PT2631239E - Nucleósidos substituídos nas posições 2¿,4¿ como agentes antivirais - Google Patents

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Description

DESCRIÇÃO
"NUCLEÓSIDOS SUBSTITUÍDOS NAS POSIÇÕES 2',4' COMO AGENTES ANTIVIRAIS"
Campo
As formas de realização da invenção referem-se a compostos, métodos e composições para utilização no tratamento de infeções virais.
Antecedentes A infeção pelo vírus da hepatite C (HCV) é um importante problema de saúde que leva a doença hepática crónica, tal como cirrose e carcinoma hepatocelular, num número considerável de indivíduos infetados, estimados em 2-15% da população mundial. Existem 4,5 milhões estimados de pessoas infetadas apenas nos Estados Unidos, de acordo com o U.S. Center for Disease Control. De acordo com a Organização Mundial de Saúde, existem mais de 200 milhões de indivíduos infetados em todo o mundo, com pelo menos 3 a 4 milhões de pessoas infetadas em cada ano. Uma vez infetados, cerca de 20% das pessoas eliminam o vírus, mas os restantes podem albergar o HCV o resto das suas vidas. Dez a vinte por cento dos indivíduos cronicamente infetados, eventualmente, desenvolvem cirrose que destrói o fígado ou cancro. A doença virai é transmitida por via parentérica através de sangue e produtos sanguíneos contaminados, agulhas contaminadas, ou sexualmente e verticalmente de mães infetadas ou mães portadoras à sua descendência. Os tratamentos atuais para a infeção por HCV, os quais se restringem a imunoterapia com interferão-α recombinante sozinho ou em combinação com o análogo de nucleósido ribavirina, são de benefício clínico limitado uma vez que a resistência se desenvolve rapidamente. Além disso, não há nenhuma vacina estabelecida para o HCV. Consequentemente, existe uma necessidade urgente de agentes terapêuticos melhorados que combatam eficazmente a infeção por HCV crónica. 0 virião de HCV é um vírus de ARN de cadeia positiva com envelope com uma sequência genómica de oligorribonucleótidos única de cerca de 9600 bases que codificam uma poliproteína de cerca de 3 010 aminoácidos. Os produtos proteicos do gene HCV consistem nas proteínas estruturais C, El e E2 e nas proteínas não estruturais NS2, NS3, NS4A e NS4B, e NS5A e NS5B. Acredita-se que as proteínas não estruturais (NS) proporcionam a maquinaria catalítica para a replicação viral. A protease NS3 liberta NS5B, a ARN polimerase ARN-dependente da cadeia de poliproteína. A polimerase NS5B de HCV é necessária para a síntese de um ARN de cadeia dupla a partir de um ARN virai de cadeia simples que serve como um modelo no ciclo de replicação de HCV. Portanto, a polimerase NS5B é considerada um componente essencial no complexo de replicação de HCV (K. Ishi et al., Heptology, 1999, 29: 1227-1235; V. Lohmann, et al. , Virology, 1998, 249: 108-118) . A inibição da polimerase NS5B de HCV evita a formação do ARN de HCV de cadeia dupla e, por conseguinte, constitui uma abordagem atrativa para o desenvolvimento de terapias antivirais específicas para HCV. O HCV pertence a uma família muito maior de vírus que partilham várias características comuns. Vírus Flaviviridae A família de vírus Flaviviridae compreende pelo menos três géneros distintos: pestivírus, que causam doença em bovinos e suínos; flavivírus, que são a principal causa de doenças como dengue e febre amarela; e hepacivírus, cujo único membro é HCV. O género flavivírus inclui mais de 68 membros separados em grupos com base no parentesco serológico (Calisher et al., J. Gen. Virol, 1993, 70, 37-43). Os sintomas clínicos variam e incluem febre, encefalite e febre hemorrágica (Fields Virology, Editores: Fields, B. N., Knipe, D. M., e Howley, P. M., Lippincott-Raven Publishers, Filadélfia, PA, 1996, Capítulo 31, 931-959) . Os flavivírus de interesse global que estão associados a doenças humanas incluem os vírus da Febre Hemorrágica do Dengue (FHD), vírus da febre amarela, síndrome do choque e vírus da encefalite japonesa (Halstead, S. B., Rev. Infect. Dis., 1984, 6, 251-264; Halstead, S. B., Science, 239: 476-481, 1988; Monath, T. P., New Eng. J. Med. 1988, 319, 641-643) . 0 género pestivírus inclui o vírus da diarreia bovina viral (BVDV), vírus da peste suína clássica (CSFV, também chamado vírus da cólera suína) e vírus da doença da fronteira (BDV) de ovelhas (Moennig, V. et al. Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98) . Infeções por pestivírus de gado doméstico (bovinos, suínos e ovinos) causam perdas económicas significativas em todo o mundo. 0 BVDV causa a doença da mucosa em bovinos e é de importância económica significativa para a indústria pecuária (Meyers, G. eThiel, H. J., Advances in Virus Research, 1996, 47, 53-118; Moennig V., et al., Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98). Pestivírus humanos não têm sido tão amplamente caracterizados como os pestivírus animais. No entanto, estudos sorológicos indicam exposição considerável a pestivírus em seres humanos.
Pestivírus e hepacivírus são grupos de vírus intimamente relacionados dentro da família Flaviviridae. Outros vírus intimamente relacionados nesta família incluem o vírus GB A, agentes semelhantes ao vírus GB A, vírus GB B e vírus GB C (também chamados vírus da hepatite G, HGV) . 0 grupo hepacivírus (vírus da hepatite C; HCV) consiste num número de vírus intimamente relacionados, mas genotipicamente distinguíveis, que infetam seres humanos. Existem pelo menos 6 genótipos de HCV e mais de 50 subtipos. Devido às semelhanças entre pestivírus e hepacivírus, em combinação com a baixa capacidade dos hepacivírus crescerem de forma eficiente em cultura celular, o vírus da diarreia bovina virai (BVDV) é frequentemente utilizado como um suplente para estudar o vírus HCV. A organização genética de pestivírus e hepacivírus é muito semelhante. Estes vírus de ARN de cadeia positiva possuem um quadro de leitura aberta (ORF) grande único que codifica todas as proteínas virais necessárias à replicação do vírus. Estas proteínas são expressas como uma poliproteína que é processada co- e pós-tradução tanto por proteinases celulares como por proteinases codificadas pelo vírus, para se produzir as proteínas virais maduras. As proteínas virais responsáveis pela replicação do ARN do genoma virai estão localizadas aproximadamente dentro do terminal carboxi. Dois terços do ORF são denominados proteínas não estruturais (NS). A organização genética e processamento da poliproteína da porção proteica não estrutural do ORF para pestivírus e hepacivírus é muito semelhante. Tanto para pestivírus como para hepacivírus, as proteínas não estruturais (NS) maduras, em ordem sequencial a partir do terminal amino da região que codifica as proteínas não estruturais para a terminação carboxi do ORF, consistem de p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A e NS5B.
As proteínas NS de pestivírus e hepacivírus partilham domínios de sequências que são caracteristicos de funções proteicas específicas. Por exemplo, as proteínas NS3 de vírus em ambos os grupos possuem motivos de sequências de aminoácidos caracteristicos de serina proteinases e de helicases (Gorbalenya, et al., Nature, 1988, 333, 22;. Bazan e
Fletterick, Virology, 1989, 171, 637-639; Gorbalenyl, et al. , Nucleic Acid Res., 1989, 17, 3889-3897). À semelhança, as proteínas NS5B de pestivírus e hepacivírus têm os motivos caracteristicos de ARN polimerases ARN-dirigida (Koonin, EV e Dolja, VV, Crit. Rev. Biochem. Molec. Biol., 1993, 28, 375-430).
Os papéis e funções atuais das proteínas NS de pestivírus e hepacivírus no ciclo de vida dos vírus são diretamente análogos. Em ambos os casos, a serina protease NS3 é responsável por todo o processamento proteolitico de precursores de poliproteína a jusante da sua posição no ORF (Wiskerchen e Collett, Virology, 1991, 184, 341-350; Bartenschlager et al. , J. Virol. 1993, 67, 3835-3844; Eckart et al. , Biochem. Biophis. Res. Comm. 1993, 192, 399-406; Grakoui et al., J. Virol. 1993, 67, 2832-2843; Grakoui et al., Proc. Natl. Acad. Aci . USA, 1993, 909, 10583-10587; Hijikata et al., J. Virol. 1993, 67, 4665-4675; Tome et al., J. Virol., 1993, 67, 4017-4026). A proteína NS4A, em ambos os casos, atua como um cofator com a serina protease NS3 (Bartenschlager et al., J. Virol. 1994, 68, 5045-5055; Failla et al., J. Virol., 1994, 68, 3753-3760; Xu et al. , J. Virol., 1997, 71, 5312-5322) . A proteína NS3 de ambos os vírus também funciona como uma helicase (Kim et al., Biochem Biophys. Res. Comm., 1995, 215, 160-166; Jin e Peterson, Arch. Biochem. Biophys., 1995, 323, 47-53; Warrener e Collett, J. Virol., 1995, 69, 1720-1726). Finalmente, as proteínas NS5B de pestivírus e hepacivírus possuem a atividade de ARN polimerase ARN-direcionada prevista (Behrens et al., EMBO, 1996, 15, 12-22; Lechmann et al., J. Virol., 1997, 71, 8416-8428; Yuan et al., Biochem. Biophis. Res. Comm. 1997, 232, 231-235; Hagedorn no documento PCT WO 97/12033; Zhong et al., J. Virol., 1998, 72, 9365-9369) .
Atualmente, as opções de tratamento para indivíduos infetados com vírus da hepatite C são limitadas. A atual opção terapêutica aprovada é a utilização de imunoterapia com interferão-α recombinante sozinho ou em combinação com o análogo de nucleósido ribavirina. Esta terapia é limitada na sua eficácia clínica e apenas 50% dos pacientes tratados respondem à terapia. Portanto, exista uma necessidade significativa de terapias mais eficazes e inovadoras para atender a necessidade médica não satisfeita representada pela infeção por HCV.
Uma série de potenciais alvos moleculares para desenvolvimento de fármacos de ação direta antiviral para terapêuticas anti-HCV foram agora identificados, incluindo, mas não limitados à autoprotease NS2-NS3, a protease N3, a helicase N3 e polimerase NS5B. A ARN polimerase ARN-dependente é absolutamente essencial para a replicação do genoma de ARN de sentido positivo de cadeia simples e esta enzima tem suscitado um interesse significativo entre os químicos farmacêuticos .
Inibidores de NS5B de HCV como potenciais terapias para a infeção por HCV foram revistos: Tan, S. L., et al., Nature Rev. Drug Discov. , 2002, 1, 867-881; Walker, Μ. Ρ. et al., Exp. Opin. Investigational Drugs, 2003, 12, 1269-1280; Ni, Z-J., et al., Current Opinion in Drug Discovery and Development, 2004, 7, 446-459; Beaulieu, P. L., et al. , Current Opinion in Investigational Drugs, 2004, 5, 838-850; Wu, J., et al. , Current Drug Targets-Infectious Disorders, 2003, 3, 207-219; Griffith, R. C., etal., Annual Reports in Medicinal Chemistry, 2004, 39, 223-237; Carrol, S., et al., Infectious Disorders-Drug Targets, 20-06, 6, 17-29. O potencial para o aparecimento de estirpes de HCV resistentes e a necessidade de identificar agentes com uma cobertura genotipica ampla apoia a necessidade de prosseguir os esforços de identificação de nucleósidos novos e mais eficazes como inibidores de NS5B de HCV. Os inibidores nucleósidos de polimerase NS5B podem atuar quer como um substrato não natural que resulta na terminação da cadeia ou como um inibidor competitivo que compete com o nucleótido pela ligação à polimerase. Para funcionar como um terminador de cadeia, o análogo de nucleósido deve ser absorvido pela célula e convertido In vivo num trifosfato para competir pelo sitio de ligação de nucleótidos à polimerase. Esta conversão no trifosfato é comummente mediada por cinases celulares que conferem requisitos estruturais adicionais sobre um potencial inibidor da polimerase nucleósido.
Apesar da existência de vacinas eficazes, a infeção pelo vírus da hepatite B (HBV) permanece um problema principal de saúde pública em todo o mundo, com 400 milhões de portadores crónicos. Estes pacientes infetados estão expostos ao risco de desenvolvimento de cirrose hepática e carcinoma hepatocelular (Lee, W. M. 1997, N. Eng. J. Med., 337, 1733-1745) . Atualmente, acredita-se existirem aproximadamente 1,25 milhões de portadores crónicos de hepatite B apenas nos Estados Unidos, com 200 000 novas pessoas infetadas a cada ano por contacto com sangue ou fluidos corporais. 0 vírus da hepatite B é a segunda, a seguir ao tabaco, causa de cancro humano. 0 mecanismo pelo qual o HBV induz cancro é desconhecido, embora se postule que pode desencadear diretamente desenvolvimento tumoral, ou desencadear indiretamente desenvolvimento tumoral através de inflamação crónica, cirrose e regeneração celular associada à infeção. 0 vírus da hepatite B atingiu níveis epidémicos em todo o mundo. Depois de um período de incubação de dois a seis meses no qual o hospedeiro não tem conhecimento da infeção, a infeção por HBV pode levar a hepatite aguda e dano hepático, que provoca dor abdominal, icterícia e níveis sanguíneos elevados de determinadas enzimas. 0 HBV pode causar hepatite fulminante, uma forma da doença de rápida progressão, muitas vezes fatal na qual secções massivas do fígado são destruídas. Os pacientes geralmente recuperam de hepatite virai aguda. Em alguns pacientes, no entanto, níveis elevados de antigénio virai persistem no sangue durante um período prolongado, ou indefinido, provocando uma infeção crónica. As infeções crónicas podem levar a hepatite crónica persistente. Os pacientes infetados com HBV crónico persistente são mais comuns em países em desenvolvimento. Em meados de 1991, havia aproximadamente 225 milhões de portadores crónicos do HBV só na Ásia, e em todo o mundo, quase 300 milhões de portadores. A hepatite crónica persistente pode causar fadiga, cirrose hepática e carcinoma hepatocelular, um cancro primário do fígado.
Nos países industrializados ocidentais, os grupos com elevado risco de infeção pelo HBV incluem aqueles em contacto com portadores de HBV ou amostras sanguíneas destes. A epidemiologia do HBV é, de facto, muito semelhante à do HIV, o que explica porque a infeção por HBV é comum entre pacientes com SIDA ou infeções associadas ao HIV. No entanto, o HBV é mais contagioso que o HIV.
Como é bem sabido, a síndrome da imunodef iciência adquirida (SIDA) é uma doença que compromete gravemente o sistema imunitário humano e que leva à morte. A causa de SIDA foi determinada ser o vírus da imunodeficiência humana (HIV). Para aliviar o sofrimento e prolongar a vida de hospedeiros infetados, novos compostos e métodos de tratamento da SIDA e ataque do vírus HIV continuam a ser procurados.
Sumário A presente invenção é conforme definida nas reivindicações. Em particular, a presente invenção é conforme definida nas seguintes cláusulas: 1. Utilização de um composto
da fórmula: ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, na preparação de um medicamento para tratar uma infeção por vírus da hepatite B, em que para a estrutura A ou A' (a) R2 é independentemente CH3, CH2F, CHF2, CF3, F, CN, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, ou alquilo C1-4 opcionalmente substituído com amino, hidroxi ou 1 a 3 átomos de flúor; (b) R é H, fosfato, incluindo 5' -monofosfato, 5',3'-fosfato cíclico, difosfato ou um trifosfato, H-fosfonato, acilo, incluindo fenilo opcionalmente substituído, alquilo, incluindo alquilo Ci-s, carboxialquilamino O-substituído ou seus derivados peptídicos, éster de sulfonato, incluindo alquil- ou arilalquil-sulfonilo, incluindo metanossulfonilo e benzilo, em que o grupo fenilo é opcionalmente substituído, um lípido, incluindo um fosfolipido, um aminoácido L ou D, um carboidrato, um péptido, ou um colesterol; (c) R3 é independentemente OH, H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, vinilo, N3, CN, Cl, Br, F, I, NO2, C (0) 0 (alquilo C1-4) , C (0) 0 (alquilo C1-4) , C (0) 0 (alquinilo C2-4) , C (0) 0 (alquenilo C2-4) , 0 (acilo C1-10) , 0 (alquilo C1-4) , 0 (alquenilo C2-4) , SH, S (acilo C1-4) ; S (alquilo C1-4) , S (alquinilo C2-4) , S (alquenilo C2-4) , SO (acilo C1-4) , SO (alquilo C1-4) , SO (alquinilo C2-4) , SO (alquenilo C2-4) , SO2 (acilo C1-4) , SO2 (alquilo C1-4) , SO2 (alquinilo C2-4) , SO2 (alquenilo C2-4) , OS (0)2 (acilo C1-4) , OS (0) 2 (alquilo C1-4) , OS (0) 2 (alquenilo C2-4) , NH2, NH (alquilo C1-4) , NH (alquenilo C2-4) , NH (alquinilo C2-4) , NH (acilo C1-4) , N (alquilo C1-4) 2, N (acilo Ci-is) 2, em que alquilo, alquinilo, alquenilo e vinilo são opcionalmente substituídos por N3, CN, um a três halogénios (Cl, Br, F, I), NO2, C (0) 0 (alquilo C1-4) , C (0) 0 (alquilo C1-4) , C (0) 0 (alquinilo C2-4) , C (0) 0 (alquenilo C2-4) , 0 (acilo C1-4) , 0 (alquilo C1-4) , 0 (alquenilo C2-4) , SH, S (acilo C1-4) , S (alquilo C1-4) , S (alquinilo C2-4) , S (alquenilo C2-4) , SO (acilo C1-4) , SO (alquilo C1-4) , SO (alquinilo C2-4) , SO (alquenilo C2-4) , SO2 (acilo C1-4) , SO2 (alquilo C1-4) , SO2 (alquinilo C2-4) , SO2 (alquenilo C2-4) , OS (0)2 (acilo C1-4) , OS (0) 2 (alquilo C1-4) , OS (0) 2 (alquenilo C2-4) , NH2, NH (alquilo C1-4) , NH (alquenilo C2-4) , NH (alquinilo C2-4) , NH (acilo C1-4) , N (alquilo ¢1-4)2, N (acilo 01-4)2; (d) R4 é N3; (e) R e R3 podem em conjunto formar um 5',3'-fosfato cíclico; (f) Base é uma base de purina ou pirimidina de ocorrência natural ou modificada representada pelas seguintes estruturas:
em que para a e b Z é N ou CR8; R5, R6 e R7 são independentemente H, F, Cl, Br, I, OH, OR', SH, SR', NH2, NHR', NR'2 (dois R' podem formar anéis saturados ou insaturados, ou anéis heterocíclicos saturados ou insaturados), alquilo de C1-C6, alquilo de C1-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alquenilo de C2-C6, alquenilo de C2-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alquinilo de C2-C6 tal como C=CH, alquinilo de C2-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alcoxi de C1-C6, alcoxi de C1-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), C02H, C02R' , CONH2, CONHR' , CONR'2, CH=CHC02H, ou CH=CHCC>2R' em que R' é um alquilo opcionalmente substituído, que inclui, mas não está limitado a, um alquilo C1-20 opcionalmente substituído, um alquilo C1-10 opcionalmente substituído, um alquilo C1-8 opcionalmente substituído; um cicloalquilo opcionalmente substituído; um alquinilo de C2-C6 opcionalmente substituído, um alquenilo de C2- C6 opcionalmente substituído, ou acilo opcionalmente substituído, que inclui, mas não está limitado a, C (0) alquilo, C (0) (alquilo C1-20) , C (0) (alquilo C1-10) , ou C (0) (alquilo Ci-s) , arilo opcionalmente substituído, alquilariloxi C1-C4 opcionalmente substituído, heteroarilo, alquilo Ci-C4-heteroarilo opcionalmente substituído, um alcoxialquilo C1-20 opcionalmente substituído, um aminoalquilo C1-20 opcionalmente substituído, um f luoroalquilo C1-20 opcionalmente substituído; R8 é independentemente H, halogénio (incluindo F, Cl, Br, I), OH, OR', SH, SR', NH2, NHR', NR'2(dois R' podem formar anéis saturados ou insaturados, ou anéis heterocíclicos saturados ou insaturados), N02, alquilo de C1-C6, alquilo de C1-C6 halogenado (F, Cl, Br, I) , alquenilo de C2-C6, alquenilo de C2-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alquinilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alcoxi de C1-C6, alcoxi de C1-C6 halogenado (F, Cl, Br, I) , C02H, C02R' , CONH2, CONHR', CONR2', CH=CHC02H, ou CH=CHC02R' , em que R' é um alquilo opcionalmente substituído, que inclui, mas não está limitado a, um alquilo Ci-2o opcionalmente substituído, um alquilo C1-10 opcionalmente substituído, um alquilo C1-8 opcionalmente substituído; um cicloalquilo opcionalmente substituído; um alquinilo de C2-C6 opcionalmente substituído, um alquenilo de C2-C6 opcionalmente substituído, ou acilo opcionalmente substituído, que inclui, mas não está limitado a, C (0) alquilo, C (0) (alquilo Ci-2o) , C (0) (alquilo C1-10), ou C(0) (alquilo Ci-s) , arilo opcionalmente substituído, alquilo Ci-C4-ariloxi opcionalmente substituído, heteroarilo, alquilo Ci-C4-heteroarilo opcionalmente substituído, um alcoxialquilo Ci-2o opcionalmente substituído, um aminoalquilo Ci-2o opcionalmente substituído, um f luoroalquilo Ci-2o opcionalmente substituído; em que a estrutura para A ou A' não é qualquer uma de:
2. A utilização de um composto de acordo com a cláusula 1, em que o composto é selecionado a partir do grupo que consiste em:
3. A utilização da cláusula 1, em que o composto é:
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. 4. A utilização de qualquer uma das cláusulas 1 a 3, em que o medicamento compreende ainda um ou mais agentes antivirais, agentes antibacterianos, agentes antiproliferativos, ou uma combinação destes. 5. A utilização de qualquer uma das cláusulas 1 a 3, em que o composto é administrado oralmente. 6. A utilização da cláusula 5, em que entre cerca de 0,1 g e cerca de 10 g do composto são administrados diariamente numa monoterapia ou numa terapia de combinação. 7. A utilização da cláusula 6, em que entre cerca de 0,5 g e cerca de 7,5 g do composto são administrados diariamente. 8. A utilização da cláusula 7, em que entre cerca de 1,5 g e cerca de 6,0 g do composto são administrados diariamente. 9. A utilização da cláusula 5, em que o composto é administrado numa dose de carga inicial seguida por uma dose diminuída.
Aspetos particulares da presente divulgação são listados nas Tabelas I e II abaixo:
Um aspeto da presente divulgação refere-se a um composto que tem a seguinte estrutura, com o mesmo padrão de substituintes conforme observado na Tabela I.
Um aspeto da presente divulgação refere-se a um composto que tem a seguinte estrutura, com o mesmo padrão de substituintes conforme observado na Tabela II.
Definições
A frase "um" ou "uma" entidade, como aqui utilizada, refere-se a uma ou mais dessas entidades; por exemplo, um composto refere-se a um ou mais compostos ou pelo menos um composto. Como tal, os termos "um" ou (ou "uma"), "um ou mais" e "pelo menos um" podem ser utilizados aqui indistintamente. A frase "como aqui definido acima" refere-se à primeira definição proporcionada no Sumário da Invenção.
Os termos "opcional" ou "opcionalmente" como aqui utilizados, significam que um evento ou circunstância subsequentemente descrito pode, mas não precisa de, ocorrer e que a descrição inclui casos onde o evento ou circunstância ocorre e casos em que não. Por exemplo, "ligação opcional" significa que a ligação pode ou não estar presente, e que a descrição inclui ligações simples, duplas ou triplas. 0 termo "independentemente" é aqui utilizado para indicar que uma variável é aplicada em qualquer caso sem ter em conta a presença ou ausência de uma variável com a mesma ou diferente definição dentro do mesmo composto. Assim, num composto no qual R aparece duas vezes e é definido como "independentemente carbono ou nitrogénio", ambos os R's podem ser carbono, ambos os R's podem ser nitrogénio ou um R pode ser carbono e o outro nitrogénio. 0 termo "alquenilo" refere-se a um radical de cadeia de hidrocarboneto não substituído tendo de 2 a 10 átomos de carbono possuindo uma ou duas ligações duplas olefínicas, de preferência uma ligação dupla olefínica. O termo "alquenilo C2-N" refere-se a um alquenilo compreendendo 2 a N átomos de carbono onde N é um número inteiro possuindo os seguintes valores: 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10. O termo "alquenilo C2-10" refere-se a um alquenilo compreendendo 2 a 10 átomos de carbono. Os exemplos incluem, mas não estão limitados a, vinilo, 1-propenilo, 2-propenilo, (alilo) ou 2-butenilo (crotilo). O termo "alquenilo halogenado" refere-se a um alquenilo compreendendo pelo menos um de F, Cl, Br e I. O termo "alquilo" refere-se a um resíduo de hidrocarboneto monovalente, saturado, de cadeia linear ou ramificada contendo 1 a 30 átomos de carbono. O termo "alquilo Ci-n" refere-se a um alquilo compreendendo 1 a N átomos de carbono, onde N é um número inteiro possuindo os seguintes valores: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30. O termo "alquilo C1-4" refere-se a um alquilo contendo 1 a 4 átomos de carbono. O termo "alquilo inferior" ou "alquilo menor" significa um resíduo de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada compreendendo 1 a 8 átomos de carbono. "Alquilo C1-20" como aqui utilizado refere-se a um alquilo compreendendo 1 a 20 átomos de carbono. "Alquilo C1-10" como aqui utilizado refere-se a um alquilo compreendendo 1 a 10 átomos de carbono. Os exemplos de grupos alquilo incluem, mas não estão limitados a, metilo, etilo, propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, heptilo e octilo. O termo (ar)alquilo ou (heteroaril)alquilo indica que o grupo alquilo é opcionalmente substituído por um grupo arilo ou heteroarilo, respetivamente. O termo "alquilohalogenado" (ou "haloalquilo") refere-se a um alquilo de cadeia linear ou ramificada compreendendo pelo menos um de F, Cl, Br e I. O termo "haloalquilo C1-3" refere-se a um haloalquilo compreendendo 1 a 3 carbonos e pelo menos um de F, Cl, Br e I. O termo "alquilo menor halogenado" refere-se a um haloalquilo compreendendo 1 a 8 átomos de carbono e pelo menos um de F, Cl, Br e I. Os exemplos incluem, mas não estão limitados a, fluorometilo, clorometilo, bromometilo, iodometilo, difluorometilo, diclorometilo, dibromometilo, diiodometilo, trifluorometilo, triclorometilo, tribromometilo, triiodometilo, 1-fluoroetilo, 1-cloroetilo, 1- bromoetilo, 1-iodoetilo, 2-fluoroetilo, 2-cloroetilo, 2- bromoetilo, 2-iodoetilo, 2,2-difluoroetilo, 2,2-dicloroetilo, 2,2-dibromoetilo, 2,2-diiodoetilo, 3- fluoropropilo, 3-cloropropilo, 3-bromopropilo, 3-iodopropilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 1, 1,2,2,2-pentafluoroetilo, 1-fluoro-l-cloroetilo, ou 1-fluro-1-cloro-1-bromoetilo . 0 termo "alquinilo" refere-se a um radical de cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada tendo de 2 a 10 átomos de carbono, preferivelmente 2 a 5 átomos de carbono, e com uma ligação tripla. O termo "alquinilo C2-n" refere-se a um alquinilo compreendendo 2 a N átomos de carbono, onde N é um número inteiro possuindo os seguintes valores: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10. O termo "alquinilo C2-4" refere-se a um alquinilo compreendendo 2 a 4 átomos de carbono. O termo "alquinilo C2-10" refere-se a um alquinilo compreendendo 2 a 10 átomos de carbono. Os exemplos incluem, mas não estão limitados a, etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo ou 3-butinilo. O termo "alquinilo halogenado" refere-se a um radical de cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada tendo de 2 a 10 átomos de carbono, preferivelmente 2 a 5 átomos de carbono, e com uma ligação tripla e pelo menos um de F, Cl, Br e I. O termo "cicloalquilo" refere-se a um anel carbociclico saturado compreendendo 3 a 8 átomos de carbono, isto é, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo ou ciclooctilo. O termo "cicloalquilo C3-7" como aqui utilizado refere-se a um cicloalquilo compreendendo 3 a 7 carbonos no anel carbociclico. O termo "alcoxi" refere-se a um grupo -O-alquilo, em que alquilo é definido acima. Os exemplos incluem, mas não estão limitados a, metoxi, etoxi, n-propiloxi, i-propiloxi, n-butiloxi, i-butiloxi, t-butiloxi. "Alcoxi menor" ou "alcoxi inferior" ou "alcoxilo inferior" como aqui utilizado significa um grupo alcoxi com um grupo "alquilo menor" como previamente definido. "Alcoxi C1-10" refere-se a um -O-alquilo em que alquilo é C1-10. O termo "alcoxi halogenado" refere-se a um grupo -O-alquilo no qual o grupo alquilo compreende pelo menos um de F, Cl, Br e I. O termo "alcoxi menor halogenado" ou "alcoxi inferior halogenado" refere-se a um grupo -0-(alquilo menor) no qual o grupo alquilo menor compreende pelo menos um de F, Cl, Br e I. 0 termo "substituído", como aqui utilizado, significa que um ou mais hidrogénios no átomo designado são substituídos com uma seleção do grupo indicado, desde que não se exceda a valência normal do átomo designado e que a substituição resulte num composto estável. 0 termo "protegido", como aqui utilizado e a menos que definido em contrário, refere-se a um grupo que é adicionado a um átomo de oxigénio, nitrogénio ou fósforo para prevenir a sua reação adicional ou para outros propósitos. Uma ampla variedade de grupos de proteção de oxigénio e nitrogénio são conhecidos por peritos na especialidade de síntese orgânica. Os exemplos não limitantes incluem: C(0)-alquilo, C(0)Ph, C(0)arilo, CH3, CH-alquilo, Ctb-alquenilo, CtbPh, Ctb-arilo, CtbO-alquilo, CtbO-arilo, S02-alquilo, S02-arilo, tert-butildimetilsililo, tert-butildifenilsililo e 1,3-(1,1,3,3-tetraisopropildissiloxanilideno) . 0 termo "halo", como aqui utilizado, inclui flúor, cloro, bromo e iodo. 0 termo base de "purina" ou "pirimidina" inclui, mas não está limitado a, adenina, N6-alquilpurinas, N6-acilpurinas (em que acilo é C(0) (alquilo, arilo, alquilarilo ou arilalquilo) , N6-benzilpurina, N6-halopurina, N6-vinilpurina, N6-purina acetilénica, N6-acilpurina, N6-hidroxialquilpurina, N6-alilaminopurina, N6-tioalcilpurina, N2-alquilpurinas, N2-alquil-6-tiopurinas, timina, citosina, 5-fluorocitosina, 5-metilcitosina, 6-azapirimidina, incluindo 6-azacitosina, 2-e 4-mercaptopirimidina, uracilo, 5-halouracilo, incluindo 5-fluorouracilo, C5-alquilpirimidinas, C5-benzilpirimidinas, C5-halopirimidinas, C5-vinilpirimidina, C5-pirimidina acetilénica, C5-acilpirimidina, C5-hidroxialquilpurina, C5-aminopirimidina, C5-cianopirimidina, C5-iodopirimidina, C6-iodopirimidina, C5-Br-vinilpirimidina, C6-Br-vinilpirimidina, C5-nitropirimidina, C5-aminopirimidina, N2-alquilpurinas, N2-alquil-6-tiopurinas, 5-azacitidinilo, 5-azauracililo, triazolopiridinilo, imidazolopiridinilo, pirrolopirimidinilo e pirazolopirimidinilo. Bases de purina incluem, mas não estão limitadas a, guanina, adenina, hipoxantina, 2,6-diaminopurina e 6-cloropurina. Os grupos funcionais de oxigénio e nitrogénio na base podem ser protegidos como necessário ou desejado. Grupos de proteção adequados são bem conhecidos por aqueles peritos na especialidade e incluem trimetilsililo, dimetilhexilsililo, t-butildimetilsililo e t-butildifenilsililo, tritilo, grupos alquilo e grupos acilo, tais como acetilo e propionilo, metanossulfonilo e p-toluenossulfonilo.
Os termos "tautomerismo" e "tautómeros" têm os seus significados aceites. 0 termo "sal ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável" é usado ao longo do relatório descritivo para descrever qualquer forma farmaceuticamente aceitável (tal como um éster, éster de fosfato, sal de um éster ou grupo relacionado) de um composto o qual, após administração a um mamífero, proporciona o composto ativo. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles derivados de bases e ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis referem-se a um composto que é metabolizado, por exemplo, hidrolisado ou oxidado, no hospedeiro para formar um composto da presente invenção. Os exemplos típicos de pró-fármacos incluem compostos que têm grupos de proteção biologicamente lábeis numa fração funcional do composto selecionado. Os pró-fármacos incluem compostos que podem ser oxidados, reduzidos, aminados, desaminados, hidroxilados, desidroxilados, hidrolisados, desidrolisados, alquilados, desalquilados, acilados, desacilados, fosforilados, desfosforilados para produzir o composto ativo. Os compostos desta invenção possuem atividade antiviral contra os vírus HIV, HBV e HCV vírus, ou são metabolizados num composto que exibe tal atividade.
Nos casos em que os compostos são suficientemente básicos ou ácidos para formar sais de ácido ou de base não tóxicos estáveis, a administração do composto como um sal farmaceuticamente aceitável pode ser apropriada. São exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis sais de adição de ácidos orgânicos formados com ácidos que formam um anião fisiologicamente aceitável, por exemplo, tosilato, metanossulfonato, acetato, citrato, malonato, tartarato, succinato, benzoato, ascorbato, a-cetoglutarato e a-glicerofosfato. Os sais inorgânicos adequados podem também ser formados, incluindo sais de sulfato, nitrato, bicarbonato e carbonato.
Alternativamente, sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser obtidos, por exemplo, reagindo um composto suficientemente básico, tal como uma amina, com um ácido adequado originando um anião fisiologicamente aceitável. Sais de metais alcalinos (por exemplo, sódio, potássio ou lítio) ou de metais alcalinoterrosos (por exemplo, cálcio e magnésio) de, por exemplo, ácidos carboxílicos também pode ser preparados.
Qualquer um dos compostos aqui descritos pode ser administrado como um pró-fármaco para aumentar a atividade, biodisponibilidade, estabilidade ou, de outra forma, alterar as propriedades do composto selecionado. Uma série de ligandos de pró-fármacos são conhecidos. 0 termo "hospedeiro", como aqui utilizado, refere-se a um organismo unicelular ou multicelular, no qual o vírus pode replicar-se, incluindo, mas não limitado a, linhas celulares e animais, e preferivelmente um ser humano. Alternativamente, o hospedeiro pode ser portador de uma parte do genoma virai, cuja replicação ou função pode ser alterada pelos compostos da presente invenção. 0 termo hospedeiro refere-se especificamente a células infetadas, células transfetadas com todo ou parte do genoma virai e animais.
Os compostos da presente invenção podem ser formulados numa ampla variedade de formas farmacêuticas de administração oral e veículos. A administração oral pode ser sob a forma de comprimidos, comprimidos revestidos, cápsulas de gelatina dura e mole, soluções, emulsões, xaropes ou suspensões. Os compostos da presente invenção são eficazes quando administrados, entre outras vias de administração, por supositórios. A maneira mais conveniente de administração é, geralmente, a oral, utilizando um regime de dosagem diária conveniente que pode ser ajustado de acordo com a gravidade da doença e a resposta do paciente à medicação antiviral.
Um composto ou compostos da presente invenção, bem como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em conjunto com um ou mais excipientes, veículos ou diluentes convencionais, podem ser colocados sob a forma de composições farmacêuticas e dosagens unitárias. As composições farmacêuticas e formas farmacêuticas unitárias podem ser constituídas por ingredientes convencionais em proporções convencionais, com ou sem compostos ativos adicionais e as formas farmacêuticas unitárias podem conter qualquer quantidade eficaz adequada do ingrediente ativo comensurado com o intervalo de dosagem diária pretendido a ser empregue. As composições farmacêuticas podem ser empregues como sólidos, tais como comprimidos ou cápsulas cheias, semissólidos, pós, formulações de libertação sustentada ou líquidos, tais como suspensões, emulsões ou cápsulas cheias para utilização oral; ou sob a forma de supositórios para administração retal ou vaginal. Uma preparação típica conterá de cerca de 5% a cerca de 95% de composto ou compostos ativos (p/p). 0 termo "preparação" ou "forma farmacêutica" pretende incluir tanto formulações sólidas como líquidas do composto ativo e um perito na especialidade apreciará que um ingrediente ativo pode existir em diferentes preparações dependendo da dose e parâmetros farmacocinéticos desejados. 0 termo "excipiente", como aqui utilizado, refere-se a um composto que é usado para preparar uma composição farmacêutica, e é geralmente seguro, não tóxico e nem biologicamente nem de outro modo indesejável, e inclui excipientes que são aceitáveis para utilização veterinária, bem como utilização farmacêutica humana. Os compostos desta invenção podem ser administrados sozinhos, mas serão geralmente administrados em mistura com um ou mais excipientes, diluentes ou veículos farmacêuticos adequados selecionados com respeito à via de administração e prática farmacêutica padrão pretendidas.
Uma forma de "sal farmaceuticamente aceitável" de um ingrediente ativo também pode conferir inicialmente uma propriedade farmacocinética desejável sobre o ingrediente ativo que se encontre ausente na forma de não sal, e pode até afetar positivamente a farmacodinâmica do ingrediente ativo no que diz respeito à sua atividade terapêutica no organismo. A frase "sal farmaceuticamente aceitável" de um composto, como aqui utilizada, significa um sal que é farmaceuticamente aceitável e que possui a atividade farmacológica desejada do composto de origem. Tais sais incluem: (1) sais de adição de ácido, formados com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromidrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, e semelhantes; ou formados com ácidos orgânicos tais como ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido 3-(4-hidroxibenzoil)benzóico, ácido 1,2-etano-dissulfónico, ácido 2-hidroxietanossulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido 4-clorobenzenossulfónico, ácido 2-naftalenossulfónico, ácido 4-toluenossulfónico, ácido canforsulfónico, ácido laurilsulfúrico, ácido glucónico, ácido glutâmico, ácido salicílico, ácido mucónico, e semelhantes ou (2) sais de adição de base formados com as bases conjugadas de qualquer dos ácidos inorgânicos listados acima, em que as bases conjugadas compreendem um componente catiónico selecionado de entre Na+, K+, Mg+2, Ca+2, NHgR"'4-g+, no qual R" ' é um alquilo C1-3 e g é um número selecionado de entre 0, 1, 2, 3, ou 4. Deveria ser entendido que todas as referências a sais farmaceuticamente aceitáveis incluem formas de adição de solvente (solvatos), formas de adição de água (hidratos) ou formas cristalinas (polimorfos), como aqui definido, dos mesmos sais de adição de ácido.
As preparações em forma sólida incluem pós, comprimidos, pílulas, cápsulas, supositórios e grânulos dispersáveis. Um veículo sólido pode ser uma ou mais substâncias que podem também atuar como diluentes, agentes aromatizantes, solubilizantes, lubrificantes, agentes de suspensão, aglutinantes, conservantes, agentes de desintegração de comprimidos, ou um material encapsulante. Em pós, o veículo é geralmente um sólido finamente dividido que está em mistura com o componente ativo finamente dividido. Em comprimidos, o componente ativo é geralmente misturado com o veículo que possui a capacidade de ligação necessária em proporções adequadas e compactado na forma e tamanho desejados. Os veículos apropriados incluem, mas não estão limitados a, carbonato de magnésio, estearato de magnésio, talco, açúcar, lactose, pectina, dextrina, amido, gelatina, tragacanto, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, uma cera de baixa fusão, manteiga de cacau, e semelhantes. As preparações em forma sólida podem conter, além dos componentes ativos, corantes, aromatizantes, estabilizantes, tampões, edulcorantes artificiais e naturais, dispersantes, espessantes, agentes solubilizantes, e semelhantes.
As formulações líquidas também são adequadas para administração oral e incluem formulações líquidas incluindo emulsões, xaropes, elixires e suspensões aquosas. Estas incluem preparações em formas sólidas que se destinam a ser convertidas a preparações em forma líquida imediatamente antes da utilização. As emulsões podem ser preparadas em soluções, por exemplo, em soluções aquosas de propilenoglicol ou podem conter agentes emulsionantes tais como lecitina, monooleato de sorbitano ou acácia. As suspensões aquosas podem ser preparadas por dispersão do componente ativo finamente dividido em água com material viscoso, tal como gomas naturais ou sintéticas, resinas, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, e outros agentes de suspensão bem conhecidos.
Os compostos da presente invenção podem ser formulados para administração como supositórios. Uma cera de baixa fusão, tal como uma mistura de glicéridos de ácidos gordos ou manteiga de cacau é, em primeiro lugar, fundida e o componente ativo é disperso, homogeneamente, por exemplo, por agitação. A mistura homogénea fundida é, em seguida, vertida em moldes de tamanho conveniente e deixada arrefecer e solidificar.
Os compostos da presente invenção podem ser formulados para administração vaginal. Pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou pulverizantes contendo, além do ingrediente ativo, tais veículos como são conhecidos na técnica como sendo apropriados.
Formulações adequadas juntamente com veículos, diluentes e excipientes farmacêuticos são descritos em Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, editado por E . W. Martin, Mack Publishing Company, 19a Edição, Easton, Pensilvânia, o qual é aqui incorporado por referência. Uma cientista especialista em formulação pode modificar as formulações dentro dos ensinamentos do relatório descritivo para proporcionar numerosas formulações para uma via de administração particular sem tornar as composições da presente invenção instáveis ou compreendendo a sua atividade terapêutica. A modificação dos presentes compostos para os tornar mais solúveis em água ou noutro veículo, por exemplo, pode ser facilmente conseguida por modificações menores (por exemplo, formulação de sal), que estão bem dentro da perícia vulgar na técnica. Está também bem dentro da perícia vulgar da técnica modificar a via de administração e regime de dosagem de um composto particular de modo a gerir a farmacocinética dos presentes compostos para um efeito benéfico máximo nos pacientes . 0 termo "medicamento" significa uma substância utilizada num método de tratamento e/ou profilaxia de um sujeito em necessidade deste, em que a substância inclui, mas não está limitada a, uma composição, uma formulação, uma forma farmacêutica, e semelhantes, compreendendo um composto de fórmula I. É contemplado que a utilização do composto representado pela fórmula I no fabrico de um medicamento para o tratamento de qualquer das condições antivirais aqui divulgadas pode ser qualquer dos compostos contemplados em qualquer dos aspetos da invenção, quer isoladamente ou em combinação com outros compostos da presente invenção. 0 termo "sujeito" significa um mamífero, o qual inclui, mas não está limitado a, gado bovino, suínos, ovelhas, galinhas, perus, búfalos, lamas, avestruz, cães, gatos e seres humanos, de preferência, o sujeito é um ser humano. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz", como aqui utilizado, significa uma quantidade necessária para reduzir os sintomas da doença num indivíduo. A dose será ajustada aos requisitos individuais em cada caso particular. Essa dosagem pode variar dentro de limites amplos, dependendo de numerosos fatores tais como a gravidade da doença a ser tratada, a idade e a estado de saúde geral do paciente, outros medicamentos com os quais o paciente está a ser tratado, a via e forma de administração e as preferências e experiência do médico envolvido. Para administração oral, uma dosagem diária de entre cerca de 0,1 e cerca de 10 g, incluindo todos os valores entre, tal como 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9 e 9,5 g, por dia deveria ser apropriada em monoterapia e/ou em terapia de combinação. Uma dosagem diária preferida está entre cerca de 0,5 e cerca de 7,5 g por dia, uma dosagem mais preferida está entre cerca de 1,5 e 6,0 g por dia. Geralmente, o tratamento é iniciado com uma grande "dose de carga" inicial para reduzir ou eliminar rapidamente o vírus, seguida por um decréscimo da dose a um nível suficiente para evitar o ressurgimento da infeção. Um perito no tratamento das doenças aqui descritas será capaz, sem experimentação indevida e com base nos conhecimentos pessoais, experiência e divulgações do presente pedido, determinar uma quantidade terapeuticamente eficaz dos compostos da presente invenção para uma dada doença e paciente. A eficácia terapêutica no tratamento de HBV e HCV pode ser determinada a partir de testes de função hepática, incluindo, mas não limitados a níveis proteicos, tais como proteínas séricas (por exemplo, albumina, fatores de coagulação, fosfatase alcalina, aminotransferases (por exemplo, alanina transaminase, aspartato transaminase), 5'-nucleosidase, C-glutaminiltranspeptidase, etc.), síntese de bilirrubina, síntese de colesterol e síntese de ácidos biliares; uma função metabólica do fígado, incluindo, mas não limitada a metabolismo de carboidratos, metabolismo de aminoácidos e amónia. Alternativamente, a eficácia terapêutica pode ser monitorizada medindo ARN de HBV ou HCV, e os resultados destes testes permitirão otimizar a dose. Para HIV, a eficácia terapêutica numa infeção por HIV pode ser determinada pela medição dos níveis de ARN de HIV a partir de amostras plasmáticas e medição dos níveis de células CD4.
Os compostos divulgados ou os seus derivados ou sais farmaceuticamente aceitáveis ou formulações farmaceuticamente aceitáveis que contêm estes compostos são úteis na prevenção e tratamento de infeções por HIV e de outras condições relacionadas, tais como complexo relacionado com SIDA (ARC), linfadenopatia generalizada persistente (PGL), condições neurológicas relacionadas com SIDA, condições positivas a anticorpos anti-HIV e positivas a HIV, sarcoma de Kaposi, púrpura trombocitopénica e infeções oportunistas. Adicionalmente, estes compostos ou formulações podem ser utilizados profilaticamente para prevenir ou retardar a progressão da enfermidade clínica em indivíduos que são anticorpos anti-HIV ou antigénios HIV positivos ou que foram expostos ao HIV.
Um outro aspeto da presente invenção compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto representado pela fórmula I e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um outro agente antiviral; em que a administração é concorrente ou alternativa ou sequencial. Entende-se que o tempo entre a administração alternativa (ou sequencial) pode variar entre 1-24 horas, o que inclui qualquer subintervalo incluindo entre 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 e 23 horas.
Contempla-se que o outro agente antiviral inclua, mas não esteja limitado a, interferão-α, interferão-B, interferão-a peguilado, ribavirina, levovirina, viramidina, um outro nucleósido inibidor de polimerases de HIV, HBV ou HCV, um inibidor não nucleósido de polimerases de HIV, HBV ou HCV, um inibidor de proteases de HIV, HBV ou HCV, um inibidor de helicases de HIV, HBV ou HCV ou um inibidor de fusão de HIV, HBV ou HCV. Quando um composto ativo ou o seu derivado ou sal são administrados em combinação com um outro agente antiviral, a atividade pode ser aumentada sobre o composto de origem. Quando o tratamento é terapia de combinação, tal administração pode ser concorrente ou sequencial com respeito aos derivados de nucleósidos. "Administração concorrente", como aqui utilizado, inclui, assim, a administração dos agentes ao mesmo tempo ou em tempos diferentes. A administração de dois ou mais agentes ao mesmo tempo pode ser alcançada através de uma formulação única contendo dois ou mais ingredientes ativos ou através da administração substancialmente simultânea de duas ou mais formas farmacêuticas com um agente ativo único.
Numa outra forma de realização para o tratamento de infeção por HIV, o composto ativo ou o seu pró-fármaco ou sal farmaceuticamente aceitável pode ser administrado em combinação ou em alternância com um outro agente antiviral, tal como um outro agente ativo anti-HIV, incluindo, mas não limitado aos das fórmulas acima, outros listados abaixo ou conhecidos na técnica. Em geral, em terapia de combinação, dosagens eficazes de dois ou mais agentes são administradas em conjunto, ao passo que durante a terapia de alternância, uma dosagem eficaz de cada agente é administrada em série. A dosagem dependerá das taxas de absorção, inativação e excreção do fármaco, bem como de outros fatores conhecidos daqueles peritos na especialidade. Note-se que os valores de dosagem também variarão com a gravidade da condição a ser aliviada. Deve ser ainda entendido que para qualquer sujeito particular, regimes e esquemas de dosagem específicos devem ser ajustados ao longo do tempo de acordo com a necessidade individual e o julgamento profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das composições.
Os exemplos não limitantes de agentes antivirais que podem ser utilizados em combinação com os compostos aqui divulgados incluem os seguintes: Invirase®, Fortovase®, Norvir®,
Crixivan®, Viracept®, Agenerase®, Kaletra®, Retrovir®, Epivit®, Combivir®, Triazivir®, Ziagen®, Hivid®, Videx®, Didex® EC, Zerit®, Viread®, Covincil™, Viramune®, Rescriptor®, Sustiva®, Droxia®, Fuzeon®, Atazanavir®, Proleukin®, Remune®, Procrit®, Darunavir® e Serostim®. Resultados experimentais
Será entendido que as referências aqui a tratamento estendem-se a profilaxia, bem como ao tratamento de condições existentes. Além disso, o termo "tratamento" de uma infeção virai, como aqui utilizado, também inclui tratamento ou profilaxia de uma doença ou uma condição associada à ou mediada pela infeção virai, ou dos sintomas clínicos desta. Não sendo limitadas por meio de exemplos, as seguintes formas de realização exemplificadas pretendem transmitir informação relativa a métodos de preparar e utilizar os compostos divulgados e reivindicados.
Preparação de compostos
Preparação geral de 2'-(R)-2'-C-metil-2'-desoxinucleósidos A preparação de 2'-desoxinucleósidos substituídos na posição 2' é ilustrada no Esquema 1 abaixo. 0 tratamento do composto 1 com TIPDSC1 seguido por reação do intermediário resultante com cloreto de oxalilo monometilico dá o composto 3. 0 tratamento de 3 com AIBN/n-BuSnsH seguido por desililação com TBAF proporciona 2' -desoxinucleósido substituído na posição 2' 6. 0 intermediário 4 também pode ser preparado por tratamento de 2 com PhOCSCI seguido por desoxigenação redutora, conforme usado para 4 a partir de 3. B e R2 são definidos como acima.
Preparação de 2'- (R)-2'-metil-2'-desoxiuridina 0 método geral acima para a preparação de 2'-desoxinucleósidos substituídos na posição 2' é exemplificado no Esquema 2 para a síntese de 2-(R)-2'-C-metil-2'-desoxiuridina. 0 tratamento de 2'-C-metil-uridina com TIPDSC1 em piridina ou na presença de imidazol seguido por reação do intermediário resultante 8 com cloreto de oxalilo monometilico deu o composto 9 com bom rendimento. A desoxigenação de 9 com conseguida por tratamento de 9 com AIBN/n-Bu3SnH para dar 10, gue após desproteção deu 2' -(R) -2' -C-metil-2'-desoxiuridina (11) .
Preparação geral de 2'-(R)-4'-azido-2'-C-metil-2'-desoxinucleósidos A síntese geral de 2'-(R)-4'-azido-2'-C-metil-2'-desoxinucleósidos é mostrada no Esquema 3. O tratamento do composto 12 com iodo na presença de trifenilfosfina seguido por eliminação na presença de uma base, tal como, NaOMe ou DBU ou semelhantes, dá 4'-metileno-nucleósido 14. A proteção de 3'-OH de 14 por tratamento com TBSC1 na presença de imidazol proporciona o composto 15. A epoxidação de 15 seguida por abertura do anel por tratamento de epóxido com TMSN3 na presença de SnCl4 também origina 4' -azido-nucleósido 18 após desproteção de 17 por TBAF. 0 composto 18 também pode ser preparado por azidoiodinação de 14. 0 tratamento de 14 com IC1 e NaN3 dá 4'-azido-5'-iodo-nucleósido 19 com bom rendimento. A proteção de 3'-OH com BzCl seguida por 5'-iodo-oxidação com ácido m-cloroperbenzóico na presença de ácido m-clorobenzóico proporciona o nucleósido protegido 20. A desproteção de 20 também origina 4'-azido-nucleósidos 18.
Preparação de 2'-(R)-4'-azido-2'-C-metil-2'-desoxicitidina (Esquema 4)
Esquema 4 ilustrou a preparação de 2(R)-4'-azido-2'-C-metil-2'-desoxicitidina. O tratamento do composto 11 com iodo na presença de trifenilfosfina seguido por eliminação catalisada por NaOMe em MeOH deu o composto 22 com bom rendimento. A reação de 22 com IN3 proporcionou o intermediário 27. A proteção de 3'-OH de 27 por tratamento com BzCl em piridina seguida por oxidação de 5'-iodo com mCPBA na presença de mCBA originou um análogo de uridina protegido 28. 0 nucleósido alvo 26 foi preparado por tratamento de 28 com cloreto de triisopropilbenzenossulfonilo na presença de DMAP seguido por hidróxido de amónio e depois amónia metanólica. 0 composto 26 também pode ser preparado através do intermediário epóxido 24 por tratamento do composto 23 com DMDO/acetona seguido por abertura do anel com TMSN3 na presença de SnCÍ4 e conversão do análogo de uridina a derivado de citidina.
Preparação de intermediários de aldeído 49 e 50 (Esquema 5) 0 tratamento do composto 42 com DMTrCl em piridina na presença de DMAP seguido por TBSCl/imidazol deu, seletivamente, o composto 44 com excelente rendimento. A desoxigenação do composto 44
foi conseguida por tratamento com clorooxoacetato de metilo na presença de DMAP seguido por AIBN/(TMS)3SiH em tolueno para proporcionar o intermediário 2'-desoxinucleósido 45. A detritilação de 45 seguida por oxidação de Dess-Martin originou aldeído 47. 0 composto 47 foi submetido a condensação de aldol seguida por redução com NaBfU deu diol 48. A oxidação seletiva de 48 por reagente de Dess-Martin proporcionou o intermediário 49. 5'-Hidroxi de 49 foi protegido com sililo para originar o intermediário 50.
Preparaçao de 4'-C-ciano-2'-metil-2'-desoxicitidina (Esquema 6) 0 tratamento do compostos 49 com cloridrato de hidroxilamina em piridina seguido por aquecimento com anidrido acético a 120 °C na presença de acetato de sódio deu o composto 52. A aminação do composto 52 foi conseguida por tratamento de 52 com cloreto de tosilo na presença de JV-metilpiperidina e trietilamina seguida por hidróxido de amónio para originar o intermediário de citidina 53. A desililação de 53 com TEAF e acetilação seguidos por tratamento com amónia metanoica produziu o composto 55.
Preparação de 4'-C-vinil-2'-metil-2'-desoxicitidina (Esquema 7) O tratamento de aldeído 50 com cloreto de metiltrifosfónio na presença de LiBu deu o intermediário 4'-C-vinilo 56. O composto 58 foi preparado de maneira semelhante. A eliminação adicional de 58 a análogo de 4'-C-etinilo foi conseguida por tratamento de 58 com LiBu. Utilizando um método semelhante para a preparação do composto 53 a partir do 52, a aminação dos compostos 56 e 59 deu os compostos 57 e 60, respetivamente.
Preparação de 4'-C-hidroximetil-2'-metil-2'-desoxicitidina (Esquema 8) A acetilação do composto 48 com anidrido acetílico deu o intermediário 61 completamente protegido. À semelhança, a aminação de 61 seguida por desproteção proporcionou 4' -C-hidroximetil-2'-metil-2'-desoxicitidina 62.
Preparação de 4'-C-alil- e 4'-C-ciano-2'-metiltimidina (Esquema 9) A epoxidação do composto 63 com DMDO seguida por tratamento do epóxido resultante com aliltrimetilsilano na presença de SnCÍ4, deu o intermediário protegido sililo 65. 0 tratamento de 65 com amónia metanólica seguida por fluoreto de amónio em MeOH proporcionou 4'-C-alil-nucleósido 69. À semelhança, o composto 70 foi preparado a partir do intermediário 64 quando cianeto de trimetilsililo foi utilizado com nucleófilo para a abertura do epóxido.
Preparação de 4'-C-etinil-2'-metiltimidina (Esquema 10) 0 tratamento do composto 64 com tri(alii)alumina seguido por desililação deu os produtos 73 e 74 após separação.
Reagentes e condições: a) (alil)3Al; b)NH4F.
Detalhes experimentais: Síntese do composto 28
0 composto 27 foi preparado a partir do nucleósido de partida, 2'-C-metil-2'-desoxiuridina, por tratamento com Ι2/ΡΪ13Ρ e eliminação catalisada por NaOMe seguida por azidoiodinação com NCl/NaN3. A uma solução do álcool (203,7 mg, 0,53 mmol, 1,0 eq.) em diclorometano (DCM) foi adicionada trietilamina (TEA) (148 μΐ, 1,06 mmol, 2,0 eq.) e dimetilaminopiridina (DMAP, quantidade catalítica). Após 5 minutos, cloreto de benzoílo (BzCl, 68 μΐ, 0,58 mmol, 1,1 eq.) foi adicionado e a reação foi monitorizada por LCMS (cromatografia líquida-espectroscopia de massa) . Após 10 minutos, a reação estava concluída. Água e NaHCCt foram adicionados e a mistura foi extraída com DCM (2x), a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SC>4, filtrada e concentrada. A purificação sobre sílica gel eluída com
EtOAC-Heptane de 3:7 a 6:4 originou iodeto protegido (180 mg, 68%) de produto como um sólido branco.
A uma solução de iodeto (180 mg, 0,362 mmol, 1,0 eq.) em DCM (18 ml) e água (9 ml) forma adicionados sucessivamente K2HPO4 (126 mg, 0,724 mmol, 2,0 eq.), nBmNHSCh (135 mg, 0,398 mmol, 1,1 eq.) e mCBA (ácido meta-clorobenzóico) (72 mg, 0,398 mmol, 1,1 eq.). A mistura de reação foi arrefecida até 0 °C e mCPBA (ácido meta-cloroperbenzóico) 77% (243 mg, 1,086 mmol, 3,0 eq.) foi adicionado e a reação foi deixada até atingir a temperatura ambiente. Depois de 14 horas, a LCMS indicou a conclusão da reação. NaHCCb e Na2S03 aquosos saturados foram adicionados à mistura de reação e a mistura foi extraída com EtOAc (100 ml) . A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre Na2SC>4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por FCC sobre sílica gel, eluído com EtOAc-Heptano de 7:3 a 5:5 para produzir 145 mg (76%) de produto 28 como um sólido branco Síntese do composto 26
Uma mistura de POCI3 (94 μΐ, 1, 009 mmol, 4, 0 eq. ) e triazol (331 mg, 4,793 mmol, 19,0 eq.) em MeCN seco (5 ml) foi agitada a 0 °C durante 5 minutos seguido por adição lenta de TEA (0,74 ml). A mistura resultante foi deixada a 0 °C durante 1 hora e depois uma solução da uridina (28, 163 mg, 0,252 mmol, 1,0 eq.) em MeCN seco (5 ml) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 14 horas, depois filtrada através de uma almofada de celite e o sólido foi lavado com 3 ml de MeCN. EtOAc foi adicionado (70 ml) e a solução foi lavada com NaHCCç aquoso saturado, água, salmoura e em seguida a solução foi concentrada. O resíduo foi coevaporado com dioxano (20 ml) . O resíduo foi utilizado na etapa seguinte sem purificação.
A uma solução de triazol (159 mg) em MeOH (5 ml) foi adicionado metóxido de sódio (-240 μΐ, 25% em peso, em MeOH, 4.0 eq.). Após 30 minutos, a LCMS mostrou que a reação estava concluída. À mistura de reação foi adicionado HC1 (1, 1 ml, 1 N, 4.0 eq.) e a mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado sobre sílica gel, eluído com DCM-MeOH de 1% a 6% para produzir 44 mg (54%) do produto com um óleo.
O composto de metóxido (40 mg, 135 mmol, 1,0 eq. ) foi dissolvido em amónia a 0,5 N em dioxano (5 ml). A mistura de reação foi aquecida até 120 °C num micro-ondas (250 W, 150 PSI) durante 3 horas. O progresso da reação foi seguido por LCMS. Após a conclusão da reação, o solvente foi removido e o resíduo foi purificado sobre sílica gel, eluído com DCM-EtOH de 95:5 a 80:20 para produzir 16,8 mg do produto desejado 26 como um xarope.
Os produtos listados abaixo são preparados utilizando um procedimento semelhante ao descrito acima.
Dados de H-RMNMS Material de
Produto dos produtos partida
(360 MHz,
CD30D) : 1,33 (d, J = 25,2 Hz, 3H) , 3,80 (m, 2H) , 4,13 (d, JM+1 = 301,13 = 21,6 Hz, 1H) , (calc. 300,10) 5.94 (d, J = 7,2para C10H13FN6O4)
Hz, 1H) , 6,53 (d, J = 10, 8 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 6,1 Hz, 1H) . (360 MHz, CD3OD): 3,80 (m, 2H) , 4,57 (dd, J = 3,6, 21, 6 Hz, 1H), 5 M+l = 287,10 (dd, J = 3,6, (calc. 286,08) 50,4 Hz, 1H), para C9H11FN6O4) 5.94 (d, J = 7,2
Hz, 1H) , 6,16 (d, J = 21, 6 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 7,2 Hz, 1H) . (360 MHz,
CD3OD) : 1,39 (d, J = 22,3 Hz, 1H) , 3,80 (m, 1H) , 4,20 (d, JM+1 = 302,12 = 25,2 Hz, 1H) , (calc. 301,08) 5,74 (d, J = 7,2para C10H12FN5O5) Hz, 1H), 6,40 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 8,2 Hz, 1H) . (360 MHz, CD3OD) : 3,76 (m, 2H) , 4,59 (dd, J = 3,6, 21,6 Hz, 1H), 5,22 (dd, J = M+l = 288,10 3,6, 54,0 Hz , (calc. 287,07)
1H), 5,70 (d, J para C9H10FN5O5) = 10,8 Hz, 1H), 6,16 (dd, J = 1,4, 18,0 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 8,2 Hz, 1H) . (400 MHz, CD3OD): 3,90 (dd, J = 12,4 Hz, 2H) , 4,50 M+l = 305,10 (t, J = 12,8 Hz, (calc. 304,07)
1H), 5,93 (d, J para C9H10F2N6O4) = 7,6 Hz, 1H), 6,40 (si, 1H), 7,71 (d, J = 7, 6 Hz, 1H). (400 MHz,
DMSO-de) : 4,52 (m, 1H), 5,75 (d, J = 8 , 0 Hz ,
1H) , 5,86 (t, J M+l = 306,05 = 6,0 Hz, 1H) , (calc. 305,06) 6,20 (t, J = 7, 6 para C9H9F2N5O5)
Hz, 1H), 6,78 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8, 0 Hz, 1H) , 11, 66 (s, 1H) . (250 MHz, CD3OD) : 0,93 (d, J = 2,5 Hz, 3H), 2,70 (m, M+l = 283,12 1H) , 3,89 (m, (calc. 282,11)
3H) , 5,89 (d, J para C10H14N6O4) = 7,5 Hz, 1H), 6,44 (m, 1H), 7,95 (d, J = 7,5 Hz, 1H). (250 MHz, CD3OD) : 0,99 (d, J = 5, 0 Hz, 3H), 2,73 (m, 1H) , 3,90 (m, M+l = 284,29
2H), 4,04 (d, J (calc. 283,09) = 12,5 Hz, 1H), para C10H13N5O5) 5,72 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 6,37 (d, J = 10, 0 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 10,0 Hz, 1H). (250 MHz,
CD3OD): 3,85 (s, 2H) , 4,50 (dd, 5,0, 22,5 z, 1H), 5,20 (td, 5,0, J = M+l = 288,19 55,0 Hz, 1H) , (calc. 287,07) 5,73 (d, J = 7,5 para C9H10FN5O5)
Hz, 1H), 6,46 (dd, J = 7,5, J = 12,5 Hz, 1H), 7,75 (dd, J = 2.5, 7,5 Hz , 1H) . (250 MHz, CD3OD): 3,85 (s, 2H), 4,49 (dd, J = 5,0, 22,5 Hz, 1H), 5,22 (td, J = M+l = 287,12 2.5, 57,5 Hz, (calc. 286,08) 1H) , 5,93 (d, Jpara C9H11FN6O4) = 7,5 Hz, 1H), 6,49 (dd, J = 5,0, 12,5 Hz,
1H), 7,76 (d, J = 7,5 Hz, 1H) . (250 MHz,
CD3OD) : 0,96 (d, J = 7,5 Hz, 3H), 2,70 (m, 1H), 3,84 (dd, M+l = 301,16 J = 12,5 Hz, (calc. 300,10)
1H), 4,03 (d, J para C10H13FN6O4) = 10,0 Hz, 1H), 6,37 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 8,25 (J = 7,5 Hz, 1H) . (250 MHz, CD3OD) : 1,02 (d, J = 7,5 Hz, 3H), 2,71 (m, 1H) , 3,92 (dd, M+Na = 323, 90 J = 12,5 Hz, (calc. 324,08 1H) , 4,07 (d, Jpara = 10,0 Hz, 1H) , CioHi2FN505Na) 6,34 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 8,30 (J = 7,5 Hz, 1H) . (450 MHz, CDC13) : 0,97 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 186 (d, J =
1,2 Hz, 3H), 2,08 (d, OH), 2,19 (t, OH), M+l = 298,10 2,68 (m, 1H) , (calc. 297,11 3,84 (d, J = 12 para C11H15N5O5)
Hz, 1H) , 3,92 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 6,33 (d, J = 7, 6 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H) . Síntese do composto 43
A uma solução de composto 42 (1,1 g, 4,26 mmol) em piridina anidrica (50 ml) foi adicionado DMTrCl (2,17 g, 6,39 mmol) à rt. A mistura foi agitada durante 5 h, diluída com EtOAc (100 ml) , lavada com água (25 ml x 4) , e seca sobre sulfato de sódio. Após filtração e concentração, o resíduo foi coevaporado com tolueno (30 ml) e purificado por cromatografia em coluna rápida (MeOH em CH2CI2 0 a 5%) para dar 43 (1,9 g, 80%). RMN de !H (CDCI3) δ (ppm) 9,94 (s, 1H, NH) , 8,17 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-6), 7,40-7,24 (m, 9H, aromático), 6,84 (m, 4H, aromático), 6,08 (s, 1H, H-l ' ) , 5,28 (dd, 1H, J = 2,0, 8,4 Hz, H-5), 4,80 (s, 1H, HO), 4,11-4,01 (m, 2H, H-3 ' e 4'), 3,79 (s, 6H, (OCH3) x 2), 3,61 (dd, 1H, J = 2,4, 11,6 Hz, H-5'), 3,55 (dd, 1H, J = 2,4, 11,2 Hz, H-5") , 2,87 (d, 1H, J = 9,2 Hz, HO) , 1,32 (s, 3H, CH3) . Síntese do composto 44
A uma solução de 43 (1,9 g, 3,39 mmol) e imidazol (0,69 g, 10,17 mmol) em CH2CI2 anidrico (20 ml) foi adicionado TBSC1 (0,77 g, 5,08 mmol) à rt. A mistura resultante foi agitada à rt durante 48 h. Imidazol (0,69 g) e TBSC1 (0,77 g) adicionais foram adicionados. Em seguida, a mistura foi agitada à rt durante 72 h, diluída com CH2CI2 (80 ml) , lavada com água (40 ml x 2), e seca sobre sulfato de sódio. Após filtração e concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel rápida (0-20-35% EtOAc em hexanos) para dar o composto 44 (2 g, 87%) como um sólido branco. RMN de ΤΗ (CDC13) δ (ppm) 8,34 (s, 1H, NH) , 8,16 (d, 1H, J = 8,4 Hz, H-6) , 7,32-7,17 (m, 9H, aromático), 6,85 (m, 4H, aromático), 6,13 (s, 1H, H-l'), 5,08 (dd, 1H, J = 2,4, 8,0 Hz, H-5), 4,19 (d, 1H, J = 8,4 Hz, H-3'), 4,01 (m, 1H, H-4'), 3,87 (dd, 1H, J = 2,0, 10.8 Hz, H-5 ' ) , 3,8 0 (s, 6H, (OCH3) x 2) , 3, 32 (dd, 1H, J = 2,0, 10.8 Hz, H-5"), 1,19 (s, 3H, CH3) , 0,79 (s, 9H, C(CH3)3), 0,07 (s, 3H, CH3Si), -0,30 (s, 3H, CH3Si). Síntese do composto 45
A uma solução de 44 (2,0 g, 2, 96 mmol) , DAMP (2,17 g, 17,78 mmol) e trietilamina (2,48 ml, 17,78 mmol) em acetonitrilo (40 ml) foi adicionado clorooxoacetato de metilo (1,64 ml, 17,78 mmol) gota a gota sob banho de água gelada. A mistura resultante foi agitada à rt durante 1 h, diluída com EtOAc (125 ml) , lavada com salmoura (30 ml x 4) , e seca sobre sulfato de sódio. Após filtração e concentração, o resíduo foi coevaporado com tolueno (20 ml x 2) e seco sob vácuo elevado durante 10 min. Em seguida, o resíduo foi dissolvido em tolueno anídrico (40 ml) e borbulhado com gás de nitrogénio durante 10 min, ao qual sililhidreto de TMS (5,49 ml, 17,78 mmol) e, depois, AIBN (1,46 g, 8,89 mmol) foram adicionados. A mistura resultante foi submetida a refluxo em banho de óleo pré-aquecido a 120 °C durante 1,5 h e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (0-20-35% EtOAc em hexanos) para dar o composto 45 (1,3 g, 67%) como um sólido branco. RMN de ΤΗ (CDCI3) δ (ppm) 8,15 (d, 1H, J= 8,4 Hz, H-6), 8,02 (s, 1H, NH) , 7,34-7,20 (m, 9H, aromático), 6,84 (m, 4H, aromático), 6,30 (d, 1H, J = 7, 6 Hz, H-l ' ) , 5,11 (dd, 1H, J = 2,4, 8,4 Hz, H-5) , 4,14 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-3 ' ) , 3, 83-3, 74 (m, 8H, H-4 ' , 5' e (CH30)2), 3,33 (dd, 1H, J = 2,4, 10,8 Hz, H-5"), 2,54 (m, 1H, H-2 ' ) , 0,98 (d, 3H, J = 6,8 Hz, CH3) , 0,76 (d, 9H, C(CH3)3), 0,04 (s, 3H, CH3Si), -0,28 (s, 3H, CH3Si) . Síntese do composto 46
A uma solução de composto 45 (1,3 g, 1,97 mmol) em CH2CI2 anídrico (10 ml) foi adicionado TFA (0,3 ml, 3,95 mmol) sob banho de água gelada. A mistura resultante foi agitada à rt durante 1 h, diluída com CH2CI2 (100 ml), lavada com NaHC03 saturado (30 ml x 2) e seca sobre sulfato de sódio. Após filtração e concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (EtOAc:hexanos = 1:1) para dar o composto 46 (600 mg, 85%) como um sólido branco. Síntese do composto 47
A uma solução de composto 46 (3 g, 8,46 mmol) em CH2CI2 anídrico (30 ml) foi adicionado periodinano de Dess-Martin a 15% em CH2CI2 (36 ml, 12,73 mmol) gota a gota a 0 °C. A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 3 h, diluída com CH2CI2 (150 ml), lavada com solução de bicarbonato de sódio (50 ml x 3) e em seguida com solução saturada de tiossulfato de sódio (50 ml x 3) , e a camada orgânica seca sobre sulfato de sódio. Após filtração e concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:20) para dar o composto 47. RMN de (CDCI3) δ (ppm) 9,79 (s, 1H, H-5 ' ) , 8,86 (s, 1H, NH), 8,26 (d, 1H, J= 7,2 Hz, H-6), 6,15 (d, 1H, J= 6,0 Hz, H-l ' ) , 5,77 (d, 1H, J= 8,0 Hz, H-5), 4,40 (d, 1H, J= 3,6 Hz, H-4' ) , 4,26 (t, 1H, J= 3,6 Hz, H-3' ) , 2,70 (m, 1H, H-2 ' ) , 0,92 (s, 9H, C(CH3)3), 0,76 (d, 3H, J= 7,6 Hz, CH3) , 0,14 (s, 3H, CH3Si) , 0,13 (s, 3H, CH3Si). Síntese do composto 48
O composto 47 obtido foi, em seguida, dissolvido em dioxano (100 ml) e formaldeido a 37% (3 ml, 36,96 mmol) foi adicionado, à solução obtida foi adicionado hidróxido de sódio a 2 N (5 ml, 10 mmol) gota a gota à rt. A mistura de reação resultante foi agitada à rt durante 15 h e arrefecida. Depois, boroidreto de sódio (890 mg, 23,53 mmol) foi adicionado em porções. A mistura resultante foi agitada à rt durante 6 h e solução de AcOH-piridina (2,5:7,5 ml) e água (100 ml) foram adicionadas sob água gelada. A mistura foi então extraída com CH2CI2 (50 ml x 4) e a camada orgânica seca sobre sulfato de sódio. Após filtração e concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:40 a 1:20) para dar o composto 48 (2,1 g, 64%) como um sólido branco. RMN de ΤΗ (CD3OD) δ (ppm) 8,30 (d, 1H, J= 8,0 Hz, H-6) , 6,31 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-l ' ) , 5,68 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-5) , 4,2 9 (d, 1H, J = 9, 6 Hz, H-3 ' ) , 3,8 6 (d, 1H, J = 12,0 Hz, CH-4 ' ) , 3,78 (d, 1H, J = 12,0 Hz, CH-4'), 3,54 (d, 1H, J = 12,0 Hz, CH-4'), 3,45 (d, 1H, J = 12,0 Hz, CH-4'), 2,83 (m, 1H, H-2 ' ) , 0, 98-0, 88 (m, 12H, CH3-2 ' e C(CH3)3), 0,15 (s, 3H, CH3Si), 0,13 (s, 3H, CH3Si). Síntese do composto 49
A uma solução de composto 48 (1,4 g, 3,62 mmol) em CH2CI2-THF (46:10 ml) foi adicionado periodinano de
Dess-Martin (1,8 g, 4,24 mmol) a 0 °C numa porção. A mistura foi agitada a 0 °C durante 2 h. Após a temperatura elevar-se até 10 °C, a mistura foi agitada durante lhe tiossulfato de sódio (1, 0 g) foi adicionado. Em seguida, a mistura foi agitada durante 30 min e adicionada no topo de uma coluna de sílica gel, que foi depois eluída com CH2CI2 e CH2Cl2-EtOAc (3:1) para dar o composto 49 (uma mistura de α/β = 2 desejado) como um sólido branco (900 mg, 64%). Síntese do composto 50
A uma solução de composto 49 (500 mg, 1,30 mmol) e imidazol (530 mg, 7,8 mmol) em CH2CI2 (20 ml) foi adicionado TBSC1 (590 mg, 3,90 mmol) à rt. A mistura resultante foi agitada durante 3 h, diluída com CH2CI2 (100 ml), lavada com água e seca sobre sulfato de sódio. Após filtração e concentração, o resíduo foi separado por cromatografia em coluna rápida (EtOAc 0 a 25% em hexanos) para dar o composto 50 (270 mg, 40%). Síntese do composto 51
A uma solução de composto 48 (220 mg, 0,57 mmol) em CH2CI2-THF anídrico (10 ml: 2 ml) foi adicionado periodinano de Dess-Martin (300 mg, 0,71 mmol) a 0 °C numa porção. A mistura de reação resultante foi agitada durante 2 h e tiossulfato de sódio (390 mg) foi adicionado. A mistura foi agitada durante 15 min a 0 °C, em seguida vertida no topo de uma coluna de sílica gel curta e eluída com CH2Cl2-EtOAc (1:1) cuidadosamente. As frações foram combinadas e concentradas em vácuo num resíduo, que foi em seguida dissolvido em piridina (10 ml) e NH2OH-HCI (300 mg) adicionado. A mistura resultante foi agitada à rt durante 15 h e concentrada em vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:40 a 1:20) para dar o composto 51 (107 mg, 47%) juntamente com isómero 4'-β (53 mg, 18%) como sólidos brancos. RMN de !H (CD3OD) δ (ppm) 8,20 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-6) , 7,4 (s, 1H, HC=N), 6,31 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-l'), 5,70 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-5), 4,32 (d, 1H, J = 10,0 Hz, H-3'), 3,84 (s, 2H, H-5' ) , 2,64 (m, 1H, H-2' ) , 0,94 (d, 3H, J = 7,2 Hz, CH3) , 0, 92 (s, 9H, C(CH3)3), 0,17 (s, 3H, CH3Si), 0,13 (s, 3H, CH3Si); RMN de ΤΗ (CD3OD) para isómero menor δ (ppm) 7,71 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-6), 7,55 (s, 1H, HC=N), 6,29 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-l'), 5,70 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-5), 4,37 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-3'), 3, 92 (d, 1H, J = 12,4 Hz, H-5' ), 3,73 (d, 1H, J = 12,4 Hz, H-5") , 2,86 (m, 1H, H-2'), 0, 93-0, 88 (m, 12H, CH3-2' eC(CH3)3), 0,12 (s, 3H, CH3Si), 0,10 (s, 3H, CH3Si) , Síntese do composto 52
Uma mistura de composto 51 (160 mg, 0,40 mmol) e acetato de sódio (123 mg, 1,5 mmol) em anidrido acético (5 ml) foi aquecida a 120 °C durante 3 h e concentrada sob vácuo. O resíduo obtido foi submetido a cromatografia com uma coluna de sílica gel, eluindo com MeOH-CH2Cl2 (1:40) para dar o composto 52 (97 mg, 57%) como um sólido branco. RMN de ΤΗ (CDCI3) δ (ppm) 10,03 (s, 1H, NH) , 7,2 6 (d, 1H, J = 8, 0 Hz, H-6) , 6,17 (si, 1H, H-l' ) , 5,7 8 (d, 1H, J = 8, 0 Hz, H-5) , 4,52 (d, 1H, J = 12,4 Hz, H-5' ) , 4,42 (d, 1H, J = 12,4 Hz, H-5"), 4,19 (si, 1H, H-3'), 2,86 (m, 1H, H-2' ) , 2,17 (s, 3H, CH3CO) , 1,03 (d, 1H, J=7,2, CH3) , 0,95 (s, 9H, C(CH3)3), 0,15 (s, 6H, CH3Si). Síntese do composto 53
A uma solução de composto 52 (200 mg, 0,47 mmol) em CH3CN anídrico (4 ml) contendo trietilamina (0,20 ml, 1,42 mmol) e JV-metilpiperidina (0,11 ml, 0,94 mmol) foi adicionado TsCl (270 mg, 1,42 mmol) à rt. A mistura resultante foi agitada à rt durante lhe em seguida NH4OH a 29% (4 ml) foi adicionado sob banho-maria. A mistura resultante foi agitada à rt durante 2 h e concentrada sob 35 °C. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2CÍ2 = 1:10 a 1:4) para dar o composto 53 (160 mg, 89%) como um xarope. Síntese do composto 54
Uma solução de composto 53 (160 mg, 0,42 mmol) e TEAF (200 mg, 1,34 mmol) em MeOH-THF (2:4 ml) foi agitada à rt durante 15 h e aquecida a 60 °C durante 4 h. Após concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:10 a 1:4) para dar o composto bruto 55 (100 mg, bruto, contaminado por TEAF), que foi depois dissolvido em piridina anídrica, em seguida tratado com anidrido acético, agitado à rt durante 3 h, e concentrado sob vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:40) para dar o composto 54 como um xarope que foi utilizado na reação seguinte. RMN de ΤΗ (CD3OD) δ (ppm) 7,97 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-6), 7,46 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-5), 6,23 (si, 1H, H-l'), 5,52 (si, 1H, H-3'), 4,65 (d, 1H, J = 12,0 Hz, H-5 ' ) , 4,62 (d, 1H, J = 12,0 Hz, H-5") , 3,11 (m, 1H, H-2 ' ) , 2,19 (s, 3H, CH3CO) , 2,19 (s, 3H, CH3CO) , 2,12 (s, 3H, CH3CO) , 0,97 (d, 3H, J = 7,2 Hz, CH3) ; MS-ES (M+l): 393. Síntese do composto 55
O composto 54 foi dissolvido em amónia a 7 M em metanol (5 ml) , agitado num balão vedado durante 15 h e concentrado sob vácuo. O resíduo obtido foi submetido a cromatografia com coluna de sílica gel, eluindo com MeOH-CH2Cl2 (1:4) para dar o composto 55 (30 mg, 27% a partir de 53) como um sólido branco. UV (Àmáx) 273 nm (MeOH) ; RMN de 2Η (CD3OD) δ (ppm) 7,85 (d, 1H, J = 7,8 Hz, H-6), 6,40 (sl, 1H, H-l'), 5,88 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-5) , 4,10 (d, 1H, J = 9, 6 Hz, H-3 ' ) , 4,0 0 (d, 1H, J = 12,4 Hz, H-5 ' ) , 3,92 (d, 1H, J= 12,4 Hz, H-5"), 2,75 (m, 1H, H-2 ' ) , 0,95 (d, 3H, J = 3,2 Hz, CH3) ; MS-ES (M+l): 267. Síntese do composto 56
A uma suspensão de brometo de metiltrifenilfosfónio em THF (2 ml) foi adicionado n-BuLi (2,2 M em hexanos, 0,24 ml, 0,528 mmol) em THF anldrico (2 ml) a -78 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante 1 h e o composto 50 (60 mg, 0,12 mmol) em THF anldrico (2 ml) foi adicionado. A mistura foi, em seguida, agitada a rt durante 1 h, neutralizada com solução de cloreto de amónio aquosa saturada, diluída com EtOAc, lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio. Após filtração e concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:40) para dar o composto 56 como um sólido branco (45 mg, 75%). Síntese do composto 57
A uma solução de composto 56 (100 mg, 0,20 mmol) em CH3CN anldrico (2 ml) contendo trietilamina (0,08 ml, 0,6 mmol) e N-metilpiperidina (0,05 ml, 0,40 mmol) foi adicionado TsCl (120 mg, 0,6 mmol) à rt. A mistura resultante foi agitada à rt durante lhe em seguida NH4OH a 29% (2 ml) foi adicionado sob banho-maria. A mistura resultante foi agitada à rt durante 2 h e concentrada a vácuo sob 35 °C. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:10 a 1:4) para dar o intermediário citidina protegido (70 mg, 70%) como um xarope. Uma mistura do intermediário (70 mg, 0,14 mmol) e fluoreto de amónio (100 mg, 2,82 mmol) em metanol (10 ml) foi submetida a refluxo durante 6 h e outras 15 h após a adição de mais fluoreto de amónio (100 mg, 2,82 mmol) . Após concentração em vácuo, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH : CH2CI2 = 1:10 a 1:4) para dar o composto 57 (28, 6 mg, 77%) . UV (Àmáx) 273 nm (MeOH); RMN de (CD3OD) δ (ppm) 8,28 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-6), 6,28 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-l'), 5,99 (dd, 1H, J = 11,2, 17,2 Hz, H-C=C) , 5,91 (d, 1H, J = 7, 6 Hz, H-5) , 5,49 (dd, 1H, J = 2,0, 17,2 Hz, H-C=C), 5,32 (dd, 1H, J = 2,0, 10,8 Hz, H-C=C), 4,06 (d, 1H, J = 10,8 Hz, H-3'), 3,72 (d, 1H, J = 12,0 Hz, H-5'), 3,55 (d, 1H, J = 12,0 Hz, H-5"), 2,45 (m, 1H, H-2 ' ) , 0,87 (d, 3H, J = 6,8 Hz, CH3) ; MS-ES: 268 (M+l), 535 (2M+1) . Síntese do composto 58
A uma suspensão de cloreto de clorometiltrifenilfosfónio (390 mg, 1,12 mmol) em THF (3 ml) foi adicionado n-BuLi (2,2 M em hexanos, 0,51 ml, 1,12 mmol) a -78 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante 1 h e o composto 50 (140 mg, 0,28 mmol) em THF anídrico (3 ml) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada à rt durante 3 h, neutralizada com cloreto de amónio saturado, diluída com EtOAc, lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio. Após filtração e concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH : CH2CI2 = 1:40) para dar o composto 58 como um sólido branco (140 mg, 94%). Síntese do composto 59
A uma de composto 58 (200 mg, 0,38 mmol) em THF anídrico (10 ml) foi adicionado n-BuLi (2,8 ml, 1,6 M em hexanos, 4,52 mmol) gota a gota a -78 °C. A mistura foi, em seguida, agitada a 78 °C durante 2 h, neutralizada com solução de cloreto de amónio saturada (10 ml) , diluída com EtOAc (50 ml) , lavada com salmoura (15 ml x 3) e seca sobre sulfato de sódio. Após filtração e concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexanos:EtOAc = 4:1) para dar o composto 59 (180 mg, 97%) como um sólido branco. RMN de ΤΗ (CDC13) δ (ppm) 9,21 (sl, 1H, NH) , 8,05 (d, 1H, J = 8,4 Hz, H-6), 6,24 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-l ' ) , 5,94 (dd, 1H, J=ll,2, 17,6 Hz, H-C=C), 5,70 (dd, 1H, J = 2,0, 8,0 Hz, H-C=C), 5,52 (dd, 1H, J = 1,2, 17,2 Hz, H-C=C) , 5,32 (d, 1H, J = 8,4 Hz, H-5) , 4,16 (d, 1H, J = 10,4 Hz, H-3 '), 3,64 (d, 1H, J = 11,2 Hz, H-5 ' ) , 3,57 (d, 1H, J = 11,6 Hz, H-5"), 2,48 (m, 1H, H-2 ' ) , 0,95 (s, 9H, C (CH3) 3) , 0, 91 e 0, 90 (m, 12H, C (CH3) 3 and CH3-2 '), 0,12-0,10 (4s, 12H, CH3S1) . Síntese do composto 60
A uma solução de composto 59 (100 mg, 0,20 mmol) em CH3CN anídrico (3 ml) contendo trietilamina (0,08 ml, 0,6 mmol) e N-metilpiperidina (0,05 ml, 0,40 mmol) foi adicionado TsCl (120 mg, 0,61 mmol) à rt. A mistura resultante foi agitada à rt durante lhe em seguida NH4OH a 29% (2 ml) foi adicionado sob banho-maria. A mistura resultante foi agitada à rt durante 2 h e concentrada a vácuo sob 35 °C. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:20 a 1:10) para dar um intermediário citidina (70 mg, 70%) como um xarope. Uma mistura do intermediário (70 mg, 0,14 mmol) e fluoreto de amónio (260 mg, 7,09 mmol) foi aguecida a 90 °C num balão selado durante 15 h e concentrada em vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:4) para dar o composto 60 (31,2 mg, 85%) como um sólido branco. UV (Àmáx) 273 nm (MeOH) ; RMN de ΤΗ (CDaOD) δ (ppm) 8,05 (d, 1H, J= 7,6 Hz, H-6), 6,31 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-l ' ) , 5,8 9 (d, 1H, J = 7, 6 Hz, H-5) , 3,95 (d, 1H, J = 10,8 Hz, H-3' ) , 3,88 (d, 1H, J = 12,4 Hz, H-5'), 3,79 (d, 1H, J = 12,4 Hz, H-5") , 3,0 6 (s, 1H, H-C=C) , 2,7 5 (m, 1H, H-2 ' ) , 0,915 (d, 3H, J = 6,8 Hz, CH3) . Síntese do composto 61
A uma solução de composto 48 (220 mg, 0,57 mmol) em piridina anídrica (4 ml) foi adicionado anidrido acético (0,27 ml, 2,85 mmol) à rt. A mistura resultante foi agitada à rt durante 5 h e concentrada em vácuo. A mistura resultante foi purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:40) para dar o composto 61 (220 mg, 82%) como um sólido branco. RMN de ΤΗ (CDCI3) δ (ppm) 9,80 (si, 1H, NH) , 7,62 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-6), 6,26 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-l'), 5,74 (d, 1H, J = 8,4 Hz, H-5), 4,53 (d, 1H, J = 12,4 Hz, HC-4 ' ) , 4,35 (d, 1H, J = 12,0 Hz, H-5 '), 4,24 (d, 1H, J = 12,0 Hz, H-5") , 4,0 5 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-3 ' ) , 3,9 9 (d, 1H, J = 12,0 Hz, HC-4 ' ) , 2,82 (m, 1H, H-2"), 2,15 (s, 3H, CH3CO), 2,12 (s, 3H, CH3CO), 0,96 (d, 3H, J = 7,2 Hz, CH3) , 0,90 (s, 9H, C(CH3)3), 0,11 (s, 3H, CH3Si), 0,08 (s, 3H, CH3Si); MS-ES (M+l): 266. Síntese do composto 62
A uma solução de composto 61 (220 mg, 0,47 mmol) em acetonitrilo anidrico (5 ml) contendo trietilamina (0,19 ml, 1,40 mmol) e iV-met ilpiperidina (0,11 ml, 0,93 mmol) foi adicionado TsCl (270 mg, 1,40 mmol) à rt. A mistura resultante foi agitada à rt durante lhe solução aquosa de NH4OH a 29% foi adicionada. Em seguida, a mistura resultante foi agitada à rt durante 15 h e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:40) para dar um intermediário citidina (120 mg, 67%) como um sólido branco. Uma mistura do intermediário (60 mg, 0,156 mmol) e fluoreto de amónio (100 mg) em metanol (5 ml) foi aquecida a 90 °C durante 15 h e concentrada em vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH:CH2Cl2 = 1:10 a 1:4) para dar o composto 62 (10 mg, 24%) como um sólido branco. UV (Àmáx) 273 nm (MeOH) ; RMN de (D2O) δ (ppm) 8,08 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-6) , 6,32 (d, 1H, J = 8,4 Hz, H-l ' ) , 6,0 9 (d, 1H, J = 7, 6 Hz, H-5) , 4,0 9 (d, 1H, J = 10,4 Hz, H-3 ' ) , 3,8 3 (d, 1H, J = 12,8 Hz, CH-4 ' ) , 3,7 7 (d, 1H, J = 12,4 Hz, CH-4 ' ) , 3,72 (d, 1H, J = 12,4 Hz, CH-4 ' ) , 3,60 (d, 1H, J = 12,4 Hz, CH-4'), 2,87 (m, 1H, H-2 ' ) , 0,87 (d, 3H, J = 6,8 Hz, CH3) . Síntese do composto 64
A uma solução de substrato 63 (150 mg, 0,43 mmol) em CH2CI2 (9 ml) foi adicionada solução fria de DMDO (11,33 ml, 1,8 eq., 0,79 mmol, a partir de 0,07 M em acetona) a -30 °C e agitada durante 1 h sob atmosfera de árgon. Os solventes foram evaporados e o resíduo foi seco em vácuo com agitação vigorosa a 0 °C, e seco durante 5 min adicionais. Um sólido viscoso 64 foi formado e utilizado na etapa seguinte sem purificação (~ 90%) . Síntese do composto 67
À solução fria de epóxido 64 (150 mg, 0,41 mmol) em CH2CI2 (10 ml) a -30 °C foram adicionados TMS-CH2CH=CH2 (90 mg, 146 ul, 1,22 mmol) seguidos por SnCÍ4 (1,22 ml de solução a 1 M em CH2CI2, 1,22 mmol) uma vez sob atmosfera de árgon. A mistura de reação foi agitada a -30 °C durante 6 h e à temperatura ambiente durante 2 h. A reação foi extinta com solução saturada de Na2HCC>3, e a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de celite. O filtrado foi dividido entre CH2CI2/H2O. A camada orgânica foi separada, seca (Na2SC>4) e concentrada até à secagem. O produto bruto foi tratado com NHa/MeOH (5 ml, 7 N) durante 15 h à temperatura ambiente. O solvente foi removido em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, eluindo com 10-40% de acetato de etilo/hexano para originar o composto 67 como uma espuma incolor (85 mg, 76%) . Massa calculada: 410,22, encontrada: 411,10 (M++H) ; RMN de ΤΗ (CDC13) δ 8,52 (s, NH) , 7,76 (s, H) , 6,19 (s, H) , 5,89 (m, H) , 5,15 (d, H, J = 4 Hz), 5,11 (s, H), 4,25 (d, H, J = 9,2 Hz), 3,86 (d, H, J = 11,2 Hz), 3,53 (dd, H, J = 11,6 Hz, 3,2 Hz), 2,28 (m, H), 2,39 (dd, H, J = 15,2 Hz, 6,8 Hz), 2,12 (dd, H, J = 14,4 Hz, 8,4 Hz), 1,90 (s, 3H) , 0,91 (s, 9H) 0,12 (s, 3H) , 0, 11 (s, 3H) . Síntese do composto 69
A uma mistura bem seca de substrato 67 (30 mg, 0, 073 mmol) , fluoreto de amónio (32 mg, 0,73 mmol) foi adicionado metanol (3 ml) e submetida a refluxo a 85 °C durante 12 h. Excesso de fluoreto de amónio (16 mg, 0,36 mmol) e metanol (2 ml) foram adicionados e o refluxo continuado durante 24 h adicionais. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de celite e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em silica gel, eluindo com 1-8% de MeOH/CH2CI2 para originar o produto 69 como um sólido incolor (19 mg, 88%). Massa calculada: 296,32, encontrada: 297,20 (M++H) ; RMN de (CDC13) δ 8,22 (s, H) , 6,18 (d, H, J = 8,4 Hz), 5,98 (m, H) , 5,0 9 (m, 2H) , 4,13 (d, H, J = 10,8 Hz), 3,76 (d, H, J = 12,4 Hz), 3,55 (d, H, J = 12 Hz), 2,66 (m, H), 2,39 (dd, H, J = 14,8 Hz, 6,4 Hz), 2,17 (dd, H, J = 14,6 Hz, 6,4 Hz), 1,85 (s, 3H) , 0,93 (d, 3H, J = 6,8 Hz). Síntese do composto 68
À solução fria de epóxido 64 (120 mg, 0,33 mmol) em CH2CI2 (6 ml) a -30 °C foi adicionado TMS-CN (60 mg, 0,65 mmol) seguidos por SnCl4 (0, 65 ml, 0, 65 mmol de solução a 1 M em CH2CI2) uma vez sob atmosfera de árgon. A mistura de reação foi agitada a -30 °C durante lhe agitada à temperatura ambiente durante 15 h. A mistura de reação foi extinta com solução saturada de Na2HCC>3. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi dividido entre CH2CI2/H2O. A camada orgânica foi separada, seca (Na2SC>4) e concentrada até à secagem. O produto bruto foi tratado com NHa/MeOH (7 N, 5 ml) durante 15 h à temperatura ambiente. O solvente foi removido e o produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel, eluindo com 4-30% de acetato de etilo/hexano para originar o produto 68 como um sólido incolor (72 mg, 56%). Massa calculada: 395,20, encontrada: 3 9 6,30 (M++H) ; RMN de1H (CDCI3) 5 8,63 (s, NH), 7,28 (s, H), 6,14 (d, H, J = 6,4 Hz), 4,36 (s, H), 4,14 (d, H, J = 12 Hz), 3,92 (d, H, J = 12,4 Hz), 3,02 (sl, OH), 2,83 (m, H), 1,90 (d, 3H, J = 1,2 Hz), 1,02 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,94 (s, 9H) , 0, 17 (s, 3H) , 0,14 (s, 3H) . Síntese do composto 70
A uma mistura bem seca de substrato 68 (35 mg, 0,09 mmol) e fluoreto de amónio (33 mg, 0,73 mmol) foi adicionado MeOH (3 ml) e submetida a refluxo a 85 °C. A reação concluiu-se em 12 h. O solvente foi removido e o produto bruto foi dissolvido em solução de MeOH/CH2CI2 a 20%. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de celite. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em silica gel, eluindo com 1-8% de MeOH/CH2Cl2 para originar o produto 70 como um sólido incolor (20 mg, 80 %) . Massa calculada: 281,27. Encontrado: 282,20 (M++H) ; RMN de 2Η (CDCla) δ 7,73 (s, H) , 6,34 (d, H, J = 6,4 Hz), 4,19 (d, H, J = 10,4 Hz), 4,02 (d, H, J = 12,4 Hz), 3,92 (d, H, J = 12 Hz), 2,73 (m, H) , 1,85 (s, 3H) , 0,98 (d, 3H, J = 6,8 Hz). Preparação de trietinilalumínio A uma solução de AICI3 (1 g, 7,5 mmol) em CH2CI2 (7,5 ml) foi adicionado cloreto de etinilmagnésio (37,5 ml de 0,6 M, em THF, 22,5 mmol) sob Ar a 0 °C. A mistura de reação foi aquecida à rt e agitada durante a noite. A solução castanha escura resultante (0,14 M) foi utilizada para a etapa seguinte. Síntese dos compostos 71 e 72
A uma solução fria de epóxido 64 (80 mg, 0,22 mmol) em CH2CI2 (6 ml) a -30 °C foi adicionado trietinilalumínio (5,2 ml de solução-mãe a 0,14 M em CH2CI2/THF, 0,56 mmol) uma vez sob atmosfera de árgon e agitada a -30 °C durante 6 h. A reação foi extinta com solução de NH4CI saturada e filtrada através de uma almofada de celite. O filtrado foi dividido entre CH2CI2/H2O. A camada orgânica foi separada e seca (Na2SC>4) . O solvente foi removido e o produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel, eluindo com 5-30% de acetato de etilo/hexano para originar os produtos 71 e 72 como um semissólido (57 mg, sobretudo 67%). Massa calculada: 394,20. Encontrado: 395,40 (M++H) .
Isómero 71: RMN de ΤΗ (CDCI3) : δ 9,02 (s, NH) , 7,58 (s, H), 6,31 (s, H), 4,10 (d, H, J = 12,0 Hz), 3,99 (d, H, J = 12, 6
Hz), 3,71 (d, H, J = 12,3 Hz), 2,81 (m, H), 1,91 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,97 (s, 9H), 0,17 (s, 3H), 0,12 (s, 3H).
Isómero 72: δ 8,34 (s, NH), 7,43 (s, H), 6,33 (d, H, J = 7,2 Hz), 4,23 (d, H, J = 7,2 Hz), 3,91 (dd, H, J = 12,4 Hz, 4,8
Hz), 3,78 (dd, H, J = 12,0 Hz, 9,2 Hz), 2,79 (m, H), 1,95 (s, 3H) , 0,98 (d, H, J = 7,6 Hz), 0,93 (s, 9H), 0,18 (s, 3H), 0,14 (s, 3H) . Síntese do composto 73
A uma mistura bem seca de substrato 71 (20 mg, 0,46 mmol) e fluoreto de amónio (17 mg, 4,56 mmol) foi adicionado MeOH (3 ml) e submetida a refluxo a 85 °C. A reação concluiu-se em 12 h, o solvente foi removido por pressão reduzida e o produto bruto foi dissolvido em solução de MeOH/CH2Cl2 a 20%. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de celite. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel, eluindo com 1-8% de MeOH/CH2Cl2 para originar o produto 73 como um sólido incolor (12 mg, 94%). Massa calculada: 280,30. Encontrado: 281,20 (M++H) ; RMN de (CDCla) δ 7,94 (s, H) , 6,23 (d, H, J = 8 Hz), 4,03 (d, H, J = 10,8 Hz), 3,90 (d, H, J = 12,4 Hz), 3,80 (d, H, J = 12,4 Hz), 3,05 (s, H), 2,75 (m, H), 1,85 (d, 3H, J = 1,2 Hz), 0,95 (d, 3H, J = 7,2 Hz). Síntese do composto 74
A uma mistura bem seca de substrato 72 (10 mg, 0,03 mmol) e fluoreto de amónio (10 mg, 0,3 mmol) foi adicionado MeOH (2 ml) e submetida a refluxo a 85 °C. A reação concluiu-se em 12 h e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi dissolvido em solução de MeOH/CH2Cl2 a 20%. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de celite. O solvente foi removido e o produto bruto foi purificado por cromatografia em silica gel, eluindo com 1-8% de MeOH/CH2Cl2 para originar o produto 74 como um sólido incolor (8 mg, 91%) . Massa calculada: 280,30. Encontrado: 281,2 (M++H); RMN de ΤΗ (CDCla) δ 7,58 (s, H) , 6,30 (d, H, J = 8,4 Hz), 4,16 (d, H, J = 12,2 Hz), 3,89 (d, H, J = 12,8 Hz), 3,71 (d, H, J = 12,7 Hz), 3,28 (s, H) , 2,85 (s, H) , 1,90 (d, 3H, J = 1,3 Hz), 0,96 (d, 3H, J = 7,0).
De uma forma semelhante, mas utilizando o açúcar e bases pirimidina e purina apropriados, os seguintes nucleósidos de fórmula conforme indicada podem ser preparados.
Ensaios biológicos
Ensaio em AD38 de HBV
Os materiais necessários para o ensaio compreendem o seguinte: A linha celular HepG2 - AD38. 0 meio de cultura para HepG2 - AD38 compreende DMEM - F/12, soro bovino fetal a 10%, 100 UI/ml/100 pg/ml de penicilina/estreptomicina, 50 pg/ml de canamicina, 0,3 yg/ml de tetraciclina e 200 yg/ml G418. O meio de ensaio para HepG2 - AD38 compreende DMEM - F/12, soro bovino fetal a 10%, 100 UI/ml/100 pg/ml de penicilina/estreptomicina, 50 pg/ml de canamicina e 200 pg/ml de G418. Outros materiais compreendem tampão fosfato salino (PBS), placa de 96 poços Biocoat™, kit de tecido DNeasy® 96 (Qiagen), coletor a vácuo QIAvac 96, placa de reação de 96 poços MicroAmp® Optical (Applied Biosystems) , tampas MicroAmp® Optical (Applied Biosystems), TaqMan® Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems) e um detetor de sequências 7700 (Applied Biosystems).
Os iniciadores e sondas para ADN de HBV compreendem o iniciador direto de 1125 nM (GGA CCC CTG CTC GTG TTA CA), o iniciador reverso de 1125 nM (GAG AGA AGT CCA CCA CGA GTC TAG A), e a sonda de 250 nM (FAM-TGT TGA CAA GAA TCC TCA CAA TAC CAC) .
Ensaio celular de HBV:
Semear 5 x 104 células/poço em 200 μΐ de meio de cultura numa placa Biocoat™ de 96 poços e incubar a placa a 37 °C com 5% de CO2. Após 2 dias, remover cuidadosamente o sobrenadante, lavar a camada celular com 200 μΐ de PBS e renovar com 200 μΐ de meio de ensaio com ou sem compostos de teste a 10 μΜ ou numa dose-resposta com um rácio de 1:3 começando a 10 μΜ (todas as amostras deveriam ser testadas em duplicado). Deixar que as células cresçam durante 5 dias mais. Ao dia 7, recolher 180 μΐ do sobrenadante por poço num suporte azul (incluído no kit de tecido DNeasy® 96). Armazenar a -80 °C ou seguir diretamente para próxima etapa.
Extração de ADN viral de HBV a partir de sobrenadante celular:
Descongelar as amostras no suporte azul. Preparar uma solução de trabalho de proteinase K/tampão ATL (2 ml de proteinase K + 18 ml de tampão ATL) e transferir 180 ul sobre o topo do sobrenadante em cada tubo do suporte azul. Selar os tubos corretamente utilizando as tampas proporcionadas e misturar invertendo o suporte de cima para baixo algumas vezes. Centrifugar até 3000 rpm e recolher qualquer solução a partir das tampas. Incubar a 55 °C durante 15 minutos. Centrifugar até 3000 rpm novamente. Remover cuidadosamente as tampas e adicionar 410 ul de tampão AL/E a cada amostra. Selar os tubos utilizando novas tampas, abanar o suporte vigorosamente para cima e para baixo durante 15 segundos e centrifugar até 3000 rpm. Colocar a placa DNeasy® 96 sobre o topo do coletor a vácuo QIAvac 96. Transferir o sobrenadante da etapa 8 para a placa DNeasy® 96. Aplicar vácuo durante alguns segundos. Adicionar cuidadosamente 500 μΐ de tampão AW1 a cada poço. Aplicar vácuo durante cerca de 1 minuto. Adicionar cuidadosamente 50 0 μΐ de tampão AW2 a cada poço. Aplicar vácuo durante cerca de 1 minuto, passar rapidamente a placa na pia, golpear o lado inferior da placa DNeasy® 96 sobre uma pilha de toalhas de papel, aplicar novamente vácuo durante 10 minutos. Aquecer 10 ml de tampão AE durante alguns minutos a 70 °C.
Colocar a placa DNeasy® 96 sobre o topo de um suporte de microtubos de eluição RS. Para eluir o ADN, adicionar 100 μΐ de tampão AE pré-aquecido a cada poço, aplicar vácuo durante 1 minuto. PCR em tempo real de HBV:
Preparar a mistura de iniciadores + sonda de HBV para 200 poços (total 1500 μΐ) compreendendo 45 μΐ de iniciador 1 (100 μΜ) , 45 μΐ de iniciador 2 (100 μΜ) , 20 μΐ de sonda (50 μΜ), e 1390 μΐ de água livre de nuclease. Selecionar uma placa de reação de 96 poços ótica. Fazer a mistura de reação para 100 poços compreendendo 1000 μΐ de Universal PCR Master Mix, 750 ui de mistura de iniciadores + sonda de HBV, e 250 μΐ de água livre de nuclease. Adicionar uma alíquota de 20 μΐ da mistura de reação por poço. Adicionar 5 μΐ por poço de ADN de HBV de cada amostra. Cobrir os poços com tampas óticas. Centrifugar durante alguns segundos para forçar todos os reagentes para a base e eliminar as bolhas. Colocar a placa no detetor de sequências 7700. Selecionar o repórter para FAM e o volume definido para 25 μΐ. Iniciar a máquina e deixá-la funcionar durante 1 hora e 56 minutos. Calcular o dCt e a redução na carga virai para cada composto de teste.
Ensaio de replicão de HCV: Células Huh 7 contendo ARN de replicão de HCV (células de clone A; Apath, LLC, St. Louis, Mo.) foram mantidas em crescimento exponencial em meio de Eagle modificado por Dulbecco (glucose elevada) contendo soro bovino fetal a 10%, L-glutamina a 4 mM e piruvato de sódio a 1 mM, 1 x aminoácidos não essenciais e G418 (1,000 pg/ml). Ensaios antivirais foram realizados no mesmo meio sem G418. As células foram semeadas numa placa de 96 poços a 1 500 células por poço, e os compostos de teste foram adicionados imediatamente após sementeira. 4 dias de tempo de incubação. No final da etapa de incubação, o ARN celular total foi isolado (Kit RNeasy® 96; Qiagen) . ARN de replicão e um controlo interno (reagentes controlo TaqMan® rRNA; Applied Biosystems) foram amplificados num protocolo de RT-PCR multiplex de etapa única, conforme recomendado pelo fabricante. Os iniciadores e a sonda de HCV foram concebidos com o software Primer Express (Applied Biosystems) e englobavam sequências da região 5' não traduzida (UTR) altamente conservadas (sentido, 5' -AGCCATGGCGTTAGTA(T)GAGTGT-3', e antissentido, 5' -TTCCGCAGACCACTATGG-3'; sonda, 5' -FAM-CCTCCAGGACCCCCCCTCCC-TAMRA-3') .
Para expressar a eficácia antiviral de um composto, o ciclo de RT-PCR limiar do composto de teste foi subtraído do ciclo de RT-PCR limiar médio do controlo não farmacológico (ACtHCV) . Um ACt de 3,3 é igual a uma redução de 1-log 10 (igual à concentração eficaz de 90% [EC90] ) em níveis de ARN de replicão. A citotoxicidade do composto de teste poderia também ser expressa calculando os valores de ACtARNr. O parâmetro de especificidade AACt poderia então ser introduzido (ACtHCV -ACtARNr) , no qual os níveis de ARN de HCV são normalizados para os níveis de ARNr e calibrados contra o controlo não farmacológico.
Atividade do HIV
Rastreio de HIV: Rastreios primários de compostos PSI são testados quanto à atividade HIV antiviral a 50 μΜ. As células utilizadas são células P4-CCR5 luc; são células indicadoras de HIV humanas, as quais derivam de células Hela, expressam CD4, CXCR4, CCR5, luciferase e um gene beta-gal sob o controlo de LTR HIV-1. Células P4-CCR5 luc são cultivadas em DMEM, FBS a 10%, penicilina, estreptomicina e G418 a 500 pg/ml. 100 μΐ de células P4-CCR5 luc são colocados em placas a 10 000 células por poço em placas de ensaio opacas de 96 poços e incubados durante a noite a 37 °C. No dia seguinte, o meio é aspirado das placas e substituído por 100 μΐ de composto diluído recentemente em meio a 2 x 50 uM, em triplicado, durante 4 horas a 37 °C. As células são, em seguida, infetadas com 100 μΐ de vírus NL43 a 5 ng de p24 por poço, na presença de 2 x 20 ug/ml de DEAE-Dextrano durante 40-42 horas. Controlos não infetados, infetados sem fármaco e de AZT estão sempre presentes em triplicado em cada placa. Após infeção, o beta-gal é quantificado utilizando o kit Galacto-Star™ de Applied Biosystems usando as instruções do fabricante e a luminescência medida utilizando um aparelho VICTOR™ de Perkin-Elmer. Os resultados são apresentados como percentagens de inibição comparativamente a células não tratadas. Os ensaios são realizados em 2 a 3 experiências independentes.
Titulação de HIV de atividade PSI para determinar EC50 sobre células P4-CCR luc
As células P4-CCR5 luc são colocadas em placas a 10 000 células por poço (100 μΐ) em placas de ensaio opacas de 96 poços e incubadas durante a noite a 37 °C. No dia seguinte, o meio é aspirado das placas e substituído por 100 μΐ de composto diluído recentemente em meio apropriado (DMEM, FBS a 10%, G418 a 500 pg/ml, penicilina/estreptomicina) a 2 x concentrações finais em diluições de 5 vezes, normalmente de 2 x 100 μΜ a 2 x 0,032 uM, em triplicado, durante 4 horas a 37 °C. As células são, em seguida, infetadas com 100 μΐ de vírus tipo selvagem ou mutante NL43, a 5 ng a 20 ng de p24 por poço, na presença de 2 x 20 ug/ml de DEAE-Dextrano durante 40-42 horas. Controlos não infetados e infetados sem fármaco estão sempre presentes em 12 repetições em cada placa. Um controlo de AZT é testado em paralelo para cada experiência. Após infeção, o beta-gal é quantificado no lisado celular utilizando o kit Galacto-Star™ de Applied Biosystems e a luminescência medida utilizando um aparelho VICTOR™ de Perkin-Elmer . A EC50 (concentração efetiva) é calcula utilizando uma folha de cálculo de Excel® de Microsoft® que calcula a concentração necessária para inibir 50% da infeção. O ensaio é realizado em pelo menos 2 experiências independentes.
Toxicidade
Ensaio de luciferase Células P4-CCR5 luc são colocadas em placas a 10 000 células por poço (100 ul) em placas de ensaio opacas de 96 poços e incubadas durante a noite a 37 °C. No dia seguinte, o meio é aspirado das placas e substituído por 200 ui de composto diluído recentemente em meio em diluições de 5 vezes de 100 μΜ a 0,0062 μΜ. Após 4 dias de incubação a 37 °C, a atividade de luciferase é medida no lisado celular utilizando o kit Bright-Glo™ de Promega e a luminescência medida utilizando um aparelho VICTOR™ de Perkin-Elmer.
Ensaios com MTS
Linhas celulares humanas Huh 7 e HepG2 (fígado), BxPC3 (pâncreas) e CEM (tecido linfoide) são utilizadas nos ensaios com MTS em placas de 96 poços. Os fármacos são recém diluídos em meio a 2 x 100 μΜ, 50 μΜ, 25 μΜ, 10 μΜ, 5 μΜ, 1 μΜ e 50 μΐ são distribuídos em triplicado nas placas. Os poços na periferia da placa contêm apenas 100 μΐ de meio e serão os controlos em branco. Um controlo duplicado sem fármaco é sempre realizado em cada placa. 50 μΐ de células são adicionados à placa, a 2000 células por poço para Huh 7, HepG2 e BxPC3, e 5000 células por poço para células CEM. Não são adicionadas células na periferia da placa. O meio usado para células Huh 7, HepG2 e BxPC3 é DMEM com FBS a 10%, e penicilina/estreptomicina, e RPMI com FBS a 10%, e penicilina/estreptomicina para células CEM. Após 8 dias de incubação a 37 °C, 20 μΐ de corante MTS do kit de proliferação celular CellTiter 96® AQueous One Solution de Promega são adicionados a cada poço e a placa incubada durante 2 h a 37 °C. A absorvância é, em seguida, lida a 490 nm utilizando o leitor de microplacas E1800 de Biotek. O sinal é calculado subtraindo a absorvância medida nos controlos em branco. O valor CC50 (concentração citotóxica) é, em seguida, determinado comparando o sinal obtido com o controlo celular sem fármaco com o das células tratadas e calculando a concentração de fármaco necessária para inibir 50% do sinal nos poços tratados com fármacos.
Resultados biológicos
Citotoxicidade (CC50 μΜ)
DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO
Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.
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Lisboa, 6 de Abril de 2015

Claims (9)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um composto da fórmula:
    ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, na preparação de um medicamento para tratar uma infeção por vírus da hepatite B, em que para a estrutura A ou A' (a) R2 é independentemente CH3, CH2F, CHF2, CF3, F, CN, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, ou alquilo C1-4 opcionalmente substituído com amino, hidroxi ou 1 a 3 átomos de flúor; (b) R é H, fosfato, incluindo 5'-monofosfato, 5',3'-fosfato cíclico, difosfato ou um trifosfato, H-fosfonato, acilo, incluindo fenilo opcionalmente substituído, alquilo, incluindo alquilo C1-8, carboxialquilamino O-substituído ou seus derivados peptídicos, éster de sulfonato, incluindo alquil- ou arilalquil-sulfonilo, incluindo metanossulfonilo e benzilo, em que o grupo fenilo é opcionalmente substituído, um lípido, incluindo um fosfolípido, um aminoácido L ou D, um carboidrato, um péptido, ou um colesterol; (c) R3 é independentemente OH, H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, vinilo, N3, CN, Cl, Br, F, I, NO2, C (0) 0 (alquilo C1-4) , C (0) 0 (alquilo C1-4) , C (0) 0 (alquinilo C2-4) , C (0) 0 (alquenilo C2-4) , 0 (acilo C1-10) , 0 (alquilo C1-4) , 0 (alquenilo C2-4) , SH, S (acilo C1-4) , S (alquilo C1-4) , S (alquinilo C2-4), S (alquenilo C2-4) , SO(acilo C1-4) , SO (alquilo C1-4) , SO (alquinilo C2-4) , SO (alquenilo C2-4) , SO2 (acilo C1-4) , SO2 (alquilo C1-4) , SO2 (alquinilo C2-4) , SO2 (alquenilo C2-4) , OS (0) 2 (acilo C1-4) , OS (0) 2 (alquilo C1-4) , OS (0) 2 (alquenilo C2-4) , NH2, NH (alquilo C1-4) , NH (alquenilo C2-4) , NH (alquinilo C2-4) , NH (acilo C1-4) , N (alquilo 01-4)2, N (acilo C1-18)2, em que alquilo, alquinilo, alquenilo e vinilo são opcionalmente substituídos por N3, CN, um a três halogénios (Cl, Br, F, I), NO2, C (0) 0 (alquilo C1-4) , C (0) 0 (alquilo C1-4) , C (0) 0 (alquinilo C2-4) , C (0) 0 (alquenilo C2-4) , 0 (acilo C1-4) , 0 (alquilo C1-4) , 0 (alquenilo C2-4) , SH, S (acilo C1-4) , S (alquilo C1-4) , S (alquinilo C2-4) , S (alquenilo C2-4) , SO (acilo C1-4) , SO (alquilo C1-4) , SO (alquinilo C2-4) , SO (alquenilo C2-4) , SO2 (acilo C1-4) , SO2 (alquilo C1-4) , SO2 (alquinilo C2-4) , SO2 (alquenilo C2-4) , OS (0)2 (acilo C1-4) , OS (0) 2 (alquilo C1-4) , OS (0) 2 (alquenilo C2-4) , NH2, NH (alquilo C1-4) , NH (alquenilo C2-4) , NH (alquinilo C2-4) , NH (acilo C1-4) , N (alquilo 01-4)2, N (acilo 01-4)2; (d) R4 é N3; (e) ReR3 podem em conjunto formar um 5' , 3' -fosfato cíclico; (f) Base é uma base de purina ou pirimidina de ocorrência natural ou modificada representada pelas seguintes estruturas:
    em que para a e b Z é N ou CR8; R5, R6 e R7 são independentemente H, F, Cl, Br, I, OH, OR', SH, SR', NH2, NHR' , NR'2 (dois R' podem formar anéis saturados ou insaturados, ou anéis heterocíclicos saturados ou insaturados), alquilo de C1-C6, alquilo de C1-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alquenilo de C2-C6, alquenilo de C2-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alquinilo de C2-C6 tal como C^CH, alquinilo de C2-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alcoxi de C1-C6, alcoxi de C1-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), CO2H, C02R', C0NH2, CONHR' , CONR'2, CH=CHC02H, ou CH=CHC02R' em que R' é um alquilo opcionalmente substituído, que inclui, mas não está limitado a, um alquilo C1-20 opcionalmente substituído, um alquilo C1-10 opcionalmente substituído, um alquilo C1-8 opcionalmente substituído; um cicloalquilo opcionalmente substituído; um alquinilo de C2-C6 opcionalmente substituído, um alquenilo de C2-C6 opcionalmente substituído, ou acilo opcionalmente substituído, que inclui, mas não está limitado a, C(0) alquilo, C (0) (alquilo C1-20) , C (0) (alquilo C1-10) , ou C (0) (alquilo Ci-s) , arilo opcionalmente substituído, alquilariloxi C1-C4 opcionalmente substituído, heteroarilo, alquilo Ci-C4-heteroarilo opcionalmente substituído, um alcoxialquilo C1-20 opcionalmente substituído, um aminoalquilo C1-20 opcionalmente substituído, um f luoroalquilo C1-20 opcionalmente substituído; R8 é independentemente H, halogénio (incluindo F, Cl, Br, I), OH, OR', SH, SR', NH2, NHR', NR' 2 (dois R' podem formar anéis saturados ou insaturados, ou anéis heterocíclicos saturados ou insaturados), NO2, alquilo de C1-C6, alquilo de C1-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alquenilo de C2-C6, alquenilo de C2-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alquinilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), alcoxi de Ci-Cê, alcoxi de C1-C6 halogenado (F, Cl, Br, I), CO2H, CO2R', CONH2, CONHR' , CONR2', CH=CHC02H, ou CH=CHC02R', em que R' é um alquilo opcionalmente substituído, que inclui, mas não está limitado a, um alquilo C1-20 opcionalmente substituído, um alquilo Ci-io opcionalmente substituído, um alquilo Ci-8 opcionalmente substituído; um cicloalquilo opcionalmente substituído; um alquinilo de C2-C6 opcionalmente substituído, um alquenilo de C2-C6 opcionalmente substituído, ou acilo opcionalmente substituído, que inclui, mas não está limitado a, C(0)alquilo, C (0) (alquilo C1-20) , C (0) (alquilo C1-10) , ou C (0) (alquilo Ci-s) , arilo opcionalmente substituído, alquilo Ci-C4-ariloxi opcionalmente substituído, heteroarilo, alquilo Ci-C4-heteroarilo opcionalmente substituído, um alcoxialquilo C1-20 opcionalmente substituído, um aminoalquilo C1-20 opcionalmente substituído, um fluoroalquilo C1-20 opcionalmente substituído; em que a estrutura para A ou A' não é qualquer uma de:
  2. 2. A utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é selecionado a partir do grupo que consiste em:
  3. 3. A utilização da reivindicação 1, em que o composto é
    ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
  4. 4. A utilização de qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que o medicamento compreende ainda um ou mais agentes antivirais, agentes antibacterianos, agentes antiproliferativos, ou uma combinação destes.
  5. 5. A utilização de qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que o composto é administrado oralmente.
  6. 6. A utilização da reivindicação 5, em que entre cerca de 0, 1 g e cerca de 10 g do composto são administrados diariamente numa monoterapia ou numa terapia de combinação.
  7. 7 . A utilização da reivindicação 6, em que entre cerca de 0,5 g e cerca de 7,5 g do composto são administrados diariamente.
  8. 8 . A utilização da reivindicação 7, em que entre cerca de 1,5 g e cerca de 6,0 g do composto são administrados diariamente.
  9. 9. A utilização da reivindicação 5, em que o composto é administrado numa dose de carga inicial seguida por uma dose diminuída. Lisboa, 6 de Abril de 2015
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