PT781781E - Derivados camptotecina - Google Patents

Description

“DERIVADOS CAMPTOTECINA ”

Campo Técnico O presente invento refere-se a um novo derivado camptotecina tendo actividade antitumor aumentada. Mais particularmente, o presente inverno refere-se a um novo derivado camptotecina que é preparado por combinação de um composto aminoalcoxi- ou hidroxialcoxi-camptotecina com um polissacárido tendo grupos carboxilo através de um aminoácido ou de um péptido e, a um processo para a preparação do mesmo. Os derivados camptotecina do presente invento podem ser distribuídos, selectivamente, e numa quantidade significativa numa região alvo do doente, de modo a apresentarem actividades farmacológicas desejadas na região desejada do doente. Por conseguinte, as actividades antitumor dos compostos camptotecina são enormemente aumentadas podendo os seus efeitos secundários ser reduzidos, sendo assim os derivados camptotecina do presente invento extremamente úteis como um medicamento.

Arte Anterior A camptotecina é um alcaloide de planta que tem a fórmula seguinte:

O

e que tem mostrado ter actividade anti-leucémica e antitumor, estando um dos derivados camptotecina, o cloridrato de irinotecano {CPT-11, 7-etil-10--[4-(piperidino)-l -piperidinojcarboniloxicamptotecina}, já comercializado. No entanto, a CPT-11 apresenta potente actividade antitumor em utilização -2- clínica mas apresenta também uma forte toxicidade similar à de outros agentes antitumor, pelo que a CPT-11 tem sido restrita na sua utilização terapêutica [cf. Câncer and Chemotherapy, Vol. 21 pg. 709 (1994)]. Têm sido sintetizados vários compostos camptotecina e tem sido referido que estes compostos camptotecina apresentam actividades antitumor (Primeira Publicação de Patente Japonesa (Kokai) Nos. 279891/1989, 222048/1993, 87746/1994, 228141/1994 e Primeira Publicação de Patente Japonesa (Kohyo) Nos. 503505/1992, 502017/1992).

Por outro lado, de forma a aumentar as actividades antitumor e reduzir também, tanto quanto possível, os seus efeitos secundários estes compostos tendo tais efeitos secundários graves têm sido estudados como um seu tipo de sistema de distribuição de fármaco, pelo qual uma quantidade necessária de um fármaco é selectivamente distribuída num tecido alvo. Em especial, na quimioterapia dos cancros, é um problema grave não haver diferença significativa entre as células de tumor e as células normais na sensibilidade contra agentes anti-cancerígenos, pelo que têm sido realizados muitos estudos sobre sistemas de distribuição de fármaco tipo alvo, para agentes anti-cancerígenos, de forma a distribuir selectivamente um agente anti-cancerígeno numa região portadora de cancro, por exemplo, complexo doxorrubicina-polissacárido (WO 94/19376), liposoma que inclui doxorrubicina (Enhancement of effects of anticancer agents and targeting therapy, pg. 227 (1987), publicado por Science Forum Ltd.), mitomicina ligada a dextrano (Enhancement of effects of anticancer agents and targeting therapy, pg. 278 (1987), publicado por Science Forum Ltd.).

Como acima explicado, os compostos camptotecina apresentam excelentes actividades antitumor e são muito úteis como um medicamento, mas estão estritamente restritos a utilização clínica devido aos seus efeitos secundários graves. Assim, é desejável desenvolver um derivado camptote- -3- -3-

cina novo no qual as excelentes actividades farmacológicas dos compostos camptotecina sejam devidamente mantidas mas sejam suprimidos os efeitos secundários graves indesejáveis.

Sob as circunstâncias acima mencionadas, os presentes inventores realizaram um estudo intensivo por forma a obter um derivado camptotecina excelente sem o inconveniente dos compostos camptotecina convencionais com utilização das técnicas dos sistemas de distribuição de fármaco acima mencionados, tendo fmalmente descoberto que o novo derivado camptotecina tendo efeitos farmacológicos desejados pode ser obtido por combinação de um composto camptotecina tendo um grupo reactivo com um polissacárido tendo grupos carboxilo, através de um aminoácido ou de um péptido, e completaram o presente invento. A WO-A-95 10304 descreve a camptotecina ligada através de um péptido a um polímero sintético, que apresenta actividade antitumor e toxicidade diminuída.

Um objectivo do presente invento é o de proporcionar um derivado camptotecina novo compreendendo o composto camptotecina [I] ligado a um polissacárido tendo grupos carboxilo, através de um aminoácido ou de um péptido, que tem actividade antitumor aumentada com menos efeitos secundários.

Um outro objectivo do presente invento é o de proporcionar um processo para a preparação deste derivado camptotecina. O composto do presente invento é um derivado camptotecina compreendendo um composto camptotecina tendo um grupo aminoalcoxi ou um grupo hidroxialcoxi, representado pela fórmula [I]:

-4- na qual R1, R2, R3, R4 e R5 são (A) entre R1, R2, R3, R4 e R5, dois grupos adjacentes um do outro que se combinam para formar um grupo alquileno, ou ambos são um átomo de hidrogénio, e um dos três grupos restantes de R1, R2, R3, R4 e R5 é um grupo da fórmula: -X„-Alqm-R6 e os outros dois grupos são um átomo de hidrogénio, ou # (B) entre R1, R2, R3, R4 e R5, dois grupos adjacentes um do outro que se combinam para formar um grupo alquileno, e um dos átomos de carbono do referido grupo alquileno é substituído por um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 e os três grupos restantes de R1, R2, R3, R4 e cr R são um atomo de hidrogénio, um grupo alquilo ou um átomo de halogénio, e um ou dois grupos metileno do grupo alquileno em (A) ou (B) podem ser opcionalmente substituídos por -O-, -S- ou -NH-, X é -O- ou -NH-,

Alq é um grupo alquileno, R6 é -NH2, um grupo da fórmula: — n^}—nh ou -oh , m e n são ambos 0 ou 1 ou m é 1 e n é 0, composto camptotecina que está ligado a um polissacárido tendo grupos carboxilo, através de um aminoácido ou de um péptido, em que uma parte ou todos os grupos carboxilo do polissacárido está(ão) ligada(os) a um grupo amino do aminoácido ou do péptido através de ligações ácido-amida, e uma parte ou todos os grupos carboxilo do referido aminoácido ou do referido péptido está(ão) ligada(os) a R6 do composto [I] através de ligações ácido-amida ou éster. O derivado camptotecina do presente invento inclui compostos que são preparados por combinação do composto camptotecina [I] com um polissacárido tendo grupos carboxilo, através de um aminoácido ou de um péptido. Por exemplo, tais derivados camptotecina podem ser preparados por combinação de uma parte ou de todos os grupos carboxilo de um aminoácido ou de um péptido com R6 do composto [I] através de ligações ácido-amida ou éster, seguida por combinação de uma parte ou de todos os grupos carboxilo de um polissacárido com os grupos amino do referido aminoácido ou do referido péptido através de ligações ácido-amida. Mais particularmente, o derivado camptotecina do presente invento inclui compostos que são preparados por combinação do grupo carboxilo do terminal C de um aminoácido ou de um péptido com R6 do composto [I] através de uma ligação ácido-amida ou éster, seguida por combinação de uma parte ou de todos os grupos carboxilo de um polissacárido com o grupo amino do terminal N do referido aminoácido ou do referido péptido através de ligações ácido-amida.

Cada substituinte do composto da fórmula [I] do presente invento é a seguir explicado. O grupo alquileno na definição de (A) formado por combinação de dois grupos adjacentes de R1, R2, R3, R4 e R5, em que um ou dois grupos metileno pode(m) ser opcionalmente substituído(s) por -O-, -S- ou -NH-, é formado por combinação de dois substituintes um com o outro, nas posições 7 e 9, posições 9 e 10, posições 10 e 11 ou posições 11 e 12 da fórmula [I], incluindo o grupo alquileno um grupo alquileno de cadeia linear ou cadeia ramificada tendo 2 a 6 átomos de carbono, por exemplo, etileno, trimetileno, tetrametileno, pentametileno, hexametileno, metilme-tileno, metiletileno, metiltrimetileno, etc. O grupo alquileno acima no qual um dos grupos metileno é substituído por -O-, -S- ou -NH- inclui um grupo alquileno em que o grupo metileno na extremidade ou em qualquer outra posição diferente da extremidade é substituído por -O-, -S- ou -NH-. Por exemplo, tal grupo alquileno inclui um grupo alquilenoxi representado pela fórmula: -O-Alq’-(Alq’ é um grupo alquileno, a seguir, o mesmo) tal como metilenoxi, etile- noxi, trimetilenoxi, tetrametilenoxi, metiletilenoxi; um grupo alquile-noamino representado pela fórmula: -NH-Alq’- tal como metilenoamino, etilenoainino, trimetilenoamino, tetrametilenoamino, metiletilenoamino; um grupo alquilenotio representado pela fórmula: -S-Alq’- tal como metilenotio, etilenotio, trimetilenotio, tetrametilenotio, metiletilenotio; um grupo alquilenoxialquilo representado pela fórmula: -Alq’-0-Alq’- tal como metilenoximetilo, etilenoximetilo, trimetilenoximetilo, metiletile-noximetilo; um grupo alquilenoaminoalquilo representado pela fórmula: -Alq’-NH-Alq’- tal como metilenoaminometilo, etilenoaminometilo, tri-metilenoaminometilo, metiletilenoaminometilo; um grupo alquileno-tioalquilo representado pela fórmula: -Alq’-S-Alq’- tal como metilenotio-metilo, etilenotiometilo, trimetilenotiometilo, metiletilenotiometilo e semelhante. O grupo alquileno acima no qual dois grupos metileno são substituídos por -O-, -S- ou -NH- inclui um grupo alquileno em que dois grupos metileno nas extremidades ou em qualquer uma das posições diferentes das extremidades são substituídos por -O-, -S- ou -NH-. Por exemplo, tal grupo alquileno inclui um gmpo alquilenodioxi representado pela fórmula: -0-Alq’-0- tal como metilenodioxi, etilenodioxi, trimeti-lenodioxi, tetrametilenodioxi, metiletilenodioxi; um grupo alquileno-diamino representado pela fórmula: -NH-Alq’-NH- tal como metileno-diamino, etilenodiamino, trimetilenodiamino, tetrametileno-diamino, metiletilenodiamino; um grupo alquilenoditio representado pela fórmula: -S-Alq’-S- tal como metilenoditio, etilenoditio, trimetilenoditio, tetrame-tilenoditio, metiletilenoditio e semelhante. O Alq no grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 inclui um gmpo alquileno de cadeia linear ou cadeia ramificada tendo 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo, metileno, etileno, trimetileno, tetrametileno, pentametileno, hexametileno, metiletileno, metiltrimetileno, etc. O gmpo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 é, por exemplo, um grupo aminoalquiloxi (por exemplo, aminoetiloxi, aminopropiloxi), um grupo piperazinilalquiloxi (por exemplo, piperaziniletiloxi, piperazinilpropiloxi, piperazinilbutiloxi, piperazinil-pentiloxi), um grupo hidroxialquiloxi (por exemplo, hidroxietiloxi, hidroxipropiloxi, hidroxibutiloxi, hidroxipentiloxi), um grupo amino-alquilamino (por exemplo, aminoetilamino, aminopropilamino, amino-butilamino, aminopentilamino), um grupo piperazinilalquilamino (por exemplo, piperaziniletilamino, piperazinilpropilamino, piperazinilbutil-amino, piperazinilpentilamino), um grupo hidroxialquilamino (por exemplo, hidroxietilamino, hidroxipropilamino, hidroxibutilamino, hidroxi-pentilamino), um grupo aminoalquilo (por exemplo, aminometilo, amino-etilo, aminopropilo, aminobutilo, aminopentilo), um grupo piperazi-nilalquilo (por exemplo, piperazinilmetilo, piperaziniletilo, piperazi-nilpropilo, piperazinilbutilo, piperazinilpentilo), um grupo hidroxialquilo (por exemplo, hidroximetilo, hidroxietilo, hidroxipropilo, hidroxibutilo, hidroxipeníilo), grupo amino, gmpo piperazino e grupo hidroxi. O grupo alquileno na definição de (B) formado por combinação de dois grupos adjacentes de R1, R2, R3, R4 e R5, em que um ou dois grupos metileno pode(m) ser opcionalmente substituído(s) por -O-, -S- ou -NH- e um dos átomos de carbono do referido grupo alquileno é substituído por um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6, é formado por combinação de dois substituintes um com o outro, nas posições 7 e 9, posições 9 e 10, posições 10 e 11 ou posições 11 e 12 da fórmula [I]. Tal grupo alquileno inclui um grupo alquileno de cadeia linear ou cadeia ramificada tendo 2 a 6 átomos de carbono, por exemplo, etileno, trimetileno, tetrametileno, pentametileno, hexametileno, metiletileno, metiltrimetileno, etc. e o grupo alquileno em que um seu grupo metileno ou seus dois grupos metileno é(são) substituído(s) por -O-, -S- ou -NH- é(são) aquele(s) acima exemplificado^). Entre estes grupos alquileno, aqueles nos quais um dos átomos de -8- carbono é substituído por um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 são também acima exemplificados. O grupo alquilo inferior para os restantes grupos R1, R2, R3, R4 e R5 que não formam um grupo alquileno inclui um grupo alquilo de cadeia linear ou cadeia ramificada tendo 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, pentilo, hexilo, etc. O átomo de halogénio é flúor, cloro, bromo ou iodo.

Adicionalmente, exemplos da estrutura parcial formada pelo Anel A e Anel B na definição (A) acima da fórmula [I] são as estruturas seguintes: R6-Alqm-X„ R-Alqm-X„ R-Alqm-X„

R6-Alqm'Xn

R6-Alqm-X„

R6-Alqm-X„ c O 0 ; -9- em que X, Alq, R6, m e n são como acima definido.

Além disso, exemplos da estrutura parcial formada pelo Anel A e Anel B na definição (B) acima da fórmula [I] são as estruturas seguintes:

em que R1, R1, R2, R4 e R5 são cada um grupo alquilo, um átomo de halogénio ou um átomo de hidrogénio e X, Alq, R6, m e n são como acima definido.

Entre eles, as combinações preferidas de R1, R1, R2, R4 e R5 são:

(1) R e R combinam-se para formar um grupo trimetileno, R é um grupo 3-aminopropiloxi, R4 e R5 são cada um átomo de hidrogénio:

1 R1 é um grupo piperazinometilo, R1 e R5 são cada um átomo de 2 hidrogénio, R2 e R4 combinam-se para formar um grupo etilenodioxi: -10-

ι 2 5 (3) R é um grupo aminometilo, R e R são cada um átomo de hidrogénio, R3 e R4 combinam-se para formar um grupo etilenodioxi:

(4) R1, R2, R4 e R1 são cada um átomo de hidrogénio, R3 é um grupo 3-aminopropiloxi: h2n Λ/\

e (6) R1, R3, R4 e R1 são cada um átomo de hidrogénio, R2 é um grupo amino: nh2

1 R1 e R2 combinam-se para formar um grupo trimetileno substituído por amino, R3 é um grupo metilo, R4 é um átomo de flúor, R1 é um átomo de hidrogénio: - 11 - 0 “polissacárido tendo grupos carboxilo” do presente invento inclui aqueles descritos na WO 94/19376 acima mencionada e inclui polissacáridos tendo originalmente grupos carboxilo na sua estrutura (por exemplo, ácido hialurónico, ácido péptico, ácido algínico, condroitina, heparina, etc.) e polissacáridos não tendo originalmente qualquer grupo carboxilo (por exemplo, pululano, dextrano, manano, chitina, manoglucano, chitosano, etc.) mas sendo neles introduzidos grupos carboxilo. Entre estes polissacáridos, o dextrano é especialmente preferido, particularmente mais preferido é o dextrano tendo um peso molecular médio de 20000 a 400000 e particularmente ainda mais preferido é o dextrano tendo um peso molecular médio de 50000 a 150000 (sendo o referido peso molecular médio determinado pelo método de cromatografía de penetração em Gele (análise por CPG), Shinseikagaku Jikken Koza, vol. 20, pg. 7). Os polissacáridos não tendo originalmente qualquer grupo carboxilo mas sendo neles introduzidos grupos carboxilo significam aqueles preparados por substituição dos átomos de hidrogénio de uma parte ou de todos os grupos hidroxilo do polissacárido não tendo originalmente qualquer grupo carboxilo por um grupo carboxialquilo(C, ^). O “polissacárido tendo grupos carboxilo” do presente invento inclui também aqueles que são preparados por tratamento de um polissacárido não tendo originalmente qualquer grupo carboxilo com um agente redutor, seguido depois por substituição dos átomos de hidrogénio de uma parte ou de todos os grupos hidroxilo do produto por um grupo carboxialquilo(Ci_4). A porção alquilo do grupo carboxialquilo(C i „4) acima que substitui os átomos de hidrogénio de uma parte ou de todos os grupos hidroxilo do polissacárido pode ser ou um grupo alquilo de cadeia linear ou um grupo alquilo de cadeia ramificada. O grupo carboxialquilo(Ci^) é, de preferência, por exemplo, carboximetilo, 1-carboxietilo, 3-carboxipropilo, l-metil-3-carboxipropilo, 2-metil-3-carboxipropilo, 4-carboxibutilo, etc., sendo mais preferidos o carboximetilo e o 1-carboxietilo. -12-

No presente invento, o polissacárido tendo grupos carboxilo é, de preferência, um dextrano ou pululano carboximetilado.

Quando se introduz um grupo carboxialquilo nos polissacáridos, o grau de introdução neles é expresso como “grau de substituição” que é definido pelo número de grupos carboxialquilo por resíduo açúcar, i.e. expresso pela equação seguinte.

Grau de Substituição = Número de grupos carboxialquilo na molécula Número total de resíduos açúcar na molécula

Quando o grupo carboxialquilo é grupo carboximetilo, o grau de substituição é ocasionalmente expresso pelo grau de carboximetilação (grau CM).

Quando o polissacárido é pululano, dextrano ou manoglucano, e todos os seus grupos hidroxi são substituídos, o seu grau de substituição é 3, e o grau de substituição preferido está no intervalo de 0,3 a 0,8.

Quando o polissacárido é chitina, e todos os seus grupos hidroxilo forem substituídos, o seu grau de substituição é 2, e o grau de substituição preferido está no intervalo de 0,3 a 0,8.

Além disso, é essencial que o polissacárido do presente invento tenha pelo menos um grupo carboxialquilo na molécula, excepto os polissacáridos que têm originalmente grupos carboxilo. Por conseguinte, os polissacáridos que têm um grau de substituição de 0 devem ser excluídos do polissacárido do presente invento. O polissacárido que tem grupos carboxilo pode ser preparado pelo método descrito na WO 94/19376. O aminoácido que intervem entre um composto camptotecina [I] e um polissacárido tendo grupos carboxilo inclui aminoácidos naturais e aminoácidos sintéticos (incluindo D-aminoácido, L-aminoácido e uma sua mistura) e inclui também aminoácidos neutros, aminoácidos básicos ou -13- aminoácidos acídicos. Adicionalmente, o aminoácido do presente invento pode ser não apenas α-aminoácidos, mas também β-aminoácidos, γ-aminoácidos, ε-aminoácidos, etc., e inclui, por exemplo, glicina, a-alanina, β-alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, cisteína, metionina, ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, arginina, fenilalanina, tirosina, histidina, triptofano, prolina, hidroxiprolina, ácido γ-amino--butírico, ácido ε-aminocapróico, etc. O péptido do presente invento inclui péptidos derivados dos aminoácidos acima ou péptidos tendo compostos diferentes dos aminoácidos na sua parte de cadeia. Por exemplo, pode existir no meio da cadeia peptídica ou no terminal da cadeia peptídica, um ácido dicarboxílico tal como ácido succínico, uma diamina tal como etilenodiamina ou um diol tal como etilenoglicol. Além disso, o local de ligação da cadeia peptídica aos grupos carboxilo do polissacárido começa normalmente no terminal N da cadeia peptídica, através de ligações ácido-amida. Quando existe na cadeia peptídica um aminoácido básico (por exemplo, lisina), o local de ligação da cadeia peptídica pode ser invertido por ligação de um grupo ε-amino do aminoácido básico aos grupos carboxilo de um polissacárido e ligação de um grupo α-amino ao terminal C da cadeia peptídica.

Tais péptidos podem ser aqueles compostos por dois ou mais aminoácidos, i.e. aqueles tendo duas ou mais cadeias peptídicas, mais preferivelmente aqueles tendo 2 a 5 cadeias peptídicas. Exemplos adequados da cadeia peptídica são -Gli-Gli-L- ou D-Fen-Gli-, -Gli-Gli-, -Gli-Gli-Gli-, -Gli-Gli-Gli-Gli-, -Gli-Gli-Gli-Gli-Gli-, -L- ou D-Fen-Gli-, -L- ou D-Tir-Gli-, -L- ou D-Leu-Gli- e cadeias peptídicas contendo estas sequências (o terminal N destes péptidos ou cadeias peptídicas contendo estas sequências é introduzido nos grupos carboxilo de um polissacárido). Entre estes péptidos, são mais preferidos -Gli-Gli-T.- ou D-Fen-Gli-, -Gli--Gli-, -Gli-Gli-Gli-, -Gli-Gli-Gli-Gli-, -Gli-Gli-Gli-Gli-Gli-, -L- ou D-Fen- -Gli- e -L- ou D-Leu-Gli-. Os péptidos ainda mais preferidos são -Gli-Gli-L-Fen-Gli-, -Gli-Gli-, -Gli-Gli-Gli-, -Gli-Gli-Gli-Gli- e -L- ou D-Fen-Gli-,

Os derivados camptotecina do presente invento podem ser normalmente preparados por combinação do composto [I] com um aminoácido ou um péptido, seguida por reacção do produto com um polissacárido tendo grupos carboxilo.

Na reacção entre o composto [I] e um aminoácido ou um péptido, quando R6 da fórmula [I] é -NH2 ou um grupo piperazino, o composto [I] é combinado com o grupo carboxilo do terminal C de um aminoácido ou de um péptido através de ligações ácido-amida. Quando R6 da fórmula [I] é -OH, o composto [I] é combinado com o grupo carboxilo do terminal C de um aminoácido ou de um péptido através de ligações éster. Neste caso, é preferível proteger outros grupos funcionais de um aminoácido ou de um péptido que não participam nas referidas ligações ácido-amida ou ligações éster, por exemplo, o grupo amino do terminal N ou outros grupos carboxilo, são protegidos de uma forma convencional, antes da reacção do composto [I] e de um aminoácido ou de um péptido. O grupo protector pode ser um qualquer grupo protector que seja convencionalmente utilizado para protecção de aminoácidos, sendo o grupo protector de grupo amino, por exemplo, grupo t-butoxicarbonilo, grupo p-metoxibenziloxicarbonilo, etc., e sendo o grupo protector de grupo carboxilo, por exemplo, um grupo alquilo inferior (por exemplo, grupo t-butilo), grupo benzilo, etc. A produção das ligações ácido-amida ou ligações éster acima mencionadas entre R6 do composto [I] e um aminoácido ou um péptido é realizada por um método convencional, por exemplo, por reacção na presença de um agente de condensação num solvente adequado. O solvente inclui, por exemplo, dimetilformamida, tetra-hidrofurano, etc., e o agente de condensação inclui, por exemplo, diciclo-hexilcarbodiimida, cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, etc. O composto camptotecina assim preparado por combinação do composto [I] com um aminoácido ou um péptido, após remoção do grupo protector de um seu grupo amino ou grupo carboxilo por um método convencional, quando um seu grupo amino ou grupo carboxilo é protegido, é feito reagir com um polissacárido tendo grupos carboxilo, para dar os derivados camptotecina desejados do presente invento. Nesta reacçào, uma parte ou todos os grupos carboxilo do polissacárido é(são) combinada(os) com o grupo amino do terminal N do aminoácido ou do péptido que é previamente ligado ao composto camptotecina [I], através de ligações ácido-amida. A reacçào do composto camptotecina que é produzida por combinação do composto [I] com um aminoácido ou um péptido, e um polissacárido tendo grupos carboxilo é realizada por um método convencional, por exemplo, na presença de um agente de condensação num solvente adequado. 0 solvente inclui, por exemplo, água, etanol, dimetilformamida ou uma sua mistura e o agente de condensação inclui, por exemplo, cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 2-etiloxi-l-etiloxicarbonil-l,2-di-hidroquinolina, etc.

Nos derivados camptotecina do presente invento, a relação do polissacárido e do composto camptotecina [I] que é um ingrediente activo pode ser seleccionada de acordo com o tipo do polissacárido a ser utilizado, mas o conteúdo em composto camptotecina [I] no derivado camptotecina do presente invento está, de preferência, no intervalo seguinte.

Quando o polissacárido é pululano, dextrano, chitina, manoglucano ou heparina de N-acetil-N-dessulfurico, está no intervalo de 0,1 a 20% em peso, mais preferivelmente no intervalo de 2 a 10% em peso.

Quando o dextrano é utilizado como um polissacárido no presente invento, o peso molecular médio do derivado camptotecina do presente invento está, de preferência, no intervalo de 30000 a 500000, mais preferi- -16- velmente, no intervalo de 60000 a 200000, determinado por análise por CPG.

Os derivados camptotecina do presente invento, assim obtidos, podem ser convertidos num seu sal farmaceuticamente aceitável, se necessário. O sal farmaceuticamente aceitável inclui, por exemplo, sais com um metal alcalino ou um metal alcalino-terroso (por exemplo, sal de sódio, sal de potássio, sal de cálcio, etc.) ou sais com um aminoácido (por exemplo, sal de arginina, sal de lisina, etc.). ♦

Alguns dos compostos camptotecina da fórmula [I] do presente invento são compostos conhecidos, por exemplo, os compostos descritos na Primeira Publicação de Patente Japonesa (Kokai) Nos. 279891/1989, 222048/1993, 87746/1994, 228141/1994 e na Primeira Publicação de Patente Japonesa (Kohyo) Nos. 503505/1992, 502017/1993, etc., e podem ser preparados por métodos convencionais, tal como pelo método descrito no Esquema Reaccional 1 seguinte: Í

Esquema Reaccional 1

[i] em que R1, R2, R3, R4 e R5 são como acima definido, R1, R2, R3, R4 e R5 são como R1, R2, R3, R4 e R5, com excepção para um grupo amino, um grupo piperazino ou um grupo hidroxilo no grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6, que está contido num de R , R , R , R e R , que está protegido.

Isto é, o composto aminocarbonilo (1) é condensado com uma piranoindolidina (2) conhecida (cf. EP-0220601-A) por um método conhecido como reacção de condensação de Friedlãnder (cf. Organic Reactions, 28, pgs. 37-202, John Wiley & Sons, Inc., New York (1982)), seguida por remoção dos grupos protectores do produto para dar o composto camptotecina [I].

No processo acima, pode-se introduzir um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6, que está contido num de R1, R2, R3, R4 e R5, após a referida reacção de condensação de Friedlãnder, quando m é 1 e n é 1.

Isto é, no processo do Esquema Reaccional 1 acima, utiliza-se um composto da fórmula (1) em que um grupo correspondente a um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 é um grupo hidroxilo (-OH) ou um grupo amino (-NH2), que se condensa com o composto (2) por reacção de condensação de Friedlãnder e o produto condensado resultante é feito reagir com um aminoalcanol ou hidroxialcanol protegido representado pela fórmula: Rõ-Alqm-OH (R6 é um grupo amino protegido, um grupo piperazino protegido ou um grupo hidroxi protegido e Alq e m são como acima definido) ou um seu derivado reactivo (por exemplo, um haleto de aminoalquilo protegido, um haleto de hidroxialquilo protegido), seguida por remoção dos grupos protectores deles para dar o composto camptotecina desejado [I]. O composto aminocarbonilo de partida (1) pode ser preparado pelo Esquema Reaccional 2 seguinte:

Esquema Reaccional 2 R2' R1 R2’ R1' R3'\ Λ OH Agente oxidante OH R4' ^ R4'"^ T R5' no2 w I R5’ no2 (a) R2’ R1’ (b) Catalisador/redução catalítica R3'\ Λ -w R4'^ T ^ nh2 R5' (1) em que R1, R2, R3, R4 e R5 são como acima definido. O composto hidroxilo (a) é tratado com um agente oxidante tal como dicromato de piridínio para dar um composto cetona (b), que é posteriormente submetido a redução catalítica na presença de um catalisador adequado tal como paládio-carbono para dar o composto (1).

Quando m e n são 1, o grupo da fórmula: -Xp-Alq^-R6, que está contido num de R1, R2, R3, R4 e R5, pode ser introduzido no composto (a) por reacção de um composto da fórmula (a) em que um grupo correspondente a um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 é um grupo hidroxilo (-OH) ou um grupo amino (-NH2) com um composto da fórmula: HO-Alq-R6 (Alq e R6 são como acima definido) ou um seu derivado reactivo (por exemplo, um haleto de alquilo substituído).

Os derivados camptotecina do presente invento e um seu sal farmaceuticamente aceitável apresentam excelente actividade antitumor contra vários tumores, em especial eles apresentam excelentes efeitos terapêuticos nos tumores sólidos tais como cancro dos pulmões, cancro do -19- útero, cancro dos ovários, cancro da mama, cancro gastrintestinal (cancro do intestino grosso, cancro gástrico, etc.).

Os derivados camptotecina do presente invento e um seu sal farmaceuticamente aceitável são administrados, de preferência, paren-tericamente (por exemplo, injecção intravascular) e são normalmente utilizados na forma de uma preparação líquida (por exemplo, solução, suspensão, emulsão, etc.). A dosagem dos derivados camptotecina do presente invento varia de acordo com o método de administração, idade, peso ou condição do doente, mas está normalmente no intervalo de 0,02-50 mg/kg/dia, mais preferivelmente, no intervalo de 0,1-10 mg/kg/dia, convertida na dose do composto camptotecina [I] (quando R6 é -NH2, um cloridrato do composto camptotecina [I] e quando Rõ é um grupo da fórmula -n ^ ^nh um cloridrato ou dicloridrato do composto camptotecina [I]).

Os derivados camptotecina do presente invento e um processo para a sua preparação são ilustrados com mais detalhe pelos Exemplos seguintes, mas não devem ser entendidos como limitados a estes. *

Exemplo 1

Preparação do derivado camptotecina da fórmula seguinte:

[CM-Dextrano-Na: sal de sódio de carboximetildextrano] (1) Preparação do 3-(t-butoxicarbonilamino)propanol O 3-aminopropanol (6,0 g) é dissolvido em cloreto de metileno (50 ml) e a eles adiciona-se, gota-a-gota, com agitação dicarbonato de di-t-butilo (18,3 g) sob arrefecimento com gelo. A mistura é agitada à tem- -20- peratura ambiente durante 12 horas e concentrada e o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gele para dar o composto do título (13,98 g) como um óleo incolor.

Rendimento: 99,9% IV (Puro): vnBXcm·1 = 3380, 1790

Massa: m/e = 176 ([Μ I II]+) RMN (300 MHz, CDC13): ô™s = 1,45 (9H, s), 1,62-1,72 (2H, m), 3,0 (1H, s largo), 3,29 (2H, dd, J=12Hz, 6Hz), 3,66 (2H, dd, J=12Hz, 6Hz), 4,80 (1H, s largo) (2) Preparação do tosilato de 3-(t-butoxicarbonilamino)propilo O 3-(t-butoxicarbonilamino)propanol (10,0 g) é dissolvido em cloreto de metileno (100 ml) e a eles adiciona-se com agitação trietilamina (8,66 g) e cloreto de tosilo (16,3 g) sob arrefecimento com gelo e a mistura reaccional é agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional é concentrada e o resíduo é dissolvido numa mistura de água e acetato de etilo. A fase orgânica é separada, lavada com uma solução saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gele para dar o composto do título (15,37 g) como um óleo amarelo pálido.

Rendimento: 82% IV (Puro): vIMXcm·1 = 3400, 3340,1700

Massa: m/e = 352 ([M+Na]+) RMN (300 MHz, CDC13): ó™s = 1,42 (9H, s), 1,78-1,90 (2H, m), 2,45 (3H, s), 3,11-3,22 (2H, m), 4,09 (2H, t, J=6Hz), 4,5-4,65 (1H, m), 7,36 (2H, d, J=8Hz), 7,77-7,83 (2H, m) (3) Preparação do 5-[3,-(t-butoxicarbonilamino)propiloxi]-l-hidroxi-8--nitro-1,2,3,4-tetra-hidronaftaleno O 1,5-di-hidroxi-8-nitro-1,2,3,4-tetra-hidronaftaleno (2,0 g) (J. Med. Chem., 1973, 16 (3), 254) é dissolvido em DMF seca (80 ml) e a eles adiciona-sc carbonato dc potássio (2 equivalentes), iodeto de sódio (1,4 equivalente) e tosilato de 3-(t-butoxicarbonilamino)propilo (1,4 equivalente). A mistura reaccional é agitada a 50°C durante 24 horas e a esta adiciona-se acetato de etilo. A mistura é lavada com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca sobre sulfato de sódio. O resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gele para dar o composto do título (3,05 g) como um pó amorfo amarelo pálido.

Rendimento: 87% IV (Puro): vmaxcn>1 = 3360, 1695 Massa: m/e = 384 ([M+NHU]*) RMN (300 MHz, CDC13): δτΜδ = 1,36 (9H, s), 1,57-1,90 (6H, m), 2,52-2,71 (2H, m), 3,11 (2H, q, J=6Hz), 4,07 (2H, t, J=6Hz), 5,12-5,17 (2H, m), 6,89 (1H, t, J=5,5Hz), 6,96 (1H, d, J=9Hz), 7,68 (1H, d, J=9Hz) (4) Preparação da 5-[3 ’-(t-butoxicarbonilamino)propiloxi]-8-nitro-1,2,3, 4-tetra-hidronaftaleno-1 -ona O 5-[3 ’-(t-butoxicarbonilamino)propiloxi]-1 -hidroxi-8-nitro-1,2,3,4--tetra-hidronaftaleno (2,46 g) é dissolvido em cloreto de metileno seco (110 ml) e a eles adicionam-se peneiros moleculares 3A (6,73 g) e diclorocromato de piridínio (1,5 equivalente) e a mistura é refluxada. Depois da reacção estar completa, a mistura é diluída com éter e os materiais insolúveis são removidos por filtração através de uma almofada de Celite. O filtrado é concentrado e o resíduo é purificado porero-matografia em coluna de sílica gele para dar o composto do título (1,87 g) como um pó incolor. P.f. 76-77°C Rendimento: 76% IV (Fundido): vmaxcm'' - 3550, 1700 Massa: m/e = 382 ([M+NH4]+) RMN (300 MHz, CDC13): Ô™s = 1,44 (9H, s), 2,02-2,20 (4H, m), 2,68-2,73 (2H, m), 2,92 (2H, t, J=6Hz), 3,36 (2H, q, J=6,5Hz), 4,12 (2H, t, J=6Hz), 4,78 (1H, s largo), 6,95 (1H, d, J=9Hz), 7,39 (1H, d, J=9Hz) (5) Preparação da 8-amino-5-[3’-(t-butoxicarbonilamino)propiloxi]--1,2,3,4-tetra-hi dronaftaleno-1 -ona A 5-[3 ’-(t-butoxicarbonilamino)propiloxi]-8-nitro-1,2,3,4-tetra-hidro naftaleno-l-ona (3,55 g) é dissolvida em etanol (160 ml) e a eles adiciona--se paládio-carbono a 10% (420 mg). A mistura é agitada sob atmosfera de hidrogénio durante 1,5 hora e o catalisador é removido por filtração. O filtrado é concentrado e o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gele para dar o composto do título (3,56 g) como um óleo amarelo. P.f. 112-115°C Rendimento: 83% IV (Nujol): Vmax001'1 = 3440,3340,1700,1650 Massa: m/e = 335 ([M+H]+) RMN (300 MHz, CDC13): ô™s = 1,45 (9H, s), 1,92-2,67 (4H, m), 2,61 (2H, t, J=6Hz), 2,87 (2H, t, J=6Hz), 3,35 (2H, q, J=6,5Hz), 3,94 (2H, t, J=6Hz), 4,85 (1H, s largo), 6,10 (2H, s largo), 6,48 (1H, d, J=9Hz), 6,94 (1H, d, J=9Hz) (6) Preparação da 10-[3’-(t-butoxicarbonilamino)propiloxi]-7,9-trimeti-leno-(20S)-camptotecina A 8-amino-5-[3 ’-(t-butoxicarbonilamino)propiloxi]-1,2,3,4-tetra-hi-dronaftaleno-l-ona (2,03 g) é dissolvida em etanol (85 ml) e a eles adiciona-se (4S)-7,8-di-hidro-4-etil-4-hidroxi-1 H-pirano[3,4-f]indolidina--3,6,10(4H)-triona (800 mg) e ácido p-toluneossulfónico (58 mg) e a mistura é refluxada durante 17 horas. Depois da reacção estar completa, a mistura é concentrada sob pressão reduzida para se remover o solvente e o resíduo resultante é purificado por cromatografía em coluna de sílica gele para dar o composto do título (850 mg) como um pó amarelo pálido. P.f. 225-227°C (decomposto)

Rendimento: 50% IV (Nujol): vmaxcm·' = 3440,3325, 1750, 1740,1655, 1620

Massa: m/e = 562 ([M+H]+) RMN (300 MHz, CDC13): ô™s = 1,03 (3H, t, J=7,5Hz), 1,45 (9H, s), 1,82-2,18 (6H, m), 3,06-3,13 (4H, m), 3,41 (2H, q, J=6Hz), 3,79 (1H, s), 4,24 (2H, t, J=6Hz), 4,9 (1H, largo), 5,16 (2H, s), 5,30 (1H, d, J=16Hz), 5,75 (1H, d, J=16Hz), 7,51 (1H, d, J=9Hz), 7,61 (1H, s), 8,06 (1H, d, J=9Hz) (7) Preparação do cloridrato de 10-(3’-aminopropiloxi)-7,9-trimetileno--(20S)-camptotecina A 10-[3 ’-(t-butoxicarbonilamino)propiloxi]-7,9-trimetileno-(20S)--camptotecina (836 mg) é suspensa em dioxano (30 ml) e a eles adiciona--se, gota-a-gota, com agitação um ácido clorídrico a 18% em dioxano (15 ml), sob arrefecimento com gelo. A mistura reaccional é agitada à temperatura ambiente, e depois da reacção estar completa, adiciona-se à mistura reaccional éter isopropílico e agita-se. O pó precipitado é recolhido por filtração, lavado com éter e seco sob pressão reduzida. O pó amarelo assim obtido é dissolvido em água e liofílizado para dar o composto do título (620 mg) como um pó amarelo. -24- P.f. >194°C (decomposto)

Rendimento: 84% IV (Nujol): vmaxcm·' = 1740,1655 Massa: m/e = 462 ([M-Cl]*) RMN (300 MHz, d6-DMSO): 6™s = 0,88 (3H, t, J=7,5Hz), 1,81-1,94 (2H, m), 1,97-2,15 (4H, m), 3,01-3,14 (6H, m), 4,28 (2H, t, J=6Hz), 5,23 (2H, s), 5,43 (2H, s), 7,28 (1H, s), 7,71 (1H, d, J=9,5Hz), 7,95-8,08 (3H, s largo), 8,03 (1H, d, J=9,5Hz) (8) Preparação da 10-[3’-(t-butoxicarbomlglicilglicil-L-fenilalanilglicil-amino)propiloxi]-7,9-trimetileno-(20S)-camptotecina O cloridrato de 10-(3’-aminopropiloxi)-7,9-trimetileno-(20S)--camptotecina (158 mg) e diisopropiletilamina (49 mg) são dissolvidos com agitação em DMF (5 ml) e a eles adiciona-se uma solução de t-butoxicarbonilglicilglicil-L-fenilalanilglicina (278 mg) e N-hidroxis-succinimida (143 mg) em DMF seca (8 ml) e, posteriormente, adiciona-se a eles com agitação cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbo-diimida (183 mg), sob arrefecimento com gelo. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Depois da reacção estar completa, a mistura é concentrada sob pressão reduzida para se remover o solvente e o resíduo resultante é purificado por cromatografia em coluna de sílica gele para dar o composto do título (285 mg) como um pó amarelo.

Rendimento: Quantitativo IV (Nujol): vmaxcm·' = 3290,1660 Massa: m/e = 880 ([M+H]+) RMN (300 MHz, CDC13): ô™s = 1,02 (3H, t, J=7,5Hz), 1,43 (9H, s), 1,85-1,94 (2H, m), 2,02-2,10 (4H, m), 2,97-3,05 (5H, m), 3,23 (1H, dd, J=14Hz, 5Hz), 3,49 (2H, q, J~6,5Hz), 3,60-3,80 (6H, m), 4,20 (1H, t, J=6Hz), 4,50-4,56 (1H, m), 5,11 (2H, s), 5,29 (1H, d, J=16,5Hz), 5,71 (1H, d, J=16,5Hz), 5,85 (1H, t largo), 7,08 (1H, m), 7,18-7,27 (5H, m), 7,45 (1H, d, J=7Hz), 7,52 (1H, d, J=9,5Hz), 7,58 (1H, s), 7,71 (1H, m), 7,99 (1H, d, J=9,5Hz) (9) Preparação do cloridrato de 10-[3 ’-(glicilglicil-L-fenilalanilglicíl-amino)propiloxi]-7,9-trimetileno-(20S)-camplolecina A 10-[3 ’-(t-butoxicarbonilglicilglicil-L-fenilalanilglicilamino)-propi-loxi]-7,9-trimetileno-(20S)-camptotecina (273 mg) é dissolvida em dioxano (10 ml) e a eles adiciona-se, gota-a-gota, com agitação ácido clorídrico a 18% em dioxano (15 ml), sob arrefecimento com gelo. A mistura reaccional é agitada à temperatura ambiente e depois da reacção estar completa, adiciona-se à mistura éter isopropílico. A mistura é agitada e o pó precipitado é recolhido por filtração, lavado com éter e seco sob pressão reduzida. O pó amarelo assim obtido é dissolvido em água e liofilizado para dar o composto do título (210 mg) como um pó amarelo. P.f. >174°C (decomposto)

Rendimento: 83% IV (Nujol): vmaxcm-' = 3190, 1745, 1650 Massa: m/e = 780 ([M-C1]+) RMN (300 MHz, d6-DMSO): 5™s = 0,89 (3H, t, J=7Hz), 1,26-1,32 (2H, m), 1,86-2,04 (6H, m), 2,79 (1H, dd, J=14Hz, 10Hz), 2,98-3,05 (5H, m), 3,28-3,36 (2H, m), 3,54-3,88 (6H, m), 4,20 (2H, t, J=6Hz), 4,45-4,54 (1H, m), 5,19 (2H, s), 5,43 (2H, s), 7,11-7,27 (5H, m), 7,35 (1H, s), 7,71 (1H, t, J=9,5Hz), 7,97 (1H, t, J=5,5Hz), 8,03 (1H, d, J=9,5Hz), 8,19 (3H, largo), 8,35 (1H, t, J=6Hz), 8,43 (1H, d, J=8Hz), 8,65 (1H, t, J=5,5Hz) O composto camptotecina tendo um grupo amino, obtido pelo processo acima, é condensado com um composto de elevado peso molecular solúvel em água tendo grupos carboxilo tal como carboximetildextrano (a seguir referido como CM-Dextrano) para dar o derivado camptotecina desejado. A reacção de condensação é realizada na presença de um agente de condensação tal como uma carbodiimida solúvel em água [cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 2-etoxi-l-etoxicarbonil-l,2-di-hidroquinolina, etc.] em água ou numa mistura de água e um solvente orgânico. (10) Preparação do derivado camptotecina O sal de sódio de CM-Dextrano (grau CM; 0,5) (500 mg) é dissolvido em água (20 ml) e a eles adiciona-se, com agitação, cloridrato de 10-[3’-(glicil-glicil-L-fenilalanil-glicilamino)propiloxi]-7,9-trimetileno--(20S)-camptotecina (50 mg) a uma temperatura inferior a 10°C. À mistura adiciona-se cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (1,5 g), durante a qual o valor de pH da mistura é mantido a pH 6,5-7,0 com ácido clorídrico 0,1N. A mistura é agitada a uma temperatura inferior a 10°C durante duas horas e o seu valor de pH é ajustado a pH 9 com hidróxido de sódio 0,1N. A mistura reaccional é purificada por cromatografia em coluna de permuta iónica (AGMP-50, tipo Na, 30 ml, fabricada por Bio-Rad, Laboratories, Inc.). As fraeções contendo o composto desejado são combinadas (30 ml) e a elas adiciona-se uma solução aquosa de cloreto de sódio 3M (1,2 ml) e a mistura é vertida em etanol (150 ml). Os precipitados são recolhidos por centrifugação, adiciona-se água (20 ml) ao precipitado e, em seguida, a mistura é filtrada. Ao filtrado adiciona-se uma solução aquosa de cloreto de sódio 3M (0,4 ml) e a mistura é adicionada, com agitação, a etanol (80 ml). Os precipitados são recolhidos por filtração, lavados com o solvente e secos sob pressão reduzida para dar o derivado camptotecina desejado (415 mg). O teor em cloridrato de 10-(3’-aminopropiloxi)-7,9-trimetileno--(20S)-camptotecina (o composto do Exemplo 1-(7)) no derivado camptotecina desejado é de 4,4%, calculado com base na absorvância a -27- 380 nm. De acordo com a análise por cromatografia de penetração em gele (CPG), o peso molecular médio do derivado camptotecina desejado é de 160000 e o grau de distribuição (pM/nM) é de 1,57.

Condições para análise por CPG: G4000SWXL (fabricada por Toso, Ltd), tampão de fosfato 0,2M (pH 7,0)

Exemplo 2

Preparação do derivado camptotecina da fórmula seguinte:

(1) Preparação da 7-(4’-(t-butoxicarbonilglicilglicil-L-fenilalanilglicil)--piperazino)metil-10,11 -etilenodioxi-(20S)-camptotecina O composto do título (518 mg) é obtido da mesma forma que no Exemplo l-(8) como um pó amarelo a partir de cloridrato de 7-piperazinometil-l 0,11 -etilenodioxi-(20S)-camptotecina (450 mg) e t-bu-toxicarbonil-glicil-glicil-L-fenilalanilglicina (2 equivalentes).

Rendimento: 74% IV (Nujol): vmaxcm-' = 3280,1750, 1655

Massa: m/e = 923 ([M+H]+) RMN (300 MHz, d6-DMSO): 5™s = 0,89 (3H, t, J=7,5Hz), 1,37 (9H, s), 1,85-2,1 (2H, m), 2,3-2,6 (4H, m), 2,75 (1H, dd, J=14Hz, 10Hz), 3,05 (1H, dd, J=14Hz, 4,5Hz), 3,3-3,6 (6H, m), 3,58 (1H, dd, J=21Hz, 5,5Hz), 3,74 (1H, dd, J=17Hz, 5,5Hz), 3,9-4,1 (4H, m), 4,44 (4H, s), 4,58 (1H, m), 5,24 (2H, s), 5,42 (2H, s), 6,50 (1H, s), 6,97 (1H, t, J=6Hz), 7,1-7,3 (6H, m), 7,55 (1H, s), 7,77 (1H, s), 7,8-7,9 (1H, largo), 8,05-8,2 (2H, m) (2) Preparação do cloridrato de 7-(4’-(glicilglicil-L-fenilalanilglicil)--piperazino)metil-10,11 -etilenodioxi-(20S)-camptotecina O composto do título (409 mg) é obtido da mesma forma que no Exemplo l-(9) como um pó amarelo a partir de 7-(4’-(t-butoxicarbonil-glicilglicil-L-fenilalanilglicil)piperazino)metil-10,ll-etilenodioxi-(20S)--camptotecina (478 mg). P.f. 237-239°C (decomposto) IV (Nujol): Vmax”"·1 = 3250,1745, 1655

Massa: m/e = 823 ([M-C1]+) RMN (300 MHz, d6-DMSO): ô™s = 0,88 (3H, t, J=7Hz), 1,8-1,99 (2H, m), 2,79 (1H, dd, J=14Hz, 10Hz), 3,07 (1H, dd, J=14Hz, 4Hz), 3,1-4,3 (16H, m), 4,47 (4H, s), 4,55-4,70 (1H, m), 5,44 (2H, s), 5,67 (2H, s), 7,15-7,32 (6H, m), 7,65 (1H, s), 8,05 (1H, s), 8,05-8,20 (3H, largo), 8,29 (1H, largo), 8,39 (1H, d, J=8,5Hz), 8,57 (1H, t, J=5,5Hz) (3) Preparação do derivado camptotecina O sal de sódio de CM-Dextrano (grau CM; 0,5) (1,2 g) e o cloridrato de 7-(4 ’ -(glicilglicil-L-fenilalanilglicil)piperazino)metil-10,11 -etilenodioxi--(20S)-camptotecina (168 mg) são tratados da mesma forma que no Exemplo 1-(10) para dar o composto camptotecina desejado (798 mg) como um pó amarelo pálido. O teor em cloridrato de 7-piperazinometil--10,1 l-etilenodioxi-(20S)-camptotecina no derivado camptotecina desejado é de 1,1%, calculado com base na absorvância a 380 nm. De acordo com a análise por cromatografia de penetração em gele (CPG), o peso molecular médio do derivado camptotecina desejado é de 169000 e o grau de distribuição (pM/nM) é de 1,32.

Condições para análise por CPG: G4000SWXL (fabricada por Toso, Ltd), tampão de fosfato 0,2M (pH 7,0)

Exemplo 3

Preparação do derivado camptotecina da fórmula seguinte:

(1) Preparação da 7-N-(t-butoxicarbonilglicilglicil-L-fenilalanilglicil)- -aminometil-10,1 l-etilenodioxi-(20S)-camptotecina O composto do título (232 mg) é obtido da mesma forma que no Exemplo l-(8) como um pó amarelo a partir de cloridrato de 7-aminometil--10,1 l-etilenodioxi-(20S)-camptotecina (222 mg) e t-butoxicarbonil-glicil--glicil-L-fenilalanilglicina (2 equivalentes).

Rendimento: 58% IV (Nujol): vmaxcm·' = 3285, 1750, 1650

Massa: m/e - 854 ([M+H]+) RMN (300 MHz, d6-DMSO): ô™s = 0,88 (3H, t, J=7,5Hz), 1,35 (9H, s), 1,78-1,94 (2H, m), 2,74 (1H, dd, J=14Hz, 10Hz), 2,99 (1H, dd, J=14Hz, 4,5Hz), 3,4-3,8 (4H, m), 4,34-4,50 (1H, m), 4,42 (4H, s), 4,66-4,82 (2H, m), 5,42 (4H, s largo), 6,50 (1H, s), 6,98 (1H, t, J=6Hz), 7,12-7,28 (5H, m), 7,26 (1H, s), 7,56 (1H, s), 7,80 (1H, s), 7,91 (1H, largo), 8,14 (1H, d, J=7,5Hz), 8,32 (2H, t, J=7,5Hz), 8,58 (1H, m) (2) Preparação do cloridrato de 7-N-(glicilglicil-L-fenilalanilglicil)--aminometil-10,11 -etilenodioxi-(20S)-camptotecina O composto do título (164 mg) é obtido da mesma forma que no Exemplo l-(9) como um pó amarelo a partir de 7-N-(t-butoxicarbonil--glicilglicil-L-feriilalaiiilglicil)aminometil-10,11 -etilenodioxi-(20S)-camp-totecina (203 mg). P.f. >211°C (decomposto) IV (Nujol): vmaxcm·' = 3220,1745,1655 Massa: m/e = 754 ([M-C1]+) RMN (300 MHz, dé-DMSO): Ô™s = 0,88 (3H, t, J=7Hz), 1,80-1,93 (2H, m), 2,77 (1H, dd, J=14Hz, 10Hz), 3,00 (1H, dd, J=14Hz, 4Hz), 3,6-4,55 (7H, m), 4,42 (4H, s), 4,65-4,85 (2H, m), 5,42 (2H, s), 5,45 (2H, s), 7,13-7,26 (5H, m), 7,27 (1H, s), 7,57 (1H, s), 7,83 (1H, s), 8,03-8,16 (3H, largo), 8,34-8,40 (2H, m), 8,54 (1H, largo), 8,73 (2H, largo) (3) Preparação do derivado camptotecina O sal de sódio de CM-Dextrano (grau CM; 0,5) (772 mg) é dissolvido em água (50 ml) e a eles adiciona-se DMF (25 ml). A mistura é agitada sob arrefecimento com gelo e a ela adiciona-se cloridrato de 7-N-(glicil-glicil-L-fenilalanilglicil)aminometil-10,ll-etilenodioxi-(20S)--camptotecina (106 mg) e 2-etoxi-l-etoxicarbonil-l,2-di-hidroquinona (1,57 g). A mistura é feita reagir durante a noite e adicionada em etanol (450 ml) para dar os precipitados, que são posteriormente tratados da mesma forma que no Exemplo 1-(10) para dar o derivado camptotecina desejado (545 mg) como um pó amarelo pálido. O teor em cloridrato de 7-aminometil-10,l l-etilenodioxi-(20S)-camptotecina no derivado camptotecina desejado é de 5,5%, calculado com base na absorvância a 375 nm. De acordo com a análise por cromatografia de penetração em gele (CPG), o peso molecular médio do derivado camptotecina desejado é de 165000 e o grau de distribuição (pM/nM) é de 1,40.

Condições para análise por CPG: G4000SWXL (fabricada por Toso, Ltd), tampão de fosfato 0,2M (pH 7,0)

Exemplo 4

Preparação do cloridrato de 10-(3’-aminopropiloxi)-(20S)-campto- tecina (1) Preparação do dimetilacetal de 5-[3’-(t-butoxicarbonilamino)-propi-loxi]-2-nitrobenzaldeido O dimetilacetal de 5-hidroxi-2-nitrobenzaldeído (3,0 g) é dissolvido em dimetilformamida seca (50 ml) e a eles adiciona-se iodeto de sódio (3,15 g), carbonato de potássio (1,93 g) e tosilato de 3-(t-butoxicarbonila-mino)propilo (6,95 g). A mistura é agitada a 50°C durante três horas e arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura é extractada com acetato de etilo e o extracto é lavado com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seco sobre sulfato de sódio. O resultante é concentrado sob pressão reduzida para se remover o solvente e o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gele para dar o composto do título (5,22 g) como um óleo amarelo pálido.

Rendimento: Quantitativo IV (Puro): vmaxcn>1 = 3360,1710 Massa: m/e = 393 ([M+Na]+) RMN (300 MHz, CDC13): ô™s = 1,44 (9H, s), 2,02 (2H, quint, J=6Hz), 3,33 (2H, dd, J=13Hz, 6Hz), 3,44 (6H, s), 4,11 (2H, t, J=6Hz), 4,7 (1H, s largo), 6,01 (1H, s), 6,90 (1H, dd, J=9Hz, 3Hz), 7,29 (1H, d, J=3Hz), 7,97 (1H, d, J=9Hz) (2) Preparação da 10-[3’-(t-butoxicarbonilamino)propiloxi]-(20S)-camp-totecina O dimetilacetal de 5-[3’-(t-butoxicarbomlammo)propiloxi]-2-nitro-benzaldeído (1270 mg) é dissolvido em etanol (20 ml) e a eles adiciona-se paládio-carbono a 10% (120 mg) e a mistura é agitada sob atmosfera de hidrogénio durante 1,5 hora. O catalisador é removido por filtração e ao filtrado adiciona-se (4S)-7,8-di-hidro-4-etil-4-hidroxi-1 H-pirano[3,4-f]in-dolidina-3,6,10(4H)-triona (300 mg) e ácido p-toluenossulfónico (22 mg) e a mistura é agitada à temperatura ambiente, durante a noite. A mistura é concentrada sob pressão reduzida para se remover o solvente e o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gele para dar o composto do título (204 mg) como um pó amarelo pálido. P.f. 223-224°C (decomposto)

Rendimento: 34% IV (Nujol): VmaxCm"' = 3360, 1750, 1690 Massa: m/e = 522 ([M+H]+) RMN (300 MHz, CDC13): ô™s = 1,03 (3H, t, J=7,5Hz), 1,46 (9H, s), 1,8-2,0 (2H, m), 2,08 (1H, dd, J=12,5Hz, 6,5Hz), 2,10 (1H, dd, J=12,5Hz, 6Hz), 3,40 (2H, q, J=6,5Hz), 4,18 (2H, t, J=6Hz), 4,82 (1H, s largo), 5,24 (2H, s), 5,29 (1H, d, J=16Hz), 5,73 (1H, d, J=16Hz), 7,12 (1H, d, J=3Hz), 7,43 (1H, dd, J=9Hz, 3Hz), 7,61 (1H, s), 8,09 (1H, d, J=9Hz), 8,20 (1H, d, J=9Hz) (3) Preparação do cloridrato de 10-(3’-aminopropiloxi)-(20S)-camp-totecina A 10-[3 ’ -(t-butoxicarbonilamino)propiloxi)-(20S)-camptotecina (352 mg) é dissolvida em dioxano seco-etanol (7 ml-1 ml) e à mistura adiciona-se, com agitação, ácido clorídrico a 19% em dioxano (5 ml), sob arrefecimento com gelo. A mistura reaccional é agitada à temperatura ambiente e a ela adiciona-se éter isopropílico (10 ml). O pó precipitado é recolhido por filtração e lavado para dar o composto do título (339 mg) como um pó amarelo. P.f. 214-218°C (decomposto) IV (Nujol): VaJ*1-1 = 3470, 3280, 1745 Massa: m/e = 422 ([M-C1]+) -33- RMN (300 MHz, d6-DMSO): Ô™s = 0,89 (3H, t, J=7,5Hz), 1,80-1,95 (2H, m), 2,10-2,22 (2H, m), 2,96-3,10 (2H, m), 4,27 (2H, t, J=6Hz), 5,25 (2H, s), 5,42 (2H, s), 7,29 (1H, s), 7,49-7,55 (2H, m), 8,08 (1H, d, J=10Hz), 8,19 (3H, s largo), 8,54 (1H, s)

Exemplo 5

Preparação do cloridrato de 10-[3’-(glicil-glicil-L-fenilalanil-glicila-mino)propiloxi]-(20S)-camptotecina (1) Preparação da 10-[3’-(t-butoxicarbonil-glicil-glicil-L-fenilalanil-glicilamino)propiloxi]-(20S)-camptotecina O cloridrato de 10-(3’-aminopropiloxi)-(20S)-camptotecina (325 mg) é dissolvido em dimetilformamida seca (10 ml) e a eles adiciona-se, com agitação, N-hidroxissuccinimida (4 equivalentes), diisopropile-tilamina (2 equivalentes), N-t-butoxicarbonil-glicil-glicil-L-fenilalanilgli-cina (2 equivalentes) e cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcar-bodiimida (4 equivalentes), sob arrefecimento com gelo. A mistura reaccional é agitada à temperatura ambiente durante a noite e concentrada sob pressão reduzida para se remover o solvente. O resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gele para dar quantitativamente o composto do título (597 mg) como um pó amarelo. IV (Nujol): vmaxcm'‘ = 3280,1750,1660

Massa: m/e = 840 ([M+H]+) RMN (300 MHz, dé-DMSO): ô™s = 0,88 (3H, t, J=7Hz), 1,36 (9H, s), 1,8-2,04 (4H, m), 2,72-2,84 (1H, m), 3,00-3,12 (1H, m), 3,24-3,36 (2H, m), 3,50-3,80 (6H, m), 4,18 (2H, t, J=6Hz), 4,44-4,54 (1H, m), 5,24 (2H, s), 5,42 (2H, s), 6,50 (1H, s), 6,99 (1H, t, J=6Hz), 7,12-7,27 (5H, m), 7,28 (1H, s), 7,48-7,55 (1H, m), 7,50 (1H, s), 7,88-7,96 (1H, m), 8,07 (1H, d, J=9Hz), 8,12-8,36 (2H, m), 8,51 (1H, s) (2) Preparação do cloridrato de 10-[3’-(glicil-glicíl-L-fenilalanilglicila-mino)propiloxi]-(20S)-camptotecina A 10-[3 '-(t-butoxicarboml-glicil-glicil-L-fenilalanil-glicilamino)--propiloxi]-(20S)-camptotecina (580 mg) é tratada da mesma forma que no Exemplo 4-(3) para dar o composto do título (438 mg) como um pó amarelo.

Rendimento: 82% P.f. 194-199°C (decomposto) IV (Nujol): v^1 =3190, 1745, 1650 Massa: m/e = 740 ([M-C1]+) RMN (300 MHz, dô-DMSO): ô™s = 0,88 (3H, t, J=7Hz), 1,80-2,03 (4H, m), 2,79 (1H, dd, J=14Hz, 10Hz), 3,05 (1H, dd, J=14Hz, 5Hz), 3,2-3,5 (2H, m), 3,52-3,62 (2H, m), 3,62-3,83 (4H, m), 4,19 (2H, t, J=6Hz), 4,48-4,58 (1H, m), 5,25 (2H, s), 5,42 (2H, s), 6,5 (1H, s largo), 7,13-7,26 (5H, m), 7,28 (1H, s), 7,49-7,55 (1H, m), 7,50 (1H, s, J=9,5Hz), 7,93 (1H, t, J=6Hz), 8,0-8,14 (4H, m), 8,32-8,41 (2H, m), 8,51 (1H, s), 8,56 (1H, t, J=5,5Hz)

Exemplo 6

Preparação do derivado camptotecina da fórmula seguinte:

O sal de sódio de CM-Dextrano (grau CM; 0,5) (513 mg) é dissolvido em água (50 ml) e a eles adiciona-se, com agitação, cloridrato de 10-[3’-(glicil-glicil-L-fenilalaml-glicilamino)propiloxi]-(20S)-camptoteci-na (77 mg) e cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiiimda (1,54 g), durante o que a temperatura é mantida a uma temperatura in- -35 - ferior a 10°C. A mistura é agitada durante duas horas a uma temperatura inferior a 10°C, durante o que o valor de pH da mistura é mantido a pH 6,0-6,5 com ácido clorídrico 0,2N. A mistura reaccional é purificada por cromatografia em coluna de permuta iónica (AGMP-50, tipo Na, 30 ml, fabricada por Bio-Rad, Laboratories, Inc.). As fracções contendo o composto desejado são combinadas, filtradas e ao filtrado adiciona-se etanol. Os precipitados são recolhidos por centrifugação, lavados e secos sob pressão reduzida para dar um complexo em pó amarelo pálido (492 mg). O teor em cloridrato de 10-(3’-aminopropiloxi)-(20S)--camptotecina no derivado camptotecina desejado é de 2,8%, calculado com base na absorvância a 380 nm. De acordo com a análise por cromatografia de penetração em gele (CPG), o peso molecular médio do derivado camptotecina desejado é de 179000 e o grau de distribuição (pM/nM) é de 1,42.

Condições para análise por CPG: G4000SWXL (fabricada por Toso, Ltd), tampão de fosfato 0,2M (pH 7,0)

Exemplo 7

Preparação do derivado camptotecina da fórmula seguinte:

CMDextrano-Na-Gli-Gli-L-Fen-Gli-NH

(1) Preparação da (9S)-1 -(t-bntoxicarbonilglicilglicil-L-fenilalanilglicil-amino)-9-etil-5-fluoro-2,3-di-hidro-9-hidroxi-4-metil-lH,12H-benzo[des]-pirano[3 * ,4’: 6,7]indolizino[ 1,2-b]quinolina-10,13 [9H, 15H]diona O composto do título (247 mg) é obtido da mesma forma que no Exemplo l-(8) como um sólido amorfo amarelo pálido a partir de cloridrato -36- de (9S)-1 -amino-9-etil-5-fluoro-2,3-di-hidro-9-hidroxi-4-metil-1 Η, 12H-benzo[des]pirano[3 ’,4 ’ :6,7]indolizino[ 1,2-b]quinolina-10,13 [9H, 15H]diona (166 mg) e t-butoxicarbonilglicilglicil-L-fenilalanilglicina (2 equivalentes). Rendimento: 82% IV (Nujol): vmaxcm-‘ = 3290,1710, 1655 Massa; iri/e = 854 ([M+H]+) RMN (300 MHz, dg-DMSO): ô™s = 0,87 (3H, t, J=7Hz), 1,37 (9H, s), 1,8-1,95 (2H, m), 2,05-2,3 (1H, m), 2,42 (3H, s), 2,5-2,85 (2H, m), 2,9-3,1 (1H, m), 3,15-3,4 (2H, m), 3,5-3,8 (6H, m), 4,4-4,55 (1H, m), 5,26 • (2H, s), 5,42 (2H, s), 5,55-5,65 (1H, m), 6,53 (1H, s), 6,99 (1H, t, J=5Hz), 7.1- 7,3 (5H, m), 7,32 (1H, s), 7,81 (1H, d, J=llHz), 7,8-7,95 (1H, m), 8.1- 8,2 (1H, m), 8,3-8,4 (1H, m), 8,4-8,5 (1H, m) (2) Preparação da (9S)-l-(glicil-glicil-L-fenilalanilglicilamino)-9-etil-5--fluoro-2,3-di-hidro-9-hidroxi-4-metil-lH,12Hbenzo[des]pirano[3\4’:6,7]--indolizino[ 1,2-b]quinolina-10,13[9H, 15H]diona O composto do título (193 mg) é obtido da mesma forma que no Exemplo l-(9) como um pó amarelo a partir do composto (220 mg) em (1) acima. P.f. >165°C (decomposto) IV (Nujol): = 3350,1745, 1660, 1615

Massa: m/e = 754 ([M-Cl+Hf) RMN (300 MHz, ck-DMSO): ô™s = 0,87 (3H, t, J=7Hz), 1,80-1,94 (2H, m), 2,08-2,27 (2H, m), 2,41 (3H, s), 2,77 (1H, dd, J=13Hz, 9Hz), 3,01 (1H, dd, J=13Hz, 5Hz), 3,15-3,28 (2H, m), 3,5-3,91 (6H, m), 4,45-4,56 (1H, m), 5,25 (2H, s), 5,41 (1H, d, J=13Hz), 5,42 (1H, d, J=13Hz), 5,57 (1H, m), 7,12-7,30 (5H, m), 7,32 (1H, s), 7,80 (1H, d, J=llHz), 8,0-8,2 (3H, largo), 8,32 (1H, d, J-7Hz), 8,43 (1H, t, J=5,5IIz), 8,50-8,62 (211, m) -37- (3) Preparação do derivado camptotecina O sal de sódio de CM-Dextrano (grau CM; 0,65) (2000 mg) e o composto (170 mg) obtido em (2) acima são tratados da mesma forma que no Exemplo 3-(3) para dar o derivado camptotecina desejado (1803 mg) como um pó amarelo pálido. O teor em cloridrato de (9S)-l-amino-9-etil-5-fluoro-2,3-di-hidro-9-hidroxi -4-metil-1 Η, 12H-benzo[des]pirano[3\4’: 6,7]-indolizino[l,2-b]quinolina-10,13[9H,15H]diona no derivado camptotecina desejado é de 3,0%, calculado com base na absorvância a 376 nm. De acordo com a análise por cromatografia de penetração em gele (CPG), o peso molecular médio do derivado camptotecina desejado é de 187000 e o grau de distribuição (pM/nM) é de 1,54.

Condições para análise por CPG: G4000SWXL (fabricada por Toso, Ltd), tampão de fosfato 0,2M (pH 7,0)

Exemplos 8-24

Os derivados camptotecina indicados na Tabela 1 são obtidos da mesma forma que nos Exemplos 1-6. t

Tabela 1

Ex. No. R Ex. No. R 8 CM-Dextrano-Na-L-Fen- 16 CM-Pululano-Na-L-Fen- 9 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli- 17 CM-Pululano-Na-Gli-Gli- 10 CM-Dextrano-Na-L-Leu-Gli- 18 CM-Pululano-Na-L-Leu-Gli- 11 CM-Dextrano-Na-L-Fen-Gli- 19 CM-Pululano-Na-L-Fen-Gli- 12 CM-Dextrano-Na-L-Tir-Gli- 20 CM-Pululano-Na-L-Tir-Gli- 21 CM-Pululano*Na-Gli-Gli-L- Fen-Gli- 13 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- 22 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- 14 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 23 CMPululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 15 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli- 24 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli- [CM-Pululano-Na: Sal de sódio de carboximetilpululano]

Exemplos 25-41

Os derivados camptotecina indicados na Tabela 2 são obtidos da mesma forma que nos Exemplos 1-6. -39-

Tabela 2 í \

Ex. No. R Ex. No. R 25 CM-Dextrano-Na-L-Fen- 33 CM-Pululano-Na-L-Fen- 26 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli- 34 CM-Pululano-Na-Gli-Gli- 27 CM-Dextrano-Na-L-Leu-Gli- 35 CM-Pululano-Na-L-Leu-Gli- 28 CM-Dextrano-Na-L-Fen-Gli- 36 CM-Pululano-Na-L-Fen-Gli- 29 CM-Dextrano-Na-L-Tir-Gli- 37 CM-Pululano-Na-L-Tir-Gli- 38 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-L- Fen-Gli- 30 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- 39 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- 31 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 40 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 32 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Glí- 41 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli-

Exemplos 42-59

Os derivados camptotecina indicados na Tabela 3 são obtidos da mesma forma que nos Exemplos 1-6.

Tabela 3

R \

Ex. No. R Ex. No. R 42 CM-Dextrano-Na-L-Fen- 51 CM-Pululano-Na-L-Fen- 43 CMDextranoNa-Gli-Gli- 52 CM-Pululano-Na-Gli-Gli- 44 CMDextrano-Na-L-Leu-Gli- 53 CM-Pululano-Na-L-Leu-Gli- 45 CMDextranoNa-L-Fen-Gli- 54 CM-Pululano-Na-L-Fen-Gli- 46 CMDextrano-Na-L-Tir-Gli- 55 CM-Pululano-Na-L-Tir-Gli- 47 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-L- Fen-Gli- 56 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-L- Fen-Gli- 48 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- 57 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- 49 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 58 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 50 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli- 59 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli-

Exemplos 60-76

Os derivados camptotecina indicados na Tabela 4 são obtidos da mesma forma que nos Exemplos 1 -6. -41 -

Tabela 4 R-NH-CH,

Ex. No. R Ex. No. R 60 CM-Dextrano-Na-L-Fen- 68 CM-Pululano-Na-L-Fen- 61 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli- 69 CM-Pululano-Na-Gli-Gli- 62 CM-Dextrano-Na-L-Leu-Gli- 70 CM-Pululano-Na-L-Leu-Gli- 63 CM · Dextrano-Na-L-F en-Gli- 71 CM-Pululano-Na-L-Fen-Gli- 64 CM-Dextrano-Na-L-Tir-Gli- 72 CM-Pululano-Na-L-Tir-Gli- 73 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-L- Fen-Gli- 65 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- 74 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- 66 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 75 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 67 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli- 76 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli-

Exemplos 77-93

Os derivados camptotecina indicados na Tabela 5 são obtidos da mesma forma que nos Exemplos 1-6.

Tabela 5

-! Ex. No. R Ex. No. R 77 C M · Dextrano-Na-L-F en- 85 CM-Pululano-Na-L-Fen- 78 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli- 86 CM-Pululano-Na-Gli-Gli- 79 CM · Dextrano-Na-L-Leu-Gli- 87 CM-Pululano*Na-L-Leu-Gli- 80 CM-Dextrano-Na-L-Fen-Gli- 88 CM-Pululano-Na-L-Fen-Gli- 81 CM-Dextrano-Na-L-Tir-Gli- 89 CM-Pululano-Na-L-Tir-Gli- 90 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-L- Fen-Gli- 82 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- 91 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- 83 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 92 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 84 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli- 93 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli-

Exemplos 94-110

Os derivados camptotecina indicados na Tabela 6 são obtidos da mesma forma que nos Exemplos 1 -6.

Tabela 6

ο R - NH - (CH2)3 - O

H5C2 oh

Ex. No. R Ex. No. R 94 C M · Dextrano-Na-L-Fen- 102 CM-Pululano-Na-L-Fen- 95 C M Dextrano-Na-Gli-Gli- 103 CM-Pululano-Na-Gli-Gli- 96 C M · DextranoNa-L-Leu-Gli- 104 CM-Pululano-Na-L-Leu-Gli- 97 CMDextranoNa-L-Fen-Gli- 105 CM-Pululano-Na-L-Fen-Gli- 98 CM Dextrano-Na-L-Tir-Gli- 106 CM-Pululano-Na-L-Tir-Gli- 107 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-L- Fen-Gli- 99 CM -Dextrano-N a-Gli-Gli-Gli- 108 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- 100 CMDextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 109 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli- 101 CM-Dextrano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli- 110 CM-Pululano-Na-Gli-Gli-Gli- Gli-Gli-

Exemplo de Referência 1 (1) O Dextrano (Dextrano T-110, peso molecular médio; 100000 (pela análise por CPG), fabricado por Pharmacia Biotech AB) (29 g) é dissolvido em água (290 ml). A solução adiciona-se boro-hidreto de sódio (1,45 g) a 0-5°C e a mistura é agitada a 5°C, durante a noite. O valor de pH da mistura reaccional é ajustado a pH 5 com ácido acético e a mistura é posteriormente agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. O valor de pH da mistura é ajustado a pH 7 com solução aquosa de hidróxido de sódio 2N e a ela adiciona-se etanol (1,2 L), com agitação forte. A mistura é deixada repou- sar e os materiais insolúveis são precipitados. O sobrenadante da mistura é removido por decantação e o resíduo é centrifugado. O resíduo é dissolvido em água (0,5 L) e a mistura é liofilizada para dar um pó branco (26,3 g). (2) O pó branco assim obtido (50 g) é dissolvido em água (500 ml) e a ele adiciona-se hidróxido de sódio (200 g), sob arrefecimento com gelo. A mistura é agitada durante 30 minutos e aquecida à temperatura ambiente. À mistura adiciona-se, gota-a-gota, uma solução de ácido monoclo-roacético (110 g) em água (150 ml) e a mistura é agitada a 40°C durante 18 horas. A mistura reaccional é arrefecida até uma temperatura inferior a 10°C e o valor de pH da mistura é ajustado a pH 8-9 com ácido acético. Adiciona-se à mistura reaccional metanol (8 L), com agitação forte, e os materiais insolúveis são precipitados. Os materiais insolúveis são recolhidos por filtração e dissolvidos em água pura (5 L). A solução é dessalinizada por ultracentrifugação. A solução residual é concentrada sob pressão reduzida e filtrada. Adiciona-se ao filtrado etanol e o material precipitado é recolhido por filtração, lavado com etanol aquoso e acetona e seco sob pressão reduzida, à temperatura ambiente, e depois seco sob pressão reduzida a 50°C para dar sal de sódio de carboximetildextrano (CM-Dextrano) (o grau de carboximetilação pelo método de titulação com neutralização; 0,5) (50,2 g).

Exemplo de Referência 2 O sal de sódio de CM-Dextrano tendo um grau de carboximetilação de 0,65 é obtido da mesma forma que no Exemplo de Referência 1 com excepção para a quantidade de ácido monocloroacético que é alterada.

Lisboa, 20 de Dezembro de 2001

Claims (26)

1. REIVINDICA CÕES I. Derivado camptotecina compreendendo um composto camptotecina da fórmula [I]:

   [I] na qual R1, R2, R3, R4 e R3 são (A) entre R1, R2, R\ R4 e R3, dois grupos adjacentes um do outro que se combinam para formar um grupo alquileno, ou ambos são um átomo de hidrogénio, e um dos três grupos restantes de R1, R2, R3, R4 e R5 é um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 e os outros dois grupos são um átomo de hidrogénio, ou (B) entre R1, R2, R3, R4 e R5, dois grupos adjacentes um do outro que se combinam para formar um grupo alquileno, e um dos átomos de carbono do referido grupo alquileno é substituído por um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 e os três grupos restantes de R1, R2, R3, R4 e R5 são um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo ou um átomo de halogénio, e um ou dois grupos metileno do grupo alquileno em (A) ou (B) podem ser opcionalmente substituídos por -O-, -S- ou -NH-, X é -O- ou -NH-, Alq é um grupo alquileno, R6 é -NH2, um grupo da fórmula: -n ^ ^ nh, ou -oh m e n são ambos 0 ou 1 ou m é 1 e n é 0, composto camptotecina que está ligado a um polissacárido tendo grupos carboxilo, através de um aminoácido ou de um péptido, em que uma parte ou todos os grupos carboxilo do polissacárido está(ão) ligada(os) a um grupo amino do aminoácido ou do péptido através de ligações ácido-amida, -2- e uma parte ou todos os grupos carboxilo do referido aminoácido ou do referido péptido está(ão) ligada(os) a R6 do composto [I] através de ligações ácido-amida ou éster, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que uma parte ou todos os grupos carboxilo do polissacárido cstá(ão) ligada(os) a um grupo amino do terminal N do aminoácido ou do péptido através de uma ligação ácido--amida e o grupo carboxilo do terminal C do aminoácido ou do péptido está ligado a R6 do composto [I] através de uma ligação ácido-amida ou éster.
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que R6 do composto [I] é -NH2 ou um grupo da fórmula: -n ^ ^nh e o polissacárido que tem grupos carboxilo é um dextrano ou pululano carboximetilado, sendo o composto [I] e o polissacárido combinados através de um péptido, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
4. 5. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que o composto [I] é 1 -amino-9-etil-5-fluoro-2,3-di-hidro-9-hidroxi-4-metil-1 Η, 12H-benzo [des]-pirano[3’,4’ :6,7]indolizino[ 1,2-b]quinolina-10,13 [9H, 15H]-diona, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
5. 6. Composto de acordo com a reivindicação 5, em que o péptido é um membro scleccionado a partir do grupo constituído por glicil-glicil-L- ou D-fenil-alanil-glicina, glicil-glicina, glicil-glicil-glicina, glicil-glicil-glicil--glicina, glicil-glicil-glicil-glicil-glicina, L- ou D-fenilalanil-glicina e L- ou D-leucíl-glicina, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
6. 7. Composto de acordo com a reivindicação 6, em que o péptido é glicil--glicil-L-fenilalanil-glicina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
7. 8. Composto de acordo com a reivindicação 6, em que o péptido é glicil--glicina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
8. 9. Composto de acordo com a reivindicação 6, em que o péptido é glicil--glicil-glicina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
9. 10. Composto de acordo com a reivindicação 6, em que o péptido é glicil--glicil-glicil-glicina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
10. 11. Composto de acordo com a reivindicação 6, em que o péptido é L- ou D-fenilalanil-glicina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
11. 12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 7, 8, 9, 10 e 11, em que o grau de carboximetilação do polissacárido está no intervalo de 0,3 a 0,8. -4-
12. 13. Processo para a preparação de um derivado camptotecina compreendendo um composto camptotecina representado pela fórmula [I]: -4-

    na qual R1, R2, R3, R4 e R5 são (A) entre R1, R2, R3, R4 e R5, dois gmpos adjacentes um do outro que se combinam para formar um grupo alquileno, ou ambos são um átomo de hidrogénio, e um dos três grupos restantes de R1, R2, R3, R4 e R5 é um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 e os outros dois grupos são um átomo de hidrogénio, ou (B) entre R1, R2, R3, R4 e R5, dois gmpos adjacentes um do outro que se combinam para formar um grupo alquileno, e um dos átomos de carbono do referido grupo alquileno é substituído por um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 e os três grupos restantes de R1, R2, R3, R4 e R5 são um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo ou um átomo de halogénio, e um ou dois grupos metileno do grupo alquileno em (A) ou (B) podem ser opcionalmente substituídos por -O-, -S- ou -NH-, X é -O- ou -NH-, Alq é um grupo alquileno, R6 é -NH2, um grupo da fórmula: -n ^ ^ nh, ou -oh m e n são ambos 0 ou 1 ou m é 1 e n é 0, composto camptotecina que está ligado a um polissacárido tendo gmpos carboxilo, através de um aminoácido ou de um péptido, em que uma parte ou todos os grupos carboxilo do polissacárido está(ão) ligada(os) a um grupo amino do aminoácido ou do péptido através de ligações ácido-amida, e uma parte ou todos os grupos carboxilo do referido aminoácido ou do -5- I referido péptido está(ão) ligada(os) a R6 do composto [I] através de ligações ácido-amida ou éster, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, que compreende a reacção do composto camptotecina [I] com um aminoácido ou um péptido, remoção do grupo protector de um grupo amino ou de um grupo carboxilo do produto resultante quando um seu grupo amino ou grupo carboxilo é protegido, reacção do produto resultante com um polissacárido que tem grupos carboxilo, e, em seguida, se necessário, conversão do derivado resultante num seu sal farmaceuticamente aceitável.
13. 14. Processo para a preparação de um composto compreendendo um composto camptotecina representado pela fórmula [I]:

    Hl na qual R1, R2, R3, R4 e R5 são (A) entre R1, R2, R3, R4 e R5, dois grupos adjacentes um do outro que se combinam para formar um grupo alquileno, ou ambos são um átomo de hidrogénio, e um dos três grupos restantes de R1, R2, R3, R4 e R5 é um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 e os outros dois grupos são um átomo de hidrogénio, ou (B) entre R1, R2, R3, R4 e R5, dois grupos adjacentes um do outro que se combinam para formar um grupo alquileno, e um dos átomos de carbono do referido grupo alquileno é substituído por um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 e os três grupos restantes de R1, R2, R3, R4 e R5 são um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo ou um átomo de halogénio, e um ou dois grupos metileno do grupo alquileno em (A) ou (B) podem ser opcionalmente substituídos por -O-, -S- ou -NH-, X é -O- ou -NH-, Alq é um grupo alquileno, R6 é -NH2, um grupo da fórmula: -n // ^ nh, ou -oh m e n são ambos 0 ou 1 ou m é 1 e n é 0, composto camptotecina que está ligado a um aminoácido ou um péptido, em que uma parte ou todos os grupos carboxilo do referido aminoácido ou do referido péptido está(ão) ligada(os) a R6 do composto [I] através de ligações ácido-amida ou éster, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, que compreende a reacção do composto [I] com um aminoácido ou um péptido, remoção do grupo protector de um seu gmpo amino ou grupo carboxilo quando um seu grupo amino ou gmpo carboxilo é protegido e, em seguida, se necessário, conversão do composto resultante num seu sal farmaceuticamente aceitável.
14. 15. Composição farmacêutica especialmente para administração por injecção que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um derivado camptotecina como descrito em qualquer uma das reivindicações 1 a 12 numa mistura de um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
15. 16. Utilização de um derivado camptotecina como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12 para a preparação de uma composição médica para a profilaxia ou tratamento de tumor.
16. 17. Composto compreendendo um composto camptotecina representado pela fórmula [I]: -7 -

    na qual Rl, R2, R3, R4 e R5 são (A) entre R1, R2, R3, R4 e R5, dois grupos adjacentes um do outro que se combinam para formar um grupo alquileno, ou ambos são um átomo de hidrogénio, e um dos três grupos restantes de R1, R2, R3, R4 e R5 é um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 e os outros dois grupos são um átomo de hidrogénio, ou (B) entre R1, R2, R3, R4 e R5, dois grupos adjacentes um do outro que se combinam para formar um grupo alquileno, e um dos átomos de carbono do referido grupo alquileno é substituído por um grupo da fórmula: -Xn-Alqm-R6 e os três grupos restantes de R1, R2, R3, R4 e R5 são um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo ou um átomo de halogénio, e um ou dois grupos metileno do grupo alquileno em (A) ou (B) podem ser opcionalmente substituídos por -O-, -S- ou -NH-, Xé-O-ou-NH-, Alq é um grupo alquileno, R6 é -NH2, um grupo da fórmula: -n ^ ^ nh, ou -oh m e n são ambos 0 ou 1 ou m é 1 e n é 0, composto camptotecina que está ligado a um aminoácido ou um péptido, em que uma parte ou todos os grupos carboxilo do referido aminoácido ou do referido péptido está(ão) ligada(os) a R6 do composto [I] através de ligações ácido-amida ou éster, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável.
17. 18. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o grupo carboxilo do terminal C do aminoácido ou do péptido está ligado a R6 do composto -8- [I] através de uma ligação ácido-amida ou éster.
18. 19. Composto de acordo com a reivindicação 18, em que R6 do composto [I] é -NH2 ou um grupo da fórmula: -n ^ ^ nh, e o composto [I] está ligado a um péptido, ou a um seu sal farmaceuticamente aceitável.
19. 20. Composto de acordo com a reivindicação 19, em que (1) R1 e R2 se combinam para formar um grupo trimetileno, R3 é um grupo 3-aminopropiloxi, R4 e R5 são cada um átomo de hidrogénio; (2) R1 é um grupo piperazinometilo, R2 e R5 são cada um átomo de hidrogénio, R3 e R4 combinam-se para formar um grupo etilenodioxi; (3) R1 é um grupo aminometilo, R2 e R5 são cada um átomo de hidrogénio, R3 e R4 combinam-se para formar um grupo etilenodioxi; (4) R1, R2, R4 e R5 são cada um átomo de hidrogénio, R3 é um grupo 3-aminopropiloxi; (5) R1 e R2 combinam-se para formar um grupo trimetileno substituído por amino, R3 é um grupo metilo, R4 é um átomo de flúor, R5 é um átomo de hidrogénio; ou (6) R1, R3, R4 e R5 são cada um átomo de hidrogénio, R2 é um grupo amino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
20. 21. Composto de acordo com a reivindicação 20, em que o composto [I] é 1 -amino-9-etil-5-fluoro-2,3-di-hidro-9-hidroxi-4-metil-lΗ, 12H-benzo--[des]pirano[3 ’ ,4 ’: 6,7]indolizino[ 1,2-b]quinolina-10,13 [9H, 15H]diona, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
21. 22. Composto de acordo com a reivindicação 21, em que o péptido é um membro seleccionado a partir do grupo constituído por glicil-glicil-L- ou D-fenil-alanil-glicina, glicil-glicina, glicil-glicil-glicina, glicil-glicil-glicil--glicina, glicil-glicil-glicil-glicil-glicina, L- ou D-fenilalanil-glicina e L- ou D-leucil-glicina, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. -9-
22. 23. Composto de acordo com a reivindicação 22, em que o péptido é glicil--glicil-L-fenilalanil-glicina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
23. 24. Composto de acordo com a reivindicação 22, em que o péptido é glicil--glicina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
24. 25. Composto de acordo com a reivindicação 22, em que o péptido é glicil--glicil-glicina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
25. 26. Composto de acordo com a reivindicação 22, em que o péptido é glicil--glicil-glicil-glicina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
26. 27. Composto de acordo com a reivindicação 22, em que o péptido é L- ou D-fenilalanil-glicina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 20 de Dezembro de 2001