ES2714198T3

ES2714198T3 - Uso de antagonistas opioideos para atenuar la proliferación y la migración de células endoteliales

Info

Publication number: ES2714198T3
Application number: ES06748298T
Authority: ES
Inventors: Jonathan Moss; Mark Lingen; Patrick A Singleton; Joe G N Garcia
Original assignee: University of Chicago
Current assignee: University of Chicago
Priority date: 2005-03-07
Filing date: 2006-03-07
Publication date: 2019-05-27
Anticipated expiration: 2026-03-07
Also published as: JP5241484B2; US20170258909A1; BRPI0608818A2; US9662390B2; AU2006220682B2; JP2008531749A; WO2006096626A3; JP2013107892A; AU2006220682A1; US20080274119A1; EP1861096A2; CN104248763A; CN101171010A; CA2600350A1; CN101171010B; EP1861096B1; CA2600350C; WO2006096626A2; MX2007010833A

Abstract

Una composicion farmaceutica que comprende un antagonista opioideo periferico para su uso en un metodo para tratar una enfermedad o un trastorno caracterizados por una migracion o una proliferacion anomalas de las celulas endoteliales, comprendiendo el metodo administrar una cantidad eficaz del antagonista opioideo periferico a un sujeto que lo necesita, en donde el antagonista opioideo periferico es metilnaltrexona, en donde la metilnaltrexona inhibe o reduce la migracion o la proliferacion anomalas de celulas endoteliales, en donde las celulas endoteliales son celulas vasculares, y la migracion o la proliferacion anomalas es angiogenesis anomala.

Description

DESCRIPCION

Uso de antagonistas opioideos para atenuar la proliferacion y la migracion de celulas endoteliales

Campo de la invencion

La invencion se refiere a composiciones para su uso en metodos de atenuar la migracion y/o la proliferacion de celulas endoteliales, especialmente asociadas con tumores, utilizando antagonistas opioideos perifericos.

Introduccion

La proliferacion celular es un proceso normal continuo en todos los organismos vivos que implica numerosos factores y senales que estan delicadamente equilibradas para mantener los ciclos celulares regulares. Tanto si las celulas de mamifero creceran y se dividiran como si no, se determina por varios mecanismos de control de la retroalimentacion, que incluyen la disponibilidad del espacio en el que puede crecer una celula, y la secrecion de factores estimuladores e inhibidores especificos en el entorno inmediato.

La angiogenesis y las enfermedades relacionadas con la angiogenesis se ven afectadas por la proliferacion celular. El proceso de la angiogenesis da como resultado la formacion de nuevos vasos sanguineos. En condiciones fisiologicas normales, los animales, incluyendo los seres humanos, experimentan la angiogenesis solo en situaciones restringidas muy especificas. Por ejemplo, la angiogenesis se observa normalmente en la cicatrizacion de heridas, el desarrollo fetal y embrionico, y la formacion del cuerpo luteo, el endometrio y la placenta.

Durante el proceso de la angiogenesis, las celulas endoteliales, que existen normalmente en un estado quiescente como parte de un vaso sanguineo existente, entran en un estado proliferativo migratorio. Este estado proliferativo migratorio de las celulas endoteliales se resuelve eventualmente cuando las celulas vuelven al estado quiescente como parte de un vaso sanguineo nuevo funcional. La generacion de nuevos capilares implica un proceso complejo que requiere que se produzcan numerosos eventos celulares y moleculares en un modelo espacial y temporal. Algunas de estas actividades incluyen la degradacion de la membrana basal circundante del vaso original, la migracion de las celulas endoteliales a traves del estroma del tejido conectivo, la proliferacion celular, la formacion de estructuras de tipo tubular, y la maduracion de estos tubos revestidos de endotelio en nuevos vasos sanguineos. (Cliff, 1963; Schoefl, 1963; Ausprunck y Folkman, 1977). Algunos factores angiogenicos esenciales incluyen el factor basico de crecimiento de fibroblastos, el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), angiopoyetinas, citoquinas, proteinas de la matriz extracelular, y metaloproteasas de matriz. Estos factores se producen localmente por celulas estromales y por leucocitos activados que son reclutados hasta la zona (Risau, W. (1997) Nature 386(6626):671-674; Risau y Flamme (1995) Ann. Rev. Cell Dev. Biol. 11:73-91). A diferencia de otros factores angiogenicos, VEGF actua como un mitogeno especifico de la celula endotelial durante la angiogenesis (Terman et al., 1992 y Ferrara, 1993).

La angiogenesis puede estimularse y aprovecharse por algunos neoplasmas (por ejemplo, tumores) para aumentar la captacion de nutrientes. Se ha encontrado que la angiogenesis es esencial para el crecimiento de tumores solidos de mas de 2-3 mm de diametro y para la metastasis tumoral (Folkman, 1995; revisado en Bouck et al., 1996). A diferencia de la angiogenesis normal, que conduce a la anastomosis y a la maduracion de los capilares, la angiogenesis asociada con neoplasia es un proceso continuo. Las celulas endoteliales se activan por las celulas neoplasicas cercanas para secretar no solo VEGF que estimula la angiogenesis, sino tambien las metaloproteasas de matriz (MMP) que degradan la matriz extracelular circundante. Las celulas endoteliales invaden a continuacion la matriz extracelular donde migran, proliferan, y se organizan para formar nuevos vasos sanguineos, que soportan el crecimiento y la supervivencia de las neoplasias.

La neoplasia vascularizada recientemente continua creciendo, conduciendo a una fuerte privacion de nutrientes adicional y a una senalizacion proangiogenica cronica. La vasculatura de las neoplasias se caracteriza por la presencia de lagunas y una tasa baja de anastomosis. Esta vasculatura parcialmente disfuncional alimenta el requisito permanente de la angiogenesis. Adicionalmente, esta vasculatura incompleta permite el desprendimiento de celulas neoplasicas en la circulacion sistemica. Por lo tanto, el potencial angiogenico de una neoplasia esta correlacionado con el potencial metastasico. (Weidner et al. (1991) N. Engl. J. Med. 324(1): 1-8; Folkman y Shing (1992) J. Biol. Chem.

267(16):10931-10934).

Ya que una proporcion significativa de neoplasias son dependientes de una angiogenesis continuada, la inhibicion de la angiogenesis bloquea el crecimiento de la neoplasia que conduce a menudo a la necrosis completa del neoplasma. (Weidner et al. (1991) N. Engl. J. Med. 324(1): 1-8; Folkman y Shing (1992) J. Biol. Chem. 267(16):10931-10934).

La supresion de una cualquiera de las etapas y/o los factores implicados en la angiogenesis podria inhibir la formacion de nuevos vasos, y por tanto, afectar al crecimiento del tumor y a la generacion de la metastasis. De hecho, se ha estimado que la eliminacion de una unica celula endotelial podria inhibir el crecimiento de 100 celulas tumorales (Thorpe et al., 1995). Se ha encontrado tambien que los anticuerpo sensibilizados contra el factor angiogenico VEGF han mostrado suprimir el crecimiento del tumor in vivo (Kim et al., 1993).

Como parte del tratamiento y la gestion de pacientes con cancer y muchas dolencias medicas, se usan ampliamente los agonistas de los opioideos, tales como morfina, para el dolor asociado. Por ejemplo, La morfina se usa en la fase terminal de los cuidados de aproximadamente la mitad de los pacientes que mueren de cancer cada ano en los Estados Unidos. Los agonistas de los opioideos, tales como morfina, comprenden un grupo de compuestos que actuan sobre una serie de receptores opioideos endogenos, tales como los receptores mu, kappa, y delta en sistemas biologicos. Normalmente, estos receptores endogenos se unen a opioideos endogenos. Los opioideos endogenos se producen de forma natural por las celulas de mamiferos. Los opioideos endogenos incluyen beta endorfinas, encefalinas, y dinorfinas. Las beta-endorfinas muestran una preferencia por los receptores mu, las encefalinas por los receptores delta y las dinorfinas por los receptores kappa. Los agonistas opioideos se clasifican por sus efectos preferentes sobre los receptores opioideos endogenos. En general, el receptor mu se asocia con el alivio del dolor, y la dependencia quimica (por ejemplo, drogodependencia y alcoholismo). La morfina, por ejemplo, es un agonista opioideo mu. Los receptores opioideos no se limitan al cerebro y al sistema nervioso central (SNC), por ejemplo, a los receptores centrales. Los receptores opioideos perifericos pueden encontrarse en otros tejidos a lo largo del cuerpo, por ejemplo, tejido gastrointestinal.

A pesar del amplio uso en el tratamiento del dolor, la morfina y otras medicaciones opioideas pueden tener efectos secundarios graves que pueden estar producidos por la activacion de los receptores perifericos. Los efectos secundarios pueden ser dificiles de gestionar y pueden dar como resultado que el paciente rechace el tratamiento del dolor basado en opioideos. Los efectos secundarios de un tratamiento con opioideos incluyen nauseas, estrenimiento, inhibition de la motilidad gastrointestinal, supresion e inmunosupresion respiratoria. Adicionalmente, la morfina y otros agonistas de receptores opioideos pueden estimular la proliferation de celulas endoteliales microvasculares humanas y la angiogenesis in vitro e in vivo a concentraciones en sangre equivalentes a morfina normal o morfina. Esta actividad proangiogenesis de los agonistas opioideos, aunque paliativa del dolor, puede acelerar la progresion del dolor.

Los antagonistas opioideos se clasifican de forma similar por sus efectos sobre los receptores opioideos, por ejemplo, por su capacidad de antagonizar un receptor mas eficazmente que otro receptor. Por ejemplo, el antagonista opioideo naloxona actua como un antagonista competitivo en todos los receptores opioideos, pero es aproximadamente diez veces mas eficaz en los receptores mu que en los receptores kappa y, por lo tanto, se clasifica como un antagonista opioideo mu. Los antagonistas opioideos pueden antagonizar receptores centrales, receptores perifericos o ambos. Los antagonistas opioideos, y en particular los antagonistas opioideos perifericos, se han usado para disminuir los efectos secundarios de los opioideos administrados exogenamente, asi como para disminuir los efectos indeseados de los opioideos endogenos excesivos. Se han examinado tambien los antagonistas opioideos para su uso potencial como agentes anticancerosos para tipos concretos de canceres, como se describe en las patentes de EE.UU. numeros 6.384.044 y 6.136.780 y en la bibliografia cientifica Gupta et al. Cancer Research, 62: 4491-98 (2002). Los efectos anticancerosos de los antagonistas opioideos han sido controvertidos y no se entienden bien, pero se ha mantenido que el antagonista opioideo con efectos anticancerosos, en la extension en que se han mostrado en todos, no esta relacionado con la angiogenesis (Poonawala T, et al., Wound Repair Regen. Mar-Abr 2005;13(2):165-74; Popov I., Acta Chir lugosl. 2004;51(2): 117-21; Blebea J, et al., J Vasc. Surg. Mar 2002;35(3):532-8; Balasubramanian S, et al., J Mol Cell Cardiol. Dic 2001;33(12):2179-87; Zagon IS, et al., Int J Oncol. Nov 2000;17(5):1053-61; Blebea J et al., J Vasc. Surg. Ago 2000;32(2):364-73; Pasi A, et al., Gen Pharmacol. (991;22(6):1077-9.). documento WO01/70031 (Zagan et al.) proporciona que un peptido opioideo endogeno, el factor de crecimiento opioideo (u "OGF"), inhibe la angiogenesis in vivo actuando sobre los receptores del OGF. Esta divulgation proporciona tambien que el antagonista opioideo naltrexona estimule el desarrollo de vasos sanguineos. De hecho, se ha notificado que en un modelo de tumores xenoinjertados en ratones, el antagonista opioideo naloxona no presenta un efecto significativo sobre la angiogenesis inducida por morfina Gupta et al. Cancer Research, 62: 4491-98 (2002). Por lo tanto, es sorprendente que se haya descubierto ahora que los antagonistas opioideos pueden inhibir la proliferacion endotelial y la migration asociada con la angiogenesis.

Breve descripcion de la invencion

La divulgacion describe metodos de atenuar, por ejemplo, inhibir o reducir, la proliferacion y la migracion celular, particularmente la proliferacion y migracion de celulas endoteliales, incluyendo las asociadas con la angiogenesis, utilizando antagonistas perifericamente restringidos.

De acuerdo con un aspecto de la invencion, se proporciona una composition farmaceutica que comprende un antagonista opioideo periferico para su uso en un metodo para tratar una enfermedad o un trastorno caracterizados por la migracion o la proliferacion anomalas de celulas endoteliales, comprendiendo el metodo administrar una cantidad eficaz del antagonista opioideo periferico a un sujeto que lo necesita, en el que el antagonista opioideo periferico es metilnaltrexona, en el que la metilnaltrexona inhibe o reduce la migracion o la proliferacion anomalas de celulas endoteliales, en el que las celulas endoteliales son celulas vasculares, y la migracion o la proliferacion anomalas es la angiogenesis anomala. El trastorno puede ser cualquier trastorno caracterizado por una migracion o una proliferacion no deseadas de celulas endoteliales. Dichos trastornos importantes son cancer, anemia de celulas falciformes, heridas vasculares, retinopatias proliferativas y proliferacion de celulas endoteliales no deseadas en los rinones y el pulmon.

El antagonista opioideo es un antagonista opioideo periferico que es metilnaltrexona. En realizaciones importantes, la cantidad eficaz es tal que el sujeto tiene niveles de plasma sangumeo en circulation eficaces del antagonista opioideo continuamente durante al menos 1 semana, al menos 2 semanas, al menos tres semanas y, preferentemente, al menos 4 semanas.

La invention incluye tambien la administration simultanea de los antagonistas opioideos con agentes que no son antagonistas opioideos, pero que son sin embargo utiles en el tratamiento de trastornos caracterizados por la migration o la proliferation no deseadas de celulas endoteliales. Los ejemplos de dichos agentes incluyen agentes anticancerosos, agentes antineovascularizacion (por ejemplo, anticuerpo monoclonal anti-VEGF), agentes antidiabetes, agentes dirigidos contra celulas falciformes, agentes cicatrizantes de heridas, y agentes dirigidos contra la proliferacion de celulas endoteliales.

se entendera que los sujetos pueden estar, o no, en terapia opioidea concurrente, dependiendo del trastorno concreto que tenga el sujeto, la gravedad del trastorno, y la necesidad que tenga el sujeto del tratamiento del dolor. En algunas realizaciones, el sujeto esta tomando terapia opioidea concurrente. En algunas realizaciones, el sujeto no esta tomando terapia opioidea concurrente. En algunas realizaciones, el sujeto esta tomando terapia opioidea cronica concurrente. En algunas realizaciones, el sujeto no esta tomando terapia opioidea cronica concurrente.

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones, el antagonista opioideo es un antagonista opioideo periferico que es metilnaltrexona.

La presente memoria descriptiva describe metodos para atenuar la migracion y/o la proliferacion de las celulas endoteliales de un tumor o cancer, que comprende poner en contacto las celulas con un agente antimigratorio o una cantidad antiproliferativa del antagonista opioideo. Se describen ademas metodos para atenuar la angiogenesis asociada con el cancer. Estos describen el tratamiento de un paciente humano con cancer, por ejemplo, mediante un metodo para atenuar la angiogenesis en un tejido canceroso de un paciente, que comprende administrar al tejido canceroso del paciente una cantidad eficaz del antagonista opioideo.

En una realization, los antagonistas opioideo se usan perioperativamente. Por "perioperativamente", se entiende antes (por ejemplo, en preparation para), durante, y/o inmediatamente despues de una cirugia o un procedimiento quirurgico o endoscopico, por ejemplo, colonoscopia, gastrolaparoscopia, y especialmente una cirugia o procedimiento quirurgico que implica la elimination de un tumor. Los antagonistas opioideos actuan para atenuar le recidiva y/o la metastasis del tumor, que surgen especialmente de la angiogenesis asociada con el anterior.

Se anticipa que el antagonista opioideo se administrara preferente en un regimen de dosificacion continuo, por ejemplo, un regimen que mantiene un minimo, e incluso de forma mas preferente un nivel en sangre relativamente constante. Se contempla ademas que las composiciones usadas en la presente invencion pueden tener un valor profilactico en determinados trastornos asociados con la angiogenesis anomala. Por tanto, la memoria descriptiva proporciona un metodo para prevenir la aparicion o reaparicion de un trastorno en un mamifero, caracterizandose el trastorno por la migracion o la proliferacion de celulas endoteliales no deseadas, incluida la angiogenesis anomala, que comprende administrar a un mamifero que necesita de tal tratamiento, una cantidad eficaz del antagonista opioideo, en el que el tumor es un cancer, anemia de celulas falciformes, enfermedades neovasculares oculares, diabetes, retinopatia ocular, u otra proliferacion endotelial no deseada en rinones, ojos o pulmones. Se entendera por tanto que, como se usa en el presente documento, el tratamiento de un sujeto con un trastorno caracterizado por la proliferacion o migracion de celulas endoteliales no deseadas incluye el tratamiento de un sujeto con un trastorno activo para inhibir o cural el trastorno y tratar a un sujeto para impedir que se reproduzca el trastorno. Por ejemplo, el sujeto puede haber tenido un tumor solido eliminado, y el sujeto puede recibir el tratamiento para impedir que se reproduzca el tumor.

En la atenuacion de la proliferacion celular, se proporciona un metodo para el tratamiento de la proliferacion anomala de celulas de una celula que expresa el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) en un mamifero que comprende administrar al mamifero una cantidad terapeuticamente eficaz de un antagonista opioideo. Se describe tambien en el presente documento un metodo para inhibir o reducir la angiogenesis, particularmente, la angiogenesis inducida por opioideos, por ejemplo, de celulas tumorales, administrando o proporcionando un antagonista opioideo, particularmente un antagonista opioideo periferico, a las celulas que experimentan la angiogenesis. Se describen tambien en el presente documento metodos para tratar la angiogenesis inducida por opioideos en pacientes que reciben un tratamiento opioideo o en pacientes donde la angiogenesis es inducida por opioideo endogenos. el primer grupo es normalmente el de pacientes con cancer con un tratamiento del dolor basado en opioideos. Los metodos comprenden administrar un antagonista opioideo a un paciente en una cantidad antiangiogenica, por ejemplo, una cantidad suficiente para inhibir o reducir la angiogenesis inducida por opioideos. En aquellos pacientes que reciben tratamiento opioideo, el antagonista opioideo y el antagonista opioideo periferico pueden administrarse simultaneamente. Los antagonistas opioideos perifericos pueden, por lo tanto, utilizarse para inhibir o reducir los efectos angiogenicos de los opioideos sobre celulas tumorales, y atenuar el crecimiento de un tumor.

Los antagonistas opioideos incluyen generalmente compuestos de aminas heterociclicas que pertenecen a diversas clases diferentes de compuestos. Por ejemplo, una clase es la de los derivados terciarios adecuados de morfinano, y en particular, los derivados terciarios de noroximorfona. En una realizacion, el derivado terciario de noroximorfona es, por ejemplo, naloxona o naltrexona.

Los antagonistas opioideos perifericos son tambien en general compuestos de aminas heterodclicas que pertenecen a diversas clases diferentes de compuestos. Por ejemplo, una clase es la de los derivados cuaternarios adecuados de morfinano, y en particular, derivados cuaternarios de noroximorfona. La invencion utiliza el derivado cuaternario de noroximorfona N-metilnaltrexona (o simplemente metilnaltrexona).

En realizaciones de la invencion, el antagonista opioideo es un antagonista opioideo mu. La invencion abarca tambien la administracion de mas de un antagonista opioideo, incluyendo las combinaciones de los antagonistas mu y las combinaciones de los antagonistas mu y kappa, por ejemplo, una combinacion de metilnaltrexona y alvimopan, o una combinacion de naltrexona y metilnaltrexona.

Se describen tambien en el presente documento metodos para tratar la angiogenesis inducida por opioideos en pacientes que reciben un opioideo, en el que un antagonista opioideo periferico y al menos un agente terapeutico diferente que no es un opioideo o antagonista opioideo se administran simultaneamente al paciente. Los agentes terapeuticos adecuados incluyen agentes anticancerosos (incluyendo agentes quimioterapeuticos y agentes antineoplasicos), asi como otros agentes antiangiogenicos.

Se describe tambien en el presente documento un metodo para reducir el riesgo de recidiva de un cancer o tumor tras la intervencion medica (tal como la intervencion para incluir, aunque no de forma limitativa, la cirugia, por ejemplo, cirugia pulmonar, procedimientos quirurgicos y endoscopicos, por ejemplo, colonoscopia, gastrolaparoscopia, quimioterapia, etc.), que comprenden administrar simultanea a un paciente con cancer un antagonista opioideo. Por tanto, se contempla en el presente documento, por ejemplo, un metodo para minimizar la recidiva postquirurgica de, por ejemplo, el cancer de mama en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de un antagonista opioideo. El antagonista opioideo periferico de acuerdo con la presente invencion, es decir, MNTX, puede inhibir tambien VEGF, factor de crecimiento derivado plaquetas (PDGF), o la proliferacion celular inducida o estimulada por esfingosina 1-fosfato (S1P) en las celulas endoteliales.

Breve descripcion de los dibujos

La invencion puede entenderse y apreciarse mejor por referencia a la descripcion detallada de las realizaciones especificas presentadas en el presente documento junto con los dibujos acompanantes de los cuales:

La FIG. 1 es un grafico de barras de la inhibicion dependiente de la dosis de la migracion de celulas endoteliales microvasculares humanas (HMVEC), que representa los resultados del Ejemplo 1.

La FIG. 2 es un grafico de barras de la inhibicion dependiente de la dosis de la migracion de celulas endoteliales microvasculares humanas, que representa los resultados del Ejemplo 2.

La FIG. 3 es un grafico de barras de la inhibicion dependiente de la dosis de la migracion de HMVEC utilizando MNTX y MNTX DAMGO.

La FIG. 4 es un grafico de barras de la inhibicion dependiente de la dosis de la migracion de HMVEC utilizando naloxona y naloxona DAMGO.

La FIG. 5 es un grafico de barras del efecto dependiente de la dosis de M3G y M6G sobre la migracion de HMVEC. La FIG. 6 es una fotomicrografia que muestra la migracion de celulas endoteliales inducida por morfina en presencia y ausencia de MNTX. Panel A = Control, Panel B = MS (sulfato de morfina), Panel C = MNTX, y Panel D = MS MNTX. Se muestran las flechas en el Panel A para resaltar algunas celulas que han migrado satisfactoriamente a traves de la membrana.

La FIG. 7 es un grafico del porcentaje de proliferacion (A) y migracion (B) de celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana en presencia de VEGF, morfina y DAMGO con o sin MNTX.

La FIG. 8 es un panel de inmunotransferencias que indica la fosforilacion (activacion) de la tirosina (A) del anticuerpo anti-VEGF R 1 (Flt-1) y 2 (Flk-1) usando el VEGF R 1 o 2 inmunoprecipitados y anti-fosfotirosina en celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana en presencia de Ve g F, Morfina y DAMGO con o sin MNTX y un grafico de barras (B) del porcentaje de proliferacion y migracion de las celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana en presencia de VEGF, morfina y DAMGO con o sin el inhibidor del VEGF R. La FIG. 9 es un panel de inmunotransferencias que indica la activacion de RhoA utilizando anticuerpo anti-RhoA en celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana en presencia de VEGF, morfina y DAMGO con o sin MNTX (A) o el inhibidor del VEGF R. (B).

La FIG. 10 es un panel de inmunotransferencias (A) de anticuerpo anti-RhoA de celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana en presencia de ARNip de secuencia aleatoria (que no se dirige a ninguna secuencia de ARNm humano conocida) o ARNip de RhoA y un grafico de barras del porcentaje de proliferacion (B) y migracion (C) de las celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana en presencia de VEGF, morfina y DAMGO con o sin ARNip de secuencia aleatoria (que no se dirige a ninguna secuencia de ARNm humano conocida).

La FIG. 11 es un diagrama esquematico que resume el mecanismo de los efectos de MNTX sobre la angiogenesis. La FIG. 12 es un grafico de barras del porcentaje de proliferacion por encima del valor del control de las celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar en presencia de S1P, VEGF, PDGF, morfina y DAMGO con o sin MNTX.

La FIG. 13 es un grafico de barras del porcentaje de migracion por encima del valor del control de las celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar en presencia de S1P, VEGF, PDGF, morfina y DAMGO con o sin MNTX.

La FIG. 14 es un grafico de barras del porcentaje de proliferacion por encima del valor del control de las celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar en presencia de S1P, VEGF, PDGF, morfina y DAMGO con el ARNip de secuencia aleatoria (del control) o con el ARNip del receptor opioideo mu.

La FIG. 15 es un grafico de barras del porcentaje de migracion por encima del valor del control de las celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar en presencia de S1P, VEGF, PDGF, morfina y DAMGO con el ARNip de secuencia aleatoria (del control) o con el ARNip del receptor opioideo mu.

La FIG. 16 es un panel de inmunotransferencias que indican la fosforilacion (activacion) del receptor opioideo mu utilizando el receptor opioideo mu inmunoprecipitado y (A, C) antifosfo-serina, (B, D) anti-fosfotreonina de celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana en presencia de morfina, DAMGO, S1P, VEGF, PDGF con MNTX (C, D) o sin MNTX (A, B); (E) es una inmunotransferencia del receptor opioideo dirigido contra mu.

La FIG. 17 es una inmunotransferencia dirigida contra RhoA de (A,B) RhoA activada y (C) RhoA total de celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana en presencia de morfina, DAMGO, S1P, VEGF, PDGF con MNTX (B) y sin MNTX (A).

La FIG. 18 es un panel de inmunotransferencias del panel superior: (A, B) anti-fosfotirosina, (C) anticuerpo anti-VEGF R y en el panel inferior: (A, B) anti-fosfotirosina, (C) anticuerpo anti-PDGF R, de celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana en presencia de morfina, DAMGO, VEGF (panel superior) o PDGF (panel inferior) con MNTX (B en cada panel) o sin MNTX (A en cada panel).

La FIG. 19 es un panel de inmunotransferencias que indican la fosforilacion (activacion de la tirosina del receptor S1P3 utilizando el receptor S1 P3 inmunoprecipitado y (A, B) anti-fosfotirosina, (C) anticuerpo anti-S1 P3 R, de celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana en presencia de morfina, DAMGO, y S1P con MNTX (B) o sin MNTX (A).

La FIG. 20 es un grafico de barras del porcentaje de proliferacion por encima del valor del control de las celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar en presencia de S1P, VEGF, PDGF, morfina y DAMGO con ARNip de secuencia aleatoria (del control o con ARNip de RhoA.

La FIG. 21 es un grafico de barras del porcentaje de migracion por encima del valor del control de las celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar en presencia de S1P, VEGF, PDGF, morfina y DAMGO con ARNip de secuencia aleatoria (del control o con ARNip de RhoA.

La FIG. 22 es un diagrama esquematico que resume el mecanismo de los efectos de MNTX sobre la sobre la activacion de RhoA y la angiogenesis.

Descripcion detallada de la invencion

La divulgacion describe metodos para atenuar la migracion y/o la proliferacion anomala o indeseable de las celulas endoteliales. Por tanto, la divulgacion proporciona metodos para atenuar la angiogenesis en un tejido o un organo de un sujeto mediante el uso de antagonistas opioideos, y una novedosa estrategia para tratar las enfermedades relacionadas con la angiogenesis y otras enfermedades hiperproliferativas en mamiferos. Por ejemplo, como se ha descrito anteriormente, los tumores solidos se basan en la generation de nuevos vasos sanguineos para que los nutrientes alcancen las celulas en el tumor. Los factores de crecimiento requeridos para la angiogenesis se pueden producir por las celulas tumorales o alternativamente, factores exogenos, tales como los opioideos pueden estimular el crecimiento de nuevos vasos sanguineos. La presente invencion proporciona una novedosa estrategia terapeutica mediante el uso de antagonistas opioideos para el tratamiento de dichos tumores, en el que la generacion de nuevos vasos sanguineos en el tumor, mas bien que las propias celulas tumorales, es la diana. Este tratamiento no es probable que conduzca al desarrollo de celulas tumorales resistentes.

Se describen en el presente documento antagonistas opioideos que inhiben la proliferacion y la migracion inducida por opioideos, endogenos o exogenos, y factores de crecimiento, tales como VEGF, PDGF, S1P, etc. Los antagonistas opioideos perifericos, en particular, mostraron una sustancial eficacia en inhibir los opioideos y el factor de crecimiento que indujeron la proliferacion y la migracion de las celulas endoteliales. El antagonista opioideo periferico metilnaltrexona (MNTX) inhibio los opioideos y el factor de crecimiento que indujeron la proliferacion y la migracion de una manera dependiente de la concentration. Ademas, naloxona inhibio tambien la migracion endotelial inducida por opioideos. Debe notarse, sin embargo, que la inhibition de DAMGO por la naloxona indujo que la migracion de celulas endoteliales se produjera a una concentracion micromolar de naloxona relativamente alta. Ademas, se ha descubierto ahora que los antagonistas opioideos, y el antagonista opioideo periferico MNTX en particular, inhibe la proliferacion y migracion de celulas endoteliales (EC) inducida por el agonista mediante la inhibicion del receptor de la fosforilacion y/o las transactivacion y la posterior inhibicion de la activacion de RhoA. Los agonistas pueden ser opioideos, exogenos y/o endogenos, factores angiogenicos (VEGF) y otros factores estimuladores de la proliferacion y/o la migracion (PDGF, S1P, el receptor S1P3, RhoA, etc.). Estos resultados sugieren que la inhibicion de la angiogenesis por antagonistas opioideos puede ser una intervention terapeutica util para, entre otros trastornos, el cancer.

Antes se explican en detalle algunas realizaciones de la invencion, debe entenderse que la invencion no se limita en su aplicacion a los detalles de la estructura y funcion de la invencion que se muestran en la siguiente descripcion o que se ilustran en las figuras adjuntas de los dibujos. La invencion es capaz de otras realizaciones o de practicarse o de llevarse a cabo en diversas maneras. Ademas, debe entenderse que la fraseologia y terminologia empleadas en el presente documento son a fines de descripcion y no deben considerarse como limitantes. El uso de terminos tales como "que incluye", "que comprende", o "que tiene" y las variaciones de los mismos en el presente documento pretende incluir los elementos enumerados a continuacion y los equivalentes de los mismos asi como los elementos adicionales.

A menos que se indique otra cosa, los terminos tecnicos se usan de acuerdo con su uso convencional. Como se usa en el presente documento, sin embargo, las siguientes definiciones pueden ser utiles para ayudar al medico especializado a comprender la invencion:

"Sujeto" se refiere a seres humanos, perros, gatos y caballos.

"Uso opioideo cronico" se refiere a y se caracteriza por la necesidad de niveles sustancialmente mayores de opioideo para producir el beneficio terapeutico como resultado del anterior uso del opioideo, como es bien sabido en la tecnica. El uso opioideo cronico como se usa en el presente documento incluye el tratamiento diario con opioideos durante una semana o mas o el uso intermitente de opioideos durante al menos dos semanas.

"Alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifatico que esta saturado y que puede ser lineal, ramificado o ciclico teniendo de 1 a aproximadamente 10 atomos de carbono en la cadena, y todas las combinaciones y subcombinaciones de las cadenas del mismo. Los grupos alquilo ilustrativos incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, y decilo.

"Alquilo inferior" se refiere a un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 atomos de carbono.

Alquenilo se refiere a un grupo hidrocarburo alifatico que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono y que tiene de 2 a aproximadamente 10 atomos de carbono en la cadena, y todas las combinaciones y subcombinaciones de las cadenas del mismo. Los grupos alquenilo ilustrativos incluyen grupos vinilo, propenilo, butenilo, pentenilo, hexenilo, heptenilo, octenilo, nonenilo y decenilo.

"Alquinilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifatico que contiene al menos un triple enlace carbono-carbono y que tiene de 2 a aproximadamente 10 atomos de carbono en la cadena, y las combinaciones y subcombinaciones de las cadenas del mismo. Los grupos alquinilo ilustrativos incluyen grupos etinilo, propenilo, butenilo, pentenilo, hexenilo, heptenilo, octenilo, nonenilo y decenilo.

"Alquileno" se refiere a un grupo hidrocarburo alifatico bivalente que tiene de 1 a aproximadamente 6 atomos de carbono, y todas las combinaciones y subcombinaciones de las cadenas del mismo. El grupo alquileno puede ser lineal, ramificado o ciclico. Puede haber insertado a lo largo del grupo alquileno uno o mas atomos de oxigeno, azufre o nitrogeno opcionalmente sustituidos, en el que el sustituyente de nitrogeno es alquilo como se ha descrito anteriormente.

“Alquenileno” se refiere a un grupo alquileno que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono. Los grupos alquenileno ilustrativos incluyen etenileno (-CH=CH-) y propenileno (CH=CHCH2--).

"Cicloalquilo" se refiere a cualquier anillo monociclico o biciclico estable que tiene de aproximadamente 3 a aproximadamente 10 carbonos, y todas las combinaciones y subcombinaciones de los anillos del mismo. El grupo cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes del grupo cicloalquilo. Los grupos cicloalquilo ilustrativos incluyen grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo. "Alquilo sustituido con cicloalquilo" se refiere a un grupo alquilo lineal, preferentemente un grupo alquilo inferior, sustituido en un carbono terminal con un grupo cicloalquilo, preferentemente un grupo cicloalquilo C3-C8. Los grupos alquilo sustituidos con cicloalquilo incluyen ciclohexilmetilo, ciclohexiletilo, ciclopentiletilo, ciclopentilpropilo, ciclopropilmetilo y similares.

"Cicloalquenilo" se refiere a un grupo cicloalifatico olefinicamente insaturado que tiene de aproximadamente 4 a aproximadamente 10 carbonos, y todas las combinaciones y subcombinaciones de los anillos del mismo.

"Alcoxi" se refiere a un grupo alquil-O- donde el grupo alquilo es como se ha descrito anteriormente. Los grupos alcoxi ilustrativos incluyen, por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y heptoxi.

"Alcoxi-alquilo" se refiere a un grupo alquil-O-alquilo donde el alquilo es como se ha descrito anteriormente.

"Acilo" significa un grupo alquil-CO- en el que alquilo es como se ha descrito anteriormente. Los grupos acilo ilustrativos incluyen acetilo, propanoilo, 2-metilpropanoNo, butanoilo y palmitoilo.

"Arilo" se refiere a un radical carbociclico aromatico que contiene de aproximadamente 6 a aproximadamente 10 carbonos, y todas las combinaciones y subcombinaciones de los anillos del mismo. El grupo arilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o dos o mas sustituyentes del grupo arilo. Los grupos arilo ilustrativos incluyen fenilo y naftilo.

"Alquilo sustituido con arilo" se refiere a un grupo alquilo lineal, preferentemente un grupo alquilo inferior, sustituido en un carbono terminal con un grupo arilo opcionalmente sustituido, preferentemente un anillo de fenilo opcionalmente sustituido. Los grupos alquilo sustituidos con arilo ilustrativos incluyen, por ejemplo, fenilmetilo, feniletilo y 3-(4-metillfenil)propilo.

"Heterodclico" se refiere a un radical carbodclico de un sistema de anillo monodclico o multidclico que contiene de aproximadamente 4 a aproximadamente 10 miembros, y todas las combinaciones y subcombinaciones de los anillos del mismo, en el que uno o mas de los miembros del anillo es un elemento diferente del carbono, por ejemplo, nitrogeno, oxigeno o azufre. El grupo heterodclico puede ser aromatico o no aromatico. Los grupos heterodclico ilustrativos incluyen, por ejemplo, grupos pirrol y piperidina.

"Halo" se refiere a fluor, cloro, bromo o yodo.

"Periferico", en referencia a los antagonistas opioideos, designa antagonistas opioideos que actuan principalmente sobre los sistemas fisiologicos y los componentes externos al sistema nervioso central, por ejemplo, no cruzan facilmente la barrera hematoencefalica en una cantidad eficaz para inhibir los efectos centrales de los opioideos. En otras palabras, Los antagonistas opioideos perifericos no inhiben eficazmente los efectos analgesicos de los opioideos cuando se administran perifericamente, por ejemplo, no reducen el efecto analgesico de los opioideos. Por ejemplo, los compuestos antagonistas opioideos perifericos empleados en los metodos de la presente invencion presentan altos niveles de actividad con respecto al tejido gastrointestinal, presentando a la vez actividad reducida o practicamente ninguna actividad en el sistema nervioso central (SNC). Los compuestos antagonistas opioideos perifericos empleados en los presentes metodos presentan de forma adecuada menos de aproximadamente 5-15 % de su actividad farmacologica en el SNC, siendo la mas adecuada aproximadamente un 0 % (por ejemplo, sin actividad en el SNC). La accion no central caracteristica de un antagonista opioideo periferico se relaciona a menudo con la carga, la polaridad y/o el tamano de la molecula. Por ejemplo, los antagonistas opioideos de aminas cuaternarias que actuan perifericamente estan cargados positivamente mientras que los antagonistas opioideos de aminas terciarias que actuan centralmente son moleculas neutras. Los antagonistas opioideos perifericos utiles en la presente invencion son normalmente los antagonistas opioideos mu y/o kappa.

Como se usa en el presente documento, se entiende que "antiangiogenesis" o "antiangiogenico" se refiere a la capacidad de una molecula/compuesto de atenuar, por ejemplo, inhibir, reducir o modular, la proliferacion de nuevos vasos sanguineos, en general, y por ejemplo, para reducir o inhibir la migracion y la proliferacion de celulas endoteliales microvasculares humanas en cultivo en presencia de determinados factores de crecimiento. Como se ha descrito anteriormente, la formacion de nuevos vasos sanguineos por celulas endoteliales implica la migracion, proliferacion y diferenciacion de las celulas.

En la siguiente descripcion de la invencion, se llevaron a cabo las etapas del proceso a temperatura ambiente y presion atmosferica salvo que se especifique de otra forma. Se entiende tambien espedficamente que cualquier intervalo numerico enumerado en el presente documento incluye todos los valores desde el valor inferior al valor superior, por ejemplo, todas las posibles combinaciones de valores numericos entre el valor mas bajo y el valor mas alto enumerados son a considerar para declararse expresamente en esta solicitud. Por ejemplo, si un intervalo de concentracion o intervalo de efecto beneficioso se indica como de 1 % a 50 %, se pretende que los valores tales como de 2 % a 40 %, del 10 % al 30 %, o del 1 % al 3 %, etc., esten enumerados expresamente en la presente memoria descriptiva. Estos son solo ejemplos de lo que se pretende espedficamente.

Se describen en el presente documento metodos para atenuar la migracion y/o la proliferacion celular anomalas o indeseables, particularmente la migracion y/o la proliferacion de celulas endoteliales, y la angiogenesis en tejidos o en un organo de un sujeto. Los metodos comprenden proporcionar o administrar uno o mas antagonistas opioideos en una cantidad eficaz a celulas endoteliales del tejido u organo de un paciente para inhibir la migracion proliferacion de celulas endoteliales, y la angiogenesis. La angiogenesis puede, en parte, ser el resultado de recibir un tratamiento opioideo, particularmente para el tratamiento del dolor en pacientes con cancer, o tener altos niveles de opioideos endogenos.

Se observo que la morfina y el agonista mu de la encefalina DAMGO ([D-Ala2, N-McPhe4, Gly5-ol] encefalina), produce cada uno un aumento dependiente de la dosis en la migracion de celulas endoteliales similar a la del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) como se midio mediante, por ejemplo, un ensayo de quimiotaxia (como se detalla en los ejemplos siguientes) u otros ensayos similares utilizados para identificar factores en la angiogenesis tumoral y los farmacos que afectan a esta. A concentraciones clrnicamente relevantes de morfina, la magnitud del efecto es aproximadamente del 70 % con respecto al que se consigue mediante VEGF. Esta migracion de celulas endoteliales basada en morfina se atenua por el antagonista opioideo mu metilnaltrexona (MNTX) de una manera dependiente de la dosis. Por ejemplo, la migracion de celulas endoteliales inducida por morfina, en concentraciones tan bajas como 10-7M, esta significativamente bloqueada por 10-7M MNTX (FIG 2). Esta atenuacion sugiere fuertemente que la migracion de celulas endoteliales esta mediada por la accion de la morfina sobre el receptor opioideo mu (MOR). Tal como se describe en los ejemplos siguientes, el efecto mediante el MOR mas bien que otros receptores opioideos se confirmo mediante experimentos que muestran que el agonista mu de la encefalina sintetica DAMGO muy selectivo induce tambien la migracion. El efecto migratorio inducido por DAMGO esta tambien bloqueado por MNTX (FIG. 3).

En una revision comprehensiva (Neumann et al. Pain 1982;13:247-52), la analgesia en los pacientes de cancer se asocio con un intervalo de concentraciones en estado estacionario de morfina y plasma que varia de 6 a 364 ng/ml. Se observo un efecto de la morfina que produce la migracion de celulas endoteliales a l0o ng/ml bien comprendido en el intervalo de la dosis clinica. Los inventores creen por tanto en el presente documento que una dosis de MNTX que mantendra los niveles en plasma de MNTX a niveles minimos de MNTX en plasma entre aproximadamente 25 y 150 ng/ml seria adecuado. Dichas dosis son alcanzables y estan bien toleradas (Yuan et al., J Clin Pharmacol 2005;45:538-46).

Alvimopan, otro antagonista opioideo periferico selectivo proporcionado oralmente, esta en la ultima etapa de desarrollo para la profilaxis del ileo postquirurgico y el tratamiento con el opioideo indujo el estrenimiento (Moss et al., Pain relief without side effects: peripheral opioid antagonists. En Schwartz, A.J., editor. 33° ASA Refresher Course in Anesthesiology. Filadelfia: Lippincott Williams & Wilkins (en prensa).) There is some transpassage of alvimopan across the membrane (J. Foss, et al., Clin. Pharm. & Ther. 2005, PII-90, pag. 74) y este puede, por lo tanto, poseer la capacidad de invertir algunos de los efectos sistemicos de los opioideos sin afectar la analgesia incluso cuando se administran oralmente.

Sin desear quedar ligando por ninguna teoria concreta, puede ser que el mecanismo del efecto del opioideo mu sobre la migracion de celulas endoteliales se produzca al nivel de la membrana ya que MNTX, a diferencia de naloxona, es una molecula cargada a pH fisiologico. La morfina actua mediante los receptores acoplados a la proteina G, mientras que VEGF actua mediante el receptor de las tirosina quinasas. Mientras que las acciones de los agonistas mu y VEGF pueden ser independientes, existe una evidencia creciente de la transactivacion del receptor como un mecanismo. Una investigation previa demostro que la toxina pertussis dependiente de los GPRC transactiva el receptor-2/F1 K1 de VEGF (Zeng, H. et al., J. Biol. Chem. 2003;278:20738-45). De esta manera, la morfina podria transactivar F11c-1 y promover un entorno donde podrian producirse la proliferation de celulas endoteliales y el crecimiento del tumor. Un estudio reciente de los ratones MOR inactivados geneticamente infectados con celulas T241 de fibrosarcoma demostro diferencias significativas en las incidencias del crecimiento del tumor y un aumento de 10 veces en la expresion de F11 c-1 en ratones tratados con morfina frente a los controles, frente al nulo aumento en los ratones KO tratados con morfina (K. Gupta, comunicacion personal). Esto proporciona una evidencia adicional de que la morfina estimula la proliferacion de celulas endoteliales y promueve el crecimiento tumoral transactivando probablemente la fosforilacion de FLK1. Por tanto, La presente invention proporciona estrategias clinicas potenciales utilizando MNTX junto con las terapias actuales que se dirigen a VEGF. Aunque es posible un efecto directo por la transactivacion del receptor, un factor adicional potencial implicado en la proliferacion de tumores puede ser tambien el papel de las quimioquinas como integradores del dolor y la inflamacion. Una reciente revision sobre este sujeto (White et al., Nature Rev. Drug Discovery 2005;4:834-44) sugiere tambien un posible papel para los leucocitos en la activation de los receptores opioideos.

Ademas, se observo que la morfina, DAMGO y VEGF estimulan la activacion de RhoA que se inhibio por antagonistas opioideos, tales como MNTX. RhoA es una importante molecula de senalizacion implicada en la angiogenesis (Aepfelbacher et al., 1997; Cascone et al., 2003; Hoang et al., 2004; Liu y Sanger, 2004.) La transactivacion del receptor de VEGF es importante para la activacion de RhoA inducida por un opiaceo. El silenciamiento de la expresion de RhoA bloqueo al opioideo y la proliferacion y migracion de EC inducida por VEGF, demostrando un papel para la activacion de RhoA en la actividad angiogenica de EC inducida por agonistas. La atenuacion mediada por MNTX de la activacion de RhoA puede ser importante para el papel inhibidor de MNTX sobre la angiogenesis inducida por el opioideo y VEGF.

Debido a que la morfina y otros opioideos a dosis clinicas potencian la migracion de celulas endoteliales, La presente invencion puede ser de valor terapeutico en el tratamiento del antagonista opioideo para pacientes en dosis significativas y sostenidas de opioideos que tienen tumores que soportan el proceso angiogenico. Ademas, aunque las observaciones clinicas del inventor se han centrado sobre la morfina, que se administra de forma exogena, los opioideos endogenos, que se liberan por estres o dolor, pueden tambien jugar un papel en la migracion de celulas endoteliales. Basandose en los experimentos de migracion de celulas endoteliales detallados a continuation en los ejemplo, MNTX y los antagonistas opioideos generalmente son generalmente de valor terapeutico como una terapia antiangiogenica incluso ausentes de la administration de opioideos exogenos (como se detalla en el presente documento). Se considera que los metodos descritos en el presente documento inhibiran o reduciran el crecimiento en y hacia un tumor. Inhibir el crecimiento de los vasos sanguineos en los tumores evita que los nutrientes y el oxigeno que se suministran al tumor soporten el crecimiento mas alla de un determinado tamano. Minimizar el numero de vasos sanguineos u otros tumores disminuye tambien la probabilidad de que el tumor metastatice.

La presente invencion puede ser de valor terapeutico en el tratamiento con antagonistas opioideos para pacientes que tienen tumores que se basan en el proceso angiogenico. Los tumores que se basan en procesos angiogenicos son tumores solidos, leucemias y mielomas. Los tumores solidos incluyen, aunque no se limitan a carcinoma de la corteza suprarrenal, tumores de la vejiga: carcinoma escamocelular, carcinomas uroteliales; tumores del hueso: adamantinoma, quistes oseos por aneurisma, condroblastoma, condroma, fibroma condromixoide, condrosarcoma, displasia fibrosa del hueso, tumor de celulas gigantes, osteocondroma, osteosarcoma; tumores de mama: carcinoma ductal secretor, cordoma; tumores de colon: adenocarcinoma colorrectal; tumores de los ojos: melanoma de la uvea posterior, fibrogenesis imperfecta de los huesos, carcinoma de celulas escamosas de cabeza y cuello; tumor de rinon: carcinoma de celulas renales cromofobo, carcinoma de celulas renales de celulas claras, nefroblastoma (tumor de Wilms), rinon: carcinoma de celulas renales papilares, tumor ASPSCR1-TFE3 renal primario, carcinoma de celulas renales; tumores de higado: hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular; tumores de pulmon: carcinoma no microcitico, cancer microcitico; melanoma maligno de partes blandas; tumores del sistema nervioso: meduloblastoma, meningioma, neuroblastoma, tumores astrociticos, ependimomas, tumores de la vaina del nervio periferico, feocromocitoma; tumores de ovario: tumores epiteliales, tumores de celulas germinales, tumores del estroma del cordon sexual, pericitoma; adenomas de la pituitaria; tumor rabdoide; tumores de la piel: histiocitomas fibrosos benignos cutaneos; tumores del musculo liso: leiomiomatosis intravenosa; tumores de tejidos blandos: liposarcoma, liposarcoma mixoide, sarcoma fibromixoide de grado bajo, leiomiosarcoma, sarcoma alveolar de las partes blandas, histiocitoma fibroso angiomatoide (AFH), sarcoma de celulas claras, tumor desmoplasico de celulas redondas pequenas, elastofibroma, tumores de Ewing, condrosarcoma mixoide extraesqueletico, tumor miofibroblastico inflamatorio, lipoblastoma, lipoma / tumores lipomatosos benignos, liposarcoma / tumores lipomatosos malignos, mioepitelioma maligno, rabdomiosarcoma, sarcoma sinovial, cancer escamocelular; tumores de los testiculos: tumores de celulas germinales, seminoma espermatocitico; tumores del tiroides: carcinoma anaplasico (indiferenciado), tumores oncociticos, carcinoma papilar; tumores del utero: carcinoma del cuello uterino, carcinoma de endometrio, leiomioma etc.

En una realizacion de la invencion los tumores son cancer de prostata, tumores gastrointestinales tales como cancer de colon o pancreas y los compuestos de la invencion se administran simultaneamente con los otros agentes anticancerosos que se describen en el presente documento.

Los antagonistas opioideos de acuerdo con la presente invencion son antagonistas opioideos que actuan perifericamente. Especialmente adecuado puede ser un antagonista opioideo mu, especialmente un antagonista opioideo periferico mu. Los antagonistas opioideo forman una clase de compuesto que puede variar en estructura manteniendo a la vez la propiedad restrictiva periferica. Estos compuestos incluyen morfinanos terciarios y cuaternarios, en particular, derivados de noroximorfona, piperidinas N-sustituidas, y en particular, piperidina-N-alquilcarboxilatos, y 20 benzomorfanos terciarios y cuaternarios. Los antagonistas perifericamente restringidos, aunque variados en la estructura, estan cargados normalmente, son polares y/o de alto peso molecular, cada uno de los cuales les impide cruzar la barrera hematoencefalica.

Los ejemplos de antagonistas opioideos, que cruzan la barrera hematoencefalica y son activos centralmente (y perifericamente), incluyen, por ejemplo, naloxona, naltrexona (cada uno de los cuales se encuentra comercialmente disponible de Baxter Pharmaceutical Products, Inc.) y nalmefeno (disponible, por ejemplo, de DuPont Pharma). Estos pueden tener valor en la atenuacion de la angiogenesis en el sistema nervioso central o en pacientes que no estan siendo tratados con un tratamiento para el dolor u otro tratamiento opioideo.

Un antagonista opioideo util para la presente invencion es un compuesto que es un derivado de morfinano cuaternario, y en particular, una noroximorfona de formula (I):

en la que R es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilo sustituido con cicloalquilo o alquilo sustituido con arilo, y X' es el anion, especialmente un anion cloruro, bromuro, yoduro o metilsulfato. Se pueden preparar derivados de noroximorfona de formula (I), por ejemplo, de acuerdo con otro enfoque descrito en la patente de EE.UU. n.° 4.176.186; vease tambien, las patentes de EE.UU. numeros 4.719.215; 4.861.781; 5.102.887; 5.972.954 y 6.274.591, las solicitudes de patente de EE.UU. numeros 2002/0028825 y 2003/0022909; y las publicaciones p Ct numeros WO 99/22737 y WO 98/25613.

El compuesto de formula (I) utilizado en la presente invencion es N-metilnaltrexona (o simplemente metilnaltrexona), en la que R es ciclopropilmetilo como se representa en la formula (II):

en la que X- es como se ha descrito anteriormente. Metilnaltrexona es un derivado cuaternario del antagonista opioideo naltrexona. Metilnaltrexona existe como una sal, y "metilnaltrexona" o "MNTX", como se usa en el presente documento, abarca por tanto las sales. "Metilnaltrexona" o "MNTX" incluye especificamente, aunque no de forma limitativa, las sales de bromuro, sales de cloruro, sales de yoduro, sales de carbonato, y sales de sulfato de metilnaltrexona. Los nombres utilizados para la sal de bromuro de MNTX en la bibliografia incluyen: bromuro de metilnaltrexona; bromuro de N-metil naltrexona; metobromuro de naltrexona; metilbromuro de naltrexona; SC-37359, MRZ-2663-BR, y N-ciclopropilmetilnoroxi-morfina-metobromuro. Metilnaltrexona esta comercialmente disponible de, por ejemplo, Mallinckrodt Pharmaceuticals, St. Louis, Mo. Metilnaltrexona se proporciona como un polvo cristalino de color blanco, soluble libremente en agua, normalmente como una sal de bromuro. El compuesto que se proporciona tiene una pureza del 99,4 % mediante HPLC en fase invertida y contiene menos de 0,011 % de naltrexona sin cuaternizar por el mismo metodo. Se puede preparar metilnaltrexona como una solucion esteril a una concentracion de, por ejemplo, aproximadamente 5 mg/ml.

Otros antagonistas opioideos perifericos adecuados pueden incluir piperidinas N-sustituidas, y en particular, piperidina-N-alquilcarboxilatos como se representa por la formula (III):

en donde

R1 es hidrogeno o alquilo;

R2 es hidrogeno, alquilo, o alquenilo;

R3 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilo sustituido con cicloalquilo, alquilo sustituido con cicloalquenilo o alquilo sustituido con arilo;

R4 es hidrogeno, alquilo, o alquenilo;

A es OR5 o NR6R7; en donde

R5 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilo sustituido con cicloalquilo, alquilo sustituido con cicloalquenilo o alquilo sustituido con arilo;

R6 es hidrogeno o alquilo;

R7 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilo sustituido con cicloalquilo, alquilo sustituido con cicloalquenilo o alquilo sustituido con arilo, o B sustituido con alquileno o junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen, R6 y R7 forman un anillo heterociclico seleccionado entre pirrol y piperidina;

B es

en el que R8 es hidrogeno o alquilo;

R9 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilo sustituido con cicloalquilo, alquilo sustituido con cicloalquenilo o alquilo sustituido con arilo o junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen, R8 y R9 forman un anillo heterociclico seleccionado entre pirrol y piperidina;

W es OR10, NR11R12, u OE; en donde

R10 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilo sustituido con cicloalquilo, alquenilo sustituido con cicloalquenilo, o alquilo sustituido con arilo;

R11 es hidrogeno o alquilo;

R12 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilo sustituido con cicloalquilo, alquilo sustituido con cicloalquenilo, alquilo sustituido con arilo o C(=O)Y sustituido con alquileno o, junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen, R11 y R12 forman un anillo heterociclico seleccionado entre pirrol y piperidina;

E es

(C=O)D sustituido con alquileno, o -R130C(=O)R14; en donde

R13 es alquileno sustituido con alquilo;

R14 es alquilo;

D es OR15 o NR16R17; en donde

R15 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilo sustituido con cicloalquilo, alquilo sustituido con cicloalquenilo, o alquilo sustituido con arilo;

R16 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, arilo, alquilo sustituido con arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilo sustituido con cicloalquilo o alquilo sustituido con cicloalquenilo;

R17 es hidrogeno o alquilo o, junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen, R16 y R17 forman un anillo heterociclico seleccionado entre el grupo que consiste en pirrol o piperidina;

Y es OR18 o NR19R20; en donde

R18 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilo sustituido con cicloalquilo, alquilo sustituido con cicloalquenilo, o alquilo sustituido con arilo;

R19 es hidrogeno o alquilo;

R20 es hidrogeno, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilo sustituido con cicloalquilo, alquilo sustituido con cicloalquenilo, o alquilo sustituido con arilo o, junto con el atomo de nitrogeno al cual se unen, R19 y R20 forma un anillo heterociclico seleccionado entre pirrol y piperidina;

R21 es hidrogeno o alquilo;

y n es 0 a 4.

Los piperidina-N-alquilcarbonilatos que pueden ser de valor son N-alquilamino-3, 4, piperidinas 4 sustituidas, tales como alvimopan, representado a continuacion como la formula (IV):

Las piperidinas N-sustituidas adecuadas se pueden preparar como se divulga en las patentes de EE.UU. numeros 5.270.328; 6.451.806; y 6.469.030. Alvimopan esta disponible de Adolor Corp., Exton, PA. Dichos compuestos tienen pesos moleculares moderadamente altos, una forma de ion hibrido y una polaridad que evita la penetracion de la barrera hematoencefalica.

Otros compuestos antagonistas opioideos perifericos mas adecuados pueden incluir compuestos de benzomorfano cuaternario. Los compuestos de benzomorfano cuaternarios empleados en los metodos descritos en el presente documento presentan altos niveles de antagonismo de la morfina, presentando a la vez actividad agonista reducida, y preferentemente sustancialmente ninguna.

Los compuestos de benzomorfano cuaternarios que se pueden emplear en los metodos descritos en el presente documento tienen la siguiente formula (V):

en la que;

R1 es hidrogeno, acil o acetoxi; y

R2 es alquilo o alquenilo;

R es alquilo, alquenilo o alquinilo

y

X- es un anion, especialmente un anion cloruro, bromuro, yoduro o metilsulfato.

Los derivados cuaternarios especificos de los compuestos de benzomorfano que se pueden emplear en los metodos descritos en el presente documento incluyen los siguientes compuestos de formula (V): 2'-hidroxi 5,9-dimetil-2,2-dialil-6,7-benzomorfanio-bromuro; 2'-hidroxi-5,9-dimetil-2-n-propil-2 alil-6,7-benzomorfanio-bromuro; 2'-hidroxi-5,9-dimetil-2-n-propil-2-propargil-6,7 benzomorfanio-bromuro; y 2’-acetoxi-5,9-dimetil-2-n-propil-2-alil-6,7 benzomorfaniobromuro.

Se describen otros compuestos de benzomorfano cuaternarios que se pueden emplear en los metodos descritos en el presente documento, por ejemplo, en la patente de EE.UU. n.° 3.723.440.

Los compuestos empleados en los metodos descritos en el presente documento pueden existir en forma de profarmaco. Como se usa en el presente documento, se pretende que "profarmaco" incluya algunos transportadores unidos covalentemente que liberan el farmaco precursor activo de acuerdo con las formulas (I) a (V) u otras formulas o compuestos en los metodos descritos en el presente documento in vivo cuando dicho profarmaco se administra a un sujeto mamifero. Como se sabe que los profarmacos potencian numerosas calidades deseables de los compuestos farmaceuticos (por ejemplo, solubilidad, biodisponibilidad, fabricacion, etc.), los compuestos empleados en los presentes metodos pueden, si se desea, administrarse en forma de profarmacos. En consecuencia, los profarmacos incluyen, por ejemplo, los compuestos descritos en el presente documento en los que un grupo hidroxi, amino, o carboxi se une a cualquier grupo que, cuando el profarmaco se administra a un sujeto mamifero, se escinde para formar un hidroxilo libre, un amino libre, o un acido carboxilico, respectivamente.

Los ejemplos incluyen, aunque no de forma limitativa, derivados de acetato, formiato y benzoato de grupos funcionales de alcohol y amina; y alquilo, carbodclicos, arilo, y esteres de alquilarilo tales como esteres de metilo, etilo, propilo, iso-propilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, ciclopropilo, fenilo, bencilo, y fenetilo, y similares.

Como se ha indicado, Los compuestos empleados en los metodos descritos en el presente documento pueden prepararse de numerosas maneras bien conocidas por los expertos en la materia. Todas las preparaciones divulgadas junto con la presente invencion se contemplan en la practica a cualquier escala, incluidos miligramo, gramo, multigramo, kilogramo, multikilogramo o a escala farmaceutica comercial.

Los compuestos empleados en los presentes metodos pueden contener uno o mas atomos de carbono asimetricamente sustituidos y pueden aislarse en formas opticamente activas o racemicas. Por tanto, se pretenden todas las formas quirales, diastereomericas, racemicas, epimericas y todas las formas isomericas geometricas de una estructura, a no ser que se indique espedficamente la estereoquimica o forma isomerica concretas. es bien conocido en la tecnica, como preparar y aislar dichas formas opticamente activas. Por ejemplo, las mezclas de estereoisomeros se pueden separar mediante tecnicas convencionales que incluyen, aunque no de forma limitativa, resolucion de formas racemicas, cromatografia normal, en fase invertida, y cromatografia quiral, formacion preferencial de sales, recristalizacion y similares, o sintesis quiral a partir de materiales de partida quirales o sintesis deliberada de centros quirales diana.

En la invencion, el antagonista opioideo es un antagonista opioideo mu. La invencion abarca tambien la administracion de mas de un antagonista opioideo, incluyendo las combinaciones de los antagonistas mu y las combinaciones de los antagonistas mu y kappa, por ejemplo, una combinacion de metilnaltrexona y alvimopan.

Los metodos descritos en el presente documento abarcan proporcionar un papel terapeutico o profilactico en otras enfermedades basadas en celulas endoteliales, por ejemplo, en varias angiogenesis y/o en enfermedades neoplasicas y no neoplasicas relacionadas con la proliferacion, por ejemplo, enfermedad de celulas falciformes, enfermedad neovascular del ojo (tal como retinopatia diabetica, glaucoma neovascular, retinopatia del prematuro, degeneracion macular relacionada con la edad), proliferacion endotelial en los rinones o pulmones y psoriasis. Las dolencias no neoplasicas que son sensibles al tratamiento incluyen la artritis reumatoide, psoriasis, ateroesclerosis, retinopatias diabetica y otras retinopatias proliferativas que incluyen retinopatia del prematuro, fibroplasia retrolental, glaucoma neovascular, degeneracion macular asociada a la edad, hiperplasias de tiroides (incluyendo enfermedad de Grave), trasplante de cornea y trasplante de otros tejidos, inflamacion cronica, inflamacion pulmonar, sindrome nefrotico, preeclampsia, ascitis, derrame pericardico (tal como el asociado con pericarditis), y derrame pleural. Por ejemplo, se ha mostrado que la morfina indujo la retinopatia en la enfermedad de celulas falciformes (Gupta et al., comunicacion personal). Se anticipa que el tratamiento con un antagonista opioideo puede inhibir significativamente la retinopatia, particularmente con la retinopatia inducida por opioideos en pacientes con enfermedad de celulas falciformes que estan en terapia activa de opioideos, y reciben opioideos durante largos periodos de tiempo, incluyendo terapia cronica durante semanas, meses o incluso anos.

Los metodos descritos en el presente documento se considera tambien que son valiosos para reducir el riesgo de recidiva de una neoplasia o neoplasma tras el tratamiento con otras modalidades terapeuticas, por ejemplo, tras intervencion quirurgica. Por ejemplo, la presente divulgacion proporciona un metodo para reducir el riesgo de recidiva del cancer postquirurgico. Los canceres pueden incluir, por ejemplo, cancer de mama o cancer de prostata, y se puede conseguir un riesgo reducido proporcionando al paciente que padece dicho cancer una cantidad eficaz de un antagonista opioideo, particularmente un antagonista opioideo periferico. Por ejemplo, como se ha descrito anteriormente, los pacientes que experimentan cirugia de cancer de mama tienen una diferencia significativa (de cuatro veces) en la incidencia de la recidiva a los 2-4 anos dependiendo de si los pacientes recibieron anestesia local o general (con morfina durante su cirugia inicial). La administracion simultanea de los antagonistas opioideos, especialmente antagonistas perifericos, De acuerdo con la presente invencion, con tratamiento quirurgico puede ser valiosa para reducir la incidencia de la recidiva del cancer.

Tal como se muestra tambien en los ejemplos siguientes,, se ha encontrado ademas que un antagonista opioideo periferico, MNTX, atenua no solo la migracion de celulas endoteliales inducida por VEGF, sino tambien la migracion y/o la proliferacion endotelial por otros factores promigracion/pro-proliferativos tales como el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), o la esfingosina 1-fosfato (S1P). Dicha atenuacion varia desde aproximadamente desde 10 % a 60 %, y proporciona una evidencia adicional de que los compuestos para su uso en la presente invencion son valiosos en la inhibicion de los factores promigracion y proangiogenicos.

Se describen tambien en el presente documento metodos para tratar pacientes, por ejemplo, pacientes de cancer, que estan experimentando tratamiento con agonistas opioideos. Los agonistas opioideos incluyen, aunque no de forma limitativa, morfina, metadona, codeina, meperidina, fentidina, fentanilo, sufentanilo, alfentanilo y similares. Como se ha descrito anteriormente, los agonistas opioideos se clasifican por su capacidad de agonizar un tipo de receptor un orden de magnitud mas eficazmente que otro. Por ejemplo, la afinidad relativa de la morfina por el receptor mu es 200 veces mayor que para el receptor kappa, y se clasifica por tanto como un agonista opiodeo mu. Algunos agonistas opioideos pueden actuar como agonistas hacia un receptor y como antagonistas hacia otro receptor y se clasifican como agonistas/antagonistas, (conocidos tambien como agonistas mixtos o parciales). "Agonista/antagonista", "agonista parcial", y "agonista mixto" se usan de manera indistinta en el presente documento. Estos opioideos incluyen, aunque no de forma limitativa, pentazocina, butorfanol, nalorfina, nalbufina, buprenorfina, bremazocina, y bezocina. Muchos de los grupos de agonistas/antagonistas de opioideos son agonistas en los receptores kappa y antagonistas en los receptores mu. Ademas, se considera que los metabolitos activos de los agonistas opioideos pueden ser tambien activos como inductores de la angiogenesis. Por ejemplo, los metabolitos de morfina, morfina 3-glucuronida (M3G) y morfina 6-glucuronida (M6G) pueden ser factores proangiogenicos activos.

En general, el antagonista opioideo periferico utilizado de acuerdo con la presente invencion puede administrarse en una cantidad eficaz de tal manera que el nivel en el plasma del paciente del antagonista opioideo periferico esta en el intervalo de 10-6 M a 10-9M. los niveles de farmaco en el plasma del paciente se pueden medir usando metodos de HPLC rutinarios conocidos por los expertos en la materia.

Tal como se describe en los ejemplos siguientes, el analogo de encefalina DAMGO induce la migracion endotelial. Por tanto, los metodos descritos en el presente documento pueden ser valiosos para el paciente que padece de enfermedades hiperproliferativas o relacionadas con la angiogenesis, por ejemplo, cancer, bastante aparte del tratamiento con agonistas opioideos.

El modo de administracion concreto del antagonista opioideo seleccionado dependera, por supuesto, de la combinacion concreta de farmacos seleccionada, la gravedad de la progresion del tumor que se este tratando, en el paciente con cancer, la condicion de salud general del paciente, y la dosificacion requerida para la eficacia terapeutica. Los metodos descritos en el presente documento, hablando en general, se pueden llevar a la practica usando cualquier modo de administracion que sea medicamente aceptable, por ejemplo, cualquier modo que produce niveles eficaces de los compuestos activos sin producir efectos adversos clinicamente inaceptables. Dichos modos de administracion incluyen la administracion oral, rectal, topica (como mediante polvos, pomada, gotas, parche transdermico o dispositivo iontoforetico), transdermica, sublingual, intramuscular, infusion, intravenosa, pulmonar, intramuscular, intracavitaria, como un aerosol, aural (por ejemplo, mediante gotas oticas), intranasal, por inhalacion, intraocular o subcutanea. Se podria usar tambien la inyeccion directa para la administracion local. La administracion oral o subcutanea puede ser adecuada para el tratamiento profilactico o a largo plazo en funcion de la conveniencia del paciente asi como del calendario de dosificacion. Para enfermedades oculares, las formulaciones oftalmicas pueden inyectarse o instilarse directamente.

Adicionalmente, los antagonistas opioideos pueden administrarse como un comprimido o capsula revestido entericamente. En algunas realizaciones, el antagonista opioideo se administra mediante un metodo de infusion lenta o mediante un metodo de liberacion controlada o liberacion en el tiempo, o como un polvo liofilizado.

Cuando se administran, los compuestos para su uso en la invencion se administran en cantidades farmaceuticamente aceptables y en composiciones o preparaciones farmaceuticamente aceptables. Dichas preparaciones pueden contener de forma rutinaria sales, agentes tamponantes, conservantes, y opcionalmente otros ingredientes terapeuticos. Cuando se usan en medicina, las sales deben ser farmaceuticamente aceptables, pero las sales no convenientemente aceptables pueden utilizarse convenientemente para preparar sales farmaceuticamente aceptables de las mismas y no se excluyen del alcance de la invencion. Dichas sales farmacologica y farmaceuticamente aceptables incluyen, aunque no de forma limitativa, aquellas preparadas a partir de los siguientes acidos: clorhidrico, bromhidrico, sulfurico, nitrico, fosforico, maleico, acetico, salicilico, p-toluenosulfonico, tartarico, citrico, metanosulfonico, formico, succinico, naftaleno-2-sulfonico, pamoico, 3-hidroxi-2-naftalenocarboxNico, y benceno sulfonico. Los agentes tamponantes adecuados incluyen, aunque no de forma limitativa, acido acetico y las sales del mismo (1-2 % WN); acido citrico y las sales del mismo (1-3 % W n); acido borico y las sales del mismo (0,5-2,5 % WN); y acido fosforico y las sales del mismo (0,8-2 % WN).

Los conservantes adecuados incluyen, aunque no de forma limitativa, cloruro de benzalconio (0,003-0,03 % WN); clorobutanol (0,3-0,9 % de W/N); parabenos (0,01-0,25 % WN) y timerosal (0,004-0,02 % WN).

Para facilitar la administracion, una composicion farmaceutica del antagonista opioideo periferico puede contener tambien uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables, tales como lubricantes, diluyentes, aglutinantes, trasportadores, y disgregantes. Otros agentes auxiliares pueden incluir, por ejemplo, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, sales para variar la presion osmotica, la coloracion, la aromatizacion y/o los compuestos aromaticos activos.

Un trasportador o excipiente farmaceuticamente aceptable se refiere a un solido, semisolido o carga liquida no toxica, un diluyente, material encapsulante o formulacion auxiliar de cualquier tipo. Por ejemplo, Los transportadores, diluyentes disolventes o vehiculos farmaceuticamente aceptables adecuados incluyen, aunque no de forma limitativa, agua, soluciones salinas (tampones), alcoholes, goma arabiga, aceites minerales y vegetales, alcoholes bencilicos, polietilenglicoles, gelatina, hidratos de carbono tales como lactosa, amilosa o almidon, estearato de magnesio, talco, acido silicico, parafina viscosa, aceites vegetales, monogliceridos y digliceridos de acidos grasos, esteres de acidos grasos de pentaeritritol, hidroximetilcelulosa, polivinilpirrolidona, etc. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamano de partfculas requerido en el caso de dispersiones y mediante el uso de tensioactivos. La prevencion de la accion de microorganismos puede asegurarse por la inclusion de diversos agentes antibacterianos y antifungicos tales como parabeno, clorobutanol, fenol, acido sorbico y similares.

Si se utiliza un transportador solido farmaceuticamente aceptable, la forma farmaceutica de los analogos puede ser comprimidos, capsulas, polvos, supositorios, o pastillas para chupar. Si se usa un transportador liquido, capsulas de gelatina blanda, se pueden utilizar parches transdermicos, pulverizadores en aerosol, crema topica, jarabes o suspensiones liquidas, emulsiones o soluciones pueden ser la forma farmaceutica.

Para la aplicacion parenteral, son particularmente adecuados los inyectables, soluciones esteriles, preferentemente soluciones acuosas o no acuosas, asi como dispersiones, suspensiones, emulsiones, o implantes, incluyendo supositorios. Las ampollas son a menudo dosificaciones unitarias convenientes. La forma de deposito inyectable puede ser tambien adecuada y puede prepararse formando matrices microencapsuladas del farmaco en polimeros biodegradables tales como polilactida-poliglicolida, poli(ortoesteres) y poli(anhidridos). Dependiendo de la relacion de farmaco a polimero y la naturaleza del polimero particular empleado, puede controlarse la tasa de liberation del farmaco.

Las formulaciones inyectables de deposito tambien se preparan atrapando el farmaco en liposomas o microemulsiones que con compatibles con tejidos corporales. Las formulaciones inyectables pueden esterilizarse, por ejemplo, mediante filtration a traves de un filtro de retention de bacterias o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones solidas esteriles que pueden disolverse o dispersarse en agua esteril u otro medio inyectable esteril exactamente antes de su uso.

Para la aplicacion enterica, son particularmente adecuados los comprimidos, grageas, liquidos, gotas, supositorios, o capsulas tales como capsulas de gelatina blanda. Un jarabe, puede utilizarse un elixir o similar en el que se emplea un vehiculo edulcorado.

Como se ha indicado, otro sistema de administration puede incluir un sistema de administration de liberacion en el tiempo, liberacion retardada o liberacion continua. Dichos sistemas pueden evitar las administraciones repetidas de los compuestos de la invention, mayor comodidad para el paciente y el medico y mantener niveles sostenido de los compuestos en plasma. Estan disponibles muchos tipos de sistemas de administracion de la liberacion y son conocidos por las personas normalmente expertas en la tecnica. Pueden formularse composiciones de liberacion continua o controlada, por ejemplo, como liposomas o aquello en el que el compuesto activo se protege con revestimientos diferencialmente degradables, tales como mediante microencapsulacion, multiples revestimientos, etc.

Por ejemplo, los compuestos para su uso en la invencion pueden combinarse con matrices de liberacion continua farmaceuticamente aceptables, tales como polimeros biodegradables, para formar composiciones terapeuticas. Una matriz de liberacion continua, como se usa en el presente documento, es una matriz preparada de materiales, usualmente polimeros, que son degradables mediante hidrolisis enzimatica o hidrolisis acido-base o mediante disolucion. Una vez insertada en el cuerpo, la matriz se activa mediante las enzimas y fluidos corporales. Se puede seleccionar una matriz de liberacion continua de forma deseable entre materiales biocompatibles tales como liposomas, un sistema basado en polimero tal como polilactidos (acido polilactico), poliglicolida (polimero de acido glicolico), polilactido co-glicolida (copolimeros de acido lactico y acido glicolico), polianhidridos, poli(orto)esteres), polisacaridos, poliaminoacidos, acido hialuronico, colageno, sulfato de condroitina, polinucleotidos, polivinilpirrolidona, polivinilpirrolidona, y silicona; sistema sin polimeros tales como acidos carboxilicos, acidos grasos, fosfolipidos, aminoacidos, lipidos tales como esteroles, sistemas de liberacion de hidrogeles; sistemas silasticos; sistemas basados en peptidos; implantes y similares. Los ejemplos especificos incluyen, aunque no de forma limitativa: (a) un sistema erosional en el que el polisacarido esta contenido en una forma en una matriz, se encuentra en las patentes de EE.UU. numeros 4.452.775, 4.675.189, y 5.736.152, y (b) un sistema difusional en el que un componente activo permea a una velocidad controlada desde un polimero tal como se describe en las patentes de Ee .UU. numeros 3.854.480, 5.133.974 y 5.407.686. Ademas, se puede usar un sistema de administracion por cable con bomba, algunos de los cuales se adaptan para implante. Se describen revestimientos entericos adecuados en la publication PCT n.° WO 98/25613 y la patente de EE.UU. n.° 6.274.591.

El uso de un implante de liberacion continua a largo plazo puede ser particularmente adecuado para el tratamiento de dolencias cronicas. Liberacion a "largo plazo", como se usa en el presente documento, significa que el implante se construye y dispone para administrar niveles terapeuticos del principio activo durante al menos 7 dias, y, de forma adecuada, de 30 a 60 dias. Los implantes de liberacion continua a largo plazo son bien conocidos por las personas normalmente expertas en la materia e incluyen algunos de los sistemas de liberacion descritos anteriormente.

Para aplicacion topica, se emplean como una forma no pulverizable, una forma viscosa a semisolida o solida que comprende un transportador compatible con la aplicacion y que tiene una viscosidad dinamica preferentemente mayor que la del agua. Como formulaciones adecuadas se incluyen, aunque no de forma limitativa, soluciones, suspensiones, emulsiones, crema, pomadas, polvos, linimentos, salvias, aerosoles, etc., que son, si se desea, esterilizadas o mezcladas con agentes auxiliares, por ejemplo, conservantes, etc.

Es tambien posible la administracion transdermica o iontoforetica de las composiciones farmaceuticas de los antagonistas opioideos.

Con respecto a MNTX espedficamente, las formulaciones acuosas pueden incluir un agente quelante, un agente tamponante, un antioxidante y, opcionalmente, un agente de isotonicidad, preferentemente con pH ajustado a entre 3,0 y 3,5. Dichas formulaciones preferidas que son estables para autoclavar y de almacenamiento a largo plazo se describen en la aplicacion con n.° de serie 10/821811, publicada ahora como 20040266806, titulada "Formulacion farmaceutica".

En una realizacion, los compuestos para su uso en la invencion se administran con un regimen de dosificacion que proporciona un regimen de dosificacion continua del compuesto a un sujeto, por ejemplo, un regimen que mantenga niveles plasmaticos minimos del antagonista opioideo, y preferentemente elimine las puntas y valles de un nivel de farmaco con los regimenes convencionales. De manera adecuada, se puede conseguir una dosis continua mediante la administracion del compuesto a un sujeto diariamente usando cualquiera de los metodos de administracion divulgados en el presente documento. En una realizacion, la dosis continua se puede conseguir usando una infusion continua al sujeto, o por un mecanismo que facilite la liberacion del compuesto con el tiempo, por ejemplo, un parche transdermico, o una formulacion de liberacion sostenida. De manera adecuada, los compuestos para su uso en la invencion se liberan continuamente al sujeto en cantidades suficientes para mantener una concentracion del compuesto en el plasma eficaz para inhibir o reducir la angiogenesis inducida por opioides; o en pacientes de cancer, para atenuar el crecimiento de un tumor. Los compuestos para su uso de acuerdo con la presente invencion, tanto si se proporcionan en solitario o junto con otros agentes terapeuticos, se proporcionan en una cantidad antiangiogenicamente eficaz. Se entendera, sin embargo, que la utilizacion diaria total de los compuestos y composiciones para su uso en la presente invencion la decidira el medico a cargo del tratamiento dentro del alcance de un buen criterio medico. El nivel de dosis terapeuticamente eficaz especifico para cualquier paciente concreto dependera de diversos de factores, incluyendo el trastorno que se este tratando y la gravedad del trastorno; la actividad del compuesto especifico empleado; la composicion espedfica empleada; la edad, peso corporal, estado de salud general, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administracion; la via de administracion; la tasa de excrecion del compuesto empleado concreto; la duracion del tratamiento; los farmacos usados en combinacion o casuales con el compuesto especifico empleado y factores similares bien conocidos en las tecnicas medicas. Por ejemplo, esta bien comprendido entre las habilidades del experto en la tecnica iniciar las dosis del compuesto a niveles menores que los necesarios para conseguir el efecto terapeutico deseado y aumentar gradualmente la dosificacion hasta que se logre el efecto deseado.

Si se desea, la dosis diaria eficaz puede dividirse en multiples dosis para fines de administracion. Por consiguiente, las composiciones de una sola dosis pueden contener dichas cantidades o submultiplos de las mismas para constituir la dosis diaria. Como se ha indicado, los expertos en la materia optimizaran facilmente las dosis eficaces y los regimenes de administracion simultanea (como se describe en el presente documento) segun determine la buena practica medica y el estado clinico del paciente individual.

En general, las dosis orales de los antagonistas opioideos, especialmente antagonistas perifericos, estara comprendida de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 80 mg/kg de peso corporal por dia. Se espera que las dosis orales en el intervalo de 1 a 20 mg/kg de peso corporal proporcionen los resultados deseados. En general, administracion parenteral, incluidas las administracion intravenosa y la administracion subcutanea, estara comprendida de aproximadamente 0,001 a 5 mg/kg de peso corporal. Se espera que las dosis comprendidas de 0,05 a 0,5 mg/kg de peso corporal proporcionen los resultados deseados. La dosificacion se puede ajustar de manera adecuada para conseguir los niveles de farmaco deseados, locales o sistemicos, dependiendo del modo de administracion. Por ejemplo, se espera que la dosis para la administracion oral de los antagonistas opioideos en una formulacion con revestimiento enterico este entre el 10 y el 30 % de la dosis oral no revestida. En el caso que la respuesta del paciente sea insuficiente a dichas dosis, se pueden emplear dosis incluso mas altas (o eficazmente una dosis mayor 30 por una ruta de administracion diferente, mas localizada) en la medida que lo permita la tolerancia del paciente. Se contemplan multiples dosis al dia para conseguir los niveles sistemicos adecuados de los compuestos. Los niveles adecuados del sistema se pueden determinar mediante, por ejemplo, la medicion del nivel de farmaco en el plasma del paciente usando metodos de HPLC rutinarios conocidos e los expertos en la materia.

En algunas realizaciones de la invencion, los antagonistas opioideos se administran simultaneamente con el opioide. La expresion "administracion simultanea" se entiende referida a una terapia combinada mediante cualquier via de administracion en la que dos o mas agentes se administran a un paciente o sujeto. La administracion simultanea de agentes tambien se puede denominar como terapia combinada o tratamiento en combinacion. Los agentes pueden estar en las mismas formulaciones de dosificacion o en formulaciones independientes. Para el tratamiento en combinacion con mas de un principio activo, cuando los principios activos estan en formulaciones de dosificacion independientes, los principios activos se pueden administrar simultaneamente, o cada uno de ellos se puede administrar en momentos separados escalonadamente. Los agentes se pueden administrar simultanea o secuencialmente (por ejemplo, un agente puede seguir directamente despues del la administracion del otro, o los agentes se pueden proporcionar episodicamente, por ejemplo, uno se puede administrar en un momento seguido del otro en un momento posterior, por ejemplo, en el plazo de una semana), siempre que se proporcionen de una forma suficiente para permitir que ambos agentes consigan concentraciones eficaces en el organismo. Los agentes tambien se pueden administrar a traves de diferentes rutas, por ejemplo, un agente se puede administrar por via intravenosa mientras que el segundo agente se puede administrar por via intramuscular, via intravenosa u oral. En otras palabras, la administracion simultanea del compuesto antagonista opioideo de acuerdo con la presente invencion con un opioide se considera de forma adecuada una preparacion farmaceutica combinada que contiene un antagonista opioideo y un agente opioideo, estando la preparacion adaptada para la administracion del antagonista opioideo periferico diariamente o de forma intermitente, y la administracion del agente opioideo diariamente o de forma intermitente. Por tanto, los antagonistas opioideos se pueden administrar antes de, de forma simultanea con o despues de la administracion de los opioides. Los agentes que se pueden administrar simultaneamente se pueden formular en premezcla, tal como, por ejemplo, en una unica formulacion o unico comprimido. Estas formulaciones pueden ser parenterales u orales, tales como las formulaciones descritas, por ejemplo, en las patentes de Estados Unidos con numeros 6.277.384; 6.261.599; 5.958.452 y la publicacion PCT N.° WO 98/25613.

Se contempla ademas que los metodos descritos en el presente documento se pueden usar en solitario o junto con otros tratamientos para controlar el crecimiento o la migracion de las celulas endoteliales, respecto a las diversas enfermedades anteriormente descritas. El antagonista opioideo periferico se puede administrar simultaneamente con otro agente terapeutico que no sea un opioide o un antagonista opioideo. Los agentes terapeuticos adecuados incluyen agentes antineoplasicos, por ejemplo, agentes quimioterapeuticos, radioterapia, u otros agentes antiangiogenicos tales como suramina, o un mAb dirigido contra VEGf , una endostatina o radioterapia. Se pretende que los antagonistas opioideos de acuerdo con la presente invencion sean de valor especial cuando se administran simultaneamente con aquellos agentes que inhiben la actividad de VEGF, por ejemplo, un mAb dirigido contra VEGF. Los anticuerpos anti-VEGF son utiles en el tratamiento de varias enfermedades neoplasicas y no neoplasicas, asi como trastornos, incluidos hiperplasia endometrial, endometriosis, proliferation vascular anomala asociada con facomatosis, edema (tal como el asociado con tumores cerebrales y sindrome de Meigs. Un ejemplo de un mAb dirigido contra VEGF es bevacizumab (Avastina, Genentech) descrito en la patente de Estados Unidos n.° 6.884.879 y en el documento WO94/10202. En una determinada realization de la invencion, MNTX se administra simultaneamente con avastina.

En otras palabras, los compuestos para su uso la presente invencion tambien se pueden utilizar para el tratamiento del cancer en pacientes, como se ha descrito anteriormente, tanto cuando se utilizan en solitario o en combination con uno o mas agentes antineoplasicos adicionales, por ejemplo, radioterapia y/u otros tratamientos quimioterapeuticos, incluidos los antiangiogenicos, administrados habitualmente a los pacientes para el tratamiento del cancer. Las principales categorias y ejemplos de dichos farmacos se han relacionado en el presente documento, e incluyen, aunque no de forma limitativa, inhibidores de metaloproteasa, inhibidores de la proliferacion/migracion de las celulas endoteliales, antagonistas de factores de crecimiento angiogenicos, inhibidores de la senalizacion de integrina/survivina, y quelantes del cobre.

En algunas realizaciones, los compuestos para su uso en la invencion se pueden combinar con combinaciones conocidas de agentes neoplasicos. Los compuestos para su uso en la invencion se pueden combinar con un agente antiangiogenico y un agente quimioterapeutico y administrarse a un paciente de cancer. Por ejemplo, MNTX se puede administrar a pacientes de cancer junto con Avastina y 5-fluorouracilo.

Se anticipa que los antagonistas opioideos administrado simultaneamente con varios farmacos contra el cancer, radioterapia, u otros farmacos antiangiogenicos, puede producir un efecto antiproliferativo significativamente aumentado sobre las celulas cancerosas, y proporcionar de esta forma un efecto terapeutico mayor, por ejemplo, el uso de antagonistas opioideos perifericos a determinados tumores puede potenciar su respuesta a otros regimenes de tratamiento. Especificamente, se obtiene un efecto antiangiogenico significativamente aumentado con las combinaciones anteriormente divulgadas se administran simultaneamente usando concentraciones mas bajas del agente antineoplasico, una dosis de radiation mas baja, u otros farmacos antiangiogenicos en comparacion con regimenes de tratamiento en los que los farmacos o la radiacion se utilizan en solitario, existe el potencial de proporcionar una terapia en la que los efectos secundarios adversos asociados con los farmacos contra el cancer u otros farmacos antiangiogenicos o radioterapia estan notablemente reducidos respecto a los que normalmente se observan con los farmacos contra el cancer u otros farmacos antiangiogenicos o radioterapia usados en solitario o a dosis mas altas. Por ejemplo, la administracion simultanea de un antagonista opioideo de acuerdo con la presente invencion con un agente contra VEGF, por ejemplo, un mAb dirigido contra VEGF, puede reducir la dosis del agente anti-VEGF o aumentar la potencia o la eficacia o ambos. Ademas, tal como se detalla en el presente documento, la administracion simultanea de un antagonista opioideo para su uso de acuerdo con la presente invencion con otras modalidades contra el cancer puede tener valor profilactico.

Cuando se usa en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas, los compuestos para su uso en la presente invencion se pueden administrar simultaneamente con inhibidores de la metaloproteasa tales como, por ejemplo: marimastat, inhibidor sintetico de la metaloproteasa de la matriz (MMPI), British Biotech; Bay 12-9566, MMPI sintetico e inhibidor del crecimiento tumoral, Bayer; AG3340, MMPI sintetico, Agouron/Warner-Lambert; CGS 27023A, MMPI sintetico, Novartis; CGS 27023A, MMPI sintetico; COL-3, MMPI sintetico, derivado de tetraciclina, Collagenex; AE-941 (Neovastat), MMPI de origen natural, AEterna, BMS-275291, MMPI sintetico, Bristol-Myers Squibb; penicilamina, inhibidor de uroquinasa, NCI-NABTT.

Cuando se usa en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas, los compuestos para su uso en la presente invention se pueden administrar simultaneamente con inhibidores directos de la proliferacion/migracion de las celulas endoteliales tales como: TNP-470 (derivado de la fumagilina), inhibe el crecimiento de celulas endoteliales, TAP Pharmaceuticals; escualamina, inhibe el intercambiador sodio-hidrogeno, NIHE3, magainina; combretastatina, induction de la apoptosis en celulas endoteliales en proliferation, oxigeno; endostatina, inhibition de celulas endoteliales, EntreMed; penicilamina, migration y proliferacion de bloques de celulas endoteliales, NCI-NABTT; inhibidor de la farnesil transferasa (FTI), migracion y proliferacion de bloques de celulas endoteliales, NCI-NABTT, -L-778.123 Merck, - SCH66336 Schering-Plough,-R115777 Janssen.

Cuando se usa en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas, los compuestos para su uso en la presente invencion se pueden administrar simultaneamente con antagonistas de factores de crecimiento angiogenicos tales como: anticuerpo dirigido contra VEGF, anticuerpo monoclonal que inactiva VEGF, Genentech; talidomida, bloquea la actividad de factores de crecimiento angiogenicos (bFGF, VEGF, TNF-alfa), Celgene; SU5416, bloquea la senalizacion del receptor de VEGF (Flk-l/KDR) (tirosina quinasa), Sugen-NCI; ribozima (Angiozyme), atenua el ARNm de los receptores VEGF, Ribozyme Pharmaceuticals, Inc; SU6668, bloquea la senalizacion del receptor de VEGF, bFGF, y PDGF, Sugen; PTK787/ZK22584, bloquea la senalizacion del receptor de VEGF, Novartis; interferon-alfa, inhibicion de la production de bFGF y VEGF; suramina, bloquea la union del factores de crecimiento a su receptor, NCI-NABTT.

Cuando se usa en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas, los compuestos para su uso en la presente invencion se pueden administrar simultaneamente con farmacos que inhiben la senalizacion de integrina/survivina especifica de celulas endoteliales: Vitaxin, anticuerpo contra alfa-v-beta3 integrina presente sobre la superficie de las celulas endoteliales, Ixsys; EMD121974, bloqueador de molecula pequena de la integrina presente sobre la superficie de las celulas endoteliales, Merck KGaA.

Cuando se usa en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas, los compuestos para su uso en la presente invencion se pueden administrar simultaneamente con quelantes de cobre, tales como: penicilamina, el grupo sulfhidrilo se une al cobre; aclara el cobre mediante excretion urinaria, NCI-NABTT; tetratiomolibdato, los grupos tiol se unen fuertemente al cobre, inactivan el cobre disponible para el tumor, University of Michigan Cancer Center; captoprilo, quelante de cobre y cinc; tambien, inhibidor de MMP y de la enzima convertidora de la angiotensina, Northwestern University.

Cuando se usa en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas, los compuestos para su uso en la presente invencion se pueden administrar simultaneamente con antagonistas de la angiogenesis con diferentes mecanismos: CDI, inhibidor del flujo de entrada de calcio, NCI; ABT-627, antagonista del receptor de la endotelina, Abbott/NCI; CM101/ZDO101, toxina de Strep del grupo B que perturba selectivamente el endotelio en proliferacion mediante su interaction con el receptor (CM201), CarboMed/Zeneca; interleucina-12, induccion de interferon gamma, regulation por defecto de la IL-10, induccion de la IP-10, M.D. Anderson Cancer Center/Temple University, Temple University, Genetics Institute, Hoffman LaRoche; IM862, bloquea la produccion de VEGF y bFGF; aumenta la produccion del inhibidor de IF-12, Cytran; PNU-145156E, bloquea la angiogenesis inducida por la proteina Tat, Pharmacia and Upjohn.

Cuando se usa en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas, los compuestos para su uso en la presente invencion se pueden administrar simultaneamente con agentes quimioterapeuticos tales como, por ejemplo, interferon alfa, COMP (ciclofosfamida, vincristina, metotrexato y prednisona), etoposido, mBACOD (metotrexato, bleomicina, doxorrubicina, ciclofosfamida, vincristina y dexametasona), PRO-MACE/MOPP (prednisona, metotrexato (w/leucovina como rescate), doxorrubicina; ciclofosfamida, paclitaxol, docetaxol, etoposido/mecloretamina, vincristina, prednisona y procarbazina), vincristina, vinblastina, angioinhibinas, TNP-470, polisulfato de pentosan, factor plaquetario 4, angiostatina, lM-609, SU-101, CM-101, Techgalan, talidomida, SP-pG y similares.

Los agentes antineoplasicos que se pueden administrar simultaneamente con los compuestos para su uso en la presente invencion tambien incluyen, de forma adecuada, antimetabolitos (por ejemplo, 5-fluorouracilo, metotrexato, fludarabina), agentes antimicrotubulos (por ejemplo, vincristina, vinblastina, taxanos tales como paclitaxel, docetaxel), un agente alquilante (por ejemplo, ciclofosfamida, melfalan, biocoroetilnitrosurea, hidroxiurea), mostazas nitrogenadas, (por ejemplo, mecloetamina, melfano, clorambucilo, ciclofosfamida e ifosfamida); nitrosoureas (por ejemplo, carmustina, lomustina, semustina y estreptozocina), agentes de platino (por ejemplo, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, JM-216, C1-973), antraciclinas (por ejemplo, doxorubicina, daunorrubicina), antibioticos (por ejemplo, mitomicina, idarubicina, adriamicina, daunomicina), inhibidores de la topoisomerasa (por ejemplo, etoposido, camtotecinas), alquilsulfonatos, incluido busulfan; triazinas (por ejemplo, dacarbazina); etieniminas (por ejemplo, tiotepa y hexametilmelamina); analogos de acido folico (por ejemplo, metotrexato); analogos de pirimidina (por ejemplo, 5-fluorouracilo, citosina arabinosido); analogos de purina (por ejemplo, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina); antibioticos antitumorales (por ejemplo, actinomicina D; bleomicina, mitomicina C y metramicina); hormonas y antagonistas de hormonas (por ejemplo, tamoxifeno, corticoesteroides) y cualesquiera otros agentes citotoxicos, (por ejemplo, estramustina fosfato, prednimustina).

Se entendera que los agentes que se pueden combinar con los compuestos para su uso en la presente invencion para la inhibicion, tratamiento o profilaxia de la angiogenesis y/o canceres no estan limitados a los anteriormente relacionados, sino que incluyen, en principio, cualesquiera agentes utiles para el tratamiento de enfermedades angiogenicas inducidas por opioideos as ^como el crecimiento tumoral.

La presente invencion se explica ademas mediante los siguientes ejemplos, que no deben tomarse en forma alguna como limitantes del alcance de la presente invencion.

Ejemplos

Ejemplo 1: Ensayo de migracion de celulas endoteliales

La actividad antiangiogenica de los antagonistas perifericos opioideos para su uso de acuerdo con la presente invencion se evaluo en experimentos que sometian a ensayo la capacidad del antagonista para inhibir o modular la migracion capilar de celulas endoteliales usando una camara de Boyden modificada.

El ensayo de migracion de celulas endoteliales se llevo a cabo como se ha descrito en Lingen, M.W., Methods in Molecular Medicine, 78: 337-347 (2003). Brevemente, Celulas endoteliales de la microvasculatura humana (HMVEC) (Cell Systems, Kirkland, WA.) se privaron de alimento durante la noche en medio de cultivo endotelial (EGM) que contenia albumina de suero bovino (BSA) al 0,1 %. A continuacion, las celulas se tripsinizaron y se resuspenden en medio Eagle modificado por Dulbecco (d Me) con BSA al 0,1 % a una concentracion de 1 x 106 celulas/ml. Las celulas se anadieron al fondo de una camara de Boyden de 48 pocillos modificada (NeuroPore Corporation, Pleasanton, CA.). La camara se ensamblo y se invirtio, y se dejo que las celulas se adhirieran durante 2 horas a 37 °C a membranas de quimiotaxia de policarbonato (tamano de poro de 5 |jm) (NeuroProbe) que se habian humedecido en gelatina al 0,1 % durante una noche, y se secaron. A continuacion, la camara se volvio a invertir y el compuesto a estudiar, a diferentes concentraciones por cuadruplicado, factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) (como control positivo) o vehiculo se anadieron a los pocillos de la camara superior (hasta un volumen total de 50 ml); a continuacion el aparato se incubo durante 4 horas a 37 °C. Las membranas se recuperaron, se fijaron y se tineron (DiffQuick, Fisher Scientific, Pittsburgh, Pa.) y se conto el numero de celulas que migraron hasta la camara superior por 10 campos de potencia alta. La migracion del fondo hasta el DME+BSA al 0,1 % se resto, y los datos se notificaron como el numero de celulas que migraron por 10 campos de potencia alta (400 veces). Cada sustancia se estudio por cuadruplicado en cada experimento, y todos los experimentos se repitieron al menos dos veces. VEGF (R&D System, Minneapolis, MN) se uso como control positivo, a una concentracion de 200 pg/ml. La concentracion optima de VEGF se habia determinado anteriormente en experimentos de respuesta a las dosis (no se muestran los datos). Los compuestos estudiados como se ha descrito anteriormente fueron morfina, naloxona, metilnaltrexona, y la combinacion de metilnaltrexona y morfina. Las concentraciones de cada sustancia estudiada estaban en un intervalo de 0,001 a 10,0 jM . La concentracion de la morfina fue constante y de 0,1 jM . Los resultados se muestran en la figura 1.

La Figura 1 muestra que la morfina aumento la migracion de una forma dependiente de la concentracion. La adicion simultanea de metilnaltrexona y morfina, sin embargo, disminuyo la migracion de una forma dependiente de la concentracion. Ni metilnaltrexona ni naloxona en solitario afectaron la migracion.

Ejemplo 2: Ensayo de migracion de celulas endoteliales

Se llevo a cabo otro conjunto de experimentos de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1. En este conjunto de experimentos, metilnaltrexona y la combinacion de metilnaltrexona y morfina se volvio a estudiar para determinar su capacidad para inhibir la migracion de las celulas endoteliales. Las concentraciones de metilnaltrexona, cuando se ensayaron en solitario, estaban comprendidas de 0,001 a 10,0 jM . En combinacion, las concentraciones de metilnaltrexona estaban comprendidas de 0,001 a 10,0 jM , mientras que la concentracion de morfina permanecio constante a 0.1 jM como se describe en el Ejemplo 1. Los resultados se muestran en la figura 2.

La FIG. 2 muestra que la combinacion de metilnaltrexona y morfina disminuyo la migracion de una forma dependiente de la concentracion, mientras que la metilnaltrexona en solitario no altero la migracion.

Ejemplo 3: Migracion de celulas endoteliales inducida por DAMGO

Los farmacos usados en este estudio fueron [D-Ala 2, N-McPhe4, Gly5-ol] encefalina o DAMGO (Sigma, St. Louis, MO); naloxona (Sigma, St. Louis, MO); bromuro de N-metilnaltrexona o metilnaltrexona (Mallinckrodt Specialty Chemicals, Phillipsburg, NJ). El ensayo de migracion de celulas endoteliales se llevo a cabo como se ha descrito previamente (9). Las celulas endoteliales de la microvasculatura dermica humana (Cell Systems, Kirkland, WA) se privaron de alimento durante la noche en medio que contenia albumina de suero bovino (BSA) al 0,1 %, se recogieron, se resuspendieron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DME) con BSA al 0,1 %, y se sembraron en una membrana semiporosa gelatinizada en una camara de Boyden modificada (Nucleopore Corporation, Pleasanton, CA). A continuacion se anadieron las sustancias experimentales a los pocillos de la camara superior, y se dejo que las celulas migraran durante cuatro horas a 37° C.

Las membranas se recuperaron, se fijaron, y se tineron, y se conto el numero de celulas que migraron hasta la camara superior por diez campos de potencia alta, contadas por un observador enmascarado. La migracion del fondo hasta el DME BSA al 0,1 % se resto, y los datos se notificaron como el numero de celulas que migraron por 10 campos de potencia alta (400x). Cada sustancia se estudio por cuadruplicado en cada experimento y todos los experimentos se repitieron al menos dos veces. La concentracion de DAMGO fue 1 |jM, VEGF (R&D Systems, Minneapolis, MN) se uso como control positivo, a una concentracion de 200 pg/ml. La concentracion optima de VEGF se habia determinado anteriormente en experimentos de respuesta a las dosis (no se muestran los datos).

Los resultados se muestran en la FIG. 3, que muestra que metilnaltrexona y DAMGO disminuyeron la migration de una forma dependiente de la concentracion. La FIG. 4 ilustra resultados similares con naloxona y DAMGO. El metabolito de morfina inactivo, M3G, no ejerce actividad angiogenica, mientras que el M6G, conocido por actuar en el receptor mu, mostro un efecto dependiente de la concentracion sobre la angiogenesis (FIG. 5).

Ejemplo 4: Tratamiento se sujetos humanos y mamiferos con metilnaltrexona

En un primer conjunto de experimentos, se indujeron ratones para desarrollar tumores mediante transformation, endogamia o trasplante de celulas tumorales. Treinta y seis ratones, teniendo cada uno tumores con un volumen de al menos 60 mm3, se dividieron aleatoriamente en tres grupos. El primer grupo recibe una sustancia de control que no comprende ni un opioide ni un antagonista opioideo. El segundo grupo recibe un opioideo, por ejemplo, morfina, administrada por via oral a una dosis de 0,5 mg/kg/dia. El tercer grupo recibe un opioideo, por ejemplo, morfina, administrada por via oral a una dosis de 0,5 mg/kg/dia, y el antagonista opioideo periferico metilnaltrexona, administrada por via oral a una dosis de 5 mg/kg/dia.

Los compuestos se administraron diariamente durante un periodo de ocho semanas. Se registraron las diferencias en la velocidad del crecimiento tumoral, el tamano del tumor, una reduction en la angiogenesis del tumor, y la mortalidad de los ratones entre cada uno de los grupos. Los resultados demostraron una reduccion en el crecimiento tumoral y angiogenesis, en comparacion con los controles o la morfina en solitario.

En un segundo conjunto de experimentos, pacientes de cancer humanos se inscribieron en un estudio. Los inscritos en el estudio se controlaron segun la edad, el estadio de la enfermedad, los tipos de tratamiento, y los factores geneticos y familiares. Los participates se dividieron en dos grupos, segun si estaban recibiendo opioides, por ejemplo, morfina. El grupo que recibia opioide se subdividio aleatoriamente en dos subgrupos. Uno de los dos subgrupos que recibia opioides recibio un antagonista opioideo periferico, por ejemplo, metilnaltrexona administrada por via oral a una dosis de 5 mg/kg/dia durante un periodo de ocho semanas. Los otros dos subgrupos recibieron placebo durante el mismo periodo de tiempo. Se registraron las diferencias en la velocidad del crecimiento tumoral, el tamano del tumor, una reduccion en la angiogenesis del tumor, y la mortalidad de los participates entre cada uno de los grupos.

Ejemplo 5: Terapias que comprenden la administracion simultanea del antagonista opioideo periferico metilnaltrexona y un segundo agente terapeutico

En un primer conjunto de experimentos, se indujeron ratones para desarrollar tumores mediante transformacion, endogamia o trasplante de celulas tumorales. Cuarenta y ocho ratones, teniendo cada uno tumores con un volumen de al menos 60 mm3, se dividieron aleatoriamente en seis grupos. El primer grupo recibe una sustancia de control que no comprende un opioide, un antagonista opioideo, o un agente antineoplasico. El segundo grupo recibe un opioideo, por ejemplo, morfina, administrada por via oral a una dosis de 0,5 mg/kg/dia. El tercer grupo recibe un opioideo, por ejemplo, morfina, administrada por via oral a una dosis de 0,5 mg/kg/dia, y el antagonista opioideo periferico metilnaltrexona, administrada por via oral a una dosis de 5 mg/kg/dia. El cuarto grupo recibe un opioideo, por ejemplo, morfina, administrada por via oral a una dosis de 0,5 mg/kg/dia, y el antagonista opioideo periferico metilnaltrexona administrada por via oral a una dosis de 5 mg/kg/dia con un agente terapeutico antineoplasico, por ejemplo, bevacizumab (Avastin) a una dosis de 5 mg/kg cada 14 dias. El sexto grupo recibe un opioideo, por ejemplo, morfina, a una dosis de 0,5 mg/kg/dia y un agente terapeutico antineoplasico, por ejemplo, bevacizumab (Avastin) a una dosis de 5 mg/kg cada 14 dias.

Los compuestos se administraron diariamente durante un periodo de ocho semanas. Se registraron las diferencias en la velocidad del crecimiento tumoral, el tamano del tumor, una reduccion en la angiogenesis del tumor, y la mortalidad de los ratones en cada uno de los grupos. Los resultados demuestran un resultado mejorado (por ejemplo, reduccion en la angiogenesis y crecimiento tumoral) para los grupos que recibieron la combination de un opioideo, un antagonista opioideo, y un agente antineoplasico, en comparacion con el resto de grupos.

En un segundo conjunto de experimentos, pacientes de cancer humanos que recibian un opioideo, por ejemplo, morfina, un agente terapeutico antineoplasico, por ejemplo, bevacizumab (Avastin), o ambos, se inscribieron en un estudio. Los inscritos en el estudio se controlaron segun la edad, estadio y tipo de enfermedad, los tipos de tratamiento, y los factores geneticos y familiares. Los pacientes que recibian un opioideo se dividieron aleatoriamente en los grupos primero y segundo; los participates que recibian un agente terapeutico antineoplasico, por ejemplo, bevacizumab (Avastin), se dividieron aleatoriamente en los grupos tercero y cuarto; los participates que recibian un opioideo junto con un agente terapeutico antineoplasico, por ejemplo, bevacizumab (Avastin), se dividieron aleatoriamente en los grupos quinto y sexto. El primer, tercer y quinto grupos recibieron, cada uno de ellos, un antagonista opioideo periferico, por ejemplo, metilnaltrexona administrada por via oral a una dosis de 5 m g/kg^a durante un periodo de ocho semanas. El segundo, cuarto y sexto grupos recibieron placebo durante el mismo periodo. Se registraron las diferencias en la velocidad del crecimiento tumoral, el tamano del tumor, una reduccion en la angiogenesis del tumor, y la mortalidad de los participates entre cada uno de los grupos. Los resultados demuestran un resultado mejorado (por ejemplo, reduccion en la angiogenesis y crecimiento tumoral) para los grupos que recibieron la combinacion de un opioideo, un antagonista opioideo, y un agente antineoplasico, en comparacion con el resto de grupos.

Ejemplo 6: Efecto de los antagonistas opioideos sobre la migracion/proliferacion de celulas endoteliales

El cultivo de celulas y los reactivos -celulas endoteliales de la microvasculatura dermica humana (Cell Systems, Kirkland, WA) y celulas endoteliales de la microvascular pulmonar humana (Clonetics, Walkersville, MD) se cultivaron como se ha descrito anteriormente en medio EBM-2 completo (Clonetics) a 37 °C en una atmosfera humidificada de CO2 al 5 %, aire al 95 %, usando los pasos 6-10 para la experimentacion (Garcia et al. 2001). A menos que se especifique de otro modo, los reactivos se obtuvieron de Sigma (St. Louis, MO). Los reactivos de la electroforesis SDS-PAGE se adquirieron de Bio-Rad (Richmond, CA), la membrana de transferencia Immobilon-P de Millipore (Millipore Corp., Bedford, MA). Los farmacos usados en este estudio fueron [D-Ala2, N-MePhe4, Gly5-ol] encefalina o DAMGO (Sigma, St. Louis, MO); naloxona, morfina-3-glucuronido (M3G) y morfina-6-glucuronido (M6G) (Sigma, St. Louis, MO); bromuro de N-metilnaltrexona o metilnaltrexona (Mallinckrodt Specialty Chemicals, Phillipsburg, NJ), morfina (Baxter, Deerfield, Illinois). El inhibidor de la tirosina quinasa del receptor de VEGF se adquirio de Calbiochem (San Diego, CA). El anticuerpo dirigido contra RhoA de raton, el anticuerpo dirigido contra fosfotirosina de raton, y perlas conjugadas con el dominio de union a rho (RBD) se adquirieron de Upstate Biotechnology (Lake Placid, NY). Los anticuerpos dirigidos contra el receptor de VEGF 1 (Flt-1), y contra el receptor de VEGF 2 (Flk-1) de conejo se adquirieron de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). El anticuerpo dirigido contra p-actina de raton se adquirio de Sigma (St. Louis, MO). Los anticuerpos secundario marcados con peroxidasa de rabano picante (HRP) se adquirieron de Amersham Biosciences (Piscataway, NJ).

Inmunoprecipitacion e inmunotransferencia -Los materiales celulares se incubaron en tampon IP (HEPES 50 mM, pH 7,5), NaCl 150 mM, MgCl220 mM, Triton X-100 al 1 %, SDS al 0,1 %, Na3VO40,4 mM, NaF 40 mM, acido okadaico 50 |jM, fluoruro de fenilmetilsulfonilo 0,2 mM, dilucion 1:250 de la mezcla de inhibidores de la proteasa Calbiochem 3). A continuacion, las muestras se inmunoprecipitaron con IgG dirigida contra el receptor de VEGf 1 o contra el receptor de VEGF 2 seguido por SDS-PAGE en geles de poliacrilamida al 4-15 %, transferencia a membranas ImmobilonTM, y se revelaron con anticuerpos especificos primarios y secundarios. La visualizacion de las bandas inmunorreactivas se consiguio utilizando quimioluminiscencia potenciada (Amersham Biosciences).

Determinacion de la fosforilacion de la tirosina de los receptores de VEGF 1 y 2 - Las proteinas solubilizadas en tampon PN (vease anteriormente) se inmunoprecipitaron con uno cualquiera de anticuerpo dirigido contra el receptor de VEGF 1 de conejo o anticuerpo dirigido contra el receptor de VEGf 2 de conejo seguido por SDS-PAGE en geles de poliacrilamida al 4-15 % y transferencia a membranas ImmobilonTM (Millipore Corp., Bedford, MA). Tras bloquear los sitios no especificos con albumina de suero bovino al 5 %, las transferencias se incubaron bien con anticuerpo dirigido contra el receptor de VEGF 1 de conejo, el anticuerpo dirigido contra el receptor de VEGF 2 de conejo, o bien anticuerpo dirigido contra fosfotirosina de raton, seguido por incubacion con anticuerpo de cabra marcado con peroxidasa de rabano picante (HRP) dirigido contra IgG de conejo, o bien anticuerpo de cabra dirigido contra IgG de raton. La visualizacion de las bandas inmunorreactivas se consiguio utilizando quimioluminiscencia potenciada (Amersham Biosciences).

La construccion y transfeccion de ARNip contra RhoA - La secuencia de ARNip que dirige el anticuerpo humano contra RhoA se genero usando secuencias de ARNm procedentes de Genbank™ (gi:33876092). Para cada ARNm (o secuencia aleatoria), se identificaron dos dianas. Especificamente, Secuencia diana de Rhoa 1 (5'-AAGAAACTGGTGATTGTTGGT-3') (SEQ ID NO:1), Secuencia diana de Rhoa 2 (5'-AAAGACATGCTTGCTCATAGT-3') (SEQ ID NO:2), secuencia aleatoria 1 (5'-AAGAGAAATCGAAACCGAAAA-3') (SEQ ID NO:3), y secuencia aleatoria 2 (5'-AAGAACCCAATTAAGCGCAAG-3') (SEQ ID NO:4), fueron las utilizadas. Los oligonucleotidos de sentido directo y de sentido contrario se adquirieron de Integrated DNA Technologies (Coralville, IA). Para la construccion del ARNip, se uso un kit basado en transcripcion de Ambion (kit de construccion de ARNip Silencer™). A continuacion, las EC de la microvasculatura pulmonar humana se transfectaron con el ARNip usando siPORTamineTM como reactivo de transfeccion (Ambion, TX) de acuerdo con el protocolo proporcionado por Ambion. Las celulas (~40 % confluencia) se privaron de suero durante una hora, seguido por incubacion con 3 j M (1,5 j M de cada ARNip) o ARNip diana (o ARNip de secuencia aleatoria o sin ARNip) durante 6 horas en medio exento de suero. A continuacion se anadio medio que contenia suero (concentracion final 1 % en suero) durante 42 h antes de realizar los experimentos bioquimicos y/o los ensayos funcionales.

Ensayos de activacion de RhoA -Despues del tratamiento con el agonista y/o el inhibidor, las EC se solubilizaron en tampon de solubilizacion, y se incubaron con perlas conjugadas al dominio de union a rho (RBD) durante 30 minutos a 4 °C. El sobrenadante se retiro y las perlas unidas a RBD con la forma unida a GTP de RhoA unida se lavaron abundantemente. Las perlas RBD se hirvieron en tampon de muestra SDS-PAGE y el material de RhoA unido se analizo mediante SDS-PAGE, se transfirio a ImmobilonTM y se inmunotransfirieron con un anticuerpo dirigido contra RhoA (Garcia et al 2001).

Ensayo de migracion de EC de la microvasculatura dermica humana -El ensayo de migracion de celulas endoteliales se llevo a cabo como se ha descrito anteriormente (Lingen 2002). Las celulas endoteliales de la microvasculatura dermica humana (Cell Systems, Kirkland, WA) se privaron de alimento durante la noche en medio que contenia albumina de suero bovino (BSA) al 0,1 %, se recogieron, se resuspendieron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DME) con BSA al 0,1 %, y se sembraron en una membrana semiporosa gelatinizada en una camara de Boyden modificada (Nucleopore Corporation, Pleasanton, CA). A continuacion se anadieron las sustancias experimentales a los pocillos de la camara superior, y se dejo que las celulas migraran durante 4 h a 37° C. Las membranas se recuperaron, se fijaron, y se tineron, y un observador enmascarado conto el numero de celulas que migraron hasta la camara superior por 10 campos de potencia alta. La migracion del fondo hasta el DME BSA al 0,1 % se resto, y los datos se notificaron como el numero de celulas que migraron por 10 campos de potencia alta (400x). Cada sustancia se estudio por cuadruplicado en cada experimento y todos los experimentos se repitieron al menos dos veces. El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF, R&D Systems, Minneapolis, MN) se uso como control positivo, a una concentracion de 200 pg/ml. La concentracion optima de VEGF se habia determinado anteriormente en experimentos de respuesta a las dosis (no se muestran los datos).

Ensayo de migracion de EC de la microvastulatura pulmonar humana - Veinticuato unidades Transwell™ con tamano de poro 8 M se usaron para supervisar la migracion celular in vitro. HPMVEC (~1 x 104 celulas/pocillo) se sembraron en placas con varios tratamientos (MNTX 100 nM, inhibidor de la tirosina quinasa del receptor de VEGF 10 |jM o ARNip) a la camara superior, y se anadieron varios agonistas a la camara inferior (MD 100 nM, DAMGO o VEGF). Las celulas se dejaron migrar durante 18 horas. Las celulas de las camaras superior e inferior se cuantificaron utilizando el ensayo CellTiter96™ MTS (Promega, San Luis Obispo, CA) y se leyeron a 492 nm. El % de migracion se definio como el n.° de celulas en la camara inferior % el numero de celulas en la camara superior e inferior. Cada ensayo se realizo por triplicado, se repitio al menos cinco veces y se analizo estadisticamente mediante el test de la t de Student (configurando la significacion estadistica a P < 0,05).

Ensayo de proliferacion de EC de la microvasculatura pulmonar humana - Para medir el crecimiento celular, HPMVEC [5 x 103 celulas/pocillo, pretratadas con varios agentes (MNTX 100 nM, inhibidor de la tirosina quinasa del receptor de VEGF 10 j M o ARNip) se incubaron con 0,2 ml de medio exento de suero que contenia varios agonistas (MS 100 nM, DAMGO o VEGF) durante 24 h a 37 °C en CO2 al 5 %/aire al 95 % en placas de cultivo de 96 pocillos. El ensayo de proliferacion celular in vitro se analizo midiendo los incrementos en el numero de celulas usando el ensayo CellTiter96™ MTS (Promega, San Luis Obispo, CA) y se leyeron a 492 nm. Cada ensayo se realizo por triplicado, se repitio al menos cinco veces y se analizo estadisticamente mediante el test de la t de Student (configurando la significacion estadistica a P < 0,05).

Usando el ensayo de migracion de celulas endoteliales, se descubrio que MS producia un aumento en la migracion endotelial dependiente de la concentracion. Naloxona y MNTX en solitario no tuvieron efectos sobre la migracion de las celulas endoteliales en una amplia gama de concentraciones. Esto se demuestra en las fotomicrografias representativas, asi como cuantitativamente (FIGS. 6 y 1, respectivamente). A concentraciones clinicamente relevantes de morfina, la magnitud del efecto fue aproximadamente de un 70 % del conseguido con VEGF. Migracion de las celulas endoteliales inducida por morfina en concentraciones tan bajas como 10-7M (FIG. 2). La migracion de las celulas endoteliales basada en morfina se atenuo por los antagonistas opioideos del receptor mu, naloxona y MNTX (en dosis tan bajas como 10-8 j M) de una forma dependiente de la concentracion, lo que sugiere fuertemente que la migracion de las celulas endoteliales esta mediada por la accion de la morfina sobre el receptor opioideo mu (MOR). Que este efecto es via MOR en lugar de otros receptores opioideos se confirmo mediante las observaciones de los inventores de que el agonista sintetico encefalina muy selectivo para mu, DAMGO, tambien indujo la migracion de una forma dependiente de la concentracion. El efecto de DAMGO tambien se bloqueo mediante MNTX (FIG. 3). Que el metabolito de morfina inactivo M3G no ejerce actividad angiogenica, mientras que M6G, conocido por actuar en el receptor mu, muestra un efecto sobre la angiogenesis dependiente de la concentracion, confirma la hipotesis de los inventores de que el efecto de la morfina sobre el endotelio esta mediado por los receptores de mu (McQuay et al.

1997) (FIG. 5).

Para evaluar los mecanismos de los efectos inducidos por el opioideo y MNTX sobre la angiogenesis, se uso una linea de EC bien caracterizada, celulas endoteliales de la microvasculatura pulmonar humana (HPMVEC). En conformidad con los efectos sobre las EC de la microvasculatura dermica humana, se observo que MS, DAMGO y VEGF inducen la migracion de las HPMVEC que se inhibe mediante MNTX (FIG. 7B). Se ha mostrado que MS, DAMGO y VEGF tambien estimulan la proliferacion de HPMVEC, que se atenua mediante MNTX (FIG. 7A).

Teniendo en cuenta los efectos inhibidores de MNTX, un antagonistas del receptor opioideo mu, sobre la proliferacion y migracion de EC inducida por VEGF, se analizo el papel de los opioideos sobre la transactivacion del receptor de VEGF. La FIG. 8A muestra que MS y DAMGO inducen la fosforilacion de la tirosina tanto en el receptor de VEGF 1 (Flt-1) como en el 2 (Flk-1), que se bloquea mediante MNTX. Ademas, MNTX atenua la fosforilacion de la tirosina en los receptores de VEGF 1 y 2 inducida por VEGF. Estos resultados indican que los opioides inducen la transactivacion del receptor de VEGF.

Para resolver si la actividad tirosina quinasa del receptor de VEGF es necesaria para la angiogenesis inducida por

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composicion farmaceutica que comprende un antagonista opioideo periferico para su uso en un metodo para tratar una enfermedad o un trastorno caracterizados por una migracion o una proliferation anomalas de las celulas endoteliales, comprendiendo el metodo administrar una cantidad eficaz del antagonista opioideo periferico a un sujeto que lo necesita,

en donde el antagonista opioideo periferico es metilnaltrexona, en donde la metilnaltrexona inhibe o reduce la migracion o la proliferacion anomalas de celulas endoteliales, en donde las celulas endoteliales son celulas vasculares, y la migracion o la proliferacion anomalas es angiogenesis anomala.

2. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la enfermedad o el trastorno son cancer, una herida vascular, enfermedad de celulas falciformes, enfermedad neovascular del ojo, retinopatia diabetica, glaucoma neovascular, retinopatia del prematuro, degeneration macular asociada a la edad, proliferacion endotelial en los rinones, o pulmones, psoriasis, artritis reumatoide, ateroesclerosis, diabetes, retinopatia proliferativa, fibroplasia retrolental, hiperplasia de la tiroides, enfermedad de Grave, trasplante de cornea y trasplante de otros tejidos, inflamacion cronica, inflamacion pulmonar, sindrome nefrotico, preeclampsia, ascitis, derrame pericardico, derrame pericardico con pericarditis o derrame pleural.

3. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el metodo para tratar una enfermedad o un trastorno es un metodo para prevenir la aparicion o la reaparicion de retinopatia ocular o proliferacion endotelial en el ojo.

4. La composicion para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la enfermedad o el trastorno es un cancer.

5. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 4, en donde el metodo comprende administrar simultaneamente al sujeto dicha cantidad eficaz del antagonista opioideo periferico y una cantidad eficaz de un agente antineoplasico.

6. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 5, en donde el agente antineoplasico es un agente antineovascularizacion.

7. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 6, en donde el agente antineovascularizacion es un anticuerpo monoclonal anti-VEGF.

8. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 7, en donde el anticuerpo monoclonal anti-VEGF es bevacizumab.

9. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 5, en donde el agente antineoplasico es 5-fluorouracilo.

10. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 2, en donde la enfermedad o el trastorno es diabetes.

11. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 2, en donde la enfermedad o el trastorno es anemia de celulas falciformes.

12. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 2, en donde la enfermedad o el trastorno es una herida vascular.

13. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 2, en donde la enfermedad o el trastorno es una enfermedad neovascular del ojo.

14. La composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 13, en donde la enfermedad o el trastorno es una retinopatia proliferativa.

15. La composicion para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde el sujeto esta tomando simultaneamente una terapia con opioides.

16. La composicion para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde el sujeto no esta tomando simultaneamente una terapia con opioides.

17. La composicion para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde el sujeto esta tomando simultaneamente una terapia con opioides cronica.

18. La composicion para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde el sujeto no esta tomando simultaneamente una terapia con opioides cronica.