PT86835B

PT86835B - Processo para a preparacao de novos derivados do acido glutamico e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT86835B
Application number: PT86835A
Authority: PT
Inventors: Constantin Agouridas; Chantal Damais; Patrick Fauveau
Original assignee: Roussel Uclaf
Priority date: 1987-02-26
Filing date: 1988-02-25
Publication date: 1992-05-29
Also published as: ATE64374T1; FR2611721B1; FR2611721A1; EP0284461B1; ES2029040T3; MX173854B; EP0284461A1; KR880009989A; CA1310443C; DE3863214D1; JPS63233961A; US5089476A; JPH0617350B2; MX10556A; PT86835A; GR3002416T3

Description

A presente invenção tem por objeç to um processo para a preparação, em todas as suas formas isoméricas ou nas formas de misturas de isómeros, de derivados do ácido glutãmico bem como os seus sais de adição com ácidos inorgânicos ou orgânicos ou com bases caracterizados por possuirem a fórmula geral (I);

C0-RI ³

Z-C-NH-CO-CH--CH_O-CH-COO-Rr- (¹)

I I

Y NH-R₁

PP-

na qual o ácido glutâmico tem a configuração D ou L, R^ representa um átomo de hidrogénio, um aminoácido ou um péptido constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos ou um aminoácido ou um péptido constituído por 2, 3 ou 4 amino ácidos em que a amina está esterificada com um ácido alifático saturado ou insaturado ^{ou re}P^resen^^a ° resíduo de um ácido alifático saturado ou insaturado Cg“^c24 t R5 representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo contendo um a cinco átomos de carbono, Rg represen ta um radical hidroxi, alcoxi, C₁~C₅ ou um aminoácido em que a amina pode ser substituída por um radical alquilo ^l-Cg, Z representa um grupo com a fórmula:

co-r₄

I

R₂-NH-C-UI

X na qual representa um átomo de hidrogénio, ou um amino ácido ou um péptido constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos, R₄ representa um radical hidroxi, alcoxi C^-Cg ou um aminoácido em que a amina pode ser substituída por um radical alquilo C^-Cg, U representa uma cadeia “CHg-C-CH- -, —CH=CH-CH₀—(Ξ OU Z) , -CH--CH=CH-(E ou Z) ou

II ^{2 2} ch₂ ou U representa em conjunto com X uma cadeia

CH-CH₂-CH₂~ (e ou Z) ou U representa em conjunto com Y uma cadeia -CHg-CHg-CH- (Ξ ou Z), X representa um átomo de hidrogénio ou com u uma cadeia =CH-CH₂-CH₂, (e ou z), e Y representa um átomo de hidrogénio ou com U uma cadeia -ch₂-ch₂-ch=, (Ε OU Z).

Na fórmula geral (I) e no que se segue, o aminoácido é de preferência um alfa-aminoácido e pode ser escolhido no grupo constituído por Ala, Vai, Ival, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gin, Ser, Thr, Cys, Met, Lys, Arg, Phe, Tyr, Trp, His e Pro, Nva, Nle, Hyp, Orn, estando estes ácidos na forma D ou L bem como Ser e Gly, podendo todos os ácidos mencionados serem N-esterifiçados ou N-alquilados no caso de um pêptido compreendendo 2, 3 ou 4 aminoácidos acima referidos.

Admitir-se-à por convenção que os símbolos dos ácidos alfa-amino carboxílicos representam estes ácidos na sua configuração D ou L (por exemplo, o termo Ala significa Alanina na forma D ou na forma L).

O ácido alifático saturado ou insaturado contem 6 a 24 átomos de carbono e de preferência 12 a 22 átomos de carbono; podem-se citar por exemplo os ácidos esteárico, palmítico, láurico, caprílico, mirístico, alfa ou gama-linolénico, linoleico, araquidónico ou docosopentaenóico.

termo radical alquilo C,-C_r de1 b signa, por exemplo, os radicais pentilo, isobutilo, buti lo, isopropilo e de preferência os radicais propilo, etilo ou metilo.

termo radical alcoxi C,-C._ de1 5 signa, por exemplo, os radicais pentoxi ou butoxi, mas de preferência propoxi, etoxi ou metoxi.

Os produtos de fórmula (I) contêm um ou vários átomos de carbono assimétricos e, como acima indicado, a invenção tem por objecto um processo pa ra preparar os referidos compostos de fórmula (I) em todaí as suas formas isoméricas possíveis e sob a forma de misturas.

Os sais dos derivados da invenção podem ser obtidos com bases orgânicas e inorgânicas. Entre as bases inorgânicas, podem-se citar os hidróxidos de metais alcalinos ou alcalino-terrosos, como por exemplo os hidróxidos de sódio, de potássio, de lítio e de cálcio, o hidróxido de magnésio ou de amónio. Entre as bases orgânicas podem-se citar as aminas alquiladas substituídas ou não substituídas, como por exemplo a trimetilamina, metil-H amina, propilamina, Ν,Ν-dimetiletalonalamina ou tris-(hidroximetil) metilamina; podem-se citar igualmente os aminc ácidos básicos como por exemplo, a lisina ou a arginina; podem-se citar ainda outras bases como por exemplo a samina ou a procaina.

gluco

Os sais de adição com ácidos gânicos ou orgânicos podem ser, por exemplo, os sais dos com o ácido clorídrico, bromídrico, nítrico, co, fosfórico, acético, fórmico, propiónico, benzóico, maleico, fumárico, succínico, tartárico, cítrico, oxálico, glioxílico, aspártico, alcanossulfónico como por exemplo os ácidos metano e etanossulfónicos, arilssulfónicos, como por exemplo os ácidos benzeno ou para-toluenossulfónicos e arilcarboxílicos.

inorforma sulfúriEntre os produtos obtidos de acordo com o processo da invenção, podem-se citar nomeadamente os derivados que obedecem à fórmula (I) acima apresentada de adição, caracterizados por na refeácido glutâmico ter a configuração D.

bem como seus sais rida fórmula (I) o

Entre estes, podem-se citar mais derivados caracterizados por na referie representarem um radical hidroxi bem como aqueles em que Rg representa um átomo de hidrogénio e mais particularmente:

-o ácido 2-amino-6-(gama-D-glutamilamino)-4-metilenoheptanodióico, particularmente os da fórmula (I) Rg

-o ácido 2-(L-alanilamino)-6-(gama-D-glutarailamino)-4-metilenoheptanodióico, bem como os seus sais de adição.

processo para a preparação dos derivados definidos pela fórmula (I) acima representada bem como dos seus sais, é caracterizado por se fazer reagir um derivado do ácido glutâmico de fórmula (II):

HOOC-CHg-CHg-CH-COO-Alk

NH-R'_χ na qual alk representa um radical alquilo e R’ tem a significação de R^ já indicada, com excepção de hidrogénio ou representa um grupo protector de uma amina, com um derivado de fórmula (III) que se pode apresentar na forma de isómeros separados ou na forma de misturas de isómeros;

C00-Alk_oC00-Alk.,

I Ί

R'_o____NH__C__U__C____NH_ (III) na qual U tem a significação já indicada, Alk^ e Àlk₂representam um radical alquilo -C^, X* e Y* representam um átomo de hidrogénio, um radical'-COO-Alk^, tendo Alk^ a significação de Alk^ e Alk₂ ou uma ligação suplementar com U e R'₂ representa um grupo protector de uma amina ou um aminoácido ou um péptido constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos em que a amina está protegida por um grupo protector, para se obter um produto com a fórmula (I_A):

^A COO-Alk₀ COO-Alk.

II

R ' ₀-NH-C --- U----C-NH-C0-CH_o-CH_n -CH-COO-Alk(I ) | | ζ z |a

X' Y' NH-R'^

em todas as formas isómeras ou sob a forma de misturas de isómeros na qual R’^ * 2 ' Alk^, Alk₂, X’r Y¹ ®

U têm a significação já indicada, que se isola e, sê desejado, se salifica, ou se submete e se necessário e desejado, a uma das reacções seguintes, numa ordem qualquer:

a) se X' ou Y' representar um radical COO-Alk^:

: descarboxilação,

b) desprotecção das funções amino,

c) desalquilação das funções hidroxilo,

d) amidificação das funções amino livres por um aminoácido ou um péptido constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos em que a função amino está protegida, e em seguida a desprotecção desta função amino,

e) esterificação ou salificação com uma base das funções carboxi,

f) salificação com um ácido das funções amino.

Nas condições preferenciais de concretização, o derivado do ácido glutâmico é activado pela presença de agentes de condensação como por exemplo a diciclohexilcarbodiimida, o N,N'-carbonildiimidazole ou as amidas bis-alquílicas de ácido sulfuroso, como por exemplo SO-(N(CHg)₂)₂ou ainda pela formação de um anidrido misto com o cloroformiato de isobutilo.

A descarboxilação é realizada de preferência por acção de um ácido inorgânico concentrado como por exemplo ó ácido clorídrico 12N.

Pode realizar-se uma descarboxilação directa pelo procedimento de Krapcho ou de Keinan e Eren (J. Org. Chem., 51, (1986) 3615-3169.

A desprotecção das funções amino (formilo ou BOC por exemplo) é realizada de preferência por acção de um ácido inorgânico diluído como por exemplo

- 6 o ácido clorídrico

A desalquilação das funções carboxilo é realizada de preferência por saponificação com ajuda de uma base inorgânica como por exemplo a potassa cáustica e sobretudo a soda cáustica. Ela pode, se neces sário, ser operada em duas fases no caso em que seja incompleta. Neste último caso, a segunda desalquilação é de preferência realizada após a desprotecção das funções amino e/ou descarboxilação.

A amidificação das funções amino livres é realizada por exemplo com ajuda de um derivado funcional como por exemplo um halogeneto do aminoácido ou do péptido ou em presença de um agente de condensação co mo por exemplo os acima apresentados.

A esterificação das funções carboxilo é realizada nas mesmas condições acima apresentadas (agentes de condensação).

Os derivados de fórmula (I) apresentam segundo o caso um carácter ácido ou básico. Podem-se preparar com vantagens os sais de adição dos derivados de fórmula (I) fazendo reagir em proporções sensivelmente estequiómetricas, segundo o caso, um ácido ou uma base inorgânica ou orgânica, com o referido derivado de fórmula (I).

Nas condições preferenciais, efe ctuam-se sob o derivado de fórmula (I ), as operações seguintes e nesta ordem;

- desalquilação das funções carboxilo,

- desprotecção das funções amino e descarboxilação,

- amidificação ou salificação por um ácido das funções amino e/ou esterificação ou salificação com uma base das funções carboxi.

são conhecidos.

preparados como

Certos derivados de fórmula (III)

Quando não forem conhecidos, podem ser se segue:

Faz-se reagir um derivado de fórmula (IV) :

COO-Alk₂

R’ ₂ —NH-C ------ U

X'

COO-Alk^

C-OH

Y' (IV) na qual Alkp Alk₂, U, X', Y* e R'₂ têm a significação acima indicada, com um hàlogeneto de alcano C^-C^ sulfonilo, de preferência o cloreto de metanossulfonilo, na presença de um agente de condensação como por exemplo a piridina, e em seguida com um hidreto alcalino como por exem pio o nitreto de sódio ou a difenilfosforilazida, para se obter um derivado de fórmula (V):

COOÀlk₂ COO-Alk₁

R* ₂ -NH-C ------ U----C--N₃ (V)

X* Y' na qual Alk^, Alk₂, U, X', Y, e R’₂ têm a significação acima indicada, que se reduz, por exemplo, por acção da tri fenilfosfina seguida de hidrólise aquosa, ou hidrogenação catalítica, por exemplo na presença de paládio em carvão com um veneno (catalisador de Lindlar) para se obter o derivado com a fórmula (III) pretendido:

COOAlk„ COO-Àlk í ² I

K’₂ -nh-c ------ U----C ------NH₂ (III)

na qual R'₂ , X', Y', U, Al^ e Alk₂ têm a significação anterior, produto de fórmula (III) que, no caso em que X* e/ou Y* não representam um átomo de hidrogénio, se submete à acção de um agente de protecção do radical arnino para se obter um produto de fórmula (III'):

COOAlk_n COO—Alk_n

R'₂ -NH-C______ U___ C______ NH-Rp (III')

X' Y' na qual R'₂ , Α1λ_χ, Alk₂, U, X’ e Y’ têm a significação já indicada, e Rp representa um grupo protector do radical arnino que se submete à acção de um agente de descarboxilação, para se obter úm produto correspondente conten do um ou dois carbonos assimétricos de que se separam, se desejado, os isómeros ou diastereoisómeros com as técnicas habituais, por exemplo, por cristalização ou cromatografia, e em seguida se submete a uma acção de desprotecção do radical arnino para se obter o produto de fórmula (III) pretendido na forma de isómeros separados ou de misturas.

Os derivados de fórmula (IV) e de fórmula (II) são conhecidos. Podem nomeadamente ser pre parados como indicado nos exemplos.

Os derivados, preparados pelo pro cesso de acordo com a presente invenção, possuem propriedades farmacológicas muito interessantes; eles são nomeadamente dotados de propriedades imunodulatadoras remarcáveis, nomeadamente por activação dos monócitos humanos e a produção de monocinas como por exemplo a TNF (Factor de Necrose de Tumor) e IL1 : Interleucina 1.

Estas propriedades são ilustradas mais adiante na parte experimental.

- Estas propriedades justificam a utilização dos derivados do ácido glutâmico bem como dos seus sais, como medicamentos.

presente pedido tem assim iguaí. mente por objectivo a aplicação, com medicamentos, dos de rivados do ácido glutâmico, como definidos pela fórmula (I), em todas as suas formas isómeras ou na forma de misturas de isómeros, bem como dos seus sais de adição farma ceuticamente aceitáveis.

I Entre os medicamentos, de acordo com a invenção, retêm-se de preferência os medicamentos caracterizados por serem constituídos pelos novos deriva dos do ácido glutâmico que obedecem à fórmula (I) na qual o ácido glutâmico tem a configuração D bem como os seus sais de adição farmaceuticamente aceitáveis.

Entre estes produtos, retêm-se nomeadamente os que obedecem à fórmula (I) na qual R_ e

R₄ representam um radical hidroxi bem como aqueles em que Rg representa um átomo de hidrogénio bem como os seus sais de adição farmaceuticamente aceitáveis.

I

Entre estes últimos, retêm-se mui to particularmente os derivados seguintess

- ácido 2-amino 6-(gama-D-glutamilamino) 4-metileno heptanodióico,

- ácido 2-(L-alanilamino) 6-(gama-D-glutamilamino) 4-metileno heptanodióico, bem como os seus sais de adição farmaceuticamente aceitáveis.

Os medicamentos de acordo com a invenção encontram utilização, por exemplo, no tratamento . das doenças autoimunes, quer se trate de doenças não espe- 10 -

cíficas de órgãos (poliartrite reumatóide, lúpus eritema toso, anemia hemolítica, leucopenia autoimune, etc.) ou quer se trate de doenças específicas de órgãos (tiroidite doença de Basedow, de Addison, esclerose em placas, pemfi gus, rectolite hemorrágica, certas nefropatias, etc.). Es tes medicamentos podem ser igualmente utilizados no tratamento de hemopatias, cancro, sida, afecções virais e microbianas, sobretudo crónicas e recorrentes (bronquite, gripe, etc.); doenças das cavidades bucais, etc. Podem constituir adjuvantes da terapia virai, da antibioterapia ou da quimoterapia anticancerosa.

Eles encontram igualmente aplicação no tratamento de várias deficiências imunitárias secundárias ou adquiridas observadas no decurso das afecções muito diversas: deficiências associadas aos problemas metabólicos, deficiências de origem iatrogénica, (cor ticóides, radiações ionizantes...), deficiências observadas nas grandes queimaduras, etc.

A dose habitual, variável de acor do com o derivado utilizado, paciente e afecção em causa pode ser por exemplo de 0,05 mg a 50 mg por dia. por via oral, no homem, o derivado do exemplo 1 pode ser administrado em doses equivalentes quotidianas de 0,5 mg a 50 mg, por exemplo, para o tratamento da poliartrite reumatóide, ou seja, cerca de 0,007 mg a 0,7 mg por quilograma de peso corpóreo.

Os compostos de fórmula (I) em to das as suas formas isómeras ou na forma de misturas de isómeros bem como os seus sais de adição com ácidos e com bases farmaceuticamente aceitáveis podem ser utilizados para preparar composições farmacêuticas que os contêm a título de princípio activo.

Estas composições podem ser administrados por via digestiva ou parentérica,

Estas composições podem ser sólidas ou líquidas e apresentarem-se nas formas farmacêuticas habitualmente utilizadas em medicina humana como, por exem pio, os comprimidos simples ou drageifiçados, geleias, gra nulados, supositórios, preparações injectáveis; elas são preparadas de acordo com os processos habituais. O ou os princípios activos podem ser nelas incorporados com excipientes habitualmente utilizados nestas composições farmacêuticas, como por exemplo o talco, goma arábica, lactose, amido, estearato de magnésio, manteiga de cacau, véiculos aquosos ou não aquosos, gorduras de origem animal ou vegetal, derivados parafínicos, glicóis, diversos agentes molhantes, dispersantes ou emulsificantes, conservantes.

Os exemplos que se seguem ilustram a presente invenção sem todavia a limitarem.

Exemplo 1: Acido 2-amino 6-(gama-D-glutamilamino) 4-metileno heptanodióico.

Fase A: 1-formilamino 3-metileno 5-^Z N-trifluoroacetil gama-D-glutamil (o-metil) amino__7 1,1/5-pentano tricarboxilato de trietilo.

Adiciona-se uma solução de 4 g de N-trifluoroacetil D-glutamato de 1-metilo em 20 cm de dimetoxietano a uma solução de 5,1 g de 5-amino l-(formilami no) 3-metileno 1,1,5-pentano tricarboxilato de trietilo em 3 o

280 cm de dimetiletilamina, arrefece-se a 0 C, adicionam-se pouco a pouco 3,2 g de diciclohexilcarbodiimida, agita —se durante 16 horas a 0°C, filtra-se, leva-se à secura, retoma-se o resíduo com dimetoxietano a frio, filtra-se, leva-se à secura, retoma-se com cloreto de metileno, lava-se com ácido clorídrico N, com uma solução saturada de bi carbonato de sódio depois com água saturada em cloreto de sódio, seca-se, evapora-se à secura, purifica-se por croma tografia em sílica (eluente: acetato de etilo-ciclohexano 5-5) e obtêm-se 5 g do produto pretendido.

Fase B:

Acido 2-amino 6-(gama-P-glutamilami.no) 4-metileno heptanodióico.

Adicionam-se gota a gota em 5 mi

Λ nutos a 0°C, 10,9 cm^J de soda cáustica N a uma solução de 3

1,28 g do produto da fase A em 20 cm de etanol, dexxa-se voltar à temperatura ambiente, agita-se durante 24 horas, neutraliza-se com a ajuda de 0,9 cm de ácido clorídrico 12N e leva-se à secura a pressão reduzida.

Descarboxilação - Desformilação;

Retoma-se o resíduo em 10 cm de etanol, adiciona-se 1 cm de ácido clorídrico 12 N e agita-se durante 40 minutos a 80°C,

Gela-se o produto acima obtido, adicionam-se gota a gota num período, de 5 minutos 15,2 cm de soda cáustica 2N, agita-se durante 24 horas à temperatura ambiente, leva-se a pH 6 com a ajuda de ácido clorídrico 12N e leva-se à secura.

Purificação;

Retoma-se o produto acima referi do em alguns cm de água, ajusta-se o pH a 6 com soda cáus tica N, desalcaliniza-se em Resina Powex 50 W x 8H⁺(50-100 malhas), elui-se em primeiro lugar com água e em seguida com amoníaco N, purifica-se por cromatografia em sí lica (eluente; etanol-amoníaco 95-5 e em seguida etanol-amoníaco 8-2), leva-se à secura, retoma-se em 200 cm de água.

filtra-se, liofiliza-se durante 16 horas e obtêm-se 400 mg do produto pretendido.

/alfa / = -9,5° Í 1° (c = 1% em ácido clorídrico 4N).

A) Preparação do N-trifluoroacetil D-glutamato de 1-metilo

Fase 1: N-(trifluoroacetil) D-glutamato de 5-(l,1-dlmetil etil) 1-raetilo.

Adicionam-se 4,1 cm de trietilamina e em seguida arrefece-se e adicionam-se gota a gota 4,1 cm de anidrido trifluoroacético a uma solução de 5,5 g de D-glutamato de 5-(1,1-dimetiletil) 1-metilo em

180 cm de cloreto de metileno. Agita-se em seguida du3 rante 2 horas à temperatura ambiente, deita-se em 70 cm de água com gelo, extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com água salgada, seca-se, leva-se à secura e obtêm -se 7,1 g do produto pretendido.

/ alfa_7_D = + 5^o - 1° (c = 1,3% em dioxano).

Fase 2; Preparação do N-trifluoroacetil D-glutamato de 1-metilo.

Dissolvem-se 6,8 g do produto acima referido em 50 cm de cloreto de metileno, adicio3 nam-se 50 cm de ácido trifluoroacético, agita-se durante 1 hora, leva-se à secura, retoma-se com acetato de etilo, deita-se em água, extrai-se com acetato de etilo, lava-se com água salgada, leva-se à secura e obtêm-se 5,5 g do produto pretendido.

/ alfa__7 ⁼ +9° - 2^o (c = 0,6% em dioxano).

B. Preparação do 5-amino l-(formilamino) 3-metileno 1,1,5-pentano tricarboxilato de trietilo de partida do Exemplo 1.

Fase 1; 2-(formilamino) (2-metil 2-propenil)propanodioato de dietilo.

Adicionam-se 40 g de carbonato de potássio, 0,380 g de catalisador de éter coroa 18 coroa 6 e 39,9 g de clorometil propano a uma solução de 30 g de formamidomalonato de etilo em 300 cm de cianometilo, agi-ta-se sob refluxo durante 3 horas, filtra-se, leva-se à secura, arrefece-se a 0 -5 C, retoma-se em 10 cm de éter isopropílico, filtra-se, lava-se com éter isopropílico, se ca-se a pressão reduzida e obtêm-se 25,2 g do produto pre tendido.

F - 72°C.

Fase 2; 1-(formilamino) 5-hidroxi 3-metileno 1,1,5-pentano tricarboxilato de trietilo (mistura de isómeros).

Adiciona-se gota a gota num período de 10 minutos uma solução de 26,5 g de glioxilato de etilo em 180 cm de cloreto de metileno, a uma solução de 84 g de cloreto férrico em 180 cm de cloreto de metileno, agita-se durante 1 hora, arrefece-se a -20°C, adiciona-se gota a gota em 20 minutos uma solução de 34 g do produto 3 tal como obtido na fase A em 180 cm de cloreto de metileno e agita-se durante 1 hora a -20°C.

Deita-se em 300 cir de água com gelo, extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com HC1 2N em seguida com água salgada, seca-se, leva-se à secura a pressão reduzida e obtêm-se 56,5 g do produ to pretendido (mistura de isómeros). F - 68°c após purificação por cromatografia em sílica (eluente: acetato de etilo-ciclohexano 6-4),

Fase 3: 5-azido 1-(formilamino) 3-metileno 1,1,5-pentano tricarboxilato de trietilo.

Dissolvem-se 46 g do produto (mis tura de isómeros) obtido na fase 2 em 500 cm de piridina,

arrefece-se a 0°c# adicionam-se gota a gota a 0°C, 12 cm de cloreto de metanossulfonilo# agita-se durante 3 horas à temperatura ambiente# deita-se em 400 cm de ácido clo3 rídrico 4N com gelo e 200 cm de cloreto de metileno# extrai-se com cloreto de metileno# lava-se com o ácido clorídrico 4N com uma solução saturada de bicarbonato de sódio e com água salgada# seca-se e evapora-se à secura sob pressão reduzida. Dissolvem-se os 56 g do resíduo obtido em 250 cm de dimetilformamida, adicionam-se 9#98 g de nitreto de sódio# agita-se durante 16 horas à temperatura ambiente, elimina-se o solvente# retoma-se em cloreto de metileno# lava-se com uma solução saturada em bicarbonato de sódio e depois com água salgada# seca-se, leva-se à se cura e obtêm-se 59 g do produto pretendido (mistura de isómeros que se purifica por cromatografia em sílica (elu-l entes ciclohexano-acetato de etilo 8-2) para se obterem 26 g do produto pretendido.

Fase 4: 5-amino 1-(formilamino) 3-metileno 1#1#5-pentano tricarboxilato de trietilo.

Adicionam-se 10,9 g de trifenili fosfina e uma solução de 13 g do produto acima referido em 250 cm de tetrahidrofurano à temperatura de cerca de o j

-5 C# agita-se durante 5 horas à temperatura ambiente# < adiciona-se 8,5 cm de água# agita-se durante 24 horas à temperatura ambiente# evapora-se o tetrahidrofurano# retoma-se o resíduo com cloreto de metileno# deita-se em ácido clorídrico 2N com gelo# extrai-se com ácido clorídri co 2n# neutraliza-se com bicarbonato de sódio# extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com água salgada# seca- ί í -se# leva-se à secura e obtêm-se 10 g do produto preten : dido. F = 50°c após recristalização em éter isopropíli co.

Exemplo 2; Ácido 2-(L-alanilamino) 6-(qama-D-qlutamilami no) 4-metileno heptanodióico

Fase A; 1-amino 3-metileno 5-^ N-trifluoroacetil gama-D-glutamil (O-metil) amino_/ 1,1,5-pentano tricarboxilato de trietilo.

Adicionam-se 1,5 cm de ácido clorídrico 12N a uma solução de 1,22 g do produto obtido na fase A do Exemplo 1 em 15 cm de etanol, agita-se durante minutos a 80°C, elimina-se o solvente sob pressão redu “

zida, retoma-se o resíduo em 10 cm de água, neutraliza-sei com bicarbonato de sódio, extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com água salgada, seca-se, leva-se à secura, purifica-se por cromatografia em sílica (eluente; acetato de etilo-ciclohexano 8-2) e obtêm-se 0,850 g do produto pretendido.

Fase B; 1~£ N-^/ (1,1-dimetiletoxi) carbonil^/ L-alanilami no_7 3-metileno 5-^ N-trifluoroacetil gama-D-glutamil (0-metil) amino_/ 1,1,5-pentano tricarboxilato de trietilo.

Dissolvem-se 0,310 g de B.O.C.-L3

-alanina em 50 cm de tetrahidrofurano, adicionam-se 0,43 β cm de trietilamina, arrefece-se a cerca de 5°c, adicionam “

-se 0,23 cm de cloroformiato de isobutilo, agita-se duran te 30 minutos a cerca de 5°c, adiciona-se gota a gota em 5 minutos uma solução de 0,800 g do produto da fase A em cm de tetrahidrofurano, deixa-se regressar à temperatu ra ambiente e agita-se durante 16 horas. Elimina-se o tetrahidrofurano, retoma-se numa mistura de águacloreto de metileno, extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com água salgada, seca-se, leva-se à secura, purifica-se por cromatografia em sílica (eluente; acetato de etilo-ciclohe xano 5-5) e obtem-se o produto pretendido.

Z“alfa_7_D - 12° - 1° (c = 1% em cloreto de metileno).

Fase C; Ácido 2-(L-alanilamino) 6-(gama-p-glutamilamino)

4-metileno heptanodióico.

Opera-se como indicado acima na fase B do exemplo 1, a partir de 700 mg do produto obtido na fase B acima referida.

A saponificação, desprotecção da amina protegida pelo B.O.C., saponificação, purificação conduz a 170 mg do produto pretendido.

^“alfa_/_D = -13° í 1° (c = 1% HC1 4N).

Exemplo 3: Acido 2-amino 4-metileno 6-/ N-(l-oxo octadecil) L-alanil gama-D-glutamilamino_/ heptanodióico.

Opera-se como indicado no exemplo 1 acima , mas utilizando o N-/ N-(l-oxo octadecil) L-alanil_7 D-glutamato de 1-metilo em vez do N-trifluoroacetilo correspondente, obtido na preparação À do exemplo 1, para se obter o produto pretendido.

/”alfa_7_D ⁼ -25° (c = 0,6% em água).

Preparação do N-/* *~N-(l--oxo octadecil)-L-alanil 7 D-glutamato de 1-metilo.

Fase 1: N-(l-oxo octadecil) L-alaninato de metilo.

A uma solução de 10 g de cloridra to de L-alanina ester metllico em 250 cm de cloreto de • 3 metileno, adicionam-se 24,9 cm de trietilamina, em segui da gota a gota em 30 minutos uma solução de 21,7 g de cio “

reto de estearilo em 50 cm de cloreto de metileno, agita-se durante duas horas e trinta minutos, filtra-se, lava-se com ácido clorídrico 2N, depois com água salgada, seca-se, leva-se à secura a pressão reduzida, empasta-se o resíduo com éter isopropílico, escorre-se e recristaliza-se em metanol. Obtêm-se 22 g do produto ptetendido. F * 84°C.

^“alfaJT^ = _₁₅o «

(c = 1% piridina)

Fase 2; N-(l-oxo octadecil) L-alanina.

Arrefece-se a 0^o C uma suspensão de 21 g do produto acima obtido em 5C0 cm de metanol, adicionam-se gota a gota 62 cm de potassa cáustica N, agita-se durante 16 horas à temperatura ambiente , adicionam-se 500 cm de metanol,'agita-se durante 4 horas, arrefece -se a 0°C, leva-se a pH 3 com a ajuda de ácido clorídrico 2n, evapora-se, retoma-se com cloreto de metileno, lava-se com água salgada, seca-se, leva-se à secura sob pressão reduzida, empasta-se o resíduo com éter isopropílico, escorre-se, recristaliza-se em metanol e obtêm-se 11,8 g do produto pretendido. F = 102°C.

/alfaJZ - -18° (c = 0,9% piridina),

Fase 3: N-/( N-(l-oxo octadecil) L-alanil_/ D-glutamato de

5-(l,1-dimetiletilo) e 1-metilo.

Arrefece-se a 0^o c uma suspensão de 1,77 g de N-(l-oxo octadecil) L-alanina e 1,08 g de D-glu3 tamato de 5-(1,1-dimetiletilo ) e 1-metilo em 170 cm de dimetoxietano, adiciona-se gota a gota em 10 minutos uma O solução de 1,23 g de Ν,Ν-diciclohexilcarbodiimida em 5 cm de dimetoxietano, agita-se durante 3 horas à temperatura ambiente, arrefece-se, filtra-se, leva-se à secura, retoma “

-se em 250 cm de éter a quente, filtra-se, leva-se à secu ra sob pressão reduzida, empasta-se com éter isopropílico, escorre-se e obtêm-se 2,4 g do produto pretendido, F 100°C após recristalização em metanol.

Z“alfa_/_D = -32° t 1° (c = 1% CI^Cip.

Fase 4; N-(l-oxo octadecil) L-alanil_/ D-glutamato de

1-metilo,

Adicionam-se gota a gota 31 cm de ácido trifluoroacético a uma solução de 11,4 g do produto acima referido em 150 cm de cloreto de metileno, deixa-se

durante 16 horas sob agitação, leva-se à secura sob pressão reduzida, retoma-se com cloreto de metileno, lava-se com água salgada, seca-se filtra-se, leva-se à secura sob pressão reduzida, cristaliza-se, recristaliza-se em etanol e obtêm-se 6,8 g do produto pretendido, F - 110°c. ^alfa^Q ⁼ -16° ” 1° (c = 0,9% piridina).

Exemplo 4: Acido 2-amino 6-(gama-D-gluta.milamino) 3-heptenodióico.

Opera-se como indicado no Exemplo 1 acima, utilizando 5-amino 1-formilamino 1,1,5-pent-2-enc tricarboxilato de trietilo, para se obter o produto preter dido.

Preparação do 5-amino 1-formilamino 2-pent-2-en-l,1,5tricarboxilato de trietilo.

Opera-se como indicado acima para a preparação do 5-amino 1-(formilamino) 3-metileno 1,1,5-pentano tricarboxilato de trietilo, mas substituindo o clorometil propeno pelo brometo de alilo, para se obter o produto pretendido na forma de um óleo. Rf= 0,4 em acetato de etiloetanol 4-1.

Exemplo 5: Acido 2-glicilamino 6-/ /~N-(l-oxododecil) L-alanil gama-D-glutamil / amino / 2-heptenodióico.

Opera-se como indicado nos exemplos 1 e 3 fazendo reagir o N-/~N-(1-oxododecil)- L-alanil / D-glutamato de 1-metilo preparado como o N-/~N-(1-oxododecil) L-alanil—/ D-glutamato de 1-metilo no Exemplo 3 substituindo o estearilo por laurilo (dodecilo) com o 6-amino 2-/ (N-formilglicil) amino 3-heptenodioato de 7-etil 1-metilo). Neste caso, não é necessária a desformilação pelo ácido clorídrico, A neutralização e a dessalificação podem se fazer simultaneamente com ajuda de uma resina H⁺ (Amberlyst 15). Obtem-se o produto pretendido que se

torna gomoso a 150°C.

^“alfa__7_D = -1⁴° (c = °'⁸% ^{em á}gua).

Exemplo 6: Mistura dos ácidos (2P,6L) e (2L,6D) 2-amino

6-(gama-D-glutamilamino) 4-metileno heptanodióicos.

Fase A: Mistura dos ácidos (2D, 6L) e (2L, 6D) 2-formilamino 4-metileno 6-/N-(trifluoroacetil) gama-D-glutamilamino__/ heptanodióico.

Adicionam-se a 0°C, 1,3 g de diciclo hexilcarbodiimida a uma solução contendo 1,5 g da mistura (2D,6L) e (2L,6D) 2-formamido 4-metileno 6-amino 1,7 heptanodioato de dietilo e 1,48 g de ácido D-glutâmico em

150 cm de dimetoxietano e agita-se durante 16 horas mantendo a temperatura a 0°C. Filtra-se o precipitado e con centra-se à secura o filtrado sob pressão reduzida. Obtêm-se 10,5 g do produto bruto que se purifica por cromatografia em sílica (eluente: ciclohexano-acetato de etilo 2-8).

Z~^alfaJ7 = -14° (c = 0,8% em água).

Fase B; Mistura dos ácidos (2D,6L) e (2L,6D) 2-amino 6-(gama-D-glutamilamino) 4-metileno heptanodióico.

Adicionam-se 5 cm de ácido clorídri co 12n a 1,9 g de produto obtido na Fase A em solução em

100 cm de etanol e agita-se durante 30 minutos. Elimina.

-se o solvente a pressão reduzida, retoma-se o resíduo em cm de etanol, ajusta-se o pH a 7 com a ajuda de uma sç lução de soda cáustica O,1N, arrefece-se a 0°c e adicionam -se gota a gota 16 cm de soda cáustica N. Deixa-se voltar à temperatura ambiente, agita-se durante 16 horas, net traliza-se o meio reaccional com ácido clorídrico N e em seguida eliminam-se os solventes a pressão reduzida. Crc matografa-se o resíduo em sílica (eluente: etanol-amoníaco 95-5, 90-10 e em seguida 80-20), retoma-se a resina obtida

em água, filtra-se e liofiliza-se. Obtêm-se 0,92 g do produto pretendido.

^”alfa_/_D= -13° ΐ 1° (c = 1% HC1 3N).

Exemplo 7: Mistura dos ácidos (2D,6D) e (2L,6L) 2-amino 6-(gama-D-glutamilamino) 4-metileno heptanodi óicos.

Fase A; Mistura dos ácidos (2D,6D) e (2L,6L) 2-formilam_i no 4-metileno 6-/ N-(trifluoroacetil) gama-D-glu tamilaminos.

Opera-se como na fase A do exemplo 6 a partir da mistura (2D,6D) e (2L,6L) 2-formamido 4-metileno 6-amino 1,7-heptanodioato de dietilo.

Fase Bi Mistura dos ácidos (2D,6D) e (2L,6L) 2-amino 6-(gama-D-glutamilamino) 4-metileno heptanodióico.

Opera-se como na fase B do Exemplo 6 a partir do produto obtido na fase A acima. ^“alfa_7_D= -12,5° ±1° (c = HC1 3N).

A mistura (2D,6D) e (2L,6L) 2-formamido 4-metileno 6-amino 1,7-heptanodioato de dietílc utilizada à partida do exemplo 7 foi preparada como indicado para a preparação do exemplo (Fase C), utilizando à partida a mistura de (2D,6D) e (2L,6L) formamido 4-metileno 6-terbutoxi carbonilamino 1,7-heptanodioato de dietilo (isómero I) obtido na Fase B desta preparação.

Preparação do 6-amino 2-/~(N-formilglicil) amino / 3-hepta nodioato de 7-etil 1-metilo,

Opera-se como indicado na preparação B do exemplo 1 substi tuindo na fase 2, o (formilamino) (2-metil 2-propenil) pro panodioato de dietilo por 2(N-formilglicil)amino / 2-(2-propenil) etanoato de metilo, para se obter o produto

pretendido. Rf= 0,2 na mistura de cloreto de metilenometanol (9-1)·

Nota; A redução do nitreto em amina (fase 4 da preparação B do Exemplo 1) é realizada neste caso por hidroge nação na presença de paládio em carbonato de cálcio e de quinoleina, em vez de trifenilfosfina.

Preparação da mistura de (2D,6L) e (2L,6D) 2-formamido 4-metileno 6-amino 1,7-heptanodioato de dietilo.

Fase A: 1-formamido 3-metileno 5-(terbutoxicarbonilamino'

1,1,5-pentano tricarboxilato de trietilo.

Adicionam-se à temperatura ambien te 13,6 g de pirocarbonato de diterbutilo em solução em cm de cloreto de metileno a 19,5 g de 1-formamido 3-metileno 5-amino 1,1,5-pentano tricarboxilato de trietilo em solução em 75 cm de cloreto de metileno e mantem-se em agitação à temperatura ambiente durante 36 horas. Dilui-se a mistura reaccional com 150 cm de cloreto de metileno, lava-se a fase orgânica com água, seca-se e elimi nam-se os solventes sob pressão reduzida, deixa-se cristã lizar à + 4°c e recolhem-se 25,8 g do produto pretendido. F=68°C.

Fase B; Mistura de (2D,6D) e (2L,6L) 2-formamido 4-metile no 6-(terbutoxicarbonilo) 1,7-heptanodioato de dietilo e mistura dos isómeros (2D,6L) e (2L,6D).

Adicionam-se 2,21 g de dietil césio e 9,42 g de para-aminofenol à 17,25 g do produto obti3 do na Fase A em solução em 250 cm de dimetil formamida e aquece-se durante 3 horas a 85°c. Deixa-se regressar à temperatura ambiente, filtra-se e eliminam-se os solven tes a pressão reduzida. Retoma-se o resíduo em 300 cm de cloreto de metileno, lava-se a fase orgânica com ácido

- 23 ♦

clorídrico 0,5N e em seguida com uma solução aquosa de bicarbonato de sódio, seca-se e elimina-se o solvente a pressão reduzida e cromatografa—se em coluna de sílica (e luente: ciclohexano-acetato de etilo 6-4) e obtêm-se 4,70 g do isómero I (isómero DD,LL), 3,84 g do isómero II (isómero DL, LD) e 2,80 g da mistura dos 2 isómeros.

Fase C; Mistura de (2D,6L) e de (2L,6D) 2-formamido 4-metileno 6-amino 1,/-heptanodioato de dietilo.

Adicionam-se 25 cm de ácido clorí drico 2N em éter a 3 g do produto II obtido na Fase B (isó mero DL,LD) em solução em 50 cm de cloreto de metileno. Agita-se à temperatura ambiente durante 30 minutos, concen tra-se em atmosfera inerte, retoma-se o cloridrato de ami na em cloreto de metileno com trietilamina e depois leva -se à secura a pressão reduzida. Após cromatografia em sílica (eluente: acetato de etilo-ciclohexano 7-3), recupera-se 1,86 g do produto pretendido.

Exemplo 8;

Prepararam-se comprimidos obedecendo à formulação; -Acido 2-amino 6-(gama-D-glutamilaminó) 4-metileno heptadióico...... 50mg

-Excipiente q.b. por um comprimido completado à..... lOOmg.

(Detalhe do excipiente; lactose, amido, talco, estearato de magnésio).

Exemplo 9;

Prepararam-se comprimidos obedecendo à formulação; -Acido 2-(L-alanilamino) 6-(gama-D-glútamilamino) 4-metil4 no heptadióico....................................

-Excipiente q.b. para um comprimido completado a...

(Detalhe do excipiente; lactose, amido, talco, estearato de magnésio)·

50mi

100m<

ESTUDO FARMACOLÓGICO

Estimulação das células monocitárias por um imunoestimulante

As células mononucleadas do sangue circulante de doadores normais são separadas de acordo cori a técnica clássica descrita por Boyum utilizando um gradi ente de Ficoll. Após lavagem, submetem-se as mononuclea res à incubação a 37°c durante 1 hora à razão de 5.10^ mo nócitos (células NSE⁺) por ml de meio de cultura, 5 ml por cada frasco de cultura. O meio de cultura utilizado nes sa experiência compem-se de RPMI 1640 adicionado de antibióticos e de tampões Hépès. Ao fim de uma hora, retiram-se as células não aderentes por lavagem dos frascos com ajuda do meio, anteriormente levado a 37°c, as células aderentes compondo-se essencialmente de monócitos (> 90%) são colocadas em cultura na presença de quantidades diferentes de produtos a ensaiar num meio P.B.S. (Dulbeno) seir 2+ 2+

Ca num Mg . A cultura é seguida durante 24 ou 48 horas e retiram-se então os sobrenadantes das células, centrifugam-se, retiram-se alíquotas e conservam-se a -80°C ou a -20°C. Substituem-se os sobrenadantes das culturas, nos frascos pela mesma quantidade de água destilada apirogénica a fim de lisar as células. Recupera-se o lisado, preparam-se alíquotas e conservam-se igualmente a -20°c. As experiências seguintes foram realizadas na presença ou ausência do Interferão gama (10 u/ml) a uma dose em que o IFN gama isolado é inactivo.

Ensaios da presença em sobrenadantes de monocinas (Interleucina-1 e Factor de Necrose de Tumor) pela sua actividade biológica

Teste da Interleucina-1 (IL-1):

Este ensaio foi descrito pela prime:, ra vez por I. Gery e Waksman em 1972 (Gery I, e Β. H. Waks- 25 -

man, 1972. Potentiation of the T Lymphocyte response to miteogens.il. The celular source of potenciating media- ; tor (S) J. Exp. Med., 136-143).

Baseia-se na acção co-mitogénica da IL-1 na presença de um antígeno (representado pela fitohemaglutinina no ensaio) em timócitos de ratinho. 1,5 x 10⁶ timócitos de ratinho C3H/Hej (provenientes de C.S.E.4 A.L. de Orleãs) são colocados em cultura durante 3 dias ng. presença de soluções diferentes de sobrenadantes e de lisados celulares susceptíveis de conter actividade IL-1 e ;

I de PHA-P Wellcome (1 jug/ml) em placas de culturas de 96 furos de fundo plano, num volume final de 200 /11 de meio composto de RPMI 1640 contendo além dos antibióticos (penicilina 1/ml - estreptomicina), 1000 U/ml de tampão HépèS, —5 lmM de glutamina, 2 mM 5% de soro de vitela e 5 x 10 M de 2-mercaptoetanol. Ao fim de 68 horas de cultura, adi '

ciona-se 1yuCi de timidina tritiada a cada furo ( H-meti^ -timidina, CEA Saclay, TMM79A de actividade específica 1 ^:/aCi/mM), a radioactividade incorporada pelas células é avaliada após se terem filtrado as culturas num aparelho colector semi-automático de tipo Skaton e contado os filtros num contador de cintilação (LKB), Exprimem-se os resultados pela diferença entre os impulsos por minuto in corporados nas culturas em presença de sobrenadantes e os; impulsos por minuto incorporados nas culturas testemunhos*

Ensaio do Factor de Necrose de Tumor (TNF)

Coloca-se em evidência a activida de TNF pela toxicidade deste factor nas células alvo L- , 929 (sub-clone alfa). A técnica foi sensibilizada adicionando no ensaio a actinomicina D.

Distribuem-se as células L à ra4 zão de 2 x 10 células por furo de uma microplaca de fun! do plano em 100 pl de meio RPKI 1640 enriquecido com 5% _;

Ζ

com soro de vitela, glutamina, tampão Hépès e antibióticos. Ao fim de 24 horas, adicionam-se diferentes diluições de sobrenadantes a ensaiar num volume de 100 pl bem como uma dose de actinomicina D de 1 jig/ml. Ao fim de 24 horas de cultura, avalia-se a quantidade de células vi áveis não lisáveis colorindo as placas de cor violeta cri.s talino medindo a densidade óptica dos diferentes furos num leitor multicanol.

RESULTADOS

Os produtos dos exemplos 1 e 2 es timulam os monócitos e a sua produção de IL-1 e de TNF. Além disso, verifica-se um efeito sinérgico dos produtos dos exemplos 1 e 2 e do Interferão gama.

Claims

Processo para a preparação de deri vados do ácido glutâmico e dos seus sais de adição de áci do obtidos com ácidos inorgânicos ou orgânicos ou com bases, em todas as suas formas isoméricas ou misturas de isómeros, com a fórmula geral (I):

CO-RI ³

Z-C-NH-CO-CH₂-CH₂-CH-COO-R₅ (I)

Y NH-R^ na qual o ácido glutâmico tem a configuração D ou L, representa um átomo de hidrogénio, um aminoácido ou um péptido constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos ou um amino ácido ou um péptido constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos em que a amina está esterificada por um ácido alifático saturado ou insaturado Cg-C₂₄ ou representa o resíduo de um ácido alifático saturado ou insaturado e R^

6 24 5 representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo contendo 1 a 5 átomos de carbono, R.^ representa um radical hidroxi, alcoxi C^-Cg ou um aminoácido em que a amina pode ser substituída por um radical alquilo C.^ -Cg, Z repre senta um grupo com a fórmula :

CO—R.

I r₉-nh-c-uI

X na qual r₂ representa um átomo de hidrogénio, um aminoáci do ou um péptido constituido por 2, 3 ou 4 aminoácidos,

R₄ representa um radical hidroxi, alcoxi -Cg ou um aminoácido em que a amina pode ser substituída por um radi

U representa uma cadeia CH₂-fj!-CH₂-, cal alquilo C-^ -Cg,

-CH₂-CH=CH-(E ou Z) ou -CH₂-CH-CH₂ ou U representa em con

I

CH□ junto com X uma cadeia =CH -CH₂-CH₂~(e ou Z) ou U represen ta em conjunto com Y uma cadeia -CH₂“CH₂-CH=(E ou Z), X representa um átomo de hidrogénio ou com U, uma cadeia =CH-CH₂-CH_2# (E ou Z) e Y representa um átomo de hidrogé nio ou com U uma cadeia -CH₂-CH₂-CH=, (E ou Z)_t caracteri zado por se fazer reagir um derivado do ácido glutâmico com a fórmula (II) :

(II) na qual Alk representa um radical alquilo -Cg e R'^ tem a significação de atrás indicada, com excepção de hidro génio ou representa um grupo protector de uma amina, com um derivado de fórmula (III) que se pode apresentar sob a forma de isómeros separados ou sob a forma de mistura de isómeros: COO-Alk_n COO-Alk,

R’₂___NH___C_____U___C nh₂

X' y· (III) na qual u tem a significação já atrás indicada, Alk^ e Alk₂ representam um radical alquilo -Cg, ^e Y' representam um átomo de hidrogénio, um radical -COO-Alkg tendo Alkg a significação de Alk^ e Alk₂ ou uma ligação suplemen tar com U e R'₂ representa um grupo protector de uma aminé. ou um aminoácido ou um péptido constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos em que a amina está protegida por um grupo pre· tector, para se obter um produto com a fórmula (l_):

COO-Alk- 1 ² COO-Alk I ¹ 1 R’ -NH-C U 1 1 — C—NH-C0-CH_o—CH_o-CH-C00-Alk 1 1 ⁽ⁱa’ 1 X’ 1 1 Y* NH-R’ _χ

em todas as suas formas isoméricas ou sob forma de misturas de isómeros em que R’Alk^, Alk^r X¹r Y‘ e U têm significação já indicada, que se isola e, se desejado, se salifica, ou se submete se necessário e se deseja do, a uma das reacções seguintes, numa ordem qualquer:

a) se X* ou Y’ representa um radical C00-Alk₃:

: descarboxilação,

b) desprotecção das funções amino,

c) desalquilação das funções hidroxilo,

d) amidificação das funções amino livres com um aminoácido ou um pêptido constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos em que a função amino está protegida, e em seguida desprotecção desta fun ção amino,

e) esterificação ou salificação com uma base das funções carboxi,

f) salificação com ácido das funções amino.

Processo de acordo com a reivindica ção 1 caracterizado por se efectuarem sonre um derivado de fórmula (I ) as operações seguintes e pela seguinte ordem:

A

-desalquilação das funções carboxilo, -desprotecção das funções amino e descarboxila ção,

-amidificação ou salificação com um ácido das funções amino e/ou esterificação ou salificação com uma base das funções carboxi.

Processo de acordo com as reivindi
2 caracterizado por se utilizar à partida um ácido glutâmico de fórmula (II) de configura4ã caçoes 1, 2 fórmula (I) xi.

Processo de acordo com ou 3 caracterizado por se obter um radical hidrona qual Rg e representam um as reivindi produto de

- 5s -

Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4 caracterizado por se obter um pro duto de fórmula (I) na qual representa um átomo de hidrogénio.

- 6a -

Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 5 caracterizado por se obterem nomeadamente os seguintes produtos de fórmula (I)·

- ácido 2-amino-6-(gama-D-glutamino)-4-metileno-heptanodióico,

- ácido 2-(L-alanilamino)-6-)gama-D-glutamino)-4-(metileno-heptanodióico), bem como os seus sais de adição.

Processo para a preparação de composições farmacêuticas caracterizado por se incorporar como ingrediente activo pelo menos um dos produtos de fórmula (I), quando preparado de acordo com a reivindicação 1, em todas as suas formas isoméricas ou mistura de isómeros ou pelo menos um dos seus sais de adição inorgânico ou or- 31 gânico ou de bases, em associação com veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

8δ Processo para a preparação de com posições farmacêuticas caracterizado por se incorporar, como ingrediente activo, pelo menos um dos compostos de fórmula (I), quando preparado de acordo com a reivindicação 6, em todas as suas formas isoméricas ou mistura de isómeros ou pelo menos um dos seus sais de adição inorgânico ou orgânico ou de bases, em associação com veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

A requerente declara que o primeiro pedido desta patente foi apresentado na França em 26 de

Fevereiro de 1987, sob o n2. 87.C2547.

Lisboa, 25 de Fevereiro de 1988

Ar *

RESUMO ”PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS DERIVADOS DO ÁCIDO GLUTAMICO e de composiçoes farmacêuticas que OS CON TEM”

A invenção refere-se a um processo para a preparação de derivados do ácido glutâmico e dos seus sais de adição de ácido formados com ácidos inorgânicos ou orgânicos ou com bases, em todas as suas formas iso méricas ou misturas de isómeros, com a fórmula geral (I);

CO—Rg

I

Z- C-NH-CO-CH₂-CH₂-CH-COO-R₅ (I)

I I ^Y nh-r que compreende fazer-se reagir um derivado do ácido glutâmico com a fórmula (II);

CO—R.

R₂-NH-C-UX com um derivado de fórmula (III) que se pode apresentar na forma de isómeros separados ou sob a forma de misturas de isómeros;

COO-Alk„ COO-Alk,

II

R’ 2----NH---C-------- U----C -------NH„(III)

II

X’Y' que se isola, e, se desejado, se salifica, ou se submete se necessário e se desejado, a uma das reacçóes seguintes, numa ordem qualquer:

a) se X' ou Y' representa um radical COO-Alk :

í descarboxilação,

b) desprotecção das funções amino,

c) desalquilação das funções hidroxilo,

d) amidificação das funções amino livres com um aminoácido ou um pêptido constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos em que a função amino está protegida, e em seguida desprotecção desta fun ção amino,

e) esterificação ou salificação com uma base das funções carboxi,

f) salificação com ácido das funções amino.