição da biosintese do colesterol, tais como lovastatin, em espécies mamíferas, tais como, humanos, cães, gatos e semelhantes. Assim, os compostos do invento podem ser administrados numa quantidade de aproximadamente k a 2000 mg numa dose unica ou na forma de doses individuais de 1 a h vezes por dia, de preferencia 4 a 200 mg em dosagens divididas de 1 a 100 mg, de forma conveniente 0,5 a 50 mg 2 b. k vezes por dia ou na forma de administração retardada.

Os Exemplos que se seguem representam formas de execução preferidas do presente invento. Desde que não haja indicação em contrário, todas as temperaturas estão expressas em graus centigrados, A cromato-grafia com flash foi realizada ou com Merck 60 ou Whatmann LPS-I de silica gel. A cromatografia de fase inversa foi realizada em resina gel CIIP-20 MCI fornecida por Mitsubishi, Ltd. - 46 -

Exemplo i ácido (S)-4-/1/4’-fluoro~3» 3'> 5-trimetil/,1'-bifenil/- 2-il/metoxi/metoxifosfinil/-3-hidroxi-butanoico, sal de monolitio ________ A. N-(2«4-dimetilbenzilideno jbenzenoamina Ref. Merck Patente dos EUA n?. 4.375.475, pg. 39.

Uma solução de 2,4-dimetilbenzaldeído de destilação recente (Aldrich, 6,97 ml, 50 mmoles) e anilina destilada (Aldrich, 4,56 ml, 50 mmoles) em tolueno seco (80,0 ml) foi levada a ferver em refluxo durante 3,0 horas sob argon num balão equipado com um aparelho Dean-Stark, A mistura foi arrefecida, depois evaporada no vácuo até ficar um óleo amarelo. O óleo em bruto foi purificado por destilação de Kugelrohr (0,5 mm Hg, 160-1802C) para dar 8,172 g (78, Γ?;) de benzenoimi-na em epígrafe, desejada, na forma dum óleo amarelo claro que cristalizou ao repousar até ficar num sólido com baixo ponto de fusão, TLC (4:l) Hex-acetona, EF= 0,67 e 0,77 (isomeros geométricos), U.V. e I2· -47- HX8b

Ref. Merck Patente dos EUA n?. 4.375.475, pág. 39«

Uma mistura de benzenoimina da Tarte A (6,0 g, 28,7 mmoles) em HOAc glacial (144 ml) foi tratada com acetato de paládio (li) (6,44 g, 28,7 mmoles) e a solução homogenaa vermelha, limpida, posta em refluxo sob argon durante uma hora. A mistura turva resultante foi filtrada a quente através duma camada de 1/2" de Celite em 900 ml de H^O. 0 solido laranja precipitado foi recolhido por filtração e seco no vácuo a 6590 sobre Po0_ durante 16,0 horas para dar 10,627 g (85*5%) do complexo de paládio em epigrafe, desejado na forma dum solido laranja com p.f. = 1949-19690. (Literatura p.f. duma amostra analítica recristalizada = 203e-205-C). C. 4’-fluoro-3,3' , 5-^^^11/1,^- bifenil/-2-carboxaldeido_ (l) bromo/4-fluoro-3-metilfenil/-magnésio

Ref. Merck Patente dos EUA n?# 4,375.^75* PP· 37 o 38« O reagente de Grignard da Parte C(l) do título foi preparado adicionando 5-t>ronio-2-fluorotolueno (22,5 g» 60,9 mmole, Eairfield Chemical Co.) gota a gota a uma velocidade suficiente para manter a reac- - 48 -

ção era refluxão a aparas de magnésio agitado (l,35 St 35,4 mmole, 8,0 eq,) em Et20 seco (70,0 ml), A reacção foi iniciada num dispositivo ultrasónico. Bepois de estar completa a adição de brometo, a mistura foi agitada durante uma hora sob argon à temperatura ambiente, posta em refluxo durante 15 minutos e depois deixada arrefecer até atingir a temperatura ambiente, (2) 4'-fluoro-3,3’ , S-trimetil/lj^-bifenil/--2-carboxaldeido

Num segundo balão, foi agitada à temperatura ambiente sob argon durante 30 minutos uma mistura do complexo de di-paládio da Parte B (3*0 g, 6,92 mmole) e trifenilfosfina (14,52 g, 55,4 mmole, 8,0 eq,), em benzeno anidro, (100 ml). Reagente de Grignard preparado recentemente e filtrado (bujão de lã de vidro) Parte C (l) foi a seguir adicionado duma só vez por meio dtima canula a esta solução e a mistura foi agitada durante 1,5 horas à temperatura ambiente sob argon. Foi adicionado ITCl 6,0 N (35 ml), a mistura agitada uma hora adicional a temperatura ambiente, depois filtrada através de Celite compacta (camada Vj2n), 0 filtrado foi extraído com EtgO (250 ml), o extracto lavado com salina (2 x 100 ml), seco sobre MgSO^ anidro e evaporado no vácuo para dar 13»35 S dum óleo laranja viscoso que cristalizou ao repousar, 0 solido laranja em bruto foi purificado por cromatografia com flash em silicagel (700 g) eluindo com hexano, seguida de (95ί5) hexano-St20. As fracções do produto foram evaporadas para dar 1,507 g (89,9/0 do aldeído do título desejado na forma dum so lido amarelo claro com p,f, = 72-75eC ) (relatórios da literatura p.f. = 739-7450). TLC: (95:5) Hex-Et20, Rf= _ 49 — 0,40, U.V. e PMA, D. 4'-ί1ηθΓθ-3,3'»5-trimetil/l,l*- bifenil/-2-metanol_

Uma solução arrefecida (05C, banho de gelo) de Et^O (15,0 ml) seco foi tratada com LiAlIí^ (259 mg, 6,82 mmole, 0,55 eq.) e a suspensão cinzenta foi tratada gota a gota durante 15 minutos com uma solução do aldeído da Parte C (3»0 g, 12,4 mmole) em Et20 (15 ml) seco, A mistura foi agitada à temperatura ambiente sob argon durante 30 minutos, depois voltou a ser arrefecida para 0?C e extinta pela adição gota a gota em sequencia de 260 ul de H^O, 260 ul de KaOIí a 15$ e 78O ul de H20. A suspensão foi diluída com EtOAc, filtrada através de Na2S0^ anidro sobre Celite compacta (camada "*/2”) e o filtrado incolor evaporado no vácuo para dar 2,99 g (98,8'JÍ) dum sólido branco, A trituração do sólido em bruto com hexano frio e secagem no vácuo deu 2,467 g (81,67’) do álcool em epi-grafe, desejado, na forma dum sólido branco com p.f, 102-103?C. TLC: (9 ίΐ) Hex-EtOAe, Ilf = 0,24, U.V, e PMA. E. ácido (s)-3-//(l,1-dimetiletil)difenil-silil/oxi/-4-(hidroximetoxifosfinil)-butanoico, ester metilico (l) ácido (s)-4-bromo~3-hidroxibutanoico, ester metilico_ (l)(a) ácido /R-(^,^)/-2,3*4-trihidroxi-butanoico, sal de cálcio, hidrato

Ref. Carbohydrate Research 72, pp, 301-30^ (1979),

Carbonato de cálcio (50 g) foi adicionado a uma solução de ácido D-isoascórbico (*ιΛ,0 gf 250 mmol) em H^O (625ml), a suspensão arrefecida para 0?C (banho de gelo) e tratada a pouco e pouco com HO a 30$ (100 ml). A mistura foi agitada a 30?-^oec (banho de óleo) durante 30 minutos. Foi adicionado Darco (10 g) e a suspensão negra aquecida num banho de vapor até ter cessado a evolução de 0^, Λ suspensão foi filtrada através de oelite, evaporada no vácuo (temperatura do banho 409c). 0 residuo foi retomado em H20 (50 ml), aquecido num banho de vapor e foi adicionado CII^OII até a solução ficar turva. 0 sólido precipitado gomoso foi recolhido por filtração e seco ao ar para dar 30,836 g (75,2??) do sal de cálcio desejado na forma dum sólido branco em pó. TLC (7:2:1)iPrOIí-HÍI, OH-I! 0, Rf = 0,19, PMA. “t 2 (l)(b) ácido /S-(R*,S*)/-2,4-dibromo-3-hidroxibutanoico. ester metilico

Ref. Bock, K, et al·, Acta Scandinavica (b) 37» pp. 3^1-3^4 (1983)

Sal de cálcio (30 g) da Parte (l)(a) foi dissolvido em 30-32?" I-IBr em ácido acético (210 ml) e agitada à temperatura ambiente durante 2h horas. Foi depois adicionado metanol (990 ml) à solução castanha e foi agitado durante a noite. A mistura fbi evaporada até ficar um óleo laranja, retomada em CILjOH (75 ml), posta em refluxo durante 2,0 horas e evaporada. 0 resíduo foi distribuído entre ICtOAc (lOO ml) e H^O, a fasd organica lavada com II^O (2x) e salina, depois seco sobre ETa2SO^ anidro e evapo- - 51 - rado para dar 22,83 g (90,5/í) de dibrometo em bruto na fornia dum óleo laranja claro, TLC (l:l) EtOAc-Hex, Rf = 0,69, UV &PMA, (1) (c) ácido (s)-4~bromo-3-hidroxibutanoico, ester metilico

Ref, igual à indicada para a preparação de (l)(b).

Uma solução purgada com argon de dibrometo (20,8o g, 75,h mmol) e NaOAc anidro (21,0 g) em EtOAc (370 ml) e HOAc glacial (37 ml) foi tratada com Pd/c a 5^ (l,30 s) e a suspensão negra agitada sob H (1 atm) enquanto era vigiada a admissão de H2· Passadas 2,0 horas, a admissão de I-I estava completa, a mistura foi filtrada através de Celite, o filtrado lavado com NaíIOO^ saturado e salina, depois seco sobre MgSO^ anidro e evaporado para dar o dibromoester em bruto na forma dum óleo castanho, 0 óleo em bruto foi combinado com o de outro série (partindo de 36,77 g do dibrometo) e destilado no vácuo para dar 25,77 g (61,3f°) do bromoester do título, desejado, na forma dum óleo limpido com p,e, = 79e-802C (1,0 mm IIg).TLC (lsl) EtOAc—Ilex, Rf = 0,44, PMA.

Anal, calcul, para C^II^O^Br : C, 30,48; II, 4,60;

Br, 40,56

Encontr,: C, 29,76; II, 4,50; Br, 39,86 (2) ácido (s)-4-bromo-3-//(l,l-dimetiletil)-difenilsilxl/oxi/butanoico, ester metilico

Uma solução de bromohidrina (4,0 g, 20,4 mmole) da parte E(l), imidazol (6,94 g, 5,0 eq,) e 4-dimetil- !![’""...... !![’""......

52 - amino piridina (4-DMAP) (12 mg, 0,005 eq,)' em DMP anidro (4o ml) é tratada com cloreto de t-butildifenil-sililo (5*84 ml, 1*1 eq.) e a mistura homogéneo agitada durante a noite sob argon êt temperatura ambiente. A mistura foi distribuída entre KHSO/+ a 5$ © EtOAc, a fase organica lavada com H^O e salina, seca sobre Na^SO^ anidro e evaporada para dar 9*32 g (lOO^,) de eter sililico em bruto, na forma dum óleo viscoso, limpido. TLC (3:l) Hex-EtOAc, Rf eter sililico = 0,75 U.V, e PMA. (3) ácido (S)-^-iodo-3“//(l*1-dimetiletil)-difenilsilil/oxi/butanoico, ester metilico

Uma solução do brometo (9*32 g* 201 mmole) em bruto da Parte E (2) em metil etil cetona (60 ml, seca sobre crivos 4â ) foi tratada com iodeto de sódio (15,06 g, 100,5 mmole, 5*0 eq.) e a suspensão amarela posta em refluxo durante 5*0 horas sob argon. A mistura foi arrefecida, diluída com EtOAc, filtrada e o filtrado lavado com NaHSO^ diluído (até ficar incolor) e salina, posteriormente seco sobre Na^SO^ anidro e evaporado no vácuo para serem obtidos 10,17 g dum óleo amarelo. 0 óleo em bruto foi purificado por cromatografia com flash em silica gel (600 g) eluindo com (3*1) hexano-CH^Cl^. As frac-ções do produto foram combinadas e evaporadas para dar 7*691 g (7^*2$, rendimento geral para ambas as fases) do iodeto em epígrafe, desejado, na forma dum óleo viscoso, incolor, limpido. TLC (3íl) Hex-EtOAc, produto. Rf s 0,75» U.V. e PMA. (Notas pontos em conjunto de iodeto de produto com brometo de ponto de partida). - 53 - (4) ácido (s)-4-(dietoxifosfinil)-3-//(l,l-dimetiletil)difenilsilil/oxi/butanoico, ester metilico_

Uma solução do iodeto (7,691 g) em fosfito de trietilo (20 ml) foi aquecida a 1551 2 3 4 5C (banho de óleo) durante 3,5 horas sob argon, A mistura foi arrefecida e o fèsfito em excesso foi destilado no vácuo (0,5 mm Hg1, 755c) para ficar um óleo amarelo («8,0 g), 0 óleo em bruto foi purificado por cromatografia com flash em silica gel (400 g) eluindo com (4:1) de hexano--acetona, As fracções do produto foram evaporadas para darem 3,222 g (4l,l®f) do fosfonato em epigrafe, sejado, na forma dum óleo viscoso, incolor, limpido, TLC (l: 1) hex-acetona, Rf = 0,51, U.V. e PMA,

Foi recuperado adicionalmente 2,519 g (6l,lfo rendimento corrigido) do iodeto da Parte (3) de partida, 1 ácido (s)-3-//(l,l-dimetiletil)difenil- 2 silil/oxi/-4-fosfonobutanoico, 3 ester mfetilico_ 4

Uma solução do fosfonato da Parte (4) (9,85 g, 20,0 mmole) em CH^Cl,, anidro (6θ ml) foi tratada em sequencia com bistrimetilsililtrifluoroacetamida 5 (BSTFA) (5»31 ml, 32,0 mmole, 1,6 eq,) e brometo de trimetilsililo (TMSBr) (6,60 ml, 50,0 mmole, 2,5 eq,) e a mistura límpida agitada durante a noite sob argon à temperatura ambiente. Foi adicionado KHSO^ (80 ml) a 5/> e a mistura foi extraída com EtOAc, A fase aquosa foi saturada com NaCl e re--extraída com EtOAc, As fases organicas combinadas foram lavadas com salina, secas sobre Na^SO^ anidro e evaporadas no vácuo para se obter ácido fosfónico em epigrafe, em bruto, na forma dum óleo viscoso. - 54 - TLC (7:2:1) iPrOII-NH^OH-ÍIgO, Rf * 0,30, U.V. e PMA . (6) ácido (s)-3-//(l,l-dimetiletil)difenil-silil/oxi/-4-(hidroximetoxifosfinil)- butanoico. ester metilico_ ácido fosfónico em bruto (~20,0 mmole) da parte (5) em piridina anidra (25 ml) foi tratado com CI-I^OH seco (sobre crivos 3A, 1,62 ml, 40,0 mmole, 2,0 eq. ) e diciclohexil carbodiimida (DCC) (4,54 gm, 22,0 mmole, 1,10 eq.) e a suspensão branca resultante agitada sob argon à temperatura ambiente durante a noite. A piridina foi eliminada no vácuo, depois azeotropada com benzeno (2 x 15 ml). O óleo residual foi dissolvido em EtOAc, filtrado e lavado com HC1 1,0 N e salina, seco sobre Na^SO^ anidro e evaporado no vácuo para dar 8,272 g do ester em epígrafe, em bruto, na forma dum oleo contendo uma pequena quantidade de diciclohexil ureia precipitada (DCU). TLC (7:2:1) iPr0H-MI^-0IT II20, Rf = 0,60, U.V. e PMA. F, ácido (s)-^-///ít,-fluoro-3,3l ,5-trimetil-/1,1'-bifenil/-2-il/metoxifosfinil/-3-t--butildifenilsililoxibutanoico, ester metilico

Mono metil ester do ácido fosfónico em bruto da Parte E (6,595 gm, ~l4,7 mmole) foi dissolvido em CHgClg anidro (30 ml), tratado com trimetilsilil-dietilamina destilada (5*60 ml, 29,4 mmole, 2,0 eq,) e agitado sob argon à temperatura ambiente durante 1 hora, A mistura foi evaporada no vácuo, recolhida com benzeno (l x 30 ml) e sêca no vácuo. - 55 - \;\ Ο óleo viscoso, amarelo, claro foi dissolvido em CilgClg anidro (30 ml) e DMF (seco sobre crivos 4A) (2 gotas), a solução limpida arrefecida para -ÍO^C (banho de sal/gelo) e tratada gota a gota por meio duma seringa com cloreto de oxalilo destilado (l,4l ml, 16,2 mmole, 1,1 eq.), A evolução de gás vigorosa era evidente e a solução tornou-se amarelho mais escuro na sua cor. A mistura foi agitada sob argon a -10?C durante 15 minutos, depois deixada em agitação à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi evaporada no vácuo, recolhida com benzeno (l x 30 rol) e seca no vácuo para dar fosfonoclori-drato em bruto na forma dum óleo amarelo. A uma solução do fosfonocloridrato em bruto (~l4,7 mmole) em CH^Cl^ anidro (10 ml) foi adicionada gota a gota uma solução do álcool bifenilico da Parte D (2,06 g, 8,43 mmole) em piridina anidra (15 ml) e a mistura resultante agitada à temperatura ambiente sob argon durante 16 horas. A mistura foi evaporada até à secura e o residuo distribuído entre KHSO^ a yfo e EtOAc. A fase organica lavada com NaHCO^ saturado e salina, depois seca sobre Na^SO^ anidro e evaporada no vácuo para dar 8,290 g du* óleo castanho. O produto em bruto foi purificado por cromatografia com flash em silica gel (370 g) eluindo com (70:30) hexano-acetona. As fracções do produto foram combinadas e evaporadas para dar 3,681 g (66$) do fosfonato em epigrafe, desejado, na forma dum óleo amarelo claro, TLC (3:2) hexano-acetona, Rf = 0,59» U.V. e PKA. » 3Ó ** G, ácido (s)-4-///4*-fluoro-3f3’»5”trimetil-/1,1' -bifenil/-2—il/metoxifosfinil /-3-hidroxibutanoico, ester metilico Uma mistura do eter sililico (l,103 g, 1,66 mmole) da Parte P em THF seco (20,0 ml) foi tratada com ácido acético glacial (380 ul, 6,64 mmole, 4,0 eq.) e uma solução de fluoreto de tetrabutilamónio 1,0 M (4,98 ml, 4,98 mmole, 3»0 eq,) e a solução amarela limpida agitada durante a noite à temppra-tura ambiente sob argon. A misturafoi distribuída entre H^O fria e EtOAc, a fase organica lavada com NaHCO^ saturado e salina, seca sobre Na^SO^ anidro e evaporada até ficar um óleo amarelo, viscoso (1,174 g), 0 óleo em bruto foi purificado por croma-tografia com flash em silica gel (47 g) eluindo com (85:15) CH^Cl^-acetona, As fracçÕes do produto foram evaporadas para dar 679 mg (93,li) do álcool em epígrafe, desejado, na forma um óleo viscoso, limpido, TLC (1:1) hexano-acetona, Rf = 0,4i, U.V. e ΡΜΛ. H. ácido (s)-4-///4,-fluoro-3,3',5-trimetil-/1,1'-bigenil/-2-il/metoxi/metoxi-fosfinil/-3-hidroxi-butanoico, sal de monolitio

Uma solução do ester metilico da Parte G (184 mg, 0,420 mmole) em dioxano (5»0 ml) foi tratada com LiOII 1,0 N (0,50 ml, 1,2 eq, ) e a mistura agitada a temperatura ambiente sob argon durante 2 horas, A mistura foi diluída com II^O, filtrada através duma membrana de policarbonato 0,4 um e evaporada no vácuo, 0 residuo dissolvido em H^O (75 ml)» congelado e liofilisado. 0 ácido em bruto foi <ffid- -57-

solvido numa quantidade minima de 0 e cromatografado numa camada de 100 ml de resina CHP-20 eluindo com um sistema gradiente linear HgO/CH^CX# As fracções de produto foram evaporadas, dissolvidas em H^O (50 ml)f filtradas através duma membrana de policarbonato de 0,^ um e liofilizadas para se obterem 17^ mg (89,1^ na base de peso do hidrato) do sal de mono-litio do titulo, pretendido, na forma dum sólidro braneo,TLC(7:2:l) iPr0H-NH40H-H20, M * 0.58 , O.V. e PMA. í 10

Anal Calcd for C21H2506PFLi +1.95 moles H20 (MW 465.46): C, 54.19? H, 6.26; F, 4.08; P. 6.65 Encont. C, 54.19; H, 6.21; F, 4.29; P, 6.43 15 H . NMR (400 HMz): a 1.74-2.08 ppm (2H, m, -PO(OCH3)ÇH2-) 2.30 (3Hr S, metilo aromático 2.32 (3H, d, metilo aromático ^ -flUor * 1 J^ ) 20 2.35-2.62 (2H, m, -CT2C02Li) 2.46 (3H, S, metilo aromáticc)) 3.57 & 3.63 (3H, 2 doublets, -OP(OCH3>-, 2 diastereomeres,JH-p= 10.3 25 Hz) 4.28 (1H, m, -OT2ÇH(0H)CH2C02LÍ) 4.97 0 II (2H, m, PhOE[2OP(OCH3)R) 6.87-7.25 (5H, m, H's aromáticos 30 -58- {-1—/

Exemplo 2 ácido (s)-4-///4'-fluoro-3,3'»5“trimetil/l,lf-bifenil/-2-il/metoxi/hidroxifosfinil/-3~ hidroxibutanoico. sal de dilitio

Uma solução do diester do Exemplo 1 (374 mg, 0,853 mmole) em dioxano (8,0 ml) foi tratada com LiOII 1,0 (2,6 ml, 3,0 eq, ) e aquecida a 50°C (banho de oleo) durante 5,0 horas sob argon. Era evidente a formação dum precipitado branco. A mistura foi diluída com HgO e filtrada. A solução aquosa foi extraída uma vez com Et^O, filtrada através duma membrana de policarbonato de 0,4 um e concentrada no vácuo. 0 produto em bruto foi cro-matografado em resina CIIP-20 (camada de 100 ml) eluindo com um sistema gradiente linear IIo0/CIÍ_CN.

As fracções de produto foram evaporadas no vacuo, retomadas em 11^0(50 ml), filtradas através duma membrana de policarbonato de 0,4 um e liofilizadas para dar 2Ó0 mg (67,lyí na base do peso do hidrato) do sal de dilitio, em epígrafe, desejado, como um solido branco, Pr0H-NH^0H-H20, Rf=0.47, U.V. e l PMA. TLC (7:2:1).

Anal Calcd for ιη + 1.77 moles B^O: 4.18; P, 6.82 4.24; P, 6.43 C, 52.88, H, 5.67; F, Enc. r C, 52.88; H, 5.26; F, H1 NMR (400 MHz, δ 1.69 2.26-2.42 2.30 2.31 CD30D): 0

II ppm (2H, m, -0PÇH2CH(0H)-) (2H, m, CT2C02Lí) (3H, S metilo aromático (3H, d, metilo aromático^ ato' F, J^sl.9 HZ) 30 -59-

2.38 4.22 4.75 6.86-7.23 (3Η, s, inetilo aromático) (1H, m, -ÇH(OH)CH2-) 0 (2H, m, PhÇH2OP-)

I (5H, m, protões aromáticos)

Exemplo 3 ácido (3S )-4-///4’ -fluoro-3»3'»5-trinietil/l, 1' -bifenil/-2-il/metoxi/metilfosfinil/-3-iiidroxibutanoico, sal de monolitio________ A, ácido (s)-4-/(cloro)metilfosfinil/-3- //(l,1-dimetiletil)difenilsilil/oxi/-butanoico, ester metilico_ 0 composto fos^indcloridato em epígrafe e preparado conforme descrito no Exemplo 6, Parte B, nos três primeiros paragrafos. B. ácido (3S)-4-///4,-fluoro-3,3,,5-trimetil- /l,l'-bifenil/-2-il/metoxi/metilfosfinil/--3-t-butildifenilsililoxibutanoico, ester metilico_________

Uma solução arrefecida (o? C, banho de gelo) do fosfinocloridato da Parte A (-2,2 mmole) e o álcool bifenilico do Exemplo 1 Parte C(2) (429 mg, 2,2 mmole, 1,0 eq) em ClIgClg anidro (lO ml) foi tratada com Et^N (425 ul, 3»04 mmole, 1,4 eq) e 4-ΌΜΑΡ (27 mg, 0,22 mmole) e a solução cor de laranja agitada à temperatura ambiente durante a noite sob argon, A mistura foi repartida entre KHOS^ a 5- e EtOAc, a fase organica lavada com salina, seca sobre .Ya^SO^ anidro e evaporada para dar 1,1 g dum oleo laranja, O oleo em bruto foi purificado por cromatografia com flash em silica gel

- 6ο - (44 g) eluindo com (l:l) EtOAc:hexano, As fracções do produto foram combinadas e evaporadas para dar 298 mg (21$) do produto em epigrafe, acoplado, pretendido, na forma dum óleo amarelo claro. Também foram recuperados 460 mg (67% de rendimento corrigido) do álcool bifeni-lico de partida do Exemplo 1, Parte C(2). TLC (1:1) EtOAc :ííex, Rf = 0,18 UV e PMA. C. ácido (3S)-4-///41-fluoro-3,3»,5-trimetil-/1,1'-bifenil/-2-il/metoxi/metil-fosfinil/-3-hidroxibutanoico, ester metilico_

Uma solução do eter sililico (298 mg, 0,46 mmole) da Parte B, em TIIF seco (6,0 ml) foi tratada com HOAc glacial (110 ul, 1,84 mmole, 4,0 eq) e 1,0 M em solução THF de fluoreto de tetrabutilamónio (1,43 ml, 3»1 eq) e a solução resultante agitada durante a noite sob argon à temperatura ambiente. A mistura foi repartida entre HgO fria e EtOAc, a fase organica lavada com NaHCO^ saturado e salina, seca sobre Na^SO^ anidro e evaporada para dar um óleo amarelo (273 mg)· 0 óleo em bruto foi purificado por cromatografia de flash em LPS-1 silica gel (11 g) eluindo com (3:2) de Hex-acetona, As fracções do produto foram combinadas e evaporadas para dar 150 mg (80$) do álcool em epigrafe, desejado, na forma dum óleo viscoso. TLC (1:1) hex-acetona, Rf=0,23, UV e PMA. D. ácido (38)-4-///4^^^^-3,31,5-trimetil-/1,11-bifenil/-2-il/metoxi/metil-fosfinil/—3—hidroxibutanoico, sal de monolitio ______

Uma solução do ester metilico (150 mg, 0,367 mmole) da Parte C, em dioxano (3»0 ml) foi tratada com LiOII 1,0 N (0,44 ml, 1,2 eq.) e a suspensão branca resultante foi agitada à temperatura ambiente sob argon durante 2 horas. A mistura foi diluída com H^O, filtrada através duma membrana de policarbonato 0,4 um e evaporada no vácuo até ficar num vidro incolor, 0 produto em br-uto foi retomado numa quantidade mi-nima de H^O e cromatografado em HP-20 (camada de 100 ml) eluindo com um gradiente linear Ho0/CHoCX. As fracçõs do produto foram evaporadas, retomadas em H^O (50 ml), filtradas atra\rés duma membrana de policarbonato de 0,4 um e liofilisadas para dar 130 mg (791/ baseado no peso do hidrato) dosai de litio, em epigrafe, pretendido, na forma dum solido branco. TLC (8:1:1) CK^Cl^-CII^OII-IIOAc,

Rf = 0,52, IP/ e ΡΜΛ.

Anal Calcd ^faaBSiC21H2505FLiP + 1.73 moles H20 20 (MW 445.49): C, 56.61; H, 6.44; F. 4.26; P, 6.95 Encont. : c, 56.67; H, 6.36; F, 4.31; P, 7.43 H1 NMR (400 HHz): O H δ 1.49 ppm (3H, d, -0P(CH3)-, Jh_p=14.7 0 11 1.83-2.0 (2H, m, P-(CH3)ÇH2-) 2.27-2.40 (2H, m, ÇH2C02Lí) 2.30 (6H, s, 2 aromatic methyl's) 2.44 (3H, s, aromatic methyl) 4.26 (1H, ra, -CH2ÇH(0H)CH2C02 Li) 25 30 1' -62- Ο 4.87 (2Η, a, ArÇH2OP(CH3)-) 6.90-7.20 (5H/ H’s aromáticos)

Exemplo k ácido (S)-4-///2,4-dicloro-6-/(4-fluorofenil)metoxi/- fenil/metoxi/metoχifosfinil/-3~hidroxi- butanoido^ sal de monolitio A« 2,4-dicloro-6-(4-fluorofenilmetoxi)-benzaldeído (Ref.: J«Med. Chem. , 1986, 29, 167)

Uma solução de 13,77 g (72,5 mmol) de 4,6-dicloro-2-hidroxibenzaldeído em 100 ml de DMP foi agitada e foram adicionados 12,02 g (87 mmol) de K^CO^. Esta mistura foi aquecida a ~ 709C durante 60 minutos, depois foram adicionados 11,7 ml de brometo de 4-fluorobenzilo« A solução resultante foi agitada a 709C durante 3,5 horas, subsequentemente esta foi deitada eai i^ÒJgelada (1*5 l)» filtrada e lavada com H^O, sendo posteriorinen-te recristalizada de Eto0/eter de petróleo.

«V

Rendimento: 17*88 g (83¾) de cristais branco acinzentado, p.f. 107-1082C. B. 2,4-dicloro-6-/(4-fluorofenil)-metoxi/benzenometanol_

Et^O (10,0 ml) seco, frio (09C, banho de gelo) foi tratado com LiÀlII^ (158 mg, 4,16 mmole, 0,6 eq.) e a suspensão cinzenta tratada gota a gota com uma solução de aldeído (2,06 g, 6,93 mmole) da Parte A, em 10 ml de TIIF seco. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante uma hora sob argon. A mistura foi de novo arrefecida para 09c (banho de gelo) e extinta pela adição sucessiva, gota a gota, de Ho0 (l60 ul), UaOII 63- 63-

HX8b a 15?«· (l60 ul) e II20 (475 ul). Os sais que precipitaram foram eliminados por filtração através de ?CaoS0,. anidro sobre Celite como enchimento (camada de TV)· O filtrado limpido foi evaporado para dar 2,052 g (98,9?) do álcool em bruto na forma de cristais brancos. Uma trituração com hexano frio deu 1,892 g (91,2/-) do álcool do titulo, puro, na forma dum solido cristalino branco com p.f. = 72-73?C. TLC (4:1) hex-acetona, Rf=0,31f UV e PHA.

Anal Calcd para (MW 301.142): C, 55.84; H, 3.68; Cl, 23.55; F, 6.31 15 .Enc.s C, 55.97; H, 3.71; Cl, 23.42; F, 6.30 C» ácido (s)-4-///2,4-dicloro-6-/(4-fluoro-fenil)metoxi/fenil/metoxi/metoxi-fosfinil/-3-t-butildifenilsililoxi- butanoico, ester metilico___

Uma solução do ester metilico («.3,84 mmole) do Exemplo 1 Parte E(6) em ClI^Clg seco (lO ml) foi tratada com trimetilsilil dietilamina destilada (1,46 ml, 7,68 mmole, 2,0 eq.) e a solução resultante agitada à temperatura ambiente sob argon durante 1,0 hora. A mistura foi evaporada no vácuo, capturada com benzeno (l x 20 ml) e seca no vácuo para dar ácido fosfénico sili-lado, em bruto, ester mono metilico, na forma dum oleo incolor, TJma solução do ester em bruto (~3,84 mmole) em CHgClg seco (10 ml) e DMF anidro (l gota) foi arrefecida para -10eC (sal, banho de gelo) e tratada gota a - 64 - gota com cloreto de oxalilo destilado (368 ul, 4,22 mmole, 1,1 eq.). A evolução de gás era evidente a partir da mistura amarela limpida, A mistura foi agitada a temperatura ambiente sob argon durante uma hora, evaporada no vácuo, capturada com benzeno (2 x 20 ml) para dar fosfonocloridato em bruto, como um oleo amarelo viscoso, 0 fosfonocloridato em bruto («3,84 mmole) em CII2C12 seco (10 ml) a 0?C (banho de gelo) foi tratado com álcool da Parte 13 (1,15 g» 3,84 mmole, 1,0 eq,) seguido de Et^N (805 ul, 5,76 mmole, 1,5 eq.) e 4-DMAP (47 mg, 0,384 mmole, 0,1 eq.) e a mistura castanha agitada durante a noite à temperatura ambiente sob argon, A mistura foi repartida entre KHSO, a 5f' e EtOAc, a fase organica lavada com salina, seca sobre Na2S0^ anidro e evaporada para dar 3,197 g dum oleo castanho escuro, 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia com flash em silica gel (l6c g) eluindo com (7:3) de Hex-EtOAc, As fracçoes do produto foram combinadas e evaporadas para dar 594 mg (21, ¥'.) do fosfonato em epígrafe desejado na forma çJliAi áleo aipáreld.· AdiCionalmente, foram recuperadas 688 mg (52,47- de rendimento corrigido) do álcool de pprtida da Parte 3, TLC (líl) hex-acetona, Rf=0,29, UV e PI·IA. D ácido (s)-4-///2,£-dicloro-6-/(4-fluoro-f enil)metoxi/fenil/metoxi/metoxi-fosfinil/-3-hidroxi butanoico, ester metilico

Uma solução do ester sililido (578 mg, 0,788 mmole) da Parte C, em THE seco (8 ml) foi tratada com IIOAc glacial (l80 ul, 3*2 mmole, 4,0 eq.) seguido de uma solução 1,0 M de n-Bu^NF em TTTF (2,36 ml, 2,36 mmole, - 65 - 3.0 eq.) e a solução amarela clara, resultante, agitada durante a noite sob argon a temperatura ambiente, A mistura foi agitada e deitada era ITo0 fria e extraída com EtOAc (2X)« A fase organica foi lavada com FalTOC^ saturado e salina, seca sobre ’\aoS0^ anidro e evaporada para dar 625 mg dum óleo amarelo. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia com flash em sili-ca gel (31 g) eluindo com (7:3) de hexano-acetona. As fracções do produto foram combinadas e evaporadas para dar 339 mg (86,97^) do álcool em epigrafe, pretendido, na forma dum óleo viscoso, incolor, limpido, TLC (1:1) hex-acetona, Rf = 0,25, UV e PMA. E. acido (s)-4-///2,4-dicloro-6-/(4-fluoro-fenil)metoxi/fenil/metoxi/metoxi/-fosfinil/-3-hidroxibutanoico, sal monolítico

Uma solução do fosfonato (132 mg, 0,267 mmole) da Parte D, em dioxano (2,5 ml) foi tratada com Li OIT 1.0 N (o,32ml, 1,2 eq,) e a mistura agitada sob argon à temperatura ambiente durante 4,0 horas. Foi notada a formação dum precipitado branco. A mistura foi diluída com ^20f filtrada e o filtrado evaporado ató à secura no vácuo, 0 residuo foi cromatografado em resina HP-20 (lOO ml de espessura de camada) eluindo com um sistema gradiente linear IlgO/CH^CN# As fracções do produto foram combinadas e evaporadas, retomadas em H20, filtradas através duma membrana de policarbonato 0,4 um e liofilizadas para dar 108 mg (797- baseado em peso do hidrato) do sal de litio, em empigrafe, pretendido, na forma dum sólido branco. "66“

TLC (20:1:1) CH2Cl2- CH3OH-HOAc, Rf * 0.41, UV e PMA.

Anal Calcd paraC^gH^gO-yC^Fli^P + 1*42 moles H20 5 (KW 511.72): C, 44.59; H, 4.10; Cl, 13.86; F, 3.71; P, 6.05

Bnc. · c, 44.22; H, 4.09; Cl, 13.91; F, 3.72; P, 6.11 10 H1 NMR (400 MHz): O δ 1.98-2.11 ppm (2H, m, OP(OCH3)ÇH2CH(OH)- 2.26-2.45 ppm (2H, m, -CH(0H)ÇH2C02Li) 3.63 & 3.62 (3H, 2 doublets, 2 diastereomersf 15 20 O oj?(OCH3)CH2“, Jgp-11 Hz) 4.23 (1H, m, (-CH2ÇH( OH) CH2C02Li) 5.16 (2H, 81 F-PhÇHjO) 5.24 (2H, d, ArÇH20P, Jgp=6.2 Hz) 7.13-7.53 (6H, m, 11' s aromáticos ) Exemplo 5 ácido (33)-4-///2,4-dicloro-6-/(4-fluorofenil)~ metoxi/fenil/metoxi/hidroxifosfinil/-3-hidroxibutanoico« sal dllitlco Uma mistura do diester do Exemplo 4, Parte D (210 mg, 0,4f4 mmole) em cíioxano (4,0 ml) foi tratada com LiOIí 1,0 P (l,30 ml, 3»0 eq.) e a solução incolor aquecida a 509O (banho de óleo) sob argon durante 3*5 horas. Era evidente um precipitado branco passados 15 minutos, A mistura foi diluída com Fo0, filtrada e o filtrado evaporado no vácuo, O residuo foi —9

— ο o cromato- dissolvi lo nut.ia quantidade mínima do o cromato- ;;afado c:a resina bi’-dO cariada de 10C nl) eiuindo cora um gradiente linear de io0/cr^C':. As fracções do produto foram combinadas e evaporadas. C resíduo foi retomado em ΙΓου (30 ml)» filtrado a+raves duma membrana de policarbonato do O,1!· um o llofilisudo para dar 173 :;id (81 na base do poso do hidrato) do sal de dilitio om epígrafe, desejado, na foirnia dum sólido branco. TLC (8:1:1) CH2Cl2-CH30H-H0Ac, Rf = 0.07, UV e PMA.

Anal Cacldpara CjgH^gOyCl2FLi2P + 1.70 moles H20 (MW 509.62): C, 42.42? H, 3.84; F, 3.73;

Cl, 13.91; P, 6.08 dnc. : C, 42.46; H, 3.90; F, 3.93; Cl, 13.42; P, 5.66 H^NMR (400 mz): 0 1.92 ppm (2H, m, -OP(OLÍ)-CH2CH(OH)- 2.27 (1H, dd, , -CH(0H)ÇH2C02Li, ^=8.8 HZ) 2.39 (1H, dd, , -CH(0H)ÇH2CO2LÍ, Jhh^4·4 Hz) 4.26 (1H, m, CH2ÇH(0H)CH2C02LÍ) 5.08 (2H, s, F-Ph-CH20Ar) 7.03-7.53 (6H, m, aromatic H’s). - 68 -

Exemplo 6 ácido (3S)-h-//2,4-dicloro-6-/(4-fluorofenil)metoxi/-fenil/metoxi/metilfosfinil/-3-hidroxibutanoico, ester metilico A# ácido (s)3-//(l»l“dimetiletil)difenilsi-lil /-oxi/-4-(etoximetilfosfinil)butanoico, ester metilico

Uma mistura do iodeto (4,68 g, 9*18 mmole) do Exemplo 1 Parte e(3) cm metil dietoxifosfina (strem Chemicals, 5,0g, 36,J mmole) foi aquecida a ÍOO^C (banho de óleo) durante 2,5 horas, a seguir a 1505c durante mais tres horas adicionais, sob argon, Por-mou-se ihentamente uin precipitado branco na solução amarela, A fosfina em excesso foi destilada no vácuo (0,5 mm Hg) e o produto em bruto purificado por cro-matografia com flash em silica gel eluindo com (65:30) de haxano-acetona, As fracções do produto foram combinadas e evaporadas para dar 1,590 g (38*6) do ester fosfi-nico, em epígrafe, pretendido (mistura de diastereome-ros) na forma dum óleo viscoso, lippido, TLC (3:2) hex-acetona, Ilf (2 diastereometos) = 0,19 e 0,22, UU e PmA· B, ácido (3^)-4-//2,4-dicloro-6-/(4-fluoro-fenil)metoxi/fenil/metoxi/metil-fosfinil/-3-t-butildifenilsilil~ butanoico, ester metilico

Uma solução do ester fosfinico (605 mg, 1,3 mmole) da Parte A, em CI^Cl^ seco (6,0 ml) foi tratada com bis(trimetilsilil)trifluoroacetamida (ESTUA) (.280 ul, 1,05 mmole, 0,8 eq,) e brometo de trimetilsililo ;TET>Pr( (2IO ul, 1,57 mmole, 1,2 eq.) e a solução resultante agitada à temperatura ambiente sob argon durante a noite. - 69 - 14

Foi adicionado KIISO^ a 5$ (15 ml) e a mistura extraída com EtOAc, A fase organica foi lavada com salina, seca sobre Na2SO^ anidro e evaporada no vácuo para dar ácido fosfi-nico, em bruto, na forma dum áleo incolor.

Uma solução do ácido fosfinico em bruto (~1,3 mmole) em CH^Clg seco (6,0 ml) foi tratada com trimetilsilil dietilamina destilada (270 ul, 1,4¾ mmole, 1,1 eq.) e a mistura limpida foi agitada a temperatura ambiente sob argon durante 1,0 hora. A mistura foi evaporada no vácuo, capturada com benzeno (l x 15 ml) e seca no vácuo.

Uma solução arrefecida (osc, banho de gelo) do ácio fosfinico sililado, em bruto (~ 1,3 mmole) em ΟΙΤ,,ΟΙ^ seco (6,0 ml) e DMF (l gota) foi tratada gota a gota por meio duma seringa com cloreto de oxalilo destilado (130 ul, 1,44 mmole, 1,1 eq.). Era evidente a evolução gasosa. A mistura foi agitada à temperatura ambiente sob argon durante uma hora, a seguir evaporada no vácuo, capturada com benzeno (2 x 15 ml) e seca no vácuo para dar fosfinocloridato, em bruto, na forma dum oleo amarelo.

Uma solução arrefecida (05, banho de gêlo) de fosfinocloridato (~ 1,3 mmole) e álcool (392 mg, 1,3 mmole) do Exemplo 1, Parte E (6), em CII^C^ dêco (6,0 ml) foi tratada com EtgN (275 ul, 1,97 mmole, 1,5 eq. ) e 4-DMAP (l6 mg, 0,13 mmole, 0,1 eq,) e a mistura amarela resultante agitada sob argon à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi repartida entre KHSO^ a 5/^ e EtOAc, a fase organica lavada com salina, seca sobre Na2S0^ anidro e evaporada para dar 908 mg dum produto em bruto na forma dum oleo amarelo escuro. - 70 -

0 produto em bruto foi purificado por cromatogaafia com flash em silica gel (^5 g) eluindo com (3:2) de Ilex--EtOAc. As fracções do produto foram combinadas e evaporadas para dar 266 mg (28,3?*) do produto em epigrafe, pretendido, na forma duin óleo incolor, limpido. Também foram recuperados 197 mg (57^» rendimento corrigido) do álcool de partida. C. ácido (3S)-^-//2,4-dicloro-6-/(^-fluoro-fenil)metoxi/feni1/metoxi/metilfosfi-nil/-3-hidroxibutanoico, ester metilico

Uma solução do ester sililico (275 mg, 0,38 mmo-le) da Parte B em TIIF seco (6,0 ml) foi tratada com HOAc galcial (90 ul, 1,53 mmole, k,0 eq.) e uma solução 1.0 M em THF de fluoreto de tetrabutilamónio (1,2 ml, 3.1 eq.). A solução resultante foi agitada durante a noite sob argon à temperatura ambiente. A mistura foi repartida entre Ho0 fria e EtOAc, a fase organica lavada com XaHCO^ saturado e salina, seca sobre XanS0^ anidro e evaporada para dar 258 mg dum óleo anarelo. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia com flash em LPS-1 silica gel (8 g) eluindo com (lsl) de hexano-acetona. As fracções do produto foram combinadas e evaporadas para dar 1^2 mg (77?*') do álcool em epigrafe, pretendido, na forma dum óleo incolor, limpido. TLC (1:1) hexano-acetona, Rf = 0,20, UV e PMA. -71- -71-

Λ HX8b D. ácido (33)-4-//2, 4-dicloro-6-/(4-fluoro- fenil)metoxi /fenil/metoxi/metil-fo s fini1/-3-hidro xibutanoi co, sal de monolitio TJma solução do ester metilico (l42 mg, 0,296 mmole) da Parte C em dioxano (3,0 ml) foi tratada com LiOH I,1 N (0,36 ml, 1,2 eq.) e a suspensão branca resultante agitada sob argon à temperatura ambiente durante 2,0 horas, Λ mistura foi diluída com Ko0, filtrada através duma membrana de policarbonato de 0,4 um e o filtrado evaporado no vácuo. 0 produto em bruto foi dissolvido numa quantidade minima de IIo0 cromatografado numa camada de 100 ml de resina HP-20 eluindo com um gradiente linear de I^O/CH^CX, As fracções do produto foram combinadas e evaporadas, 0 resíduo foi retomado em H^O, filtrado através duma membrana e liofi-lizado para dar 93 mg (632' baseado no peso do hidrato) do sal de litio, em epigrafe, desejado, na forma dum sólido branco, TLC (8:1:1) CH2C12- CHjOH-HOAc, Rf = 0.51, UV e PMA. 25 Anal Calcd paraC19H190?Cl2FLiP +1.38 moles H20 (MW 495.94): C, 46.01; H, 4.42; F, 3.83; Cl, 14.30; P, 6.24

Enc.: C, 46.10; H, 4.49; F, 3.82; Cl, 14.32; P, 6.43 NMR (400 MHz): 30 72- HX8b δ 1.53 ppa (3H, d, -OP(ÇH3)CH2-, JH_p 14.6 Hz) 0 1.87-2.10 (2H, m, -OP(OCH3)CH2-) 2.27 (1H, dd, -OT(0H)ÇH2C02Li, JH-H=8*4 02' JH-p=1·1 Π*) 2.38 (1H, dd, -CH(0H)ÇH2C02Li, Jjj_q~4.7 Hz, Jg_p—1.1 Hz) 4.29 (1H, a, -CH2CH(0H)CH2C02Li) 5.16+5.18 (4H, a, ArÇH20P and F-PhÇH20)-) 7.11-7.52 (6H, a, aroaatic) 5 10

Exemplo 7 ácido (S)-4-///4'-fluoro-3,3',5-trimeiil/l,l,-bifenil-2~il/metil/amino/metoxifosfinil/-3-hidroxibutanoico, sal de monolitio_ A. ácido 4,-fluoro-3»3,»5“trimetil/l,l’-bifenil/-2-carboxilico

Uma solução do aldeído (l,0 g, 4,13 mmole) do Exemplo 1 Parte c{2) em acetona (10,0 ml) a O^C (banho de óleo) foi tratada gota a gota com reagente de Jones 8,0 N (4,1 ml, excesso) e a suspensão verde-acastanhado resultante agitada durante a noite sob argon à temperatura ambiente. 0 oxidante em excesso foi destruído adicionando isopropanol (10,0 ml) e os sais de crómido que precipitaram foram eliminados por filtragem através duma almofada de 1/4" de Celite. 0 filtrado foi evaporado, retomado em EtOAc, lavado com IICl 1,0 X (2X), Nj-I^Cl saturado (2X) e salina, depois seco sobre NaoS0^ anidro e evaporado para dar 1,011 g dum sólido verde com p.f, 153-1545C. 73 - 0 ácido era bruto foi purificado por meio do sal de diciclohexilamina. A uma solução do ácido em bruto em EtOAc (5»0 ml) foi adicionada diciclohexil amina (DCHA) (823 ul, 1,0 eq.). A solução diluída com hexa-no e sal cristalino precipitado foi recolhida para se obterem 997 mg (557^ de aldeído, p.f, I8I-I83SC) do produto pretendido na forma dum sal DCIÍA cristalino, branco acinzentado. 0 ácido livre do titulo foi regenerado do sal DCHA repartindo o sal entre XHSO. a y?, e EtOAc, A fase organica foi lavada com salina, seca sobre Na^SCj anidro e evaporada no vácuo para dar 55^ mg (52^ de aldeído) do ácido do título desejado, TLC (9:1) CIIgClg-CII^OH, Rf=0,37, UV e PMA. B. h·-fluoro-3,3’,5-trimetil/l,1·-bifenil/-2-carboxamida

Uma suspensão do ácido (55¾ mg, 2,l4 mmole) da Parte A em CII^Cl^ anidro (6,0 ml) e DMF anidro (l gota) a 0?C (banho de gelo) foi tratada gota a gota por meio duma seringa com cloreto de oxalilo destilado (205 ul, 2,35 mmole, 1,1 eq.) e a solução amarela límpida agitada sob argon à temperatura ambiente durante uma hora, A mistura foi evaporada no vácuo, capturada com benzeno (2X) e seca no vácuo para dar cloreto ácido em bruto na forma dura óleo amarelo.

Uma mistura arrefedida (0?C, banho de gelo) de THF (3,0 ml) e NH^OII concentrado (2,0 ml, excesso) foi tratada gota a gota com uma solução TIIF (3»0 ml) do cloreto ácido em bruto e a solução cor de laranja, brilhante, agitada à temperatura ambiente sob argon durante 1,0 hora. A mistura foi repartida entre ΙΙ,,Ο e EtOAc, a fase organica lavada com XalICO^ saturado, H^O e salina, depois seca sobre NapSO^ anidro e evaporada para dar 528 mg (96,17) da amida em bruto como um sólido laranja, claro. Uma recristalização de EtOAc -hexano deu b35 mg (79»1%) da amida do título purifica da como agulhas amarelas claras com p,f, 197-19890, TLC (1:1) Et^O-acetona Rf=0,83, UV e PrlA, C. ^-fluoro-O^',5-trimetil/l,1 *- bifenil/-2-metanamina_

Uma solução arrefecida (O^C, banho de gelo) de THF sêco (5,0 ml) foi tratada com LiAlH^ sólido (125 mg, 3»3 mmole) e a suspensão cinzenta tratada gota a gota durante cinco minutos com uma solução da amida da Parte B (h2h mg, 1,65 mmole) em TIIF (5»0 ml), A suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente sob argon durante 2,5 horas, depois posta em refluxo durante 45 minutos, A mistura foi arrefecida para 0?C (banho de gelo) e extinta pela adição gota agota em sequencia de 125 ul de IT^O, 125 ul de XaOII a 157 e 375 ul de Ho0, Os sais de aluminio que precipitaram foram eliminados por filtragem através de Na^SO^ anidro sobre Celite como enchimento, 0 filtrado limpido foi evaporado no vácuo para dar a amina em bruto como um óleo limpido. TLC (7:3) Et^O-acetona, Rf=0,60, UV e ΡΜΛ. A amina foi purificada como sal HCl,

Uma solução da amina em bruto (~ 1,65 mmole) em EtOíí absoluto (8,0 ml) foi tratada com HCl concentrado (152 ul, 1,82 mmole) e a mistura agitada durante 15 minutos à temperatura ambiente sob argon, A mistura foi evaporada no vácuo até ficar um sólido cristalino branco. - 75 - V. 0 sólido foi triturado com Eto0 frio, recolhido por filtragem e seco no vácuo para dar 426 mg (92,4'/) da amina-IICl em epigrafe, como cristais brancos, finos, D, ácido (3)-4-////4^^^^-3,31 , 5-t.rimetil-/1,1’ -bigenil /-2-il/metil/amino/-metoxifosfinil/-3-t-butildifenil-sililoxi butanoico, ester metilico Uma solução do ester metilico (~ 2,0 mmole) do Exemplo 1 Parte E(6) em 0IIoClo seco (5,0 ml) foi tratada com trimetilsilil dietilamina destilada (753 ul, 4,0 mmole, 2,0 eq.) e a mistura límpida agitada à temperatura ambiente sob argon durante uma hora. A mistura foi evaporada no vácuo, capturada com benzeno (l x 15 ml) e seca no vácuo. TJma solução arrefecida (0?C) do fosfonato de s.ililo em bruto em ΟΙΙ,,ΟΙ seco (7,0 ml) e ri'!F (l gota) foi tratada gota a gota com cloreto de oxalilo destilado (192 ul, 2,2 mmole, 1,1 eq.). Era evidente a evolução gasosa a partir da mistura amarela limpida. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora, evaporada no vácuo, capturada com benzeno (2 x 15 ml) e seca no vácuo para dar o fosfonocloridato em bruto como um óèeo viscoso, amarelo.

Uma solução arrefecida (0?c) do fosfonocloridato e bifenil amina*IICl, da Parte C (4l6 mg, 1,49 mmole) em CH^Cl^ seco (10 ml) foi tratada com Et^N (64l ul, 4,6 mmole, 2,3 eq,) e 4-ΌΜΑΡ (24 mg, 0,2 mmole, 0,1 eq.) e a mistura amarela limoida agitada durante a noite à temperatura ambiente sob argon. Λ mistura foi repartida entre ItHS0/+ a %' e EtOAc, a fase orga- - 76 - niva lavada com salina, seca sobi’e NaoS0^ anidro e evaporada no vácuo para dar 1,19 g dum óleo amarelo. O produto em bruto foi purificado por croma-tografia com flash em silica gel (6θ g) eluindo com (7:3) de hexano-acetona. As fracções do produto foram evaporadas para dar 588 mg (59,5f') da fosfonamida em epígrafe, desejada, como um óleo viscoso, amarelo, claro, TLC (7:3) hexano-acetona, Rf = 0,20, UV e ΡΙΜΑ. E. ácido (s)-b-////h'-flvioro-3,31,5-tTime-til/1,1'-bifenil)-2-il/metil /amino/— metoxifosfinil/-3-hidroxibutanoico, ester metilico UMa solução do eter sililico (588 mg, 0,888 mmo-le) da Parte D em TIIF seco (10,0 ml) foi tratada com IíOAc glacial (203 nl, 3,55 mmole, 4,0 eq, ) e uma solução 1,0 li em THE de fluoreto de tetrabutilamónio (2,66 ml, 2,66 mmole, 3,0 eq.) e a solução resultante agitada durante a noite sob argon à temperatura ambiente, A mistura foi deitada em Iioo fria e extraída com EtOAc. A fase organica foi lavada com NaHCO^ saturado e salina, seguidamente seca sobre XaoS0; ani-dro e evaporada no vácuo para dar 605 mg dum óleo laranja. 0 produto em bruto foi purificado por cro-matografia com flash em silica gel (36 g) eluindo com (1:1) de hexano-acetona. As fracções do produto foram combinadas e evaporadas para dar 196 mg (50,k'f.) do álcool em epigrafe, desejado, como óleo laranja, claro. TLC (1:1) hexano -a c e t o na, Rf=0,16 , TJV e PKA. 77 .?« ácido (s)-?f-////-í,-fluoro-3,3,,5-triinetil-/1,1'-bifenil/-2-il/metil/amino/metoxi-fosfinil/-3-hidroxibutanoico, sal monolítico

Uma solução do diester (105 mg, 0,2'íO mmole) da Parte E em dioxano (2,0 ml) foi tratada com LiOF 1,0 >7 (288 ul, 1,2 eq.) e a suspensão branca agitada sob argon à temperatura ambiente durante htC horas. A mistura foi diluída com HO, filtrada e o filtrado evaporado no vácuo, 0 residuo foi cromatografado em HP--20 (camada de 100 ml) resina eluindo cora um gradiente linear H^O/CH^C'., As fracções do produto foram combinadas e evaporadas. 0 residuo foi retomado em Iío0(50 ml), filtrado através duma membrana de policarbonato C,i; um e liofi-lizado para dar 70 mg (62,7',' baseado em peso do hidrato) do sal de litio, em opigrafo, desejado, na forma dum solido branco. TLC (20:1:1) CH2Cl2-CH3OH-HOAc, Rf=0.19, UV e 20 PMA.

Anal Calcdpara gNOgPFLi + 2.41 moles H2O (MW 472.75): C, .53.35; H, 6.57; N, 2.96; F, 4.02; P, 6.55

Qic. : c, 53.35; H, 6.52; N, 2.98; F, 4.05; P, 6.59 -78 HX8b H1 NMR (400 MHz):

O δ 1.79-1.97 ppm (2H, m, -í >(och3)çh2-) 2.26-2.44 ppm (2H, m, -CH2C02Li 5 2.29 (3H, gf metilo aromático) 2.31 (3H, motilo aromático * w a fluor, Jgp=l.4 HZ) 2.47 (3H, metilo aromático) 3.46 & 10 3.50 (3H, 2 doublets, 2 diastereomers, Jgp=10.5 Hz) 0 m, -PhCH2NHP(OCH3)- 3.96 (2H, 4.17 (1H, m, (-ch2çh(oh)ch2co2lí) 15 6.84-7.21 (5H, m, protões aromáticos) Exemplo s 8 a 20 Seguindo os processos descritos até agora e conforme delinados nos Exemplos anteriores, podem ser preparados os seguintes compostos adicionais:

0 H M t *

R-P-CH2-C-CH2-C02-R

X OH <^2 >n 25 -79- ΗΧ8 b

13 C Η Ο 4 9

ch2-o 1 Ο

Li HX8b

-81- I HX8b

> - 82 -

Exemplo 21 ácido (s)-4-diisopropiloxifosfinil)-3- //(l,1-dimotil-etil)difenilsilil/ oxi/-butanoico, ester metilico O iodeto (^5,1 mmol», 21,7t g) do Exemplo 1, Parte H(3) foi agitado em alto vácuo durante 30 minutos. Foi adicionado fosfito do triisopropilo de destilação recente (0,'t51 mol., 93#92 g, 113,3? ml) duma só vez e a mistura de reacção foi agitada sob argon e aquecida num banho de óleo a 15550 durante 16,5 horas. Λ mistura foi então arrefecida à temperatura ambiente, 0 fosfito de triisopropilo em excesso e os produtos voláteis da reacção foram eliminados por destilação de percurso curto (10 mm Hg) seguida de destilação de Ilugelrohr (0,5Q mm Hg, 1005C, S horas). 0 produto continuou a ser purificado por croma-togafia com flash (95 mm diam. de coluna, 6”/silica gel Herde, 6/3/1 eluente hoxano/acetona/tolueno, velocidade de fluxo 2"/min., fracções de 5C ml) para se obter 17,63 g (33»9^ mmol, 75*6 de rendimento) do isopropilfosfonato em epigrafe, como óleo viscoso, limpido. rLC: silica gol 'IfwC,32 (6 - 3;3 hexano/acetona/tolueno) XHNMR: (270 MHZ, CDCl3) 25 δ 7.70-7.65 (m,4H) 7.45-7.35 (m,6H) 4.57-4.44 (m,3H) 3.59 (s,3H) 2.94 and 2.88 (2xd, 1H J=3.7 Hz) 30 2.65 and 2.60 (2xd, 1H J=7.4 Hz) 2.24-1.87 (Series df m, 2H) 1.19 and 1.12 (2xd, 12H J=6.3 Hz) 1.01 (s, 9H) - 83 -

Exemplo 22 ácido (3)-4-(hidroximetoxifosfinil)-3- //(1,1-dime-tiletil)difenilsilil/oxi/butanoico, ester metilico, diciclohexilamina fl;l) sal 0 fosfonato de isopropilo (30,5 mmol, 10,66 g) do Exemplo 21 foi agitado sob argon, à temperatura ambiente em 80 ml de Cll^Cl ^ seco. Esta solução foi tratada gota a gota (5 min,) com bistrimetilsililtri-fluoroacetamida (EDITA) (32,8 mmol, 8,44 g, 8,71 ml), seguido da adição gota a gota (10 min.) de trimetil-sililbrometo (TMSBr) (51,3 mmol, 7,34 g, 6,75 ml).

Após agitação à temperatura ambiente durante 30 horas, a mistura de reacção foi extinta com 200 ml de KIISO^ aquoso a 5Í e agitada vigorosamente durante 15 minutos, A fase aquosa foi extraída 3 vezes com aceteto de etilo. Os extractos orgânicos foram combinados, lavados uma vez com salina, secos sobre EaoS0_, e concentrados no vácuo, 0 residuo foi azeotropado 2 vezes com 50 ml de toluono, 0 precipitado que se formou foi suspenso em tolueno e filtrado, 0 filtrado foi concentrado e o processo azeotropo/filtro foi repetido, 0 filtrado resultante foi evaporado no vácuo e depois bombeado sob alto vácuo durante 5 horas, 0 óleo limpido, viscoso, resultante foi agitado sob argon, à temperatura ambiente, em 50 ml de piridina seca. Esta solução foi tratada duma só vez com dici-clohexilcarbodiimida (DCC) (22,6 mmol, 4,65 g) seguida da adição de metanol (41,0 mmol, 1,31 g» 1,6? ml). Depois de agitação à temperatura ambiente durante 20 horas, a mistura de reacção foi filtrada através duma almofada de celite num funil de vidro sinte-rizado, - 8'l· A celite foi lavada com acetato de etilo e os filtrados combinados foram evaporados no vácuo. 0 residuo foi redissolvido em acetato de etilo e lavados 2 vezes com KíISO^ aquoso a 5/. e uma vez com salina, 0 extracto orgânico foi seco sobre Ka^SOlf, filtrado e o filtrado concentrado e azeotropado 2 vezes com to-1 lueno, suspenso em tolueno e filtrado. C filtrado resultante foi outra vez concentrado, azeotropado, filtrado e o filtrado evaporado no vácuo e colocado sob alto vácuo durante 6 horas para dar o monoester de fosfonato como um oleo viscoso, limpido (10,2 g, 100% de rendimento), TLC: silica gel ff=0,50 (7:2:1 nPr0Il/NII^0H/lIo0 ), O monoester de fosfonato /1,21 g foi bombeado no alto vácuo durante b horas, dando l,l£> g (2,57 mmol)/ foi dissolvido em lt ml de eter etilico seco e tratado gota a gota com dxciclohexil-amina (2,65 mmol, 0,^81 g, 0,528 ml), A solução homogénea resultante sedimentou à temperatura ambienre duranée~7 horas resultando em formação insignificante de cristais, Λ mistura foi guardada a -20?C ditrante 16 horas e depois aquecida para temperatura ambiente e filtrada. Os cristais foram lavados com eter etilico seco, frio e depois bombeados sob alto vácuo sobre P 0_ durante 18 horas. Os cristais foram sub- 2 5 sequentemente bombeados sob alto vácuo a b^-C durante b horas, dando 1,25 £T (l»98 mmol, 77/ de rendimento) do sal de diciclohexilamina em epígrafe, na forma dum solido branco em pá, p,f, 155-156-0, TLC: silica gel ?.f=0,57 (20/ MeOJl/CJ! Clp) *TT rhf: (270 MK2, CDC13)

Claims (3)

1. -85 HX8b 6 7.71-7.65 (m, 4H) 7.40-7.32 (m, 6H) 4.02 (m, 1H) 3.52 (s, 3H) 5 3.28 and 3.22 (m, 1H) 3.11 (d, 3H J=ll Hz) 2.77-2.64 (m, 2H) 2.62-2.56 (m, 1H) 1.92-1.08 ( séries de rn, 22H) 10 1.00 (S, 9H) (FAB) 632 (M&H)+ IRí(KBr) 3466-3457 «(largo) 3046, 3016, 2997, 2937, 2858, 2836, 2798, 2721, 2704, 2633, 2533, 2447, 1736, 1449, 1435, 1426, 15 1379, 1243, 1231, 1191, 1107, 1074, 1061, 1051, 820 CM-1 Anal Calcdpara C22H31 OgPSÍ*C12H23N: C,64.63; H,8.61; N,2.22 Ene.*. C, 64.51; H, 8.49; N, 2.18 20 86 1·: iTrxnrcArflKs 1* Processo para a preparação de compostos tendo a ostrutura 0 II R-P-CH~-CH-CEL,-C0-R- I 2 z: i í X OH «p2>n z incluindo os seus sais, na qual R c OH, alcoxi inferior ou alquilo inferior; \ é -O- ou -Mií-; n é 1 o-.i ,'2; Z <> Uffl;· grupo hLdrofiqjo; UX $ bidro.qán lo ou alquilo inferior, em forma de ácido livre ou na forma dum estor aceitavel e M-droiisavel flaiologicamente em forma de sal, caracte-rizado pelo facto de compreender submeter-se um eter sililico da formula 0 -87- c R^*—P-CH2-CH-CH2 -C02 alkyl X õ (CH2) Si-C(CH3)3 i n / \ Z C6H5 CeHs c ✓ na qual R e alquilo inferior ou alcoxi inferior, à clivagem do eter sililico para formar um ester da fórmula •O rc-p-ch2-ch-ch2-co2 rx x Bh J

   >n (RXje alquilo) e, caso se queira, converter-se o ester ao sal corres» pondente da fórmula 0 II R-P-CH2-CH-CH2-C02 alkali metal X OH (ÇH2)n Z na qual li ó alquilo inferior ou alcoxi inferior, num acido da fórmula -ΟΠ Ο II r-P-ci-] ~CH-CH-> ~CO-> H I Ξ. X OH <ÇH,)n z ao sal correspondente da fórmula 0 II me ta 1 al ca l l.noQ_p~CH2 -ÇH-CH2 -C02tne l;a 1 til c a l J. no X ÕH (CH2)n ou ao acido da fórmula O HO-P-CH2-ÇH-CH2-C02 H X ÕH (ÇH2)n 2
2. 2. Processo de acordo com o roLvlndiçado na Reivindicarão .1, oarac terizado pelo facto do 0 çifUpo i hldrofu/'Ό ser um ^rujio 1. i po f i 1. i.co que cp unido libado à cadeia latorai .súper í o r como-HMC da molécula pelo l imanto (λ) apro pri ado, so une a uma bolsa hidrofu-p;a da eu·/, ima não utilizada na i i fio substrato A » — 1 (‘ο;\ ιί· nl laudo 1:0 ,ιιιιιημιΙο de potência em relação ,405 compostos um q 1«·.· 2-H . < ί· -R9L-
3. 3. Processo de acordo com o reivindicado na Reivindicação 1, na qual Z é

   em que as linhas a tracejado representam ligações duplas facultativas, -9B- Μ. I em que Z é

   5 5 * inferior ou OIJ, estando ura dos doxs ou R ou R presente quando o carbono a qual está unido estiver ligado a uma ligação dupla; 0 ....... fi ,! R é alquilo-C-ou ariloCIT,,-; R c é alquilo infei’ior, hidroxi, oxo ou halogéneo, e q é O, 1, 2 ou 3· h. cação alcoxi na Reivindi-0-, R ser Processo de acordo com o reivindicado 3, caracterizado pelo facto de X ser , e Z ser I