PT657428E - Preparacao de piperidinil-n-alquilcarboxilatos 3,4,4-tri-substituidos e intermediarios uteis como antagonistas de opioides - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "PREPARAÇÃO DE PIPERIDINIL-N-ALQUILCARBOXILATOS 3,4,4-TRI-SUBSTITUÍDOS E INTERMEDIÁRIOS, ÚTEIS COMO ANTAGONISTAS DE OPIÓIDES"

Esta invenção relaciona-se com um processo para preparação de alguns piperidinil-N-alquil-carboxilatos 3,4,4-tri-substituídos, novos intermediários e seus congéneres. Finalmente, esta invenção proporciona compostos cristalinos estáveis e formulações úteis como antagonistas de opióides periféricos.

Um substancial grupo de provas indica que os péptidos opióides periféricos e seus receptores possuem um papel fisiológico importante na regulação da motilidade intestinal. Consequentemente, distúrbios gastrointestinais tais como prisão de ventre idiopática e o síndroma do intestino irritável podem relacionar-se com uma disfunção do controlo mediado pelos receptores opiáceos, e agentes que actuam como antagonistas destes receptores podem beneficiar um paciente que sofra de tal disfunção.

As piperidinas N-substituídas, preparadas utilizando o processo e intermediários desta invenção são úteis como antagonistas opióides periféricos selectivos. Um particularmente desejável piperidinil-N-alquilcarboxilato 3,4,4-tri-substituído é o ácido (2S,3R,4R)([[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-l-piperidiniljmetil]-1 -oxo-3-fenilpropil]amino]acético (1). -2-

ΟΗ .OH

OR? Ph' (1) (2)

Um processo genérico para preparar éster de etilo do ácido (aS,3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-a-(fenilmetil)-l-piperidinopropanóico (2) um intermediário útil para a preparação de 1, é conhecido pelos técnicos da matéria. Zimmerman descreve este processo na U.S. Patent 5,250,542 (aqui incorporada por referência). Contudo, este processo produz uma mistura de produtos estereoisoméricos que impede a sua utilização prática num processo comercial. A preparação do composto desejado de Fórmula 1 requer uma tediosa separação cromatográfica com um rendimento de apenas 13% para a separação do isómero. Além disso, cada intermediário é isolado como um produto "tipo cola" devido à presença do isómero indesejado. O produto "tipo cola" impede a purificação de qualquer intermediário sem a cromatografia e é muito indesejável para fins comerciais. O processo desta invenção proporciona agora uma via sintética que proporcionará intermediários cristalinos sem epimerização para facilitar a preparação comercial de 1 e dos ésteres de Ci-C6 alquilo dele derivados. Adicionalmente, o processo desta invenção produz um sólido cristalino de 1 e dos ésteres de C,-C6 alquilo dele derivados com rendimento aceitável. Finalmente, o processo sintético desta invenção inclui intermediários cristalinos para proporcionar tanto o enriquecimento como a purificação do produto desejado.

Esta invenção proporciona um muito desejável ácido (2S,3R,4R)- -3-

Mb*· ^ ([[2-[[4-(3'hidiOxifcnil)-3,4-dimctil-l-pipcridinil]mctil]-l-oxo-3-fenilpropil]-aminojacético (1) que é o di-hidrato.

Os novos intermediários cristalinos e método de cristalização são particularmente importantes para o desenvolvimento comercial dos piperidinil-N-alquil-carboxilatos 3,4,4-tri-substituídos farmaceuticamente activos (18 e 18a infra). A invenção presentemente reivindicada proporciona um novo sal di-hidrato cristalino de Fórmula 5

Também são revelados novos sais cristalinos de Fórmula 2

(2) em que R é Q-Cè alquilo; Z- é seleccionado do grupo que consiste em cloro, bromo, succinato e (+)-dibenzoíltartarato; em rendimentos aceitáveis.

Também é descrito um processo para preparação de um composto mono-hidrato cristalino de Fórmula 3

compreendendo a cristalização de 3 a partir de um solvente compreendendo cerca de 50% a 75% de álcool inferior e cerca de 50% a 25% de água (em peso).

Adicionalmente, são descritos compostos cristalinos de Fórmula 4

em que R1 é Q-Cô alquilo; o composto é um sal seleccionado do grupo que consiste ém cloridrato e L-malato. O sal cloridrato é uma forma cristalina única -5-existindo como mono-solvato cm acetona. Os sais L-malato também são únicos porque a sua estequiometria tanto pode ser 1 equivalente molar de cada um do ácido L-málico e um composto de 4 ou pode ser 3 equivalentes molares de ácido L-málico e 2 equivalentes molares de composto 4. Tal como aqui utilizado, o termo "sesquimalato" refere-se a uma proporção 3:2 de ácido L-málico para o composto 4. O termo "Q-Cô alquilo", tal como aqui utilizado, representa um grupo alquilo linear ou ramificado possuindo de um a seis átomos de carbono. Grupos Ci-Có alquilo típicos incluem metilo, etilo, «-propilo, /so-propilo, butilo, zso-butilo, sec-butilo, férc-butilo, pentilo, hexilo, e outros semelhantes. Outros termos semelhantes representam grupos alquilo de cadeia linear ou ramificada com o número de átomos de carbono especificado. Por exemplo, "C1-C3 alquilo" representa metilo, etilo, «-propilo e isopropilo. O termo "álcool inferior" refere-se a metanol, etanol, 1-propanol e 2-propanol.

Os termos "atmosfera inerte" e "condições inertes" referem-se a condições reaccionais em que a mistura é coberta com uma camada de um gás inerte como azoto ou árgon. O termo "substancialmente puro" é aqui utilizado para referir pelo menos 90 moles por cento do estereoisómero absoluto e/ou polimorfo desejado. Mais preferencialmente a pelo menos 95 moles por cento e ainda mais preferencialmente a pelo menos cerca de 98 moles por cento do estereoisómero absoluto e/ou polimorfo presentes.

Mais preferencialmente, os compostos e produtos do processo existem como o isómero 3R, 4R como mostrado na Fórmula 3 -6- C—.(

ou o isómero 3S, 4S de Fórmula 6

(6)

Além disso, o técnico reconhecerá que o substituinte benzilo se liga a um centro quiral. Esta invenção inclui ambos os diastereoisomeros (aS, 3R, 4R) e (aR, 3S, 4S). Os compostos da presente invenção especialmente preferidos são os de Fórmulas 2, 3, 4 e 5, em que a configuração dos substituintes no anel piperidina é 3S, 4R, e o carbono com o grupo benzilo é S. O técnico pode escolher reagentes apropriados para preparar o enantiómero oposto.

Os termos "R" e "S" são aqui utilizados como vulgarmente utilizado em química orgânica para denotar a configuração específica do centro quiral. Ver Organic Chemistry, R.T. Morrison e R.N. Boyd, 4a ed., Allyn & Bacon, Inc., Boston (1983), págs. 138-139 e The Vocabularv of Organic Chemistrv. Orchin et. ai, John Wiley and Sons Inc., p. 126. 0 termo "hidrólise" tal como aqui utilizado inclui todos os métodos de hidrólise de esteres apropriados, incluindo os processos acídicos, básicos e enzimáticos. Os métodos preferidos são descritos infra.

Tal como aqui utilizada, a frase "a cristalização de 3" refere-se à neutralização do produto da reacção de hidrólise; A Fórmula 7

em que M+ é sódio, lítio ou potássio, com os reagentes designados e cristalizando utilizando técnicas conhecidas. A mistura pode ser conseguida utilizando métodos vulgares de agitação, batimento e outros semelhantes. Além disso, o técnico reconhece que os processos de cristalização podem incluir sementeira, congelação, riscar o vidro do recipiente da reacção, e outras técnicas vulgares.

Os materiais de partida para a presente invenção podem ser preparados por uma variedade de procedimentos bem conhecidos daqueles com conhecimentos correntes na arte. Os derivados 3-substituído-4-metil-(3-hidroxi-ou alcanoiloxifenil)piperidina empregues como materiais de partida no processo desta invenção podem ser preparados pelo procedimento geral ensinado por Zimmerman na U.S. Patent N°. 4 115 400 (1978) e Zimmerman et al. na U.S. Patent N°. 4 891 379 (1990). As U.S Patents 4 115 400 e 4 891 379 são aqui -8-incorporadas por referência. O material de partida para a síntese dos compostos da presente invenção, (3, 4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetilpiperidina, pode ser preparado pelo procedimento de Zimmerman na U.S. Patent 5 250 542, aqui incorporada por referência. O técnico deve notar particularmente o Exemplo 1 da 542 de Zimmerman. O material de partida 14, preparado como descrito na arte, pode ser utilizado no processo do Esquema 1 {infra).

Esquema 1

Em que R1 é definido supra. R2 é cloro, bromo, (+)-dibenzoíltartarato ou succinato.

Tal como ilustrado no Esquema 1, faz-se contactar o composto 14 com um acrilato de alquilo (acrilato R1) para formar o 15. R1 é definido supra. Solventes adequados incluem metanol, tetra-hidrofurano, etanol e outros. Os solventes mais preferidos são metanol e tetra-hidrofurano. O composto 15 é desprotonado e faz-se contactar com brometo de benzilo. A desprotonação pode ser conseguida utilizando uma base apropriada. Exemplos de reagentes básicos apropriados incluem di-isopropilameto de lítio ou hexametildisilazida de lítio. Os

-9- solventes preferidos para a reacçâo com a base incluem tetra-hidrofurano c 1,2-dimetoxietano. O técnico reconhecerá que outros solventes podem ser adequados. Quando a base é a di-isopropilameto de lítio (LDA), é mais preferido que estejam presentes 2 equivalentes de brometo de benzilo. O produto da alquilação é uma mistura 1:1 do isómero (aS, 3R, 4R) e do isómero (aR, 3R, 4R).

Os compostos cristalinos de fórmula 16 são novos e únicos. Só quatro sais específicos de 16 eram tanto sais estáveis e cristalinos como proporcionaram o desejado enriquecimento diastereoisomérico. Foram estudados os ácidos seguintes, utilizando para cada um quatro sistemas diferentes de solventes: HC1, HBr, (+)-dibenzoíl tartárico, succínico, (-)-di-p-toluílo tartárico, (+)-di-p- toluílo tartárico, (-)-dibenzoíl tartárico, (lR,3S)-(+)-cnfórico, hipúrico, benzóico, L-málico, D-málico, malónico, D-aspártico, (-)-tartárico, (+)-tartárico, (-)-mandélico, (+)-mandélico, L-ascórbico, maleico, sulfurico, acético, fosfórico, cítrico, láctico, p-touenossulfónico, D-arabascórico e L-aspártico. Assim, mais de 110 estudos de cristalização deram somente quatro sais cristalinos estáveis que proporcionaram enriquecimento! O enriquecimento e rendimentos dos quatro sais cristalinos estáveis são ilustrados na Tabela 1.

Tabela 1 Sais cristalinos do éster

Sal Relação Diast. Rendimento Solvente de cristalização cloridrato 88/12 39% metanol bromidrato 79/21 42% metanol (+)DBTAa 71/29 25% acetato de etilo:acetona (1:1) succinato 83/17 25% acetato de etilo:acetona (1:1) a) (+)-dibenzoíltartarato - 10-

Tal como ilustrado no Esquema 2 (infra), o composto 16 é sujeito a hidrólise para formar o composto 17. O técnico reconhecerá que o composto 17 será útil para preparação de outros compostos úteis como ilustrado pelo composto 18a. Os compostos 18a são genericamente revelados na U.S. Patent 5 250 542 como sendo antagonistas úteis dos opióides. Pela primeira vez é possível preparar os isómeros estereoquímicos absolutos puros (18 e 18a) sem separações cromato-gráficas fastidiosas utilizando os novos intermediários desta invenção.

Esquema 2

‘OR1

Plr (16)

(18a)

1. Saponificação 2. Neutralização; Cristalização Ph""* H 0 (19B.L.)

Forn de s R2 H"

Ph"'' H °

(18) N OVVyR1 (19) - 11 - hC~ 1 9 em que R e R são como definidos supra. A é OR4 ou NR5R6; em que: R4 é hidrogénio, Ci-Qo alquilo, C2-C10 alcenilo, cicloalquilo, Cs-Cg cicloalcenilo, C1-C3 alquilo cicloalquilo substituído, C1-C3 alquilo C5-C8 ciclo-alcenilo substituído ou C1-C3 alquilo fenilo substituído; R5 é hidrogénio ou C1-C3 alquilo; R6 é hidrogénio, CrCi0 alquilo, C3-C10 alcenilo, cicloalquilo, C1-C3 alquilo fenilo cicloalquilo substituído, C5-C8cicloalcenilo, C1-C3 alquilo C5-C8 cicloalcenilo substituído ou (CH2)q-B; ou R5 e R6 conjuntamente com N um anel heterocíclico saturado, não aromático com 4 a 6 membros; O—N o Bé -/ II || ouNR7R8;

N-C—R5’ CW R7 é hidrogénio ou C1-C3 alquilo; R8 é hidrogénio, C]-C10 alquilo, C3-C10 alcenilo, C1-C3 alquilo cicloalquilo substituído, cicloalquilo, Cs-Cg cicloalcenilo, C1-C3 alquilo Cs-Cg cicloalcenilo substituído, fenilo ou C1-C3 alquilo fenilo substituído; ou R e R conjuntamente com N formam um anel heterocíclico saturado, não aromático com 4 a 6 membros; W é OR9, NR,0R" ou OE; R9 é hidrogénio, C1-C10 alquilo, C2-C10 alcenilo, cicloalquilo, Cs-Cg cicloalcenilo, CrC3 alquilo cicloalquilo substituído, C1-C3 alquilo Cs-Cg cicloalcenilo substituído ou C1-C3 alquilo fenilo substituído; R10 é hidrogénio ou C1-C3 alquilo; R11 é hidrogénio, C,-C10 alquilo, C3-C10 alcenilo, fenilo, -12- h^YO C-L~—-«—V ( *4 cicloalquilo, C5-C8 cicloalcenilo, C1-C3 alquila ciclaalquilo substituído, C1-C3

O alquilo fenilo substituído, ou (CH2)m^Y; ou R10 e Rn conjuntamente com N formam um anel heterocíclico saturado, não aromático com 4 a 6 membros; Eé O (CH2)m

H3C —ch2-

, ou

O

13 -R12-0CR R12 é metileno C1-C3 alquilo substituído, R13 é CpCio alquilo; D é OR14 ou NR1SR16; em que: R14 é hidrogénio, CrCi0 alquilo, C2-Ci0 alcenilo, cicloalquilo, C5-Cg cicloalcenilo, C1-C3 alquilo cicloalquilo substituído, C1-C3 alquilo Cs-Cg cicloalcenilo substituído ou C1-C3 alquilo fenilo substituído; R15 é hidrogénio, C1-C10 alquilo, C3-C10 alcenilo, fenilo, C1-C3 alquilo fenilo substituído, cicloalquilo, Cs-Cg cicloalcenilo, C1-C3 alquilo cicloalquilo substituído ou C1-C3 alquilo C5-C8 cicloalcenilo substituído; e R16 é hidrogénio ou C1-C3 alquilo: ou R15 e R16 conjuntamente com N formam um anel heterocíclico saturado, não aromático com 4 a 6 membros; Y é OR17 ou NR18R19; R17 é hidrogénio, C]-Ci0 alquilo, C2-Cio alcenilo, cicloalquilo, C5-C8 cicloalcenilo, C1-C3 alquilo cicloalquilo substituído, Q-C3 alquilo Cs-Cg cicloalcenilo substituído ou C1-C3 alquilo fenilo substituído; R é hidrogénio ou C1-C.3 alquilo; e - 13- /<\·£

R19 é hidrogénio, C1-C10 alquilo, C3-C10 alcenilo, fenilo, cicloalqui-lo, C5-Cg cicloalcenilo, C1-C3 alquilo cicloalquilo substituído, C1-C3 alquilo C5-C8 cicloalcenilo substituído ou (VC3 alquilo fenilo substituído; ou R18 e R19 conjuntamente com N formam um anel heterocíclico saturado, não aromático com 4 a 6 membros; qé 1-4; m é 1-4.

O substituinte "A" é descrito na U.S. Patent 5 250 542. A reacção de hidrólise pode ser completada utilizando métodos de hidrólise acídica conhecidos. Um exemplo de um tal método de hidrólise acídica é o tratamento com um ácido aquoso em dioxano sob refluxo. Mais preferencialmente, a reacção de hidrólise é completada utilizando condições de saponifícação para evitar a epimerização. Exemplos de reagentes de saponifi-cação incluem hidróxido de lítio, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio e outros semelhantes. O produto da reacção de hidrólise (o sal carboxilato) é ajustado ao ponto isoléctrico do amino ácido utilizando ácido aquoso para proporcionar o zwiterião 17. A cristalização do mono-hidrato de 17 deve completar-se utilizando 50% a 75% de um álcool inferior e 50% a 25% de água. A Tabela 1 ilustra a dependência crítica da cristalização no solvente aproximadamente 1:1 de álcool inferior/água. O termo "cola" refere-se A coagulação de um produto semi sólido pegajoso numa massa amorfa.

Tabela 1

Entrada % de cosolvente Cone. de ácido Rendimento Observações 1 nenhum HC112N 86% cola 2 nenhum HC112N 88% cola 3 nenhum HC112N 93% cola 4 nenhum HC1 IN 90% cola 5 nenhum HC16N 91% cola 6 nenhum H3P04 1M 93% cola 7 nenhum H3PO4 6M 97% cola 8 nenhum AcOH 1M 99% cola 9 6 MeOH HC1 12N 88% cola 10 12 MeOH HC1 12N 87% cola 11 25 MeOH HC1 12N 83% cola 12 25 MeOH HC1 12N 90% cola 13 50 MeOH HC1 12N 58%* cola 14 50 MeOH HC1 12N 82% cristalino 15 50 MeOH HC112N 90%* cristalino 16 50 MeOH HC1 12N 95,9%** cristalino 17 50 i-Pr HC112N 73% cristalino 18 50 ACN HC1 12N 23% cristalino ACN refere-se a acetonitrilo; i-Pr refere-se a álcool isopropílico.

Devido à concentração de reacção de 10 mL solvente/g de 16. ** O aumento de rendimento é devido à remoção do metanol por destilação depois de ocorrer a cristalização.

Tal como ilustrado no Esquema 2, o produto 17 pode ser directa- -15- Μ b*- Φ

mente utilizado no passo de amidação/esterificação. Quando é desejada a amidação, o amino ácido deve ser seleccionado para produzir os compostos desejados de fórmula 18 ou 18a. Faz-se contactar o amino ácido com um éster de glicina num solvente como a dimetilformamida ou tetra-hidrofurano. A diciclo-hexilcarbodi-imida é utilizada como reagente de ligação. O N-hidroxibenzotriazole é adicionado como nucleófilo auxiliar. A reacção de ligação pode ser efectuada sob condições inertes. Mais preferencialmente, a reacção de ligação de péptido utiliza tetra-hidrofurano como solvente. O técnico reconhecerá que outros métodos de ligação de péptido também serão eficazes.

Altemativamente, um sal cristalino do composto 19B.L. (base livre) pode ser preparado como ilustrado no Esquema 2 supra. Os estudos de cristalização foram conduzidos utilizando 17 ácidos diferentes com três solventes: acetato de etilo, acetona e etanol. Dessas 51 experiências, só os ácidos L-málico e clorídrico deram sais cristalinos estáveis a 25°C. O sal cloridrato cristalino é obtido por contacto do 19 B.L. com HC1 anidro em acetona. A análise por cromatografia de gás capilar indica que o sal é produzido como o monosolvato em acetona. Esta forma monosolvato cristalino única permite que o composto 19 seja isolado em forma substancialmente pura. O contacto do 19B.L. com HC1 anidro noutros solventes produz um sólido amorfo sem purificação substancial.

Os requerentes descobriram que o sal do ácido L-málico pode ser preparado como um sólido cristalino estável possuindo duas relações de 19B.L. para o acido L-málico, dependendo do solvente de cristalização. Quando a cristalização se completa em solventes como metil-etil-cetona, acetona, acetona/t-butil metil éter ou acetona/heptano verifica-se a estequiometria esperada de 1:1 -16-

At-

dc 19B.L. para o ácido L-málico. Contudo, quando a cristalização é efectuada cm sistemas de solventes de acetona/acetato de etilo, acetona/tolueno ou etanol/to-lueno dá o sal cristalino com a estequiometria única de uma relação 3:2 de ácido L-málico para o 19B.L. (sesquimalato). Este resultado é particularmente inesperado quando é obtido o sesquimalato mesmo quando uma relação 1:1 de ácido málico e 19 B.L. são combinados em certos solventes. Na realidade, quando quantidades equimolares de ácido málico e 19 B.L. são combinadas num solvente ou sistema de solventes formador de sesquimalato, o sesquimalato é o único sal formado com um rendimento de cerca de 67%, sendo o balanço de massa na água mãe 19 B.L. Certamente que o técnico esperaria que a relação fosse 1:1. Além disso, a cristalização de um sal sesquimalato num solvente ou sistema de solventes "não formadores de sesquimalato" forma só o sal monomalato num rendimento quase quantitativo, mantendo-se o ácido L-málico em excesso na água mãe. A cristalização do sal sesquimalato proporciona um produto de pureza farmaceuticamente aceitável num elevado rendimento com cristais com forma e tamanho muito consistentes. Os sais cloridrato e sesquimalato podem ser utilizados como entidades profármaco porque o éster isobutílico é facilmente clivado in vivo.

Os ácidos que não formam sais cristalinos estáveis a 25°C incluem os ácidos HBr, H2S04, hipúrico, d-tartárico, 1-tártárico, malónico, succínico, acético, arabascórbico, ascórbico, cítrico, benzóico, láctico, (S)-(+)-mandélico e (R)-(-)-mandélico. Demonstrando assim a surpreendente e única natureza dos sais L-málico e HC1. O produto da reacção de amidação/esterificação ou dos sais dela derivados, pode ser hidrolisada utilizando métodos vulgares. Preferencialmente - 17-

Iqa. íC-——v ( ^A são utilizados métodos de hidrólise básicos. Os reagentes de saponiflcação preferidos incluem hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de lítio e

outros semelhantes. Mais preferencialmente, o passo de saponiflcação é completado utilizando hidróxido de sódio e um solvente. Solventes particularmente preferidos são metanol:água (1:1) e etanohágua (2:1). A reacção é parada utilizando um ácido como o ácido clorídrico. Após neutralização (pH=6), o produto di-hidrato cristalino sólido 18 é isolado directamente por filtração. O produto isolado 18 possui pureza farmaceuticamente aceitável sem passos de purificação subsequentes. O novo di-hidrato 18 é particularmente desejável porque o composto é um sólido cristalino estável, de forma de cristal e tamanho de partículas consistentes para proporcionar ritmos de dissolução reprodutíveis, e é de qualidade farmaceuticamente desejável.

Os compostos de Fórmula 5 e 6 supra, são úteis no bloqueio dos

receptores opióides periféricos e prevenção de efeitos laterais induzidos por opiáceos. Esses efeitos laterais são induzidos por administração de um opiáceo como a morfina a um mamífero. Os efeitos laterais induzidos por opiáceos podem incluir prisão de ventre, náusea e vómito. Assim, os compostos desta invenção são úteis para tratamento de um ou mais efeitos laterais induzidos pelos opiáceos.

Estes compostos também podem ser úteis no tratamento do síndroma de intestino irritável, dispepsia não ulcerosa e prisão de ventre idiopática. Estes compostos não passam substancialmente através da barreira sangue-cérebro e assim não mitigam o efeito dos opióides nos receptores opióides centrais (cérebro e coluna espinal). Consequentemente, estas características indicam que os compostos também serão substancialmente livres de outros efeitos centralmente mediados.

De modo a determinar a determinar o antagonismo dos receptores opióides in vivo, foi utilizado o teste de contorção por analgésicos. Os compostos testados foram medidos quanto à sua capacidade para bloquear a analgesia induzida pela morfina.

Cinco ratinhos macho CF-1 (Charles River, Portage, MI), pesando aproximadamente 20 g após terem sido alimentados durante a noite foram observados em simultâneo quanto à contorção de resposta. A contorção de resposta foi definida como uma contracção da musculatura abdominal seguida pela extensão dos membros traseiros, e foi induzida por administração intraperitoneal de 0,6 % de ácido acético num volume de 1 mL/100 g de peso corporal. O período de observação teve uma duração de 10 minutos, iniciando-se 5 minutos após a injecção do ácido acético. A percentagem de inibição da contorção foi calculada a partir do número médio de contorções no grupo de controlo (sem fármaco). A ED5o foi definida como a dose de agonista que inibia a média das contorções em 50%. A AD50 foi definida como a dose de antagonista que reduzia a inibição da contorção produzida por uma dose de 1,25 mg/kg de sulfato de morfina para 50%. Cada ratinho foi utilizado só uma vez. Todos os fármacos foram administrados subcutâneamente (1 mL/100 g de peso corporal total) 20 minutos antes da injecção de ácido acético.

Foram conduzidas determinações da actividade opióide periférica. Os ratinhos foram mantidos com água com 0,01 M de sacarose e 1 g/L de sulfato de morfina durante um mínimo de 10 dias, sendo a média de mais de 3,0 g de água por ratinho por dia durante pelo menos 3 dias. A água com morfina foi removida 45 minutos antes da injecção com 0 antagonista opióide proposto, e os ratinhos foram colocados em cilindros de plástico com toalhas de papel branco a cobrir o chão.

Os ratinhos foram monitorizados visualmente durante 30 minutos - 19-pós-injecção quanto à presença de saltos e de diarreia. O salto foi registado como positivo se ocorreu pelo menos um salto em 30 minutos. A diarreia foi registada como positiva quando as fezes tinham humidade suficiente para manchar o papel branco na base do cilindro. Após 30 minutos de teste os ratinhos foram devolvidos às suas gaiolas originais, novamente colocada a água com morfina e não foram testados nas 48 seguintes. Foram testadas doses mais baixas dos compostos agonistas até se determinarem doses limite para a diarreia. A diarreia é um sinal mediado periféricamente da abstinência brusca dos opiáceos. A extensão do efeito na actividade periférica comparada com a actividade central dos compostos presentes pode ser determinada por comparação da AD5o para o teste da contorção no ratinho com a EDS0 para o teste da diarreia no ratinho. Quanto mais elevada for a relação, maior será o antagonismo relativo dos receptores opióides periféricos por um composto particular.

Os valores de AD50 para os compostos desta invenção são superiores a 8 mg/kg, enquanto que os valores de ED50 são inferiores a 1.

Adicionalmente, verificou-se que os compostos de Fórmulas 5 e 4 supra revelam excelente actividade de ligação aos receptores opióides que mede a afinidade dos compostos para se ligarem a receptores mu. Este ensaio foi conduzido segundo o procedimento que se segue.

Ratinhos Sprague Dawley machos foram sacrificados por decapitação e removeram-se os cérebros. O tecido cerebral com o cerebelo removido foi homogenizado num homogenizador de Teflon e vidro. Uma fracção do depósito IV, sobrenadante I foi congelada em azoto líquido a uma concentração de 1,33 g /mL e armazenou-se durante não mais que cinco semanas antes da utilização.

-20-

Concentrações crescentes do composto experimental (0,1 a 1000 nanomolar (nM)), tampão Krebs-Hepes, pH 7,4 e naloxone tritiado (0,5 nM) (ligando 3H) foram combinados em tubos de polistireno à temperatura ambiente. A reacção foi iniciada pela adição do tecido ressuspenso que tinha sido pré incubado a 37°C durante 20 minutos. A mistura reaccional foi incubada num banho de água a 37°C durante 20 minutos. A reacção foi terminada por filtração rápida (Brandel cell harvester), através de filtros de vidro Whatman GF/B que tinham sido ensopados em tampão Krebs-Hepes, pH 7,4. Os filtros foram depois lavados 2 vezes com 5 mL de tampão Krebs-Hepes pH 7,4 gelado. Os filtros lavados foram colocados em frascos de cintilação e adicionou-se 10 mL, (Brandel) e as amostras foram lidas num contador beta Searle D-300.0 tempo de incubação para a mistura reaccional foi de 20 minutos a 37°C. Os valores de K,· e KD foram calculados utilizando os métodos vulgares.

Os compostos desta invenção exibem perfis de actividade altamente desejáveis. Os valores de percentagem de deslocamento pelos compostos testados a uma concentração de 10 nM foi superior a 75% e superior a 80% a 100 nM. Isto é particularmente desejável à luz dos valores de AD50 e ED50 (supra). Os resultados indicam que os compostos desta invenção possuem perfis de actividade favoráveis para utilização no tratamento do síndroma do intestino irritável e estados relacionados com a ligação de receptores mu.

Apesar de ser possível administrar um composto desta invenção directamente sem qualquer formulação, os compostos são preferencialmente empregues sob a forma de uma formulação farmacêutica compreendendo um excipiente farmaceuticamente aceitável e pelo menos um composto da invenção. A gama de dosagem efectiva para os compostos desta invenção é grande. Assim, tais composições contêm desde cerca de 0,1% em peso até cerca de 90,0% em peso de um composto presentemente reivindicado. Como tal, a presente invenção também proporciona formulações farmacêuticas compreendendo um composto desta invenção e um excipiente farmaceuticamente aceitável para esse fim.

No fabrico das formulações da presente invenção, o ingrediente activo é geralmente misturado com um excipiente que pode ser um veículo ou um diluente ou ser diluído por um veículo, ou encerrado num veículo que pode tomar a forma de cápsula, saqueta, papel ou outro recipiente. Quando o veículo serve como um diluente, ele pode ser um material sólido, semi-sólido ou líquido que actua como um veículo, excipiente ou meio para o ingrediente activo. Assim, a formulação pode tomar a forma de comprimidos, pílulas, pós, lozengos, saquetas, hóstias, elixires, emulsões, soluções, xaropes, suspensões, aerossóis (como um sólido ou em meio líquido), supositórios e cápsulas de gelatina mole ou rija.

Os compostos desta invenção podem ser libertados transdermi-camente, se desejado. Os melhoradores da permeação transdérmica e sistemas de libertação, incluindo compressas e outros semelhantes são bem conhecidos do técnico experiente.

Exemplos de veículos, excipientes e diluentes adequados incluem lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma acácia , fosfato de cálcio, alginatos, silicato de cálcio celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, tragacanto, gelatina, xarope, metilcelulose, hidroxibenzoatos de propilo e metilo, talco, estearato de magnésio, água e óleo mineral. As formulações também podem incluir agentes molhantes, emulsificantes e agentes de suspensão, agentes conservantes, agentes edulcorantes ou agentes aromatizantes. As formulações da invenção podem ser formuladas de modo a proporcionar libertação rápida, prolongada ou diferida do ingrediente activo após administração ao paciente por utilização de procedimentos bem conhecidos na técnica.

Os compostos desta invenção podem ser libertados transdermicamente utilizando sistemas de libertação transdérmica e excipientes conhecidos. Mais preferencialmente, um composto desta invenção é misturado com melhoradores de permeação incluindo, mas não se limitanrln a, propilenoglicol, polietilenoglicol, monolaurado e azacicloalcan-2-onas, e incorporado numa compressa ou sistema de libertação similar. Excipientes adicionais incluindo agentes gelificantes, emulsionantes e tampões também podem ser adicionados como desejado à formulação transdérmica.

Para administração oral, um composto desta invenção pode idealmente ser misturado com veículos e diluentes e moldado em comprimidos ou encerrado em cápsulas de gelatina. Os compostos desta invenção podem ser preparados como micropartícuias ou microsferas. As micropartícuias podem ser preparadas utilizando poliglicolide, polilactide ou outros polímeros para facilitar a libertação controlada do composto activo ou prófármaco.

As composições são preferencialmente formuladas numa forma de dosagem unitária, contendo geralmente cada dosagem desde cerca de 1 até cerca de 500 mg, mais vulgarmente cerca de 5 a cerca de 300 mg de ingrediente activo. Outro intervalo preferido é de cerca de 0,5 mg a cerca de 60 mg de ingrediente activo por forma de dosagem unitária. O termo "forma de dosagem unitária" refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como doses unitárias para sujeitos humanos e outros mamíferos, contendo cada unidade uma quantidade pré determinada de material activo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com um veículo farmacêutico adequado. O técnico reconhecerá que os compostos desta invenção podem ser -23-

«rl formulados com outros medicamentos conhecidos. A co-formulação pode proporcionar um efeito terapêutico sinergético. Por exemplo, pode formular-se um antiácido com os compostos desta invenção para proporcionar um efeito gastrointestinal desejado.

De modo a ilustrar plenamente a operação desta invenção, são proporcionados os exemplos de formulações que se seguem. Os exemplos são somente ilustrativos, e não se destinam a limitar o alcance da invenção. As formulações podem empregar como compostos activos quaisquer compostos da presente invenção.

Formulação 1

Preparam-se cápsulas de gelatina rija utilizando os seguintes ingredientes: Quantidade Concentração em Dor cáosula oeso (oercentaeern) éster de metilo do ácido (2 S,3R,4R) [ [2- [ [4-(3 -hidroxifenil)-3,4-dimetil-1 -piperidiniljmetil] -1 -oxo-3 -fenil-propil] amino] acético, cloridrato 250 mg 55,0 Amido seco 200 mg 43,0 Estearato de magnésio 10 me 2,0 460 mg 100,0

Misturam-se os ingredientes acima e enchem-se cápsulas de gelatina rija com quantidades de 460 mg. -24-

Formulação 2 Cápsulas contendo 20 mg de medicamento são feitas como se segue:

Quantidade Concentração em mono-hidrato de cloridrato do éster de etilo do ácido (2S,3R,4R)[[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-1 -piperidiniljmetil]-1 - nor cápsula oeso ÍDercentaeem') oxo-3 -fenil-propil] amino] acético 20 mg 10,0 Amido 89 mg 44,5 Celulose microcristalina 89 mg 44,5 Estearato de magnésio 2 me _lq. 200 mg 100,0 O ingrediente activo, a celulose, o amido e o estearato de magnésio são misturados, a mistura crivada através de um crivo de malha U.S. N°.45 e enchem-se as cápsulas de gelatina rija.

Formulação 3 Cápsulas contendo cada uma 100 mg de medicamento são feitas como se segue: -25-

Quantidade Concentração em Ácido (2S,3R,4R)[[2-[[4-(3-hidroxifenil)- 3,4-dimetil-l-piperi- Dor cáosula peso (bercentaeem) dinil]-metil]-1 -oxo-3 -fenil-propil] amino]- acético, di-hidrato 100 mg 30,0 Mono-oleato de polioxietilenosorbitano 50 mg 0,02 Amido em pó 250 mg 69.98 350 mg 100,0

Os ingredientes acima são cuidadosamente misturados e colocados em cápsulas vazias de gelatina.

Formulação 4

Comprimidos contendo 10 mg de ingrediente activo são feitos como se segue:

Quantidade por comprimido

Concentração em peso (percentagem) éster de etilo do ácido (2 S,3 R,4R) [ [2- [ [4-(3 -hidroxifenil)-3,4-dimetil-1 -piperidinil]metil]-1 -oxo-3-fenil-propil]amino]acético, sesquimalato 10 mg 10,0 Amido 45 mg 45,0 Celulose microcristalina 35 mg 35,0 Polivinilpirrolidona (como solução a 10% em água) 4 mg 4,0 Carboximetil amido de sódio 4,5 mg 4,5 Estearato de magnésio 0,5 mg 0,5 Talco _Lmg 1.0 100 mg 100,0 -26- 0 ingrediente activo, o amido e a celulose são passados por um crivo de malha U.S. N°.45 e cuidadosamente misturados. A solução de polivinilpirrolidona é misturada com os pós resultantes que são depois passados por um crivo de malha U.S. N°.14. Os grânulos assim produzidos são secos a 50-60°C e passados através de um crivo de malha U.S. N°.18. O carboximetilamido de sódio, o estearato de magnésio e o talco, previamente passados por um crivo de malha U.S. N°.60, são depois adicionados aos grânulos que após mistura são comprimidos numa prensa para comprimidos para dar um comprimido pesando 100 mg.

Formulação 5

Pode ser preparada uma formulação para comprimidos utilizando os ingredientes abaixo:

Quantidade Concentração em Ácido (2S,3R,4R)[[2-[[4-(3-hidroxifenil)- 3,4-dimetil-1 -piperi-dinil]metil]-1 -oxo-3-fenil-propil]- por comprimido peso (percentagem! amino]acético, di-hidrato 250 mg 38,0 Celulose microcristalina 400 mg 60,0 Dióxido de silício micronizado 10 mg 1,5 t Acido esteárico 5 me 0.5 665 mg 100,0

Os componentes são misturados e comprimidos para formar comprimidos pesando 665 mg.

Formulação 6

Pode ser preparada uma cápsula de gelatina rija utilizando os seguintes ingredientes:

Quantidade Concentração em por cápsula peso (percentagem) Ácido (2S,3R,4R)[[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-1 -piperi-dinil]-metil]-1 -oxo-3-fenil-propil]amino]- acético, di-hidrato 66 mg 18 Polietilenoglicol 300 me 82 366 mg 100,0

Todos os ingredientes são crivados. O polietilenoglicol é fundido e mantido no estado líquido. O medicamento é incorporado no veículo fundido. Enchem-se as cápsulas com a suspensão homogénea fundida até ao peso ou volume adequado utilizando equipamento adequado de enchimento com pastas oleosas. Cápsulas contendo 6 mg de substância activa podem ser preparadas exactamente como descrito acima; contudo, a quantidade de di-hidrato do composto deve ser reduzida para 6,6 mg por cápsula. Cápsulas contendo 0,6 mg de substância activa podem ser preparadas como descrito acima; contudo, a quantidade de di-hidrato deve ser reduzida para 0,66 mg com 200 mg de polietilenoglicol por cápsula.

Os intermediários e processos da presente invenção são úteis para preparar compostos possuindo actividade antagonista opióide periférica benéfica. -28-

WH

São preferidos alguns compostos e condições no campo da invenção. As condições seguintes, realizações da invenção e características dos compostos listadas abaixo em forma de tabela podem ser combinadas independentemente para produzir uma variedade de compostos preferidos e condições de processo. A seguinte lista de realizações desta invenção não se destina a limitar o campo desta invenção de algum modo. A) O composto cristalino 2 é o éster de metilo.éster. B) O composto cristalino 2 é cloridrato do éster metilico do ácido (aS,3R,4R)-(3-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-a-(fenilmetil)-1 -piperidinopropanóico,. C) O composto cristalino 2 é o éster etílico. D) O composto cristalino 2 é o sal HBr. E) O álcool inferior é metanol. F) A relação álcool inferior:água é de 50-60% de álcool inferior e 50-40% de água. G) R1 é C1-C4 alquilo. H) Os compostos cristalinos de Fórmula 4 são o sal sesquimalato. I) Os compostos cristalinos de Fórmula 4 são a forma cloridrato monosolvato em acetona. J) O substancialmente puro di-hidrato de Fórmula 5 é 97% ou mais o di-hidrato 2S, 3R, 4R. K) Uma formulação farmacêutica compreendendo um composto di-hidrato de Fórmula 5 e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. L) Uma formulação farmacêutica compreendendo um sal sesquimalato de um composto de Fórmula 4. M) Um método de utilização de um composto de Fórmula 5 para tratar o síndroma do intestino irritável. -29- N) Um método de utilização de um ou mais compostos de Fórmula 4 para tratar o síndroma do intestino irritável. O) Um método para ligar um receptor mu compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula 5. P) Um método para ligar um receptor mu compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um ou mais compostos de fórmula 4.

As realizações preferidas desta invenção são representadas por A-P.

Os exemplos que se seguem são proporcionados para fins de ilustração e não devem ser interpretados como limitando o alcance da invenção reivindicada. A concentração dos reagentes não é crítica para a invenção. 0 técnico pode alterar a concentração dos reagentes para conseguir o desejado ritmo e rendimento. A duração dos processos descritos não é crítica. Como é sempre o caso em química, o ritmo da reacção depende de uma variedade de factores, como a temperatura e o composto exacto que vai ser preparado. O curso da reacção pode ser seguido utilizando métodos tais como a cromatografia em camada fina (TLC), cromatografia líquida de elevado rendimento (HPLC), cromatografia de gás (GC) e espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) para detectar o grau de realização da reacção. O operador pode obter rendimentos máximos utilizando o processo por alongamento do tempo de reacção. Altemativamente, o operador pode desejar obter um máximo rendimento interrompendo a reacção no ponto em que atinge um grau de realização económico. -30- C2-·*· μ. (

Tal como utilizado nos exemplos que se seguem, os termos seguintes têm os significados indicados. "HOBt" refere-se a hidrato de 1-hidroxibenzotriazole. "THF" refere-se a tetra-hidrofiirano. "DMF" refere-se a dimetilformamida. "TEA" refere-se a trietilamina. "DCC" refere-se a diciclo-hexilcarbodi-imida. PREPARAÇÃO 1 Éster de metilo do ácido (3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-l-piperidinopropanóico

Carregou-se um balão de fundo redondo com THF (1000 mL) e (+)-3-(3,4-dimetil-4-piperidinil)fenol (70,46 g, 0,343 mol). A suspensão foi aquecida a 40-45°C e adicionou-se acrilato de metilo (46,4 mL, 0,515 mol, 1,5 equiv.) ao longo de três minutos. Não se observou mudança na temperatura. A reacção foi agitada a 45°C e o progresso monitorizado por HPLC. A mistura reaccional manteve-se turva, Após quatro horas, a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada através de terra de diatomáceas. O solvente e o acrilato de metilo foram removidos por concentração da solução via evaporação rotativa a 40°C até um peso líquido de 120 g. O produto crú foi redissolvido em THF (180 g) para dar 33,3 % em peso de solução para utilização no processo do Exemplo 2.

Rendimento quantitativo por HPLC. [a]\s(20,D) 75,3° (c 1,01 MeOH), [a]23°5 245,6° (c 1,01 MeOH). IV (CHC13): 3600, 3600-3100, 1732, 1440 cm·1. 'H-RMN (CDC13): δ 0,72 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,30 (s, 3H), 1,59 (d largo, 1H), 1,90-2,03 (m, 1H), 2,25-2,50 (m, 2H), 2,50-2,90 (m, 7H), 3,66 (s, -31 -

At fc-Kh £—-*·! -1 3H), 6,63 (dd, 1H, J = 7,8, 2,0 Hz), 6,73 (s largo, 1H), 6,81 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,15 (t, 1H, J = 8,0 Hz). ,3C-RMN (CDC13) δ 16,1, 27,4, 30,8, 32,0, 38,4, 38,9, 49,9, 51,7, 53,9, 55,7, 55,8, 112,5, 112,6, 113,0, 113,2, 117,6, 117,7, 129,2, 151,6, 156,1, 173,4. UV (EtOH): λ máx. 274 nm, ε 2028; 202 nm, ε 17350. EM (FAB): m/z 292 (100%, M+l), 292 (18%, M+), 218 (65%). PREPARAÇÃO 2

Isobutilglicina, sal de ácido p-toluenossulfónico

Carregou-se um balão de fundo redondo com tolueno (600 mL), glicina (22,53 g, 0,30 mol), mono-hidrato de ácido p-toluenossulfónico (62,76 g, 0,33 mol, 1,1 equiv.) e álcool isobutílico (60 mL, 0,65 mol, 2,17 equiv.). A mistura heterogénea foi agitada e aquecida em refluxo com uma manta de aquecimento para remoção azeotrópica da água conforme se fosse formando. Após duas horas a mistura estava homogénea. Após 1,5 horas adicionais a mistura reaccional foi arrefecida até 50°C e concentrada via evaporação rotativa até um peso líquido de 135 g. O resíduo (óleo homogéneo) foi dissolvido em acetato de etilo (450 mL) enquanto ainda estava quente e a solução transferida para um balão de fundo redondo de três tubuladuras equipado com um agitador mecânico e um condensador de refluxo. Adicionou-se hexano (450 mL) à solução, com agitação à temperatura ambiente. A suspensão foi então aquecida em refluxo para redissolver o sólido e deixou-se a solução arrefecer lentamente com agitação. A solução foi semeada a 38°C para iniciar a cristalização. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura foi arrefecida até 5°C e agitada durante mais uma hora. O produto foi isolado por filtração através de um funil de vidro sinterizado, seco ao ar durante Ά hora e depois seco de um dia para o outro numa -32-estufa de vácuo (40°C, 5 mm Hg). Foi obtido um total dc 89,1 g (97,9%) dc um sólido cristalino branco. P.f. 77,2-79,6 °C. pKa (67% aq. DMF) = 7,68. IV (CHC13): 3300-2600, 3018, 2970, 1752, 1213, 1125, 1033, 1011 cm \ *H-RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,82 (d, 6H, J = 6,9), 1,79 (sept., 1H, J = 6,8), 2,33 (s, 3H), 3,66 (s largo, 2H), 3,78 (d, 2H, J = 6,6), 7,10 (d, 2H, J = 8,1), 7,72 (d, 2H, J = 8,2), 8,03 (s largo, 3H). 13C-RMN (75,4 MHz, CDC13) δ 18,9, 21,3, 27,4, 40,3, 72,0, 126,1, 128,9, 140,3, 141,4, 167,5.

Análise para C13H21NO5S:

Calculada: C, 51,47; H, 6,98; N, 4,62; S, 10,57.

Encontrada: C, 51,74; H, 6,77; N, 4,76; S, 10,73.

Exemplo 1 Éster de 2-metilpropilo do ácido (2S,3R,4R) [[2-[[4-(3-hidroxife-nil)-3,4-dimetil-l-piperidinil]metil]-l-oxo-3-fenilpropil]-amino]acético

Carregou-se um balão de fundo redondo com ácido (aS,3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-a-(fenilmetil)-l-piperidinopropanóico (20,11 g, 0,0522 mol, 1 equiv.), um composto da Preparação 2 (17,60 g, 0,058 mol, 1,11 equiv.), mono-hidrato de hidroxibenzotriazole (17,60 g, 0,058 mol, 1,11 equiv.) e tetra-hidrofurano seco (144 mL). Adicionou-se trietilamina (8,08 mL, 0,058 mol, 1,11 equiv.) à mistura seguido por diciclo-hexilcarbodi-imida (11,97 g, 0,058 mol, 1,11 equiv.) dissolvida em tetra-hidrofurano (60 mL). A mistura foi agitada a 25°C sob azoto durante dois dias. O fim da reacção foi monitorizado utilizando HPLC. A suspensão foi arrefecida até 0°C durante duas horas e filtrada. O filtrado foi depois evaporado quase até à secura sob pressão reduzida (10 Torr) a -33- 40°C. O óleo foi retomado em 250 mL de acetato de etilo. A camada orgânica fui lavada com 250 mL de uma solução tampão 0,5 M de CCVVHCC^1, pH 9,8. O pH foi ajustado a 9,5-9,8. A solução orgânica foi lavada com 250 mL de solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, arrefecida com agitação até -20°C e deixou-se repousar, sem agitação, a -20°C de um dia para o outro (16 horas). O DCU precipitado foi removido por filtração. O acetato de etilo foi evaporado sob pressão reduzida (10 Torr) para dar 35,0 g (95%) de um sólido amorfo. IV (CHClj) 2897, 1740, 1659 cm'1; 'H-RMN (300 MHz, CDC13) δ 8,94 (dd, 1H, J = 2,0 Hz), 8,40 (s largo, 1H), 7,20-6,93 (m, 2H), 6,60-6,50 (m, 3H9, 4,04, 3,95 (m, 2H), 3,80-3,65 (m, 2H), 3,16 (dd, 1H, J = 13,8 Hz, J = 4,4 Hz), 2,69 (d largo, 1H, J = 10,2 Hz), 2,63-2,41 (m, 4H), 2,40-2,15 (m, 4H), 1,84-1,71 (m, 2H), 1,42 (d largo, 1H, J = 12,4 Hz), 1,10 (s, 3H), 0,77 (d, 6H, J = 6,9 Hz), 0,57 (d, 3H, J = 6,9 Hz; *H-RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 9,17 (s largo, 1H), 8,40 (t largo, 1H, J = 2,0 Hz), 7,26-7,14 (m, 4H), 7,04 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 6,63 (m, 2H), 6,52 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 3,81-3,79 (m, 4H), 2,90-2,43 (m, 6H), 2,37 (d, 1H, J = 12,4 Hz), 2,33-2,03 (m, 3H), 1,95-1,65 (m, 2H), 1,43 (d, 1H, J = 12,4 Hz), 1,17 (s, 3H), 0,85 (d, 6H, J = 6,7 Hz), 0,65 (d, 3H, J = 6,8 Hz; 13C-RMN (75,4 MHz, DMSO-de) d 174,03, 169,78, 157,05, 151,71, 140,08, 128,80, 128,71, 125,77, 115,93, 112,36, 112,06, 69,96, 59,73, 54,95, 49,87, 44,24, 40,59, 38,03, 37,83, 35,61, 29,93, 27,19, 27,08, 18,72, 15,79; EM (FD) m/z 481 (M+); [«]is +170° (MeOH, c = 1.01); UV (MeOH) 264,4 nm (ε =0 2093), 202,8 nm.

Análise para C29H40N2O4:

Calculada: Encontrada: C, 72,47; H, 8,39; N, 5,83. C, 72,49; H, 8,59; N, 5,63.

Exemplo 2

Cloridrato de éster de metilo do ácido (aS,3R,4R)-4-(3-hidroxife-nil)-3,4-dimetil-a-(fenilmetil)-1 -piperidinopropanóico

Um balão de fundo redondo foi purgado com azoto e carregado com THF (100 mL) e uma solução 2,0 M de LDA (17,6 mL, 35,18 mmol, 2,05 equiv.). A solução foi arrefecida até -30°C e adicionou-se a solução de um composto da Preparação 1 (15,24 g, 17,26 mmol, 1,0 equiv., 32,8% em peso em THF) ao longo de vinte minutos enquanto se mantinha a temperatura entre -26° e -28°C.

Após agitação durante 15 minutos a -25°C, adicionou-se lentamente brometo de benzilo (5,81 g, 34,32 mmol, 2,0 equiv.) enquanto se mantinha a temperatura entre -17° e -20°C. A mistura reaccional foi agitada entre -15° e -20°C durante três horas, (éster de metilo do ácido (aS,3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-a-(fenilmetil)-1 -piperidinopropanóico/éster de metilo do ácido (aR,3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-l-piperidinopropanóico = 97/3). A mistura reaccional foi parada com HC1 IN (22 mL, 22 mmol). O pH de 10,6 para 9,5 com HC1 12 N (2,3 mL) e o banho de baixa temperatura removido. Adicionou-se heptano (50 mL) e separaram-se as camadas. Adicionou-se metanol (25 mL) à camada orgânica e arrefeceu-se a solução. Adicionou-se HC1 anidro (1,3 g), à solução enquanto se mantinha a temperatura abaixo de 5°C, até a mistura se acidificar. O sal cloridrato precipitou durante a adição. A mistura foi concentrada até um peso líquido de 32,58 g. Adicionou-se metanol (36 mL) ao concentrado oleoso e após uns minutos formou-se um precipitado. A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente.

Após arrefecimento até 0°C durante 1,25 horas o precipitado foi filtrado, o balão lavado com 10 mL do filtrado, e o bolo lavado com metanol frio (10 mL), O sólido foi seco para dar 2,93 g (40,9% de rendimento) de um pó branco. A análise por HPLC mostrou que o produto era uma mistura 86:14 de estereoisómeros.

Adicionou-se o sal cloridrato crú (2,75 g) a metanol (13,75 mL) e aqueceu-se a suspensão em refluxo durante duas horas. A mistura foi arrefecida até cerca de 0°C. O precipitado foi filtrado, o balão foi lavado com filtrado e o bolo foi lavado com metanol frio (1,5 mL). O produto foi seco para dar 2,32 g de um sólido branco (84,4% de rendimento).

Rendimento global: 34,5% (alquilação e resuspensão).

Pureza: 96,2% de éster de metilo do ácido (aS,3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-a-(fenilmetil)-l -piperidinopropanóico, 2,9% de cloridrato do éster de metilo do ácido (aR,3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-a-(fenilmetil)-l -piperidinopropanóico e 0,7% de mono-hidrato de ácido (aS,3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-a-(fenilmetil)-l-piperidinopropanóico (% das áreas de HPLC). P.f. 230-232°C (dec.), IV (KBr): 3174, 1732, 1620, 1586, 1276, 785, 749, 706 cm'1. 'H-RMN (DMSO-d*): d [0,78 (d, 0,85 x 3H, J = 7,2 Hz) & 1,02 (d, 0,15 x 3H, J = 7,2 Hz, sais diastoméricos], [1,28 (s, 0,15 x 3H), 1,34 (s, 0,85 x 3H, sais diastoméricos], 1,76 (d largo, 1H), 2,10-2,48 (m, 2H), 2,75-3,65 -36-

Iqa. Y ( t·^ (m, 12H), 6,60-6,90 (m, 3H), 7,11 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,15-7,35 (m, 5H), 9,43 (s largo, 1H), 9,75 (s largo, 1H). EM (FD): mtz 381 (100%, M - HC1) C, 68,97; H, 7,72; N, 3,35 Cl, 8,48. C, 69,27; H, 7,84; N, 3,42 Cl, 8,38.

Análise para C24H32CINO3: Calculada: Encontrada:

Exemplo 3

Mono-hidrato de ácido (+)-(aS,3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dime-til-a-(fenil-metil)-1 - piperidinopropanóico

Carregou-se um balão de fundo redondo com água desionizada (230 mL) e uma solução a 50% p/p de hidróxido de sódio (20,02 g, 250 mmol, 4,2 equiv.). Adicionou-se de uma só vez ao balão o produto do Exemplo 2 (25,0 g, 60 mmol, 1 equiv.). A mistura foi agitada à temperatura ambiente e filtrada. O papel de filtro foi lavado com 33 mL de uma solução 1 N de hidróxido de sódio. Transferiu-se a solução para um balão de fundo redondo adequado para destilação sob vácuo. Adicionou-se metanol à solução (240 mL). O pH da solução foi ajustado a 6,0 utilizando ácido clorídrico concentrado (32,14 g). Removeu-se o metanol a pressão e temperatura reduzidas (100-200 mm Hg, 45-50°C). O metanol foi removido até o peso do concentrado ser de aproximadamente 313 g. Deixou-se a suspensão com agitação durante 4 horas. O pH da solução foi reajustado a 6,0 e arrefeceu-se a mistura até 0-5°C durante 1,5 horas. O produto desejado foi filtrado e lavado três vezes com 50 mL de água desionizada. Secou-se o produto. O produto mono-hidrato desejado foi isolado como um sólido granulado branco e pesava 21,3 g para um rendimento de 92%. P.f. 178-180 °C(dec.). -37- ! ‘H RMN (300 MHz, DMSO) δ 0,64 (d, 3H, J = 6,9 Hz), 1,19 (s, 3H), 1,51 (d, 1H, J = 13,1 Hz), 1,97-2,00 (m, 1H), 2,11 (td, 1H, J = 3,6 Hz, 12,7 Hz), 2,34-2,95 (m, 9H), 6,54 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 6,66 (m, 2H), 7,06 (t, 1H, J = 7,9 Hz), 7,14-7,28 (m, 5H), 9,22 (s largo, 1H). 13C RMN (75,5 MHz, DMSO) δ 15,5, 26,9, 29,5, 35,2, 37,5, 37,7, 42,7, 49,7, 53,7, 58,8, 112,2, 112,3, 115,9, 126,0, 128,2, 128,7, 128,9, 139,4, 151,2, 157,1, 175,1. UV (MeOH) λ ^ 203, ε 17,860; 275, ε 2356. EM (FD) m/z 368. IV (HBr) 3360, 3272, 2967, 1622, 1585, 1363, 844 cm'1, [a]^ 304° (c 1,01, MeOH). KF = 4,07% (calc. para o mono- hidrato: 4,70%).

Análise para C23H31NO4:

Calculada: C, 71,66; H, 8,10; N, 3,63.

Encontrada: C, 72,29; H,8,10; N,3,71.

Exemplo 4

Sal sesquimalato do éster de 2-metilpropilo do ácido (2S,3R,4R) [[2- [ [4-(3 -hidroxifenil)-3,4-dimetil-1 -piperidinil]metil] -1 -oxo-3 -fenilpropil] -amino]-acético

Dissolveu-se um composto do Exemplo 1 (2,5 g, 5,2 mmol, 1,0 equiv.) em 50 mL de acetato de etilo. Adicionou-se ácido L-málico à mistura (1,03 g, 7,8 mmol, 1,5 eq.). Após a dissolução do ácido L-málico por agitação, a solução foi aquecida até 70°C e adicionaram-se 4 mL de acetona. Cristalizou-se a solução. O produto foi isolado por filtração. O bolo do filtrado foi lavado com acetato de etilo. Secou-se 0 sal até o nível de acetato de etilo ser inferior a 1%. O composto em epígrafe foi isolado como cristais brancos. A amostra foi analisada utilizando a diffacção de raios x do pó. -38- Μ h*.yb P.f. 94-95°C. IV (HBr) 3346,92, 2972,68,1741,94, 1601,12 cm'1; 'H RMN (300 MHz, DMSO-d^) δ 9,70 (s largo, 1H), 8,47 (t, 1H, J = 1,9 Hz), 7,23-7,13 (m, 4H), 7,06 (t, 1H, J = 7,9 Hz), 6,67 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,63 (s, 1H), 6,53 (dd, 1H, 8 Hz, J = 1,7 Hz), 4,18 (t, 1,5H, J = 5,8 Hz), 3,82-3,78 (m, 3H), 3,33-1,80 (m, 16H), 1,48 (d largo, 1H, J = 13,0 Hz), 1,18 (s, 3H), 0,85 (d, 6H, J = 6,7 Hz), 0,64 (d, 3H, J = 6,9 Hz; 13C RMN (75,4 MHz, DMSO-de) δ 175,63, 175,42, 171,44, 158,66, 138,63, 138,60, 130,50, 130,23, 129,66, 128,02, 114,07, 114,05, 114,01, 113,94; EM (FD) m/z 481 (M+); UV (MeOH) 272,8 nm (ε = 1797), 202,4 nm (ε = 20576);

Análise para C7oH9gN4023: C, 61,65; C, 61,40; H, 7,38; H, 7,23; 0,26,98. O, 26,66. N, 4,10; N, 4,1;

Calculada:

Encontrada:

Exemplo 5

Di-hidrato do ácido (2S,3R,4R) [[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-1 -piperidinil]metil]-1 -oxo-3-fenilpropil]-amino]acético

Carregou-se um balão de fundo redondo com uma solução de um composto do Exemplo 1 (12,5 g, 0,026 mol, 1,0 equiv.) em 315 mL de etanol 3A. Adicionou-se água (74,0 mL) à mistura. Adicionou-se uma solução aquosa de hidróxido de sódio ((1,0 M) 0,077 mol, 3,0 equiv.) gota a gota ao longo de 10-15 minutos a 25-30°C. A solução foi agitada e depois filtrada. O pH da solução foi ajustado de 12,50 para 6,0 por adição de ácido clorídrico concentrado. Semeou-se a solução e o ácido (2S,3R,4R) [[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-l-piperidi- niljmetilJ-l-oxo-3-fenilpropil]-amino]acético começou a precipitar em 10-15 minutos. A cristalização foi agitada a 25°C durante duas horas e depois o ácido (2S,3R,4R) [[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-l-piperidinil]metil]-l-oxo-3-fe-nilpropil]-amino]acético foi filtrado com sucção ligeira até um bolo húmido. Os cristais foram suspensos com 60 mL de água e filtrados com sucção até um bolo compacto. Secaram-se os cristais até ao di-hidrato, de um dia para o outro (16 horas) ao ar livre com 33% de humidade relativa a 25°C, fazendo passar uma corrente de ar sobre o produto no funil de filtração com sucção moderada. O composto em epígrafe foi isolado com um rendimento de 85% (10,2 g), a partir do mono-hidrato do ácido (aS,3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-a-(fenil-metil)-l- piperidinopropanóico, como cristais brancos comum com um ponto de fusão agudo a 208°C. A amostra foi analisada utilizando a difracção de raios x do pó. IV (KBr) 3419,3204,3028,1684,1591 cm'1; 'H RMN (300 MHz, DMSO-dé) δ 9,18 (s largo, 1H), 8,34 (t, 1H, J = 5,5,Hz), 7,26-7,12 (m, 6H), 7,05 (t, 1H, J = 7,9 Hz), 6,67 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,63 (s, 1H), 6,52 (dd, 1H, J = 8,0 Hz, J = 1,8 Hz), 3,65 (d, 2H, J = 5,6 Hz), 2,89-2,10 (m, 14H), 1,91 (d largo, 1H, J = 6,7 Hz), 1,18 (s, 3H), 0,64 (d, 3H, J = 6,9 Hz); ,3C RMN (75,4 MHz, DMSO-dé) δ 173,54, 71,3, 157,05, 151,28, 139,83, 128,83, 128,73, 128,05, 125,82, 115,97, 112,14, 59,62, 54,59, 49,92, 43,75, 41,12, 39,95, 39,67, 39,39, 39,12, 38,84, 37,80, 37,73, 35,42, 29,68, 27,04,15,54;

Ms (FD) m/z 425 (M+ - 2H20: UV (MeOH) 275,0 (ε = 2246), 202,6 (ε = 22709,4);[α]365 = -1,18 (MeOH, c = 1,0);

Análise para C25H36N206:

Calculada: Encontrada: C, 65,20; H, 7,88; N, 6,08; 0,20,84. C, 64,96; H, 7,74; N, 6,10; 0,20,82. -40-

Exemplo 6

Di-hidrato do ácido (2S,3R,4R) [[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-1 -piperidiniljmetil]-1 -oxo-3-fenilpropil]-amino]acético.

Carregou-se um balão de fundo redondo com etanol (3A, 2400 mL)

e um composto do Exemplo 4 (146 g com 5% de EtOAc, 138,7 g pura (0,203 mol, 1,0 equiv., 0,085 molar).Adicionou-se gota a gota uma solução aquosa 1,0 M de hidróxido de sódio, gota a gota durante 20 minutos , a 25-30°C. A solução foi agitada e depois filtrada. O pH da solução foi ajustado de 12,96 para 6,0 por adição de ácido clorídrico concentrado. Semeou-se a solução e o ácido (2S,3R,4R) [[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-1-piperidiniljmetil]- l-oxo-3-fe-nilpropil]-amino]acético começou a precipitar em 10-15 minutos. A cristalização foi agitada a 25°C durante duas horas. Arrefeceu-se a suspensão até 0°C e agitou-se. O ácido (2S,3R,4R) [[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-l-piperidinil]metil]-l-oxo-3-fenilpropil]-amino]acético foi filtrado com sucção ligeira até um bolo húmido. Os cristais foram suspensos com 500 mL de água a 25°C, com agitação, seguido por ligeira sucção, ressuspensos com 500 mL de água e filtrados com sucção até um bolo compacto. Secaram-se os cristais até ao di-hidrato, de um dia para o outro ao ar livre com 35% de humidade relativa a 25°C, fazendo passar uma corrente de ar sobre o produto no funil de filtração com sucção moderada. O composto em epígrafe foi isolado com um rendimento >93% (88 g), como cristais brancos com um ponto de fusão agudo a 208°C.

Análise para C25H36N2O6:

Calculada: Encontrada: C, 65,20; H, 7,88; N, 6,08; O, 20,84. C, 65,38; H, 7,87; N, 6,25; 0,20,90. -41 -

Exemplo 7

Mono-solvato em acetona do cloridrato do éster de 2-metilpropilo do ácido (2S,3R,4R) [[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-l-piperidinil]metil]-l-oxo-3 -fenilpropil] -amino] acético

Dissolveu-se uma amostra de 6,0 g de um composto do Exemplo l em 60,0 mL de acetona seca. Adicionou-se gota a gota a 25°C uma porção de 0,45 g de gás clorídrico (0,98 equiv.) dissolvido em 30,0 mL de acetona seca. O gás clorídrico em acetona foi adicionado gota a gota até o pH ser 3. Quando o pH atingiu 3, adicionou-se uma Segunda aliquota de 1,0 mL de um composto do Exemplo 1, com a mesma concentração da solução de partida. Formou-se um precipitado. A reacção foi agitada a 25°C durante uma hora e depois arrefecida até 0°C. A reacção foi agitada durante duas horas a 0°C. O sal cloridrato do éster de 2-metilpropilo do ácido (2S,3R,4R) [[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-l-piperidinil]metil]-l-oxo-3-fenilpropil]-amino]acético foi filtrado com pressão de azoto. O cloridrato do éster de 2-metilpropilo do ácido (2S,3R,4R) [[2-[[4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-l-piperidinil]metil]-l-oxo-3-fenilpropil]-amino]acético foi seco por fluxo de azoto sobre o filtrado para formar o monosolvato em acetona. O mono-solvato em acetona foi caracterizado por cromatografia de gás capilar que mostrou 9,3%-9,97% (em peso) de acetona (teoricamente 10%). O produto foi caracterizado por remoção da molécula de acetona da solvação. O mono-solvato de cloridrato em acetona foi ainda mais seco utilizando uma estufa com vácuo a 50°C durante 2 a 3 dias. A formação do mono-hidrato de cloridrato foi efectuada por espalhamento dos cristais numa superfície grande a 25°C com 40% de humidade relativa durante 2 dias. -42- O rendimento foi >85% com pureza de cerca de 99,3% por HPLC de fase reversa. P.f. 70-75°C: IV (KBr) 3217,7, 3063,4, 2965,0, 179,7, 1671,5; ‘H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 9,45 (s largo, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,94 (t, 0,85H, J = 1,5 Hz), 8,92 (t, 0,15H, J = 1,5 Hz), 7,28-7,20 (m, H), 7,09 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 6,67-6,56 (m, 3H), 3,83-3,76 (m, 4H), 3,47-3,10 (m, 5H), 2,83 (dq, 2H, J = 18,0 Hz, J = 5,5 Hz, J = 2,0 Hz), 2,7-2,0 (m, 5H), 1,82 (sept., 1H, J = 6,7 Hz), 1,70 (d, 1H, J = 12,0 Hz), 1,29 (s, 0,85H), 1,24 (s, 0,15H), 0,99 (d, 0,45H, J = 7,4 Hz), 0,85 (d, 6H, J = 6,6 Hz), 0,71 (d, 2,55H, J = 7,3 Hz); 13C RMN (75,4 Hz, DMSO-d^) δ 172,7, 169,8, 157,4, 149,4, 129,3, 128,3, 121,6, 118,6, 115,7, 112,9, 112,3, 53,9, 57,1, 70,2, 48,1, 46,4, 40,8, 37,3, 36,9, 27,3, 27,0, 26,5, 18,8, 15,1; UV (MeOH) 274 (ε = 2738), 202,2 (ε = 28413); EM (FD) 481 (M+ - HC1-H20);

Análise para C29H41N2O4-H2O:

Calculada: C, 65,09; H, 8,10; N, 5,23; 0,14,95; Cl, 6,63.

Encontrada: C, 65,06; H, 7,92; N, 5,27; 0,15,19 Cl, 6,92.

Exemplo 8

Cloridrato do éster de etilo do ácido (aS,3R,4R)-4-(3-hidroxifenil)-3,4-dimetil-a-(fenilmetil)-1 - piperidinopropanóico

Carregou-se um balão de fundo redondo com uma amostra de (+)-3-(3,4-dimetil-4-piperidinil)fenol (50,0 g, 243,5 mmol, 1,0 equiv.). Adicionaram-se tetra-hidrofurano (1 L) e acrilato de etilo (33,0 mL, 304,4, mmol, 1,25 equivalentes) e agitou-se a mistura reaccional heterogénea durante vários dias à -43- /Qt d**——«.(‘Ά temperatura ambiente. A mistura reaccional foi filtrada através de terra de diatomáceas e a solução transparente concentrada até um óleo viscoso âmbar pesando 75.0 g. Uma porção do amino éster (1,16 g, 3,80 mmol, 1,0 equivalente)foi redissolvido em 10 mL de tetra-hidrofurano (THF) e adicionado a uma solução a -75°C de di-isopropilameto de lítio (3,90 mL, 7,80 mmol, 2,05 equivalentes) em THF (20 mL). A adição demorou aproximadamente cinco minutos. A suspensão foi então agitada a -70°C durante 15 minutos e adicionou-se brometo de benzilo (0,47 mL, 3,99 mmol, 1,05 equivalentes). Deixou-se a reacção aquecer até -25 a -30°C e agitou-se durante 3 horas. A reacção foi parada com 10 mL de cloreto de amónio saturado, 10 mL de H2O e 20 mL de acetato de etilo. Separou-se a camada aquosa. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. O orgânico foi depois seco sobre MgS04. A mistura foi filtrada e a solução resultante foi evaporada rotativamente para dar um óleo amarelo pesando 1,80 g. A mistura de produto e material de partida foi então cromatografada com pressão de azoto com uma mistura de acetato de etilo e hexano para isolar 1,07 g (71%) do éster de etilo. O éster de etilo (14,8 g, 37,4 mmol) foi dissolvido em 150 mL de etanol. Aspergiu-se a solução com cloreto de hidrogénio anidro e removeu-se o etanol por evaporação rotativa. O sólido foi depois triturado com 50 mL de acetato de etilo e filtrado. Secou-se o sólido de um dia para o outro a 30°C para isolar 12,25 g do cloridrato (76%, ponto de fusão de 179-181°C). A relação diastereoisomérica foi de 49% de aS,3R,4R (diastereoisómero desejado) para 51% de ccR,3R,4R diastereoisómero não desejado). O sal cloridrato (1,02 g) foi suspenso em 5 mL de etanol e aquecido em refluxo durante 3 horas. Deixou-se a mistura arrefeceu até à temperatura ambiente e agitou-se. Agitou-se a mistura a 0°C durante 1 hora e filtrou-se. O sal foi seco de um dia para o outro a 40°C. O sólido branco isolado pesava 0,48 g (47%). A relação diastereoisomérica foi de 76% de aS,3R,4R para 24% de aR,3R,4R. O sal cloridrato (0,42 g) foi suspenso em 6 mL de etanol, aquecido em refluxo durante 2 horas, arrefecido até à temperatura ambiente e agitado. A suspensão foi arrefecida até 0°C durante 1 hora e filtrada. O sal foi seco e obtiveram-se 0,31 g (74%) do sal. A relação diastereoisomérica foi de 92% de aS,3R,4R para 8% de aR,3R,4R.

Uma porção do sal (0,24 g) foi suspensa uma terceira vez em 2,5 mL de etanol. A mistura foi aquecida em refluxo durante três horas e deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente e agitou-se. A suspensão foi arrefecida até 0°C durante 1 hora e filtrou-se. Secou-se o sólido. O sal cloridrato de éster de etilo diastereoisoméricamente puro (98% de aR,3R,4R) pesava 0,23 g (96%).

Lisboa, 11 de Abril de 2001

ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims (6)

1. - 1 - REIVINDICAÇÕES 1. Composto di-hidrato cristalino de Fórmula 5
2. 2. Composto da Reivindicação 1, em que o composto di-hidrato cristalino é pelo menos 97% de di-hidrato 2S,3R,4R.
3. 3. Composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 e 2 para utilização em ligação a receptor de opióides periférico num paciente.
4. 4. Composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 e 2 para utilização no tratamento de um estado seleccionado do grupo que consiste em síndroma do intestino irritável, prisão de ventre idiopática e dispepsia não ulcerosa.
5. 5. Formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 e 2 em combinação com um ou mais excipientes, veículos ou diluentes farmaceu-ticamente aceitáveis. -2-
6. 6. Processo para preparação de um composto di-hidrato cristalino como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 e 2, que compreende a hidrólise de um composto de Fórmula

   em que R1 é CrC6 alquilo e R2 é um ião L-malato ou cloro. Lisboa, 11 de Abril de 20001 /IClWJV C^*·· ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA