PT88926B - Processo para a preparacao de derivados do acido aminopimelico e de compostos farmaceuticos que o contem - Google Patents

Description

A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de compostos de fórmula (I):

H02C-CH_o-U-d-R ² \

HY o₂h (I) na qual U representa um radical CH^CH^CHa no qual os traços a tracejado representam uma única ligação dupla eventual de configuração cis ou trans e a representa um átomo de hidrogénio, um radical metilo ou um grupo metileno -CH₂-, Y representa um átomo de hidrogénio ou o resíduo de um aminoácido ligado pelo carboxilo alfa ou omega ou de um peptídeo constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos em que a amina é eventualmente acilada por um ácido alifático saturado ou insaturado possuindo de 6 a 24 átomos de carbono ou alquilada por um radical alquilo possuindo de 1 a 8 átomos de carbono e R representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo, linear ou ramificado, saturado ou insaturado, possuindo no máximo 8 átomos de carbono eventualmente substituído por um ou vários átomos de halogéneo, com

LNA y

s

Ε a condição de que se Y representa um átomo de hidrogénio, um radical alanina ou prolina e se a representa um átomo de hidrogénio, U contém uma dupla ligação assim como os seus ésteres dos álcoois contendo no máximo 6 átomos de carbono, as suas amidas primárias e secundárias e os seus sais dos ácidos orgânicos ou minerais ou das bases.

U representa um radical:

-ch₂-ch₂-ch₂- ; -ch=ch-ch₂- ; -ch₂-hc=ch-^CH2

-ch₂-c: ch„ —CH„—CH—CH„— Z | Z

CH~

-CH=C-CH„I ²

CH~

-CH„—C=CH— ² I

CH„

Quando R representa um radical alquilo, trata-se de preferência do radical metilo, etilo, propilo, isopropilo ou butilo ou de um radical insaturado como o radical vinilo, alilo, etinilo ou propinilo.

Quando R representa um radical alquilo substituído por um ou vários átomos de halogéneo, trata-se de preferência de um radical alquilo substituído por um ou vários átomos de fluor ou de cloro, por exemplo, os radicais -CHF₂,-CH₂F, -CHC1₂, -ch₂ci.

Na fórmula geral I e na que se segue, o aminoácido é de preferência um alfa aminoácido e pode ser seleccionado num grupo constituído por Ala, Vai, Ival, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gin, Ser, Tr, Cis, Met Lis, Arg, Pfe, Tir,Trp, His e Pro, Nva, Nle, Hip, Orn, estando estes ácidos sob a forma D ou L assim como para Sar e Gli, todos os ácidos referidos anteriormente podem ser N-acilados ou N-alquilados no caso de um peptídeo contendo 2, 3 ou 4 aminoácidos, os quais são seleccionados no grupo constituído pelos aminoácidos anteriores.

Admite-se por convenção que os símbolos dos ácidos alfa-amino carboxílicos representam estes ácidos sob a sua configuração D ou L (por exemplo, o termo Ala significa Alanina sob a forma D ou sob a forma L).

ácido alifático saturado ou insaturado possui de 6

a 24 átomos de carbono e de preferência de 12 a 22 átomos de carbono; podem referir-se, por exemplo, os ácidos esteárico, palmitico, laurico, caprílico, mirístico, linolénico alfa ou gama, linoleico, araquidónico, ou docosopentaenóico.

Os sais de adição dos ácidos minerais ou orgânicos podem ser, por exemplo, os sais formados dos ácidos cloridrico, bromídrico, nitrico, sulfúrico, fosforico, acético, formico, propiónico, benzóico, maleico, fumarico, succinico, tartrico, cítrico, oxálico, glioxilico, aspartico, alcano-sulfónicos tais como os ácidos metano ou etano-sulfónicos, aril-sulfónicos tais como os ácidos benzeno ou para-tolueno-sulfónicos e aril-carboxílicos.

Os sais dos derivados obtidos pelo processo desta invenção podem formar-se de bases orgânicas e minerais. Entre as bases minerais, podem referir-se os hidróxidos alcalinos e alcalino-terrosos, tais como por exemplo, os hidróxidos de sódio, de potássio, de litio e de cálcio, o hidróxido de magnésio ou de amónio. Entre as bases orgânicas, podem referir-se as aminas alquiladas substituídas ou não substituídas, tais como por exemplo, a tri-metil-amina, a metil-amina a propilamina, a N,N-di-metil-etanolamina ou a tris(hidroxi-metil)-metilamina; podem referir-se igualmente aminoácidos básicos tais como, por exemplo, a lisina ou a arginina; podem ainda referir-se outras bases tais como, por exemplo, a glucosamina ou a procaína.

Entre os compostos preferenciais obtidos de acordo com esta invenção, podem referir-se os compostos de fórmula (I) na qual ϋ representa um radical:

-ch=ch-ch₂ou um radical: -CH₂-CH=CHassim como os seus ésteres de álccàs possuindo um máximo de 6 átomos de carbono, as suas amidas primárias e secundárias e os seus sais dos ácidos orgânicos ou minerais ou das bases. Podem igualmente referir-se como compostos preferenciais, os compostos nos quais Y é seleccionado no grupo dos resíduos da alanina, da prolina, da lisina e do ácido alfa ou gama glutâmico e muito especialmsnte os compostos nos quais Y representa o resíduo da ala3 nina assim como aqueles em que Y representa o resíduo da lisina.

A invenção refere-se muito partieularmente a um proces so de preparação dos compostos de fórmula (I), nos quais R representa um átomo de hidrogénio ou ainda naqueles em que R representa um radical metilo ou naqueles em que R representa um radical -CHF2, ou ainda etinilo ou vínilo.

Entre os compostos preferenciais obtidos de acordo com esta invenção, podem referir-se os produtos cuja preparação se apresenta adiante na parte experimental e muito partieularmente os produtos dos exemplos 6, 9, 13, 15 e 16. As amidas são de preferência as amidas do tipo primário RCONH₂ ou secundário RCONHalc, representando alc um radical alquilo possuindo um máximo de 8 átomos de carbono como, por exemplo, um radical metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo.

Os derivados, obtidos de acordo com o processo da presente invenção, possuem propriedades farmacológicas muito interessantes, são especiaimente dotados de importantes propriedades imunomoduladoras, partieularmente por activação dos monocitos humanos e produção de monocinos tais como o TNF (Factor de Necrose de Tumor) e o 111 (Interleucine 1) sozinhos ou na presença do IFN gama, assim como de interessantes propriedades anti-bacterianas.

Estas propriedades são ilustradas adiante na parte experimental.

Estas propriedades justificam a utilização dos produtos obtidos de acordo com esta invenção assim como os seus sais, como medicamentos.

Os medicamentos de acordo com esta invenção utilizam-se, por exemplo, no tratamento das doenças auto-imunológicas, quer se trate de danos não específicos de órgãos (póliartrite reumatoide, lupus eritematoso, anemia hemolítica, leucopenia auto-imunologica etc...) ou de doenças específicas de órgãos (tiroídite, doença de Basedow, de Addison, esclerose em placas, penfigos, recto-colite hemorrágica, determinadas nefropatias, etc...). Estes medicamentos podem igualmente utilizar-se no

tra mento de hemopatias, cancro, sida, afecções virais e microbianas, sobretudo crónicas e recorrentes (bronquite, gripe, etc...); de doenças das cavidades bocais, etc... Podem constituir adjuvantes da terapia anti-viral, da antibioterapia em relação aos germes bacterianos e as leveduras, os cogumelos (candida albicans...) ou da quimioterapia anti-cancerosa.

Podem utilizar-se igualmente no tratamento de várias deficiências imunitárias secundárias ou adquiridas observadas no decurso de afecções muito diversas: deficiências associadas a perturbações metabólicas, deficiências de origem iatrogénea, (corticoides, radiações ionizantes...), deficiências observadas nos grandes queimados, etc.

A dose normal, variável com o derivado utilizado, o individuo e a afecção em causa pode ser, por exemplo, de 0,05 mg a 50 mg por dia. Por via oral, no homem, o derivado do exemplo 8 pode adm.inistrar-se a uma dose diária de 0,5 mg a 50 mg, por exemplo para a prevenção ou tratamento de infecções bacteriana, virais ou fúngicas assim como para o tratamento de afecções bacterianas.

Entre os medicamentos preferidos de acordo com esta invenção,podem referir-se os que contêm como princípio activo, os produtos dos exemplos 6, 9, 13, 15 e 16.

Além disso, constatou-se igualmente que se obtêm resultados particularmente interessantes associando os produtos de fórmula (i) e o interferão gama para a produção pelos monocitos de monocinos do tipo TNF, IL1 por exemplo.

Os produtos de formula (I) assim como os seus sais farmacêuticamente aceitáveis podem utilizar-se para preparar composições farmacêuticas que os contêm como princípio activo.

Como medicamentos, os derivados da fórmula (I) e os seus sais de adição dos ácidos ou das bases, farmacêuticamente aceitáveis podem incorporar-se nas composições farmacêuticas destinadas à via digestiva ou parentérica.

Estas composições farmâcêuticas podem ser, por exemplo, sólidas ou líquidas e apresentarem-se sob as formas farmacêuticas comummente utilizadas em medicina humana, como, por exemplo, comprimidos, simples ou em drageias, geleias, grânulos, supositórios, preparações injectáveis, e prepararam-se segundo os métodos normais. O ou os princípios activos podem incorporar-se em excipientes normalmente utilizados nestas composições farmacêuticas, tais como talco, goma arábica, lactose, amido, estearato de magnésio, manteiga de cacau, veículos aquosos ou não, gorduras de origem animal ou vegetal, derivados parafínicos glicóis, diversos agentes humectantes, dispersantes ou emulsionantes, conservantes.

processo de preparação dos produtos de fórmula (I), objectivo desta invenção, caracteriza-se por se submeter um composto de fórmula (II):

yNH acilo alc₁O₂C-CH-U-C-X (II)

CO₂alc₂ na qual U conserva a sua significação anterior, alc^ e alc₂, idênticos ou diferentes, representam um radical alquilo possuindo um máximo de 8 átomos de carbono, X representa o radical R, ou um grupo -CC^alCg no qual alc^ representa um radical alquilo, possuindo um máximo de 8 átomos de carbono e acilo representa o resíduo de um ácido orgânico possuindo um máximo de 8 átomos de carbono, à acção de um halogeneto de alcano-sulfonilo ou de areno-sulfonilo de fórmula (III) :

HalSO₂alc₄ (III) na qual alc^ representa um radical alquilo possuindo um máximo de 8 átomos de carbono ou um radical arilo possuindo um máximo de 14 átomos de carbono, depois à acção de um agente de redução para se obter o composto de fórmula (IV) :

^NH acilo alc₁O₂C-CH₂-U-C-X (IV)

CO₂alc₂ que se submete, ss se desejar, à totalidade ou a uma parte apenas das operações seguintes segundo uma ordem qualquer:

a) desprotecção da função amina,

b) hidrólise das funções ésteres, depois descarboxilação quando X representa um radical -CC^alc^,

c) redução da dupla ligação,

d) esterificação ou salificação por uma base, das funções carboxi,

e) salificação das funções amino por um ácido,

f) amidificação das funções aminadas livres por um aminoácido ou um peptídeo constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos em que a função aminada é protegida depois desprotecção desta função aminada.

Numa forma de realização preferencial do processo desta invenção:

- 0 halogeneto de alcano-sulfonilo ou de areno-sulfonilo é o cloreto de metano^sulfonilo utilizado em presença de um agente de condensação como a piridina ou num solvente neutro como o cloreto de metileno em presença de uma base como a tri-etilamina,

- 0 agente de redução pode ser um metal como o zinco na presença de iodeto de sódio, num solvente alcalino,

- A desprotecção da função amina realiza-se de preferência por acção de um ácido mineral diluído tal como o ácido clorídrico ou de um ácido orgânico tal como o ácido tri-fluoro-acético em álcool benzílico na presença de um agente tal como o cloreto de acetilo,

- A hidrólise das funções ésteres realiza-se de preferência por saponificação com o auxílio de una base mineral como a soda ou a potassa seguida, se for o caso, de um tratamento por uma resina ácida.

Quando X representa um grupo -CC^alc^, a hidrólise da função éster é seguida por uma descarboxilação realizada de preferência com o auxílio de um ácido orgânico tal como o ácido acético; pode igualmente realizar-se com o auxílio de um ácido mineral tal como o ácido clorídrico 12N e aquecimento num solvente tal como o etanol. Pode igualmente realizar-se em conjunto com o tratamento pela resina ácida. Pode também realizar-se uma descarboxilação directa pelo procedimento de krapcho ou de Keinan et Eren (J. Org. Chem 51 3165-3169 (1986)).

·»

- Α amidificação realiza-se na presença de agentes de condensação como a di-ciclo-hexil-carbo-di-imida, o N,N¹-carbonil-di-imidazol ou amidas bis-alquilicas de ácidos sulfurados tais como N,N'-sulfinil-bis(di-metil-amina), SO(N(CH₃) ₂· ^{ou a}i^nda por formação de anidrido misto com o cloroformiato de isobutilo.

processo caracteriza-se particularmente por se efectuar sobre o derivado de fórmula:

alc₁O₂C-CH₂-U-CçX (IV)

CO₂alc₂ na qual alç^, ^a^^c2' ^acií° ^{e x sa0} definidos como anteriormente, as operações seguintes e nesta ordem:

a) desprotecção da função aminada,

b) hidrólise das funções ésteres, para se obter o composto de fórmula (IA):

X^NH2

HO₂C - CH₂ - U - C^- X (IA)

-°2^H na qual X¹ representa o radical R ou o grupo -CO₂H, produto (IA) que, se se desejar, se amidifica por um aminoácido ou por um peptídeo constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos cuja função aminada é protegida, submetida, se necessário, a uma descarboxilação da função X¹, depois desprotegida a função aminada do produto obtido que se reduz, se se desejar.

Os diferentes passos deste processo realizam-se de acordo com as formas de realização preferênciais descritas anteriormente.

De acordo com uma variante do processo anterior, o processo desta invenção caracteriza-se por se submeter o composto de fórmula:

(V)

na qual alc₅ representa um radical alquilo possuindo um máximo de 8 átomos de carbono e A representa um átomo de hidrogénio ou um radical metilo, à acção de um composto de fórmula (VI):

II

H-C-CO„alc_r (VI) z o na qual alc₆ representa um radical alquilo possuindo um máximo de 8 átomos de carbono, para se obter o composto de fórmula (VII):

que se submete à acção de um halogeneto de alcano-sulfonilo ou de areno-sulfonilo de fórmula (VIII):

HalSO₂alc₇ (VIII) na qual alc₇ representa um radical alquilo possuindo um máximo de 3 átomos de carbono ou um radical arilo possuindo um máximo de 14 átomos de carbono, para se obter o composto de fórmula (IX):

que se submete à acção de um nitreto alcalino, para se obter o composto de fórmula (X):

que se reduz e submete-se o produto assim obtido a uma hidrólise aquosa, para se obter o composto de fórmula (XI):

que se submete, se se desejar, à totalidade ou apenas a uma parte das operações seguintes numa ordem qualquer:

a) hidrólise das funções éster

b) amidificação das funções amino livres por um aminoácido ou um peptídeo constituído por 2, 3 ou 4 aminoácidos cuja função amino é protegida, depois desprotecção desta função amino,

c) redução da dupla ligação,

d) esterificação ou salificação, por uma base, das funções carboxi,

e) saliEicação por um ácido das funções amino.

Numa forma de realização preferencial:

- a condensação dos compostos (V) e (VI) realiza-se na presença de cloreto férrico ou de tetracloreto de titânio ou de qualquer outro ácido de Lewis conhecido;

- o halogeneto de alcano-sulfonilo ou de areno-sulfonilo é o cloreto de metano-sulfonilo utilizado na presença de um agente de condensação tal como a piridina ou de um solvente neutro como o cloreto de metileno na presença de uma base como a tri-etil-amina;

- o nitreto alcalino é o nitreto de sódio; pode igualmente utilizar-se o di-fenil-fosforil-azida (pela passagem directa de álcool no nitreto) na presença de tri-fenil-fosfina e azo-di-carboxilato de etilo ou ftalimida de potássio em di-metil -formamida;

- o agente de redução que se faz reagir com o produto de fórmula (X) é a tri-fenil-fosfina, pode-se igualmente proceder por hidrogenação catalítica, por exemplo, na presença de paládio sobre carvão activado envenenado pela quinoleína. 0 agente de hidrólise da ftalimida pode ser uma base mineral ou a hidrazina;

- as operações seguintes a que se submete o composto de fórmula (XI) realizam-se de preferência de acordo com as formas de realização preferenciais indicadas anteriormente para os diferentes panos de:

- hidrólise das funções ésteres

- amidificação das funções amino livres,

- redução,

- esterificação e salificação

Os exemplos seguintes ilustram a invenção sem contudo a limitar.

produto de partida de exemplo 1 preparou-se como se segue:

1-(formilamino)-5-hidroxi-3-metileno-l,1,5-pentano tri-carboxilato de tri-etilo.

Fase 1 : 2-(formilamino)-(2-metil-2-propenil)-propano-dioato de di-étilo.

Adicionam-se 40 g de carbonato de potássio, 0,380 g de catalisador éter coroa (18 coroa 6) e 39,9 g de cloro-metil-propeno a uma solução de 30 g de formamida-malonato de etilo em 300 cm³ de acetonitrilo, agita-se por refluxo durante 3 horas, filtra-se, seca-se, arrefece-se a 0°/5°C, recupera-se em .10 cm³ de éter isopropilico, filtra-se, lava-se com éter isopropílico, seca-se sob pressão reduzida e obtêm-se 25,2 g do produto pretendido. P.F - 72°C.

Fase 2: l-(formilamino)-5-hidroxi-3-metileno 1,1,5-pentano-tri-carboxilato de tri-etilo.

Adiciona-se gota a gota, durante 10 minutos, uma solução de 26,5 g de glioxilato de etilo em 180 cm³ de cloreto de metileno, a uma solução de 84 g de cloreto férrico em 180cm³ de cloreto de metileno, agita-se durante uma hora, arrefece-se a -20'^>C, adiciona-se, gota a gota, durante vinte minutos, uma solução de 34 g de produto tal como obtido na fase 1 em 180 cm³ de cloreto de metileno e agita-se durante uma hora a -20°C. Verte-se sobre 300 cm³ de água gelada, extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com ácido clorídrico 2N depois com solução

salina, seca-se sob pressão reduzida e obtêm-se 56,5 g do produto pretendido. P.F * 68°C depois de purificação por cromatografia sobre sílica (eluente: acetato de etilo) ciclo-hexano 6:4).

Exemplo 1: Ácido 2-amino-4-metileno--heptano-dióico.

Fase A : l-(formilamino)-3-metileno-l,l,5-pentano-tri-carboxilato de tri-etilo.

Dissolvem-se 46 g do produto obtido na preparação atrás descrita em 500 cm³ de piridina, arrefece-se a 0°C e adicionam-se, gota a gota, 12 cm³ de cloreto de metano-sulfonilo, agita-se durante 3 horas à temperatura ambiente, verte-se em 400 cm³ de ácido clorídrico 4N gelado e 200 cm³ de cloreto de metileno, extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com o ácido clorídrico 4N, com uma solução saturada de bicarbonato de sódio depois com solução salina, seca-se e evaporasse a seco sob pressão reduzida. Obtém-se um produto A.

Deixa-se em refluxo durante 6 horas uma suspensão contendo 10,8 g de produto A, 100 cm³ de di-metoxi-etano, 10cm³ de água, 18,5 g de iodeto de sódio e 16 g de zinco em pó.

Arrefece-se a suspensão, filtra-se o precipitado, adiciona-se água, extrai-se com cloreto de metileno, seca-se, filtra-se e seca-se. Obtêm-se 8,4 g de um óleo que se purifica por cromatografia sobre sílica eluído com uma mistura de ciclo-hexano-acetato de etilo (5:5). Obtêm-se 5,75 g do produto pretendido.

Espectro RMN CDCl^ (ppm)

H dos grupos CO₂CH₂CH₃: 1,25 (t) 1,27 (t)

H do grupo formilo: 8,18 H do grupo am.ino : 7,0

H do CH₂ na posição 2 do pentano : 3,14 (s)

H do metileno substituído na posição 3 do pentano

4.12 e 4.26

4.8 e 4.9

H dos CH_? nas posições 4 e 5 do pentano 2,45

ch₂-ch

2,2

Fase B : l-acino-3-metileno-l,l,5-pentano-tri-carboxilato de tri-etilo.

Mantém-se em refluxo, sob agitação durante 35 minutos, uma mistura de 6 g de produto preparado na fase anterior, 60 cm³ de etanol e 6 cm³ de ácido clorídrico concentrado. Evapora-se a maior parte do etanol. Arrefece-se, adiciona-se água, neutraliza-se com carbonato ácido de sódio. Extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com solução salina, seca-se, filtra-se e seca-se sob pressão reduzida.

Obtêm-se, assim, 5,2 g de um óleo de que se faz a cromatografia sobre sílica eluido pela mistura ciclo-hexano-acetato de etilo (7:3).

Espectro RMN CDCl^ em ppm

H dos grupos CO_?CH₂CH₃: 1,25 (t) e 1,28 (t)

4,12 (q) e 4,23 (q)

H do grupo NH₂ : 2,04 (s)

H do CH₂ na posição 2 do pentano : 2,80 (s)

H do metileno substituído na posição 3 do pentano : 4,99 e 4,95 H dos CH₂ nas posições 4 e 5 do pentano : 2,28 m e 2,45 m Fase C : ácido 2-amino 4-metileno-heptanodióico.

Adicionam-se, gota a gota, 9,9 cm³ de uma solução de hidróxido de sódio N a uma solução contendo 945 mg de 1-amino

3-metileno-l,1,5-pentano-tri-carboxilato de tri-etilo preparado na fase anterior e 10 cm³ de etanol. Mantém-se a mistura de reacção sob agitação durante 16 horas à temperatura ambiente e seca-se sob pressão reduzida. Recupera-se o resíduo em 10cm³ de água e adicionam-se 2 cm³ de ácido acético puro. Mantém-se a mistura de reacção sob agitação a 80°C durante duas horas e seca-se. Obtêm-se 830 mg de um produto que se purifica por passagem sobre resina Dowex 50 W x 8 (eluente : água e depois amoníaco 0,4N). Depois de passagem sobre celulose de 290 mg do resíduo (sluente : metanol, água (9:1)), obtêm-se 160 mg do produto pretendido.

Espectro RMN P₂O em ppm

H do CH na posição 2 do ácido heptanodióico : 3,89 (dd J=4 e 10)

Η do CH„ na posição 3 do ácido heptanodióico : 2,51 (dd) 2,77 (dd)

H do metileno substituido na posição 4 do ácido heptanodióico : 5,00 e 5,02

H dos CH₉ nas posições 5 e 6 do ácido heptanodióico : 2,3 a 2,5 ppm

Exemplo 2 : Ácido 2-(L-alanilamino)-4-metileno-heptanodióico.

Fase A : 1- [DM1,1 -di-metil-étoxi-carbonil)-L-alanil^-amino^-3-metileno-l,l,5-pentano-tri-carboxilato de tri-etilo.

Arrefece-se a 0°C uma solução contendo 945 mg do produto preparado na fase B do exemplo, 1,30 cm³ de di-metoxi-etano, 621 mg de Boc-L-alanina e adicionam-se, em pequenas porções, durante 10 minutos, 678 mg de di-ciclo-hexil-carbo-di-imida. Deixa-se sob agitação a 0°C durante 16 horas. Filtra-ss, e seca-se o filtrado sob pressão reduzida. Faz-se a cromatografia sobre sílica eluída com a mistura ciclo-hexano-acetato de etilo (7:3). Obtêm-se 1,3 g do produto pretendido. alfa_D = -22° +2° c = 0,7 % CH₂C1₂

Espectro RMN CDCl^ em ppm H dos grupos CO₂CH₂CH₃ :

1,25 (t) - 1,26 4,05 a 4,35 (t)

H dos CHg de /^H3

-c-_Ch₃ ^CH3

H do CH do grupo L-alanilo

H do CH₃ do grupo L-alanilo

H do CH₂ na posição 2 do pentano

H do metileno substituido na posição 3 do H dos CH₂ nas posições 4 e 5 do pentano .

1,45 (s)

4,05 a 4,35 ppm 1,35 (d)

3,12 pentano : 4,77 e 4,86 2,23 - 2,40

Fase B : Ácido 2-(L-alanil-amino)-4-metileno-heptanodióico • · o

Adicionam-se, a 0 C gota a gota, 3,9 cm³ de uma solução de hidróxido de sódio N a uma solução contendo 580 mg do produto preparado na fase A e 5 cm³ de etanol, Mantém-se a mistura de reacção sob agitação durante 4 horas. Seca-se sob pressão reduzida. Recupera-se o resíduo em etanol. Enxuga-se o sal formado, lava-se e seca-se. Obtêm 580 mg de um produto que se dissolve em 2 cm³ de água.

Adiciona-se à solução obtida resina Amberlyst 15 até pH = 3. Filtra-se, lava-se com água e seca-se sob pressão reduzida. Re cupera-se o resíduo em 2,5 cm³ de água e 4,5 cm³ de ácido acético. Mantém-se a mistura de reacção sob agitação durante 2 horas a 80°C e seca-se sob pressão reduzida. Obtêm-se 370 mg de uma resina que se purifica por cromatografia sobre sílica, eluida pela mistura propanol, água (8:2). Obtêm-se 250 mg da amina bloqueada sob a forma de carbamato de t-butilo a qual se adicionam 2,5 cm³ de cloreto de metileno e 1 cm³ de ácido tri-fluoro-acético. Deixa-se 3 horas sob agitação à temperatura ambiente e seca-se sob pressão reduzida. Purifica-se o resíduo obtido por cromatografia sobre sílica eluida pela mistura propanol-água (8:2). Depois de passagem sobre resina Dowex 50 W x 8, elui-ss por 250 cm³ de água destilada depois com amoníaco 0,4 e obtem-se 12o mg do produto pretendido.

alfa_n = +3° + 1,5 (c = 0,6% H_o0)

Espectro RMN D^O em ppm

H do CHg do grupo L-alanilo : 1,49 (d) desdobrado

H do CH do grupo L-alan.ilo : 4,09 (q) desdobrado

H do CH na posição 2 do ácido heptanodióico : 4,36

H do metileno substituído na posição 4 do ácido heptanodióico : 4,85 e 4,89

H dos CH₂ nas posições 5 e 6 do ácido heptanodióico : 2,2 a 2,7

Exemplo 3 : Ácido 2- £(gama-D-glutamil)amino3-4-metileno-heptano dióico.

Fase A : 3-metileno-l-Q^0-metil-N-(tri-fluoro-acetil)gama-D-glutami]~[aminq2l,l,5-pentano-tri-carboxilato de tri-etilo.

Arrefece-se a 0°C, uma solução contendo 1,27 g do pro duto preparado na fase B do exemplo 1, 50 cm³ de di-metoxi-etano e 1,22 g de (N-tri-fluoro-acetil)-D-glutamato de 1-metilo. Adicionam-se em pequenas porções 1,06 g de di-ciclo-hexil-carbo -di-imida e deixa-se durante 16 horas sob agitação a 0°C. Filtra-se o precipitado formado e seca-se sob pressão reduzida. Obtêm-se 2,4 g de resíduo ao qual se faz cromatografia sobre sílica eluida pela mistura ciclo-hexano-acetato de etilo (6:4). Obtêm-se 1,6 g do produto pretendido.

(rf. = 0,3) alfa = +11°5 +1,5°

ÍC - 0,65% CH₂31₂)

Espectro RMN CDCl^ em ppm

H dos grupos CO^HpCH^:: 1,13 a 1,31

4,11 (q) e 4,25 (q)

H do CH₃ de CO₂CH₃ : 3,77 (s)

H de CH do gama-glutamilo : 4,50 (dt)

H do CH₂ na posição 2 do pentano : 3,11 (s)

H do metileno substituído na posição 3 do pentano : 4,75 e 4,87 H dos CH₂ nas posições 4 e 5 do pentano : 2,05 a 2,50.

Fase B : Ácida 2-Qgama-D-glutamil)amino2-4-met.ileno-heptanodióico.

Adicionam-se a 0°C, 11,8 cm³ de hidróxido de sódio N a uma solução contendo 1,1 g do produto preparado na fase A e 50 cm³ de etanol. Deixa-se a mistura de reacção sob agitação durante 16 horas. Seca-se e obtém-se um resíduo que se recupera com 10 cm³ de água e 2 cm³ de ácido acético puro. Mantém-se a mistura sob agitação durante 4 horas a 80°C. Seca-se sob pressão reduzida. Obtêm-se 1,8 g de um produto que se purifica sobre sílica eluida pela mistura etanol-amoníaco (90:10). Isolam-se 510 mg do produto pretendido bruto que se purifica recupera.ndo-o em etanol até à obtenção do precipitado branco. Enxuga-se e seca-se sob pressão reduzida, Obtém-se um produto que se dissolve em água, fil.tra-se e liofiliza-se. Depois de 2 liofitizações sucessivas obtêm-se 280 mg do produto pretendido.

alfa = -12°+ 1,5° (c - 0,7% H₂0)

Espectro RMN Ρ,-,0 em ppm

H do metileno substituído na posição 4 do ácido heptanodióico : 4,86 - 4,88

H do CH na posição 2 do ácido heptanodióico : 4,33

H do CH do gama-D-glutamilo : 3,76

H dos CH₂ nas posições 5 e 6 do ácido heptanodióico : 2,05 a

2,70

Exemplo 4 : Ácido 2-amino-3-heptanodióico.

Fase A : l-(form.il-amino)-2-penteno-l,l,5-tri-carboxilato de tri-etilo.

Adicionam-se 4,2 g de iodeto de sódio e 3,7 g de zinco a uma solução de 2,4 g do produto obtido na fase A do exemplo 1. Faz-se o refluxo do meio de reacção em di-metoxi-etano na presença de água sob agitação durante 2 horas. Adicionam-se 50 ml de água. Filtra-se e extrai-se com cloreto de metileno. Seca-se sob pressão reduzida. Obtêm-se 2,3 g de produto bruto ao qual se faz a cromatografia sobre sílica eluida pela mistura ciclo-hexano-acetato de etilo (5:5). Obtêm-se assim

1,6 g do produto pretendido.

Espectro RMN

H do formilo : 8,1 ppm

H etilénico na posição 2 : 6,0-6,3 ppm

Ή etilénico na posição 3 : 5,7 ppm

H dos CH₂ nas posições 4e5 : 2,3 a 2,5 ppm

Fase B : Ácido 2-amino-3-heptenodióico.

Adicionam-se 0,25 cm³ de ácido clorídrico 12N a uma solução contendo 0,5 g do produto preparado na fase A em 5 cm³ de etanol. Faz-ss o refluxo do meio de reacção durante uma hora. Deixa-se arrefecer à temperatura ambiente e adicionam-se 20 cm³ de água. Extrai-se o etanol sob pressão reduzida. Neutraliza-se com uma solução de bicarbonato de potássio a 10%. Extrai-se com acetato de etilo. Secam-se as fases orgânicas sobre sulfato de magnésio e evaporam-se a seco. Obtêm-se 0,4 g de produto bruto.

Dissolvem-se 0,34 g do produto assim obtido em 10 cm³ de etanol a 0°c e adicionam-se, gota a gota, 3,2 cm³ de uma solução de hidróxido de sódio N. Deixa-se o meio de reacção sob agitação durante 16 horas à temperatura ambiente. Seca-se. Recupera-se o resíduo em 5 cm³ de água. Adicionam-se 0,2 cm³ de áciio acético. Deixa-se ficar a solução obtida durante 16 horas sob agitação à temperatura ambiente e seca-se.

»r

Purifica-se o produto obtido por passagem sobre celulose (eluentes: propanol, água 9:1, 8:2 e 7:3), filtração sobre gel de impregnação, passagem sobre resina permuiadora de iões. Obtêm-se 0,110 g do produto pretendido.

Espectro RMN D^O

H do CH na posição 2 : 4,20

H etilénicos : 5,59 dd j = 8 e 15,5 5,98 d j = 15,5 e 6

H âos CH₂ nas posições 5 e 6 : 2,25 a 2,42

Exemplo 5 : Âc.ido 6-amino-3-heptenodióico.

Fase A : 6-hidroxi-3-heptenodioato de (7) etilo e de (1) metilo.

Adiciona-se, durante 15 minutos, a 0°/+6°C, uma solução de 40 g de 4-pentenoafo de metilo em cloreto de metileno, a ama suspensão contendo 71,5 g de glioxilato de etilo em um litro de cloreto de metileno e 115 g de cloreto férrico. Deixam-se em contacto durante 15 minutos a 0°/+5°C. Permite-se elevar à temperatura ambiente. Verte-se sobre gelo. Decanta-se e lava-se a fase com o ácido clorídrico N. Seca-se sobre sulfato de magnésio. Evapora-se e obtêm-se 84 g de produto bruto.

Purifica-se sobre sílica (eluente : ciclohexano - acetato de etilo (7:3).

Obtém-se o produto pretendido. Rendimento 70%.

Fase B : 6-^(metil-sulfonil)oxi2-3-heptenodioato de (7) etilo e de (1) metilo.

Dissolvem-se 1,5 g do produto preparado na fase A em 15 cm³ de cloreto de metileno à temperatura ambiente. Adicionam-se 15,6 cm³ de piridina e 0,7 cm³ de cloreto de metano-sulfonilo. Agita-se durante 16 horas à temperatura ambiente. Verte-se lentamente o meio de reacção sobre uma solução de ácido clorídrico 6N adicionado com cloreto de metileno. Lava-se com uma solução de carbonato ácido de sódio. Seca-se e evapora-se a seco. Purifica-se o resíduo por cromatografia sobre sílica eluido com a mistura cloreto de metileno - acetato de etilo (9:1).

Recolhem-se e secam-se as fracções contendo o produto desejado. Obtêm-se 0,3 g do produto pretendido.

Espectro RMN (ppm)

H de SO2CH3 : H de CO„CH„CH„ :	3,15 1,31 e
	2 —2 —J
H	do CH na posição 6 :	5,05
H	de CH2 na posição 5 :	2,55 a
H	etilénicos :	5,56 e
H	de CO2CH3 :	3,68
H	do CH2 na posição 2 :	3,08
Fase C : 6-azido 3-heptenodioato

4,26

2,8

5,74 de (7) etilo e de (1) metilo

Dissolvem-se 1,6 g do produto preparado na fase anterior em 20 cm³ de di-metil-formamida, adicionam-se 0,39 g de nitreto de sódio NaNg e agita-se durante 16 horas à temperatura ambiente. Evapora-se a di-metil-formamida à temperatura máxima de 35°C e recupera-se o resíduo obtido em cloreto de metileno. Lava-se com uma solução de carbonato ácido de sódio a 10% depois com solução salina. Seca-se e evapora-se a seco. Obtêm-se 1,25 g de resíduo ao qual se faz a cromatografia sobre sílica eluida pela mistura acetato de etilo-ciclo-hexano (3:7). Secam-se as fracções que interessam. Obtêm-se 1,03 g do produto pretendido. Rf. = 0,3 numa mistura ciclo-hexano - acetato de etilo (8:2).

Espectro RMN

H etilénicos H de CO₂CH₃ H do CH₂ na posição 2 H do CH₂ na posição 5 H de CO₂Et

H do CH na posição 6

5,55	e 5,75	PPm
3,69	ppm
3,08	ppm
2,45	a 2,65	PPm
1,31	ppm e >	1,25 ppm
3,88	Ppm

Fase D : 6-amino 3-heptenodióico de (7) etilo e de (1) metilo.

Dissolvem-se 21,1 g do em 350 cm³ de tetra-hidrofurano.

produto obtido na fase anterior Arrefece-se a 0QC e adicionam19

-se 27,5 g de tri-fenil-fosfina. Agita-se à temperatura ambiente durante 5 horas. Adicionam-se 23,6 cm³ de água e agita-se à temperatura ambiente durante 16 horas. Evapora-se o tetra-hidrofurano. Recupera-se o resíduo em cloreto de metileno e extrai-se duas vezes com uma solução de ácido clorídrico 2N. Neutraliza-se com carbonato ácido de sódio e extrai-se com cloreto de metileno. Lava-se com solução salina, seca-se e evapora-se a seco. Obtêm-se 16,2 g do produto pretendido.

Rf. = 0,25 em acetato de etilo : etanol (9:1).

Espectro RMN CDCl^

H	de	nh2			: 1,61	ppm
H	do	GH :	na	posição 6	: 3,51	ppm
H	de	C02	Et		: 1,28	e 4,18	ppm
H	do	ch2	na	posição 5	: 5,52	e 5,68	ppm
H	do	ch2	na	posição 2	: 3,07	ppm.

Fase E : Ácido 6-amino-3-heptenodióico.

Dissolve-se 1 g do produto obtido na fase anterior em 10 cm³ de etanol. Adicionam-se 5,1 cm³ de uma solução de hidróxido de sódio 2N. Agita-se durante 16 horas à temperatura ambiente. Evapora-se a seco sob pressão reduzida. Desalcaliniza-se o produto obtido sobre resina Dowex 50 W x 8. Evaporam-se a seco as fracçoes que contêm o produto desejado. Obtém-se um produto que se liofilisa em 150 cm³ de água bi-destilada, filtrada. Obtêm-se 660 mg do produto pretendido. Rf.=0,5 numa mistura BuOH-AcOH-H₂O (4:2:2).

Espectro RMN D^O

etilénicos	5,46	ppm - 5,80 ppm
do CH2 na posição 5	2,49	a 2,76 ppm
do CH na posição 6	3,79	ppm
do CH2 na posição 2	2,98	ppm

Exemplo 6 : Ácido 6-(L-alanilamino)-3-heptenodióico.

Fase A : 6-^N-(l,l-di-metil-etoxi)carbonilJ-L-alanil-amino^-3-heptenodioato de (7) etilo e de (1) metilo.

Dissolvem-se 3,9 g do produto obtido na fase D do exemplo 5 em 200 cm³ de di-metoxi-etano. Adicionam-se 3,63 g de N-Boc-L-alanina. Arrefece-se até -5°, 0°C. Adicionam-se 3,99 g de di-ciclo-hexil-carbo-di-imida e agita-se vigorosamente durante 16 horas a 0°C. Filtra-se e evapora-se a seco. Recupera-se em dimetoxi-etano e filtra-se. Evapora-se a seco e recupera-se em cloreto de metileno. Lava-se com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, depois com solução salina, seca-se e evapora-se a seco. Obtêm-se 7,7 g do produto pretendido bruto ao qual se faz cromatografia sobre sílica eluída pela mistura ciclo-hexano - acetato de etilo (7:3).. Obtêm-se 5,4 g do produto pretendido. alfa^ = -18,5 +1° (c = 1,6% ch₂ci₂)

Espectro RMN CDCl^

H	dos	CH3 de C(CH3)3	: 1,45	ppm
H	de	CO2Et 1	: 1,43	e 4,20	ppm
H	de		: 2,4 a	2,7 p	pm
H	do	CH2 na posição 2	: 3,05	ppm
H	de	co2ch3	: 3,17	e 6,68	ppm
H	eti	lénicos	: 5,42	e 5,62	ppm
H	do	CHj do fragmento	L-alanilo	: 1,	36 e

Fase B : Ácido 6-(L-alanil-amino)-3-heptenodióico.

Dissolvem-se 790 mg do produto obtido na fase A em 20 cm³ de etanol à temperatura ambiente.

Arrefece-se em banho de gelo e adicionam-se 2,4 cm³ de uma solução de hidróxido de sódio 2N. Agita-se à temperatura ambiente durante 2 horas e 30 minutos. Ajusta-se a pH 6 com uma solução concentrada de ácido clorídrico e evapora-se a seco. Recupera-se o resíduo obtido em 10 cm³ de dioxano e adiciona-se 1 cm³ de uma solução de ácido clorídrico 12N.

Agita-se a suspensão obtida durante 30 minutos a 70°C Filtra-se o precipitado e evapora-se a seco o filtrado. Recupera-se o resíduo em 2 cm³ de água, ajusta-se o pH a 6 com hidróxido de sódio N, passa-se sobre resina permutadora de iões (H ) elui-se com água depois com amoníaco 0,5N e evaporam-se a seco as fracções contendo o produto desejado. Obtêm-se 420mg de um produto que se recupera em água bi-destilada, filtrada e

liofiliza-se. Obtêm-se 370 mg do produto pretendido.

Rf. = 0,5 eluido com a mistura BuOH-AcOH-f^O (4:2:2). alfa_D = -4° + 1° (c = 1% HC15N)

Espectro RMN CD^OD (ppm)

etilénicos	: 5,42 - 5,65
de HO2C x	: 2,9
do CH2 na posição 2	: 2,37 - 2,64
do CH na posição 6	: 4,29
do CH do fragmento L	-alanilo : 3,
do CH_ do fragmento	L-alanilo: 1,

Exemplo 7 : 6- [[»-!> -oxo-octadecil)-L-alanilJ -O-metil-gama-D-glutamil^amincQ-S-heptenodioato de (7) etilo e de (1) metilo.

Arrefece-se a 10-12°C uma solução contendo 1,99 g de [N-(l-oxo-octadecil)-L-alanilJ-D-glutamato de 1-metilo e 70 cm³ de tetra-hidrofurano anidro. Adicionam-se 1,16 cm³ de tri-etil -amina e 0,6 cm³ de cloroformiato de isobutilo. Deixa-se sob agitação a 10 - 12°C durante 35 minutos e adicionam-se 0,86 g do produto obtido na fase D do exemplo 5 e 10 cm³ de tetrahidrofurano anidro.

Deixa-se sob agitação à temperatura ambiente durante 2 horas. Adiciona-se gelo, extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com uma solução de ácido clorídrico N e solução salina, seca-se e evapora-se a seco sob pressão reduzida. Obtêm-se 2,9 g do produto pretendido bruto que se purifica por cromatografia sobre sílica eluido pela mistura Cf^C^ : MeOH (98:2). Obtêm-se 1,8 g do produto pretendido.

P.F = 110°C.

alfa_D = -14,5° j- 2° CH₂C1₂ c= 0,5%

Espectro RMN CDC1

- 0,88 (t)

-1,25

- 1,38 - 1,39 :

- 1,9 a 2,4

- 2,55 :

₃ (ppm)

CHg da cadeia (CH_O) e CH_O etilo 2 n 3 ch₃-ch (ΟΗ₂)₂-^οΗ e CH₂-C=O =c-ch₂-ch

3,06	: =C-CH2-C=O
3,65 - 3,68	e 3,73 : CO2CH3
4,21	: -CH2-CH3
4,4 a 4,7	: N-CH-C (3H) “ II 0
5,46 e 5,67	: os H etilénicos (J = 15Hz)

- 6,14 - 6,15

- 6,50 - 6,86

- 7,32 - 7,26 os NH-C=O

Exemplo 8 : Ácido 6-[l-oxo-octadecil)-L-alanil^gama-D-glutamilJamino2-3-heptenodióico (sal de sódio).

Adicionam-se, a 0°C, 3,6 cm³ de uma solução de hidróxido de sódio N a uma solução contendo 800 mg do produto obtido no exemplo 7 e 15 cm³ de etanol. Mantém-se a mistura de reacção sob agitação durante 2 horas à temperatura ambiente. Seca-se sob pressão reduzida sem se aquecer. Recupera-se o resíduo

obtido	em água, filtra-se e liofiliza-se. Obtêm-se 775
produto	pretendido fundindo a 200°C (P.F. pouco nítido)
alfa =	-26° +2° (c = 0,5% H2O)
Espectro RMN DnO (PPM)
- 0,89	(t) : CH3 da cadeia
- 1,40	(t) : CH3-CH
- 1,9 a	2,5 : (CH2)2-CH ; C=C-CH2-CH ; -CH_2-C=O
- 2,93	(d, J =7) : C-CHO-C=C II 2
- 4,38	II 0 (q, J=7) : N-CH-C=O |
- 4,17	CH3 (m) : os outros N-CH-C=O
- 5,46	: H etilénicos Δ(Ε) J - 15Hz
5,67
Exemplo	9 : Ácido 6-(L-lisil-amino)-3-heptenodióico.
Fase A	: N,N1-bis Ql ,1-di-metil-etoxi)carbonil^ -L-Lisina

Dissolvem-se 1,46 mg de lisina numa solução de o,4 g de hidróxido de sódio em pastilhas em 1 cm³ de água. Adicionam23

-se 2 cm³ de terc-butanol. Introduz-se, gota a gota, o (Boc)₂0. Agita-se a suspensão obtida durante 4 horas à temperatura ambiente. Dilui-se em água, ajusta-se a pH 4 por intermédio de uma solução de hidrogeno-sulfato de potássio (10 g/cm³ de água). Extrai-se com acetato de etilo, lava-se com solução salina até à neutralidade, seca-se e evapora-se a seco. Obtêm-se 2,35 g do produto pretendido.

alfa_D = +12° + 1° (c = 1% H₂0)

Espectro RMN CPC1₃

H dos grupos terc-butilos : 1,45 - 1,47 - 1,52 ppm

H do CH₂ na posição 6 da lisina : 3,12 ppm

H do CH na posição 2 da lisina : 4,12 e 4,30 ppm

Fase B : 6 [[_N ,N'-bis Q( 1,1-di-metil-etoxi)carbonilj-L-lisilJ aminoj 3-heptenodioato de (7) etilo e de (1) metilo.

Dissolvem-se 1,74 g do produto preparado na fase A e 1,076 g de 6-amino-3-hepteno-dioato de (7) etilo e de (1) metilo, em 80 cm³ de di-metoxi-etano. Arrefece-se a 0°C e introduz-se uma solução de 1,03 g de di-ciclo-hexil-carbo-di-imida em 20 cm³ de di-metoxi-etano. Agita-se durante 16 horas a 0°C. Filtra-se e seca-se o filtrado. Obtêm-se 2,9 g do produto pretendido bruto que se purifica por cromatografia sobre sílica eluído pela mistura acetato de etilo - ciclo-hexano (1:1). Secam-se as fraeções que contêm o produto e obtêm-se 1,78 g do produto pretendido.

alfa_D = - 14° + 2° (c = 0,65% CH Cl )

Espectro RMN (ppm)

H	de	c(ch3)3	1,44	- 1,45
H	de	co2ch3	3,68	- 3,69
H	de	co2ch2ch3 :	4,20	(m)
H	de	CO2CH2CH3 :	1,28	(t)
H	do	CH2 na posição	2 do	fragmento	heptenodióico : 3,	05	(d)
H	do	CH2 na posição	5 do	fragmento	heptenodióico : 2,	55	(m)
H	dos	CH na posição	2 do	fragmento	lisilo e na posição	6	do

fragmento heptenodióico : 4,1-4,60.

• Fase C : Sal de sódio do Ácido 6-Ν'-bis-£(1,1-di-metil-etoxi . carbonilj -L-lisil^ amino^ -3-heptenodióico.

Adicionam-se a 0°C, 6 cm³ de uma solução de hidróxido de sódio N a uma solução de 1,47 g do produto preparado na fase anterior e 25 cm³ de etanol. Agita-se durante uma hora e trinta minutos a 0°C e depois duas horas e trinta à temperatura ambiente. Evapora-se à temperatura ambiente sob pressão reduzida. Obtêm-se 1,57 g do produto pretendido.

Espectro RMN D^O (ppm)

H dos C(CH₃)₃ : 1,43 - 1,45

H dos CH2 na posição 6 dos fragmentos lisilo : 3,08 (t)

H dos CH na posição 2 dos fragmentos lisilo e na posição 6 do fragmento heptenodióico : 4,03 (m) - 4,22 (m)

H etilénicos : 5,14 (m) - 5,60 (m)

H do CH₂ na posição 2 do fragmento heptenodióico : 2,93 (d)

Fase D : 6-^£N,N'-bis Q( 1,1-di-metil-etoxi) carbonil^-L-lisil^ aminoJ-3-heptenodioato de (7) etilo e de (1) metilo.

Dissolvem-se 1,16 g do produto obtido na fase anterior em 17 cm³ de dioxano. Adicionam-se 1,7 cm³ de uma solução de ácido clorídrico concentrado. Eleva-se a 70°C durante 30 minutos. Evapora-se a seco. Dilui-se em água, ajusta-se a pH 6 por adição de bicarbonato de sódio. Purifica-se por passagem sobre resina permutadora de iões Dowex 50 W x 8 e eluído com água depois com amoníaco 0,2 N. Evapora-se a seco e liofiliza-se. Obtêm-se 536 mg do produto pretendido.

alfa_D = + 15° + 1° c = 1% H₂O

Espectro RMN D₂O (ppm)

H

H

H

H

H

H de HO₂C-^ch2x^ ^: ' 2,88 a 3,04 etilénicos : 5,46-5,69 do CH₂ na posição 2 do fragmento heptenodióico : 2,4 a 2,7 do CH na posição 6 do fragmento heptenodióico : 4,25 do CH na posição 2 dos fragmentos lisilo : 4,02. do CH na posição 6 dos fragmentos lisilo : 2,88 a 3,04.

Exemplo 10 : Ácido 6-£( L-alanil-gama-D-glutamil)amino^ 3-heptenodióico.

Fase A : 6-££N-Qj-tri-fluoro-acetil)L-alanilJ-(0-metil)-gama-D· -glutamiljamino_-3-heptenodioato de (7) etilo e de (1) metilo.

Adicionam-se a 12°C, 0,62 cm³ de cloroformiato de isobutilo a uma solução contendo 1,44 g de N-[N-(tri-fluoro-acetil) -L-alanijJ-D-glutamato de 1-metilo, 1,2 cm³ de tri-etil-amina e 70 cm³ de tetrahidrofurano. Mantém-se sob agitação durante uma hora. Adiciona-se, gota a gota, uma solução de 0,9 em 30 cm³ de tetrahidrofurano, do produto obtido na fase D do exemplo 5. Mantém-se a solução obtida sob agitação durante uma hora à temperatura ambiente. Lava-se a fase cloro-metilénica com 20 cm³ de ácido clorídrico N, e seca-se. Obtêm-se 2,2 g de um produto que se purifica por cromatografia sobre sílica eluida com a mistura cloreto de metileno - acetato de etilo (4:6). Obtêm-se 1,32 g de produto que se espessa com éter isopropílico e obtêm-se 1,12 g do produto pretendido.

P.F. = 70°C.

Espectro RMN CDCl^ (ppm)

H de CO₂CH₂CH₃ : 1,29 (d)

H de

HN-COCF.

1,48 (d)

H de

2,01 a 2,45

N

-C—CHo—CH₉—CH—C

II - - ⁼ II

O 0

H de —CH2*^ H de =CH-CH2-CO2CH3 H de CO2CH~ ”	: 2,56 : 3,07 : 3,69 - 3,70 e 3,75 (glutamil OCH3)
	NH-C 1 II
H	1 II de CH 0 /\	: 4,42 a 4,66 (alanil)
H	etilenrcos	: 5,42 e 5,66 (m)
H	dos NH 6,40 (d) ,	6,50 (d), 7,46 e 7,88.

Fase B : Ácido 6 Q(L-alanil-gama-D-glutamil)-amino]-3-heptenodióico.

Adicionam-se, gota a gota, 6,4 cm³ de uma solução de

- 26 hidróxido de sódio N a uma solução contendo 0,8 g do produto preparado na fase anterior e 16 cm³ de etanol a 0°C. Deixa-se a solução obtida sob agitação durante 16 horas à temperatura ambiente. Ajusta-se o pH a 7 com ácido acético. Concentra-se a solução sob pressão reduzida, adicionam-se 5 cm³ de água ao resíduo e purifica-se por passagem sobre resina permutadora de iões Dowex 50 W x 8; elui-se com amoníaco 0,2 N, liofiliza-se e obtêm-se 0,545 g do produto pretendido.

alfa = -í- 4° + 2° (c = 1% H₂O

Espectro RMN

H do CH^ do fragmento alanilo : 1,47 (d) - 1,49 (d)

H do CH₂ na posição 2 do fragmento heptenodióico : 2,91 (d)' H do CH₂ na posição 5 do fragmento heptenodióico e dos CH₂ do fragmento glutamilo : 1,89 a 2,60

H do CH do fragmento alanilo : 3,94

H do CH do fragmento glutamilo : 4,15 a 4,30

H etilénicos : 5,45 e 5,66

Exemplo 11 : Ácido 2-amino 2-metil-4-metileno-heptanodióico.

Fase A : (2-metil-2~propenil)propanodioato de di-etilo.

Dissolvem-se 50 g de 2-metil-malonato de di-etilo em 500 cm³ de acetonitrilo, adicionam-se 80 g de carbonato de potássio, 800 mg de éter coroa (18 coroa 6) depois 75 g de 3-cloro-2-metil-l-propeno,agita-se e faz-se o refluxo durante 8 horas. Filtra-se a parte insolúvel e concentra-se a seco o filtrado. Faz-se a cromatografia do resíduo sobre sílica, eluí-se com uma mistura ciclo-hexano-acetato de etilo (9:1) e obtêm--ss 28,3 g de produto puro e 32 g de mistura. Faz-se a cromatografia deste último sobre sílica eluida com uma mistura ciclo-hexano-acetato de etilo (9:1) e isolam-se ainda 16,5 g do produto pretendido.

Rf.= 0,3 em ciclo-hexano-acetato de etilo (9:1).

Fase B : metil-(2-metil-2-propenil)propanodioato de mono-etilo.

Arrefece-se a 0°C, 27 g de metil-(2-metil-2-propenil) -propanodioato de di-etilo em 250 cm³ de etanol, adicionam-se, gota a gota, 65 cm³ de hidróxido de sódio 2N e agita-se durante

horas à temperatura ambiente.

Verte-se a mistura de reacção em 30 cm³ de ácido clorídrico 6N gelado, extrai-se com acetato de etilo e evapora-se a seco. Recupera-se o resíduo em cloreto de metileno, extrai-se com uma solução aquosa a 10% de bicarbonato de sódio, acidifica-se com o ácido clorídrico concentrado e extrai-se com acetato de etilo. Lava-se a fase orgânica com solução salina, seca-se, evapora-se a seco e obtêm-se 24 g do produto pretendido. Rf. = 0,4 em CH₂Cl₂-MeOH (9:1).

Fase C : 2,4-di-metil-2-Qmetoxi-carbonil) amino]-4-pentenoato de etilo.

Dissolvem-se 27,5 g do produto obtido como anteriormente em 150 cm³ de cloreto de tionilo, agita-se durante 3 noras em refluxo e seca-se sob pressão reduzida e obtêm-se 30 g de cloreto ácido. Dissolvem-se 14,5 g deste último em 100 cm³ de acetona, arrefece-se a 0°C, adicionam-se, gota a gota, 5,187 g de nitreto de sódio em solução em 40 cm³ de água, agita-se durante uma hora a 0°C. Evapora-se a acetona, extraí-se com éter, seca-se, evapora-se a seco e obtêm-se 25 g de nitreto.

Dissolve-se este último em 200 cm³ de metanol, agita-se por refluxo durante 16 horas, evapora-se a seco, recupera-se o resíduo em cloreto de metileno, lava-se a fase orgânica com solução salina, seca-se, evapora-se a seco e obtêm-se 22 g de produto bruto. Faz-se a cromatografia deste sobre sílica eluida com uma mistura ciclo-hexano-acetato de etilo (8:2) e isolam-se 11,2 g do produto pretendido.

Rf. = 0,4 em ciclo-hexano-acetato de etilo (8:2).

Fase D : 6-hidroxi-2-[jmetoxi-carbonil)amino]-2-metil-4-metileno-heptanodioato de di-etilo.

A uma suspensão de 30,5 g de cloreto férrieo em 150 cm³ de cloreto de metileno, adicionam-se, gota a gota, 9,9 g de glioxilato de etilo em 150 cm³ de cloreto de metileno e agita-se durante 30 minutos à temperatura ambiente. Arrefece-se a -60°C e adicionam-se, gota a gota, 11,1 g de produto obtido em C em 150 cm³ de cloreto de metileno. Permite-se elevar a temperatura a -302C. Verte-se a mistura de reacção em 400 cm³ de

água gelada e extraí-se em cloreto de metileno. Lava-se a fase orgânica em água com uma solução aquosa a 10% de bicarbonato de sódio depois com uma solução salina, seca-se e evapora-se a seco. Obtêm-se 15,3 g de produto bruto correspondente a uma mistura : 65% do produto pretendido e 35% do produto 4-metil-hepteno. Depois de passagem sobre sílica (eluente : ciclo-hexano-acetato de etilo (7:3), obtêm-se 11,4 g da mistura purificada. Rf. = 0,25 em ciclo-hexano-acetato de etilo (6:4).

Fase E : 2-£(metoxi-carbonil)amino3-2-metil-4-fnetileno-6-£(metil-sulfonil)oxijheptanodioato de etilo.

Dissolvem-se 11,4 g do produto obtido anteriormente em 150 cm³ de piridina, arrefece-se a 0°C e adicionam-se 4,9 g de cloreto de metano-sulfonilo, agita-se durante uma hora a 0°C e durante 5 horas à temperatura ambiente. Verte-se sobre ácido clorídrico 6N, extraí-se com acetato de etilo, lava-se a fase orgânica em ácido clorídrico 6N, com uma solução aquosa a 10% de bicarbonato de sódio, depois com solução salina. Seca-se e evapora-se a seco. Faz-se a cromatografia do resíduo sobre sílica, elui-se com uma mistura de cloreto de metileno-acetato de etilo (9:1) e separam-se 6 g do produto pretendido, 6 g de mistura de 4-metileno-heptano¹¹ e 4-metil-hepteno e 0,7 g de 4-metil-hepteno. Depois de uma segunda cromatografia nas mesmas condições da fracção de mistura, isolam-se 3,5 g do produto pretendido, 1 g de mistura e 1,1 g do produto 4-metil-hepteno. Rf. em Cf^C^-acetato de etilo (9:1) :

0,4 para o produto 4-metileno-heptano,

0,35 para o produto 4-metil-hepteno.

Fase F : 2-£(metoxi-carbonil)aminoJ-2-metil-4-metileno-heptanodioato de di-etilo.

Dissolvem-se 1,5 g do produto obtido anteriormente em 20 cm³ de di-metoxi-etano, adicionam-se, sucessivamente, 2 cm³ de água, 2,75 g de iodeto de sódio e 2,4 g de zinco, agita-se e faz-se o refluxo durante 8 horas. Filtra-se, lava-se a parte insolúvel em água, com cloreto de metileno, lava-se a fase orgânica com solução salina, seca-se e evapora-se a seco. Faz-se a cromatografia do resíduo sobre sílica, elui-se com uma mistu_ ra ciclo-hexano-acetato de etilo (8:2) e isolam-se 0,85 g do produto pretendido.

Rf. = 0,25 em ciclo-hexano-acetato de etilo (8:2).

Fase G : Ácido 2-amino-2-metil-4-metileno-heptanodióico.

Dissolvem-se 420 mg do produto obtido na fase F em 5 cm³ de etanol, adicionam-se 1,66 cm³ de hidróxido de sódio 2N e agita-se durante 2 horas à temperatura ambiente. Evapora-se o etanol, recupera-se o resíduo em 5 cm³ de hidróxido de sódio 2N, agita-se e faz-se o refluxo durante 20 horas. Coneentra-se a seco, recupera-se em água e neutraliza-se com ácido clorídrico 2N. Passa-se a solução sobre resina permutadora de iões Dowex 50 W x 8 (H⁺), eiui-se com água depois com amoníaco 0,7N. Concentram-se a seco as fracçóes que interessam, recuperam-se em 10 cm³ de água, liofilizam-se durante 16 horas e obtêm-se 250 rng do produto pretendido.

Rf. = 0,5 em BuOH - AcOH - H₂O (4:2:2).

Espectro RMN (Ρο°) (ppm)

3,85 : do CH₂ na posição 6

5,17 - 5,23 e

5,22-5,27 : H do metileno substituído na posição 4

1,54 : H do CHg substituido na posição 2

2,4 a 2,9 : os CH₂

Exemplo 12 : Ácido 2-amino-2-(di-fluoro-metil)-4-metileno-heptanodióico.

Fase à : (2-metil-2-propenil)-propanodioato de (1) (1,1-di-metil -etilo) e de (3) etilo.

Dissolvem-se 33 g de malonato de etilo e de terc-butilo em 400 cm³ de acetonitrilo, adicionam-se, com agitação, g de carbonato de potássio, 0,5 g de éter coroa (18-6) e 300 g de 3-cloro-2-metil-l-propeno, depois agita-se durante 16 horas a 65°C. Filtra-se a parte insolúvel· e evapora-se a seco o filtrado. Faz-se a cromatografia do resíduo sobre sílica, eluído com uma mistura de ciclo-hexano-acetato de etilo (95:5) e isolam-se 18 g de produto puro e 22 g de mistura. Faz-se a cromatografia deste sobre sílica eluida com uma mistura ciclo-he30 *»

Λ··»λο»3«ιε;»

xano-acetato de etilo (97,5 z 2,5) e isolam-se ainda 11 g do pro duto.

Rf. = 0,35 em ciclo-hexano-acetato de etilo (95:5).

Fase B : (Di-fluoro-metil)-(2-metil-2-propenil)-propanodioato de (1) (1,1-di-metil-etilo) e de (3) etilo.

Faz-se a suspensão de 2,8 g de hidreto de sódio em 100 cm³ de tetra-hidrofurano, adicionam-se gota a gota 11,1 g do produto obtido na fase A em 100 cm³ de tetra-hidrofurano e agita-se durante uma hora a 42°C. Faz-se borbulhar Fréon 22 durante 15 minutos com agitação a 45°C e agita-se ainda durante uma hora a 45°C e durante uma hora à temperatura ambiente sob atmosfera de Freon 22. Hidroliza-se o meio de reacção com solução salina, extrai-se com cloreto de: metileno, lava-se a fase orgânica com solução salina, seca-se e concentra-se a seco. Obtêm-se 13 g do produto pretendido.

Rf. = 0,4 em ciclo-hexano - acetato de etilo (95:5).

Fase C : (Di-fluoro-metil)-(2-metil-2-propenil)propanodioato de mono-etilo.

Dissolvem-se 13 g do produto obtido an teriormente em 100 cm³ de cloreto de metileno, adicionam-se 70 cm³ de ácido tri-fluoro-acético e agita-se durante uma hora e 30 minutos à temperatura ambiente. Concentra-se a seco sob pressão reduzida, recupera-se o resíduo em cloreto de metileno e extrai-se com una solução aquosa a 10% de bicarbonato de sódio. Lava-se a fase aquosa com cloreto de metileno e neutraliza-se com ácido clorídrico concentrado. Extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com solução salina, seca-se e concentra-se a seco e obtêm-se 5,3 g do produto pretendido.

Rf. = 0,5 em CH₂Cl₂-MeOH - AcOH (9:0,5:0,5).

Fase D : 2-(di-fluoro-metil) 2-(formil-amino)-4-metil-4-peatanoato de etilo.

Agitam-se 10,5 g do produto obtido anteriormente em 60 cm³ de cloreto de tionilo e aquece-se em,, refluxo dvrante 3 horas. Evapora-se a seco, recupera-se o resíduo em tolueno e seca-se sob pressão reduzida e obtêm-se 10,5 g de cloreto ácido.

-Μ

Dissolve-ss este último em 50 cm³ de acetona, arrefece-se a 0°C, adiciona-sq, gota a gota, uma solução de 3,35 g de nitreto de sódio em 20 cm³ de água e agita-se durante uma hora a 0°C. Evapora-se a acetona, extrai-se com éter, lava-se com solução salina, seca-se, evapora-se a seco e obtêm-se 10 g de nitreto.

Dissolve-se este último em 100 cm³ de ácido fórmico e aquece-se em refluxo durante uma hora e trinta minutos. Permite-se voltar à temperatura ambiente e adicionam-se, gota a gota, 40 cm³ de anidrido acético e agita-se durante 3 horas à temperatura ambiente. Adicíonam-se lentamente 40 cm³ de água gelada, evapora-se a seco e recupera-se com uma mistura de água -cloreto de metileno, extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com ruma solução aquosa a 10% de bicarbonato de sódio, depois com solução salina, seca-se e concentra-se a seco. Faz-se a cromatografia do resíduo sobre sílica, eluida com uma mistura ciclo-hexano-acetato de etilo (85:15) e isolam-se 5 g do produto pretendido.

Fase E : 2-(fluoro-metil)-2-(formilamino)-6-hidroxi-4-metileno-heptanodioato de di-etilo.

Faz-se uma suspensão de 9,65 g de cloreto férrico em 50 cm³ de cloreto de metileno, adicionam-se, gota a gota, 3,03 g de glioxilato de etilo em 50 cm³ de cloreto de metileno e agita-se durante 30 minutos à temperatura ambiente. Arrefece-se a -60°C e adicionam-se, gota a gota, 3,5 g do produto obtido em D em 50 cm³ de cloreto de metileno.

Agita-se durante uma hora a -30°C, depois durante uma hora a -20°C. Verte-se a mistura de reacção em água gelada, extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com solução salina, depois com uma solução aquosa a 10% de bicarbonato de sódio, depois com solução salina. Seca-se e evapora-se a seco. Faz-se a cromatografia sobre sílica do resíduo, eluído por uma mis tura ciclo-hexano - acetato de etilo (6:4) e isolam-se 0,590 g do produto B (4-metil-hepteno...) e 1,7 g do produto C (4-metileno-heptano...) e 1 g de mistura.

Produto B : Rf. 0,32 em ciclo-hexano - acetato de etilo Produto C : Rf. 0,35 (1-1)

Fase F : 2-(di-fluoro-metil)-2-(formil-amino)-4-metileno~6- £(metil-sulfonil)oxi^heptanodioato de di-etilo.

Dissolvem-se 1,65 g do produto C. obtido anteriormente em 20 cm³ de piridina, arrefece-se a 0°C e adicionam-se 0,725 g de clorebo de metano-sulfonilo.

Agita-se durante 30 minutos a 0°C e durante 5 horas à temperatura ambiente. Verte-se a mistura de reacção sobre ácido clorídrico 6N gelado, extrai-se com cloreto de metileno, lava-se a fase orgânica com ácido clorídrico 6N depois com uma solução aquosa a 10% de bicarbonato de sódio e finalmente com solução salina. Seca-se e evapora-se a seco. Faz-se a cromatografia do resíduo sobre sílica, elui-se com uma mistura de cloreto de metileno - acetato de etilo (9:1) e isolam-se 1,55 g do produto pretendido.

Rf. = 0,45 em CH₂C1₂ - AcOET (8:2).

Fase G : 2-(di-fluoro-metil)-2-(formil-amino)-4-metileno-heptanodioato de di-etilo.

Dissolvem-se 0,430 g do produto obtido em F em 20 cm³ de di-metoxi-etano, adicionam-se 2 cm³ de água, 0,770 g de iodeto de sódio e 0,670 g de zinco, agita-se e faz-se o refluxo durante 9 horas. Filtra-se, adicionam-se 25 cm³ de água ao filtrado e extrai-se com cloreto de metileno, Lava-se a fase orgânica com solução salina, seca-se e evapora-se a seco. Obtêm-se 300 mg do produto pretendido.

Rf. = 0,5 em CH₂C1₂ - AcOEt (8:2).

Fase H : Ácido 2-amino-2-(di-fluoro-metil)-4-metileno-heptanodióico.

Dissolvem-se 250 mg do produto obtido anteriormente em 5 cm³ de etanol, adicionam-se 0,5 cm³ de ácido clorídrico concentrado, agita-se e aquece-se em refluxo durante uma hora. Neutraliza-se com bicarbonato de sódio e evapora-se a seco. Recupera-se em água e extrai-se com acetato de etilo, lava-se com solução salina, seca-se e evapora-se a seco. Recupera-se o resíduo em etanol, adicionam-se 2,5 cm³ de hidróxido de sódio O,1N e agita-se durante 16 horas à temperatura ambiente. Neutraliza-se a pH 6 com ácido acético, seca-se, recupera-se em 2 cm³ de água e passa-se sobre resina permutadora de iões Dowex 50 W x 8, eluido com água depois com amoníaco 0,7N. Obtêm-se 130 mg de produto que se liofiliza em 10 cm³ de água. Recuperam-se 125 mg do produto pretendido.

Rf. = 0,6 em BuOH -AcOH - H₂O (4:2:2).

Espectro RMN (ppm)

6,28 : CHF

2,56 e 2,92 : CH₂ ^na posição 3

5,06 e 5,11 : CH₂ do metileno substituido na posição 4.

Exemplo 13 : Ácido 2-(L-alan.ilamino)-3-heptenodióico.

Faz-se uma suspensão de 1,83 g de N-Ql, 1-di-metil-etoxi)carboni!^-L-alaninato de (2,5-di-oxo-pirrolidin-l-ilo) em 10 cm³ de di-metil-formamida, arrefece-se a 0°C e adicionamse, gota a gota, 0,250 g de ácido 2-amino-3-heptenodióico em 20 cm³ de di-metil-formam.ida, mantendo o pH entre 8 e 9 com tri-etilamina e agita-se durante 16 horas à temperatura ambiente. Concentra-se a seco, recupera-se em 10 cm³ de água, lava-se com acetato de etilo, ajusta-se a pH 1 com ácido clorídrico 2N e extrai-se com acetato de etilo, secam-se as fases orgânicas. Faz-se a cromatografia do resíduo sobre sílica, elui-se com uma mistura:cloreto de metileno - metanol - ácido fórmico (95:5:1) e isolam-se 0,467 g de produto bloqueado.

Recuperam-se 0,400 g deste último em 10 cm³ de ácido tri-fluoro-acético em cloreto de metileno (1:1) e deixa-se em contacto durante uma hora à temperatura ambiente. Seca-se o meio de reacção, recupera-se o resíduo duas vezes em cloreto de metileno e seca-se, recupera-se o resíduo em água e ajusta-se a pH 7 com o hidróxido de sódio 2N.

Passa-se esta solução sobre resina permutadora de iões Dowex 50 W x 8, elui-se com amoníaco 0,2M e obtêm-se 0,211 g do produto que se purifica sobre sílica eluentes : etanol - amoníaco (9:1) depois (8:2).

Isolam-se 108 mg do produto pretendido depois de liofilização.

1\

Preparação de N- Ç( 1, 1-di-metil-etoxi) carbonil*}-L-alaninato de (2,5-di-oxo-pirrolidin-l-ilo).

Dissolvem-se 0,2 g de B.O.C. L-alanina e 0,112 g de 1-hidroxi 2,5-di-oxo-pirrolidina em 5 cm³ de di-metoxi-etano. Arrefece-se a 0°C e adicionam-se, pouco a pouco, 0,24 g de di-cislo-hexil-carbo-di-imida e deixa-se em contacto durante 7 horas. Filtra-se, seca-se, recupera-se em cloreto de metileno, lava-se com uma solução aquosa a 10% de bicarbonato de sódio, seca-se e obtêm-se 0,305 g do produto bruto. Recristaliza-se este em 1,5 cm³ de isopropanoí e obtêm-se 0,220 g do produto pretendido. P.F. = 164°C.

Exemplo 14 ; Ácido 2-(L-lisil-amino heptanodióico).

Dissolvem-se à temperatura ambiente 678 mg de ácido 6-(L-lisil-amino)-3-heptenodióico preparado como no exemplo 9 em 70 cm³ de etanol, adicionam-se 2,1 cm³ de ácido clorídrico

N, depois 140 mg de paládio sobre carvão activado e hidrogénio sob 1100 mbares durante 1 hora e meia. Filtra-se, lava-se com etanol depois com água, seca-se e concentra-se a seco sob pressão reduzida.

Recupera-se o resíduo em água, ajusta-se o pH a 6 com hidróxido de amónio. Purifica-se por passagem sobre resina permutadora de iões Dowex 50 W x 8 eluida com água, depois com amoníaco

O, 5N. Evapora-se a seco e liofiliza-se. Obtêm-se 566 mg do produto pretendido.

alfa = 29° + 1,5° (c = 0,7% H₂0).

Exemplo 15 : Ácido 2-£n-(1-oxo-octadecil)-L-alanil-gama-D-glutamil-aminoj heptanodióico, sal de sódio.

Fase A : 6-((oxo-octadecil)-L-alanil-gama-D-glutamil-(O-metil) aminoJ-3-heptanodioato de (7) etilo e de (1) metilo.

Hidrogena-se durante 4 horas, 450 mg de 6~ £[n-Q( 1-oxo-octadecil) -L-alanilJ -O-metil-gama-D-glutamilJ am.ino-3j-heptanodioato de (7) etilo e de (1) metilo preparado como no exemplo 7 em 45 cm³ de metanol em presença de 45 mg de paládio a 10% sobre carvão activado.

Filtra-se, lava-se com metanol e concentra-se a seco .-d'' : 0,88 : 1,26 : 1,39 : 3,66 e 3,73 : 4,20 : 4,35 a 4,60 6,25 Í6.56 7.12 sob pressão reduzida, recuperam-se 426 mg do produto bruto que se dissolveram em 4 cm³ de cloreto de metileno tépido, filtra-se, adicionam-se 2 cm³ de éter isopropílico, deixa-se em repou so durante 16 horas a +4°C, enxuga-se e seca-se sob pressão reduzida. Obtêm-se 375 mg do produto pretendido. P.F.- 100°C alfa_D = -16° +1° (c = 0,9% CH₂C1₂)

Espectro RMN (CDCl-J (ppm)

CHg da cadeia (CH_O) e C0_oCH-CH_o ζ n z =3

CH₃-CH OS CO₂-CH₃ co₂-ch₂-ch₃ NH-CH-C = O

NH-CO

J 7,38 7,54

Fase B : Ácido 2- Qtf-(l-oxo-octadecil)-L-alanil-gama-D-glutamil-aminoj heptanodióico, sal de sódio.

A uma solução de 140 mg de produto preparado na fase A em 2,8 cm³ de etanol, adicionam-se, gota a gota, 0,66 cm³ de hidróxido de sódio N e mantém-se sob agitação durante 16 horas à temperatura ambiente. Evapora-se a seco sob pressão reduzida recupera-se o resíduo em água e liofiliza-se. Obtêm-se 136 mg do produto pretendido.

alfa_D = -21° +1° (c = 0,5% H₂O)

Espectro RMN (P₂O) (ppm)

CH₃ da cadeia 0,90 (CH„) e CH_O em alfa de CO„Na : 1,29 Ζ n 2 2

CH₃-CH

NaO₂C-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂ CH_O em beta do C da cadeia ² II

NaO₂C-CH₂

C-CH_O-CH„-CH

II “² “² :: 1,39 1,5 a 1,8

1,9 a 2,4

C-CH„-(CH„)

II “^{2 2}

NH ch₇-ch;

: 4,33 c=o os outros

N-CH-C

4,10 e 4,20

Exemplo 16 : Ácido 6- £(4-hidroxi-l,4-di-oxo-butil)-amino3-3-heptenodióico.

Fase A : 6-£(l,4-di-oxo-4-etoxi-butil)-aminoJ-3-heptenodioato de (7) etilo e de (1) metilo.

Adicionam-se, à temperatura ambiente, 338 mg de tri-etilamina a 583 mg de 6-amino-3-heptenodioato de 1-metilo 7-etilo preparado como no exemplo 5D, em solução em 50 cm³ de cloreto de metileno, arrefece-se a + 5°C e adicionam-se 483 mg de 4-cloro-4-oxo-butanoato de etilo.

Agita-se durante 1 hora à temperatura ambiente, adicionam-se 25 cm³ de água e 1 cm³ de ácido clorídrico 2N e extrai-se com cloreto de metileno, lava-se com solução salina, depois com uma solução de bicarbonato de sódio, seca-se e evaporam-se os solventes. Faz-se a cromatografia do resíduo sobre sílica, eluido com ciclo-hexano- acetato de etilo (1:1). Obtêm-se 750 mg do produto pretendido.

Espectro RMN CDC1₃

H dos etilénicos H de H₃CO₂C H de CH₂-CH=CH H dos CO₂Et H dos CH₂ (250 Mhz) ppm : 5,43 - 5,64 : 3,69 : 3,06 : 1,26 e 1,28 : 2,4 a 2,7

4,10 a 4,25

Fase B : Ácido 6- Q( 4-hidroxi-l,4-di-oxo-butil)-amincQ-3-hepteno dióico.

Adicionam-se 4,66 cm³ de uma solução N de hidróxido de sódio a 500 mg do produto preparado na fase A em solução em 10 cm³ de etanol e agita-se durante 16 horas à temperatura ambi jht <

1RtVÍ· ente.

Trata-se com resina Amberlyst 15 até pH = 6, filtra-se e concentra-se a seco. Recupera-se o resíduo em 30 cm³ de água, filtra-se e liofiliza-se. Obtêm-se 470 mg do produto pretendido.

Espectro RMN D^O (250 Mhz) ppm

H dos etilénicos

H dos -CH-NH

H de HO₂C-CH₂

H de CH₂-CH-CH₂

5,50 e 5,65 4,23 3,02

2,35 a 2,6

Exemplo 17 : Ácido 6- U>(1 -oxo-octadecil)-gama-D-glutamil^-amino2-3-heptenodióico (sal de sódio)

Fase A : 6- Πν-( 1-oxo-octadecil)-gama-D-glutamil^ -amino^-3-heptenodioato de etilo.

Arrefece-se a 14°C, 1,28 g de ácido 4-]jJ-l-oxo-octadeciljglutâmico em solução numa mistura de oxano/tetra-hidrofu3 rano (3:1), depois adicionam-se, em 5 minutos, 0,86 cm de tri-etilamina depois 0,43 cm³ de cloroformiato de isobutilo. Agita-se durante 35 minutos a 14°C, adicionam-se 647,8 mg de 6-amino-3-heptenodioato de 1-metilo 7-etilo preparado como no exemplo 5D em solução em 15 cm³ de tetra-hidrofurano, agita-se durante 2 horas à temperatura ambiente, faz-se a cromatografia sobre sílica (eluente : cloreto de metileno-metanol 92:2) e obtêm-se 980 mg de produto bruto que se dissolve em 3 cm³ de cloreto de metileno, adiciona-se 1 cm³ de éter isopropílico, deixa-se cristalizar durante 16 horas a +5°C, enxuga-se e seca-se sob pressão reduzida à temperatura ambiente.

Obtêm-se 840 mg do produto pretendido.

alfa^ = +8° +1° (c = 1% piridina)

Espectro RMN (CDCl^) (250 MHz) ppm ^CH3-^(CH2>n (CH„) e CH~ de OEt :

n 3

CH₂-C= e CH₂C=O :

os OMe :

CH₂ de CO₂Et :

0,88 - 1,25

2,1 a 2,6 3,68 e 3,74 4,20

N-CH-C=O etilénicos os NH-C

II

4,62

5,45 - 5,65

6,56

6,76

Fase B : Ácido 6-||N-(1-oxo-octadecil)-gama-D-glutamil|-aminoj-3-heptenodióico (sal de sódio).

Adicionam-se a 0°C, 2,1 cm³ de hidróxido de sódio N a 400 mg do produto obtido na fase A em suspensão em 10 cm³ de etanol. Agita-se durante 16 horas à temperatura ambiente, concentra-se sob pressão reduzida, recupera-se o resíduo em 10 cm³ de água, filtra-se e liofiliza-se. Obtêm-se 370 mg do produto pretendido.

alfa = -13° + 1° (c = 1% H₂O)

Espectro RMN (Ρ₂° 300 MHz) ppm

CH-CH₂-CONa os CH etilénicos os CH₂

CH-NH

CH.

2,93

5,43 - 5,67 1,8 - 2,6 4,18 0,86

Exemplo 18 : Ácido 6- £(gama-D-glutamil) amino^]-3-heptenodióico

Fase A : 6- £(N-tri-fluoro-acetil-gama-D-glutamil)amino2-3-heptenodioato de etilo.

Adicionam-se, em 15 minutos, 554 mg de ácido glutâmico em solução em 30 cm³ de di-metoxi-etano, a 422 mg do produto obtido como na fase D do exemplo 5. Arrefece-se a solução a 0°C, adicionam-se, em 20 minutos, 475 mg de di-ciclo-hexil-carbo-di-imida em solução em 10 cm³ de di-metoxi-etano e agita-se a suspensão obtida durante 16 horas a 0°C depois durante 4 horas à temperatura ambiente. Filtra-se e evapora-se a seco. Recupera-se o resíduo oleoso em 10 cm³ de éter, filtra-se e evapora-se a seco. Recuperam-se 1,03 g de produto bruto que se purificam por cromatografia sobre sílica (eluente : ciclo-hexano - acetato de etilo 5:5). Obtêm-se 410 mg do produto pretendido.

Espectro RMN (CDCl-,) 250 MHz

CO2Et ch2 = CH-CO2CH3	• « •	l,29(t) - 4,21 2 a 2,66 3,06 (d)	<P>
CO2-CH3		3,69 - 3	,77 e	3,78
NH s
Cif	•	4,54 (m)	4,63	(m)
_Xc°2
CH=CH	•	5,42 (m)	5,63	(m)
NH-C		6,40 (d)	8,54

O

Fase B : Ácido 6-βgama-D-glutamil)amincQ-3-heptenodióico.

Dissolvem-se 454 mg de produto preparado como na fase A em 20 cm^{2 3} de etanol, arrefece-se a 0°C e adicionam-se 3,6 cm³ de hidróxido de sódio N. Agita-se, adiciona-se 1 cm³ de água e mantém-se durante 16 horas sob agitação à temperatura ambiente. Concentra-se sob pressão reduzida, recupera-se o resíduo em 2 cm³ de água e ajusta-se a pH 6 com uma solução de ácido clorídrico 2N. Purifica-se por passagem sobre resina Dowex (50 W x 8) eluído com água, depois com amoníaco. Obtêm-se 272 mg de produto que se dissolve em 10 cm³ depois liofiliza-se. Recolhem-se 215 mg do produto pretendido.

alfa_D = - 18° + 2° (c = 0,5% HC1 N)

Espectro RMN (D₂O) ^00 MHz ppm ch₂-co₂h

CH=CH

CH(^

NH : 2,95 (d, gama = 7h₂) : 5,64 (d, J=15,5 e 7H₂) 5,49 : 3,77 (t) 4,20 (dd)

CO,

CH ₂ = 2,1 a 2,7

Exemplo 19 :

Prepararam-se comprimidos com a fórmula :

Produto do exemplo 6....................... 50 mg

Excipiente q.b. para um comprimido terminado a.. 250 mg.

(Excipiente: lactose, amido, talco, estearato de magnésio).

Exemplo 20 :

Prepararam-se comprimidos com a fórmula :

Produto do exemplo 2.............................

Excipiente q.b. para um comprimido terminado a... 250 mg (Excipiente: lactose, amido, talco, estearato de magnésio).

ESTUDO FARMACOLÓGICO

Estimulação de células monocitárias por um imuno-estimulante.

As células mononucleadas de sangue circulante de dadores normais separaram-se seguindo a técnica clássica descrita por Boyum utilizando um gradiente de Picoll. Depois de lavagem as células mononucleares incubaram-se a 37°C durante uma hora à razão de 5x10 monocitos (células NSE⁺) por ml do meio de cultura, 5 ml por frasco de cultura. O meio de cultura utilizado nesta experiência é constituído por RPMI 1640 a que se adicionou antibióticos e o tampão Hepes. Ao fim de uma hora, as células não aderentes retiraram-se por lavagem dos frascos com o meio anterior elevado a 37°C, sendo as células aderentes constituídas essencialmente de monocitos (>90%) recolhidas em cultura num meio RPMI completo sem soro em presença de diferentes quantidades de produtos a testar, colocados anteriormente em solução num tampão (Dulbecco) sem Ca^⁺ nem Mg^⁺. Continuou-se a cultura durante 24 ou 48 horas e então, lavaram-se os sobrenadantes das células, centrifugaram-sç, fizeram-se aliquotas e conservaram-se a -80°C ou a -20°C.

Substituíram-se os sobrenadantes de cultura, nos frascos, pela mesma quantidade de água destilada não pirogénica afim de proporcionar o lise das células. Recuperou-se o lisado, fez-se aliquotas e conservou-se igualmente a -20°C. As experiências seguintes realizaram-se em presença ou ausência de Interferão gama (10 U/ml) a uma dose à qual o IFN gama sozinho é inactivo.

Testes da presença nos sobrenadantes de monocinos (Interleukine-1 e Factor de Necrose de Tumor) pela sua actividade biológica.

Teste Interleukine-1 (IL-1) :

Este teste foi descrito a primeira vez por I. Gery e Waksman em 1972 (Gery I e B.H. Waksman 1972. Potentiation of the T Lymphocyte response to mitogens. II. The cellular source of potentiating mediator (s) J.Exp.Med., 136-143.

Baseia-se na acção co-mitogénica de IL-1 na presença de um antígeno (imitado pela fito-hemaglutinina no teste) sobre os ti-.

β mócitos de ratos. 1,5 x 10 timócitos de ratos C3H/HeJ (provenientes do C.S.E.A.L. de Orleães) colocaram-se em cultura durante três dias na presença de diferentes diluições de sobrenadantes e de lisados celulares susceptíveis de reprimir a actividade IL-1 e do PHA-P Wellcome (1 pg/ml) em placas de cultura de 98 tubos de fundo plano, num volume final de 200 jil de meio constituído por RPMI 1640 contendo além de antibióticos (penicilina lU/ml - estreptomicina 1000 U/ml), tampão Hepes, 1 mM de glutamina, 2 mM de soro de vitelo a 5% e 2-mercapto-etanol 5 x 10 M. Depois de 68 horas de cultura, adicionou-se 1 /iCi 3 de timidina tritiada a cada tubo ( H-metil-timidina, CEA Saclay, TMM79A, actividade específica 1 Ci/mM = 37GBq/mM), determinou-se a radioactividade incorporada pelas células depois de se terem filtrado as culturas num aparelho de recolha semi-automático do tipo Skatron e contaram-se os filtros num contador de cintilação liquido (Beckman). Os resultados apresentaram-se como a diferença entre os impulsos por minuto incorporados pelas culturas na presença de sobrenadantes e os impulsos por minuto incorporados pelas culturas testemunho.

Teste de Factor de Necrose de Tumor (TNF) :

A actividade TNF é posta em evidência pela toxicidade deste factor sobre células alvo L-929 (sub-clone alfa). A técnica foi sensibilizada por adição no teste, de actinomicina

D.

As células L distribuiram-se à razão de 2 χ 10⁴ células por trebo de uma micro-placa de fundo plano em 100 pl de meio RPMI 1640 enriquecido com 5% de soro de vitelo, com glutamina, tampão Hepes e antibióticos. Depois de 24 horas, adicionaram-se diferentes diluições de sobrenadantes a testar, num volume de 100 jil assim como uma dose de actinomicina D de 1 p.g/ ml. Ao fim de 24 horas de cultura, calculou-se a quantidade de células não lisada, por coloração das placas com cristal violeta e por medição da densidade óptica dos diferentes tubos num leitor de decomposição de imagem múltiplo.

RESULTADOS :

O produto do exemplo 9 estimula os monocitos e a sua produção de IL-1 e de TNF. Além disso, existe sinergia entre os produtos e o Interferão gama.

B. Actividade anti-bacteriana (in vitro)

Determinou-se a actividade antibacteriana dos produtos reivindicados pelo método de difusão em meio de Davis Mingioli adicionado de 1% de agar. As geloses utilizadas colocaram-se em caixas de Petri a 48°C, depois semearam-se com 5 x 1Õ germes/ml por intermédio da estirpe bacteriana de teste. Os inaculantes provinham de uma pré-cultura de 24 horas em meio de Davis Mingioli. Depois de endurecimento das geloses, as soluções aquosas dos produtos estudados introduziram-se em tubos (9 mm) encravados no meio, por intermédio de um saca-peças. As zonàs de inibição observadas (diâmetro em mm) mediram-se depois de incubação de 24 horas a 37°C.

	Produto do	Produto	do
	exemplo 6	exemplo	13
	(25 mg/1)	(25 mg/1)
Escherichia Coli 078		17,5
Salmonella typhimurium MZ11	24	20
Enterobacter cloacae 1321E	10
Providencia sp. DU48		22

C. Actividade antibacteriana (in vivo)

Utilizaram-se para esta experiência ratos suiços fêmeas pesando de 18 a 20 g (Charles River Cobs não consaguíneos CD1). Cada grupo é composto de 20 animais.

Colocaram-se os diferentes produtos em solução, em soro fisiológico não pirogénico de maneira a obterem-se concentrações de

1-10-100 mcg/rato, ou seja: 50 - 500 - 5000 mcg/kg.

Preparação da suspensão infectante (estirpe IP 52 145)

A) Conservação e manutenção da estirpe

A estirpe liofilizada, re-hidratou-se com algumas gotas de meio soja (BioMérieux). Um tubo de 10 ml de meio soja semeou-se com a suspensão obtida e cultivada durante 18 horas em estufa a 37°C.

Os tubos de gelose de conservação (Pasteur) semearam-se com esta cultura por picadura central. Depois de 18 horas de cultura em estufa a 37°C, os tubos são conservados a.22°C.

B) Colocação em cultura

Semeou-se um tubo de meio soja a partir de uma gelose de conservação e deixou-se em cultura durante 18 horas em estufa a 37°C. As geloses inclinadas de soja semearam-se a partir desta cultura.

Depois de 18 horas de estufa a 37°C os germes recuperaram-se da superfície da gelose e colocaram-se em suspensão em soro fisiológico à razão de uma ansa de platina por 10 ml de água fisiológica.

Calculou-se a concentração em germes por contagem no contador coulter. Diluíu-se a suspensão bacteriana até à obtenção da dose de germes desejada depois injectou-se por via I.V. a um volume de 0,2 ml/rato. A quantidade de germes revivifiçáveis injectados controlou-se por exposição sobre caixas de Petri contendo gelose.

Protocolo

A administração fez-se por uma injecção por via intramuscular a um volume de 0,05 ml/rato, 24 horas antes da infecção.

Os germes injectaram-se por via intravenosa a um volume de 0,2 ml/rato. Observaram-se os animais durante 21 horas. Realizou-se uma comparação da mortalidade dos animais não tratados (testemunha) relativamente aos animais tratados pelos diferentes produtos.

Os resultados exprimiram-se em sobrevivência (número

2) ¥

JB * ,r de animais sobreviventes em cada grupo ao fim de 21 dias de observação). Utilizou-se o teste de Fisher para comparar a sobrevivência dos grupos tratados com o grupo testemunha. No caso em que não se pode detectar um aumento nítido de sobrevivência depois de 21 dias de observação, pode-se calcular para cada um dos grupos um tempo médio de sobrevivência (TMS). Neste caso, a análise estatística faz-se pelo teste de Mann e Whitney comparando cada um dos grupos tratados com o grupo testemunha. 0 estudo efectuou-se num computador IBM PC e com uma programação Tadpole. Observou-se uma protecção particularmente significativa no grupo tratado pelo produto do exemplo 8 a uma dose de 5 mg/kg: resultados expressos em TMS ou em sobrevivência ao fim dos 21 dias de observação.

D. Actividade sobre os Monocitos Humanos

Os produtos dos exemplos 5 e 9 mostraram uma acção directa sobre os monocitos humanos, acção medida pela produção de uma actividade TNF e de uma actividade IL-1 nos sobrenadantes de cultura (com 5 g de produto).

Além disso, com o produto do exemplo 9, na presença de CHU-IFN-g, pode-se pôr em evidência um efeito pelo menos aditivo na produção de monocinos (TNF e IL-1).

Claims (4)

1. REIVINDICAÇÕES

   - lã Processo para a preparação de compostos de fórmula (I) :

   HO
2. 2C-CH₂

   U-C-R (I) co₂H no qual U representa um radical CH—CH—CH no qual os traços e

   II a

   ponteado representam uma única dupla ligação eventualmente de configuração cis ou trans e a. representa um átomo de hidrogénio, um radical metilo ou um grupo metileno-CL·^-, Y representa um átomo de hidrogénio ou o resíduo de um ácido aminado ligado pelo carboxilo alfa ou ómega ou de um péptido constituído por 2,
3. 3 ou 4 ácidos aminados cuja amina está eventualmente acilada por um ácido alifático saturado ou insaturado contendo entre 6 e 24 átomos de carbono ou alquilado por um radical alquilo que contém de 1 a 8 átomos de carbono e R representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo, linear ou ramificado, saturado ou insaturado, contendo até 8 átomos de carbono eventualmente substituidos por um ou vários átomos de halogéneo, com a condição de que se Y representa um átomo de hidrogénio, um radical alanina e prolina e se a representa um átomo de hidrogénio, U contém uma dupla ligação bem como dos seus ésteres com os álcoois contendo até 6 átomos de carbono, das suas amidas primárias e secundárias e dos seus sais com os ácidos orgânicos ou minerais ou com as bases, caracterizado por se submeter um composto de fórmula (II):

   ,NH acilo (II) na qual U conserva a significação anterior, alc^ e alc₂, iguais ou diferentes, representam um radical alquilo contendo até 8 átomos de carbono, X representa quer o radical R quer um grupo -CO₉alc„ no qual alc_ representa um radical alquilo contendo até
4. 8 átomos de carbono e o radical acilo representa o resíduo de um ácido orgânico contendo até 8 átomos de carbono, à acção de um halogeneto de alcano-sulfonilo ou de areno-sulfonilo de fórmula (III):

   HalSC^alc^ (III) na qual alc^ representa um radical alquilo contendo até 8 átomos de carbono ou um radical arilo contendo até 14 átomos de carbono, depois à acção de um agente de redução para se obter o composto de fórmula (IV):

   (IV) /NH acilo alc₁O₂C-CH₂-U-C-X

   CO₂alc₂ que se submete, se desejado, à totalidade ou a uma parte somente das seguintes operações por uma ordem qualquer:

   a) desprotecção da função amina,

   b) hidrólise das funções éster, depois se for caso disso descarboxilação quando X representa um radical -CC^alCg,

   c) redução da dupla ligação,

   d) esterificação ou salificação por uma base das funções carboxi,

   e) salificação das funções amino por um ácido,

   f) amidificação das funções aminadas livres por um ácido aminado ou um péptido constituído por 2, 3 ou 4 ácidos aminados cuja função aminada é protegida depois da desprotecção desta função aminada.

   - 2ã

   Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se efectuarem sobre o derivado de fórmula

   NH acilo alc₁O₂C-CH₂-U-C^-X ^CO2^alC2 (IV) na qual alc.^, alc₂, acilo e X são definidos como na reivindicação 1, as operações seguintes pela ordem indicada:

   a) desprotecção da função aminada,

   b) hidrólise das funções éster, para obter o composto de fórmula (I ):

   NH,

   HO₂C-CH₂-U-C-X' (I:

   co₂h na qual X' representa ou o radical R ou um grupo -CO₂H; producto I que, se desejado, se amidifica com um ácido aminado ou um péptido constituído por 2, 3 ou 4 ácidos aminados cuja função aminada está protegida, depois submete-se a função X¹ se for caso disso a um reagente de descarboxilação, depois desprotege -se a função amino do produto obtido que se reduz, se desejado

   - 3ã Processo para a preparação do composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se submeter o composto da fórmula:

   na qual alc,- representa um radical alquilo contendo até 8 átomos de carbono e A representa um átomo de hidrogénio ou um radical metilo, à acção de um composto de fórmula (VI):

   II

   H-C-CO„-alc, (VI) z 6 na qual alCg representa um radical alquilo contendo até 8 átomos de carbono, para obter o composto de fórmula (VII):

   que se submete à acção de um halogeneto de alcano-sulfonilo ou de areno-sulfonilo de fórmula (VIII):

   HalSO₂alc₇ (VIII) na qual ale? representa um radical alquilo contendo até 3 átomos de carbono ou um radical arilo contendo até 14 átomos de carbono, para obter o composto de fórmula (IX):

   :o₂alc₆ °2^alC5

   OSC^alc?

   (XX) que se submete, à acção de um nitreto alcalino, para se obter o composto de fórmula (X) •N„ “CCLalc,2 5 ώ CC^alCg (X) que se reduz e submete a uma hidrólise aquosa, para se obter o composto de fórmula (XI):

   (XI) que se submete, se desejado, à totalidade ou somente a uma parte das operações seguintes numa ordem qualquer:

   a) hidrólise das funções éster,

   b) amidificação das funções amino livres por um ácido aminado ou um péptido constituido por 2, 3 ou 4 ácidos aminados cuja função amino é protegida depois da desprotecção desta função amino,

   c) redução da dupla ligação,

   d) esterificação ou salificação por uma base das funções carboxi,

   e) salificação por um ácido das funções amino.

   - 4ã Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por se utilizar à partida um composto de fórmula II na qual U representa um radical -CH=CH-CH₂ ou um radical -ch₂-ch=ch-.

   5ã

   Processo de acordo com as reivindicações 1 a 4, para preparar compostos de fórmula I na qual Y é escolhido no grupo dos resíduos de alanina, prolina, lisina e ácido eí ou y-glutâmico assim como os seus ésteres com os álcoois contendo até 6 átomos de carbono, as suas amidas primárias e secundárias e os seus sais com os ácidos orgânicos ou inorgânicos ou com as bases, caracterizado por se amidificar de forma adequada a função amina livre do composto de fórmula XI ou o do composto obti do após desprotecção da função -NH acilo do composto de fórmula IV.

   - 6ã Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, para preparar compostos de fórmula I na qual Y representa o resíduo alanina assim como os seus ésteres com os álcoois contendo até 6 átomos de carbono, as suas amidas primárias e secundárias e os seus sais com os ácidos orgânicos ou inorgânicos ou com as bases caracterizado por se amidificar de forma apropriada a função amina livre do composto de fórmula XI ou a do composto obtido após desprotecção da função-NH acilo do composto de fórmula IV.

   - 7ã Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, para preparar compostos de fórmula I na qual Y representa o resíduo da lisina assim como os seus ésteres com os álcoois contendo até 6 átomos de carbono, as suas amidas primárias e secundárias e os seus sais com os ácidos orgânicos ou inorgânicos ou com as bases caracterizado por se amidificar de forma adequada a função amina livre do composto de fórmula XI ou a do composto obtido após desprotecção da função -NH acilo do composto de fórmula IV.

   - 8ã 50

   Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3 para preparar compostos de fórmula I na qual R representa um átomo de hidrogénio assim como os seus ésteres com os álcoois contendo até 6 átomos de carbono, as suas amidas primárias e secundárias e os seus sais com os ácidos orgânicos ou inorgânicos ou com as bases, caracterizado por se utilizar à partida um composto de fórmula II na qual X representa um átomo de hidrogénio ou por se submeter o composto de fórmula IV a um reagente adequado de descarboxilação.

   - 9ã _

   Processo de acordo com qualquer das reivindicaçõ 1 a 3 para preparar compostos de fórmula I na qual R representa um radical metilo assim como os seus ésteres com os álcoois contendo até 6 átomos de carbono, as suas amidas primárias e secundárias e os seus sais com os ácidos orgânicos ou inorgânicos ou com as bases caracterizado por se utilizar à partida um composto de fórmula II na qual X representa um radical metilo.

   - lOã Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3 para preparar compostos de fórmula I na qual R representa um radical CHF₂ ou ainda etinilo ou vinilo assim como os seus ésteres com os álcoois contendo até 6 átomos de carbono, as suas amidas primárias e secundárias e os seus sais com os ácidos orgânicos ou inorgânicos ou com as bases caracterizado por se utilizar à partida um composto de fórmula II na qual X representa um radical CHF₂ ou ainda etinilo ou vinilo.

   - llã _

   Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se escolher o composto de partida de forma a preparar-se o ácido 6-(L-lisilamino)-3-heptenodióico assim como os seus ésteres com os álcoois contendo até 6 átomos de carbono, as suas amidas primárias e secundárias e os seus sais com as bases.

   - 12ã Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se escolher o composto de partida de forma a preparar-se :

   o ácido 6-Qú-alanilaminoJ 3-heptenodióico, oácido 2- Qj-alanilaminoJ 3-heptenodióico, o ácido 2-^N-(l-oxo-octadecil)L-alanil- -D-glutamilamino^heptano-dióico, o ácido 6-Q(4-hidroxi-l,4-dioxobutil)amincQ-3-hepteno-dióico, assim como os seus ésteres com os álcoois, contendo até 6 átomos de carbono, as suas amidas primárias e secundárias e os seus sais com as bases.

   - 13a Processo para a preparação de composições farmacêuticas caracterizado por se incorporar como ingrediente activo pelo menos um composto de fórmula I quando preparado de acor do com qualquer das reivindicações 1 a 10 ou pelo menos uma das suas amidas primárias ou secundárias e os seus sais com os ácidos inorgânicos ou orgânicos ou com as bases farmaceuticamente aceitáveis sob uma forma destinada a esta utilização.