PT2692345T - Composição farmacêutica para prevenir ou tratar a degeneração macular - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

"COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA PREVENIR OU TRATAR A DEGENERAÇÃO MACULAR"

CAMPO TÉCNICO A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica para prevenir ou tratar a degeneração macular, que compreende derivados de benzopirano substituídos com aminas secundárias incluindo imidazol ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos como ingrediente ativo.

ESTADO DA TÉCNICA ANTERIOR 0 tecido nervoso localizado no centro da retina do olho designa-se por mácula. A mácula inclui a maior parte das células fotorrecetoras que respondem a estímulos luminosos, e as aparências dos objetos são focadas no centro da mácula. Consequentemente, a mácula desempenha uma função essencial na conservação da visão. A degeneração macular relacionada com a idade (DMRI) é uma doença crónica caracterizada pelas degenerações do epitélio pigmentar da retina e da membrana de Bruch na mácula, assim como dos capilares da coróide. Anatomicamente, a retina sensorial está localizada à frente do epitélio pigmentar da retina. A nutrição, suporte, reciclagem e tratamento dos resíduos da retina sensorial dependem do epitélio pigmentar da retina. A membrana de Bruch apresenta uma estrutura de cinco camadas e está ensanduichada entre a coróide e o epitélio pigmentar da retina. A camada mais interior é uma membrana basal do epitélio pigmentar da retina e a camada mais exterior é uma membrana basal da capilar da coróide. Isto é, a degeneração macular é uma doença degenerativa que ocorre no complexo do epitélio pigmentar da retina, da membrana de Bruch e da capilar da coróide.

Esta doença, que ocorre principalmente em idades acima dos 50 anos, é a principal causa de cegueira na população com mais de 60 anos nos países ocidentais, e a tendência da mesma está a aumentar também na Coreia. Embora a causa da degeneração macular relacionada com a idade ainda não esteja esclarecida, os fatores de risco incluem a idade (especialmente, um aumento acentuado a partir dos 75 anos), o tabagismo (fator de risco ambiental mais notório), pressão arterial alta, obesidade, causas genéticas, exposição excessiva aos raios UV, concentração baixa de antioxidantes no sangue e afins.

Existem dois tipos de degeneração macular, isto é, a degeneração macular seca (não exsudativa) e a degeneração macular húmida (exsudativa). A degeneração macular seca (DM seca, DM não exsudativa ou DM não neovascular) está associada à formação de depósitos amarelos de resíduos, conhecidos como drusas, sob a retina. A formação de uma grande quantidade de drusas causa distúrbios no fluxo de sangue para a retina, especialmente para a mácula, o que conduz a visão obscurecida, provocando deste modo deficiência visual. Embora a degeneração macular seca não cause uma perda de visão repentina, pode transformar-se em degeneração macular húmida. Sob a retina situa-se a coróide, que contém um conjunto de vasos imcorporados no tecido fibroso e no epitélio pigmentar que reveste a camada coróide. A degeneração macular húmida (DM húmida, DM exsudativa ou DM neovascular) está associada à angiogénese da área da coróide sob a retina. A rotura destes neovasos fracos causa hemorragia e exsudação, o que leva à degeneração na área da mácula da retina, provocando deste modo deficiência visual. Uma vez que a degeneração macular húmida se desenvolve muito rapidamente, sabe-se que a visão pode deteriorar-se em várias semanas, ou que a perda de visão pode ocorrer entre 2 meses e 3 anos.

Como terapia para a degeneração macular, utilizam-se atualmente uma terapia fotodinâmica (TFD) e uma terapia por injeção de anticorpo sobre fator de crescimento angiogénico. A terapia fotodinâmica é um método que compreende injetar um fotossensibilizador (Visudyne) nos vasos sanguíneos, seguido de irradiação do olho com um laser específico que é reativo apenas ao fotossensibilizador no momento em que este chega aos neovasos da retina, de modo a destruir, seletivamente, os neovasos . No entanto, a terapia fotodinâmica causa muitos casos de recidiva após o tratamento, o que requer tratamentos repetidos. Existe também a desvantagem de os tratamentos repetidos causarem danos na própria retina. A terapia por injeção de anticorpo é um método através do qual um anticorpo anti-VEGF é injetado diretamente na retina, o que inibe a formação e proliferação de neovasos através da ligação seletiva ao fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF), critico para a formação e progressão de neovasos. Como fármaco à base de proteina utilizado na terapia por injeção de anticorpo, existem Lucentis e Avastin. Lucentis foi aprovado pela FDA como agente terapêutico da degeneração macular húmida. Embora o Avastin esteja aprovado para tratar o cancro, está a ser utilizado clinicamente para tratar a DM húmida. A terapia por injeção de anticorpo apresenta algumas desvantagens: por exemplo, implica um alto custo terapêutico, administração local (especialmente a administração direta no olho) e injeções repetidas. Consequentemente, em termos da comformidade dos pacientes com o fármaco, do custo terapêutico, etc., existe a necessidade de desenvolver uma formulação de colirio (não injetável) com base num composto sintético de baixo peso molecular.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO PROBLEMA TÉCNICO

Os presentes inventores realizaram várias pesquisas para desenvolver compostos eficazes para prevenir e tratar a degeneração macular. Como resultado, os presentes inventores descobriram que determinados derivados do benzopirano que têm efeitos terapêuticos no cancro, na artrite reumatóide, etc., relatados anteriormente pelos presentes inventores, podem ser preparados como uma formulação de colirio com base num material de baixo peso molecular e aplicados proveitosamente na prevenção e tratamento da degeneração macular, sem injetar diretamente no local afetado como na terapia por injeção de anticorpo. Derivados do benzopirano são divulgados em Park Shi-Young et ai. (2008), EP 1782812 e WO 2004/014898.

Deste modo, é objeto da presente invenção providenciar uma composição farmacêutica para prevenir ou tratar a degeneração macular, gue compreende um determinado derivado do benzopirano como ingrediente ativo.

SOLUÇÃO TÉCNICA

De acordo com a presente invenção, é providenciada uma composição farmacêutica que compreende (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo para utilização na prevenção ou tratamento da degeneração macular, em que a composição farmacêutica é uma formulação de colirio para administrar na córnea de um olho, para entregar o ingrediente ativo na retina do olho. A presente divulgação refere-se a uma composição farmacêutica para prevenir ou tratar a degeneração macular, que compreende um composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo: <Fórmula 1>

em que, R1 representa H, CN, NCq ou Nfh, R2 representa

s R3 e R4 são independentes um do outro e representam alquilo linear ou ramificado H, Cl, Br, F, Ci ~ C3, 0Rb, CF3, OCF3, N02 ou C02Rb,

Ra representa alquilo linear ou ramificado Ci ~ C4,

Rb representa alquilo H ou Ci ~ C3, e * representa o centro quiral. A presente divulgação refere-se a uma composição farmacêutica para prevenir ou tratar a degeneração macular, que compreende (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo. A presente divulgação refere-se a uma formulação de colirio para prevenir ou tratar a degeneração macular, que compreende (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo. A formulação de colirio pode apresentar-se sob a forma de solução ou sob a forma de suspensão.

EFEITOS VANTAJOSOS

Foi recentemente descoberto pela presente divulgação que o composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser aplicado proveitosamente na prevenção e tratamento da degeneração macular, a doença degenerativa dos capilares da coróide da retina. Especialmente, a partir da presente invenção constata-se que, quando (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é administrado na córnea sob a forma de colirio, é entregue na retina sem inibir a regeneração normal das células epiteliais da córnea. Consequentemente, o composto de Fórmula 1, incluindo

(2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser aplicado proveitosamente para prevenir ou tratar a degeneração macular numa formulação de colirio. DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A FIG. 1 apresenta os resultados (fotografias) obtidos pela avaliação dos efeitos inibitórios sobre a angiogénese corneana em modelos animais com danos na córnea.

As Figuras 2 e 3 apresentam os resultados (gráficos) obtidos pela avaliação dos efeitos inibitórios sobre a angiogénese corneana em modelos animais com danos na córnea. A FIG. 4 apresenta os resultados obtidos pela avaliação dos efeitos inibitórios sobre a expressão do recetor 2 (FLK-1) do VEGF. A FIG. 5 apresenta os resultados (fotografias) obtidos pela avaliação dos efeitos sobre a regeneração normal das células epiteliais da córnea. A FIG. 6 apresenta os resultados (gráficos) obtidos pela avaliação dos efeitos sobre a regeneração normal das células epiteliais da córnea. A FIG. 7 apresenta os resultados (fotografias) obtidos pela avaliação dos efeitos inibitórios sobre a angiogénese da retina em ratos Brown Norway. A FIG. 8 apresenta os resultados (gráficos) obtidos pela avaliação dos efeitos inibitórios sobre a angiogénese da retina em ratos Brown Norway. A FIG. 9 apresenta os resultados (fotografias) obtidos pela avaliação dos efeitos inibitórios sobre a angiogénese da retina em micro-porcos. A FIG. 10 apresenta os resultados (gráficos) obtidos pela avaliação dos efeitos inibitórios sobre a angiogénese da retina em micro-porcos. A FIG. 11 apresenta os resultados (fotografias) obtidos pela avaliação dos efeitos inibitórios da solução de colirio e da suspensão de colírio sobre a angiogénese da retina. A FIG. 12 apresenta os resultados (gráficos) obtidos pela avaliação dos efeitos inibitórios da solução de colírio e da suspensão de colírio sobre a angiogénese da retina.

MELHOR MANEIRA DE REALIZAR A INVENÇÃO A presente divulgação descreve uma composição farmacêutica para prevenir ou tratar a degeneração macular, gue compreende um composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo: <Fórmula 1>

em que, R1 representa H, CN, NCq ou

NH2, R2 representa 1 R3 e R4 são independentes um do outro e representam alquilo linear ou ramificado H, Cl, Br, F, Ci ~ C3 alquilo, 0Rb, CF3, 0CF3, N02 ou C02Rb,

Ra representa alquilo linear ou ramificado Ci ~ C4,

Rb representa alquilo H ou C1-C3, e * representa o centro quiral.

Na composição farmacêutica da presente divulgação, o composto de Fórmula 1 pode ser selecionado do grupo que consiste em: (2 S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2S,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2R,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-trifluorometilfenil)-N-(lH-imi dazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil- 3,4-diidro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3, 4-diid ro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-trifluorometoxifenil)-N-(lH-im idazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil -3,4-diidro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-bromofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(2,4-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol -2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-d iidro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(2-isopropilfenil)-N-(lH-imidazol -2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-d iidro-2H-l-benzopirano; (2 S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(2,3-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol -2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-d iidro-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(2,3-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol -2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-d iidro-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(4-bromofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2R, 3R,4S)-6-nitro-4-[N-(4-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diid ro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4 — fluorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diid ro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(2-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diid ro-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(2-isopropilfenil)-N-(lH-imidazol -2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-d iidro-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(2-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3, 4-diid ro-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(3-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2 S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(3-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(4-trifluorometoxifenil)-N-(lH-im idazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil -3,4-diidro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-ciano-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-trifluorometilfenil)-N-(lH-imi dazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil- 3,4-diidro-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-trifluorometoxifenil)-N-(lH-im idazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil -3,4-diidro-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(2,3-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol -2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-d iidro-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diid ro-2H-l-benzopirano; (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-bromofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(2,3-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol -2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-d iidro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(2-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diid ro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diid ro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(2,4-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol -2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-d iidro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(2-isopropilfenil)-N-(lH-imidazol -2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-d iidro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-trifluorometoxifenil)-N-(lH-im idazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil -3,4-diidro-2H-l-benzopirano; (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-bromofenil)-N-(lH-imidazol-2-i lmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-l-benzopirano; e (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-fluorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diid ro-2H-l-benzopirano.

Entre os compostos de Formula 1, um composto especialmente preferencial é (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Consequentemente, a presente divulgação refere-se a uma composição farmacêutica para prevenir ou tratar a degeneração macular, que compreende (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo. 0 composto de Fórmula 1 pode ser utilizado como um sal farmaceuticamente aceitável, incluindo, por exemplo, um sal de adição de ácido derivado de ácidos livres farmaceuticamente aceitáveis, um sal de metal alcalino (sal de sódio, sal de potássio, etc.) e um sal de metal alcalino-terroso (sal de cálcio, sal de magnésio, etc.) . 0 ácido livre inclui um ácido inorgânico e um ácido orgânico. 0 ácido inorgânico inclui ácido clorídrico, ácido hidrobrómico, ácido nitrico, ácido sulfúrico, ácido perclórico, ácido fosfórico, etc. 0 ácido orgânico inclui ácido citrico, ácido acético, ácido láctico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido metanossulfónico, ácido glicólico, ácido succinico, ácido tartárico, ácido galacturónico, ácido embónico, ácido glutâmico, ácido aspártico, ácido oxálico, ácido málico (D) ou (L) , ácido maleico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido 4-toluenossulfónico, ácido salicilico, ácido citrico, ácido benzóico, ácido malónico, etc. Exemplos dos sais farmaceuticamente aceitáveis do composto de Fórmula 1 incluem acetato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, edicilato, ecilato, formato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, cloridrato/cloreto, hidrobrometo/brometo, hidroiodeto/iodeto, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilssulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, famoato, fosfato/diidrogénio-fosfato/hidrogénio-fosfato, sacarato, estearato, succinato, tartrato, tosilato, trifluoroacetato, sal de aluminio, sal de arginina, sal de benzatina, sal de cálcio, sal de colina, sal de dietilamina, sal de diolamina, sal de glicina, sal de lisina, sal de magnésio, sal de meglumina, sal de olamina, sal de potássio, sal de sódio, sal de trometamina, sal de zinco, etc. Entre eles, cloridrato e/ou trifluoroacetato são preferenciais.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis do composto de Fórmula 1 podem ser preparados de acordo com métodos convencionais. Por exemplo, o sal de adição de ácido pode ser preparado dissolvendo o composto de Fórmula 1 num solvente orgânico miscivel com água, tal como acetona, metanol, etanol ou acetonitrilo, e adicionando depois um ácido orgânico em excesso ou uma solução aquosa de um ácido inorgânico, de modo a precipitar ou cristalizar o sal resultante. Posteriormente, o sal de adição de ácido pode ser isolado evaporando o solvente ou o ácido excessivo e secando depois o residuo resultante, ou através de filtração por aspiração do sal precipitado. E também, o composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo inclui os seus isómeros, hidratos e solvatos. 0 composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo mostra atividade inibitória sobre a angiogénese corneana e atividade inibitória sobre a expressão do marcador de angiogénese corneana, FLK-1 (ver Figuras 1 a 4) . A capacidade de cicatrização normal (capacidade de regeneração) das células epiteliais da córnea não é inibida pela composição farmacêutica da presente invenção (ver Figuras 5 e 6) . E também, o composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo mostra excelente atividade para prevenir ou tratar a degeneração macular, uma doença induzida pela degeneração dos capilares da coróide da retina (ver Figuras 7 a 10) . Especialmente, descobriu-se que o composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser preparado numa forma externa de formulação de colírio administrável topicamente, que mostra excelente atividade para prevenir ou tratar a degeneração macular sem injetar no local afetado (ver Figuras 11 e 12). Além disso, a partir da presente invenção constata-se que, quando a formulação de colírio é administrada na córnea, o ingrediente ativo é entregue eficazmente na retina, sendo apenas uma quantidade negligenciável absorvida no sangue (ver o Quadro 1) .

Consequentemente, a presente divulgação refere-se a uma formulação de colírio para prevenir ou tratar a degeneração macular, que compreende um composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo. Em particular, a presente divulgação refere-se a uma formulação de colírio para prevenir ou tratar a degeneração macular, que compreende (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo. A formulação de colírio pode apresentar-se sob a forma de solução ou sob a forma de suspensão.

Por exemplo, uma formulação de colírio sob a forma de solução pode compreender um solubilizante, tal como polietilenoglicol 400, glicerina, etc.; um estabilizante, tal como EDTA, etc. ; um agente tampão, tal como ácido bórico, etc. ; um agente controlador de pH, tal como ácido clorídrico, hidróxido de sódio, etc., além do composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (por exemplo, (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano ou o seu sal) . E também, uma formulação de colírio sob a forma de suspensão pode compreender um agente controlador de viscosidade, tal como polivinilpirrolidona de ligação cruzada (por exemplo, povidona K-25) etc.; um agente isotónico, tal como cloreto de sódio, etc.; um estabilizante, tal como EDTA, etc.; um agente tampão, tal como ácido bórico, bórax, etc.; um agente controlador de pH, tal como ácido clorídrico, hidróxido de sódio, etc., além do composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (por exemplo, (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano ou o seu sal) . Se necessário, a composição farmacêutica sob a forma de formulação de colírio pode ser esterilizada de acordo com métodos convencionais ou compreender adicionalmente um agente suplementar, tal como um conservante, um agente hidratante, um emulsionante, um agente solubilizante, um sal para controlar a pressão osmótica e/ou um agente tampão.

Na composição farmacêutica da presente divulgação, o composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrado numa quantidade de tipicamente aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg/dia, preferencialmente 0,03 a 80 mg/dia com base em adultos com 70 Kg de peso corporal, embora a quantidade possa ser alterada de acordo com a idade do paciente, peso corporal, sexo, forma de dosagem, estado de saúde, gravidade da doença, etc. A administração pode ser realizada a intervalos apropriados, por exemplo, em dose única ou em doses diárias divididas, de acordo com as instruções do médico ou do farmacêutico. A presente divulgação refere-se à utilização de um composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para o fabrico de um medicamento para prevenir ou tratar a degeneração macular: <Fórmula 1>

em que, R1, R2, R3 e R4 são como definidos anteriormente e * representa o centro quiral.

Na presente divulgação, o composto de Fórmula 1 pode ser preferencialmente (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano. 0 medicamento pode apresentar-se sob a forma de solução ou sob a forma de suspensão. Na presente divulgação, o composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrado numa quantidade de tipicamente aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg/dia, preferencialmente 0,03 a 80 mg/dia com base em adultos com 70 Kg de peso corporal, embora a quantidade possa ser alterada de acordo com a idade do paciente, peso corporal, sexo, forma de dosagem, estado de saúde, gravidade da doença, etc. A administração pode ser realizada a intervalos apropriados, por exemplo, em dose única ou em doses diárias divididas, de acordo com as instruções do médico ou do farmacêutico. A presente divulgação refere-se a um método para prevenir ou tratar a degeneração macular num paciente, que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ao paciente que necessita do mesmo: <Fórmula 1>

em que, R1, R2, R3 e R4 são como definidos anteriormente e * representa o centro quiral.

No método para prevenir ou tratar a degeneração macular da presente divulgação, o composto de Fórmula 1 pode ser preferencialmente (2R, 3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano. 0 composto pode ser administrado numa formulação de colirio sob a forma de solução ou sob a forma de suspensão. No método para prevenir ou tratar a degeneração macular da presente divulgação, o composto de Fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrado numa quantidade de tipicamente aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg/dia, preferencialmente 0,03 a 80 mg/dia com base em adultos com 70 Kg de peso corporal, embora a quantidade possa ser alterada de acordo com a idade do paciente, peso corporal, sexo, forma de dosagem, estado de saúde, gravidade da doença, etc. A administração pode ser realizada a intervalos apropriados, por exemplo, em dose única ou em doses diárias divididas, de acordo com as instruções do médico ou do farmacêutico. A presente divulgação será descrita mais detalhadamente com referência aos seguintes exemplos de preparação e exemplos . Estes exemplos de preparação e exemplos são apenas para fins ilustrativos e não se destinam a limitar o âmbito da presente invenção.

Exemplo de Preparação 1: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano 0 composto de epóxido, (2S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (437 mg, 1,55 mmol) e (4-clorofenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (323 mg, 1,55 mmol) foi dissolvido em acetonitrilo (2 ml) . À solução resultante foi adicionado cloreto de cobalto anidro (C0CI2) (202 mg, 1,55 mmol). A mistura de reação foi agitada a 60 °C durante 10 horas e depois uma solução aquosa saturada de NaHCCR (5 ml) foi adicionada à mistura, que foi extraida com acetato de etilo (30 ml). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SC>4 anidro e depois concentrada sob pressão reduzida. O residuo resultante foi purificado por cromatografia de coluna de gel de silica (hexano:acetato de etilo=2:l) para dar o composto do titulo (304 mg, 40%). ΧΗ NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,4 9 (s, 3H) , 3, 60 (s, 3H) , 3, 63 (s, 3H) , 4,32 (m, 1 H) , 4,57(s, 1 H) , 5,14(s 1, 1 H) , 6,75(s 1, 2H) , 6, 97 (m, 4H) , 7,27(m, 2H) , 7,93(s, 1 H) , 8,08 (d, 1 H) . Exemplo de Preparação 2: Preparação de (2S,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano O composto do titulo (76 mg, 34%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2 S, 3R, 4R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-diidro-2H -1-benzopirano (129 mg, 0,46 mmol) e (4-clorofenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (95 mg, 0,46 mmol). ΧΗ NMR (2 0 0 MHz, CDCI3) δ 1, 66 (s, 3H), 3, 60 (s, 3H), 3, 69 (s, 3H) , 3, 87 (s 1, 1 H) , 4,13(m, 1 H) , 4,29(d, 1 H) , 4,43(d, 1 H) , 4, 64 (s, 1 H) , 5, 64 (d, 1 H) , 6,83(d, 2H) , 6, 95 (m, 4H) , 7,15(d, 2H) , 7, 8 6 (s, 1 H) , 8,06(m, 2H) , 8,41 (s, 1 H) .

Exemplo de Preparação 3: Preparação de (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano 0 composto do título (2,13 g, 64%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2R,3R,4R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (1,038 g, 3,7 mmol) e (4-clorofenil) (1 H-imidazol-2-ilmetil)amina (766 mg, 3,7 mmol). NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,4 9 (s, 3H) , 3, 60 (s, 3H) , 4,32 (m, 1 H) , 4,57 (s, 1 H) , 5, 14 (s 1, 1 H) , 6,75(s 1, 2H) , 6, 97 (m, 4H) , 7,27 (m, 2H) , 7,93(s, 1 H) , 8,08 (d, 1 H) .

Exemplo de Preparação 4: Preparação de (2R,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano 0 composto do título (269 mg, 63%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2R,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (250 mg, 0,88 mmol) e (4-clorofenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (183 mg, 0,88 mmol). XH NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1, 66 (s, 3H), 3, 60 (s, 3H), 3, 69 (s, 3H) , 3, 87 (s 1, 1 H) , 4,13(m, 1 H) , 4,29(d, 1 H) , 4,43(d, 1 H) , 4, 64 (s, 1 H) , 5, 64 (d, 1 H) , 6,83(d, 2H) , 6, 95 (m, 4H) , 7,15(d, 2H) , 7, 8 6 (s, 1 H) , 8,06(m, 2H) , 8,41 (s, 1 H) .

Exemplo de Preparação 5: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-trifluorometilfenil)-N-(lH-imida zol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H-1-benzopirano O composto do título (146 mg, 22%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2 S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (356 mg, 1,26 mmol) e (4-trifluorometilfenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (305 mg, 1,26 mmo1). NMR (200 MHz, CDC13) δ l,51(s, 3H) , 3,60(s, 3H) , 3,61 (s, 3H), 4,32 (m, 3H), 4,57 (s, 1 H), 5, 14 (s 1, 1 H), 6, 8 5 (m, 2H), 6, 95 (m, 4H) , 7,38 (d, 2H) , 7,91 (s, 1 H) , 8,05(dd, 2H) , 8,42(m, 1 H) .

Exemplo de Preparação 6: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-il metil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2 H-1-benzopirano O composto do título (280 mg, 28%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2 S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (591 mg, 2,10 mmol) e (4-metoxifenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (427 mg, 2,10 mmol). NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,47 (s, 3H) , 3,5 9 (d, 6H) , 3, 68 (s, 3H) , 4,30(m, 2H) , 4,54(m, 2H) , 5,02(d, 1 H) , 6, 67-6, 78(m, 4H) , 6, 89-7,26(m, 3H) , 8,04(m, 2H) .

Exemplo de Preparação 7: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-trifluorometoxifenil)-N-(lH-imid azol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4 -diidro-2H-l-benzopirano O composto do título (181 mg, 47%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2 S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (200 mg, 0,71 mmol) e (4-trifluorometoxifenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (183 mg, 0,71 mmo1). ΧΗ NMR (200 MHz, CDC13) δ l,50(s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 4,2-4,50 (m, 2H) , 4,58-5, 65 (m, 2H), 5,18(s, 1 H) , 6, 91-6,95 (m, 7H) , 8,00 (s, 1 H) , 8,05(dd, 1 H) .

Exemplo de Preparação 8: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-bromofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano 0 composto do título (310 mg, 41%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (400 mg, 1,42 mmol) e (4-bromofenil)(1 H-imidazol-2-ilmetil)amina (359 mg, 1,42 mmol). XH NMR (200 MHz, CDC13) δ l,48(s, 3H) , 3, 61 (d, 6H) , 4, 10-4, 19 (m, 2H) , 4,20-4,40(m, 2H) , 5,13(s, 1 H) , 6,70-7,01 (m, 6H), 7,21 (s, 1 H), 7,94 (s, 1 H), 8,06(dd, 1 H) .

Exemplo de Preparação 9: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(2,4-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol-2 -ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-1-benzopirano O composto do título (231 mg, 33%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2 S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (400 mg, 1,42 mmol) e (2,4-dimetilfenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (287 mg, 1,42 mmol). ΧΗ NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,39 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,47 (s, 3H) , 3,59(d, 6H) , 4,15-4,82 (m, 5H) , 6, 80-6, 89(m, 5H) , 7,58(d, 1 H) , 7, 94-7, 99 (dd, 1 H) , 8,62(m, 1 H) .

Exemplo de Preparação 10: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(2-isopropilfenil)-N-(lH-imidazol-2 -ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-1-benzopirano O composto do título (140 mg, 20%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2 S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (400 mg, 1,42 mmol) e (2-isopropilfenil) (1 H-imidazol-2-ilmetil)amina (306 mg, 1,42 mmol). NMR (200 MHz, CDC13) δ 1,22-1,2 9 (m, 10H), 3,60(d, 6H) , 4, 07-4, 63 (m, 5H) , 6, 79-7,35(m, 6H) , 7,78(m, 1 H) , 7,99(dd, 1 H) , 8,61 (m, 1 H)

Exemplo de Preparação 11: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(2,3-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol-2 -ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-1-benzopirano O composto do título (253 mg, 37%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (400 mg, 1,42 mmol) e (2,3-dimetilfenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (287 mg, 1,42 mmol). NMR (200 MHz, CDC13) δ l,39(s, 3H) , 2,17(s, 3H) , 2,41 (s, 3H) , 3,61 (d, 6H) , 4,26-4,74(m, 5H) , 6, 76-6, 95(m, 4H) , 6, 98 (m, 1 H) , 7,58 (d, 1 H) , 7,95(dd, 1 H) , 8, 63 (d, 1 H) . Exemplo de Preparação 12: Preparação de (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(2,3-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol-2 -ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-1-benzopirano 0 composto do título (416 mg, 49%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2R,3R,4R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (500 mg, 1,77 mmol) e (2,3-dimetilfenil) (1 H-imidazol-2-ilmetil)amina (358 mg, 1,77 mmol). ΧΗ NMR (200 MHz, CDC13) δ l,39(s, 3H) , 2,17(s, 3H) , 2,41 (s, 3H) , 3,61 (d, 6H) , 4,26-4,74(m, 5H) , 6, 76-6, 95(m, 4H) , 6, 98 (m, 1 H) , 7,58 (d, 1 H) , 7,95(dd, 1 H) , 8, 63 (d, 1 H) . Exemplo de Preparação 13: Preparação de (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(4-bromofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano 0 composto do título (570 mg, 60%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2R,3R,4R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (500 mg, 1,78 mmol) e (4-bromofenil)(1 H-imidazol-2-ilmetil)amina (450 mg, 1,78 mmol). NMR (200 MHz, CDC13) δ l,48(s, 3H) , 3, 61 (d, 6H) , 4, 10-4, 19 (m, 2H) , 4,20-4,40(m, 2H) , 5,13(s, 1 H) , 6,70-7,01 (m, 6H), 7,21 (s, 1 H), 7,94 (s, 1 H), 8,06(dd, 1 H) .

Exemplo de Preparação 14: Preparação de (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(4-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-il metil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2 H-1-benzopirano 0 composto do título (446 mg, 86%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2R,3R,4R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (300 mg, 1,06 mmol) e (4-metoxifenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (216 mg, 1,06 mmol). XH NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,47 (s, 3H) , 3,5 9 (d, 6H) , 3, 68 (s, 3H) , 4,30 (m, 2H) , 4,54(m, 2H) , 5,02(d, 1 H) , 6, 67-6, 78(m, 4H) , 6, 89-7,26(m, 3H) , 8,04(m, 2H) .

Exemplo de Preparação 15: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(4-fluorofenil)-N-(lH-imidazol-2-il metil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2 H-1-benzopirano 0 composto do título (650 mg, 48%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (800 mg, 2,84 mmol) e (4-fluorofenil)(1 H-imidazol-2-ilmetil)amina (380 mg, 1,8 mmol). NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,4 9 (s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 4,3 0 (m, 2H) , 4,60(m, 2H) , 5,05(m, 1 H) , 6, 76-6, 97(m, 7H) , 7,95(s, 1 H) , 8,03(dd, 1 H)

Exemplo de Preparação 16: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(2-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-il metil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2 H-1-benzopirano 0 composto do título (500 mg, 58%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (500 mg, 1,78 mmol) e (2-metoxifenil)(1 H-imidazol-2-ilmetil)amina (253 mg, 1,25 mmol). NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,3 8 (s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 3, 91 (s, 3H) , 3, 97 (m, 1H) , 4,74(d, 1H) , 4, 60-4, 84(m, 3H) , 6, 80-7,03(m, 6H) , 7,58(m, 1H) , 7,99(dd, 1H) , 8,86(m, 1 H)

Exemplo de Preparação 17: Preparação de (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(2-isopropilfenil)-N-(lH-imidazol-2 -ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-1-benzopirano O composto do título (72 mg, 42%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2R,3R,4R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (100 mg, 0,35 mmol) e (2-isopropilfenil)(1 H-imidazol-2-ilmetil)amina (75 mg, 0,35 mmol). ^ NMR (200 MHz, CDC13) δ 1,22-1,29(m, 10H), 3,60(d, 6H) , 4, 07-4, 63 (m, 5H) , 6, 79-7,35(m, 6H) , 7,78(m, 1 H) , 7,99(dd, 1 H) , 8,61 (m, 1 H) .

Exemplo de Preparação 18: Preparação de (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(2-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-il metil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2 H-1-benzopirano 0 composto do título (580 mg, 67%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2R,3R,4R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (500 mg, 1,78 mmol) e (2-metoxifenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (231 mg, 1,78 mmol). NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,3 8 (s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 3, 91 (s, 3H) , 3, 97 (m, 1 H) , 4,74(d, 1 H) , 4, 60-4, 84(m, 3H) , 6, 80-7,03(m, 6H) , 7,58(m, 1 H) , 7,99(dd, 1 H) , 8,86(m, 1 H) .

Exemplo de Preparação 19: Preparação de (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(3-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano O composto do título (337 mg, 39%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2R,3R,4R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (500 mg, 1,77 mmol) e (3-clorofenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (366 mg, 1,77 mmol). XH NMR (200 MHz, CDC13) δ 1,51 (s, 3H) , 3,61 (d, 6H) , 4,2 0-4,57 (m, 2H), 4,57-4,5 9 (m, 2H), 5,17 (s, 1 H) , 6, 6 9- 6, 7 3(m, 3H) , 6,94-7,01 (m, 4H) , 7,89(m, 1 H) , 8,04(dd, 1 H) .

Exemplo de Preparação 20: Preparação de (2S,3S,4R)-6-nitro-4-[N-(3-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano O composto do título (280 mg, 35%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2 S,3S,4S)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (450 mg, 1,6 mmol) e (3-clorofenil) (1 H-imidazol-2-ilmetil)amina (232 mg, 1,1 mmol). NMR (200 MHz, CDC13) δ 1,51 (s, 3H) , 3,61 (d, 6H) , 4.20- 4,57(m, 2H), 4,57-4,5 9 (m, 2H), 5,17 (s, 1 H) , 6, 69- 6, 7 3 (m, 3H) , 6,94-7,01 (m, 4H) , 7,89(m, 1 H) , 8,04(dd, 1H) .

Exemplo de Preparação 21: Preparação de (2R,3R,4S)-6-nitro-4-[N-(4-trifluorometoxifenil)-N-(lH-imid azol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4 -diidro-2H-l-benzopirano 0 composto do título (155 mg, 40%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2R,3R,4R)-6-nitro-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (200 mg, 0,71 mmol) e (4-trifluorometoxifenil) (1 H-imidazol-2-ilmetil)amina 183 mg (0,71 mmo1). NMR (200 MHz, CDCl3) δ l,49(s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 4.20- 4,50(m, 2H) , 4,58-5, 65 (m, 2H) , 5,18(s, 1 H) , 6, 91-6, 95 (m, 7H), 7,99 (s, 1 H), 8,04(dd, 1 H) .

Exemplo de Preparação 22: Preparação de (2S,3S,4R)-6-ciano-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano O composto do título (106 mg, 28%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 1, utilizando o composto de epóxido, (2 S,3S,4S)-6-ciano-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-epoxi-3,4-di idro-2H-l-benzopirano (210 mg, 0,8 mmol) e (4-clorofenil)(lH-imidazol-2-ilmetil)amina (167 mg, 0,8 mmol). ΧΗ NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,47 (s, 3H) , 3,58 (s, 3H) , 3, 62 (s, 3H) , 4,35 (m, 1H) , 4,57(s, 1H) , 5,16(sl, 1 H) , 6,81-6,93 (m, 3H) , 7,17(d, 1 H), 7,38(s, 1 H), 7,51 (dd, 1 H).

Exemplo de Preparação 23: Preparação de (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano O composto nitro (521 mg, 1,07 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 3 foi dissolvido em metanol (3 ml) e depois 10% Pd/C (50 mg) foi adicionado ao mesmo. A mistura foi hidrogenada sob 3 pressão atmosférica de 1¾ durante 12 horas. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite para remover um sólido, e o filtrado foi concentrado. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna de gel de sílica (metanol:diclorometano = 5:95) para dar o composto do título (368 mg, 75%) . ΧΗ NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,42 (s, 3H) , 3, 61 (s, 6H) , 4,2 7 (m, 2H) , 4,42 (s, 1 H) , 4,52(d, 1 H) , 5,24(m, 1 H) , 6,29(s, 1 H) , 6,58(d, 2H), 6,7 0(d, 2H), 6,98(m, 3H), 7,41 (m, 2H) .

Exemplo de Preparação 24: Preparação de (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano O composto nitro (177 mg, 0,36 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 1 foi dissolvido em metanol (2 ml) e depois uma solução aquosa 0,4 M de Cu (OAc) 2 (0,38 ml, 0,15 mmol) foi adicionada ao mesmo. Borohidrato de sódio (113 mg, 3, 0 mmol) foi adicionado lentamente à temperatura ambiente durante 10 minutos à mistura de reação. A mistura de reação foi agitada durante uma hora e depois foi adicionado acetato de etilo (5 ml) à mesma. Os precipitados pretos foram removidos por filtração e depois uma solução aquosa saturada de NaHC03 (5 ml) foi adicionada ao filtrado. A mistura foi extraída com acetato de etilo (30 ml). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e depois concentrada a vácuo para remover o solvente. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna de gel de sílica (n-hexano:acetato de etilo = 1:4) para dar o composto do título (58 mg, 35%). ΧΗ NMR (2 0 0 MHz, CDCI3) δ 1,42 (s, 3H) , 3, 61 (s, 6H) , 4,2 7 (m, 2H) , 4,52 (d, 1H) , 4,42(s, 1H) , 5,24(m, 1H) , 6,29(s, 1H) , 6,58(d, 2H), 6,7 0(d, 2H), 6,98(m, 3H), 7,41 (m, 2H) .

Exemplo de Preparação 25: Preparação de (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-trifluorometilfenil)-N-(lH-imida zol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H-1-benzopirano 0 composto do título (34 mg, 57%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 24, utilizando o composto nitro (65 mg, 0,12 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 5. XH NMR (200 MHz, CDC13) δ l,38(s, 3H) , 3,60(s, 3H) , 4, 0 6-4, 85 (m, 3H), 4,41 (s, 1 H), 5,06(s 1, 2H), 6,31 (s, 1 H), 6,57(d, 2H), 6,80-7,18(m, 7H)

Exemplo de Preparação 26: Preparação de (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-trifluorometoxifenil)-N-(lH-imid azol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4 -diidro-2H-l-benzopirano O composto do título (23 mg, 24%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (100 mg, 0,19 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 21. XH NMR (200 MHz, CDC13) δ l,50(s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 4,20-4,50 (m, 2H) , 4,59(s, 2H) , 5,18(s, 1 H) , 6,30(s, 1 H) , 6,60(dd, 2H), 6,70-6,96(m, 6H)

Exemplo de Preparação 27: Preparação de (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(2,3-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol-2 -ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-1-benzopirano O composto do título (19 mg, 15%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (135 mg, 0,28 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 12. NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,2 9 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,43 (s, 3H) , 3,60 (s, 6H) , 4,41-4,63(m, 5H) , 6,57(dd, 1 H), 6,70-7,19(m, 6H), 7,40(d, 1 H)

Exemplo de Preparação 28: Preparação de (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-il metil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2 H-1-benzopirano 0 composto do título (21 mg, 23%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (100 mg, 0,21 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 14. XH NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,3 6 (s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 3, 64 (s, 3H) , 4,20-4, 60(m, 3H) , 4,45(s, 1 H) , 4,70-4, 90(m, 2H) , 6,50(m, 1 H) , 6,7 0 (dd, 1 H) , 6, 80-7, 00(m, 6H) , 7,40(d, 1H) .

Exemplo de Preparação 29: Preparação de (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-bromofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano O composto do título (50 mg, 53%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (100 mg, 0,19 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 13. XH NMR (200 MHz, CDC13) δ l,48(s, 3H) , 3, 61 (d, 6H) , 4, 10-4, 19 (m, 2H) , 4,22(s, 2H) , 5,13(s, 1 H) , 6,33-7,15(m, 9H) . Exemplo de Preparação 30: Preparação de (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(2,3-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol-2 -ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-1-benzopirano O composto do título (35 mg, 54%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (70 mg, 0,14 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 11. NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,2 9 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,43 (s, 3H) , 3,60 (s, 6H) , 4,41-4,63(m, 5H) , 6,57(dd, 1 H), 6,70-7,19(m, 6H), 7,40(d, 1 H).

Exemplo de Preparação 31: Preparação de (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(2-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-il metil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2 H-1-benzopirano O composto do título (74 mg, 66%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (80 mg, 0,16 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 16. XH NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,30 (s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 3, 80 (s, 3H), 4,10-4,30 (m, 2H), 4,45(s, 1H), 4,70-4, 90 (m, 2H), 6,50 (dd, 1H), 6,70-7,00(m, 7H), 7,40(d, 1 H).

Exemplo de Preparação 32: Preparação de (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-metoxifenil)-N-(lH-imidazol-2-il metil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2 H-1-benzopirano 0 composto do titulo (74 mg, 77%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (103 mg, 0,21 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 6. XH NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,3 6 (s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 3, 64 (s, 3H), 4,20-4, 60 (m, 3H), 4,45(s, 1H), 4,70-4, 90 (m, 2H), 6,50(m, 1H) , 6,7 0 (dd, 1H) , 6, 80-7, 00(m, 6H) , 7,40(d, 1H) .

Exemplo de Preparação 33: Preparação de (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(2,4-dimetilfenil)-N-(lH-imidazol-2 -ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-1-benzopirano O composto do titulo (54 mg, 67%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (86 mg, 0,18 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 9. NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,2 6 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,43 (s, 3H) , 3,58(s, 6H) , 4,36-4,54 (m, 3H) , 4,60(m, 2H) , 6,56(dd, 1 H) , 6,70(dd, 1 H), 6,80-7,15(m, 6H), 7,36(d, 1 H).

Exemplo de Preparação 34: Preparação de (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(2-isopropilfenil)-N-(lH-imidazol-2 -ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidr o-2H-1-benzopirano O composto do titulo (30 mg, 73%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (45 mg, 0,09 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 10. ^ NMR (200 MHz, CDC13) δ l,22-l,29(m, 9H), 3, 60(d, 6H), 4, 10-4, 62 (m, 5H) , 6, 50-6, 77(m, 2H) , 6, 85-7,30(m, 6H) , 7,60(m, 1 H) .

Exemplo de Preparação 35: Preparação de (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-trifluorometoxifenil)-N-(lH-imid azol-2-ilmetil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4 -diidro-2H-l-benzopirano 0 composto do título (34 mg, 72%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (50 mg, 0,10 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 7. XH NMR (200 MHz, CDC13) δ l,50(s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 4,20-4,50 (m, 2H) , 4,59(s, 2H) , 5,18(s, 1 H) , 6,30(s, 1 H) , 6,60( dd, 2H), 6, 70-6, 96 (m, 6H) .

Exemplo de Preparação 36: Preparação de (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-bromofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano O composto do título (41 mg, 88%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (50 mg, 0,10 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 8. XH NMR (200 MHz, CDC13) δ l,48(s, 3H) , 3, 61 (d, 6H) , 4, 10-4, 19 (m, 2H) , 4,22(s, 2H) , 5,13(s, 1 H) , 6,33-7,15(m, 9H) . Exemplo de Preparação 37: Preparação de (2S,3S,4R)-6-amino-4-[N-(4-fluorofenil)-N-(lH-imidazol-2-il metil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2 H-1-benzopirano O composto do título (44 mg, 95%) foi preparado de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo de Preparação 23, utilizando o composto nitro (50 mg, 0,10 mmol) preparado a partir do Exemplo de Preparação 15. NMR (2 0 0 MHz, CDC13) δ 1,4 9 (s, 3H) , 3, 60 (d, 6H) , 4,3 0 (m, 4H) , 4,98(s, 1 H) , 6,33(s, 1 H) , 6,55(dd, 2H) , 6, 60-6, 92 (m, 6H) .

Exemplo 1. Avaliação dos efeitos inibitórios sobre a angiogénese em modelos animais com danos na córnea

Os testes foram realizados utilizando ratos Sprague Dawley (8 semanas de idade, machos) como animais com danos na córnea (15 ratos para o grupo experimental e 1 rato para o grupo normal, respetivamente). Os danos na córnea foram induzidos aplicando um cotonete revestido com nitrato de prata na superfície das córneas dos ratos, de modo a induzir um dano com 2 mm de diâmetro na córnea central. No terceiro dia após a indução dos danos nas córneas, confirmámos o estabelecimento de modelos de indução de angiogénese corneana e depois injetámos subconjuntivamente uma solução (20 μΐ) preparada dissolvendo o composto do Exemplo de Preparação 23, isto é, (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano (KR-31831) em tampão fosfato-salino (PBS) contendo 10% PEG 400, na concentração de 0,3 mg/ml. No caso do grupo de controlo, o PBS (20 μΐ) contendo 10% PEG 400 foi injetado subconjuntivamente. Como controlo positivo, uma solução (20 μΐ) preparada dissolvendo Avastin (utilizado como um inibidor da angiogénese) em PBS na concentração de 10 mg/ml foi subconjuntivamente injetada. 1 semana após as administrações dos fármacos, as fotografias da angiogénese corneana foram mostradas na FIG. 1. As avaliações gue quantificam as fotografias da FIG. 1 foram realizadas utilizando o programa Image J (NIH, EUA) e os respetivos resultados foram mostrados na FIG. 2.

Como mostrado na FIG. 1, os modelos animais injetados com o composto da presente invenção mostraram menor angiogénese corneana do que o grupo de controlo injetado com PBS e o grupo positivo injetado com Avastin. E também, como mostrado na FIG. 2, o grupo ao qual foi administrado o composto da presente invenção (KR) e o grupo ao qual foi administrado Avastin (Ava) mostraram, respetivamente, 52,6110% e 66,4110,6% de angiogénese corneana, comparado com a angiogénese corneana (100%) do grupo de controlo (Cont). Consequentemente, pode ver-se que, mesmo quando o composto da presente invenção foi administrado numa concentração menor do que o Avastin, tem um efeito inibitório superior sobre a angiogénese corneana (FIG. 2) .

Exemplo 2. Avaliação dos efeitos inibitórios sobre a angiogénese em modelos animais com danos na córnea À exceção de efetuar a injeção subconjuntival e a administração de colirio de (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano e Avastin, os efeitos inibitórios sobre a angiogénese foram avaliados da mesma maneira que no Exemplo 1. Para a injeção subconjuntival, utilizámos uma solução (20 μΐ) preparada dissolvendo (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano em PBS contendo 10% PEG 400, na concentração de 0,3 mg/ml e uma solução(20 μΐ) preparada dissolvendo Avastin em PBS na concentração de 10 mg/ml. E também, para a administração de colirio, utilizámos cada solução (50 μΐ, uma gota) preparada dissolvendo cada fármaco em PBS contendo 30 % por peso de PEG (polietilenoglicol 400) e 10 % por peso de DMSO (sulfóxido de dimetilo) nas mesmas concentrações dos mesmos como mencionado anteriormente, e ajustando depois o pH da solução resultante para pH 7 com ácido clorídrico. Os respetivos resultados são mostrados na FIG. 3.

Como mostrado na FIG. 3, comparado com a angiogénese (100%) do grupo de controlo (Cont), 29,3±8,6% de angiogénese foi mostrado no caso do grupo ao qual foi administrado Avastin (Ava) e 25, 1 ±10, 8% de angiogénese foi mostrado no caso do grupo ao qual foi administrado o composto da presente invenção (KR) . Pode ver-se que, mesmo quando o composto da presente invenção foi utilizado numa concentração menor do que o Avastin, tem um efeito inibitório superior sobre a angiogénese (FIG. 3), que é o mesmo do Exemplo 1.

Exemplo 3. Medição da expressão de um recetor 2 (FLK-1) do VEGF

Os testes foram realizados para confirmar a angiogénese corneana como um marcador. A uma solução de Trizole™ (200 μΐ) , foi adicionado cada tecido corneano obtido dos ratos do Exemplo 1. Os ARN totais foram isolados e depois foram preparados cADN utilizando uma transcriptase reversa. Cada cDNA (5 μΐ) foi misturado com o conjunto de primers do FLK-1 e depois foi realizada a amplificação do PCR em termociclador nas seguintes condições: desnaturação a 94 °C durante 5 minutos e depois 35 ciclos de desnaturação a 94 °C durante 20 segundos, emparelhamento a 58 °C durante 1 minuto e extensão a 72 °C durante 25 segundos. Cada produto de PCR foi carregado em gel de agarose 1%, e as bandas fluorescentes de brometo de etidio resultantes foram identificadas. Os respetivos resultados foram mostrados na FIG. 4.

Como mostrado na FIG. 4, pode ver-se gue o grupo (KR) injetado subconjuntivamente com uma solução(20 μΐ) do composto da presente invenção, isto é, (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano na concentração de 0,3 mg/ml, mostra uma expressão do FLK-1 notoriamente baixa (aproximadamente 30%) na córnea, comparado com a expressão do FLK-1 na córnea (100%) no caso do grupo de controlo (não) injetado com PBS (20 μΐ) e a expressão do FLK-1 na córnea (aproximadamente 59%) no caso do grupo (Avastin) injetado com Avastin (20 μΐ) na concentração de 10 mg/ml.

Exemplo 4. Avaliação dos efeitos sobre a regeneração normal de células epiteliais da córnea em modelos animais

Os modelos animais com danos nas células epiteliais da córnea foram estabelecidos anestesiando ratos (8 semanas de idade, 200 g a 250 g) com uma solução misturada de rompun e zoletil (1 ml/kg) e depois raspando as células epiteliais da córnea no centro da córnea em forma circular com 2 mm de diâmetro com um bisturi. A remoção de células epiteliais da córnea foi confirmada com uma solução a 1% de fluoresceina. A formulação de colírio (50 μΐ) utilizada no Exemplo 2 foi administrada duas vezes ao dia, isto é, a cada 12 horas. As córneas, após 0 horas, 18 horas, 36 horas após a administração, foram mostradas na FIG. 5. As avaliações que quantificam as fotografias da FIG. 5 foram realizadas utilizando o programa Image J (NIH, USA) e os resultados das mesmas foram mostrados na FIG. 6.

Como mostrado nas Figuras 5 e 6, quando o tamanho de cada dano epitelial da córnea foi comparado com a córnea no seu todo, o grupo de controlo (Controlo) mostrou 51±9% de taxa de cicatrização 0 horas após a administração, 54110% de taxa de cicatrização 18 horas após a administração e 9216% de taxa de cicatrização 36 horas após a administração, respetivamente, e o grupo (colírio KR) ao qual foi administrada a formulação de colírio contendo o composto da presente invenção, isto é, (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano, mostrou 5219% de taxa de cicatrização 0 horas após a administração, 5519% de taxa de cicatrização 18 horas após a administração e 9418% de taxa de cicatrização 36 horas após a administração, respetivamente. Consequentemente, pode ver-se que a taxa de cicatrização normal das células epiteliais da córnea não é inibida pela formulação de colírio contendo o composto da presente invenção.

Exemplo 5. Observação dos efeitos terapêuticos na degeneração macular em modelos animais que apresentam danos na retina

Os testes foram realizados utilizando ratos Brown Norway (8 semanas de idade, machos) como animais que apresentam danos na retina (15 ratos para o grupo experimental e 1 rato para o grupo normal, respetivamente). A membrana de Bruch da retina de cada rato Brown Norway foi danificada utilizando um laser Zeiss 532s à intensidade de 200mV, 30ms. No terceiro dia após a indução de danos por laser, o fármaco foi administrado no humor vítreo de modo a observar os vasos da retina. O composto da presente invenção, isto é, (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano foi administrado com as soluções (10 μΐ de cada solução) obtidas pela dissolução em PBS contendo 30% PEG 400 e 10% DMSO, nas concentrações de 0,1 mg/ml e 0,3 mg/ml. Avastin foi administrado com a solução (10 μΐ) obtida pela dissolução em PBS na concentração de 2,5 mg/ml. No caso do grupo de controlo, foi administrado PBS (10 μΐ) . Além disso, (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano foi administrado por via intraperitoneal com uma solução obtida pela dissolução em PBS contendo 30% PEG 400 e 10% DMSO, na dose de 25 mg/kg. 2 semanas após as administrações dos fármacos, dextran-FITC foi injetado no ventrículo esquerdo na dose de 25 mg/kg, seguido de enucleação do olho do mesmo após 5 minutos e, depois, de fixação numa solução de 10% formalina. A córnea e o cristalino do olho foram removidos do olho fixo, o qual foi depois observado sob um microscópio de fluorescência. A angiogénese foi identificada pela intensidade e o derrame de dextran-FITC no local dos danos induzidos por laser e os respetivos resultados foram mostrados na FIG. 7. As avaliações que quantificam as fotografias da FIG. 7 foram realizadas utilizando o programa Image J (NIH, USA) e os resultados das mesmas foram mostrados na FIG. 8.

Como mostrado na FIG. 7, uma forma reticulada foi observada nos vasos normais da retina (Normal) pela coloração de dextran-FIT, enquanto que o derrame de dextran-FITC no local dos danos induzidos por laser foi observado no caso do grupo de controlo (Control) . No entanto, pode ver-se que, no caso do grupo ao qual foi administrado o composto da presente invenção, a área de derrame de dextran-FITC no local dos danos induzidos por laser foi reduzida comparado com o grupo de controlo e o grupo ao qual foi administrado Avastin. A FIG. 8 mostra os resultados da avaliação através da quantificação das intensidades de fluorescência nas fotografias da FIG. 7. Quando a intensidade de fluorescência dos vasos circundantes foi 100, o grupo de controlo (Control) ao qual foi administrado soro fisiológico estéril mostrou 67±3 de intensidade de fluorescência e o grupo ao qual foi administrado Avastin (Ava) mostrou 46±3 de intensidade de fluorescência. Por outro lado, entre os grupos aos quais foi administrado um composto da presente divulgação, o grupo ao qual foi administrado 0,1 mg no humor vitreo (0,1 mg/ml, VI) mostrou 53±2,8 de intensidade de fluorescência; o grupo ao qual foi administrado 0,3 mg no humor vitreo (0,3 mg/ml, VI) mostrou 45±3,1 de intensidade de fluorescência e o grupo ao qual foi administrado por via intraperitoneal (25 mg/kg, IP) mostrou 51±5 de intensidade de fluorescência. Consequentemente, pode ver-se que os grupos aos quais foi administrado o composto da presente divulgação mostraram uma intensidade de fluorescência notoriamente baixa; e que, mesmo quando o composto da presente divulgação foi injetado numa concentração inferior ao Avastin conhecido como um inibidor da angiogénese, tem efeitos equivalentes ou superiores . Além disso, a partir dos resultados de que a administração intraperitoneal também mostrou os efeitos terapêuticos, pode ver-se que a eficiência em termos do método de administração é maior comparado com o agente terapêutico convencional.

Exemplo 6. Medição dos efeitos terapêuticos na degeneração macular em modelos animais que apresentam danos na retina

Os testes foram realizados utilizando micro-porcos Yutacan (3 kg, machos) como modelos animais que apresentam danos na retina (15 porcos para o grupo experimental) . Os modelos com degeneração macular da retina foram estabelecidos de acordo com os mesmos procedimentos que nos ratos Brown Norway do Exemplo 5. A formulação de colirio (100 μΐ, 0,9 mg/ml) preparada de acordo com os mesmos procedimentos que no Exemplo 2, foi administrada quatro vezes ao dia durante 2 semanas. Para injeção intravitrea, a solução do mesmo composto (20 μΐ, 0,3 mg/ml) foi injetada no humor vitreo uma vez. 2 semanas após as administrações, fluoresceina 1% foi injetada por via intravenosa de modo a observar o local dos danos induzidos por laser e os efeitos do composto da presente divulgação, isto é, (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano. Os resultados foram mostrados na FIG. 9. As avaliações que quantificam as fotografias da FIG. 9 foram realizadas utilizando o programa Image J (NIH, USA) e os resultados das mesmas foram mostrados na FIG. 10.

Como mostrado nas FIGURAS 9 e 10, quando a intensidade do grupo de controlo ao qual não foi administrado fármaco foi 1, o grupo ao qual foi administrada a formulação de colirio (4 vezes ao dia, 2 semanas) (Colirio) mostrou uma intensidade de 0,46±0, 17 e o grupo com administração por via intravitrea (Inj . intravitrea) mostrou uma intensidade de 0,36+0,14. Consequentemente, o composto da presente invenção é eficaz para 0 tratamento da degeneração macular. Pode ver-se que o composto da presente invenção mostra um excelente efeito terapêutico na degeneração macular.

Exemplo 7 . Medição da entrega na retina de formulação de colirio em modelos animais

Avaliámos se a formulação de colirio contendo (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano penetra através da córnea e posteriormente entregue na retina. Ratos Brown Norway (8 semanas de idade) foram utilizados no teste; e os modelos animais foram estabelecidos de acordo com os mesmos procedimentos do Exemplo 5. As formulações de colirio (100 μΐ de cada formulação) dos seguintes Exemplos de formulações 1 a 3 (isto é, as formulações de colirio sob a forma de solução dos Exemplos de formulações 1 e 2, e a formulação de colirio sob a forma de suspensão do Exemplo de formulação 3) foram administradas quatro vezes por dia durante 2 semanas, respetivamente. 2 semanas após as administrações, fluoresceina 1% foi injetada por via intravenosa de modo a observar o local dos danos induzidos por laser e os efeitos do composto da presente invenção, isto é, (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano. Os resultados foram mostrados na FIG. 11. As avaliações que quantificam as fotografias da FIG. 11 foram realizadas utilizando o programa Image J (NIH, USA) e os resultados das mesmas foram mostrados na FIG. 12.

Como mostrado nas Figuras 11 e 12, quando a intensidade do grupo de controlo ao qual não foi administrado fármaco foi 100%, o grupo ao qual foi administrada a formulação de colirio sob a forma de solução tendo a concentração de 0,9 mg/ml (Colirio 0,9 mg/ml) mostrou uma intensidade de 64,319,7%; o grupo ao qual foi administrada a formulação de colirio sob a forma de solução tendo a concentração de 0, 6 mg/ml (Colirio 0, 6 mg/ml) mostrou uma intensidade de 75,8111,6%; e o grupo ao qual foi administrada a formulação de colirio sob a forma de suspensão tendo a concentração de 0,6 mg/ml (Suspensão 0,6 mg/ml) mostrou uma intensidade de 71,57611,58%. Consequentemente, pode ver-se que as formulações de colirio preparadas de acordo com a presente divulgação foram administradas externamente e topicamente, mostrando excelentes efeitos terapêuticos na degeneração macular. Exemplo 8. Medição da entrega na retina de formulação de colirio em modelos animais

Avaliámos se a formulação de colirio contendo (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano penetra através da córnea e é depois entregue na retina. Foram utilizados ratos (8 semanas de idade) no teste e a formulação de colirio (50 ml) preparada no seguinte Exemplo de formulação 1 foi gotejada no olho de cada rato. O nivel de entrega do composto na retina foi medido e os resultados do mesmo são mostrados no quadro 1 seguinte.

Como mostrado no quadro 1 acima, o composto foi detetado nos niveis de 1250 ng/ml no humor aquoso, 195 ng/ml no humor vitreo e 846 ng/ml na retina, respetivamente, 30 minutos após a administração. 120 minutos após a administração, o composto foi detetado nos niveis de 827 ng/ml no humor aquoso, 194 ng/ml no humor vitreo e 225 ng/ml na retina, respetivamente. No plasma, o composto não foi detetado, 30 minutos após a administração, e foi detetado no nivel de 0, 9 ng/ml, 120 minutos após a administração. Consequentemente, pode ver-se que, quando o composto da presente invenção foi gotejado no olho, foi entregue na retina, e que apenas uma quantidade negligenciável é absorvida no sangue. O composto de Fórmula 1 ou o seu sal de acordo com a presente divulgação podem ser formulados para produzir várias formas de dosagem de acordo com as finalidades, preferencialmente sob a forma de formulação de colirio. A formulação de colirio pode apresentar-se sob a forma de solução ou sob a forma de suspensão. Os seguintes Exemplos de formulações ilustram exemplos representativos das formulações de colirio sob a forma de solução ou suspensão, embora a presente invenção não se limite aos mesmos.

Exemplos de formulações 1 e 2: Preparação de formulações de colirio sob a forma de solução

As formulações de colirio sob a forma de solução foram preparadas de acordo com os componentes e quantidades mostrados no Quadro 2 . Cada quantidade do Quadro 2 representa a quantidade do mesmo por 1 ml de volume total. 0 composto do Exemplo de Preparação 23, polietilenoglicol 400, glicerina, EDTA e ácido bórico, foi dissolvido em água estéril. O pH foi ajustado para 6,510,5 com ácido clorídrico diluído e depois foi adicionada água estéril à solução, de modo a ajustar o volume total.

[Quadro 31

Exemplo de formulação 3: Preparação de formulação de colírio sob a forma de suspensão A formulação de colírio sob a forma de suspensão foi preparada de acordo com os componentes e quantidades mostrados no Quadro 3. Cada quantidade do Quadro 3 representa a quantidade dos mesmos por 1 ml de volume total. O composto do Exemplo de Preparação 23, povidona K-25, EDTA, ácido bórico, bórax e cloreto de sódio foram dispersados em água estéril. O pH foi ajustado para 7,010,5 com ácido clorídrico diluído e, posteriormente, foi adicionada água estéril à suspensão, de modo a ajustar o volume total.

[Quadro 3]

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • EP 1782812 A, Park Shi-Young [0007] • WO 2004014898 A [0007]

Claims (3)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Uma composição farmacêutica que compreende (2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-clorofenil)-N-(lH-imidazol-2-ilm etil)amino]-3-hidroxi-2-metil-2-dimetoximetil-3,4-diidro-2H -1-benzopirano ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo para utilização na prevenção ou tratamento da degeneração macular, em que a composição farmacêutica é uma formulação de colirio para administrar na córnea de um olho, para entregar o ingrediente ativo na retina do olho.
2. 2. A composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a formulação de colirio se apresenta sob a forma de solução ou sob a forma de suspensão.
3. 3. A composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a regeneração normal de células epiteliais da córnea não é inibida.