PT842165E

PT842165E - Derivados de acido tiazolidina-4-carboxilico como agentes citoprotectores

Info

Publication number: PT842165E
Application number: PT97917549T
Authority: PT
Inventors: Mark R Hellberg
Original assignee: Alcon Laboratoires Inc
Priority date: 1996-03-25
Filing date: 1997-03-19
Publication date: 2001-08-30
Also published as: US5846988A; ES2156633T3; JPH11507081A; ATE201204T1; DE69704833D1; AU713581B2; EP0842165B1; WO1997035852A1; GR3036142T3; DE69704833T2; CA2220024A1; AU2584097A; DK0842165T3; EP0842165A1; CA2220024C

Description

DESCRIÇÃO “DERIVADOS DE ÁCIDO TIAZOLIDINA-4-C^RBOXÍLICO COMO AGENTES CITOPROTECTORES”

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção diz respeito a compostos farmacêuticos úteis para evitar as lesões teciduais induzidas por stress oxidativo. Em particular, a presente invenção diz respeito a derivados de ácido tiazolidina-4-carboxílico que possuem uma actividade dupla como antioxidantes e pró-fármacos cisteinicos, os quais são úteis enquanto agentes citoprotectores.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Sabe-se que o stress oxidativo contribui ou dá origem a diversas doenças. Para um estudo de recapitulação sobre doenças ou estados patológicos associados ao stress oxidativo veja-se as obras Drugs of the Future, vol. 13 (10), pág. 973 (1988) e Molecular and Cellular Biochemistry, vol. 84, pág. 199 (1988). A glutationa desempenha uma função importante para proteger os sistemas celulares contra lesões oxidativas. A cisteina é um aminoácido importante e constitui o substrato limitativo da velocidade na síntese da glutationa. Quando administrada de forma directa, a cisteina pode ser citotóxica. As formas de pró-fármaco da cisteina proporcionam um sistema de libertação de cisteina que permite a sua libertação a uma velocidade que reduz a citotoxicidade e facilita a síntese da glutationa. Foi já demonstrado que os pró-fármacos cisteinicos são eficazes para proteger os sistemas celulares contra diversas formas de stress. Para que estes agentes sejam eficazes é necessário que o pró-fármaco seja clivado quer por meios enzimáticos quer não enzimáticos. Uma vez libertada, a cisteina tem de ser convertida em glutationa para revelar um efeito terapêutico. Como obras de referência sobre a utilidade dos compostos tiazolidina- 1 d~ ^ ^—ç- -4-carboxilatos, enquanto pró-fármacos cisteínicos, refere-se Câncer, Chemotherapy and Pharmacology, vol. 28, pág. 166 (1991) e Arch. Gerontology and Geriatrics, vol. 1, pág. 299 (1982). 0 documento EP 0 373 002 A2 descreve a utilização de determinados ácidos 2-substituído-tiazolidina-4-carboxílicos, enquanto pró-fármacos cisteínicos, em medicamentos para retardar o aparecimento de cataratas em mamíferos. Nenhum dos substituintes definidos nas obras de referência concede propriedades de antioxidante ou de radical livre aos compostos ácidos 2-substituído-tiazolidina-4-carboxílicos descritos naquelas publicações. A patente norte-americana n° 4 868 114 descreve um método para estimular a biossíntese de glutationa em células de mamíferos, fazendo contactar as células com uma quantidade eficaz de determinados pró-fármacos L-cisteínicos. A patente norte-americana n°4 952 596 descreve derivados N--acílicos do ácido tiazolidina-4-carboxílico que possuem actividade antipirética, anti-inflamatória, mucolitica e analgésica para além da actividade demonstrada para o tratamento de patologias isquémicas e de patologias provocadas pela sobreprodução de radicais oxidantes.

No documento WO 95/15958 estão descritos compostos que possuem simultaneamente actividade antagonista do cálcio e actividade antioxidante. Estes compostos são úteis para evitar ou mitigar lesões teciduais, ao nível celular. O documento EP 0 033 151 AI descreve derivados dos ácidos hidroxifenil-tiazol, hidroxifenil-tiazolina e hidroxifenil-tiazolidina--carboxílicos que são úteis para influenciar o metabolismo do colagénio.

Nos documentos FR 2 547 729 AI e FR 2 547 728 AI estão descritos agentes citoprotectores que compreendem o ácido DL-tiazolidina--carboxílico. São desejáveis os compostos que não só possuem capacidade para aumentar as defesas naturais contra o stress oxidativo mas também sejam capazes de proteger os sistemas celulares contra lesões agudas provocadas por espécies activos de oxigénio. 2

Lz

DESCRIÇÃO ABREVIADA DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona compostos que são úteis como agentes citoprotectores. Estes compostos possuem uma actividade dupla como antioxidantes e pró-fármacos cisteínicos. As propriedades antioxidantes dos compostos da presente invenção protegem o sistema celular contra lesões agudas provocadas por espécies activas de oxigénio ou radicais livres, ao passo que as propriedades de pró--fármaco cisteinico enriquecem o sistema natural de defesa, ao facilitarem a síntese de glutationa. A presente invenção também diz respeito à utilização dos compostos da presente invenção para a preparação de um medicamento para fins específicos, conforme definido na memória descritiva.

DESCRIÇÃO MINUCIOSA DA INVENÇÃO

Os compostos da presente invenção combinam dois resíduos biologicamente activos distintos numa única entidade química, podendo ser representados pela fórmula estrutural seguinte Z-(CH2)nX(CH2)in—

N—C H \;(0)R (I) em que Z =

HO. m = 0 - 12; X = nada, NR1, 0 ou S(0)n; desde que quando X = NR1, 0 ou S(0)n, então m>0 e n>0; n’ 0 - 2; R1 = H ou alquilo (Ci-C6) ; 3 L·, ^ R = OH, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, alcoxilo(Ci-Ce), amino, mono- ou di-alquilamino, em que o alquilo possui entre 1 e 4 átomos de carbono, ou então um radical de um aminoácido de fórmula -NH- (CHj) n-CH (R2) -CO-R3; R2 = H ou alquilo (Ci-C4) facultativamente substituído por hidroxi, SH, SCH3 ou fenilo,' e R3 = OH, alcoxilo (Cj-Ce) / amino ou mono- ou di-alquilamino em que o alquilo possui entre 1 e 4 átomos de carbono. A porção fenólica dos compostos da presente invenção é especifi-camente seleccionada por forma a possuir uma actividade antioxidante ou abluente de radicais livres. 0 tiazolidina-4-carboxilato é se-leccionado segundo o seu potencial para actuar como pró-fármaco cisteínico.

Os compostos preferidos da presente invenção são os que satisfazem à fórmula (I) em que n = 0 - 2, m =0-2, X = nada, R = OH ou alcoxi (C2-C6) . Os compostos mais preferidos são aqueles em que n=0, m=0, X= nada, R = OH.

Os compostos de fórmula (I) podem ser preparados em conformidade com métodos conhecidos (H.T, Nagasawa, J.C. Roberts, USP 4 868 114), tal como adiante ilustrado no esquema 1. Combina-se o aldeído (II) com cisteína (comercialmente disponível e de \Aldrich Chemical Company’, Milwaukee, Wisconsin, E.U.A. (“Aldrich”) ) num solvente, tal como o metanol ou o etanol, e aquece-se a mistura ao refluxo durante 0,5 - 12 horas. Arrefece-se a mistura de reacção e isola-se o ácido carboxílico (II, fórmula (I) em que R = OH) por métodos convencionais. É possível converter o ácido carboxílico (II) nos derivados éster (fórmula (I) em que R -= alcoxilo) ou amida (fórmula (I) em que R = alquil- ou dialquil-amina) por tratamento do ácido (II) com o álcool ou com a amina adequados num solvente, tal como a dimetil-formamida ou o tetra-hidrofurano, e na presença de um agente de acoplamento, tal como a didiclo-hexil-carbodiimida ou 1-(3-dimetil-aminopropil)-3-etilcarbodiimida e 1-hidroxibenzotiazol ou 4-di-metilaminopiridina. 4 t f

Esquema 1

H2N^^C02H

Z—(CH2)nX(CH2)mC(0)H *2 —' y HS^ :id Z-(CH2)nX(CH2 ),5-^% h (o) oh (III) z—(CH2)nX (CH2)

V

(O) R :d O aldeído (II) pode ser preparado conforme descrito no esquema 2. 0 éster (IV) (M.R. Hellberg, G. Barnes, R.J. Collier, Jr., USP 5 424 321) pode ser reduzido para se obter o aldeído (II), utilizando DIBAL (Aldrich) num solvente, tal como o cloreto de metileno, a uma temperatura entre -20°C e -78°C. Em alternativa, o éster (IV) pode ser reduzido para o álcool (V), utilizando um agente de redução, tal como o hidreto de alumínio e lítio, num solvente, tal como o tetra-hidrofurano, efectuando-se depois a oxidação para se obter o aldeído (II), utilizando as condições de oxidação de Swern ou o reagente de Collins.

Esquema 2 -► Z—(CH2)nX(CH2)mC(0)H (II) Z-(CH2)nX(CH2)mC(0)0R2 (IV)

Z— (CH2) nX (CH2)mCH2OH (V)

Os compostos de fórmula (I) podem ser incorporados em diversos tipos de composições farmacêuticas, em conformidade com as técnicas de formulação conhecidas pelos especialistas na matéria. Por exemplo, os compostos podem ser incorporados em comprimidos, cápsulas, soluções, suspensões ou outras formas de dosagem adaptadas para administração oral; soluções e suspensões adaptadas para utilização parentérica; e supositórios para administração por via rectal. As 5

f soluções, suspensões e outras formas de dosagem adaptadas para aplicação tópica aos tecidos em causa, tal como as soluções de irrigação tecidual, são particularmente preferíveis para o tratamento de estados agudos associados a cirurgias ou outras formas de traumas. A presente invenção visa particularmente as composições adaptadas para o tratamento de tecidos oftálmicos. As composições oftálmicas da presente invenção irão incorporar um ou vários compostos de fórmula estrutural (I) e um veículo farmaceuticamente aceitável para o(s) referido(s) composto(s). É possível utilizar diversos tipos de veículos. De um modo geral, os veículos são de natureza aquosa. São geralmente preferíveis as soluções aquosas, devido à facilidade de formulação e tendo em conta também a capacidade do paciente para administrar facilmente tais composições, introduzindo uma ou duas gotas das soluções nos olhos afectados. No entanto, os compostos de fórmula (I) também podem ser facilmente incorporados noutros tipos de composições, tais como suspensões, geles viscosos ou semiviscosos ou outros tipos de composições solidas ou semi-sólidas. As suspensões são preferíveis para os compostos de fórmula (I) que sejam relativamente insolúveis em água. As composições oftálmicas da presente invenção também podem compreender outros ingredientes diversos, tais como tampões, conservantes, co--solventes e agentes para ajustar a viscosidade. É possível adicionar um sistema tampão adequado [v. g. fosfato de sódio, acetato de sódio ou borato de sódio) para evitar as variações do pH durante a armazenagem.

De forma típica, os produtos oftálmicos são embalados sob a forma de doses múltiplas. Sendo assim, são necessários conservantes para evitar a contaminação microbiana durante a sua utilização. Como conservantes adequados refere-se os seleccionados entre: cloreto de benzalcónio, timerosal, clorobutanol, metil-parabeno, propil--parabeno, álcool feniletílico, edetato dissódico, ácido sórbico, poliquatérnio-1 ou outros agentes conhecidos pelos especialistas na matéria. Tais conservantes são utilizados tipicamente num nível compreendido entre 0,001% e 1,0% em peso. 6 p L-i ^ΐ

Alguns dos compostos de fórmula (I) podem possuir uma solubilidade limitada em água, sendo por isso necessário utilizar um agente tensioactivo ou outro co-solvente adequado na composição. Como exemplos de tais co-solventes refere-se: polissorbatos 20, 60 e 80; ‘Pluronic F-681, ‘Pluronic F-84’ e ‘Pluronic P-103’; ciclodextrina; ou outros agentes conhecidos pelos especialistas na matéria. Tais co--solventes são utilizados tipicamente numa proporção compreendida entre 0,001% e 10% em peso.

Pode ser desejável que a viscosidade seja superior à das soluções aquosas simples, para aumentar a absorção ocular do composto activo, para diminuir a variabilidade ao ministrar as formulações, para reduzir a separação física dos componentes de uma suspensão ou emulsão de formulação e/ou para melhorar a formulação oftálmica. Como exemplos de tais agentes para ajustar a viscosidade refere-se os seleccionados entre álcool polivinílico, polivinil-pirrolidona, metil-celulose, hidroxipropil-metil-celulose, hidroxietil-celulose, carboximetil-celulose, hidroxipropil-celulose ou outros agentes conhecidos pelos especialistas na matéria. Tais agentes são utilizados tipicamente numa proporção compreendida entre 0,001% e 2% em peso.

As composições farmacêuticas que contêm iam ou vários compostos de fórmula estrutural (I) podem ser utilizadas para tratar pacientes que sofram ou sejam propensos a sofrer de diversos tipos de lesões celulares. Como exemplos representativos, mas não exaustivos, de estados patológicos que podem ser tratados com os compostos da presente invenção refere-se os seguintes: cataratas, retinopatias, degeneração muscular, lesões devidas a reperfusão isquémica, doenças cardíacas, isquémia cerebral, artrite reumatóide, cancro, perturbações neuromusculares e aterosclerose. A concentração dos compostos nas composições da presente invenção irá depender de diversos factores, incluindo a natureza do estado patológico que se pretende tratar com as composições. No entanto, a composição irá conter geralmente uma concentração compreendida entre cerca de 0,001% e cerca de 5% em peso, com base no peso total da composição (“% em peso”) . 7 p L·, A via de administração (v.g. tópica, parentérica ou oral) e o regime de dosagem irão ser determinados pelos médicos especialistas, com base em factores tais como a natureza exacta da doença que se pretende tratar, a sua gravidade, a idade e o estado físico geral do paciente e não só.

Conforme indicado antes, a utilização dos compostos de fórmula (I), para a preparação de uma composição farmacêutica para evitar ou reduzir os danos em tecidos oftálmicos ao nível celular, constitui um aspecto particularmente importante da presente invenção. As doenças oftálmicas que podem ser tratadas compreendem, mas sem que isso constitua qualquer limitação, as seleccionadas entre cataratas, retinopatias, doenças heredodegenerativas, degeneração macular, isquémia ocular, doenças neovasculares, glaucoma e danos associados a lesões dos tecidos oftálmicos, tais como danos por reperfusão isquémica, danos fotoquímicos e danos associados às cirurgias oculares, em particular lesões da retina, da cárnea ou de outros tecidos, provocadas por exposição à luz ou a instrumentos cirúrgicos. Os compostos também podem ser utilizados como complementos da cirurgia oftálmica, por exemplo, por injecção no humor vítreo ou subconjuntival a seguir a uma cirurgia oftálmica. Os compostos podem ainda ser utilizados para o tratamento intenso de doenças temporárias ou então podem ser administrados cronicamente, em especial no caso de doenças degenerativas. Os compostos também podem ser utilizados profilacticamente, em especial antes de uma cirurgia ocular ou antes de procedimentos oftálmicos não invasivos ou outros tipos de cirurgia. A utilização de soluções de irrigação em equilíbrio fisiológico, enquanto veículos farmacêuticos para os compostos de fórmula (I) , é preferível no.caso de os compostos serem administrados por via intra-ocular. Conforme aqui utilizada, a expressão “solução de irrigação em equilíbrio fisiológico” designa uma solução que é adaptada para manter a estrutura e a função físicas dos tecidos durante procedimentos médicos invasivos ou não invasivos. De forma típica, este tipo de solução irá conter electrólitos, tais como sódio, potássio, cálcio, magnésio e/ou cloreto; uma fonte energética, tal como a dextrose; e 8

Lc, r um tampão para manter o valor do pH da solução em níveis fisiológicos ou aproximadamente fisiológicos. São conhecidas diversas soluções deste tipo (v.g. Solução de Ringer Lactada). Como exemplos de soluções de irrigação intraocular em equilíbrio fisiológico refere-se a Solução de Irrigação Estéril ‘BSS®’ e a Solução de Irrigação Intraocular Estéril ‘BSS Plus®’ (Alcon Laboratories, Inc., Fort Worth, Texas, E.U.A.). Este último tipo de solução está descrito na patente norte-americana n° 4 550 022 (Garabedian et al.) .

As doses utilizadas para qualquer das finalidades anteriormente descritas irão estar compreendidas geralmente entre cerca de 0,01 e cerca de 100 miligramas por quilograma de massa corporal, administradas uma a quatro vezes por dia. A presente invenção é ainda ilustrada pelos exemplos seguintes. Os exemplos 1 e 2 ilustram a síntese de compostos de fórmula (I); os exemplos 3 e 4 demonstram a actividade fisiológica dos compostos e os métodos para medir tal actividade; e o exemplo 5 ilustra melhor as composições farmacêuticas da presente invenção.

Exemplo 1 Síntese de ácido (4R)-2-(3,5-di-terc-butil-4-hidroxifenil)-4--tiazolidina-carboxílico

Preparou-se uma mistura de 2,0 g (17,1 mmol) de cisteína (Aldrich) e 4,0 g (17,1 mmol) de 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzaldeído (Aldrich) em 100 mL de metanol e aqueceu-se ao· refluxo durante 2,25 horas. Deixou-se a mistura de reacção arrefecer até à temperatura ambiente e recolheu-se por filtração o sólido que se formou após o arrefecimento. Lavou-se o sólido com metanol e deixou-se recristalizar a partir de uma mistura de etanol/acetato de etilo. A recristalização a partir de etanol proporcionou 1,3 g (rendimento de 22%) de ácido (4R)-2-(3, 5-di-terc-butil-4-hidroxi-fenil)-4-tiazolidina-carboxílico com o aspecto de um sólido esbranquiçado, p.f. 163°C-165°C.

Análise elementar calculada para Ci8H27N03S Calculado: C, 64,05; H, 8,06; N, 4,15

Encontrado: C, 64,18; H, 8,08; N, 4,09 9 Γ ^—ç.

Exemplo 2 Síntese de ácido (4R)-2-(6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametil-3,4-di-hidro--2H-benzo[l, 2-b1pirano-2-il)-4-tiazolidina-carboxílico (i) Síntese do intermediário 6-hidroxi-2, 5,7, 8-tetrametil-3,4-di--hidro-2H-benzo[l, 2-b]pirano-2-il-metanal

Agitou-se durante 12 minutos uma solução preparada por adição sequencial de 2,9 g (23 mmol) de cloreto de oxalilo e 3,7 g (47 mmol) de diraetilsulfóxido a cloreto de metileno que tinha sido arrefecido para -78°C. Depois adicionou-se gota a gota à mistura de reacção uma outra solução constituída por 4,0 g (18 mmol) de 6-hidroxi-2,5,7,8--tetrametil-3, 4-di-hidro-2H-benzo[l, 2-b]pirano-2-il-metanol em 50 mL de cloreto de metileno. Depois de se agitar durante 40 minutos, adicionou-se gota a gota 7,3 g (72,6 mmol) de trietilamina ao longo de 5 minutos. Agitou-se a mistura de reacção à temperatura de -78°C durante 15 minutos e depois à temperatura ambiente durante 30 minutos. Diluiu-se a mistura de reacção com 100 mL de cloreto de metileno. Lavou-se a solução resultante (110 mL de água, 100 mL de salmoura, 100 mL de água), secou-se (sulfato de magnésio) e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter um óleo amarelo. Submeteu-se o óleo a cromatografia (Si02, 200 g, mistura de acetato de etilo:hexano a 1:9) para se obter 3,0 g (rendimento de 70%) de 6-hidroxi-2, 5, 7, 8-tetrametil-3, 4-di-hidro-2H-benzo[l, 2-b]pirano-2-il--metanal com o aspecto de um sólido branco. RMN-1)! (CDC13) δ 9,6 (s, 1H) , 4,3 (s, 1H) , 2,2 (s, 3H) ; 2,1 (s, 3H) ; 2,2-20 (m, 2H) , 1,9-1,7 (m, 2H), 1,4 (s, 3H) . (ii) Síntese de ácido (4R)-2-(6-hidroxi-2,5, 7, 8-tetrametil-3,4-di--hidro-2H-benzo[l, 2-t>]pirano-2-il) -4-tiazolidina-carboxílico— ·

Preparou-se uma mistura de 1,5 g (12,7 mmol) de cisteína e 3,0 g (13 mmol) do intermediário obtido no exemplo 2 anterior, o composto 6-hidroxi-2,5, 7,8-tetrametil-3, 4-di-hidro-2H-benzo[l, 2-b]pirano-2-il--metanal, em metanol e aqueceu-se ao refluxo durante 2,5 horas. Deixou-se a mistura de reacção arrefecer até à temperatura ambiente e depois agitou-se à temperatura ambiente de um dia para o outro. 10 p U, ^^

Filtrou-se a mistura de reacção e deixou-se o filtrado recristalizar a partir de etanol (3 vezes) para se obter 1,2 g (rendimento de 28%) de ácido (4R) -2-(6-hidroxi-2, 5,7, 8-tetrametil-3,4-di-hidro-2H--benzo[l, 2-b]pirano-2-il)-4-tiazolidina-carboxílico com o aspecto de um sólido branco, p.f. 184°C-186°C.

Análise elementar calculada para C17H23NO4S Calculado: C, 60,51; H, 6,87; N, 4,15

Encontrado: C, 60,61; H, 6,90; N, 4,17 A capacidade dos compostos de fórmula (I) para funcionarem como agentes citoprotectores foi avaliada conforme adiante descrito nos exemplos 3 (inibição da formação de peróxido lipídico) e 4 (inibição de alterações do cristalino provocadas por danos oxidativos).

Exemplo 3

Avaliação da capacidade citoprotectora A inibição da formação de peróxido lipídico, por acção dos compostos representativos da presente invenção, em comparação com o pró-fármaco cisteinico ácido 2-oxo-4-tiazolidina-carboxílico (Sigma Chemical Company, St. Louis MO), está indicada no quadro 1 seguinte. O efeito citoprotector do composto foi medido utilizando peças da retina de bovinos. Os tecidos da retina foram incubados em meio hipóxico durante 1 hora. Ao fim de 50 minutos de hipoxia adicionou-se ao meio os agentes de teste para permitir que nos 10 minutos seguintes o fármaco de difundisse no tecido, antes da reoxigenação. O veículo foi adicionado por si só ao grupo que não tinha fármaco. Após o período de incubação reoxigenou-se o tecido durante 1 hora. Determinou-se a peroxidação lipídica pela formação de substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (SRATB, o mesmo que TBARS). Homogeneizou-se os tecidos, adicionou-se o produto homogeneizado ao reagente constituído por ácido tricloroacético/ácido tiobarbitúrico e aqueceu-se em presença de BHT. Filtrou-se o produto homogenado e mediu-se a absorvência do sobrenadante por meios espectrofotométricos. Utilizou-se uma técnica de derivada dupla para calcular a concentração de SRATB presente em cada amostra. A quantificação foi efectuada com base num coeficiente molar de extinção igual a 1,56 x 105. 11

Quadro 1

Composto % de inibição da produção de SRATB (0,1 mM) Ciso (μΜ) Exemplo 1 95 0,05 Exemplo 2 90 3,0 Ácido 2-oxo-4-tiazolidina- -38 peroxidação -carboxílico elevada Exemplo 4 Avaliação da capacidade citoprotectora A inibição das alterações provocadas no cristalino por danos oxidativos, graças à acção dos compostos representativos da presente invenção, em comparação com o pró-fármaco cisteinico ácido 2-oxo-4--tiazolidina-carboxílico (Sigma Chemical Company, St. Louis MO), está indicada no quadro 2 seguinte. Mediu-se o efeito citoprotector utilizando cristalinos excisados de coelhos pigmentados, expostos a ‘diquat’, recorrendo ao método de Bhuyan (Free Radical Biology & Medicine, volume 12, páginas 251-261, 1992) . Procedeu-se à extracção dos cristalinos normais dos olhos imediatamente após o sacrifício dos coelhos pigmentados. Efectuou-se a incubação do cristalino em meio de bicarbonato de Ringer modificado por Krebs contendo mono--hidrato de dibrometo de diquat 1 mM (Imperial Chemical Industries, Ltd., Londres) e o composto de ensaio (1 mM) . Utilizou-se como contraprova um grupo que não continha fármacos.de ensaio. Os cristalinos foram incubados durante 3 horas a 37°C em banho de água agitado. No final do período de incubação removeu-se e homogeneizou-se cada um dos cristalinos. Estabeleceu-se os níveis de glutationa (GSH) e de malonidialdeído (MDA), tratando o sobrenadante com ácido tri-cloroacético para que ocorresse a precipitação das proteínas, e utilizando depois aliquotas do sobrenadante de TCA para se determinar os níveis de glutationa e de MDA em conformidade com procedimentos convencionais. Os grau de protecção foi medido pela inibição da perda de GSH e pela inibição da formação de malonidialdeído. 12

Quadro 2 Composto % de inibição da perda de GSH % de inibição da formação de MDA Exemplo 1 40 76 Ácido 2-oxo-4-tiazolidina- 9,4 28 -carboxílico

Exemplo 5

Formulação representativa A formulação seguinte pretende ilustrar melhor as composições farmacêuticas da presente invenção, em particular as composições para aplicação tópica ao olho. Neste exemplo o termo “composto” designa qualquer dos compostos de fórmula (I).

Ingrediente Quantidade (% em peso) Final idade Composto (base livre) 1,0 Ingrediente activo Álcool polivinilico, USP 1,4 Excipiente Fosfato de sódio monobásico (mono--hidrato), USP 0,05 Agente tampão Fosfato de sódio dibásico (anidro), USP 0,15 Agente tampão Cloreto de sódio, USP 0, 5 Agente de tonicidade EDTA dissódico (edetato dissódico), USP 0,01 Conservante Polissorbato 80, NF 0,05 Agente tensioactivo Solução de cloreto de benzalcónio, 0,01 + 5 Conservante NF excesso Hidróxido de sódio, NF q.s. ajustamento do pH Ácido clorídrico, NF q.s. ajustamento do pH Água para injecção, USP q.s. Veículo

Lisboa, 6 de Junho de 2001

O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL 1Ύ \ 13

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula Z—(CH2)nX(CH2)n

(0) R (I) em que Z = HO

V/

n = 0 - 12; m = 0 - 12; X = nada, NR1, 0 ou S(0)n; desde que quando X = NR1, O ou S(0)R, então m>0 e n>0; n’ = 0 - 2; R1 = H ou alquilo (Ci-C6) ; R = OH, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, alcoxilo (C!-C6), amino, mono- ou di-alquilamino, em que o alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono, ou um radical de um aminoácido de fórmula -NH- (CH2) n-CH (R2) -CO-R3; R2 = H ou alquilo(C!-C4) facultativamente substituído por hidroxi, SH, SCH3 ou fenilo; e R3 = OH, alcoxilo (Ci~C6), amino ou mono- ou di-alquilamino em que o alquilo possui 1 a 4 átomos de carbono.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que n = 0 - 2; m = 0-2; X = nada e R = OH ou alcoxi (C2-C6) .
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que n = 0; m = 0; X = nada e R = OH.
4. Composição farmacêutica que incorpora um veículo farmaceuti-camente aceitável e um agente citoprotector de fórmula 1 r Z-(CH2)nX(CH2) —f h N—( H \:(0)R (I) em que Z, η, m, X e R são como definidos na reivindicação 1.
5. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, em que n = 0 - 2; m = 0 - 2; X = nada e R = OH ou alcoxi (C2-C6) .
6. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5, em que n = 0; m = 0; X = nada e R = OH.
7. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, em que a composição é adaptada para administração ao olho.
8. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, em que o agente citoprotector está presente numa quantidade compreendida entre cerca de 0,001% e cerca de 5% em peso.
9. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3 para utilização como substância terapêutica activa.
10. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3, utilizável como substância terapêutica activa para a prevenção ou para o tratamento de cataratas, retinopatias, doenças heredo-degenerativas, degeneração macular, isquémia ocular, doenças neovasculares, glaucoma, danos por reperfusão isquémica, danos fotoquímicos, doenças cardíacas, isquémia cerebral, artrite reumatóide, cancro, perturbações neuromusculares ou ateros-clerose.
11. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3, utilizável como substância terapêutica activa que proporciona citoprotecção. 2
12. Utilização de iam composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3 para a preparação de uma composição farmacêutica utilizável para a prevenção ou para o tratamento de cataratas, retinopatias, doenças heredodegenerativas, degeneração macular, isquémia ocular, doenças neovasculares, glaucoma, danos por reperfusão isquémica, danos fotoquímicos, doenças cardíacas, isquémia cerebral, artrite reumatóide, cancro, perturbações neuromusculares ou aterosclerose.
13. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3 para a preparação de uma composição farmacêutica que proporciona citoprotecção. Lisboa, 6 de Junho de 2001 0 AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDIISTR1AL

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