PT2354161E

PT2354161E - Anticorpo anti-nr10, e a sua utilização

Info

Publication number: PT2354161E
Application number: PT98304637T
Authority: PT
Inventors: Kuramochi Taichi; Tatsuhiko Tachibana; Hirotake Shiraiwa; Taichi Kuramochi; Keiko Kasutani; Souhei Ohyama; Tomoyuki Igawa; Keiko Esaki
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2008-12-05
Filing date: 2009-12-04
Publication date: 2015-10-22
Also published as: BRPI0906478B8; JP2010210772A; RU2010126078A; DK2354161T3; EP2949672A1; EP2354161A4; EP2354161B1; ES2552690T3; WO2010064697A1; EP2354161A1; KR20100091245A; PL2354161T3; KR101271323B1; BRPI0906478A2; BRPI0906478B1; RU2487136C2

Description

DESCRIÇÃO "ANTICORPO ANTI-NR10, E A SUA UTILIZAÇÃO"

Dominio Técnico A invenção presente diz respeito a anticorpos anti-NRIO, e a composições farmacêuticas que contenham um anticorpo anti-NRIO.

Estado da Técnica São conhecidas muitas citoquinas como factores humorais envolvidos no crescimento e na diferenciação de diversos tipos de células, ou na activação de funções diferenciadas em células maduras. As células estimuladas por citoquinas produzem diferentes tipos de citoquinas, formando deste modo redes de múltiplas citoquinas no corpo. A homeostasia biológica é mantida por um equilíbrio delicado entre as regulações mútuas das citoquinas nestas redes. Crê-se que muitas doenças inflamatórias resultam de uma falha das referidas redes de citoquinas. Deste modo, a terapia contra citoquinas baseada em anticorpos monoclonais tem chamado muitas atenções. Por exemplo, os anticorpos anti-TNF e os anticorpos anti-recetor de IL-6 têm demonstrado clinicamente ser altamente eficazes. Por outro lado, existem muitos exemplos de falhas com ausência de efeitos terapêuticos quando se bloqueou uma única citoquina, tal como a IL-4, devido à activação de caminhos compensadores nas condições patológicas reais. A invenção presente teve sucesso no isolamento de um novo recetor de citoquinas NR10 com elevada homologia com gpl30, um recetor para a transdução do sinal de IL-6 (Documento de Patentes 1) . 0 NR10 forma um heterodímero com, o recetor M de oncostatina (OSMR) e funciona como um recetor de IL-31 (Documento sem ser de Patentes 1) . A respeito do IL-31, foi reportado que murganhos transgénicos cobre-expressando IL-31 desenvolvem espontaneamente dermatite prurítica (Documento de Patentes 2).

Os anticorpos que se ligam a NR10 e inibem a ligação entre NR10 e IL-31 podem ser eficazes para tratar doenças inflamatórias. Para utilização clínica, são necessários anticorpos anti-NRIO que tenham uma pequena imunogenicidade. Além disto, para conseguir efeitos terapêuticos fortes, são desejáveis anticorpos com actividade forte de ligação ou neutralização de NR10. Por exemplo, foram descritos anticorpos anti-NRIO neutralizantes de murganho para utilização no tratamento de doenças inflamatórias (Documento de Patentes 3) .

Descrevem-se em seguida os documentos da técnica anterior à invenção presente.

Documento de Patentes 1: WO 00/75.314 Documento de Patentes 2: WO 03/060.090 Documento de Patentes 3: WO 2007/142.325 Documento sem ser de Patentes 1: A IL-31 está associada a células linfocíticas T cutâneas dirigidas positivas para antigénio em doentes com dermatite atópica, J. Allergy Clin. Immunol. 2006 Fevereiro; 117(2): 418-25.

Descrição da Invenção [Problemas a Resolver pela Invenção] A invenção presente foi conseguida atentas as circunstâncias descritas acima. Um objetivo da invenção presente é proporcionar anticorpos anti-NR10, e composições farmacêuticas que incluam um anticorpo anti-NR10.

[Meios para Resolver os Problemas]

Os inventores presentes levaram a cabo estudos dedicados para conseguir o objetivo descrito acima. Os inventores presentes conseguiram obter anticorpos anti-NR10 com uma actividade neutralizante eficaz de NR10. Além disto, os inventores presentes conseguiram humanizar os anticorpos enquanto se manteve a sua actividade. Os inventores presentes também produziram com sucesso anticorpos com melhor farmacocinética, maior actividade de ligação ao antigénio, mais estáveis, e/ou com menor risco de imunogenicidade. Estes anticorpos são úteis como agentes terapêuticos para doenças inflamatórias. A invenção presente diz respeito a anticorpos anti-NRIO, e a composições farmacêuticas incluindo um anticorpo anti-NRIO. Mais em particular, a invenção presente inclui: [1.] Um anticorpo anti-NRIO que seja qualquer um de entre: (1) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 9, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H30, H44) e uma região variável da cadeia leve contendo uma

CDR1 com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ

ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L 17) ; (2) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 196, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H28, H42) e uma região variável da cadeia leve contendo uma

CDR1 com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L17); (3) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 176, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H34, H46) e uma

região variável da cadeia leve contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L17); (4) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 9, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 198, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H57, H78) e uma região variável da cadeia leve contendo uma

CDR1 com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L17); (5) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 176, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 198, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H71, H92) e uma região variável da cadeia leve contendo uma

CDR1 com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L17); e

(6) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 9, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 199, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H97, H98) e uma região variável da cadeia leve contendo uma

CDR1 com a SEQ ID NO: 203, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L50).

[2.] O anticorpo anti-NRlO de [1.], que seja qualquer um de entre: (1) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 210 (H44) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H44L17); (2) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 207 (H30) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H30L17); (3) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 209 (H42) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H42L17); (4) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 206 (H28) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H28L17); (5) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 211 (H46) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H46L17); (6) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 208 (H34) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H34L17); (7) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 214 (H78) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H78L17); (8) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 212 (H57) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H57L17); (9) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 215 (H92) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H92L17); (10) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 213 (H71) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H71L17); (11) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 217 (H98) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 221 (L50) (H98L50); e (12) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 216 (H97) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 221 (L50) (H97L50).

[3.] 0 anticorpo anti-NRIO de [1.] ou de [2.], que seja um anticorpo humanizado.

[4.] 0 anticorpo anti-NRIO de [2.], que seja qualquer um de entre: (1) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 228 (H44) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H44L17); (2) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 225 (H30) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H30L17); (3) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 227 (H42) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H42L17); (4) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 224 (H28) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H28L17); (5) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 229 (H46) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H46L 17); (6) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 226 (H34) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L 17) (H34L17); (7) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 232 (H78) e uma cadeia leve contendo a (L17) (H78L17); sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (8) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 230 (H57) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H57L17); (9) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 233 (H92) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H92L17); (10) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 231 (H71) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H71L17); (11) um anticorpo contendo uma sequência de aminoácidos da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 235 (H98) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 239 (L50) (H98L50); e (12) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 234 (H97) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 239 (L50) (H97L50).

[5.] Uma composição farmacêutica que inclua o anticorpo anti-NRIO de qualquer uma de entre [1.] a [4.].

[6.] 0 anticorpo anti-NRIO de qualquer uma de entre [1.] a [4.] para utilização no tratamento de uma doença inflamatória.

[7.] A utilização do anticorpo anti-NRIO de qualquer uma de entre [1.] a [4.] no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença inflamatória.

Breve Descrição dos Desenhos A Fig. 1 mostra as sequências de aminoácidos das regiões variáveis da cadeia pesada dos anticorpos de murganho NS18, NS22, NS23, e NS33 . A Fig. 2 mostra as sequências de aminoácidos das regiões variáveis da cadeia leve dos anticorpos de murganho NS18, NS22, NS23, e NS33 . A Fig. 3 é um gráfico mostrando a inibição do crescimento de células hNR10/hOSMR/BaF3 por sobrenadantes da cultura de hibridomas. A Fig. 4 é um gráfico mostrando a inibição do crescimento de células cynNRl0/cynOSMR/BaF3 por sobrenadantes da cultura de hibridomas. A Fig. 5 é um gráfico mostrando a avaliação da actividade de NS22 (BaF) quimérico. A Fig. 6 é um gráfico mostrando a avaliação da actividade de NS22 (DU-145) quimérico. A Fig. 7 é um gráfico mostrando a avaliação da competição de NS22 quimérico com IL-31. A Fig. 8 é um gráfico mostrando a actividade competitiva de ligação a NR10 dos anticorpos anti-NRIO. A Fig. 9 é um conjunto de gráficos mostrando a avaliação da competição de NS22 humanizados (HOLO) com IL-31. A Fig. 10 mostra o efeito da região constante do anticorpo anti-NRIO humanizado HOLO na heterogeneidade avaliada por cromatografia de permuta catiónica. A Fig. 11 é um conjunto de gráficos mostrando a avaliação da competição de mutantes do anticorpo humanizado anti-NRIO cujo ponto isoelétrico das regiões variáveis foi diminuído sem perda significativa da ligação a NR10, com IL-31. A Fig. 12 mostra o efeito da região constante do anticorpo anti-recetor de IL-6 sobre a heterogeneidade, avaliado por cromatografia de permuta iónica. A Fig. 13 mostra o efeito da região constante do anticorpo anti-recetor de IL-6 sobre o pico de desnaturação avaliado por DSC. A Fig. 14 mostra o efeito da nova região constante M14 sobre a heterogeneidade num anticorpo anti-recetor de IL-6, avaliado por cromatografia de permuta iónica. A Fig. 15 mostra o efeito da nova região constante M58 sobre a heterogeneidade num anticorpo anti-recetor de IL-6, avaliado por cromatografia de permuta iónica. A Fig. 16 o efeito da nova região constante M58 sobre o pico de desnaturação num anticorpo anti-recetor de IL-6, avaliado por DSC. A Fig. 17 mostra o resultado da avaliação da retenção de huPMl-IgGl e de huPMl-M58 no plasma de murganhos transgénicos com FcRn humano. A Fig. 18 mostra a actividade biológica de cada anticorpo avaliado utilizando BaF/NRIO. A Fig. 19 mostra a análise de amostra termicamente acelerada (linha a tracejado) e não acelerada (linha continua), de cada anticorpo modificado, por cromatografia de permuta catiónica, para comparar a geração de produtos de degradação entre antes e depois da aceleração térmica. A seta indica a posição do pico da componente básica que foi alterada. A Fig. 20 é um conjunto de gráficos mostrando a avaliação (BaF) da actividade de cada variante. A Fig. 21 é um gráfico mostrando a avaliação (BaF) da actividade de Ha401La402 e de H0L0. A Fig. 22 é um gráfico mostrando a avaliação (BaF) da actividade de H17L11 e de H0L0. A Fig. 23 é um gráfico mostrando a avaliação (BaF) da actividade de H19L12 e de HOLO. A Fig. 24 é um gráfico mostrando a actividade biológica de H0L12 e de H0L17 avaliados utilizando BaF/NRIO. A Fig. 25-1 é um conjunto de gráficos mostrando a avaliação (BaF) da actividade de cada variante. A Fig. 25-2 é uma continuação da Fig. 25-1. A Fig. 26 é um diagrama esquemático para NR10-ECD humano/murganho de tipo selvagem e quimérico. A Fig. 27 é um conjunto de fotografias mostrando a detecção do domínio de ligação por transferência Western. A é uma fotografia mostrando o resultado da deteção utilizando um anticorpo humanizado anti-NRIO humano; B é uma fotografia mostrando o resultado da detecção utilizando um anticorpo de murganho anti-NRIO humano; e C é uma fotografia mostrando o resultado da detecção utilizando um anticorpo anti-Myc. Com o anticorpo anti-NRIO humano detetou-se um antigénio ligante apenas em hhh, hhm, e hmm, mas não em mmm, mmh, e mhm. A Fig. 28-1 mostra a sequência de aminoácidos de cada variante de HO (SEQ ID NO: 50). A Fig. 28-2 é uma continuação da Fig. 28-1. A Fig. 28-3 é uma continuação da Fig. 28-2. A Fig. 29-1 mostra a sequência de aminoácidos de cada variante de LO (SEQ ID NO: 52). A Fig. 29-2 é uma continuação da Fig. 29-1.

Modo de Levar a Cabo a Invenção NR10 A NR10 é uma proteína que forma um heterodímero com o recetor M da oncostatina (OSMR) e funciona como um recetor de IL-31. A NR10 também é designada glm-r (J. Biol. Chem. 277, 16831-6, 2002), GPL (J. Biol. Chem. 278, 49850- 9, 2003), IL31RA (Nat. Immunol. 5, 752-60, 2004), e outras semelhantes. Portanto, a NR10 tal como descrita neste documento também inclui proteínas designadas por aqueles nomes.

Tal como se descreve neste documento, a NR10 (também denominada IL31RA, GPL, ou glm-r) não tem nenhuma limitação específica quanto à sua origem, incluindo as derivadas de seres humanos, murganhos, macacos, e outros mamíferos. A NR10 derivada de seres humanos, murganhos, e macacos é preferida e é especialmente preferida a NR10 derivada de seres humanos.

Existem múltiplas variantes conhecidas de NR10 derivada de seres humanos, com emendas (WO 00/075.314) . Das variantes emendadas descritas acima, a NR10.1 é constituída por 662 aminoácidos e contém um domínio transmembranar. A NR10.2 é uma proteína semelhante a um recetor solúvel, constituída por 252 aminoácidos sem o domínio transmembranar. Entretanto, incluem-se nas variantes emendadas de NR10 que funcionam como proteínas recetoras transmembranares a NR10.3 e a IL-31RAv3. A NR10 humana tal como descrita neste documento não tem nenhuma limitação específica, desde que forme um heterodímero com o recetor M da oncostatina (OSMR) e funcione como um recetor de IL-31. Incluem-se nas NR10 preferidas a NR10.3 (também denominada ILRAv4 (Nat. Immunol. 5, 752-60, 2004)) e a IL-31RAv3. A NR 10.3 (IL31RAv4) é constituída por 662 aminoácidos (WO 00/075.314; Nat. Immunol. 5, 752-60, 2004) e a IL31RAv3 é constituída por 732 aminoácidos (N2 de Acessão no GenBank: NM_139017). A sequência de aminoácidos da IL31RAv4 está ilustrada na SEQ ID NO: 79, e a sequência de aminoácidos da IL31RAv3 está ilustrada na SEQ ID NO: 80. Entretanto, incluem-se nas NR10 derivadas de murganho, proteínas contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 81. Além disto, incluem-se nas NR10 derivadas de macacos cinomólogos proteínas contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 66.

Anticorpos (sequências) 0 anticorpo anti-NRIO preferido tal como descrito neste documento inclui os anticorpos anti-NRIO de qualquer uma das (1) a (8) em (A) a (D) adiante. (A) NS 18 (1) anticorpos com uma região variável da cadeia pesada que inclua uma CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 1 (HCDR1), uma CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 2 (HCDR2), e uma CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 3 (HCDR3); (2) anticorpos contendo a região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 4 (VH); (3) anticorpos contendo a região variável da cadeia leve que inclua uma CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 5 (LCDR1), uma CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 6 (LCDR2), e uma CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 7 (LCDR3); (4) anticorpos contendo a região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 8 (VL); (5) anticorpos contendo a região variável da cadeia pesada de (1) e a região variável da cadeia leve de (3); (6) anticorpos contendo a região variável da cadeia pesada de (2) e a região variável da cadeia leve de (4); (7) anticorpos nos quais um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos nos anticorpos de qualquer uma das (1) a (6), que tenham uma actividade equivalente à dos anticorpos de qualquer uma das (1) a (6); e (8) anticorpos que se liguem ao mesmo epítopo que um epítopo a que se liguem os anticorpos de qualquer uma das (1) a (7). (B) NS22 (1) anticorpos com uma região variável da cadeia pesada que inclua uma CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 9 (HCDR1), uma CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 (HCDR2), e uma CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 11 (HCDR3); (2) anticorpos contendo a região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 12 (VH); (3) anticorpos contendo a região variável da cadeia leve que inclua uma CDRl contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 13 (LCDR1), uma CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 14 (LCDR2), e uma CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 15 (LCDR3); (4) anticorpos contendo a região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 16 (VL); (5) anticorpos contendo a região variável da cadeia pesada de (1) e a região variável da cadeia leve de (3); (6) anticorpos contendo a região variável da cadeia pesada de (2) e a região variável da cadeia leve de (4); (7) anticorpos nos quais um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos nos anticorpos de qualquer uma das (1) a (6), que tenham uma actividade equivalente à dos anticorpos de qualquer uma das (1) a (6); e (8) anticorpos que se liguem ao mesmo epitopo que um epitopo a que se liguem os anticorpos de qualquer uma das (1) a (7).

Os exemplos específicos das acima descritas substituições, eliminações, adições, e/ou inserções de um ou mais aminoácidos não têm nenhuma limitação específica e nelas se incluem, por exemplo, as modificações seguintes.

Substituição da lie na posição 3 na CDR1 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 9 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação específica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Vai.

Substituição da Met na posição 4 na CDR1 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 9 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação específica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Ile.

Substituição da Met na posição 4 na CDR1 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 9 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação específica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Leu.

Substituição da lie na posição 3 na CDR1 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 9 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Ala.

Substituição da Leu na posição 1 na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Glu.

Substituição da Asn na posição 3 na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Asp.

Substituição da Gin na posição 13 na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Asp.

Substituição da Lys na posição 14 na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Gin.

Substituição da Lys na posição 16 na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Gin.

Substituição da Gly na posição 17 na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Asp.

Substituição da Lys e da Gly, respectivamente nas posições 16 e 17, na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10, por outros aminoácidos. Não existe nenhuma limitação especifica dos aminoácidos depois da substituição mas incluem-se nos exemplos preferidos as substituições da Lys na posição 16 por Gin, e da Gly na posição 17 por Asp.

Substituição de Lys, Lys, e Gly respect ivamente nas posições 14, 16, e 17, na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10, por outros aminoácidos. Não existe nenhuma limitação especifica dos aminoácidos depois da substituição mas incluem-se nos exemplos preferidos as substituições da Lys na posição 14 por Gin, da Lys na posição 16 por Gin, e da Gly na posição 17 por Asp.

Substituição de Gin, Lys, Lys, e Gly respectivamente nas posições 13, 14, 16, e 17, na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10 por outros aminoácidos. Não existe nenhuma limitação especifica dos aminoácidos depois da substituição mas incluem-se nos exemplos preferidos as substituições da Gin na posição 13 por Asp, da Lys na posição 14 por Gin, da Lys na posição 16 por Gin, e da Gly na posição 17 por Asp.

Substituição da Ser na posição 10 na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Asp.

Substituição da Gin na posição 13 na CDR2 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 10 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Pro.

Substituição da Tyr na posição 3 na CDR3 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 11 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Leu.

Substituição da Met na posição 10 na CDR3 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 11 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Leu.

Substituição do Asp na posição 11 na CDR3 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 11 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Glu.

Substituição da Tyr na posição 12 na CDR3 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 11 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas incluem-se nos seus exemplos preferidos a Thr e a Ser.

Substituição de Met, Asp, e Tyr respect ivamente nas posições 10, 11, e 12 na CDR3 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 11 por outros aminoácidos. Não existe nenhuma limitação especifica dos aminoácidos depois da substituição mas incluem-se nos seus exemplos preferidos a substituição da Met na posição 10 por Leu, da Asp na posição 11 por Glu, e da Tyr na posição 12 por Thr.

Substituição de Asp e Tyr respectivamente nas posições 11 e 12, da CDR3 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 11, por outros aminoácidos. Não existe nenhuma limitação especifica dos aminoácidos depois da substituição mas incluem-se nos seus exemplos preferidos a substituição do Asp na posição 11 por Glu, e da Tyr na posição 12 por Thr.

Substituição de Tyr, Asp, e Tyr respect ivamente nas posições 3, 11, el2, respectively, da CDR3 da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 11, por outros aminoácidos. Não existe nenhuma limitação especifica dos aminoácidos depois da substituição mas incluem-se nos seus exemplos preferidos a substituição da Tyr na posição 3 por Leu, do Asp na posição 11 por Glu, e da Tyr na posição 12 por Thr ou Ser.

Substituição de Arg na posição 1 na CDR1 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 13 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Gin.

Substituição da Asn na posição 5 na CDR1 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 13 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Asp.

Substituição da Arg e Asn respectivamente nas posições 1 e 5, da CDR1 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 13, por outros aminoácidos. Não existe nenhuma limitação especifica dos aminoácidos depois das substituições mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a substituição de Arg na posição 1 por Gin, e de Asn na posição 5 por Asp.

Substituição de Ser na posição 8 da CDR1 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 13, por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Arg.

Substituição de Leu na posição 10 da CDR1 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 13 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Vai.

Substituição de Ser e de Leu respectivamente nas posições 8 e 10, da CDR1 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 13 por outros aminoácidos. Não existe nenhuma limitação especifica dos aminoácidos depois da substituição mas incluem-se nos exemplos preferidos a substituição de Ser na posição 8 por Arg, e da Leu na posição 10 por Vai.

Substituição da Thr na posição 2 da CDR1 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 13 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas incluem-se nos seus exemplos preferidos a Ala e a Ser.

Substituição da Asn na posição 1 da CDR2 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 14 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Asp.

Substituição da Lys na posição 3 da CDR2 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 14 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Gin.

Substituição da Leu na posição 5 da CDR2 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 14 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Glu.

Substituição da Lys na posição 7 da CDR2 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 14 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas incluem-se nos seus exemplos preferidos a Gin e o Asp.

Substituição de Lys, Leu, e Lys respect ivamente nas posições 3, 5, e 7, da CDR2 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 14, por outros aminoácidos. Não existe nenhuma limitação especifica dos aminoácidos após as substituições, mas incluem-se nos exemplos preferidos a substituição de Lys na posição 3 por Gin, de Leu na posição 5 por Glu, e de Lys na posição 7 por Gin.

Substituição de Glu na posição 5 da CDR3 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 15 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Asp.

Substituição de Ser na posição 6 da CDR3 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 15 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos o Asp.

Substituição da Thr na posição 9 da CDR3 da cadeia leve com a SEQ ID NO: 15 por outro aminoácido. Não existe nenhuma limitação especifica do aminoácido depois da substituição mas inclui-se nos seus exemplos preferidos a Phe.

Pode fazer-se qualquer uma das substituições referidas acima por si só, ou podem fazer-se substituições múltiplas combinadas. Além disto, as substituições acima podem ser combinadas com outras substituições. Estas substituições podem melhorar a farmacocinética do anticorpo (retenção no plasma), aumentar a sua actividade de ligação ao antigénio, melhorar a estabilidade, e/ou diminuir o risco ou a imunogenicidade.

Tal como descrito neste documento, incluem-se nos exemplos particulares das regiões variáveis com uma combinação das substituições descritas acima, por exemplo, regiões variáveis da cadeia pesada cuja sequência de aminoácidos é a SEQ ID NO: 167 e regiões variáveis da cadeia leve cuja sequência de aminoácidos é a SEQ ID NO: 168. Além disto, incluem-se nos exemplos dos anticorpos portadores de uma combinação das substituições descritas acima, por exemplo, anticorpos que incluem uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 167 e uma região variável da cadeia leve cuja sequência de aminoácidos é a da SEQ ID NO: 168.

Além disto, incluem-se nos exemplos particulares de regiões variáveis da cadeia pesada ou da cadeia leve que apresentam uma combinação das substituições descritas acima, por exemplo, as seguintes regiões variáveis: (a) regiões variáveis da cadeia pesada que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 196, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 11 (Hl7); (b) regiões variáveis da cadeia pesada que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 176, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 11 (Hl 9); (c) regiões variáveis da cadeia pesada que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 196, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H28, H42); (d) regiões variáveis da cadeia pesada que incluam umas CDR1 com a SEQ ID NO: 9, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H30, H44); (e) regiões variáveis da cadeia pesada que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 176, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H34, H46); (f) regiões variáveis da cadeia pesada que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 9, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 198, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H57, H78); (g) regiões variáveis da cadeia pesada que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 176, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 198, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H71, H92); (h) regiões variáveis da cadeia pesada que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 9, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 199, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H97, H98); (i) regiões variáveis da cadeia leve que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 200, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (Ll1); (j) regiões variáveis da cadeia leve que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 201, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L12); (k) regiões variáveis da cadeia leve que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L17); e (l) regiões variáveis da cadeia leve que incluam uma CDR1 com a SEQ ID NO: 203, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L50).

Além disto, incluem-se nos exemplos particulares de anticorpos portadores de uma combinação das substituições descritas acima, por exemplo: (i) anticorpos que incluam a região variável da cadeia pesada de (c) e a região variável da cadeia leve de (k); (ii) anticorpos que incluam a região variável da cadeia pesada de (d) e a região variável da cadeia leve de (k); (iii) anticorpos que incluam a região variável da cadeia pesada de (e) e a região variável da cadeia leve de (k); (iv) anticorpos que incluam a região variável da cadeia pesada de (f) e a região variável da cadeia leve de (k); (v) anticorpos que incluam a região variável da cadeia pesada de (g) e a região variável da cadeia leve de (k); e (vi) anticorpos que incluam a região variável da cadeia pesada de (h) e a região variável da cadeia leve de (1). (C) NS2 3 (1) anticorpos com uma região variável da cadeia pesada que inclua CDR1 que tenha a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 17 (HCDR1), uma CDR2 que tenha a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 18 (HCDR2), e uma CDR3 que tenha a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 19 (HCDR3); (2) anticorpos que tenham uma região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 20 (VH); (3) anticorpos que tenham uma região variável da cadeia leve que inclua uma CDR1 com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 (LCDRl), uma CDR2 tendo uma sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 22 (LCDR2), e uma CDR3 contendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 23 (LCDR3); (4) anticorpos que tenham uma região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 24 (VL); (5) anticorpos contendo a região variável da cadeia pesada de (1) e a região variável da cadeia leve de (3); (6) anticorpos contendo a região variável da cadeia pesada de (2) e a região variável da cadeia leve de (4); (7) anticorpos nos quais um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos nos anticorpos de qualquer uma das (1) a (6), que tenham uma actividade equivalente à dos anticorpos de qualquer uma das (1) a (6); e (8) anticorpos que se liguem ao mesmo epitopo que um epitopo a que se liguem os anticorpos de qualquer uma das (1) a (7). (D) NS33 (1) anticorpos que tenham uma região variável da cadeia pesada que inclua uma CDR1 contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25 (HCDR1), uma CDR2 contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 26 (HCDR2), e uma CDR3 contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27 (HCDR3); (2) anticorpos que tenham uma região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 28 (VH); (3) anticorpos que tenham uma região variável da cadeia leve que inclua uma CDR1 contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 29 (LCDR1), uma CDR2 contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 30 (LCDR2), e uma CDR3 contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31 (LCDR3); (4) anticorpos que tenham uma região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 32 (VL); (5) anticorpos contendo a região variável da cadeia pesada de (1) e a região variável da cadeia leve de (3); (6) anticorpos contendo a região variável da cadeia pesada de (2) e a região variável da cadeia leve de (4); (7) anticorpos nos quais um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos nos anticorpos de qualquer uma das (1) a (6), que tenham uma actividade equivalente à dos anticorpos de qualquer uma das (1) a (6); e (8) anticorpos que se liguem ao mesmo epítopo que um epítopo a que se liguem os anticorpos de qualquer uma das (1) a (7).

Podem utilizar-se quaisquer regiões do quadro (FR) para os anticorpos descritos acima de (1) ou de (3); no entanto, utilizam-se preferivelmente FR derivadas de seres humanos. Além disto, quaisquer regiões constantes podem ser utilizadas pata os anticorpos de (1) a (8) descritos acima; no entanto, utilizam-se preferivelmente regiões constantes derivadas de seres humanos. Para os anticorpos tais como se descrevem neste documento, a sequência de aminoácidos da FR original ou da região constante original podem ser utilizadas sem modificação, ou depois de haverem sido modificadas a uma sequência de aminoácidos diferente por substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de um ou mais aminoácidos. A sequência de aminoácidos da cadeia pesada de NS18 descrita acima está ilustrada na SEQ ID NO: 34 e mostra-se a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência está ilustrada na SEQ ID NO: 33. Entretanto, a sequência de aminoácidos da cadeia leve está ilustrada na SEQ ID NO: 36 e mostra-se a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência na SEQ ID NO: 35. A sequência de aminoácidos da cadeia pesada de NS22 está reportada na SEQ ID NO: 38 e a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência está ilustrada na SEQ ID NO: 37. Entretanto, a sequência de aminoácidos da cadeia leve está reportada na SEQ ID NO: 40 e a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência está ilustrada na SEQ ID NO: 39. A sequência de aminoácidos da cadeia pesada de NS23 está representada na SEQ ID NO: 42 e a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência está ilustrada na SEQ ID NO: 41. Entretanto, a sequência de aminoácidos da cadeia leve está reportada na SEQ ID NO: 44 e a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência está ilustrada na SEQ ID NO: 43. A sequência de aminoácidos da cadeia pesada de NS33 está reportada na SEQ ID NO: 46 e a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência está ilustrada na SEQ ID NO: 45. Entretanto, a sequência de aminoácidos da cadeia leve está reportada na SEQ ID NO: 48 e a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência está ilustrada na SEQ ID NO: 47.

Tal como se descreve neste documento, a "actividade equivalente à do anticorpo de qualquer um de entre (1) e (6)" significa que a actividade de ligação e/ou neutralização de NR10 (por exemplo, NR10 humana) é equivalente. Tal como se descreve neste documento, o termo "equivalente" significa que a actividade não é necessariamente igual mas pode ser aumentada ou diminuída, desde que a actividade se mantenha. Incluem-se nos anticorpos com actividade diminuída, por exemplo, anticorpos com uma actividade que seja 30 % ou mais, preferivelmente 50 % ou mais, e mais preferivelmente 80 % ou mais do que a do anticorpo original.

Os anticorpos de qualquer um de entre (1) a (6) mencionados acima podem ter uma substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de um ou mais aminoácidos na sua sequência de aminoácidos das regiões variáveis (sequências CDR e/ou sequências FR), desde que seja mantida a actividade de ligação e/ou neutralização de NR10. Incluem-se nos métodos bem conhecidos dos especialistas na técnica para preparar a sequência de aminoácidos de um anticorpo que tenha uma substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de um ou mais aminoácidos e mantenha a actividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10, métodos para se introduzirem mutações em proteínas. Por exemplo, os especialistas da técnica podem preparar mutantes com funcionalidade equivalente à do anticorpo com actividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10 introduzindo as mutações apropriadas na sequência de aminoácidos do corpo por mutagénese dirigida ao local (Hashimoto-Gotoh, T, Mizuno, T, Ogasahara, Y, e Nakagawa, M. (1995), "An oligodeoxyribonucleotide-directed dual amber method for site-directed mutagenesis", Gene 152, 271-275, Zoller, MJ, e Smith, M. (1983) "Oligonucleotide-directed mutagenesis of DNA fragments cloned into M13 vectors", Methods Enzymol. 100, 468-500, Kramer, W, Drutsa, V, Jansen, HW, Kramer, B, Pflugfelder, M, e Fritz, HJ (1984), "The gapped duplex DNA approach to oligonucleotide-directed mutation construction", Nucleic Acids Res. 12, 9441-9456, Kramer W, e Fritz HJ (1987), Oligonucleotide-directed construction of mutations via gapped duplex DNA Methods, Enzymol. 154, 350-367, Kunkel, TA (1985), "Rapid and effcient site-specific mutagenesis without phenotypic selection", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 488-492) ou outros semelhantes. Assim, os anticorpos que contêm uma ou mais mutações em aminoácidos nas regiões variáveis e que têm atividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10 também se incluem no anticorpo da invenção presente.

Quando é alterado um resíduo de aminoácido, o aminoácido é preferivelmente mutado por um ou mais aminoácidos diferentes que conservam as propriedades da cadeia de aminoácidos lateral. São exemplos de propriedades de cadeias laterais de aminoácidos: aminoácidos hidrofóbicos (A, I, L, M, F, P, W, Y, e V) , aminoácidos hidrofílicos (R, D, N, C, E, Q, G, Η, K, S, e T) , aminoácidos contidos em cadeias laterais alifáticas (G, A, V, L, I, e P) , aminoácidos contendo cadeias laterais contendo grupos hidroxilo (S, T, e Y) , aminoácidos contidos em cadeias laterais contendo enxofre (C e M) , aminoácidos contidos em cadeias laterais contendo cadeias laterais com ácido carboxílico e amida (D, N, E, e Q) , aminoácidos contidos em cadeias laterais básicas (R, K, e H) , e aminoácidos contidos em cadeias laterais aromáticas (H, F, Y, e W) (os aminoácidos foram representados entre parênteses pelos seus códigos de uma letra). As substituições de aminoácidos em cada grupo são denominadas substituições conservativas. Já se sabe que um polipéptido contendo uma sequência de aminoácidos modificada na qual um ou mais resíduos de aminoácido de uma determinada sequência de aminoácidos sejam eliminados, adicionados, e/ou substituídos por outros aminoácidos, pode manter a atividade biológica original (Mark, D. F. et al. , Proc. Natl. Acad. Sei. USA; (1984) 81: 5662-6; Zoller, M. J. e Smith, M., Nucleic Acids Res. (1982) 10: 6487-500; Wang, A. et al., Science (1984) 224: 1431-3; Dalbadie-McFarland, G. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1982) 79: 6409-13) . Estes mutantes têm uma identidade de aminoácidos de pelo menos 70 %, mais preferivelmente pelo menos 75 %, ainda mais preferivelmente pelo menos 80 %, e ainda mais preferivelmente pelo menos 85 %, e ainda mais preferivelmente pelo menos 90 %, e de preferência pelo menos 95 %, com as regiões variáveis (por exemplo, sequência CDR, sequências FR, ou regiões variáveis inteiras), tal como descritas neste documento. Neste documento, define-se a identidade de sequências como a percentagem dos resíduos que são idênticos aos da sequência de aminoácidos original da região variável da cadeia pesada ou da região variável da cadeia leve, determinados depois de as sequências serem alinhadas e de se haverem introduzido apropriadamente espaços para maximizar a identidade de sequências consoante necessário. A identidade entre sequências de aminoácidos pode ser determinada pelo método que se descreve adiante.

Em alternativa, podem obter-se as sequências de aminoácidos das regiões variáveis que tenham uma substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de um ou mais aminoácidos na sequência de aminoácidos das regiões variáveis (sequências CDR e/ou sequências FR) e mantenham a atividade de ligação a e/ou neutralização de NR10, a partir de ácidos nucleicos que hibridizem em condições rigorosas a um ácido nucleico constituído por sequências de nucleótidos codificando para as sequências de aminoácidos das regiões variáveis. Incluem-se nas condições de hibridização restritivas para se isolar um ácido nucleico que se hibridize em condições restritiva a um ácido nucleico que inclua a sequência de nucleótidos codificando para as sequências de aminoácidos das regiões variáveis, por exemplo, as condições de ureia 6 M, 0,4% de SDS, 0,5 x SSC, e 37°C, ou condições de hibridização com restrições equivalentes a estas. Em condições ainda mais rigorosas, por exemplo, condições envolvendo ureia 6 M, 0,4 % de SDS, 0,1 x SSC, e 42°C, pode esperar-se isolarem-se ácidos nucleicos com uma homologia muito maior. Podem determinar-se as sequências dos ácidos nucleicos isolados pelos métodos conhecidos descritos adiante. A homologia global entre sequências de nucleótidos isolados são de pelo menos 50 %, ou uma maior identidade entre sequências, preferivelmente 70 % ou mais, mais preferivelmente 90 % ou mais (por exemplo, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, ou mais).

Também se podem isolar ácidos nucleicos que se hibridizam em condições rigorosas a um ácido nucleico constituído pela sequência de nucleótidos codificando para as sequências de aminoácidos das regiões variáveis utilizando, em vez dos métodos descritos acima que recorrem a técnicas de hibridização, métodos de amplificação de genes tais como a reação da polimerase em cadeia (PCR) recorrendo a iniciadores sintetizados com base na informação acerca de sequência de nucleótidos codificando para as sequências de aminoácidos das regiões variáveis.

Em particular, a identidade entre uma sequência de nucleótidos ou uma sequência de aminoácidos e outra pode ser determinada utilizando o algoritmo BLAST, de Karlin e

Altschul (Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993) 90, 5873-7).

Foram desenvolvidos programas tais como o BLASTN e o BLASTX com base neste algoritmo (Altschul et al. , J. Mol. Biol. (1990) 215, 403-10) . Para analisar sequências de nucleótidos de acordo com BLASTN com base no BLAST, ajustam-se os parâmetros, por exemplo, a classificação = 100 e comprimento de palavra = 12. Por outro lado, os parâmetros utilizados para análise das sequências de aminoácidos com o BLASTX baseado no BLAST incluem, por exemplo, classificação = 50 e comprimento de palavra = 3. Utilizam-se os parâmetros de defeito para estes programas quando se utilizam o BLAST e os programas de BLAST com Espaços. São conhecidas nas técnicas metodologias específicas para estas análises (veja-se o local na internet do National Center for Biotechnology Information (NCBI), da Basic Local Alignment Search Tool (BLAST); http://www.ncbi.nlm.nih.gov).

Também existem anticorpos descritos que se ligam ao mesmo epítopo que um epítopo ao qual se ligam os anticorpos de qualquer uma de (1) a (7).

Pode confirmar-se se um anticorpo reconhece o mesmo epítopo que é reconhecido por outro anticorpo através da competição entre ambos os anticorpos, em relação ao epítopo. Pode avaliar-se a competição entre os anticorpos em ensaios de ligação competitiva utilizando meios tais como ELISA, o método de transferência de energia de fluorescência (FRET), e tecnologia de ensaio fluorométrico de microvolume (FMAT(R)). A quantidade de anticorpos ligada a um antigénio correlaciona-se indirectamente com a capacidade de ligação de anticorpos candidatos como competidores (anticorpos em teste) que se ligam competitivamente ao mesmo epítopo. Por outras palavras, à medida que aumenta a quantidade de ou a afinidade de anticorpos em testes contra o mesmo epitopo, diminui a quantidade de anticorpos ligados ao antigénio, e aumenta a quantidade de anticorpos em teste ligados ao antigénio. Em particular, adicionam-se em simultâneo aos antigénios anticorpos adequadamente marcados e anticorpos que se pretendem avaliar, e detectam-se os anticorpos que deste modo se ligaram utilizando o marcador. A quantidade de anticorpos ligada ao antigénio pode ser facilmente determinada marcando previamente os anticorpos. Não há nenhuma limitação 'particular deste marcador, e selecciona-se o método de marcação consoante a técnica de ensaio que se utilizar. Inclui-se no método de marcação a marcação fluorescente, a marcação radiológica, a marcação enzimática, e outras semelhantes.

Por exemplo, adicionam-se em simultâneo anticorpos com marcador fluorescente e anticorpos não marcados ou em teste a células animais que expressem NR10, e detectam-se os anticorpos marcados por tecnologia de ensaio fluorométrico de microvolume.

Neste documento, o "anticorpo que reconhece o mesmo epitopo" refere-se a um anticorpo que consegue diminuir a ligação do anticorpo marcado em pelo menos 50 % a uma concentração que seja habitualmente 100 vezes maior, preferivelmente 80 vezes maior, mais preferivelmente 50 vezes maior, ainda mais preferivelmente 30 vezes maior, e ainda mais preferivelmente 10 vezes maior, do que a concentração à qual o anticorpo não marcado diminui a ligação do anticorpo marcado em 50 % (IC50) .

Os anticorpos que se ligam ao epitopo ao qual os anticorpos incluídos em qualquer uma de entre (1) a (7) acima são úteis porque possuem uma atividade neutralizante especialmente elevada.

Os anticorpos incluídos em qualquer uma de entre (1) a (8) acima são preferivelmente anticorpos humanizados, embora eles não se limitem especificamente a estes.

Além disto, descrevem-se genes codificando para os anticorpos anti-NR10 de qualquer uma das (1) a (8) de (A) a (D) acima. Os genes tais como descritos neste documento podem ser qualquer forma de genes, por exemplo, de ADN ou de ARN.

Anticorpos (humanizados)

As concretizações preferidas dos anticorpos tais como se descrevem neste documento incluem anticorpos humanizados que se ligam a NR10. Os anticorpos humanizados podem ser preparados por métodos que são conhecidos dos especialistas na técnica. A região variável do anticorpo é tipicamente constituída por três regiões determinando a complementaridade (CDR) envolvidas por quatro regiões do quadro (FR). As CDR determinam largamente a especificidade de ligação do anticorpo. As sequências de aminoácidos das CDR são muito diferentes. Em contraste, as sequências de aminoácidos das FR exibem amiúde uma elevada homologia entre anticorpos possuindo diferentes especificidades de ligação. Afirma-se portanto em geral que a especificidade de ligação de um anticorpo pode ser transplantada para um anticorpo diferente enxertando-lhe as CDR.

Também se referem os anticorpos humanizados como anticorpos humanos com formas diferentes, e eles são preparados transferindo as CDR de um anticorpo derivados de um animal não humano tal como um murganho, nos locais das CDR de um anticorpo humano. Também são conhecidas as metodologias genéticas de recombinação para a sua preparação (vejam-se a Publicação do Pedido de Patente Europeia Nos 125.023 e o WO 96/02.576) .

Em particular, por exemplo, quando as CDR forem derivadas de um anticorpo de murganho, sintetiza-se por PCR uma sequência de ADN concebida de tal forma que as CDR do anticorpo de murganho estejam ligadas por regiões do quadro (FR) de anticorpo humano, utilizando a título de iniciadores, diversos oligonucleótidos que tenham porções que se sobrepõem os terminais tanto das CDR como das FR (veja-se o método descrito no WO 98/13.388) . Liga-se então o ADN resultante a um ADN codificando para uma região constante de um anticorpo humano, insere-se num vector de expressão, e introduz-se num hospedeiro para se produzir o anticorpo (veja-se a Publicação de Pedido de Patente Europeia N2 EP 239.400 e a publicação do Pedido Internacional de Patente N2 WO 96/02.576).

Seleccionam-se as regiões do quadro de anticorpo humano que se pretendem ligar às CDR de tal modo que as CDR formem um local de ligação a antigénio favorável. Caso seja necessário, podem introduzir-se nas regiões do quadro da região variável do anticorpo substituições, eliminações, adições, e/ou inserções de aminoácidos de tal modo que as CDR do anticorpo humano com nova forma formem um local de ligação a antigénio adequado. Por exemplo, podem introduzir-se mutações na sequência de aminoácidos de FR aplicando o método de PCR que é utilizado para enxertar as CDR de murganho nas FR humanas. Em particular, podem introduzir-se mutações numa porção das sequências de nucleótidos dos iniciadores que se ligam às FR. Introduzem-se as mutações nas FR sintetizadas por esses iniciadores. Pode determinar-se a actividade de ligação ao antigénio nos anticorpos mutantes possuindo substituições de aminoácidos, e avaliar-se, pelo método descrito acima, e deste modo podem seleccionar-se sequências de FR mutantes com as propriedades pretendidas (Sato, K. et al., Cancer Res. (1993) 53, 851-856) .

Utilizam-se regiões constantes (C) de anticorpos humanos para as de anticorpos humanizados. Por exemplo, utilizam-se Ογΐ, 0γ2, 0γ3, 0γ4, Cp, Cõ, Cal, Ca2, e Cs para as cadeias H; e utilizam-se Ck e CÀ para as cadeias L. A sequência de aminoácidos de Ck é ilustrada pela SEQ ID NO: 58, e mostra-se a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência na SEQ ID NO: 57. A sequência de aminoácidos de Ογΐ está ilustrada na SEQ ID NO: 60, e mostra-se a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência na SEQ ID NO: 59. A sequência de aminoácidos de Ογ2 está ilustrada na SEQ ID NO: 62, e mostra-se a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência na SEQ ID NO: 61. A sequência de aminoácidos de Ογ4 está ilustrada na SEQ ID NO: 64, e mostra-se a sequência de nucleótidos codificando para esta sequência na SEQ ID NO: 63. Além disto, as regiões C do anticorpo humano podem ser modificadas para melhorar a estabilidade do anticorpo ou a produção do anticorpo. Incluem-se nas regiões C modificadas do anticorpo humano, por exemplo, as regiões C descritas adiante neste documento. Os anticorpos humanos utilizados para humanização podem ser de um isotipo qualquer tal como IgG, IgM, IgA, IgE, ou IgD; no entanto, utiliza-se IgG preferivelmente na invenção presente. O IgG que se pode utilizar inclui IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, e outros semelhantes.

Além disto, depois de se preparar um anticorpo humanizado, os aminoácidos da região variável (por exemplo, CDR e FR) e da região constante do anticorpo humanizado podem ser eliminados, adicionados, inseridos, e/ou substituído por outros aminoácidos. Os anticorpos tais como descritos neste documento também incluem anticorpos humanizados tais como os portadores de substituições de aminoácidos, e outros semelhantes. A origem das CDR de um anticorpo humanizado não tem nenhuma limitação específica, e podem provir de qualquer animal. Por exemplo, é possível utilizar as sequências de anticorpos de murganho, anticorpos de rato, anticorpos de coelho, anticorpos de camelo, e outras semelhantes. São preferidas as sequências CDR de anticorpos de murganho.

Em geral, é difícil humanizar anticorpos mantendo as atividades de ligação e de neutralização dos anticorpos originais. A invenção presente, no entanto, conseguiu obter anticorpos humanizados com atividades de ligação e/ou de neutralização equivalentes às dos anticorpos de murganho originais. Os anticorpos humanizados são úteis quando administrados a seres humanos com os objetivos terapêuticos, porque manifestam uma imunogenicidade inferior no corpo humano.

Incluem-se nos exemplos preferidos dos anticorpos humanizados anti-NRIO tal como descritos neste documento: (a) anticorpos humanizados que incluam uma região variável da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50 (HO-VH); (b) anticorpos humanizados que incluam uma região variável da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 112 (Hl—VH); (c) anticorpos humanizados que incluam uma região variável da cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52 (LO-VL); (d) anticorpos humanizados que incluam uma região variável da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50 (HO-VH) e uma região variável da cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52 (LO-VL); e (e) anticorpos humanizados que incluam uma região variável da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 112 e anticorpos humanizados que incluam uma região variável da cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52. A região variável da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50 (HO-VH) , a região variável da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 112, e a região variável da cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52 (LO-VL) podem exibir uma substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de um ou mais aminoácidos. A substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de aminoácidos pode ser feita quer em CDR, quer em FR, ou em ambas.

Deste modo, outras concretizações preferidas do anticorpo humanizado anti-NRIO tal como descrito neste documento incluem, por exemplo: (f) anticorpos que incluam uma região variável da cadeia pesada contendo uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50 (HO-VH); (g) anticorpos que incluam uma região variável da cadeia pesada contendo uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 112 (Hl-VH); (h) anticorpos que incluam uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52 (LO-VL); (i) anticorpos que incluam uma região variável da cadeia pesada contendo uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50 (HO-VH) , e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52 (LO-VL); (j) anticorpos que incluam uma região variável da cadeia pesada contendo uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 112 (Hl-VH), e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52 (LO-VL);

Sem nenhuma limitação específica, os anticorpos de qualquer uma de entre (f) e (j) têm preferivelmente uma atividade semelhante à dos anticorpos de qualquer uma das (a) a (e) . A substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de aminoácidos não são especificamente limitadas, mas incluem-se em exemplos particulares, por exemplo, as substituições de aminoácidos descritas acima.

Mais em particular, por exemplo, podem incluir-se as seguintes substituições de aminoácidos:

Substituição de lie na posição 3 da CDR1 (SEQ ID NO: 9) na região da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Vai (SEQ ID NO: 173) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 9 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 173 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50 ou 112.

Substituição da Met na posição 4 da CDR1 (SEQ ID NO: 9) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por lie (SEQ ID NO: 174). Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 9 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 174 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50 ou 112 .

Substituição da Met na posição 4 da CDR1 (SEQ ID NO: 9) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Leu (SEQ ID NO: 175). Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 9 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 175 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50 ou 112 .

Substituição da lie na posição 3 da CDR1 (SEQ ID NO: 9) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Ala (SEQ ID NO: 176). Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 9 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 176 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50 ou 112 .

Substituição da Leu na posição 1 da CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Glu (SEQ ID NO: 113) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 113 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição da Asn na posição 3 da CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Asp (SEQ ID NO: 114) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 114 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição da Gin na posição 13 da CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Asp (SEQ ID NO: 115) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 115 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Lys na posição 14 de CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Gin (SEQ ID NO: 116) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 116 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Lys na posição 16 da CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Gin (SEQ ID NO: 117) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 117 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição da Gly na posição 17 de CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Asp (SEQ ID NO: 118) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 118 numa região variável de

cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição da Lys na posição 16 e de Gly na posição 17 de CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, respetivamente por Gin e Asp, (SEQ ID NO: 119) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 119 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112 .

Substituição de Lys na posição 14, Lys na posição 16, e Gly na posição 17 da CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, respetivamente por Gin, Gin, e Asp (SEQ ID NO: 167) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 171 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Gin na posição 13, Lys na posição 14, Lys na posição 16, e Gly na posição 17 de CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, respetivamente por Asp, Gin, Gin, e Asp, (SEQ ID NO: 172) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 172 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Ser na posição 10 de CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Asp (SEQ ID NO: 177) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 177 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Gin na posição 13 de CDR2 (SEQ ID NO: 10) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112 por Pro (SEQ ID NO: 178) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 10 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 178 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Tyr na posição 3 de CDR3 (SEQ ID NO: 11) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Leu (SEQ ID NO: 179) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 11 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 17 9 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Met na posição 10 de CDR3 (SEQ ID NO: 11) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Leu (SEQ ID NO: 180) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 11 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 180 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Asp na posição 11 de CDR3 (SEQ ID NO: 11) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Glu (SEQ ID NO: 181) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 11 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 181 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Tyr na posição 12 de CDR3 (SEQ ID NO: 11) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Thr (SEQ ID NO: 182) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 11 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 182 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Tyr na posição 12 da CDR3 (SEQ ID NO: 11) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, por Ser (SEQ ID NO: 183) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 11 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 183 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição da Met na posição 10, do Asp na posição 11, e da Tyr na posição 12 de CDR3 (SEQ ID NO: 11) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, respetivamente por Leu, Glu, Thr (SEQ ID NO: 184) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 11 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 184 numa região variável de

Substituição do Asp na posição 11 e da Tyr na posição 12 de CDR3 (SEQ ID NO: 11) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, respetivamente por Glu e Thr (SEQ ID NO: 185) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 11 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 185 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112 .

Substituição da Tyr na posição 3, do Asp na posição 11, e da Tyr na posição 12 de CDR3 (SEQ ID NO: 11) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, respetivamente por Leu, Glu, e Thr (SEQ ID NO: 186) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 11 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 186 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição da Tyr na posição 3, do Asp na posição 11, e da Tyr na posição 12 da CDR3 (SEQ ID NO: 11) na região variável da cadeia pesada com a SEQ ID NO: 50, ou 112, respetivamente por Leu, Glu, e Ser (SEQ ID NO: 187) .

Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 11 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 187 numa região variável de cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 50, ou 112.

Substituição de Arg na posição 1 de CDR1 (SEQ ID NO: 13) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Gin (SEQ ID NO: 121) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 13 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 121 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Asn na posição 5 de CDR1 (SEQ ID NO: 13) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Asp (SEQ ID NO: 122) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 13 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 122 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Ser na posição 8 da CDR1 (SEQ ID NO: 13) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52 por Arg (SEQ ID NO: 188) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 13 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 188 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Leu na posição 10 de CDR1. (SEQ ID NO: 13) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Vai (SEQ ID NO: 189). Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 13 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 189 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Ser na posição 8 e da Leu na posição 10 da CDR1 (SEQ ID NO: 13) da região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, respetivamente por Arg e Vai (SEQ ID NO: 190) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 13 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 190 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Thr na posição 2 da CDR1 (SEQ ID NO: 13) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Ala (SEQ ID NO: 191) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 13 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 191 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Thr na posição 2 da CDR1 (SEQ ID NO: 13) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Ser (SEQ ID NO: 192) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 13 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 192 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição de Asn na posição 1 da CDR2 (SEQ ID NO: 14) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Asp (SEQ ID NO: 123) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 13 é substituída pela CDR1 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 123 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Lys na posição 3 da CDR2 (SEQ ID NO: 14) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Gin (SEQ ID NO: 124) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 14 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 124 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Leu na posição 5 da CDR2 (SEQ ID NO: 14) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Glu (SEQ ID NO: 125) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 14 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 125 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Lys na posição 7 da CDR2 (SEQ ID NO: 14) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Gin (SEQ ID NO: 126) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 14 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 126 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Lys na posição 7 da CDR2 (SEQ ID NO: 14) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Asp (SEQ ID NO: 127) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 14 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 127 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Arg na posição 1 e de Asn na posição 5 da CDR1 (SEQ ID NO: 13) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, respetivamente por Gin e

Asp (SEQ ID NO: 169) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 14 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 169 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Lys na posição 3, da Leu na posição 5, e da Lys na posição 7 da CDR2 (SEQ ID NO: 14) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, respetivamente por Gin, Glu, e Gin (SEQ ID NO: 170) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 14 é substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 170 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Glu na posição 5 da CDR3 (SEQ ID NO: 15) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Asp (SEQ ID NO: 193) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 15 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 193 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Ser na posição 6 da CDR3 (SEQ ID NO: 15) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Asp (SEQ ID NO: 194) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 15 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 194 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Substituição da Thr na posição 9 da CDR3 (SEQ ID NO: 15) na região variável da cadeia leve com a SEQ ID NO: 52, por Phe (SEQ ID NO: 195) . Deste modo, descrevem-se regiões variáveis da cadeia leve nas quais a CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 15 é substituída pela CDR3 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 195 numa região variável de cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 52.

Além disto, as substituições diferentes das que se descreveram acima incluem uma substituição da Arg na posição 3 da FR2 da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 97 por outro aminoácido. 0 aminoácido, após a substituição, não tem nenhuma limitação especial; mas inclui-se nos exemplos preferidos dele Gin. Quando a Arg na posição 3 da SEQ ID NO: 97 foi substituída por Gin, pode substituir-se a Ala na posição 5 por Ser para se obter uma sequência FR2 humana. A sequência de aminoácidos na qual Arg e Ala nas posições 3 e 5 na sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 97 foram substituídos respectivamente por Gin e Ser, está ilustrada na SEQ ID NO: 120. Deste modo, a invenção presente proporciona regiões variáveis da cadeia pesada nas quais a FR2 contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 97 é substituída por uma FR2 contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 120 numa região variável da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50 ou 112 .

Pode utilizar-se qualquer das substituições de aminoácidos descritas acima por si só ou em combinação por outro aminoácido consoante as substituições descritas acima. Elas também podem ser combinadas com substituições de aminoácidos diferentes das descritas acima.

Incluem-se nos exemplos particulares dos anticorpos nos quais as substituições descritas acima foram levadas a cabo, por exemplo, anticorpos que incluam uma região variável da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 167, anticorpos que incluam uma região variável da cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 168, e anticorpos que incluam uma região variável da cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 167 e uma região variável da cadeia leve com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 168 .

Além disto, incluem-se nos exemplos particulares das regiões variáveis da cadeia pesada nas quais se fizeram as substituições descritas acima, por exemplo, as seguintes regiões variáveis da cadeia pesada: (1) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 204 (H17); (2) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 205 (Hl 9); (3) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 206 (H28); (4) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 207 (H30); (5) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 208 (H34); (6) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 209 (H42); (7) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 210 (H44); (8) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 211 (H46) ; (9) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 212 (H57); (10) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 213 (H71); (11) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 214 (H78); (12) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 215 (H92); (13) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 216 (H97); e (14) regiões variáveis da cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 217 (H98).

Entretanto, incluem-se nos exemplos particulares das regiões variáveis da cadeia leve nas quais se levaram a cabo as substituições descritas acima, por exemplo, as seguintes regiões variáveis de cadeia leve: (15) regiões variáveis da cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 218 (Eli); (16) regiões variáveis da cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 219 (L12); (17) regiões variáveis da cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17); e (18) regiões variáveis da cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 221 (L50).

Além disto, incluem-se nos exemplos particulares dos anticorpos incluindo as regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve descritas acima, por exemplo, os seguintes anticorpos: (19) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (3) e a região variável da cadeia leve de (17) (H28L17); (20) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (4) e a região variável da cadeia leve de (17) (H30L17); (21) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (5) e a região variável da cadeia leve de (17) (H34L17); (22) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (6) e a região variável da cadeia leve de (17) (H42L17); (23) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (7) e a região variável da cadeia leve de (17) (H44L17); (24) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (8) e a região variável da cadeia leve de (17) (H46L17); (25) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (9) e a região variável da cadeia leve de (17) (H57L17); (26) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (10) e a região variável da cadeia leve de (17) (H71L17), (27) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (11) e a região variável da cadeia leve de (17) (H78L17); (28) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (12) e a região variável da cadeia leve de (17) (H92L17); (29) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (13) e a região variável da cadeia leve de (18) (H97L50); e (30) anticorpos que incluem a região variável da cadeia pesada de (14) e a região variável da cadeia leve de (18) (H98L50). A região constante utilizada para os anticorpos humanizados tais como descritos neste documento pode ser qualquer região constante derivada de um anticorpo humano. Incluem-se nos exemplos preferidos de tais regiões constantes derivadas de anticorpos humanos, por exemplo, regiões constantes derivadas de IgGl ou de IgG2. Além disto, também se podem utilizar regiões constantes nas quais um ou mais aminoácidos sejam substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na região constante derivada de um anticorpo humano.

As regiões constantes nas quais um ou mais aminoácidos sejam substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na região constante derivada de um anticorpo humano não são especificamente limitadas, e nelas se incluem, por exemplo, as seguintes regiões constantes: regiões constantes contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 128 (M58); regiões constantes contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 129 (M14); e regiões constantes contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 62 (SKSC).

Incluem-se exemplos particulares das cadeias pesadas ou de anticorpos com as regiões constantes descritas acima, por exemplo: (1) cadeias pesadas que incluam uma região variável contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 167 e uma região constante contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 128; (2) cadeias pesadas nas quais a CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 171 nas cadeias pesadas de (1) seja substituída pela CDR2 contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 172; (3) anticorpos que incluam a cadeia pesada de (1) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 152; e (4) anticorpos que incluam a cadeia pesada de (2) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 152.

Incluem-se nos exemplos mais particulares dos anticorpos humanizados anti-NRIO tal como se descrevem neste documento, por exemplo, os anticorpos seguintes: (k) anticorpos que incluem uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 54 (HO-VH + região constante); (l) anticorpos que incluem uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 130 (Hl-VH + região constante); (m) anticorpos que incluem uma cadeia leve com a região constante); sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 56 (LO-VL + (n) anticorpos que incluem uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 54 (HO-VH + região constante) e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 56 (LO-VL + região constante); e (o) anticorpos que incluem uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 130 (Hl-VH + região constante) e uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 56 (LO-VL + região constante). A cadeia pesada com a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 54 (HO-VH + região constante) e a cadeia leve com a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 56 (LO-VL + região constante) podem ter substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de um ou mais aminoácidos. A substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de aminoácidos podem ser levadas a cabo quer na região variável, quer na constante, ou em ambas.

Deste modo, descrevem-se: (p) anticorpos que incluem uma cadeia pesada com uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos sejam substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54 (H0-VH + região constante); (q) anticorpos que incluem uma cadeia pesada com uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos sejam substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 130 (Hl-VH + região constante); (r) anticorpos que incluem uma cadeia leve com uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos sejam substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 56 (LO-VL + região constante); (s) anticorpos que incluem uma cadeia pesada com uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos sejam substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos da sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 54 (HO-VH + região constante) e uma cadeia leve com uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos sejam substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 56 (LO-VL + região constante); e (t) anticorpos que incluem uma cadeia pesada com uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos sejam substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 130 (Hl-VH + região constante) e uma cadeia leve com uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos sejam substituídos, eliminados, adicionados, e/ou inseridos na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 56 (LO-VL + região constante) .

Sem qualquer limitação especifica, os anticorpos de qualquer uma de entre (p) e (t) têm preferivelmente uma atividade semelhante à dos anticorpos que qualquer uma de entre (k) e (o). A substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de aminoácidos não têm qualquer limitação específica, mas incluem-se nos seus exemplos particulares, por exemplo, as substituições de aminoácidos delineadas acima.

Além disto, a sequência nucleotídica codificando para a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada humanizada acima referida com a (SEQ ID NO: 50) está ilustrada na SEQ ID NO: 49. A sequência nucleotídica codificando para a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve humanizada acima referida com a (SEQ ID NO: 52) está ilustrada na SEQ ID NO: 51. A sequência nucleotídica codificando para a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada humanizada acima referida com a (SEQ ID NO: 54) está ilustrada na SEQ ID NO: 53. A sequência nucleotídica codificando para a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve humanizada acima referida com a (SEQ ID NO: 56) está ilustrada na SEQ ID NO: 55.

Para além disto, existem anticorpos descritos que reconhecem o mesmo epítopo que é reconhecido pelos anticorpos de qualquer uma das (a) a (t) acima. A ligação ao mesmo epítopo já foi descrita acima.

Também se descrevem os anticorpos seguintes: (u) anticorpos que incluem uma cadeia pesada com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 151; (v) anticorpos que incluem uma cadeia leve com a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 152; e (w) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (u) e a cadeia leve de (v).

Além disto, a invenção presente proporciona as seguintes cadeias pesadas e leves e anticorpos: (1) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 222 (H17); (2) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 223 (H19); (3) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 224 (H28); (4) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 225 (H30); (5) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 226 (H34); (6) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 227 (H42); (7) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 228 (H44); (8) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 229 (H46); (9) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 230 (H57); (10) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 231 (H71); (11) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 232 (H78); (12) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 233 (H92); (13) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 234 (H97); (14) cadeias pesadas incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 235 (H98); (15) cadeias leves incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 236 (Lll) (16) cadeias leves incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 237 (L12); (17) cadeias leves incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17); (18) cadeias leves incluindo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 239 (L50); (19) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (3) e a cadeia leve de (17) (H28L17); (20) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (4) e a cadeia leve de (17) (H30L17); (21) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (5) e a cadeia leve de (17) (H34L17); (22) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (6) e a cadeia leve de (17) (H42L17); (23) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (7) e a cadeia leve de (17) (H44L17); (24) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (8) e a cadeia leve de (17) (H46L17); (25) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (9) e a cadeia leve de (17) (H57L 17); (26) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (10) e a cadeia leve de (17) (H71L17); (27) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (11) e a cadeia leve de (17) (H78L17); (28) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (12) e a cadeia leve de (17) (H92L 17); (29) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (13) e a cadeia leve de (18) (H97L50); (30) anticorpos que incluem a cadeia pesada de (14) e a cadeia leve de (18) (H98L50); (31) cadeias pesadas incluindo uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados e/ou inseridos nas cadeias pesadas de qualquer uma de entre (1) e (14); (32) cadeias leves incluindo uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados e/ou inseridos nas cadeias leves de qualquer uma de entre (15) e (18); (33) anticorpos com uma sequência de aminoácidos uma sequência de aminoácidos na qual um ou mais aminoácidos hajam sido substituídos, eliminados, adicionados e/ou inseridos nos anticorpos de qualquer uma das (19) a (30); e (34) anticorpos que reconhecem o mesmo epítopo que é reconhecido pelos anticorpos de qualquer uma das (19) a (33). A substituição, eliminação, adição, e/ou inserção de aminoácidos são tal como se descreveram acima. Também se descreveram acima os anticorpos que reconhecem o mesmo epitopo que é reconhecido por um anticorpo.

Também se descrevem genes codificando para as regiões variáveis, cadeias pesadas, cadeias leves, ou anticorpos da invenção presente.

Também se descrevem vetores transportando os genes descritos acima.

Também se descrevem células hospedeiras transformadas com os vetores descritos acima.

Também se descrevem métodos para produzir regiões variáveis, cadeias pesadas, cadeias leves, ou anticorpos da invenção presente, que incluem o passo de se cultivarem as células hospedeiras descritas acima.

Os vetores, células hospedeiras, e cultura de células hospedeiras estão descritos adiante neste documento.

Anticorpos que reconhecem domínios

Incluem-se nas concretizações preferidas do anticorpo anti-NRIO tal como descrito neste documento anticorpos que reconhecem o domínio 1 ou o domínio 2. Na invenção presente, o domínio 1 refere-se à região de aminoácidos nas posições 21 a 120 (LPAKP a LENIA) na sequência de aminoácidos de NR10 humana com a SEQ ID NO: 76, em que a numeração dos aminoácidos é baseada na sequência incluindo o péptido de sinal. Além disto, tal como se descreve neste documento, o domínio 2 refere-se à região de aminoácidos nas posições 121 a 227 (KTEPP a EEEAP) na sequência de aminoácidos de NR10 humana com a SEQ ID NO: 76, em que a numeração dos aminoácidos é baseada na sequência incluindo o péptido de sinal.

Estes anticorpos não são especificamente limitados; no entanto, em geral, eles possuem uma atividade neutralizante, e são preferivelmente anticorpos humanizados.

Incluem-se nos exemplos dos anticorpos preferidos tais como descritos neste documento os anticorpos que reconhecem o domínio 1. Os anticorpos que reconhecem o domínio 1 possuem uma forte atividade neutralizante, e são portanto especialmente úteis como fármacos.

Anticorpos (atividade neutralizante)

Também são descritos anticorpos anti-NRIO com uma atividade neutralizante.

Tal como se descreve neste documento, a atividade neutralizante contra NR10 refere-se a uma atividade de inibição da ligação entre NR10 e o seu ligando IL-31, e preferivelmente uma atividade de supressão de uma atividade biológica baseada em NR10.

Podem selecionar-se anticorpos com uma atividade neutralizante de NR10, por exemplo, adicionando candidatos a anticorpos a uma linha de células dependente de IL-31 e observando o seu efeito de supressão do crescimento da linha de células. Neste método, os anticorpos que suprimem o crescimento da linha de células dependente de IL-31 são determinados como sendo anticorpos com uma atividade neutralizante contra NR10.

Anticorpos (em geral)

Os anticorpos tais como se descrevem neste documento não são limitados em termos da sua origem, e podem ser derivados de quaisquer animais tais como seres humanos, murganhos, e ratos. Além disto, os anticorpos podem ser anticorpos recombinantes tais como anticorpos quiméricos e anticorpos humanizados. Tal como se descrevem acima, os anticorpos preferidos tal como descritos neste documento incluem anticorpos humanizados.

Os anticorpos quiméricos contêm, por exemplo, as regiões constantes das cadeias pesada e leve de um anticorpo humano, e as regiões variáveis das cadeias pesada e leve de um anticorpo de um mamífero não humano, tal como um murganho. Podem produzir-se os anticorpos quiméricos por métodos conhecidos. Por exemplo, podem produzir-se os anticorpos clonando um gene de anticorpo a partir de hibridomas, inserindo num vetor apropriado, e introduzindo esta construção em hospedeiros (veja-se, por exemplo, Cari, A. K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Publicado no Reino Unido por MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990). Em particular, sintetizam-se os cADN das regiões variáveis do anticorpo (regiões V) a partir de mARN de hibridomas utilizando transcriptase reversa. Uma vez obtidos os ADN codificando para as regiões V de um anticorpo com interesse, elas são ligadas a ADN codificando para as regiões constantes (regiões C) de um anticorpo humano pretendido. Inserem-se as construções resultantes em vetores de expressão. Em alternativa, podem inserir-se os ADN codificando para as regiões V dos anticorpos em vetores de expressão incluindo ADN codificando para as regiões C de um anticorpo humano. Inserem-se os ADN em vetores de expressão de modo que eles sejam expressos sob a regulação das regiões reguladoras da expressão, por exemplo, incrementadores e promotores. No passo seguinte, podem transformar-se células hospedeiras com os vetores de expressão, para permitir a expressão dos anticorpos quiméricos.

Também são conhecidos métodos para se obterem anticorpos humanos. Por exemplo, podem obter-se os anticorpos humanos pretendidos com atividade de ligação a antigénio (1) sensibilizando linfócitos humanos com antigénios de interesse ou células que expressem antigénios de interesse in vitro; e (2) fundindo os linfócitos sensibilizados com células de mieloma humano tais como a U266 (veja-se o Pedido de Patente Japonesa Publicação Kokoku N2 (JP-B) H01-59878 (examinada, publicação de pedido de patente Japonesa para oposição)). Em alternativa, também se pode obter o anticorpo humano pretendido imunizando um animal transgénico que tenha um reportório inteiro de genes de anticorpos humanos, com um antigénio pretendido (vejam-se as Publicações de Pedidos de Patente Internacional Nos WO 93/12.227, WO 92/03.918, WO 94/02.602, WO 94/25.585, WO 96/34.096, e WO 96/33.735).

Além disto, são conhecidas técnicas para se obterem anticorpos humanos por tratamento sucessivo com uma biblioteca de exibição de fagos de anticorpos humanos. Por exemplo, a região variável de um anticorpo humano é expressa sob a forma de um anticorpo de cadeia singela (scFv) à superfície de um fago, utilizando um método de exibição de fagos, podendo selecionar-se os fagos que se ligam ao antigénio. Analisando os genes dos fagos selecionados, podem determinar-se as sequências de ADN codificando para as regiões variáveis dos anticorpos humanos que se ligam ao antigénio. Caso se identifiquem os ADN das sequências dos scFv que se ligam ao antigénio, podem construir-se vetores de expressão apropriados que incluam essas sequências para se obterem anticorpos humanos. Estes métodos são bem conhecidos. Podem referir-se WO 92/01.047, WO 92/20.791, WO 93/06.213, WO 93/11.236, WO 93/19.172, WO 95/01.438, WO 95/15.388, e semelhantes.

Incluem-se nos anticorpos tais como se descrevem neste documento não só anticorpos divalentes tais como os representados por IgG, mas também anticorpos monovalentes, anticorpos multivalentes tais como representados por IgM, e anticorpos biespecíficos capazes de se ligarem a diferentes antigénios, desde que apresentem uma atividade de ligação a NR10 e/ou uma atividade da sua neutralização. Os anticorpos multivalentes tais como descritos neste documento incluem anticorpos multivalentes nos quais os locais de ligação a antigénio são todos idênticos, e anticorpos multivalentes nos quais todos ou alguns dos locais de ligação ao antigénio são diferentes. Os anticorpos tais como descritos neste documento não se limitam a moléculas de anticorpo de comprimento inteiro, mas também podem ser anticorpos com pequena massa molecular ou produtos modificados a partir deles, desde que se liguem à proteína NR10.

Em alternativa, os anticorpos tais como descritos neste documento podem ser anticorpos com pequena massa molecular. Estes anticorpos com pequena massa molecular são anticorpos incluindo fragmentos de anticorpo que não têm algumas porções de um anticorpo inteiro (por exemplo, IgG inteiro), e não têm nenhuma limitação específica, desde que mantenham atividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10. Tal como se descreve neste documento, os anticorpos com pequena massa molecular não têm nenhuma limitação específica, desde que contenham uma porção dos anticorpos inteiros. Os anticorpos com pequena massa molecular contêm preferivelmente uma região variável da cadeia pesada (VH) ou uma região variável da cadeia leve (VL) . Os anticorpos com pequena massa molecular especialmente preferidos contêm tanto VH como VL. Além disto, os exemplos preferidos dos anticorpos com pequena massa molecular da invenção presente incluem anticorpos com pequena massa molecular contendo as CDR de um anticorpo. As CDR contidas nos anticorpos com pequena massa molecular podem incluir algumas ou todas as seis CDR de um anticorpo.

Os anticorpos com pequena massa molecular tais como descritos neste documento têm preferivelmente uma massa molecular mais pequena do que anticorpos inteiros. No entanto, os anticorpos com pequena massa molecular podem formar multimeros, por exemplo, dimeros, trimeros, ou tetrâmeros, e portanto as suas massas moleculares até podem ser maiores do que as de anticorpos inteiros.

Incluem-se nos exemplos particulares dos fragmentos de anticorpo, por exemplo, Fab, Fab', F(ab')2, e Fv. Entretanto, incluem-se nos exemplos específicos dos anticorpos com pequena massa molecular, por exemplo, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv (Fv de cadeia singela), diacorpos, e sc(Fv)2 ( (Fv)2 de cadeia singela) . Também se incluem multimeros (por exemplo, dimeros, trimeros, tetrâmeros, e polímeros) destes anticorpos nos anticorpos com pequena massa molecular tal como descritos neste documento.

Podem obter-se fragmentos de anticorpos, por exemplo, tratando anticorpos com enzimas para se produzirem fragmentos de anticorpo. Incluem-se nos enzimas que se sabe gerarem fragmentos de anticorpos, por exemplo, papaina, pepsina, e plasmina. Em alternativa, pode construir-se um gene codificando para um tal fragmento de anticorpo, introduzir-se num vetor de expressão, e expressar-se em células hospedeiras apropriadas (veja-se, por exemplo, Co, M.S. et al., J. Immunol. (1994) 152, 2968-2976; Better, Μ. & Horwitz, A. H. Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496; Plueckthun, A. & Skerra, A. Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496; Lamoyi, E., Methods in Enzymology (1989) 121, 652-663; Trousseaux, J. et al., Methods in Enzymology (1989) 121, 663-669; Bird, R. E. et al., TIBTECH (1991) 9, 132-137).

Os enzimas digestivos clivam um local especifico de um fragmento de anticorpo, originando fragmentos com estruturas particulares que se ilustram adiante. Podem aplicar-se técnicas de engenharia genética aos fragmentos de anticorpo que deste modo se obtiveram para eliminar uma porção arbitrária do anticorpo.

Os fragmentos de anticorpo obtidos utilizando os enzimas digestivos descritos acima são como se seguem:

Digestão com papaina: F(ab)2 ou Fab Digestão com pepsina: F(ab')2 ou Fab'

Digestão com plasmina: Facb

Os anticorpos com pequena massa molecular tais como se descrevem neste documento incluem fragmentos de anticorpo sem uma região arbitrária, desde que mantenham uma actividade de ligação a ou de neutralização de NR10.

"Diacorpo" refere-se a um fragmento de anticorpo bivalente construído por fusão genética (Holliger P. et al. , Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90: 6444-6448 (1993); EP 404.097; WO 93/11.161, etc.). Os diacorpos são dímeros constituídos por duas cadeias polipeptídicas. Em cada uma das cadeias formando um dímero, uma VL e uma VH estão habitualmente ligadas por um agente de ligação na mesma cadeia. Em geral, o agente de ligação num diacorpo é suficientemente curto para que a VL e a VH não consigam ligar-se uma à outra. Em particular, o número de resíduos de aminoácido que constituem o agente de ligação é, por exemplo, de cerca de cinco resíduos. Deste modo, a VL e a VH codificadas no mesmo polipéptido não conseguem formar um fragmento com uma região variável de cadeia singela, e formarão um dímero com outro fragmento contendo uma cadeia singela com uma região variável. Em resultado, o diacorpo possui dois locais de ligação a antigénio.

Os anticorpos ScFv são polipéptidos de cadeia singela produzidos ligando uma região variável de uma cadeia pesada ([VH]) e uma região variável de uma cadeia leve ([VL]) por um agente de ligação ou algo assim (Huston, J. S. et al. , Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. (1988) 85, 5879-5883; Pluckthun "The Pharmacology of Monoclonal

Antibodies" Vol. 113, editores, Resenburg e Moore, Springer Verlag, Nova Iorque, págs. 269-315, (1994)). A região V da cadeia H e a região V da cadeia L de scFv podem ser derivadas de qualquer anticorpo descrito neste documento. 0 agente de ligação peptídico para ligar as regiões V não tem nenhuma limitação especifica. Por exemplo, pode utilizar-se a titulo de agente de ligação um polipéptido arbitrário contendo entre cerca de três e 25 resíduos. Em particular, é possível utilizar os agentes de ligação peptídicos que se descrevem adiante, ou algo assim.

As regiões V de ambas as cadeias podem ser ligadas, por exemplo, por PCR tal como se descreveu acima. Em primeiro lugar, de entre os ADN que se seguem, utiliza-se um ADN codificando para a sequência total de aminoácidos pretendida ou uma parcial como escantilhão, para se ligarem as regiões V por PCR:

Sequência de ADN codificando para uma cadeia H ou para uma região V de uma cadeia H de um anticorpo, e

Sequência de ADN codificando para uma cadeia L ou para uma região V de uma cadeia L.

Amplificam-se por PCR os ADN codificando para as regiões V da cadeia H e da cadeia L utilizando um par de iniciadores com sequências correspondendo às de ambas as extremidades do ADN que se pretende amplificar. Depois prepara-se um ADN codificando para a porção do agente de ligação peptídico. Também se pode sintetizar por PCR o ADN codificando para o agente de ligação peptídico. Neste caso, adicionam-se sequências de nucleótidos que se podem adicionar aos produtos de amplificação das regiões V sintetizadas em separado, ao terminal 5' dos iniciadores que se vão utilizar. Leva-se a cabo então uma PCR utilizando cada ADN [ADN da região V da cadeia] [ADN do agente de ligação peptídico] - [ADN da região V da cadeia L], e iniciadores de montagem por PCR.

Os iniciadores para a montagem por PCR são constituído por uma combinação de um iniciador que se ligue ao terminal 5' de [ADN da região V da cadeia H] e um iniciador que se ligue ao terminal 3' de [ADN da região V da cadeia L]. Por outras palavras, os iniciadores da montagem por PCR são um conjunto de iniciadores que se podem utilizar para amplificar ADN codificando para a sequência de comprimento inteiro do scFv que se pretende sintetizar. Entretanto, foram adicionadas sequência que se podem ligar aos ADN das regiões V ao [ADN do agente de ligação peptídico]. Deste modo, estes ADN estão ligados em conjunto, e então o scFv inteiro é finalmente gerado como produto de amplificação pelos iniciadores PCR de montagem. Uma vez gerados os ADN codificando para scFv, podem obter-se por métodos convencionais os vectores de expressão portadores destes ADN e células recombinantes transformadas com estes vectores de expressão. Além disto, pode obter-se o scFv por cultura das células recombinantes resultantes de modo a expressarem os ADN codificando para scFv. A ordem das regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve que se pretendem ligar em conjunto não tem nenhuma limitação específica, e elas podem estar dispostas por uma ordem qualquer. Listam-se adiante exemplos das disposições.

[VH] agente de ligação [VL] [VL] agente de ligação [VH] 0 sc(Fv)2 é um anticorpo de cadeia singela e pequena massa molecular produzido ligando duas VH e duas VL recorrendo a agentes de ligação e semelhantes (Hudson et al. , J Immunol. Methods 1999; 231: 177-189) . Por exemplo, pode produzir-se sc (Fv)2 ligando dois scFv por um agente de ligação. São preferidos os anticorpos nos quais duas VH e duas VL estão dispostas pela ordem VH-VL-VH-VL ([VH] agente de ligação [VL] agente de ligação [VH] agente de ligação [VL]) a partir do terminal N do polipéptido de cadeia singela. No entanto, a ordem das duas VH e das duas VL não se limita à disposição acima, e elas podem estar dispostas por uma ordem qualquer. Listam-se adiante exemplos das disposições: [VL] agente de ligação [VH] agente de ligação [VH] agente de ligação [VL] [VH] agente de ligação [VL] agente de ligação [VL] agente de ligação [VH] [VH] agente de ligação [VH] agente de ligação [VL] agente de ligação [VL] [VL] agente de ligação [VL] agente de ligação [VH] agente de ligação [VH] [VL] agente de ligação [VH] agente de ligação [VL] agente de ligação [VH] A sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada ou da região variável da cadeia leve num anticorpo com massa molecular pequena pode conter uma substituição, eliminação, adição, e/ou inserção. Além disto, a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada e a da região variável da cadeia leve também podem não ter algumas porções ou conter outros polipéptidos a elas adicionados, desde que apresentem actividade de ligação ao antigénio quando estão ligadas umas às outras. Em alternativa, as regiões variáveis podem ser quimerizadas ou humanizadas.

Na invenção presente, os agentes de ligação que ligam as regiões variáveis do anticorpo incluem agentes de ligação peptídicos arbitrários que se podem introduzir utilizando engenharia genética, ou agentes de ligação sintéticos tais como os descritos em Protein Engineering, 9(3), 299-305, 1996.

Os agentes de ligação preferidos tais como descritos neste documento são agentes de ligação peptídicos. Os comprimentos dos agentes de ligação peptídicos não têm nenhuma limitação específica e os entendidos na técnica podem seleccionar apropriadamente os seus comprimentos consoante o objectivo a que se destinam. São comprimentos típicos entre um e 100 aminoácidos, preferivelmente 3 a 50 aminoácidos, mais preferivelmente 5 a 30 aminoácidos, e de preferência 12 a 18 aminoácidos (por exemplo, 15 aminoácidos).

Incluem-se nas sequências de aminoácidos desses agentes de ligação peptídicos, por exemplo:

Ser;

Gly-Ser;

Gly-Gly-Ser;

Ser-Gly-Gly;

Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 82);

Ser-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO: 83);

Gly-Gly-Qly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 84);

Ser-Gly-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO: 85);

Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Set (SEQ ID NO: 86);

Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO: 87);

Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 88);

Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO: 89); (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 84))n; e (Ser-Gly-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO: 85))n, em que n seja um inteiro igual a 1 ou maior. A sequência de aminoácidos do agente de ligação peptidico pode ser adequadamente seleccionada pêlos entendidos na técnica, consoante os objetivos. Por exemplo, o "n" mencionado acima, que determina o comprimento dos agentes de ligação peptídicos, é em geral de 1 a 5, preferivelmente 1 a 3, e de preferência 1 ou 2.

Os agentes de ligação sintéticos (agentes quimicos de ligações cruzadas) incluem agentes de ligações cruzadas que são habitualmente utilizados para criar ligações cruzadas entre péptidos, por exemplo, N-hidroxi-succinimida (NHS), suberato de dissuccinimidilo (DSS), suberato de bis(suitossuccinimidilo) (BS3) , ditiobis (propionato de succinimidilo) (DSP), ditiobis(propionato de suitossuccinimidilo) (DTSSP), bis(succinimidilsuccinato) de etilenoglicol (EGS), bis(sulfossuccinimidilsuccinato) de etilenoglicol (sulfo-EGS) , tartarato de dissuccinimidilo (DST) , tartarato de dissulfossuccinimidilo (sulfo-DST), bis [2-(succinimidoxicarboniloxi)etil]sulfona (BSOCOES), e bis [2-(sulfossuccinimidoxilcarboniloxi)etil]sulfona (sulfo-BSOCOES). Estes agentes de ligações cruzadas encontram-se comercialmente disponíveis.

Quando quatro regiões variáveis de anticorpos estão ligadas, são em geral necessários três agentes de ligação. Estes múltiplos agentes de ligação podem ser iguais ou diferentes.

Os anticorpos tais como descritos neste documento incluem anticorpos nos quais um ou mais resíduos de aminoácidos hajam sido adicionados à sequência de aminoácidos de um anticorpo da invenção presente. Além disto, estão incluídas na invenção presente as proteínas de fusão que resultam de uma fusão entre um dos anticorpos acima e um segundo péptido ou proteína. As proteínas de fusão podem ser preparadas ligando um polinucleótido codificando para um anticorpo tal como descrito neste documento a um polinucleótido codificando para um segundo péptido ou polipéptido no quadro, inserindo este produto num vetor de expressão, e expressando a construção da fusão num hospedeiro. Estão disponíveis para este objetivo algumas metodologias conhecidas na técnica. 0 péptido ou polipéptido parceiro que se vai fundir a um anticorpo da invenção presente pode ser um péptido conhecido, por exemplo, FLAG (Hopp, T. P. et al., BioTechnology 6, 1204-1210 (1988)), 6x His constituído por seis resíduos His (histidina), lOx His, hemaglutinina da gripe (HA) , fragmento c-myc humano, fragmento VSV-GP, fragmento pl8HIV, marcador de T7, de marcador HSV, marcador de E, fragmento de antigénio SV40 T, marcador lck, fragmento de a-tubulina, marcador B, fragmento de Proteína C. Outros polipéptidos parceiros para serem fundidos com os anticorpos da invenção presente incluem, por exemplo, GST (glutationa-S-transferase), HA (hemaglutinina da gripe), a região constante da imunoglobulina, β-galactosidase, e MBP (proteína de ligação a maltose). Pode fundir-se um polinucleótido codificando para um destes péptidos ou polipéptidos comercialmente disponíveis a um polinucleótido codificando para um anticorpo tal como se descreve neste documento. Pode preparar-se o polipéptido de fusão expressão a construção da fusão.

Além disto, os anticorpos tais como descritos neste documento podem ser anticorpos conjugados que estão ligados a diversas moléculas incluindo substâncias poliméricas tais como polietilenoglicol (PEG) e ácido hialurónico, substâncias radioativas, substâncias fluorescentes, substâncias luminescentes, enzimas, e toxinas. Estes anticorpos conjugados podem ser obtidos modificando quimicamente os anticorpos obtidos. Foram estabelecidos neste domínio métodos para modificar anticorpos (por exemplo, US 5.057.313 e US 5.156.840). Os "anticorpos" da invenção presente também incluem esses anticorpos conjugados.

Além disto, os anticorpos utilizados na descrição presente podem ser anticorpos biespecíficos. O anticorpo biespecífico refere-se a um anticorpo que tem regiões variáveis que reconhecem diferentes epitopos na mesma molécula de anticorpo. Tal como se descreve neste documento, os anticorpos biespecíficos podem reconhecer diferentes epitopos numa molécula de NR10, ou reconhecem NR10 com um local de ligação a antigénio e uma substância diferente com o outro local de ligação a antigénio. São conhecidos métodos para produzir anticorpos biespecíficos. Podem preparar-se anticorpos biespecíficos, por exemplo, ligando dois anticorpos que reconheçam antigénios diferentes. Os anticorpos que se vão ligar entre si podem ser meias moléculas cada uma das quais contém uma cadeia H e uma cadeia L, ou quartos de moléculas que consistem em apenas uma cadeia H. Em alternativa, podem fundir-se hibridomas produzindo diferente anticorpos monoclonais para produzir uma célula fundida biespecífica produzindo anticorpos. Além disto, os anticorpos biespecíficos podem ser produzidos por técnicas de engenharia genética.

Os anticorpos tais como descritos neste documento podem diferir nas sequências de aminoácidos, na massa molecular, nos pontos isoelétricos, na presença/ausência de cadeias de açúcares, e na conformação, dependendo da célula ou do hospedeiro que produz o anticorpo ou do método de purificação tal como se descreve adiante. No entanto, inclui-se um anticorpo resultante na descrição presente, desde que seja funcionalmente equivalente a um anticorpo da invenção presente. Por exemplo, quando um anticorpo da invenção presente é expresso em células procarióticas, por exemplo e E. coli, adiciona-se um resíduo de metionina ao terminal N da sequência de aminoácidos do anticorpo original. Estes anticorpos estão incluídos na descrição presente.

Produção ds anticorpos

Os anticorpos tal como descritos neste documento podem ser anticorpos policlonais ou monoclonais. Podem obter-se destes anticorpos monoclonais com atividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10, por exemplo, recorrendo ao seguinte processo: preparam-se anticorpos

monoclonais anti-NRIO utilizando NR10 ou um seu fragmento que seja derivado de um mamífero tal como um ser humano ou um murganho por métodos conhecidos, a título de antigénio, e depois selecionam-se dos anticorpos monoclonais anti-NRIO assim obtidos, aqueles anticorpos que tenham atividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10. Em particular, utiliza-se um antigénio pretendido ou células que expressem o antigénio pretendido, a titulo de antigénio de sensibilização para imunização recorrendo a métodos convencionais de imunização. Podem preparar-se anticorpos monoclonais anti-NRIO fundindo as células imunes obtidas com células conhecidas de parentes utilizando métodos de fusão de células convencionais, e despistando-as para encontrar células produzindo anticorpos monoclonais (hibridomas) por métodos de despiste convencionais. Incluem-se nos animais a imunizar, por exemplo, mamíferos tais como murganhos, ratos, coelhos, ovelhas, macacos, cabras, burros, vacas, cavalos e porcos. Pode preparar-se o antigénio utilizando a sequência conhecida do gene de NR10 e seguindo métodos conhecidos, por exemplo, por métodos utilizando baculovírus (por exemplo, WO 98/46.777) .

Podem preparar-se hibridomas, por exemplo, seguindo o método de Milstein et ai. (Kohler, G. e Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73: 3-46) ou semelhantes. Quando a imunogenicidade de um antigénio é pequena, pode levar-se a cabo a imunização depois de se ligar o antigénio a uma macromolécula com imuogenicidade, tal como a albumina.

Incluem-se nas concretizações dos anticorpos tais como descritos neste documento que tenham uma atividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10, anticorpos monoclonais que atividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10 humano. Os antigénios utilizados para preparar anticorpos monoclonais que tenham uma atividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10 não têm nenhuma limitação especifica, desde que permitam a preparação dos anticorpos que tenham uma atividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10 humano. Sabe-se por exemplo, que existem diversas variantes de NR10 humana, e pode utilizar-se uma variante qualquer como imunogénio desde que permita preparar anticorpos que possuam uma atividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10 humana. Em alternativa, nas mesmas condições, um fragmento peptidico de NR10 ou uma proteína na qual se houvessem introduzido mutações artificiais na sequência natural de NR10 podem ser utilizadas como imunogénio: A NR10.3 humana é um dos imunogénios preferido na preparação de anticorpos que tenham uma atividade de ligação a e/ou de neutralização de NR10 na invenção presente.

Além disto, pode medir-se a atividade de ligação a e/ou neutralização de anticorpo contra NR10, por exemplo, observando o efeito de suprimir o crescimento da linha de células dependente de IL-31, tal como se descreve nos Exemplos.

Entretanto, os anticorpos monoclonais também se podem obter por imunização com ADN. A imunização do ADN é um método no qual um vetor de ADN construído de tal modo que o gene codificando para uma proteína antigénica possa ser expresso num animal a ser imunizado por administração ao animal, e o imunogénio é expresso dentro do corpo do animal para proporcionar imunoestimulação. Em comparação com os métodos de imunização comuns baseados na administração de antigénios proteicos, espera-se que a imunização com ADN seja vantajosa por: • permitir uma imunoestimulação enquanto retém a estrutura de uma membrana proteica; e • o imunogénio não necessita de purificação.

Por outro lado, é difícil combinar a imunização com ADN com um meio imunoestimulante tal como um adjuvante.

Para se obter um anticorpo monoclonal por imunização com ADN, em primeiro lugar, administra-se ADN codificando para NR10 a um animal a imunizar. Pode sintetizar-se o ADN codificando para NR10 por métodos conhecidos tais como PCR. 0 ADN resultante é inserido num vetor de expressão apropriado, e administrado ao animal a imunizar. Incluem-se nos vetores de expressão que se podem utilizar vetores de expressão comercialmente disponíveis tais como pcDNA3.1. Pode administrar-se o vetor ao corpo vivo por métodos convencionais. Por exemplo, pode levar-se a cabo a imunização com ADN introduzindo partículas de ouro revestidas com o vetor de expressão em células recorrendo a uma pistola de genes. Um método preferido para se obter um anticorpo monoclonal envolve um reforço utilizando células expressando NR10 a seguir a uma imunização com ADN.

Uma vez imunizado o mamífero tal como se descreveu acima, e tendo-se confirmado que o teor de anticorpo pretendido no soro aumentou, recolhem-se células imunes do mamífero e submetem-se a uma fusão celular. Preferem-se em particular a título de células imunes, as células do baço.

Utilizam-se células de mieloma de mamífero para a fusão com as células imunes acima. Prefere-se que as células de mieloma tenham marcadores de seleção adequados para o seu despiste. 0 marcador de seleção refere-se a um fenótipo que permite (ou que não permite) a sobrevivência em determinadas condições de cultura. Incluem-se nos marcadores de seleção conhecidos a deficiência em hipoxantina-guanina fosforribosiltransferase (doravante neste documento abreviada como "deficiência em HGPRT") e a deficiência em timidina quinase (doravante neste documento abreviada como "deficiência em TK"). As células deficientes em HGPRT ou em TK exibem sensibilidade a hipoxantina-aminopterina-timidina (doravante neste documento abreviada como "sensibilidade a HAT") . No meio de seleção HAT, as células sensíveis a HAT não conseguem sintetizar ADN e portanto morrerão. No entanto, quando fundidas a células normais, elas poderão continuar a sintetizar ADN pelo caminho de salvação das células normais, e portanto conseguem crescer mesmo em meio de seleção HAT.

Podem selecionar-se células deficientes em HGPRT ou em TK utilizando um meio contendo 6-tioguanina, 8-azaguanina (doravante neste documento abreviada como "8AG"), ou 5'-bromodesoxiuridina. Enquanto as células normais são mortas devido à incorporação destes análogos de pirimidina no seu ADN, as células que não possuem estes enzimas conseguem sobreviver no meio de seleção porque não conseguem incorporar estes análogos de pirimidina. Outro marcador de seleção denominado resistência a G418 confere resistência a antibióticos de 2-desoxiestreptamina (análogos de gentamicina) devido ao gene de resistência à neomicina. São conhecidas diversas linhas de células de mieloma adequadas para a fusão celular. A fusão celular entre células imunes e células de mieloma pode ser essencialmente levada a cabo segundo métodos conhecidos, por exemplo, o método de Kohler e Milstein (Kohler. G. e Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73, 3-46) .

Mais em particular, pode levar-se a cabo a fusão celular, por exemplo, num meio de cultura comum na presença de um agente que promova a fusão celular. 0 agente promotor de fusão inclui, por exemplo, polietilenoglicol (PEG) e vírus Sendai (HVJ) . Caso seja necessário, também se pode adicionar um agente auxiliar tal como sulfóxido de dimetilo para melhorar a eficiência da fusão.

Podem utilizar-se as células imunes e as células de mieloma a uma razão arbitrariamente determinada. Por exemplo, a razão entre células imunes e células de mieloma é preferivelmente de entre 1 e 10. Incluem-se nos meios de cultura a utilizar para a fusão de células, por exemplo, meios que são adequados para o crescimento celular da linha de células de mieloma, tais como RPMI 1640 e MEM, e outros meios de cultura comuns utilizados para este tipo de cultura de células. Além disto, os meios de cultura também podem conter suplementos de soro, tais como soro fetal de vitelo (FCS).

Misturam-se quantidades previamente determinadas de células imunes e células de mieloma no meio de cultura, e depois mistura-se com uma solução de PEG previamente aquecida a 37 °C para se obterem células fundidas (hibridomas). No método de fusão de células, por exemplo, pode adicionar-se PEG com uma massa molecular média de cerca de 1.000-6.000 às células tipicamente a uma concentração de 30 % a 60 % (em peso/volume) . Repetem-se então adições sucessivas de meio de cultura apropriado listado acima e remoção do sobrenadante por centrifugação para se eliminar o agente de fusão celular e outros semelhantes, que são desfavoráveis ao crescimento dos hibridomas.

Podem escolher-se os hibridomas resultantes utilizando um meio de seleção consoante o marcador de seleção que as células de mieloma utilizadas na fusão celular possuem. Por exemplo, podem escolher-se as células deficientes em HGPRT ou TK promovendo a sua cultura num meio HAT (um meio contendo hipoxantina, aminopterina, e timidina). Em particular, quando se utilizam na fusão celular células de mieloma sensíveis a HAT, podem fazer-se crescer seletivamente as células bem-sucedidas na sua fusão com células normais no meio HAT. Continua-se a cultura celular utilizando o meio HAT acima durante um período de tempo suficiente para deixar morrer todas as células (células não fundidas) exceto os hibridomas pretendidos. Podem em geral selecionar-se os hibridomas pretendidos fazendo a cultura das células durante entre diversos dias e algumas semanas. Pode então fazer-se a escolha e a clonagem singela dos hibridomas de que provém um anticorpo com interesse levando a cabo métodos de diluição limitativa normais. Em alternativa, podem preparar-se anticorpos que reconhecem NR10 pelo método descrito no WO 03/104.453.

Pode levar-se a cabo o despiste e a clonagem singela de um anticorpo com interesse por métodos de despiste conhecidos com base na reação do anticorpo com o antigénio. Por exemplo, liga-se um antigénio a um veículo tal como pérolas feitas de poliestireno ou outro semelhante em placas de microtitulação de 96 poços que se podem obter comercialmente, e depois faz-se reagir com o sobrenadante da cultura de hibridoma. Em seguida, lava-se o veículo e faz-se reagir com um anticorpo secundário marcado com um enzima ou algo semelhante. Quando o sobrenadante da cultura contém um anticorpo com interesse que reage com o antigénio de sensibilização, o anticorpo secundário liga-se ao veiculo através desse anticorpo. Por último, deteta-se o anticorpo secundário ligado ao veiculo para se determinar se o sobrenadante da cultura contém o anticorpo com interesse. Podem clonar-se os hibridomas que produzem um anticorpo pretendido capaz de se ligar ao antigénio, pelo método da diluição limitativa ou outro semelhante. Podem utilizar-se preferivelmente como antigénios para este propósito, não só o antigénio utilizado para imunização mas também uma proteína NR10 substancialmente equivalente a ele. Por exemplo, uma linha celular que expresse NR10, o domínio extracelular de NR10, ou um oligopéptido constituído por uma sequência de aminoácidos parcial constituindo o domínio, podem ser utilizados a título de antigénio.

Para além do método descrito acima para preparar hibridomas por imunização de um animal não humano, também podem obter-se os anticorpos com interesse sensibilizando linfócitos humanos com um antigénio. Em particular, sensibilizam-se em primeiro lugar linfócitos humanos com uma proteína NR10 in vitro. Em seguida, fundem-se os linfócitos sensibilizados com um parceiro de fusão apropriado. Por exemplo, podem utilizar-se como parceiro de fusão células de mieloma derivadas de humanos com a capacidade de se dividirem permanentemente (veja-se a Publicação do Pedido de Patente Japonesa Kokoku N2 (JP-B) Hl-59.878 (examinada, pedido de patente Japonesa aprovado, publicado para oposição) . Os anticorpos obtidos por este método são anticorpos humanos com uma atividade de ligação à proteína NR10. A sequência nucleotídica codificando para um anticorpo anti-NRIO obtido pelo método acima descrito ou outro semelhante, bem como a sua sequência de aminoácidos, podem ser obtidas por métodos conhecidos pelos especialistas na técnica. Os aminoácidos contidos nas sequências de aminoácidos descritas na invenção presente podem sofre modificação após a tradução (por exemplo, modificação da glutamina do terminal N a ácido piroglutâmico por piroglutamilação, bem conhecidas dos especialistas da técnica). Naturalmente, estas sequências com modificações de aminoácidos após a tradução também estão incluídas nas sequências de aminoácidos descritas na invenção presente.

Com base na sequência obtida do anticorpo anti-NRIO, pode preparar-se o anticorpo anti-NRIO, por exemplo, por técnicas de recombinação genética conhecidas dos especialistas na técnica. Em particular, pode construir-se um polinucleótido codificando para um anticorpo com base na sequência do anticorpo que reconheça NR10, inserir-se num vetor de expressão, e depois expressar-se em células hospedeiras adequadas (vejam-se por exemplo Co, M. S. et al. , J. Immunol. (1994) 152, 2968-2976; Better, M. e Horwitz, A. H., Methods Enzymol. (1989) 178, 476-496; Pluckthun, A. e Skerra, A., Methods Enzymol. (1989) 178, 497-515; Lamoyi, E., Methods Enzymol. (1986) 121, 652-663;

Rousseaux, J. et al., Methods Enzymol. (1986) 121, 663-669; Bird, R. E. e Walker, B. W., Trends Biotechnol. (1991) 9, 132-137).

Incluem-se nos vetores os vetores M13, os vetores pUC, os vetores pBR322, pBluescript, e pCR-Script. Em alternativa, quando se pretender subclonar e retirar cADN, os vetores incluem, por exemplo, pGEM-T, pDIRECT, e pT7, além dos vetores descritos acima. Os vetores de expressão são especialmente úteis quando se utilizam vetores para produzir os anticorpos da invenção presente. Por exemplo, quando se pretenda a expressão em E. coli tal como de JM109, DH5a, HB101, e XLl-Blue, os vetores de expressão não só têm que ter as caracterist icas descritas acima que permitem a amplificação do vetor em E. coli, mas também têm que ser portadores de um promotor que permita uma expressão eficiente em E. coli, por exemplo, o promotor lacZ (Ward et al., Nature (1989) 341, 544-546; FASEB J. (1992) 6, 2422-2427), o promotor araB (Better et al., Science (1988) 240, 1041-1043), o promotor T7 ou semelhantes. Incluem-se nestes vetores pGEX-5X-l (Pharmacia) , "QIAexpress system" (Qiagen), pEGFP, ou pET (neste caso, o hospedeiro é preferivelmente BL21 que expressa a ARN polimerase de T7) para além dos vetores descritos acima.

Os vetores podem conter sequências de sinalização para a secreção de anticorpos. A titulo de sequência de sinalização para a secreção de anticorpos, pode utilizar-se uma sequência de sinalização pelB (Lei, S. P. et al., J.

Bacteriol. (1987) 169, 4379) quando uma proteína for segregada para o periplasma de E. coli. 0 vetor pode ser introduzido nas células hospedeiras com cloreto de cálcio ou por métodos de eletroporação, por exemplo.

Para além dos vetores para E. coli, os vetores para produzir os anticorpos da invenção presente incluem vetores de expressão de mamíferos (por exemplo, pcDNA3 (Invitrogen), pEF-BOS (Nucleic Acids. Res. 1990, 18(17), p5322), pEF, e pCDM8), vetores de expressão derivados de células de insetos (por exemplo, o "sistema de expressão de baculovírus Bac-to-BAC" (Gibco-BRL) e pBacPAK8), vetores de expressão derivados de plantas (por exemplo, pMHl e pMH2), vetores de expressão derivados de vírus de animais (por exemplo, pHSV, pMV, e pAdexLcw), vetores de expressão retrovirais (por exemplo, pZIPneo), vetores de expressão de leveduras (por exemplo, "Pichia Expression Kit" (Invitrogen), pNVll, e SP-Q01), e vetores de expressão de Bacillus subtilis (por exemplo, pPL608 e pKTH50), por exemplo.

Quando se pretender a expressão em células animais tais como células CHO, COS, e NIH3T3, os vetores têm que possuir um promotor essencial para a expressão em células, por exemplo, promotor SV40 (Mulligan et ai., Nature (1979) 277, 108), promotor MMLV-LTR; promotor EFla (Mizushima et ai., Nucleic Acids Res. (1990) 18, 5322), e promotor CMV, e mais preferivelmente eles têm um gene para selecionar células transformadas (por exemplo, um gene de resistência a fármaco que permita a avaliação utilizando um agente (neomicina, G418, ou semelhantes). Incluem-se por exemplo nos vetores com estas caracteristicas, pMAM, pDR2, pBK-RSV, pBK-CMV, pOPRSV, e pOP13.

Além disto, pode utilizar-se o método seguinte para expressão estável de genes e amplificação de genes em células: introduz-se em células CHO deficientes num caminho de síntese de ácido nucleico um vetor (por exemplo, pSV2-dhfr (Molecular Cloning 2a edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)) que seja portador de um gene DHFR que compensa a deficiência, e amplifica-se o vetor utilizando metotrexato (MTX). Em alternativa, pode utilizar-se o método seguinte para uma expressão transiente de um gene: células COS com um gene que expresse o antigénio T de SV40 no seu cromossoma, recorrendo a um vetor (pcD e semelhantes) com uma origem de replicação de SV40. Também se podem utilizar origens de replicação derivadas do vírus polioma, do adenovirus, do vírus papiloma bovino (BPV), e semelhantes. Para amplificar o número de cópias do gene nas células hospedeiras, os vetores de expressão podem além disto ser portadores de marcadores de seleção tais como o gene de aminoglicósido transferase (ΑΡΗ), o gene da timidina quinase (TK), o gene da E. coli xantina-guanina fosforribosiltransferase (Ecogpt), e o gene da dihidrofolato redutase (dhfr).

Deste modo, existem métodos descritos para produzir os polipéptidos da invenção presente ou polipéptidos codificados por genes codificando para os polipéptidos da invenção presente, que incluem o passo de cultivar células hospedeiras contendo um vetor no qual haja sido introduzido um polinucleótido codificando para o polipéptido da invenção presente.

Mais em particular, existem métodos descritos para se produzirem os polipéptidos da invenção presente, que incluem os passos de: (a) se cultivar uma célula hospedeira contendo um vetor no qual haja sido introduzido um gene codificando para o polipéptido da invenção presente; e (b) se obter o polipéptido codificado pelo gene.

Os anticorpos tal como se descrevem neste documento obtidos pelos métodos descritos acima podem ser isolados de dentro das células hospedeiras ou de fora das células (do meio, ou semelhantes), e purificados até à homogeneidade. Podem isolar-se e purificar-se os anticorpos por métodos utilizados em rotina para isolar e para purificar anticorpos, e não existe nenhum limite para o tipo de método. Por exemplo, podem isolar-se e purificar-se os anticorpos selecionando e purificando adequadamente e combinando cromatografia em coluna, filtração, ultrafiltração, salgando, precipitando com solvente, extraindo com solventes, destilando, imunoprecipitando, por eletroforese sobre gel de SDS-poliacrilamida, isoeletrofocando, dialisando, recristalizando, e outros semelhantes.

Incluem-se nas cromatografias, por exemplo, cromatografia por afinidade, cromatografia de permuta iónica, cromatografia hidrofóbica, filtração de gel, cromatografia em fase reversa, e cromatografia de adsorção (Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Editores Daniel R. Marshak et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996) . Os métodos cromatográficos descritos acima podem ser conduzidos utilizando cromatografia liquida, por exemplo HPLC e FPLC. Incluem-se nas colunas que se podem utilizar para cromatografia de afinidade as colunas de proteína A e as colunas de proteína G. Incluem-se nas colunas de proteína A, por exemplo, Hyper D, POROS, e Sepharose FF (GE Amersham Biosciences). Estão descritos anticorpos que são muito purificados utilizando estes métodos de purificação. A atividade de ligação a NR10 dos anticorpos obtidos pode ser determinada por métodos que são conhecidos dos especialistas na técnica. Incluem-se nos métodos para determinar a atividade de ligação a antigénio de um anticorpo, por exemplo, ELISA (ensaio de imunossorvência ligada a um enzima), EIA (imunoensaio enzimático), RIA (radioimunoensaio), e o método do anticorpo fluorescente. Por exemplo, quando se utiliza um imunoensaio, adicionam-se amostras contendo anticorpo, tais como anticorpos purificados e sobrenadantes de cultura de células produtoras de anticorpo, a placas recobertas com antigénio. Adiciona-se um anticorpo secundário marcado com um enzima, tal como fosfatase alcalina, e incubam-se as placas. Depois de se lavarem, adiciona-se um substrato do enzima, tal como fosfato de p-nitrofenilo, e mede-se a absorvância para se avaliar a atividade de ligação ao antigénio.

Composições farmacêuticas A invenção presente também proporciona composições farmacêuticas incluindo o anticorpo mencionado a titulo de ingrediente ativo. Além disto, a invenção presente proporciona agentes terapêuticos para doenças inflamatórias que incluem o anticorpo mencionado acima a titulo de ingrediente ativo.

Na invenção presente, doença inflamatória refere-se a doenças com aspetos patológicos envolvidos em reações citológicas e histológicas que ocorrem nos vasos sanguíneos afetados e nos tecidos adjacentes em resposta a uma lesão ou a uma estimulação anormal provocada por agentes físicos, químicos ou biológicos (Stedman's Medical Dictionary, 5a Edição, MEDICAL VIEW CO., 2005). Em geral, incluem-se nas doenças inflamatórias a dermatite (dermatite atópica, dermatite crónica, e semelhantes), doenças inflamatórias dos intestinos (colite e semelhantes), asma, artrite (artrite reumatoide, osteoartrite, e semelhantes), bronquite, doenças autoimunes Th2, lúpus eritematoso sistémico, miastenia grave, GVHD crónica, doença de Crohn, espondilite deformante, dor lombar, gota, inflamação depois de uma cirurgia ou lesão, inchaços, neuralgia, laringofaringite, cistite, hepatite (esteatohepatite não alcoólica, hepatite alcoólica, e semelhantes), hepatite B, hepatite C, arteriosclerose, e prurido.

Incluem-se nos exemplos preferidos de doenças inflamatórias que são sujeitos da invenção presente a dermatite atópica, a dermatite crónica, o reumatismo, a osteoartrite, a asma crónica, e o prurido. A frase "inclui um anticorpo anti-NRIO a titulo de ingrediente ativo" significa incluindo um anticorpo anti-NRIO como pelo menos um dos ingredientes ativos, e não limita a proporção do anticorpo. Além disto, os agentes terapêuticos para doenças inflamatórias na invenção presente também podem incluir, em combinação com o anticorpo anti-NRIO mencionado acima, outros ingredientes que incrementem o tratamento de doenças inflamatórias.

Também se podem utilizar os agentes terapêuticos da invenção presente com finalidades preventivas.

Pode preparar-se o anticorpo anti-NRIO da invenção presente sob a forma de formulações seguindo os métodos habituais (veja-se, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Science, última edição, Mark Publishing

Company, Easton, EUA). Além disto, elas podem conter veículos e/ou aditivos aceitáveis do ponto de vista farmacêutico caso seja necessário. Por exemplo, elas podem conter tensioativos (por exemplo, PEG e Tween), excipientes, antioxidantes (por exemplo, ácido ascórbico) , agentes corantes, agentes saborizantes, conservantes, estabilizadores, agentes tamponizantes (por exemplo, ácido fosfórico, ácido cítrico, e outros ácidos orgânicos), agentes quelantes (por exemplo, EDTA), agentes de suspensão, agentes isotonificantes, aglomerantes, desintegrantes, lubrificantes, promotores de fluidez, e agentes corretivos. No entanto, sem se limitarem a estes, os agentes para evitar ou tratar doenças inflamatórias da invenção presente podem conter outros veículos habitualmente utilizados. Tais veículos incluem especificamente ácido silícico leve anidro, lactose, celulose cristalina, manitol, amido, carmelose cálcica, carmelose sódica, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, polivinilacetaldietilaminoacetato, polivinilpirrolidona, gelatina, triacilgliceróis de ácidos gordos de cadeia média, óleo de rícinos polioxietilenado 60, sacarose, carboximetilcelulose, amido de milho, e sal inorgânico. Os agentes também podem conter outros polipéptidos com pequena massa molecular, proteínas tais como albumina de soro, gelatina, e imunoglobulina, e aminoácidos tais como glicina, glutamina, asparagina, arginina, e lisina. Quando se prepara o anticorpo anti-NRIO como solução aquosa para injeção, o anticorpo anti-NRIO pode ser dissolvido numa solução isotónica contendo, por exemplo, soro salino fisiológico, dextrose, ou outros adjuvantes. Os adjuvantes podem incluir, por exemplo, D-sorbitol, D-manose, D- manitol, e cloreto de sódio. Além disto, podem utilizar-se concomitantemente agentes dissolventes apropriados, por exemplo álcoois (por exemplo, etanol), poliálcoois (por exemplo, propilenoglicol e PEG), e detergentes não iónicos (polissorbato 80 e HCO-50).

Caso seja necessário, podem encapsular-se anticorpos anti-NRIO em microcápsulas (microcápsulas feitas de hidroximetilcelulose, gelatina, poli(metacrilato de metilo), e outras semelhantes), e transformados em componentes de sistema coloidais de transporte de fármacos (lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas, e nanocápsulas) (por exemplo, veja-se "Remington's Pharmaceutical Science, 16a edição" &, Oslo Ed. (1980)) . Além disto, são conhecidos métodos para fabricar fármacos com libertação prolongada, e estes podem ser aplicados para anticorpos anti-NRIO (Langer et al.r J. Biomed. Mater. Res. (1981) 15, 167-277; Langer, Chem. Tech. (1982) 12, 98-105; Patente US N2 3.773.919; Pedido de

Patente Europeia (EP) N2 58.481; Sidman et al., Biopolymers (1983) 22, 47-56; EP 133.988).

Podem administrar-se as composições farmacêuticas da invenção presente quer por via oral, quer por via parentérica, mas elas são preferivelmente administradas por via parentérica. Em particular, administram-se os agentes a pacientes por injeção ou por administração percutânea. Incluem-se nas injeções, por exemplo, injeções endovenosas, intramusculares, e subcutâneas, para administração sistémica ou local. Podem administrar-se os agentes nos locais em que se pretenda suprimir a inflamação, ou em áreas rodeando esses locais, por infusão local, especificamente por injeção intramuscular. Podem selecionar-se adequadamente os métodos de administração consoante a idade e o estado do doente. Pode selecionar-se a dose para administração única, por exemplo, adentro da gama de 0, 0001 a 100 mg do ingrediente ativo por kg de massa corporal. Em alternativa, por exemplo, quando se administram os agentes a pacientes humanos, a dose do ingrediente ativo pode ser selecionada adentro da gama de 0,001 a 1.000 mg/kg de massa corporal. A dose para administração única contém preferivelmente, por exemplo, entre cerca de 0,01 e 50 mg/kg de massa corporal, do anticorpo da invenção presente. No entanto, a dose de um agente para evitar ou para tratar doenças inflamatórias da invenção presente não é limitada a estes exemplos.

[Exemplos]

Adiante neste documento, descrever-se-á a invenção presente relativamente a Exemplos, mas não se deve considerar que ela se limite a eles.

[Exemplo 1] Preparação de hibridomas

1.1. Preparação de plasmideos de NR10 humanos e de macaco cinamolgo para imunização com ADN

1.1.1. Preparação de vetores de expressão para hNRlO e para cynNRlO

Inseriu-se NR10 humana (sequência de nucleótidos, SEQ ID NO: 75; sequência de aminoácidos, SEQ ID NO: 76) no vetor de expressão pMacII, que expressa uma proteína sob ao controlo do promotor β-actina de murganho (WO 2005/054.467), para preparar um vetor de expressão para hNRIO. Do mesmo modo, construiu-se um vetor de expressão para cynNRlO a partir de NR10 de macaco cinomolgo (sequência de nucleótidos, SEQ ID NO: 65; sequência de aminoácidos, SEQ ID NO: 66).

1.1.2. Preparação do cartucho de ADN

Para se utilizar o vetor de expressão de hNRIO ou de cynNRlO preparado em 1.1.1 para imunização de murganhos com ADN, utilizou-se o Estojo de Cartucho de Pistola de Genes Helios (BIO-RAD) para produzir um cartucho de ADN para cada ADN que permite a imunização, com 1 pg de ADN de cada vez. 1.2. Preparação de hibridomas produzindo anticorpo anti-NRlO humana 1.2.1. Preparação de hibridomas utilizando murganhos imunizados com NR10 humana ou de macaco cinomolgo

Imunizaram-se dez murganhos Balb/c (fêmea; com seis semanas de idade no inicio da imunização; Charles River Laboratories Japão) com NR10 humana ou de macaco cinomolgo recorrendo ao seguinte processo. Para imunização primária, imunizaram-se os murganhos com o cartucho de ADN preparado com o vetor de expressão de hNRIO utilizando o Sistema Helios de Pistola de Genes (BIO-RAD). Passada uma semana, levou-se a cabo a imunização secundária pelo Sistema Helios de Pistola de Genes (BIO-RAD) utilizando o cartucho de ADN preparado com o vetor de expressão de cynNRIO. A terceira imunização e as subsequentes forma levadas a cabo a intervalos semanais utilizando alternadamente os vetores de expressão de hNRIO e de cynNRIO. Depois de se confirmar que o titulo do anticorpo contra NR10 humana no soro era elevado, administrou-se por via endovenosa uma proteína NR10 humana (domínio extracelular) (Exemplo de Referência 4) diluída com PBS (-) a 10 pg/animal, a título de imunização final. Quatro dias depois da imunização final fundiram-se células de baço de murganho com células de mieloma de murganho P3X63Ag8U.l (abreviadas como P3U1; ATCC CRL-1597) por um método convencional utilizando PEG1500 (Roche Diagnostics). Fez-se a cultura das células fundidas resultantes, isto é, hibridomas, em RPMI1640 com suplemento de 10 % de FBS (doravante abreviado, neste documento, como 10% FBS/RPMI1640). 1.2.2 . Seleção dos hibridomas

No dia seguinte ao da fusão, suspenderam-se as células fundidas num meio semi-sólido (StemCells), fazendo-se a sua cultura para seleção bem como colonização de hibridomas.

Passados nove ou dez dias da fusão, recolheram-se colónias de hibridoma e semearam-se cada uma delas num poço de uma placa de 96 poços contendo o meio de seleção HAT (10% FBS / RPMI1640, com 2 vol % de HAT 50 x concentrado (Dainippon Pharmaceutical) , e 5 vol % de BM-Condimed Hl (Roche Diagnostics)) . Passados três ou quatro dias de cultura, recolheu-se o sobrenadante de cultura de cada poço para se determinar a concentração em IgG de murganho no sobrenadante. Avaliaram-se os sobrenadantes de cultura nos quais se detetaram IgG de murganho quanto à sua atividade neutralizante utilizando uma linha de células humanas dependente de IL-31 (células hNRl0/hOSMR/BaF3; Exemplo de Referência 2), e obtiveram-se diversos clones que apresentavam atividade neutralizante de NR10 forte (Fig. 3) . Obtiveram-se clones que suprimiam o crescimento induzido por IL-31 humano de células de um modo dependente da concentração e que suprimem o crescimento induzido por IL-31 de macaco cinomolgo de células (cynNRl0/cynOSMR/BaF3; Exemplo de Referência 2) (Fig. 4) .

[Exemplo 2] Preparação de anticorpos quiméricos

Preparação de vetores de expressão para anticorpos quiméricos

Extraíram-se os ARN totais dos hibridomas utilizando os Mini Estojos RNeasy (QIAGEN), e sintetizaram-se os cADN a partir deles utilizando o Estojo de Amplificação de cADN SMART RACE (BD Biosciences). Isolaram-se os genes da região variável de anticorpos por PCR utilizando a ADN polimerase PrimeSTAR HS (TaKaRa), 10 x de Mistura A de Iniciador Universal ligado ao Estojo de Amplificação de cADN SMART RACE (BD Biosciences), e iniciadores concebidos para cada região constante de anticorpos (cadeia H, mlgGl-mot; cadeia L, mlgK-mot). Determinou-se a sequência de nucleótidos de cada fragmento de ADN isolado com o Sequenciador de ADN ABI PRISM 3730xL ou com o Sequenciador de ADN ABI PRISM 3700 DNA (Applied Biosystems), utilizando o Estojo BigDye Terminator Cycle Sequencing (Applied Biosystems) e seguindo o método descrito no manual de instruções apenso. Mostraram-se as sequências de aminoácidos determinadas para as regiões variáveis da cadeia H e da cadeia L nos anticorpos de murganho NS18, NS22, NS23, e NS33, respetivamente nas Figs. 1 e 2.

Cada um dos fragmentos resultantes das cadeias H e L foi submetido a PCR recorrendo à ADN Polimerase PrimeSTAR HS (TaKaRa) e os conjuntos de iniciadores ilustrados na Tabela 1. Ligaram-se os fragmentos amplificados resultantes com a região constante (respetivamente γΐ ou γ2 humanas, e κ humana) , e depois inseriram-se num vetor de expressão de célula animal. Determinou-se a sequência de nucleótidos de cada fragmento de ADN com o Sequenciador de ADN ABI PRISM 3730xL ou com o Sequenciador de ADN ABI PRISM 3700 (Applied Biosystems), utilizando o Estojo BigDye Terminator Cycle Sequencing (Applied Biosystems) consoante o método descrito no manual de instruções apenso.

Preparação de anticorpos quiméricos

Suspendeu-se a linha de células de cancro do rim embriónica humana HEK293H (Invitrogen) em DMEM (Invitrogen) com suplemento de 10 % de soro fetal de bovino (Invitrogen), e 10 mL de células foram semeados em placas para células aderentes (com diâmetro de 10 cm; CORNING) a uma densidade de células de 6 x IO5 células/mL. Incubaram-se as células numa incubadora de C02 (37 °C, 5 % de C02) durante um dia e uma noite inteiros. Em seguida, removeu-se o meio por aspiração, e adicionaram-se 6, 9 mL de meio CHO-S-SFMII (Invitrogen). Adicionou-se meio CHO-S-SFMII à mistura de ADN de plasmideos preparada (13,8 pg ao todo) a um volume de 700 pL. Isto foi misturado com 20,7 pL de polietilenoimina a 1 pg/mL (Polysciences Inc.), e deixou-se repousar à temperatura ambiente durante 10 minutos. Adicionou-se a solução às células em cada placa. Incubaram-se as células numa incubadora de C02 (37 °C, 5 % de C02) durante quatro ou cinco horas. Em seguida, adicionaram-se 6,9 mL de meio CHO-S-SFMII (Invitrogen), e incubaram-se as células numa incubadora de C02 durante três a quatro dias. Recolheram-se os sobrenadantes de cultura e depois centrifugou-se (a cerca de 2.000 g, cinco minutos, temperatura ambiente) para remover sólidos. Filtraram-se os sobrenadantes através de um filtro de 0,22 pm MILLEXO-GV (Millipore) . Armazenaram-se as amostras a 4°C até à sua utilização. Purificaram-se os anticorpos dos sobrenadantes utilizando Proteína G Sepharose (Amersham Biosciences) . Concentraram-se os anticorpos purificados com Amicon Ultra 15 (Millipore), e substituiu-se o solvente por PBS (-) contendo 0,05 % de NaN3 utilizando colunas PD-10 de dessalinização (Amersham Biosciences). Mediu-se a absorvância a 280 nm com um Espectrofotómetro ND-1000 (NanoDrop), e determinaram-se as concentrações pelo método de Pace et al. (Protein Science (1995) 4: 2411-2423).

Avaliação da atividade de NS22 quimérico

Avaliou-se a atividade do hIL-31 neutralizante utilizando a linha de células hNR10/hOSMR/BaF3, que cresce de um modo dependente da dose de hIL-31, tal como se descreve adiante.

Prepararam-se células hNRl0/hOSMR/BaF3 a 1,5 x 105 células/mL em meio RPMI1640 (GIBCO) contendo 10 % de FBS (MOREGATE) e 1 % de Penicilina-Estreptomicina (Invitrogen). Adicionou-se hIL-31 (R&D Systems) a uma alíquota das células, a uma concentração final de 4 ng/mL (IL-31(+); conc. final: 2 ng/mL). Utilizou-se o restante da suspensão de células como IL-31(-). Ajustou-se o NS22 purificado a 2 pg/mL utilizando o meio, e prepararam-se oito diluições em série a uma taxa de diluição constante de 1:3 (conc. final: 1 pg/ml ou menos) . Adicionou-se a cada poço 50 pL da suspensão de células e 50 pL da diluição de NS22 apropriada (γΐ, κ humana), em cada poço de uma placa de 96 poços com fundo chato (CORNING), e fez-se a cultura das células numa incubadora sob 5 % de CO2 a 37 °C durante dois dias. Depois da cultura, adicionaram-se a cada poço 20 pL de uma mistura de iguais quantidades de Cell Counting Kit-8 (Dojindo) e de PBS, e mediu-se a absorvância (450 nm/620 nm), (TECAN, SUNRISE CLASSIC). Deixou-se continuar a reação durante duas horas na incubadora sob 5 % de C02 a 37°C, e mediu-se de novo a absorvância. Apresentou-se a atividade neutralizante de NS22 como uma taxa de inibição utilizando urn valor obtido subtraindo o valor à hora zero do valor às 2 horas. 0 resultado mostrava que NS22 suprimia o crescimento induzido por IL-31 da linha de células hNRl0/hOSMR/BaF3, de um modo dependente da concentração. Isto demonstra que a NS22 tem uma atividade neutralizante contra a sinalização da IL-31 humana (Fig. 5).

Avaliou-se a atividade neutralizante de IL-31 tal como se descreve adiante recorrendo a uma linha de células DU145 (linha de células de cancro da próstata humano), na qual a produção de IL-6 é induzida após estimulação por IL-31 .

Prepararam-se células DU145 a 2,5 x 105 células/mL em MEM (Invitrogen) contendo 10 % de FBS (MOREGATE), 2 mmol/L de L-glutamina (Invitrogen), e 1 mmol/L de piruvato de sódio (SIGMA), e distribuíram-se alíquotas de 200 pL pelos poços de placas com 48 poços (CORNING). Incubaram-se as células a 37°C sob 5 % de C02 de um dia para o outro. Diluiu-se NS22 purificada quimérica (γΐ, k humanas) a 100 pg/mL com MEM contendo 10 % de FBS, 2 mmol/L de L-glutamina, e piruvato de sódio. Utilizando esta solução, prepararam-se seis diluições em série a uma taxa de diluição constante de 1:5. Combinaram-se as diversas diluições com interleuquina-31 humana a 100 ng/mL (R&D Systems), a uma razão de 1:1, e adicionou-se uma alíquota de 50 pL a cada poço. Ao fim de dois dias de cultura a 37°C sob 5 % de C02, determinou-se a concentração em IL-6 no sobrenadante de cada cultura utilizando o estojo DuoSet ELISA Development (R&D Systems). Avaliou-se a atividade neutralizante de NS22 determinando a taxa de inibição (%). Em particular, assumindo que a concentração em IL-6 na ausência de IL-31 (A) como representando a atividade inibidora máxima (100 % de inibição) e a concentração em IL-6 na presença de IL-31 e sem NS22 (B) como ausência de atividade inibidora (0 % de inibição), determinou-se a concentração em IL-6 na presença de IL-31 e de NS22 (C) de acordo com a fórmula seguinte:

Taxa de inibição (%) = (B-C)/(B-A) x 100 O resultado mostrava que NS22 suprimia a produção de IL-6 induzida por IL-31 na linha de células DU145, de um modo dependente da concentração, e portanto demonstrava que NS22 possuía uma atividade neutralizante contra a sinalização de IL-31 humana (Fig. 6).

Avaliação da competição do anticorpo anti-NRlO quimérico com IL-31

Marcou-se IL-31 humana (R&D Systems) com FMAT Blue Monofunctional Reactive Dye (Applied Biosystems). Misturaram-se 100 pL de hIL-31 prepara a 0,5 mg/mL utilizando tampão 50 mM de fosfato de sódio (pH 8,0) com 5,25 pL de 25 nmoles de FMAT Blue dissolvidas em DMSO (Junsei) . Agitou-se num vórtex, e deixou-se a mistura repousar à temperatura ambiente durante 15 minutos. Terminou-se a reação de conjugação do FMAT Blue com hIL-31 adicionando 5 pL de Tris-HCl 1 M (pH 7,4) e 1,1 pL de Tween 20 a 10 %, e depois separaram-se hIL-31 marcado com FMAT Blue e FMAT Blue por reagir por uma filtração através de gel utilizando uma coluna Superdex 75 (GE Healthcare, 17-0771-01) com uma solução reveladora de 0,1 % de

Tween2 0/PBS.

Avaliaram-se os anticorpos quanto à atividade da inibição da ligação IL-31/NR10 utilizando células CHO expressando hNRIO, tal como se descreve adiante.

Diluíram-se NS22 e NA633 (cujas regiões constantes são γΐ, κ) a uma concentração apropriada utilizando tampão de Ensaio (10 mM em HEPES, 140 mM em NaCl, 2,5 mM em CaCl2, 3 mM em MgCl2, com 2 % de FBS, 0,01 % de NaN3) , e prepararam-se diversas diluições em série a uma taxa de diluição constante de 1:2. Adicionaram-se as diluições a 40 pL/poço a placas (Placas FMAT de 96 Poços; Applied Biosystems). Em seguida, diluiu-se hIL-31 marcado com FMAT Blue 400 vezes em tampão de ensaio e adicionou-se a 20 pL/poço. Por último, ajustaram-se as suspensões de células a 2,5 x 105 células/mL em tampão de Ensaio e adicionaram-se a 40 pL/poço (no final 1 x 104 células/poço) . Duas horas depois da adição das células, determinou-se a fluorescência (FL1) utilizando o Sistema de Deteção Celular 8200 (Applied Biosystems). O resultado mostrava que a NS22 inibia a ligação hIL-31/hNR10 de um modo dependente da dose, e demonstrava que a sua atividade era superior à de NA633 (Fig. 7).

[Exemplo 3] Competição de um anticorpo anti-NRlO contra NR10

Marcou-se o anticorpo NS22 purificado a partir de um sobrenadante de cultura de hibridoma com FMAT Blue (Applied Biosystems, 4328853) . Misturaram-se 170 pL de NS22 preparado a 1 mg/mL em PBS com 17 pL de solução 1 M de NaHCCp e com 3,4 pL de FMAT Blue (17 nmoles) dissolvidos em DMSO. Depois de agitar num vórtex, deixou-se a mistura repousar à temperatura ambiente durante 30 minutos. Terminou-se a reação de conjugação do FMAT Blue com o NS22 adicionando 8 pL de Tris-HCl 1 M (pH 7,4) e 1,9 pL de Tween 20 a 1 %, e depois separaram-se o NS22 marcado com FMAT Blue (FMAT Blue-NS22) e o FMAT Blue por reagir recorrendo a uma filtração sobre gel utilizando uma coluna Superdex 75 (GE Healthcare, 17-0771-01) com solução reveladora de 0,01 % de Tween 20/PBS.

Examinou-se cada anticorpo quanto à inibição da ligação de FMAT Blue-NS22 preparado a células CHO expressando hNRIO (Exemplo de Referência 3) utilizando o Sistema de Deteção Celular 8200 (Applied Biosystems, 4342920). Adicionaram-se os anticorpos quiméricos anti-NR10 (cuja região constante é γΐ, k) a diversas concentrações a cada poço contendo 7.500 células e 8,8 x 10~2 pg/mL de FMAT Blue-NS22. Deixaram-se as células em repouso no escuro durante quatro horas, e depois mediu-se o sinal fluorescente proveniente do FMAT Blue ligado às células. Levou-se a cabo a reação em Hepes 10 mM com KOH contendo

CaCl2 2,5 mM, MgCl2 3 mM, NaCl 140 mM, 2 % de FBS, e 0,01 % de NaNCd. Mostra-se o resultado na Fig. 8. 0 valor de fluorescência FL1, que representa a ligação das células FMAT Blue-NS22 a células expressando NR10, diminuía com o aumento da concentração em anticorpo NS22 ou NS23. Por outro lado, FL1 pouco era afetado pelo aumento de concentração em anticorpo NA633 (Exemplo de Referência 6) (Fig. 8) .

[Exemplo 4] Humanização do anticorpo NS22

Seleção de cada uma das sequências do quadro

Compararam-se as regiões variáveis do anticorpo NS22 murino com as sequências da linha de gérmen humana. Resumem-se as sequências FR utilizadas para humanização na Tabela 2. Determinaram-se as CDR e as FR com base na numeração de Rabat. As sequências das regiões variáveis humanizadas da cadeia H são constituídas por FR1, FR2, FR3_1, e FR4, e constituídas por FR1, FR2, FR3_2, e FR4, que se listam na Tabela 2, e são designadas respetivamente HO-VH (SEQ ID NO: 50) e Hl-VH (SEQ ID NO: 112). Entretanto, a sequência da cadeia L constituída por FR1, FR2, FR3, e FR4 é designada LO (SEQ ID NO: 52).

Preparação da região variável para o NS22 humanizado HOLO

Conceberam-se oligo ADN sintéticos para cada uma das cadeias H e L para se construírem as regiões variáveis de NS22 humanizado em que as CDR de NS22 são enxertadas nas FR utilizadas para a humanização. Misturaram-se os oligo ADN sintéticos respetivos, e depois submeteram-se a uma PCR de montagem para construir um gene codificando para a região variável de NS22 humanizado. A PCR de montagem foi levada a cabo utilizando KOD-Plus (TOYOBO) e respeitando as seguintes condições. Aqueceu-se a 942C uma mistura reacional contendo 10 pmol de oligo ADN sintéticos e o tampão de PCR apenso, os dNTP, MgS04, e KOD-Plus, durante cinco minutos. Submeteu-se então a mistura a dois ciclos de PCR a 94°C durante minutos, 55°C durante dois minutos, e 68°C durante dois minutos. Em seguida, adicionaram-se 10 pmol de cada um de entre um iniciador ao qual foi adicionado um local de restrição bem como a sequência Kozak ao terminal 5' da região variável, e um iniciador ao qual foi adicionado um local de restrição ao terminal 3' da região variável, e submeteu-se a 35 ciclos de PCR a 94°C durante 30 segundos, 55°C durante 30 segundos, e 68°C durante um minuto, para se obter um fragmento amplificado. Clonou-se este fragmento amplificado resultante num vetor de Clonagem TOPO TA (TOYOBO), e determinou-se a sua sequência de nucleótidos por sequenciação. Combinaram-se as regiões variáveis construídas com as regiões constantes para se prepararem HO-SKSC (SEQ ID NO: 54) e LO (SEQ ID NO: 56) . A construção resultante foi inserida num vetor de expressão capaz de expressar o gene inserido em células animais. Determinou-se a sequência de nucleótidos de cada fragmento de ADN utilizando o Estojo BigDye Terminator Cycle Sequencing (Applied Biosystems) com um Sequenciador de ADN ABI PRISM 3730xL ou com urn Sequenciador de ADN ABI PRISM 3700 (Applied Biosystems) seguindo o método descrito no manual de instruções apenso.

Preparação da região variável para NS22 Hl humanizado

Gerou-se Hl-SKSC (SEQ ID NO: 130) substituindo a glutamina (E) na posição com a numeração de Rabat 73 em FR3 de HO-SKSC (SEQ ID NO: 54) por lisina (K) . Preparou-se o mutante utilizando o Estojo comercialmente disponível QuikChange Site-Directed Mutagenesis (Stratagene) consoante o manual de instruções apenso.

Expressão do anticorpo transformado em IgG

Levou-se a cabo a expressão do anticorpo pelo método descrito adiante. Suspendeu-se a linha de células HEK293H derivada de células de cancro renal fetal humano (Invitrogen) em DMEM (Invitrogen) contendo 10 % de soro fetal de bovino (Invitrogen), e semearam-se 10 mL de células a uma densidade de 5-6 x 105 células/mL em placas para células aderentes (com 10 cm de diâmetro; CORNING). Incubaram-se as células numa incubadora sob C02 (37°C, 5 % de C02) durante um dia e uma noite inteiros. Em seguida, removeu-se o meio por aspiração, e adicionaram-se às células 6,9 mL de meio CHO-S-SFMII (Invitrogen). Misturou- se a mistura de ADN de plasmídeos preparada (13,8 pg ao todo) com 20,7 pL de poliet ilenoimina a 1 pg/mL (Polysciences Inc.) e 690 pL de meio CHO-S-SFMII, e deixou-se em repouso à temperatura ambiente durante 10 minutos. Adicionou-se a mistura às células de cada placa, e incubaram-se as células numa incubadora de CCg (5 % de CCg, 37°C) durante quatro a cinco horas. Em seguida, adicionaram-se 6,9 mL de meio CHO-S-SFMII (Invitrogen), e incubaram-se as células numa incubadora de CCp durante três dias. Recolheu-se o sobrenadante da cultura e centrifugou-se (cerca de 2.000 g, cinco minutos, temperatura ambiente) para remover as células. Esterilizou-se então o sobrenadante por filtração através de um filtro de 0,22 pm MILLEX®-GV (Millipore) . Armazenou-se cada uma das amostras a 4°C até se utilizar.

Purificação de anticorpo transformado em IgG

Suspenderam-se 50 pL de rProteina A Sepharose™ Fast Flow (Amersham Biosciences) em TBS e adicionaram-se ao sobrenadante de cultura obtido, misturando-se por inversão a 4°C durante quatro horas ou mais. Transferiu-se a solução para um recipiente de um filtro de 0,22 pm de Ultrafree®-MC (Millipore) . Depois de três lavagens com 500 pL e TBS, suspendeu-se resina rProteina A Sepharose™ em 100 pL de solução aquosa 50 mM de acetato de sódio (pH 3,3), e deixou-se repousar durante três minutos para eluir o anticorpo. Neutralizou-se imediatamente a solução por adição de 6,7 pL de Tris-HCl 1,5 M (pH 7,8). Eluíu-se por duas vezes e obtiveram-se 200 pL de anticorpo purificado. Submeteram-se 2 pL da solução contendo o anticorpo ao Espectrofotómetro ND-1000 (NanoDrop)(Thermo Scientific NanoDrop™l000 Spectrophotometer (Thermo Scientific)) ou submeteram-se 50 pL ao Espectrofotómetro DU-600 (BECKMAN) para se medir a absorvância a 280 nm, e calculou-se a concentração em anticorpo pelo método de Pace et ai., (Protein Science (1995) 4: 2411-2423).

Medição da competição com IL-31 utilizando FMAT

Avaliaram-se os anticorpos quanto à sua atividade na inibição da ligação de IL-31/NR10, utilizando células CHO expressando hNRIO tal como se descreve adiante. Diluiu-se o anticorpo quimérico NS22 bem como NS22_H0L0 (cadeia H, HO-SKSC/SEQ ID NO: 54; cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56) a uma concentração apropriada utilizando tampão de Ensaio (10 mM em HEPES, 140 mM em NaCl, 2,5 mM em CaCl2, 3 mM em MgCl2, com 2 % de FBS, 0,01 % de NaN3, pH 7,4), e prepararam-se mais oito diluições em série a uma taxa de diluição comum de 1:2. Adicionaram-se as diluições a 40 pL/poço a placas (Placas FMAT de 96 Poços, Applied Biosystems). Em seguida, diluiu-se hIL-31 marcado com FMAT Blue 400 vezes com tampão do Ensaio, e adicionou-se a 20 pL/poço. Por último, ajustou-se uma suspensão de células a 2,5 x 105 células/mL com tampão de Ensaio e adicionou-se a 40 pL/poço (no final 1 x 104 células/poço). Duas horas depois da adição das células, mediu-se a fluorescência (FL1) utilizando o Sistema de Deteção Celular 8200 (Applied Biosystems). 0 resultado mostrava que, tal como se ilustra na Fig. 9, os anticorpos NS22 humanizados HOLO (cadeia H, H0-SKSC/SEQ ID NO: 54; cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56), e H1L0 (cadeia H, Hl-SKSC/SEQ ID NO: 130; cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56) exibiam uma atividade de competição comparável à do anticorpo quimérico, sugerindo que tanto HOLO como H1L0 são anticorpos humanizados anti-recetor de IL-31. Além disto, considera-se que as FR utilizadas para o HOLO e para o H1L0 podem ser utilizadas para humanização.

Deste modo, todas as mutações de CDR descritas nos Exemplos adiante neste documento podem ser introduzidas tanto em HO como em Hl.

[Exemplo 5] Efeito de diminuição da heterogeneidade das novas regiões constantes M14 e M58 em anticorpo humanizado anti-recetor de IL31

Tal como se mostra nos Exemplos de Referência 7 a 9, foi demonstrado que a transformação da região constante de IgG2 para M14 ou para M58 no anticorpo huPMl, um anticorpo humanizando anti-recetor de IL-6, poderia diminuir a heterogeneidade derivada da região charneira de IgG2 sem perda de estabilidade. Deste modo, também se testaram anticorpos humanizados anti-recetor de IL-31 para se avaliar se era possível diminuir a heterogeneidade transformando-se as suas regiões constantes da de IgG2 de tipo selvagem para M14 ou para M58.

Utilizaram-se H0-M14, H0-M58, HO-IgGl, e H0-IgG2, que foram gerados combinando IgGl (SEQ ID NO: 60), IgG2 (SEQ ID NO: 132), M14 (SEQ ID NO: 129) e M58 (SEQ ID NO: 128) gerados nos Exemplos de Referência 8 e 9, com a região variável da cadeia H HO (HO-VH/SEQ ID NO: 50) do anticorpo humanizado anti-recetor de IL-31 gerado no Exemplo 4, a título de cadeias H, e utilizou-se LO (LO/SEQ ID NO: 56) produzida no Exemplo 4 a título de uma cadeia L, para gerar HOLO-IgGl (cadeia H, HO-IgGl/SEQ ID NO: 133; cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56), H0L0-IgG2 (cadeia H, H0-IgG2/SEQ ID NO: 134; cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56), H0L0-M14 (cadeia H, H0-M14/SEQ ID NO: 135; cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56), e H0L0-M58 (cadeia H, H0-M58/SEQ ID NO: 136; cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56) . Expressou-se cada um dos anticorpos e purificou-se, pelo método descrito no Exemplo 4.

Avaliou-se a heterogeneidade por cromatografia de permuta catiónica. Avaliaram-se os anticorpos preparados quanto à heterogeneidade utilizando uma coluna ProPac WCX-10 (Dionex) , acetato de sódio 20 mM (pH 5,0) como fase móvel A, e acetato de sódio 20 mM/NaCl 1 M (pH 5,0) como fase móvel B, com um caudal e um gradiente apropriados. Ilustra-se o resultado da avaliação por cromatografia e permuta catiónica (IEC) na Fig. 10.

Tal como se vê na Fig. 10, a heterogeneidade foi aumentada por transformação da região constante de IgGl para IgG2 no anticorpo anti-recetor de IL-31, e pode diminuir-se a heterogeneidade por transformação da região constante para M14 ou para M58, em qualquer anticorpo.

[Exemplo 6] Efeito de melhoria da farmacocinética da nova região constante M58 em anticorpos anti-recetor de IL-31

Tal como se mostra no Exemplo de Referência 9, verificou-se que a transformação da região constante de IgGl em M58 num anticorpo huPMl anti-recetor de IL-6 melhorava a sua atividade de ligação a FcRn humana bem como a farmacocinética em murganhos transgénicos com FcRn humana. Deste modo, também se testaram anticorpos anti-recetor de IL-31 para se avaliar se a transformação da região constante em M58 melhorava a sua farmacocinética.

Avaliaram-se HOLO-IgGl (cadeia H: HO-IgGl/SEQ ID NO: 133; cadeia L: LO/SEQ ID NO: 56) e H0L0-M58 (cadeia H: H0-M58/SEQ ID NO: 136; cadeia L LO/SEQ ID NO: 56) preparados tal como se descreveu nos Exemplos 4 e 5 quanto à sua atividade de ligação a FcRn humana pelo método descrito no Exemplo de Referência 9. 0 resulto está listado na Tabela 3.

Tal como se mostra na Tabela 3, a transformação da região constante de IgGl a M58 também melhorou a atividade de ligação a FcRn humana do anticorpo HOLO anti-recetor de IL-31 tal como no anticorpo hPMl anti-recetor de IL-6. Isto sugere que a transformação da região constante de IgGl para M58 pode melhorar a farmacocinética do anticorpo anti-recetor de IL-31 em seres humanos.

[Exemplo 7] Identificação dos locais de mutação diminuindo o ponto isoelétrico

Produção de mutantes

Produziu-se cada mutante pelo método descrito no Exemplo 4 ou por PCR de montagem. No método de PCR de montagem, sintetizam-se ADN com base nas sequências direta e reversa incluindo um local alterado. 0 ADN oligo direto incluindo um local alterado e o ADN oligo reverso ligando-se ao vetor no qual se havia inserido o gene que se pretende alterar foram combinados, e combinaram-se ADN oligo reverso incluindo um local alterado e ADN oligo direto ligando-se ao vetor no qual se havia inserido o gene que se pretende alterar. Levou-se a cabo PCR utilizando PrimeSTAR (Takara) para se produzirem fragmentos 5'-terminal e 3'-terminal incluindo o local alterado. Montaram-se os dois fragmentos por PCR de montagem para se produzir cada mutante. Inseriu-se o mutante produzido num vetor de expressão capaz de expressar o gene a inserir em células animais. Determinou-se a sequência de nucleótidos do vetor de expressão resultante por um método conhecido dos especialistas na técnica. Produziram-se anticorpos e purificaram-se pelo método descrito no Exemplo 4.

Identificação dos locais de mutação

Para melhorar a farmacocinética de HOLO (Cadeia H, HO-SKSC/SEQ ID NO: 54; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56), examinaram-se locais alterados capazes de diminuir o ponto isoelétrico da região variável. Um exame dos diversos locais de mutação nas regiões variáveis permitiu prever a partir do modelo estrutural tridimensional locais de mutação revelados que diminuiriam o ponto isoelétrico das regiões variáveis sem diminuir significativamente a sua ligação a NR10. Estes estão resumidos na Tabela 4 (Hp5-VH/SEQ ID NO: 137, Hp7-VH/SEQ ID NO: 138, Hp8-VH/SEQ ID NO: 139, Hp6-VH/SEQ ID NO: 140, Hp9-VH/SEQ ID NO: 141, Hpl-VH/SEQ ID NO: 142, Hpl3-VH/SEQ ID NO: 143, Lpl-VL/SEQ ID NO: 144, Lp2-VL/SEQ ID NO: 145, Lp3-VL/SEQ ID NO: 146, Lp4-VL/SEQ ID NO: 147, Lp7-VL/SEQ ID NO: 148, Lp5-VL/SEQ ID NO: 149, Lp6-VL/SEQ ID NO: 150) . Produziu-se e purificou-se cada variante pelo método descrito no Exemplo 4.

Testaram-se as diversas variantes quanto à sua atividade de inibição da ligação hIL-31/hNR10, utilizando FMAT. Levou-se a cabo o teste seguindo o método tal como descrito no Exemplo 4. Tal como se ilustra na Fig. 11, a atividade de competição de cada variante não sofria grande diminuição em comparação com a de H0L0.

0 asterisco (*) na Tabela 4 acima indica um local que não era relevante para o ponto isoelétrico mas era alterado para transformação numa sequência humana.

Incluem-se nos exemplos dos anticorpos NS22 humanizados cujo ponto isoelétrico foi reduzido através da combinação destas alterações Hp3Lpl5 (Cadeia H: Hp3- SKSC/SEQ ID NO: 151; Cadeia L: Lpl5/SEQ ID NO: 152) .

Compararam-se entre Hp3Lpl5 e HOLO a afinidade para NR10, o ponto isoelétrico, e a retenção de plasma em murganhos.

Medição da afinidade

Determinou-se a afinidade de cada anticorpo para NR10 pelo método descrito no Exemplo de Referência 10. O resultado da medição da afinidade está listado na Tabela 5. Verificou-se que a afinidade de Hp3Lpl5 era quase a mesma que a de HOLO.

Medição do ponto isoelétrico

Analisaram-se os diversos anticorpos por focagem isoelétrica para avaliar alterações do ponto isoelétrico do anticorpo todo devido às alterações de aminoácidos as suas regiões variáveis. Levou-se a cabo pelo seguinte método a focagem isoelétrica.

Inchou-se gel Phast-Gel Dry IEF (Amersham Biosciences) em Phastsystem Cassette (Amersham Biosciences) durante cerca de 30 minutos utilizando a solução para inchar que se mostra adiante.

Água MilliQ 1,5 mL

Pharmalyte 5-8 para IEF (Amersham Biosciences) 100 pL

Levou-se a cabo uma eletroforese em PhastSystem (Amersham Biosciences) utilizando o gel inchado de acordo com o programa indicado adiante. Carregaram-se as amostras sobre o gel no Passo 2. Utilizou-se o Estojo de Calibração para pi (Amersham Biosciences) a titulo de marcador de pi.

Passo 1: 2000 V 2,5 mA 3,5 W 15°C 75 Vh

Passo 2: 200 V 2,5 mA 3,5 W 15°C 15 Vh

Passo 3: 2000 V 2,5 mA 3,5 W 15°C 410 Vh

Depois da eletroforese, fixou-se o gel com 20 % de TCA, e depois contrastou-se com prata utilizando o Estojo de Contrastação com Prata, Proteína (Amersham Biosciences), seguindo o protocolo apenso ao estojo. Depois da contrastação, calculou-se o ponto isoelétrico da amostra (o anticorpo inteiro) a partir dos pontos isoelétricos conhecidos dos marcadores de pi. 0 resultado das medições de pontos isoelétricos por focagem isoelétrica mostrava que o ponto isoelétrico do HOLO era de cerca de 7,8, e que o ponto isoelétrico do Hp3Lpl5 era de cerca de 5,5, mostrando que o ponto isoelétrico do Hp3Lpl5 era menor em cerca de 2,3 em comparação com o de HOLO. Quando se calculou o ponto isoelétrico teórico da região variável VH/VL usando o GENETYX (GENETYX CORPORATION), os pontos isoelétricos das regiões variáveis de HOLO e de Hp3Lpl5 eram respetivamente 7,76 e 4,63. Portanto, o ponto isoelétrico teórico de Hp3Lpl5 era cerca de 3,13 menor do que o de HOLO.

Avaliação da farmacocinética do anticorpo com menor ponto isoelétrico utilizando murganhos

Para avaliar a retenção no plasma de Hp3Lpl5, comparou-se um anticorpo modificado com ponto isoelétrico menor, compararam-se a retenção no plasma de HOLO e de Hp3Lpl5 em murganhos normais. Administrou-se por via endovenosa uma única dose de HOLO ou de Hp3Lpl5 a 1 mg/kg a murganhos (C57BL/6J, Charles River Japão, Inc.) para comparar a evolução da concentração no plasma ao longo do tempo. Determinaram-se as concentrações no plasma por ELISA. Dispensaram-se concentrações adequadas de uma amostra de calibração e de amostras de plasma em teste por imunoplacas (Nunc-Immuno Plate, MaxiSorp (Nalge Nunc International)) revestidas com anticorpo IgG anti-humano (específicas para Fc) (Sigma). Deixaram-se as amostras repousar à temperatura ambiente durante uma hora. Depois de reagirem com IgG-ALP de Cabra anti-humano (Sigma) à temperatura ambiente durante uma hora, levou-se a cabo uma reação de desenvolvimento de cor utilizando o Sistema de Substratos de Fosfatase BluePhos Microwell (Kirkegaard & Perry Laboratories) como substrato. Mediu-se a absorvância a 650 nm com um leitor de microplacas. Determinaram-se as concentrações no plasma com base na absorvância da curva de calibração utilizando o programa analítico SOFTmax PRO (Molecular Devices).

Calcularam-se os parâmetros farmacocinéticos (AUC e expulsão do sistema (CL)) a partir dos dados acerca da evolução da concentração no plasma ao longo do tempo utilizando o programa de análise de farmacocinética WinNonlin (Pharsight). Listam-se os parâmetros na Tabela 6. A AUC e a expulsão do sistema de Hp3Lpl5 após a administração endovenosa aumentaram respetivamente em cerca de 14 % e diminuíram em cerca de 12 %, em comparação com os de H0L0. Deste modo, demonstrou-se que o Hp3Lpl5, no qual o ponto isoelétrico do H0L0 foi diminuído, tem melhor farmacocinética.

[Exemplo 8] Efeito de combinações de região variável e região constante sobre a atividade biológica

Para se avaliarem os efeitos de regiões constantes diferentes sobre a atividade biológica, produziram-se as seguintes variantes.

Combinaram-se as regiões constantes SKSC (SEQ ID NO: 62) e M58 (SEQ ID NO: 128), preparadas nos Exemplos de Referência 7 e 9, com Hp3 (Hp3-VH/SEQ ID NO: 167), uma região variável preparada no Exemplo 7, para se produzirem Hp3-M58 (SEQ ID NO: 240) e Hp3-SKSC (SEQ ID NO: 151) como Cadeias H. Combinaram-se as cadeias H preparadas com Lpl5 (Lpl5/SEQ ID NO: 152), uma Cadeia L preparada no Exemplo 7, para se produzir Hp3Lpl5-SKSC (Cadeia H, Hp3-SKSC/SEQ ID NO: 151; Cadeia L, Lpl5/SEQ ID NO: 152) bem como Hp3Lpl5-M58 (Cadeia H, Hp3-M58/SEQ ID NO: 240; Cadeia L, Lpl5/SEQ ID NO: 152) . Expressou-se e purificou-se cada anticorpo pelo método descrito no Exemplo 4.

Avaliaram-se os anticorpos produzidos tal como se descreveu acima, H0L0-SKSC (Cadeia H, HO-SKSC/SEQ ID NO: 54; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56) que se prepararam com a região constante SKSC (SEQ ID NO: 62) descrita no Exemplo de Referência 7, e H0L0-M58 (Cadeia H, H0-M58/SEQ ID NO: 136; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56) bem como H0L0-IgG2 (Cadeia H, H0-IgG2/SEQ ID NO: 134; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56) preparado no Exemplo 5, quanto à sua atividade biológica, pelo método descrito no Exemplo 2 utilizando BaF/NRIO. Resumem-se os resultados na Fig. 18.

Tal como se ilustra na Fig. 18, não se detetou nenhuma diferença significativa na atividade biológica entre as regiões constantes. Uma vez que a atividade biológica não era afetada quando se combinavam as duas regiões variáveis HO e Hp3 com cada região constante, a combinação de regiões variáveis futuramente criadas com qualquer região constante não resultaria numa alteração da atividade biológica.

[Exemplo 9] Identificação dos locais de mutação suprimindo a degradação num estudo de aceleração térmica

Os anticorpos utilizados em fármacos apresentam heterogeneidade embora sejam anticorpos monoclonais obtidos a partir de clones derivados de células produzindo um único anticorpo. Sabe-se que esta heterogeneidade dos anticorpos resulta de modificações tais como oxidação ou desamidação, e que aumenta durante a armazenagem de longa duração ou por exposição a condições de tensão, tais como tensão térmica ou tensão luminosa (veja-se "Heterogeneity of Monoclonal Antibodies", Journal of Pharmaceutical Sciences, 97(7), 2426-2447). No entanto, quando se desenvolve um anticorpo como fármaco, as propriedades físicas da proteína, em especial a sua homogeneidade e a sua estabilidade, são especialmente importantes. Deste modo, pretende-se que a heterogeneidade das substâncias pretendidas e das com elas relacionadas seja pequena e que a substância seja tanto quanto possível constituída por uma única substância. Neste contexto, a experiência que se descreve adiante foi levada a cabo para avaliar a heterogeneidade do anticorpo em condições de tensão, e para diminuir a heterogeneidade.

Para avaliar os produtos de degradação, preparou-se uma amostra acelerada de HOLO (Cadeia H, HO-SKSC/SEQ ID NO: 54; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56) pelo método que se descreve adiante. Analisaram-se tanto a mostra acelerada preparada como a amostra não acelerada (inicial) por cromatografia de permuta catiónica utilizando o método descrito adiante. - Método para preparara amostras aceleradas

Tampão: PBS

Concentração em anticorpo: 0,2 a 1,0 mg/mL Temperatura de aceleração: 60°C Período de aceleração: um dia -Método de análise por cromatografia de permuta catiónica

Coluna: ProPac WCX-10, 4 x 250 mm (Dionex)

Fase móvel: (A) 25 mmol/L de MES/NaOH, pH 6,1 (B) 25 mmol/L de MES/NaOH, 250 mmol/L de NaCl, pH 6,1

Caudal: 0,5 mL/minuto

Temperatura da coluna: 40°C

Gradiente: % de B 0 a 0 (0-5 minutos)^0 a 30 (5-80 minutos)

Deteção: 280 nm

Ilustram-se os cromatogramas de amostras de H0L0 antes e depois da aceleração na Fig. 19. As amostras de H0L0 depois de aceleradas tinham uma tendência para demonstrar um pico de base maior.

Em seguida, levou-se a cabo um despiste para diminuir este pico. Em resultado, encontraram-se Ha355, Ha356, Ha360, e Ha362. Estas Cadeias H variantes foram combinadas com LO para se produzir Ha355L0 (Cadeia H, Ha355-SKSC/SEQ ID NO: 242; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56),

Ha356L0 (Cadeia H, Ha356-SKSC/SEQ ID NO: 243; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56), Ha360L0 (Cadeia H, Ha360-SKSC/SEQ ID NO: 244; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56), e Ha362L0 (Cadeia H,

Ha362-SKSC/SEQ ID NO: 245; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56) .

Mostra-se a sequência d cada uma das variantes na Tabela 7.

Expressou-se e purificou-se cada um dos anticorpos identificados pelo método descrito no Exemplo 4. Tal como com HOLO, preparou-se uma amostra acelerada de cada anticorpo preparado, e analisou-se por cromatografia de permuta iónica. 0 resultado está ilustrado na Fig. 19. 0 resultado mostrava gue o pico de base gue aumentava após aceleração era menor no anticorpo modificado contendo uma substituição de ácido aspártico por ácido glutâmico na posição 101 da Cadeia H, em comparação com o de HOLO. Avaliou-se a atividade biológica dos anticorpos modificados pelo método descrito no Exemplo 2 utilizando BaF/NRIO. Mostra-se o resultado na Fig. 20. Tal como se mostra na Fig. 20, as atividades biológicas dos anticorpos modificados eram comparáveis ou maiores do gue a do HOLO. Isto significava gue as modificações de Ha355, Ha356, Ha360, e de Ha362 suprimiam a geração de produtos de degradação por aceleração, e portanto gue era eficaz na melhoria da estabilidade do anticorpo.

[Exemplo 10] Identificação dos locais de mutação aumentando a afinidade

Construiu-se uma biblioteca na qual se introduziram mutações das sequências das CDR e se examinaram em ordem a promover a afinidade de HOLO com NR10. Em resultado do exame da biblioteca na qual se haviam introduzido mutações das CDR, encontraram-se mutações melhorando a afinidade para NR10. Listam-se as mutações na Tabela 8. Combinaram-se as diversas variantes de Cadeia H Hal01-SKSC (SEQ ID NO: 246), Hal03-SKSC (SEQ ID NO: 247),

Hal11-SKSC (SEQ ID NO: 248), Ha204-SKSC (SEQ ID NO: 249), e Ha219-SKSC (SEQ ID NO: 250) com LO (LO/SEQ ID NO: 56); e combinaram-se as diversas Cadeias L modificadas Lal34 (SEQ ID NO: 251), Lal30 (SEQ ID NO: 252), La303 (SEQ ID NO: 253), e La328 (SEQ ID NO: 254) com HO (HO-SKSC/SEQ ID NO: 54), para se construir um anticorpo. Produziu-se e purificou-se cada variante pelo método descrito no Exemplo 4 .

Avaliou-se a afinidade de cada anticorpo para NR10 utilizando Biacore. Mostra-se o resultado na Tabela 9. O ensaio foi levado a cabo utilizando o método descrito no Exemplo de Referência 10. Tal como se mostra na Tabela 9, verificou-se que o valor de KD era melhor, em comparação com o de HOLO (Cadeia H, HO-SKSC/SEQ ID NO: 54; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56).

Tabela 8

Incluem-se nos exemplos de combinações destas mutações melhorando a afinidade com as mutações baixando o ponto isoelétrico geradas no Exemplo 7, por exemplo, Ha40lLa402 (Cadeia H, Ha401-SKSC/SEQ ID NO: 255; Cadeia L, La4 02 / SEQ ID NO: 256) e H17L11 (Cadeia H, H17-M58/SEQ ID NO: 222; Cadeia L, Lll/SEQ ID NO: 236) . Produziram-se e purificaram-se estas variantes pelo método descrito no Exemplo 4 .

Avaliou-se Ha401La402 (Cadeia H, Ha401-SKSC/SEQ ID NO: 255; Cadeia L, La402/SEQ ID NO: 256) quanto à sua afinidade para NR10 e à sua atividade biológica, respetivamente pelo método descrito no Exemplo de Referência 10 e pelo método utilizando BaF/NR10 tal como descrito no Exemplo 2, e compararam-se os valores com os de H0L0 (Cadeia H, HO-SKSC/SEQ ID NO: 54; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56) . O resultado da medição da afinidade está listado na Tabela 10, e a atividade biológica determinada utilizando BaF/NR10 está ilustrada na Fig. 21. Verificaram-se melhorias tanto na afinidade como na atividade biológica em comparação com as da H0L0 (Cadeia H, HO-SKSC/SEQ ID NO: 54; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56).

Além disto, avaliou-se H17L11 (Cadeia Η, H17-M58/SEQ ID NO: 222; Cadeia L, Lll/SEQ ID NO: 236) quanto à sua afinidade para NR10 e à sua atividade biológica, respetivamente pelo método descrito no Exemplo 7 e pelo método utilizando BaF/NRIO tal como descrito no Exemplo 2, e compararam-se com os de HOLO (Cadeia H, H0-M58/SEQ ID NO: 136; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56). Mostra-se o resultado da medição de afinidade na Tabela 11, e a atividade biológica determinada utilizando BaF/NRIO na Fig. 22. Verificaram-se melhorias tanto na afinidade como na atividade biológica em comparação com as da HOLO (Cadeia H, H0-M58/SEQ ID NO: 136; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56).

[Exemplo 11] Identificação dos locais de mutação diminuindo o risco de imunogenicidade

Diminuição do risco de imunogenicidade na CDRl da

Cadeia H

Analisaram-se os epítopos de células T presentes na sequência da região variável de HOLO utilizando TEPITOPE (Métodos 2004, Dezembro, 34(4) : 468-75) . Em resultado, previu-se que a CDRl da Cadeia H teria muitos epítopos da célula T que se ligam a HLA (isto é que têm sequências com elevado risco de imunogenicidade). Então, levou-se a cabo uma análise com TEPITOPE para examinar substituições que diminuíssem o risco de imunogenicidade da CDRl da Cadeia H. Em resultado, verificou-se que o risco de imunogenicidade era marcadamente diminuído substituindo a isoleucina na posição 33 na numeração de Rabat por alanina (A) (Tabela 12) . Em seguida, adicionou-se esta alteração ao H17 gerado no Exemplo 10 para se produzir H19 (H19-M58/SEQ ID NO: 223) . Combinou-se ο H19 gerado com L12 para se produzir H19L12 (Cadeia H, H19-M58/SEQ ID NO: 223; Cadeia L, L12/SEQ ID NO: 237). Produziu-se e purificou-se cada variante pelo método descrito no Exemplo 4.

Avaliou-se o anticorpo quanto à sua afinidade para NR10 e quanto à sua atividade biológica, respetivamente pelo método descrito no Exemplo de Referência 10 e pelo método utilizando BaF/NR10 tal como descrito no Exemplo 2, e compararam-se com as de HOLO (Cadeia H, H0-M58/SEQ ID NO: 136; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56). Mostra-se o resultado da medição da afinidade na Tabela 13, e a atividade biológica determinada utilizando

BaF/NRIO na Fig. 23. Tanto a afinidade como a atividade biológica demonstraram serem quase iguais às de HOLO.

Diminuição do risco de imunogenicidade na CDRl da

Cadeia L A treonina (T) presente na posição 25 de acordo com a numeração de Rabat na CDRl da Cadeia L corresponde a alanina (A) ou a serina (S) na sequência da linha de gérmen. Deste modo, prevê-se que o risco de imunogenicidade seja diminuído substituindo a treonina (T) na posição 25 por alanina (A) ou por serina (S) (Tabela 14). Portanto, a substituição acima foi adicionada a L12 para se produzir L17 (SEQ ID NO: 238). 0 L17 produzido foi combinado com HO para produzir H0L17 (Cadeia H, H0-M58/SEQ ID NO: 136;

Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238) . Produziu-se a purificou-se cada variante pelo método descrito no Exemplo 4.

Avaliou-se cada variante quanto à sua afinidade para NR10 e quanto à sua atividade biológica, respetivamente pelo método descrito no Exemplo de Referência 10 e pelo método utilizando BaF/NR10 tal como descrito no Exemplo 2, e compararam-se com as de H0L0 (Cadeia H, H0-M58/SEQ ID NO: 136; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56) e as de H0L12 (Cadeia H, H0-M58/SEQ ID NO: 136; Cadeia L, L12/SEQ ID NO: 237). Uma vez que L12 contém uma sequência que melhora a afinidade, ele exibe uma afinidade cerca de duas vezes maior do que a de H0L0. Mostra-se o resultado da medição de afinidade na Tabela 15, e a atividade biológica determinada utilizando BaF/NR10 na Fig. 24. Tanto a afinidade como a atividade biológica demonstraram serem quase iguais às de H0L0.

Tabela 14

Tabela 15

[Exemplo 12] Preparação de anticorpo NS22 completamente humanizado

Prepararam-se regiões variáveis de NS22 combinando as diversas mutações que diminuem o pi, aumentam a afinidade, suprimem a degradação da Cadeia H, e diminuem o risco de imunogenicidade, todas as quais se encontraram nos Exemplos acima, em HO (H0-M58/SEQ ID NO: 136), Hl (Hl-M58/SEQ ID NO: 257), ou LO (LO/SEQ ID NO: 56), e submeteram-se a diversos processos de escolha. Em resultado, encontraram-se H28L17 (Cadeia H, H28-M58/SEQ ID NO: 224; Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238), H30L1.7 (Cadeia H, H30-M58/SEQ ID NO: 225; Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238), H34L17 (Cadeia H, H34-M58/SEQ ID NO: 226, Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238), H42L17 (Cadeia H, H42-M58/SEQ ID NO: 227;

Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238), H44L17 (Cadeia Η, H44- M58/SEQ ID NO: 228; Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238), H46L17 (Cadeia H, H46-M58/SEQ ID NO: 229; Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238), H57L17 (Cadeia H, H57-M58/SEQ ID NO: 230; Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238), H71L17 (Cadeia H, H71-M58/SEQ ID NO: 231; Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238), H78L17 (Cadeia Η, H78-M58/SEQ ID NO: 232; Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238), H92L17 (Cadeia H, H92-M58/SEQ ID NO: 233; Cadeia L, L17/SEQ ID NO: 238), H97L50 (Cadeia H, H97-M58/SEQ ID NO: 234; Cadeia L, L50/SEQ ID NO: 239), e H98L50 (Cadeia H, H98-M58/SEQ ID NO: 235; Cadeia L, L50/SEQ ID NO: 239) . Produziu-se a purificou-se cada variante pelo método descrito no Exemplo 4 .

Avaliou-se cada variante quanto à sua afinidade para NR10 e quanto à sua atividade biológica, respetivamente pelo método descrito no Exemplo de Referência 10 e pelo método utilizando BaF/NR10 tal como descrito no Exemplo 2, e compararam-se com as de H0L0 (Cadeia H, H0-M58/SEQ ID NO: 136; Cadeia L, LO/SEQ ID NO: 56). Mostra-se o resultado da medição de afinidade na Tabela 16, e da atividade biológica determinada utilizando BaF/NR10 nas Fig. 25-1 e 25-2. Tanto a afinidade como a atividade biológica demonstraram serem quase iguais ou maiores do que as de H0L0.

[Exemplo 13] Análise do domínio de ligação do anticorpo anti-NRlO neutralizante (1) Preparação de antigénios de tipo selvagem humanos/de murganho e quiméricos

Fundiram-se os genes codificando para domínios extracelulares humanos e de murganho, de tipo selvagem, bem como para domínio quiméricos extracelulares de NR10 (hhh (SEQ ID NO: 258), mmm (SEQ ID NO: 259), hhm (SEQ ID NO: 260), mmh (SEQ ID NO: 261), hmm (SEQ ID NO: 262), mhm (SEQ ID NO: 263), e mhh (SEQ ID NO: 264)), com marcadores His e com marcador Myc (HHHHHHEQKLISEEDL/SEQ ID NO: 287) nos seus terminais C, inseriram-se num vetor de expressão animal, e expressaram-se transitoriamente utilizando o Sistema de Expressão Freestyle 293 (Invitrogen™) . Mostram-se diagramas esquemáticos dos ECD de NR10 humanos/de murganho de tipo selvagem, e quiméricos, na Fig. 26.

Purificaram-se os antigénios humanos/de murganho de tipo selvagem, e quiméricos (hhh, mmm, hhm, mmh, hmm, mhm, emhh) a partir de sobrenadantes de cultura por cromatografia em coluna Ni-NTA Superflow. Em particular, colocou-se 1 mL de Ni-NTA Superflow (QIAGEN) sobre uma

Coluna Vazia Poly-Prep (BioRad), e adicionaram-se 30 mL do sobrenadante de cada uma das culturas. Depois de se lavar com D-PBS (soro salino tamponizado com fosfato da Dulbecco) contendo cloreto de sódio 150 mM e imidazole 20 mM, eluiu-se a coluna com D-PBS contendo cloreto de sódio 150 mM e imidazole 250 mM. Permutaram-se tampões das frações eluídas com D PBS e concentraram-se utilizando um Amicon-Ultra (Millipore), com uma exclusão de massas moleculares a 10 K. (2) Deteção do antigénio ligante por transferência Western

Submeteu-se a uma eletroforese cada um dos antigénios preparados humanos/de murganho de tipo selvagem, e quiméricos, a 0,5 pg/pista, em três geles de poliacrilamida a 4-20 % (Daiichi Pure Chemicals Co.) . Eletro-transferiram-se as proteínas para membranas em PVDF (Millipore) num aparelho semi-seco de transferência, e bloquearam-se as membranas com TBS contendo 5 % de leite magro. Incubou-se uma membrana com 5 pg/mL de H44M58L17 (sistema de deteção para anticorpo humanizado anti-NR10 humano); outra com 5 pg/mL de ND41 (sistema de deteção para anticorpo de murganho anti-NR10 humano); e a outra com anticorpo anti-Myc (SantaCruz, N2 de Catálogo sc-789) diluído 500 vezes com TBS contendo 5 % de leite magro (sistema de deteção para o marcador Myc) à temperatura ambiente durante uma hora.

Depois de se lavar por três vezes com TBS contendo 0,05 % de Tween™ 20, incubaram-se os anticorpos secundários com as membranas. Utilizou-se IgGy de cabra marcado com fosfatase alcalina anti-humano (BIOSOURCE, N2 de Catálogo AHI0305) para detetar anticorpo humanizado anti-NRIO humano; utilizou-se IgG de cabra marcado com fosfatase alcalina anti-murganho (SantaCruz, N2 de Catálogo sc-2008) para detetar anticorpo de murganho anti-NRIO humano; e utilizou-se IgG de cabra marcado com fosfatase alcalina anti-coelho (SantaCruz, N2 de Catálogo sc-2057) para detetar o marcador Myc. Levou-se a cabo a reação à temperatura ambiente durante uma hora. Depois de se lavar por quatro vezes com TBS contendo 0,05 % de Tween™ 20 durante três minutos, levou-se a cabo a revelação da cor utilizando substrato de BCIP/Fosfatase NBT, Sistema de 1-componente (KPL). O TBS (soro salino tamponizado com Tris) utilizado nesta experiência foi preparado dissolvendo um pacote de TBS (soro salino tamponizado com Tris) em pó (TaKaRa) em 1 L de água destilada. Mostra-se o resultado na Fig. 27.

Quando o anticorpo humanizado ou o anticorpo de murganho eram utilizados, apenas se detetou ligação para hhh, hhm, e hmm, que são domínios extracelulares de NR10.

[Exemplo de Referência 1] Isolamento dos genes NR10, OSMR, e IL-31 de macaco cinomolgo

Uma vez que a reatividade cruzada e a atividade neutralizante em macacos cinomolgos foram consideradas importantes para avaliação da segurança num estádio pré-clínico, isolaram-se os genes de NR10 e de OSMR do macaco cinomolgo. Conceberam-se os iniciadores com base em informação publicada acerca do genoma do macaco Rhesus e outros, e amplificaram-se com sucesso os genes de NR10 e de OSMR por PCR a partir de cADN pancreático de macaco cinomolgo. Mostram-se as sequências dos genes isolados de macaco cinomolgo, NR10, OSMR, e IL-31 respetivamente nas SEQ ID NOs: 65, 69, e 67, e as sequências de aminoácidos de NR10, OSMR, e IL-31 do macaco cinomolgo encontram-se respetivamente nas SEQ ID NOs: 66, 70, e 68.

[Exemplo de Referência 2] Estabelecimento de linhas celulares Ba/F3 expressando NR10 e OSMR

Inseriu-se o cADN de comprimento inteiro humano de NR10 (SEQ ID NO: 75) no vetor de expressão pCOSl (Biochem. Biophys. Res. Commun. 228, 838-45, 1996), e denominou-se o vetor resultante pCosNR10.3. Isolou-se o cADN de um recetor M de oncostatina (OSMR, GenBank N2 de acessão NM003999) por PCR a partir de uma biblioteca de placentas humanas, e construiu-se o vetor de expressão pCosl-hOSMR do mesmo modo. Introduziram-se em simultâneo 10 pg de cada um dos vetores por eletroporação numa linha de células Ba/F3 derivadas de células B de murganho dependentes de IL-3 (BioRad Gene Pulser, 960 pF, 0,33 kV). Depois da introdução, adicionou-se IL-31 humano (R&D

Systems) e fez-se uma cultura das células para se obter uma linha de células (células hNRl0/hOSMR/BaF3) que prolifera de um modo dependente de IL-31. Além disto, inseriu-se o gene de IL-31 de macaco cinomolgo (SEQ ID NO: 67) num vetor de expressão de células de mamífero e introduziu-se na linha DG44 de células CHO. Obteve-se o sobrenadante resultante da cultura como IL-31 de macaco cinomolgo. Tal como com a hNRl0/hOSMR/BaF3, inseriram-se os genes de comprimento inteiro NR10 e OSMR de macaco cinomolgo no vetor de expressão pCOSl e expressaram-se em células Ba/F3, estabelecendo-se uma linha de células de macaco cinomolgo dependente de IL-31 (células cynNRl0/cynOSMR/BaF3) utilizando o sobrenadante de cultura descrito acima.

[Exemplo de Referência 3] Estabelecimento de linhas celulares CHO expressando NR10

Inseriram-se ambos os genes de NR10 humano isento de domínio citoplásmico (SEQ ID NO: 73) e de NR10 de macaco cinomolgo isento de domínio citoplásmico (SEQ ID NO: 71) num vetor de expressão de células de mamífero. Linearizaram-se os vetores resultantes com um enzima de restrição, e depois introduziram-se numa linha de células DG44 de CHO por eletroporação (BioRad Gene Pulser, 25 pF, 1,5 kV) . Depois de selecionar o fármaco, selecionaram-se células expressando NR10 e estabeleceram-se por análise FCM utilizando anticorpo anti-NRIO humano. Mostra-se a sequência de aminoácidos codificada pela sequência de nucleótidos do gene humano de NR10 isento de domínio citoplásmico (SEQ ID NO: 73) na SEQ ID NO: 74, e a sequência de aminoácidos codificada pela sequência de nucleótidos do gene de NR10 isento de domínio citoplásmico de macaco cinomolgo (SEQ ID NO: 71) na SEQ ID NO: 72.

[Exemplo de Referência 4] Preparação de proteina NR10 (domínio extracelular)

Utilizou-se o cADN de NR10 humano como escantilhão para amplificar apenas o domínio extracelular por PCR. Fundiu-se então a região amplificada a uma sequência marcadora FLAG no terminal C e inseriu-se num vetor de expressão de células de mamífero. Introduziram-se dez yg do vetor linearizado na linha de células DG44 de ovário de hamster Chinês por eletroporação (BioRad Gene PulserlI, 25 yF, 1,5 kV) . Obteve-se uma linha de células manifestando um teor de expressão elevado. Purificou-se o sobrenadante da linha de células de cultura em larga escala, utilizando a coluna de anticorpo anti-FLAG (Sigma) e filtração através de gel para se obter NR10 solúvel. Mostra-se a sequência de nucleótidos de NR10 solúvel na SEQ ID NO: 77, e a sua sequência de aminoácidos na SEQ ID NO: 78 .

[Exemplo de Referência 5] Preparação anticorpo anti-NRlO humano

Imunizaram-se murganhos com proteína humana NR10 (domínio extracelular) (descrita no Exemplo de Referência 4), e prepararam-se hibridomas por um método convencional. Avaliaram-se os sobrenadantes de culturas destes hibridomas quanto à atividade neutralizante utilizando a linha de células humana dependente de IL-31 (células hNRl0/hOSMR/BaF3) descrita no Exemplo de Referência 2, e deste modo obteve-se NA633 que tem uma atividade neutralizante de NR10.

Além disto, levou-se a cabo uma imunização com ADN recorrendo à pistola de genes movida a He gasoso utilizando um vetor de expressão de mamífero portador do gene de NR10 humano de comprimento inteiro (SEQ ID NO: 75), e prepararam-se hibridomas por um método convencional. Avaliaram-se os sobrenadantes de culturas destes hibridomas quanto à atividade neutralizante utilizando a linha de células humana dependente de IL-31 (células hNRl0/hOSMR/BaF3) descrita no Exemplo de Referência 2, e deste modo obteve-se ND41 que tem uma atividade neutralizante de NR10.

[Exemplo de Referência 6] Preparação de anticorpo quimérico humano

Mostram-se as sequências de aminoácidos das regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve de NA633 respetivamente nas SEQ ID NOs: 104 e 108. Mostram-se as sequências de aminoácidos de CDR1, CDR2, e de uma CDR3 da região variável da cadeia pesada de NA633 respetivamente nas SEQ ID NOs: 105, 106, e 107, enquanto se mostram as das CDR1, CDR2, e de uma CDR3 da região variável da cadeia leve respetivamente nas SEQ ID NOs: 109, 110, e 111. Além disto, produziu-se por um método convencional um anticorpo quimérico entre estas regiões variáveis de murganho e a região constante humana (Cadeia Η, γΐ; Cadeia L, k).

[Exemplo de Referência 7] Preparação de huPMl-SKSC no qual a heterogeneidade de IgG2 de tipo selvagem é diminuída sem perda de estabilidade

Uma vez que o anticorpo NS22 é um anticorpo neutralizando NR10, a sua ligação ao recetor Fcy pode ser desfavorável levando em consideração a imunogenicidade e acontecimentos adversos. Um método possível para diminuir a ligação ao recetor Fcy é selecionar IgG2 ou IgG4 em vez de IgGl como isotipo da região constante (Ann. Hematol. 1998 Junho; 76(6): 231-48). Do ponto de vista do recetor Fcy I e da retenção no plasma, IgG2 tem sido considerado mais desejável do que IgG4 (Nat. Biotechnol. 2007 Dezembro; 25(12) : 1369-72) . Entretanto, quando se desenvolve um anticorpo como fármaco, são muito importantes as propriedades da proteína, em especial a homogeneidade e a estabilidade. O isotipo IgG2 tem sido descrito como apresentando uma heterogeneidade muto grande resultante das ligações dissulfureto na região da charneira (J. Biol. Chem. 2008, 6 de Junho; 283(23): 16206-15). Não é fácil e seria mais caro fabricá-lo como fármaco em grande escala mantendo a diferença proveniente da heterogeneidade de substâncias pretendidas/relacionadas entre os produtos resultantes do fabrico. Portanto, é desejável que a substância seja constituída por um único produto, tanto quanto possível. Nestas condições, quando se desenvolvem como fármacos anticorpos com o isotipo IgG2, prefere-se diminuir a heterogeneidade resultante das ligações dissulfureto sem diminuir a estabilidade.

Para diminuir a heterogeneidade do IgG2 de tipo selvagem, substituíram-se as cisteínas da região da charneira e do domínio CHI de IgG2. Em resultado do exame das diversas variantes, a SKSC (SEQ ID NO: 62), que é uma região constante obtida alterando a cisteína na posição 131 e a arginina na posição 133 de acordo com a numeração EU (Sequências de proteínas com interesse imunológico, NIH N-91-3242) adentro do domínio CHI da cadeia H da sequência da região constante de IgG2 de tipo selvagem, respetivamente para serina e lisina, e alterando a cisteína na posição 219 da cadeia H na parte superior da charneira consoante a numeração EU, para serina, consegue diminuir-se a heterogeneidade sem diminuir a estabilidade. Entretanto, outros métodos possíveis para diminuir a heterogeneidade são alterar apenas a cisteína na posição 219 da cadeia H na parte superior da charneira consoante a numeração EU, para serina, e alterar apenas a cisteína da posição 220 da cadeia H, consoante a numeração EU, para serina. Deste modo, produziram-se a região constante SC (SEQ ID NO: 153) na qual se alterou a cisteína na posição 219 consoante a numeração EU de IgG2 para serina, e a região constante CS (SEQ ID NO: 154) na qual se alterou a cisteína na posição 220 consoante a numeração EU de IgG2 para serina.

Utilizaram-se huPMl-SC (SEQ ID NO: 157), huPMl-CS (SEQ ID NO: 158), huPMl-IgGl (SEQ ID NO: 159), huPMl-IgG2 (SEQ ID NO: 160), e huPMl-SKSC (SEQ ID NO: 161), gue se prepararam combinando as regiões constantes produzidas tal como acima, IgGl (SEQ ID NO: 60), e IgG2 (SEQ ID NO: 132) com a região variável do anticorpo humanizado anti-recetor de IL-6 (região variável da Cadeia H, huPMl-VH/SEQ ID NO: 155; região variável da Cadeia L huPMl-VL/SEQ ID NO: 156) (Cancer Res. 1993, 15 de Fevereiro; 53(4): 851-6), a título de uma Cadeia H, e utilizou-se huPMl-L (SEQ ID NO: 162) a título de uma Cadeia L, para se produzir cada anticorpo. Expressaram-se e purificaram-se estes anticorpos pelo método descrito no Exemplo 4.

Compararam-se os anticorpos entre si em termos da heterogeneidade. A heterogeneidade de huPMl-IgGl, huPMl-IgG2, huPMl-SC huPMl-CS, e huPMl-SKSC foi avaliada por cromatografia de permuta catiónica. Levou-se a cabo a cromatografia utilizando uma coluna ProPac WCX-10 (Dionex), acetato de sódio 20 mM (pH 5,0) a título de fase móvel A, e acetato de sódio 20 mM/NaCl 1 M (pH 5,0) a título de fase móvel B, com um caudal e um gradiente apropriados. O resultado da avaliação por cromatografia de permuta iónica pode ser visto na Fig. 12.

Tal como se mostra na Fig. 12, a transformação da região constante de IgGl para IgG2 aumentou a heterogeneidade. Em contracte, a heterogeneidade diminuiu marcadamente transformando a região constante em SKSC. Enquanto a região constante SC resultava numa diminuição considerável da heterogeneidade tal como em SKSC, a região constante CS não melhorava suficientemente a heterogeneidade.

Quando se desenvolve um anticorpo como fármaco, pretende-se em geral que o anticorpo tenha uma estabilidade elevada além de uma pequena heterogeneidade para a produção de preparações estáveis. Deste modo, para avaliar a estabilidade, determinou-se a temperatura correspondente ao ponto médio da desnaturação térmica (valor de Tm) por calorimetria diferencial de varrimento (DSC) (VP-DSC; Microcal). A temperatura correspondente ao ponto médio da desnaturação térmica (valor de Tm) serve como um indicador da estabilidade. Para se prepararem preparações estáveis a título de fármacos, prefere-se uma temperatura correspondente ao ponto médio da desnaturação térmica mais elevada (valor de Tm) (J. Pharm. Sei. 2008, Abril; 97(4): 1414-26). Deste modo, dialisaram-se huPMl-IgGl, huPMl-IgG2, huPMl-SC, huPMl-CS, e huPMl-SKSC contra uma solução de acetato de sódio 20 mM/NaCl 150 mM (pH 6,0) (EasySEP; TOMY) , e levou-se a cabo a medição dos DSC utilizando 0,1 mg/mL de cada proteína a uma taxa de aquecimento de l°C/minuto, entre 40 e 100°C. Mostram-se as curvas de desnaturação obtidas por DSC na Fig. 13. Os valores de Tm dos domínios Fab estão listados na Tabela 17 adiante.

Tabela 17

Nome Tm/0 C huPMl-IgGl 94,8 huPMl-IgG2 93,9 huPMl-SC 86,7 huPMl-CS 86,4 huPMl-SKSC 93,7

Os valores de Tm de huPMl-IgGl e de huPMl-IgG2 eram quase iguais, nomeadamente cerca de 94°C (o de IgG2 é inferior em cerca de 1°C). Entretanto, os valores de Tm de huPMl-SC e de huPMl-CS eram de cerca de 86°C, valor significativamente menor do que os de huPMl-IgGl e de huPMl-IgG2. Por outro lado, o valor de Tm de huPMl-SKSC era de cerca de 94 °C, e quase o mesmo que o de huPMl-IgGl e de huPMl-IgG2. Uma vez que a estabilidade de huPMl-SC e de huPMl-CS era marcadamente menor do que a de IgG2, o huPMl-SKSC no qual a cisteina do domínio CHI também tenha sido alterada para serina pode ser mais preferível para o desenvolvimento de fármacos. A diminuição significativa do valor de Tm em huPMl-SC e huPMl-CS quando comparados com o de IgG2 pode ser devida ao perfil de ligações dissulfureto em huPMl-SC e em huPMl-CS que é diferente do de IgG2.

Além disto, uma comparação das curvas de desnaturação por DSC mostrava que o pico de desnaturação para o domínio Fab era afiada para huPMl-IgGl e para huPMl-SKSC, sendo mais larga para huPMl-SC e para huPMl-CS do que para os dois acima, e que na da huPMl-IgG2 era aparente um ombro no lado de temperatura inferior no pico de desnaturação do domínio Fab. 0 pico de desnaturação observado por DSC torna-se afiado em geral no caso de uma única componente, mas pode tornar-se mais largo quando estão presentes duas ou mais componentes com valores de Tm diferentes (nomeadamente, heterogeneidade). Sugeria-se portanto que huPMl-IgG2, huPMl-SC, e huPMl-CS continham duas ou mais componentes, e que a heterogeneidade do IgG2 natural não se encontrava diminuída em huPMl-SC e em huPMl-CS. Este facto sugere que as cisteínas presentes tanto na região charneira como no domínio CHI estão envolvidas na heterogeneidade do IgG2 natural, e que é necessário alterar não só a cisteína da região charneira, mas também a do domínio CHI, para se diminuir a heterogeneidade visível no DSC. Além disto, tal coo se descreveu acima, só é possível atingir uma estabilidade equivalente à de IgG2 natural alterando não só a cisteína da região charneira, mas também a do domínio CHI.

Tal como se descreveu acima, no que toda às regiões constantes nas quais a heterogeneidade resultante da região charneira de IgG2 foi diminuída, tornou-se claro que SC e CS, que são regiões constantes nas quais apenas a cisteína da região charneira foi substituída por serina, estas substituições podem ser insuficientes do ponto de vista da heterogeneidade e da estabilidade, e que apenas é possível diminuir significativamente a heterogeneidade enquanto se mantém a estabilidade comparável à de IgG2 através de substituição adicional da cisteína na posição com a numeração EU 131 no domínio CHI por serina. Estas regiões constantes incluem SKSC.

[Exemplo de Referência 8] Produção e avaliação da região constante M14 otimizada, não se ligando ao recetor n-FcY

No domínio Fey de ligação ao recetor da região constante de IgG2, os resíduos das posições com a numeração EU 233, 234, 235, e 236 são de tipo não ligante, enquanto os resíduos das posições com a numeração EU 327, 330, e 331 são diferentes dos de IgG4, que são de tipo não ligante. Deste modo, é necessário alterar os aminoácidos das posições com a numeração EU 327, 330, e 331 para a sequência que existe no IgG4 (G2Aa no Eur. J. Immunol. 1999 Agosto; 29(8): 2613-24). No entanto, uma vez que o aminoácido na posição com a numeração EU 339 é alanina no IgG4 enquanto é treonina no IgG2, a mera alteração dos aminoácidos nas posições com a numeração EU 327, 330, e 331 para a sequência de IgG4 gerará uma nova sequência peptídica com 9 aminoácidos não existente na natureza, que poderá ser um péptido epítopo de células T, originado deste modo um risco de imunogenicidade. Deste modo, verificou-se que a ocorrência da nova sequência peptídica poderia ser evitada alterando a treonina na posição com a numeração EU 339 do IgG2, para alanina, além das alterações descritas acima. Além das mutações descritas acima, fez-se a mutação da metionina na posição com a numeração EU 397 para valina, para melhorar a estabilidade de IgG2 em meio ácido. Além disto, na SKSC (SEQ ID NO: 62) produzida no Exemplo de Referência 7, na qual a heterogeneidade resultante das ligações dissulfureto na região charneira havia sido melhorada, a introdução de mutações nas posições 131 e 133 gerará uma nova sequência peptidica com 9 aminoácidos e não ocorrendo na natureza que poderia ser um péptido epitopo para células T, provocando deste modo um risco de imunogenicidade. Portanto, transformou-se a sequência peptidica da zona das posições 131 a 139 do mesmo modo que IgGl mutando o ácido glutâmico na posição com numeração EU 137 para glicina e mutando a serina na posição com numeração EU 138 a glicina. A sequência de região constante M14 (SEQ ID NO: 129) foi produzida recorrendo a todas estas mutações acima. A expressão e a purificação de huPMl-M14, preparado utilizando huPMl-M14 a titulo de Cadeia H e huPMl-L (SEQ ID NO: 162) a titulo de Cadeia L, foi levada a cabo pelo método descrito no Exemplo de Referência 7. Avaliaram-se os huPMl-MI4 (SEQ ID NO: 163), huPMl-IgGl, e huPMl-IgG2 preparados quanto à sua heterogeneidade recorrendo à cromatografia de permuta catiónica pelo método descrito no Exemplo de Referência 7.

Tal como se mostra na Fig. 14, a heterogeneidade também foi diminuída no huPMl-M14, tal como na huPMl-SKSC.

[Exemplo de Referência 9] Preparação de huPMl-M58 com menor heterogeneidade na região do terminal C da cadeia H e com melhor farmacocinética

Preparação da molécula de huPMl-M58 0 huPMl é um anticorpo IgGl. Quanto à heterogeneidade na sequência do terminal C da Cadeia H do anticorpo IgG, a eliminação do resíduo de lisina do terminal C e a amidação do grupo do terminal C devida à eliminação dos dois aminoácidos do terminal C, glicina e lisina, já foram descritas (Anal. Biochem. 2007, 1 de

Janeiro; 360(1) : 75-83) . Também no huPMl, embora a componente principal seja uma sequência na qual a lisina do terminal C seja codificada pela sequência de nucleótidos tenha sido eliminada por modificação após a tradução, existe também uma componente menos importante na qual a lisina permanece e uma componente de menos importância na qual o grupo amino do terminal C está amidado devido à eliminação tanto da glicina como da lisina, as quais contribuem para a heterogeneidade. Produzir um fármaco em larga escala enquanto se mantém a diferença na heterogeneidade das substâncias pretendidas/relacionadas entre os produtos não é fácil mas resulta em vez disso num aumento dos custos, e pretende-se portanto que a substância seja constituída tanto quanto possível por um único produto. Quando se desenvolve um anticorpo a título de fármaco, é desejável uma diminuição da heterogeneidade. Deste modo, pretende-se que o terminal C da Cadeia H não tenha heterogeneidade quando é desenvolvido como fármaco. É também pretendido prolongar a vida média do anticorpo no plasma para diminuir a dose de antibiótico.

Deste modo, as alterações descritas adiante foram introduzidas para preparar uma nova região constante na qual a heterogeneidade do terminal C da Cadeia H tenha sido diminuída, a farmacocinética tenha sido melhorada em comparação com a de huPMl-IgGl, e a heterogeneidade derivada de IgG2 do tipo selvagem também tenha sido diminuída sem perda de estabilidade.

Em particular, na huPMl-SKSC, que tem uma elevada estabilidade e na qual a heterogeneidade mencionada acima relacionada com anticorpos com regiões constantes do isotipo de IgG2 é diminuída, substituiu-se o ácido glutâmico na posição com a numeração EU 137 por glicina; a serina na posição 138 por glicina; a histidina na posição 268 por glutamina; a arginina na posição 355 por glutamina; e a glutamina na posição 419 por ácido glutâmico. Para além das substituições acima, a glicina e a lisina nas posições 446 e 447 foram eliminadas para diminuir a heterogeneidade do terminal C da cadeia H, obtendo-se deste modo huPMl-M58 (SEQ ID NO: 164). 0 huPMl-M58 preparado partindo de huPMl-M58 a título de Cadeia H e de huPMl-L (SEQ ID NO: 162) a título de Cadeia L foi expresso e purificado pelo método descrito no Exemplo 4.

Avaliou-se para os huPMl-M58, huPMl-IgGl, e huPMl-IgG2 a heterogeneidade e a estabilidade pelos métodos descritos no Exemplo 5 utilizando respetivamente cromatografia de permuta catiónica e DSC.

Mostra-se o resultado da DSC na Tabela 18. Tal como se ilustra nas Figs. 13 e 16, verificou-se que o huPMl-M58 apresenta uma menor heterogeneidade sem perda de estabilidade, do que em huPMl-SKSC.

Avaliação da retenção no plasma de huPMl-M58 A retenção prolongada (eliminação lenta) da molécula de IgG no plasma é devida à função de FcRn, se se sabe ser um recetor de salvação da molécula de IgG (Nat. Ver. Immunol. Setembro de 2007; 7(9): 715-25). Quando incorporadas em endossomas por pinocitose, as moléculas de

IgG ligam-se a FcRn expressa em endossomas nas condições ácidas adentro do endossoma (cerca de pH 6,0). Enquanto as moléculas de IgG que não estão ligadas a FcRn são transferidas para lisossomas aonde são degradadas, as ligadas a FcRn são translocadas para a superfície celular e são depois libertadas da FcRn para o plasma mais uma vez nas condições neutras do plasma (cerca de pH 7,4).

Sabe-se que os anticorpos do tipo IgG incluem os isotipos IgGl, IgG2, IgG3, e IgG4. As vidas médias destes isotipos no plasma em seres humanos estão descritas como sendo de cerca de 36 dias para IgGl e para IgG2; cerca de 29 dias para IgG3; e 16 dias para IgG4 (Nat. Biotechnol. Dezembro de 2007; 25(12) : 1369-72) . Deste modo, crê-se que a retenção de IgGl e de IgG2 no plasma é a mais longa. Em geral, os isotipos de anticorpos utilizados como agentes farmacêuticos são IgGl, IgG2, e IgG4. Os métodos descritos para melhorar mais a farmacocinética destes anticorpos IgG incluem métodos de melhorar a ligação descrita acima a FcRn humano por alteração da sequência da região constante do IgG (J. Biol. Chem. 2007, 19 de Janeiro; 282(3) : 1709-17; J. Immunol. 2006 1 de Janeiro; 176(1): 346-56).

Existem diferenças relativas às espécies entre FcRn de murganho e FcRn humano (Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 5 de Dezembro de 2006; 103(49): 18709-14). Portanto, para prever a retenção dos anticorpos IgG com uma sequência alterada na região constante no plasma humano, pode ser desejável avaliar a ligação a FcRn humano e a retenção no plasma em murganhos transgénicos com FcRn humano (Int. Immunol. Dezembro de 2006; 18(12): 1759-69).

Avaliação da ligação a FcRn humano O FcRn é um complexo de FcRn com β2- microglobulina. Prepararam-se iniciadores de oligo-ADN com base na sequência genética publicada para FcRn humano (J. Exp. Med. (1994) 180(6), 2377-2381). Preparou-se um fragmento de ADN codificando para todo o gene por PCR utilizando cADN humano (Human Placenta Marathon-Ready cDNA, Clontech) como escantilhão, e os iniciadores preparados. Utilizando o fragmento de ADN obtido como escantilhão, amplificou-se um fragmento de ADN codificando para o domínio extracelular contendo a região do sinal (Metl-Leu290) por PCR, e inseriu-se num vetor de expressão de célula animal (sequência de aminoácidos de FcRn humano/SEQ ID NO: 165) . De igual modo, prepararam-se iniciadores de oligo-ADN com base na sequência publicada para o gene da p2-microglobulin humana (Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 99(26), 16899-16903 (2002)). Preparou-se um fragmento de DN codificando para o gene todo por PCR utilizando cADN humano (Hu-Placenta Marathon-Ready cDNA, CLONTECH) como escantilhão e os iniciadores preparados. Utilizando o fragmento de ADN obtido como escantilhão, amplificou-se um fragmento de ADN codificando para a p2-microglobulina total, contendo a região do sinal (Metl-Metll9) por PCR, e inseriu-se num vetor de expressão de célula animal (sequência de aminoácidos of p2-microglobulina humana/SEQ ID NO: 166).

Expressou-se FcRn solúvel humano pelo processo seguinte. Introduziram-se os plasmideos preparados para FcRn humano e para p2-microglobulina humana na linha de células derivada de cancro do rim embriónico humano HEK293H (Invitrogen) utilizando 10 % de soro fetal de bovino (Invitrogen), por lipofeção. Recolheu-se o sobrenadante de cultura resultante e purificou-se utilizando IgG Sepharose 6 Fast Flow (Amersham Biosciences) pelo método descrito no J. Immunol. 2002, 1 de Novembro; 169(9) : 5171-80. Em seguida levou-se a cabo uma purificação subsequente utilizando HiTrap Q HP (GE Healthcare).

Avaliou-se a FcRn humana utilizando Biacore 3000. Ligou-se um anticorpo a Proteína L ou à cadeia Kapa de anticorpo IgG de coelho anti-humano imobilizada numa ficha sensora, adicionou-se FcRn humano como analito para interação com o anticorpo, e calculou-se a afinidade (KD) a partir da quantidade de FcRn humano ligada. Em particular, imobilizou-se Proteína L numa ficha sensora CM5 (BIACORE) pelo método de acoplamento de aminas utilizando um tampão 50 mM de fosfato de sódio (pH 6,0) contendo NaCl 150 mM como tampão de ensaio. Em seguida, diluiu-se um anticorpo com o tampão de ensaio contendo 0,02 % de Tween 20, e injetou-se e deixou-se ligar à ficha. Injetou-se então FcRn humano para avaliar a atividade de ligação do anticorpo ao FcRn humano.

Calculou-se a afinidade utilizando o programa BIAevaluation. Utilizou-se o sensorgrama obtido para se calcular a quantidade de hFcRn ligado ao anticorpo imediatamente antes do final da injeção do FcRn humano. Esta foi ajustada pelo método de afinidade no estado estacionário, para calcular a afinidade de FcRn humano para o anticorpo.

Avaliação previsional da retenção no plasma de huPMl-IgGl e de huPMl-M58 em humanos, utilizando FcRn humano

Avaliaram-se as atividades de ligação de huPMl-IgGl e de huPMl-M58 a FcRn humano utilizando o BIAcore. Tal co o se lista na Tabela 19, a atividade de ligação de huPMl-M58 era maior do que a de huPMl-IgGl em cerca de 1,4 vezes.

Avliação da retenção no plasma em murganhos transgénicos com FcRn humano

Avaliou-se a farmacocinética em murganhos transgénicos com FcRn humano (murganhos B6.mFcRn-/-.hFcRn Tg linha 276 +/+; Jackson Laboratories) pelo seguinte processo. Administrou-se um anticorpo por via endovenosa uma vez a uma dose de 1 mg/kg a murganhos, e obteve-se sangue em momentos apropriados ao longo do tempo. Centrifugou-se imediatamente o sangue recolhido a 15.000 rpm durante 15 minutos a 4°C para se obter plasma. Armazenou-se o plasma separado num congelador a -20°C ou menos, até ser utilizado. Determinou-se a concentração no plasma por ELISA.

Avaliação previsional da retenção no plasma de huPMl-IgGl e de huPMl-M58 em seres humanos, utilizando murganhos transgénicos com FcRn humano

Avaliou-se a retenção no plasma de huPMl-IgGl e de huPMl-M58 em murganhos transgénicos com FcRn humano. Tal como se ilustra na Fig. 17, o resultado demonstrava que a farmacocinética de huPMl-M58 era melhorada em comparação com a de huPMl-IgGl. Sugeria-se que a ligação a FcRn humano estava correlacionada com a retenção no plasma em murganhos transgénicos com FcRn humano.

[Exemplo de Referência 10] Medição da afinidade na reação antigénio-anticorpo utilizando Biacore A análise cinética da reação antigénio-anticorpo foi levada a cabo utilizando Biacore T100 (GE Healthcare

Biosciences). Mediu-se a interação antigénio-anticorpo imobilizando rec-Proteína A (doravante neste documento Proteína A) (ZYMED) sobre uma ficha sensora, capturando um anticorpo sobre a Proteína A imobilizada, e depois fazendo reagir o antigénio como um analito. Utilizaram-se diversas concentrações de rhNRIO como antigénio. Os parâmetros cinéticos, a constante de velocidade de associação ka (1/Ms) e a constante de velocidade de dissociação kd (1/s), foram calculados a partir dos sensorgramas obtidos pela medição. Então, determinou-se o KD (M) com base nas constantes de velocidade. Determinou-se cada parâmetro utilizando o Programa de Avaliação Biacore T100, versão 1.1 (GE Healthcare Biosciences).

Imobilização da Proteína A sobre uma ficha sensora

Imobilizou-se Proteína A sobre todas as células de fluxo da ficha sensora CM5 (GE Healthcare Biosciences) pelo método de acoplamento de amina. Levou-se a cabo a experiência utilizando HBS-EP+ (HEPES 10 mM, 0,15 M em NaCl, 3 mM em EDTA, com 0,05 % em volume de Surfactant P20) como tampão do ensaio a um caudal de 10 pL/minuto. Ativaram-se os grupos carbonilo da carboximetildextrana na ficha sensora com 100 pL de uma mistura a 1:1 de EDC (cloridrato de N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida) a 75 mg/mL e NHS (N-hidroxissuccinimida) a 11,5 mg/mL, e Proteína A preparada a 50 pg/mL utilizando tampão de acetato de sódio 10 mM (pH 4,5), fluindo para a reação.

Em seguida, deixaram-se fluir 100 pL de cloridrato de etanolamina 1 M (pH 8,5) para inativar os grupos ativos por reagir. Em resultado, imobilizaram-se cerca de 4.000 a 5.000 RU. A experiência foi levada a cabo sempre a 25°C.

Medição da afinidade numa reação antigénio-anticorpo entre rhNRlO e o anticorpo capturado sobre a Proteína A O tampão de ensaio utilizado foi HBS-EP+. Preparou-se cada anticorpo a 0,25 pg/mL, ou preparou-se de tal modo que cerca de 100 RU se ligassem a Proteína A. Preparou-se o rhNRlO utilizado como analito a 0, 38,5, 77,0, e 154 nM, ou a 0, 19,25, e 77,01 nM utilizando HBS- EP+. Na medição, em primeiro lugar, capturou-se a solução de anticorpo sobre Proteína A, e fez-se reagir uma solução do analito a um caudal de 20 pL/minuto durante três minutos. Em seguida, alterou-se a solução para HBS-EP+, e mediu-se a fase de dissociação durante cinco minutos. Depois de se medir a fase de dissociação, regenerou-se a ficha sensora por lavagem com glicina-HCl 10 mM (pH 1,5) . Analisaram-se cineticamente os sensorgramas obtidos utilizando o programa específico para análise de dados da Biacore, Biacore T100 Evaluation Software na sua Versão 1.1.

Aplicabilidade Industrial

Os anticorpos anti-NRIO obtidos pelos inventores presentes manifestam uma atividade neutralizante efetiva contra RIO, e são úteis como, por exemplo, agentes terapêuticos para doenças inflamatórias.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

<110> CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA <120> Anticorpos Anti-NRIO, e a sua utilização

<130> C1-A0712Y1PPP <150> PCT/JP2008/072152 <151> 2008-12-05 <150> PCT/JP2009/054941 <151> 2009-03-13 <160> 287 <170> Patente na versão 3.4

<210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 1 <210> 2 <211> 17

<212> PRT

Gly Tyr lie Met Asn 1 5 <213> Mus musculus <400> 2

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe Lys . .1 5 10 15

Gly

<210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr 1 5 10

<210> 4 <211> 121 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4

Glu Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Vai Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn- Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp'Ile 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Ser Vai Thr Vai Ser Ser 115 120

<210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Phe Leu Ala 1 5 '10

<210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6

Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys 15

<210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7

Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu Thr 1 5

<210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Glu Thr Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Gin Gly Lys Ser Pro His Leu Leu Val 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 . 60

Ser Gly. Ser Gly Thr Gin Phe Ser Leu Lys lie Asn Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 9 <211> 5 <213> Mus musculus <400> 9

<212> PRT

Gly Tyr lie Met Asn 1 5

<210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 10

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ash Gin Lys Phe Lys .1 5 10 15

Gly

<210> 11 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 11

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr 1 5 10

<210> 12 <211> 121 <212> PRT <213> Mus musculus <4 Ο 0> 12

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Met Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Asn Leu Glu. Trp lie 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 .

Gin Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 13

Arg Thr Ser Glu Asn He Tyr Ser Phe Leu Ala 15 10

<210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 14 Âsn Ala Lys Thr Leu Ala Lys 1 5

<210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 15

Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu Thr 1 5-.

<210> 16 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 16

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Ser Leu Sér Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Glu Thr Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Glu .Asn life Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Gin Gly Lys Ser Pro His Leu Leu Val 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gin Phe Ser Leu Lys lie Asn Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Phe Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 ' 105 <210> 17 <211> 5 <213> Mus musculus <4 0 0> 17

<212> PRT

Gly Tyr. He Met Asn 1 5

<210> 18 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 18

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Ala Glu Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 1 5 10 15

Asp

<210> 19 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 19

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr 15 10 <210> 20 <211> 121 <213> Mus musculus <400> 20

<212> PRT

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 .10 15

Ser Met Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Ala Glu Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Phe Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 21 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 21

Arg Ala Asn Glu Asn lie Tyr Ser Tyr Leu Ala 1 5 10

<210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 22

Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5

<210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 23

Gin His His Tyr Gly Thr Pro Pro Thr 1 5

<210> 24 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Asn Glu Asn lie Tyr Ser Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Gin Gly Lys Ser Pro Gin Leu Leu Val 35 . 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 '60

Ser Gly Ser Gly Thr Gin Phe Ser Leu Lys lie Asn Ser Leu Gin Pro 65 70 . 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Gly Thr Pro Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 25 <211> 5

<212> PRT <213> Mus musculus <400> 25

Asn Tyr Trp Met His 1 5

<210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 26

Ala.lie Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Asp Tyr Asn Gin Lys Phe LyS 1 5 10 15

Gly '

<210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 27

Asp Gly Tyr Asp Asp Phe Asp His 1 5 <210> 28 <211> 116 <213> Mus musculus <400> 28

<212> PRT

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg.Pro Gly Ala 1 5 10 15 .

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly. Leu Glu Trp lie 35 40 -45

Gly Ala lie Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Asp Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Phe Phe Cys 85 90 95 (

Thr Thr Gly Tyr Asp Asp Phe Asp His Trp Gly Gin Gly Thr. Thr Leu 100 105 110

Thr Val Ser Ser 115

<210> 29 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 29

Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His 15 10

<210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 30

Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5

<210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 31

Gin Gin Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr 15

<210> 32 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 32

Glu Asn Vai Lau Thr Gin Ser Pro Ala lie Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10.· 15

Glu Lys Vai Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Vai Ser Ser Ser 20 25 30

Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp 35 40 45 lie Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Vai Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Tyr Phe Thr Ile Ser Ser Vai Glu 65 70 75 80

Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Ser Gly Tyr Pro 85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105

<210> 33 <211> 1406 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 33 atgggatgga gctggatctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt ccactctgag 60 gtccagctgc aacagtctgg acctgagctg gtgaagcctg gagcttcaat gaagatctcc 120 tgcaaggctt ctggttactc attcactggc tacatcatga actgggtgaa gcagagccat 180 ggaaagaacc ttgagtggat tggacttatt aatccttaca atggtgatac taactacaac 240 cagaagttca agggcaaggc cacattaact gtagacaagt catccagcac agcctacatg 300 gaactcctca gtctgacatc agaggactct gcagtctatt actgtgcaag ggatggttac 360- gacgacggac cctatactat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 420 gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac 480 tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc 540 tggaactctg gatçcctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 600 ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc 660 acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg 720 gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc 780 cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg 840 gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag 900 gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc 960 agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc 1020 aacagtgeag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccáaaaccaa aggcagaccg 1080 aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggage-agatggccaa ggàtaaagtc 1140 agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg 1200 aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct 1260 tacttcgtct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc 1320 acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac 1380 tctcctggta aataatgagc ggccgc 1406

<210> 34 <211> 445 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 34

Glu Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Vai Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Ser Vai Thr Vai Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser 115 120 125

Vai Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met Vai 130 135 140

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<210> 35 <211> 716 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 35

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<210> 36 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 36

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<210> 37 <211> 1406 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 37 atgggatgga gctggatctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt ccactctgag 60 gtccagctgc aacagtctgg acctgagctg gtgaagcctg gagcttcaat gaagatctcc 120 tgcaaggctt ctggttactc attcactggc tacatcatga actgggtgaa gcagagccat 180 ggaaagaacc ttgagtggat tggacttatt aatccttaca atggtggtac tagctacaac 240 cagaagttca agggcaaggc cacattaact gtagacaagt catccagtac agcctacatg 300 gaactcctca gtctgacatc agaggactct gcagtctatt actgtgcaag ggatggttac 360 gacgacggac cctatactat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 420 gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac 480 tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacC 540 tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 600 ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc 66Ó acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg 720 gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc 780 cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg 840 gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag 900 gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc 960 agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggágttcaa atgcagggtc 1020 aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg 1080 aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc 1140 agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg 1200 aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct 1260 tacttcgtct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc 1320 acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac 1380 tctcctggta aataatgagc ggccgc 1406

<210> 38 <211> 445 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 38

Glu Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu- Leu Vai Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

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<210> 42 <211> 445 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 42

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<210> 44 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 44

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Asn Glu Asn lie Tyr Ser Tyr 20 25 30

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Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie 130 135 140

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<210> 45 <211> 1391 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 45 atggaatgta actggatact tccttttatt ctgtcggtaa tttcaggggt ctactcagag 60. gttcagctcc agcagtctgg gactgtgctg gcaaggcctg gggcttccgt gaagatgtcc 120 tgcaaggctt ctggctacac ctttaccaac tactggatgc actgggtaaa acagaggcct 180 ggacagggtc tagaatggat tggtgctatt tatcctggaa atagtgatac tgactacaac 240 cagaagttca agggcaaggc caaactgact gcagtcacat ccgccagcac tgcctacatg 300 gaactcagca gcctgacaaa tgaggactct gcggtctttt tctgtaccac tggttacgac ... 360 gacttcgacc actggggcca aggcaccact ctcacagtct cctcagccaa aacgacaccc 420 ccatctgtct atccactggc ccctggatct gctgcccaaa ctaactccat ggtgaccctg 480 ggatgcctgg tcaagggcta tttccctgag ccagtgacag tgacctggaa ctctggatcc 540 ctytcc3.c<ccj cjt cj t cjcscsc cttcccs-Cfct ytcctçccjyt ctgacctcta cactctgogc 600 agctcagtga ctgtcccctc cagcacctgg cccagcgaga ccgtcacctg caacgttgcc 660 cacccggcca gcagcaccaa ggtggacaag aaaattgtgc ccagggattg tggttgtaag 720 ccttgc.atat gtacagtccc agaagtatca tctgtcttca tcttcccccc aaagcccaag 780 gatgtgctca ccattactct gáctcctaag gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag 840 gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt gtagatgatg tggaggtgca cacagctcag 900 acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc actttccgct cagtcagtga acttcccatc 960 atgcaccagg actggctcaa tggcaaggág ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc 1020 cctgccccca tcgagaaaac catctccàaa accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg 1080 tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg 1140 ataacagact tcttccctga agacattact gtggagtggc agtggaatgg gcagccágcg 1200 gagaactaca agaacactca gcccatcatg gacacagatg gctcttactt' cgtctacagc 1260 aagctcaatg tgcagaagag caactgggag gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta 1320 catgagggcc tgcacaacca ccatactgag aagagcctct cccactctcc tggtaaataa 1380 tgagcggccg c 1391

<210> 46 <211> 440 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 46

Glu Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Thr Vai Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Vai Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30

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Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Vai Phe Phe Cys 85 90 95

Thr Thr Gly Tyr Asp Asp Phe Asp His Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu 100 105 110

Thr Vai Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Vai Tyr Pro Leu Ala 115 120 ' 125

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Vai Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Thr Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160

Ser Leu Ser Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser Asp 165 170 175

Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Vai Thr Vai Pro Ser Ser Thr Trp Pro 180 185 190

Ser Glu Thr Vai Thr Cys Asn Vai Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys 195 200 205

Vai Asp Lys Lys lie Vai Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile 210 215 220

Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240

Lys Asp Val Leu Thr lie Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val 245 250 255

Val Asp lie Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gin Phe Ser Trp Phe Val 260 265 270

Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin 275 280 285

Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro lie Met His Gin 290 295 -300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala 305 310 315 320

Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro 325 330 335

Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr lie Pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala 340 - 345 350

Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met He Thr Asp Phe Phe Pro Glu 355 3.60 365

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Lys Asn Thr Gin Pro lie Met Asp· Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr 385 390 395 400

Ser Lys Leu Asn Val Gin Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe 405 410 415

Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys 420 425 430

Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys , . 435 440

<210> 47 <211> 725 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 47 atggattttc tggtgcagat tttcagcttc ttgctaatca gtgcctcagt tgcaatgtcc 60 agaggagaaa atgtgctcac ccagtctcca' gcaat.catgt ctgcatctcc aggggaaaag 120 gtcaccatga cctgcagggc cagctcaagt gtaagttcca gttacttgca ctggtaccag 180 cagaagtcag gtgcctcccc caaactctgg atttatagca cttccaactt ggcttctgga 240 gtccctgctc gcttcagtgg cagtgggtct gggacctctt actatttcac aatcagcagt 300 gtggaggctg aagatgctgc cacttattac tgccagcaat acagtggtta cccàctcacg 360 ttcggagggg ggaccaagct ggaaataaaa cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc 420 ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac 480 aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag tggaagattg atggcagtga acgacaaaat 540 ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac agcaaagaca gcacctacag catgagcagc 600 accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa cgacataaca gctatacctg tgaggccact 660 cacaagacat caacttcacc cattgtcaag agcttcaaca ggaatgagtg ttaatgagcg 720 gccgc 725

<210> 48 <211> 215 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48

Glu Asn Vai Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15

Glu Lys Vai Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Vai Ser Ser Ser 20 25 30

Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin·Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp 35 40 45

Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Vai Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Tyr Phe Thr Ile Ser Ser Vai Glu 65 70 75 80

Ala Glu Asp Ala Ala Thr- Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Ser Gly Tyr Pro 85 90 '95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala 100 105 110

Ala Pro Thr Vai Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gin Leu Thr Ser 115 120 125

Gly Gly Ala Ser Vai Vai Cys Phe LeU Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp 130 ,135 140

Ile Asn Vai Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly Vai 145 . 150 155 160

Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser 180 185 190

Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro lie Vai Lys 195 200 205

Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 ' 215 <210> 49 <211> 425 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência artificialmente sintetizada <400> 49 ccaccatgga ctggacctgg agggtcttct gcttgctggc tgtagctcca ggtgctcact 60 cccaggtgca gctggtgcag tctggggctg aggtgaagaa gcctggggcc tcagtgaagg 120 tttcctgcaa ggcatctgga tacaccttca ccggctacat catgaactgg gtgcgacagg 180 cccctggaca agggcttgag tggatgggac ttattaatcc ttacaatggt ggtactagct 240 acaaccagaa gttcaagggc agagtcacga ttaccgcgga cgaatccacg agcacagcct 300 acatggagct gagcagcctg agatctgagg acacggccgt gtattactgt gcgagagatg 360 gttacgacga cggaccctat actatggact actggggcca gggcaccctc gtcacagtct 420 cctca 425 <210> 50 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência artificialmente sintetizada <400> 50

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 . 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 51 <211> 398 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência artificialmente sintetizada <4Ο0> 51 ccaccatgga catgagggtc cccgctcagc tcctggggct cctgctactc tggctccgag 60 gtgccagatg tgacatccag atgacccagt ctccatcctc cctgtctgca tctgtaggag 120 acagagtcac catcacttgc cgaacaagtg agaatattta cagtttttta gcatggtatc 180 -a Λ-a ii a r-r· γ·λ·Ι- —i λλ t- «ral- /M- aí- ·3 ίι f f ·3ΛΑ·5 -a -3 ΐιΛτ Ο Λ Λ aycay aoucc σ. ^ ^ ^ cl α d ν ο'-ιν—αα.α.αα’—'— ι_ ua.yj^acia.ci'j Δίν gggtcccatc aaggttcagt ggcagtggat ctgggacaga tttcactctc accatcagca 300 gtctgcaacc tgaagatttt gcaacttact actgtcaaca tcattatgag agtcctctga 360 cgttcggcgg agggaccaag gtggagatca aacgtacg 398 <210> 52 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência artificialmente sintetizada <400> 52

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 <210> 53 <211> 1422

<212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência artificialmente sintetizada <400> 53 gaattccacc atggactgga cctggagggt cttctgcttg ctggctgtag ctccaggtgc 60 tcactcccag gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt 120 gaaggtttcc tgcaaggcat ctggatacac cttcaccggc tacatcatga actgggtgcg ' 180 acaggcccct ggacaagggc ttgagtggat gggacttatt aatccttaca atggtggtac 240 tagctacaac cagaagttca agggcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac 300 agcctacatg gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag 360 agatggttac gacgacggac cctatactat ggactactgg ggccagggca ccctcgtcac 420 agtctcctca gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct cctccaagag 480 cacctccgag agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt 540 gacggtgtcg tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct 600 acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg 660 cacccagacc tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac 720 agttgagcgc aaatcttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc 780 gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga 840 ggtcacgtgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta 900 cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag 960 cacgttccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cgtgcaccag gactggctga acggcaagga 1020 gtacaagtgc aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa 1080 aàccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat 1140 gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc 1200 cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct 1260 ggactccgac ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca 1320 gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacaca 1380 gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaatg ataagcggcc gc 1422 <210> 54 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência artificialmente sintetizada <4Ο0> 54

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr'Gly Tyr 20 25 , 30

He Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu -Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phé Pro Ala 165 170 . 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val , . 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val . 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285.

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 . 320

Cys Lys val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr'lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 55 <211> 719 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência artificialmente sintetizada <400> 55 ccaccatgga catgagggtc cccgctcagc tcctggggct cctgctactc tggctccgag 60 gtgccagatg tgacatccag atgacccagt ctccatcctc cctgtctgca tctgtaggag 120 acagagtcac catcacttgc cgaacaagtg agaatattta cagtttttta gcatggtatc 180 agcagaaacc agggaaagcc cctaagctcc tgatctataa tgcaaaaacc ttagcaaaag 240 gggtcccatc aaggttcagt ggcagtggat ctgggacaga tttcactctc accatcagca 300 gtctgcaacc tgaagatttt gcaacttact actgtcaaca tcattatgag agtcctctga 360 cgttcggcgg agggaccaag gtggagatca aacgtacggt ggctgcacca tctgtcttca 420 tcttcccgcc atctgatgag cagttgaaat ctggaactgc ctctgttgtg tgcctgctga 480 ataacttcta tcccagagag gccaaagtac agtggaaggt ggataacgcc ctccaatcgg 540 gtaactccca ggagagtgtc acagagcagg acagcaagga cagcacctac agcctcagca 600 gcaccctgac gctgagcaaa gcagactacg agaaacacaa agtctacgcc tgcgaagtca 660 cccatcaggg cctgagctcg cccgtcacaa agagcttcaa caggggagag tgttgataa 719 <210> 56 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência artificialmente sintetizada <4Ο0> 56

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro.Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 ' 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200' 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 57 <211> 327

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 57 cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60 ggaaetgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120 tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt àactçccagg agagtgtcac agagcaggac 180 agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc áccctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300 agcttcaaca ggggagagtg ttgataa 327

<210> 58 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15

Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 · <213> Homo sapiens <400> 59 <210> 59 <211> 990

<212> ADN gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg aeaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatçgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccâcag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 720 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990

<210> 60 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 : Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val.Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80

Tyr lie Cys Asa Val Asa His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

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Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 ' 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175

Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190

His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220

Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255

Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Ash Gly Gin Pro Glu Asn 260 265 270

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Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His ASn His Tyr Thr 305 310 315 320

Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 61 <211> 984

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 61 gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct cctccaagag cacctccgag 60 agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 240 tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 300 aaatcttgtg tcgagtgccc accg'tgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 360 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 420 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 480 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt 540 gtggtcagcg tcctcaccgt cgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 600 aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg . 660 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 720 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 780 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac 840 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 900 gtcttctcat gctcçgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actácacaca gaagagcctc 960 tccctgtctc cgggtaaatg ataa 984 .

<210> 62 <211> 326 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110

Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125

Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140

Val Ser. His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 165 170 175

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp 180 185 190

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205

Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu 210 215 220

Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240

Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie 245 250 255

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270

Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu. Tyr Ser Lys 275 . 280 , 285

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu 305 310 315 320

Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 63 <211> 995 <213> Homo sapiens <400> 63

<212> ADN gctagcacca agggcccatc cgtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60 agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 240 tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 300 aaatatggtc ccccatgccc accatgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 360 ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 420 tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 480 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 540

Cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 600 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 660 gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 720 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 780 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 840 gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg 900 aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 960 ctctccctgt ctctgggtta atgataagcg gccgc 995

<210> 64 <211> 326 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu.Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125

Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140

Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205

Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 210 215 220

Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys :225 230 235 / 240

Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255

He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300

Cys.Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His .Tyr Thr Gin Lys Ser 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325 atgatgtgga cctgggcact gtggatgttc cctttactct gcaaattcgg cctggcagct 60 ctgccagcta agcctgagaa catttcctgt gtctactact ataggaaaaa tttaacctgc 120 acttggagtc caggaaagga aactagttat acccagtaca cagctaagag aacttacgct 180 tttggaaaaa aacatgataa ttgtacaacc agtagttcta caagtgaaaa tcgtgcttcg · 240 tgctcttttt tccttccaag aataacgatc ccagataatt ataccattga ggtggaagct 300 gaaaatggag atggtgtaat taaatctgat atgacatgtt ggagattaga ggacatagcg 360 aaaactgaac cacctgagat tttcagtgtg aaaccagttt tgggcatcaa acgaatgatt 420 cggattgaat ggataaagcc tgagttggca cctgtttcat ctgatttaaa atatgcactt 480 cgattcagga cagtcaatag taccagctgg atggaagtca acttcgctaa gaaccgtaaa 540 gatacaaacc aaacctacaa ccttatgggg ctgcaggctt ttacagagta tgtcgtagct 600 ctgcgatgtg cggtcaagga gtcaaagttc tggagtgact ggagccaaga aaaaatggga 660 atgactgagg aagaagctcc atgtggcctg gaactgtgga gagtcctgaa accaactgag 720 gtggatggaa gaaggccagt gcggttgtta tggaagaagg caagaggagc cccagtccta 780 gagaaaacac ttggctacaa catatggtac tttccagaaa acaacactaa cctcacagag 840 acagtgaaca ccactaacca gcagcttgaa ctgcatctgg gaggcgagag ctattgggtg 900 tctatgattt cttataattc tcttgggaag tctccagtga ccaccctgag gattccagcc 960 attcaggaaa agtcatttcg gtgcattgag gtcatgcagg cctgccttgc tgaggaccag 1020 ctagtggtga agtggcaaag ctctgctcta gacgtgaaca cttggatgat tgaatggttt .1080 ccggacatgg actcagagca ccccactctt tcctgggaat ctgtgtctca ggccacgaac 1140 tggacaatcc agcaagataa attaaaacct ttctggtgct ataacatctc tgtgtatcca 1200 atgttgcacg acaaagttgg cgagccatat tccatccagg cttatgccaa agaaggcatt 1260 ccatcaaaag gtcctgagac caaggtggag aacattggcg tgaagacggt cacgatcaca 1320 tggaaagaga ttcccaagag tgagagaaag ggtatcatct gcaactacac catcttttac 1380 caagctgaag gtggaaaagg attctccaag acagtcaact ccagcatctt gcagtatggc 1440 ctggagtccc tgaaacgaaa gacctcttac actgttcggg tcatggccag caccagtgct 1500 gggggaatca acgggaccag cataaatttc aagacattgt cattcagtgt ttttgagatt 1560 atccttataa cttctctgat tggtggaggc cttcttattc tcattatcct gacggtggca 1620 tatggtctca aaaaacccaa caaattgact cacctgtgtt ggcccagtgt tcccáaccct 1630 gctgaaagta gtatagccac atggcgtgga gatgatttca aggataagct aaacctgaag 1740 gagtctgatg actctgtgaa cacagaagac aggatcttaa aaccatgttc cacccccagt 1800 gacaagttgg ttattgacaa gtcggtggtg aactttggga atgttctgca agaaatgttc 1860 acagatgaag ccagaaçggg tcaggaaaac aatttaggag gggaaaagaa tgagtatgtg 1920 acccacccct tcagggctga ctgtcccctg gggaaaagtt ttgaggagct cccagtttca 1980 cctgagattc ctcccagaaa atcccaàtac ctacgttcga ggatgccaga agggacctgc 2040 ctagaagccg aagagcagct tctcgtttct ggtcaaagtc tagaaagtct agcaccagac 2100 catgtgcggg aggcagcggc cccaaatccg tatttgaaaa attcagtgac aaccagggaa . 2160 tttcttgtgt ctcaaaaact tccagagcac accaaaggag aagtctaa 2208

<210> 66 <211> 735 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 6 6

Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Phe Pro Leu Leu Cys Lys Phe 1 5 10 15

Gly Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Tyr 20 25 30

Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 35 40 45

Ser Tyr Thr Gin Tyr Thr Ala- Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Lys Lys 50 55 60

His Asp Asn Cys Thr Thr Ser. Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 70 75 80

Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg lie Thr lie Pro Asp Asn Tyr Thr lie 85 90 95

Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val lie Lys Ser Asp Met Thr 100 105 110

Cys Trp Arg Leu Glu.Asp lie Ala Lys Thr Glu Pro Pro Glu He Phe 115 120 125

Ser Val Lys Pro Val Leu Gly lie Lys Arg Met lie Arg lie Glu Trp 130 135 140 lie Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Ala Leu 145 150 155 160

Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 165 170 175

Lys Asn Arg Lys Asp Thr Asn Gin Thr Tyr Asn Leu Met Gly Leu Gin 180 185 190

Ala Phe Thr Glu Tyr Val Val Ala Leu Arg Cys Ala val Lys Glu Ser 195 200 205

Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 210 215 220

Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu.Lys Pro Thr Glu 225 ' 230 235 240

Val Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly 245 250 255

Ala. Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn lie Trp Tyr Phe Pro 260 265 270

Glu Asn Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Val Asn Thr Thr Asn Gin Gin 275 280 285

Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Tyr Trp Val Ser Met lie Ser 290 295 300

Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Ser Pro Val Thr Thr Leu Arg lie Pro Ala 305 310 315 320 lie Gin Glu Lys Ser Phe Arg Cys lie Glu Val Met Gin Ala Cys Leu 325 330 335

Ala Glu Asp Gin Leu Val Val Lys Trp Gin Ser Ser Ala Leu Asp Val 340 , 345 350

Asn Thr Trp Met lie Glu Trp Phe Pro Asp Met Asp Ser Glu His Pro 355 360 355

Thr Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gin Ala Thr Asn Trp Thr lie Gin 370 375 380

Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn lie Ser Val Tyr Pro 385 390 395 400

Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser lie Gin Ala Tyr Ala 405 ' 410 415

Lys Glu Gly lie Pro Ser Lys Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn lie 420 425 430

Gly Val Lys Thr Val Thr lie Thr Trp Lys G1U lie Pro Lys Ser Glu 435 440 445

Arg Lys Gly lie lie Cys Asn Tyr Thr lie Phe Tyr Gin Ala Glu Gly 450 455 460

Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser lie Leu Gin Tyr Gly 455 470 475 480

Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr Thr Val Arg Val Met Ala 485 490 495

Ser Thr Ser Ala Gly Gly lie Asn Gly Thr Ser lie Asn Phe Lys Thr 500 505 510

Leu Ser Phe Ser Val Phe Glu lie lie Leu lie Thr Ser Leu lie Gly 515 520 525

Gly Gly Leu Leu lie Leu lie lie Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu Lys 530 535 540

Lys Pro .Asn Lys Leu Thr His Leu Cys Trp. Pro Ser Val Pro Asn Pro 545 550 555 560

Ala Glu Ser Ser lie Ala Thr Trp Arg Gly Asp Asp Phe Lys Asp Lys 565 570 575

Leu Asn Leu Lys Glu Ser Asp Asp Ser Val Asn Thr Glu Asp Arg lie 580 585 590

Leu Lys Pro Cys Ser Thr Pro Ser Asp Lys Leu Val lie Asp Lys Ser 595 600 605

Val Val Asn Phe Gly Asn Val Leu Gin Glu Met Phe Thr Asp Glu Ala 610 615 620

Arg Thr Gly Gin Glu Asn Asn Leu Gly Gly Glu Lys Asn Glu Tyr Val 625 630 635 640

Thr His Pro Phe Arg Ala Asp Cys Pro Leu Gly Lys Ser Phe Glu Glu 645 650 655

Leu Pro Val Ser Pro Glu lie Pro Pro Arg Lys Ser Gin Tyr Leu Arg 660 665 670

Ser Arg Met Pro Glu Gly Thr Cys Leu Glu Ala Glu Glu Gin Leu Leu 675 680 685

Val Ser Gly Gin Ser Leu Glu Ser Leu Ala Pro Asp His Val Arg Glu 690 695 700

Ala Ala Ala Pro Asn Pro Tyr Leu Lys Asn Ser Val Thr Thr Arg Glu 705 710 715 720

Phe Leu Val Ser Gin Lys Leu Pro Glu His Thr Lys Gly Glu Val 725 730 735

<210> 67 <211> 495 <212> ADN <213> Macaca fascicularis <400> 67 atggcctctc actcagcagg ccccgcgacg tccgtgctgt ttctgctctg ctgcctggga 60 ggctggctga cctcccacac gttgcccgtc catttcctac aaccaagtga tatacagaaa 120 atagtcgagg aattacagtc cctctcgaag atgcttttga aagatgtgaa ggaagacaag 180 ggggtgctcg tgtcccagaa ttacacgctg ccgtgtctca cccctgacgc ccagccgcca 240 aacatcatcc acagcccagc catccgggca tatctcaaga caatcagaca gttagacaac 300 aaatctgtta ttgatgagat catagagcac ctcgacaaac tcatatttca agatgcacca 360 gaaacaaaca tttctgtgcc aacagacacc catgaatgta aacgcttcat cctgactatt 420 tctcaacagt tttcagagtg catggacctt gcattaaaat cgttgacttc tggagcccag 480 caggccacca cttaa 495

<210> 68 <211> 164 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 68

Met Ala Ser His Ser Ala Gly Pro Ala Thr Ser Val Leu Phe Leu Leu 1 5 10 15

Cys Cys Leu Gly Gly Trp Leu Thr Ser His Thr Leu Pro Val His Phe 20 ' 25 30

Leu Gin Pro Ser Asp He Gin Lys lie Val Glu Glu Leu Gin Ser Leu 35 40 45

Ser Lys Met Leu Leu Lys Asp Val Lys Glu Asp Lys Gly Val Leu Val 50 55 60

Ser Gin Asn Tyr Thr Leu Pro Cys Leu Thr Pro Asp Ala Gin Pro Pro 65 70 75 80

Asn He He His Ser Pro Ala He Arg Ala Tyr Leu Lys Thr lie Arg 85 90 95

Gin Leu Asp Asn Lys Ser Val He Asp Glu He He Glu His Leu Asp 100 105 110

Lys Leu He Phe Gin Asp Ala Pro Glu Thr Asn He Ser Val Pro Thr 115 120 125

Asp Thr His Glu Cys Lys Arg Phe He Leu Thr He Ser Gin Gin Phe 130 135 140

Ser Glu Cys Met Asp Leu Ala Leu Lys Ser Leu Thr Ser Gly Ala Gin 145 150 - 155 160

Gin Ala Thr Thr atggctctat' ttgtagtctt tcagacaaca ttcttcttaa cattgctgtc cttgaggact 60 taccagagtg aagtcttggc tgaacgttta ccattgactc ctgtgtcact taaagtttcc 120 accaattcta tacatcagag tttgcattta caatggactg tccacaacct tccttatcat 180 caggaattga aaatggtatt tcagatccag atcagtagga ttgaaacatc caatgtcgtc 240 tgggtgggga attacagcac cactgtgaag tggaaccagg ttctgcattg gagctgggaa 300 tcggaactcc ctttggaatg tgccacacac tttgtaagaa tcaagagtgt gatagacgat 360 gccagtttcc ctgagccaaa tttctggagc aactggagtt cctgggagga agtcagtgta 420 caagattatc ttggacgggg cactttgttc gttttccctaaagataagct ggtggaagaa 480 ggctccaatg ttaccatttg ttatgtttct aggaacattc aaaataatgt atcctgttat 540 ttggaaggga aacagattca cggagaacaa cttgatccac atgtaactgc attcaaçttg 600 aatagtgtgc ctttcattag gaatagaggg acaaatatct attgtgaggc gagtcaagga 660 aatgtcagta aaggcataga aggcatcgtt ctctttgtct caaaagtact tgaggagccc 720 aaggactttt cttgtgaatc ccaggacttc aacactttgc actgtacttg ggatcctggg 780 acggacactg ccttggggtg gtctaaacaa ccttcccaaa gctacacttt atttgaatca 840 ttttctgggg aaaagaaact ttgtacgcac aaaaactggt gtaattggca aataactcaa 900 gactcacaag aaatgtataa cttcacactc atagctgaaa attacttaag gaagagaagt 960 gtcaatatcc ttrttaacct gactcatcga gtttatttaa tgaatccttt tagtgtcaac 1020 tttgaaaatg taaatgccac aaatgccatc atgacctgga aggtgcactc catgaggaat 1080 aatttcacat atttgtgtca gattgaactc catggtgaag gaaaaatgat gcaatacgat 1140 gtttctatca acgtgaacgg tgagtacttc ttaagtgaac tggaacctgc cacagaatat 1200 atggcccgag tacgctgtgc tgatgccagc cacttctgga aatggactga atggagtggt 1260 cagaacttca ccacacttga agctgctccg tcagaggccc ctgatgtctg gagaagtgtg 1320 aactcagagc caggaaatca tactgtgacc ttattctgga agccattatc aaaactgcat 1380 gccaatggaa agatcctgtt ctataatgta gttgtagaaa acctagacaa accgtccagg 1440 tcagagctcc gttccattcc ggcaccagcc aacagcacaa aactaatcct cgacaggtgt 1500 tcctaccaaa tctgcgtcac agctaacaac agtgtgggcg cttctcctgc ttctataata 1560 gtcatctctg cggaccctga aaacaaagag gttgaggaag aaagaattgc aggcacagag 1620 ggtggattct ctctgtcttg gaaaccccag cctggagatg ttataggcta tgttgtggac 1680 tggtgtgacc atccccagga tgtgctccag tggaagaatg taggtcccaa taccacaagc 1740 acagtcatta gcacagatgc ttttaggcca ggagttcgat acgacttcag aatctatggg 1800 ttatctacaa aaaggattgc ttgtttatta gagaaaaaaa caggatactc tcaggaactg 1860 gctccttcag acaaccctca egtgctggta gatatgttga catcccactc cttcactctg 1920 aqttgqaaag attactctac tqaatctcaa cctgqtttta tacaaqgqta ccatqtctat 1980 ctgaaatcca aggcgaggca gtgccaccca cgatttcaaa aggcagttct ttcagatggt 2040 tcagaatgtt gcaaatacàa aattgacaac ccagaagaaa aggcattgat tgtggacaac 2100 ctaaagccag aatccttcta tgagtttttc gttactccat tcactagtgc tggcgagggc 2160 cccaatgcta cgttcacgaa ggtcacgact ccggatgaac actcctccat gttgattcgt 2220 atcctactgc ccatggtttt ctgcgtcttg ctcatcatga tcgtgtgcta cttgaaaagt 2280 cagtggatca aggagacgtg ttatcctgac atccctgacc cttacaagag cagcatcctg 2340 tcgttaataa aattcaagga gaaccctcac ctaacaataa tgaatgtcag tgactgtatc 2400 ccagatgcta ttgaagttgt cagcaagcca gaagggacaa agatacagct cctaggcact 2460 aggaagtcac tcacagaaac tgagttaact aagcctaact acctttatct ccttccaaca 2520 gaaaagaatc actctggccc tggcccctgc atctgttttg agaactttac ctacaaccag 2580 gcagcttctg acgctggctc ttgtggccat gttccagtac cccccaaagc cccaccaagt 2640 atgctaggac taatgacctc acctgaaaat gtactaaagg cgctagaaaa aaactacatg 2700 aactccctgg gagaagtccc agctggagaa acaagtttga attatgtgtc ccagttggct 2760 tcacccatgt ctggagacaa ggacagtctc ccaacaaacc cagtggagcc accacactgt 2820 tcagagtata aaatgcaaat ggcagtcccc ctgcgtcttg ccctgcctcc cccgaccgag 2880 aatagcagcc tttcctcaat taccctttta gatccaggtg aacactaccg ctaa 2934

<210> 70 <211> 977 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 70

Met Ala Leu Phe Val Val Phe Gin Thr Thr Phe Phe Leu Thr Leu Leu 1 5 10 15 .

Ser Leu Arg Thr Tyr Gin Ser Glu Val Leu Ala Glu Arg Leu Pro Leu 20 25 30

Thr Pro Val Ser Leu Lys Val Ser Thr Asn Ser lie His Gin Ser Leu 35 40 45

His Leu Gin Trp Thr Val His Asn Leu Pro Tyr His Gin Glu Leu Lys 50 55 60

Met Val Phe Gin He Gin lie Ser Arg lie Glu Thr Ser Asn Val Val 65 70 75 80

Trp Val Gly Asn Tyr Ser Thr Thr Val Lys. Trp Asn Gin Val Leu His 85 90 95

Trp Ser Trp Glu Ser Glu Leu Pro Leu Glu Cys Ala Thr His Phe Val 100 105 110

Arg lie Lys Ser Val lie Asp Asp Ala Ser Phe Pro Glu Pro Asn Phe 115 120 125

Trp Ser Asn Trp Ser Ser Trp Glu Glu Val Ser Val Gin Asp Tyr Leu 130 135 140

Gly Arg Gly Thr Leu Phe Val Phe Pro Lys Asp Lys Leu Val Glu Glu 145 150 155 160

Gly Ser Asn Val Thr lie Cys Tyr Val' Ser Arg Asn lie Gin Asn Asn 165 170 175

Vai Ser Cys Tyr Leu Glu Gly Lys Gin lie His Gly Glu Gin Leu Asp 180 185 190

Pro His Vai Thr Ala Phe Àsn Leu Asn Ser Vai Pro Phe. Ile Arg Asn 195 200 205

Arg Gly Thr Asn Ile Tyr Cys Glu Ala Ser Gin Gly Asn Vai Ser Lys 210 215 220

Gly Ile Glu Gly Ile Vai Leu Phe Vai Ser Lys Vai Leu Glu Glu Pro 225 230 235 240

Lys Asp Phe Ser Cys Glu Ser Gin Asp Phe Asn Thr Leu His Cys Thr 245 250 255

Trp Asp Pro Gly Thr Asp Thr Ala Leu Gly Trp Ser Lys Gin Pro Ser 260 265 270

Gin Ser Tyr Thr Leu Phe Glu Ser Phe Ser Gly Glu Lys Lys. Leu Cys 275 280 285

Thr His Lys Asn Trp Cys Asn Trp Gin Ile Thr Gin Asp Ser Gin Glu 290 295 300

Met Tyr Asn Phe Thr Leu Ile Ala Glu Asn Tyr Leu Arg Lys Arg' Ser 305 310 315 320

Vai Asn lie Leu Phe Asn Leu Thr His Arg Vai Tyr Leu Met Asn Pro 325 330 335

Phe Ser Vai Asn Phe Glu Asn Vai Asn Ala Thr Asn Ala lie Met Thr 340 345 350

Trp Lys Vai His Ser Met Arg Asn Asn Phe Thr Tyr Leu Cys Gin lie 355 360 365

Glu Leu His Gly Glu Gly Lys Met Met Gin Tyr Asp Vai Ser lie Asn 370 375 380

Vai Asn Gly Glu Tyr Phe Leu Ser Glu Leu Glu Pro Ala Thr Glu Tyr 385 390 395 400

Met Ala Arg Vai Arg Cys Ala Asp Ala Ser His Phe Trp Lys Trp Thr 405 410 415

Glu Trp Ser Gly Gin Asn Phe Thr Thr Leu Glu Ala Ala Pro Ser Glu 420 425 430

Ala Pro Asp Vai Trp Arg Ser Vai Asn Ser Glu Pro Gly Asn His Thr 435 44Q 445

Vai Thr Leu Phe Trp Lys Pro Leu Ser Lys Leu His Ala Asn Gly Lys 450 455 460

Ile Leu Phe Tyr Asn Vai Vai Vai Glu Asn Leu Asp Lys Pró Ser Arg 465 470 . 475 480

Ser Glu Leu Arg Ser lie Pro Ala Pr.o Ala Asn Ser Thr Lys Leu Ile 485 490 '495

Leu Asp Arg Cys Ser Tyr Gin Ile Cys Vai Thr Ala Asn Asn Ser Vai 500 505 510

Gly Ala Ser Pro Ala Ser lie lie Val He Ser Ala Asp Pro Glu Asn 515 520 525 · .

Lys Glu Val Glu Glu Glu Arg Tie Ala Gly Thr Glu Gly Gly Phé Ser 530 535 540

Leu Ser Trp Lys Pro Gin Pro Gly Asp Val He Gly Tyr Val Val Asp 545 550 555 560

Trp Cys Asp His Pro Gin Asp Val Leu Gin Trp Lys Asn Val Gly Pro 565 570 575

Asn Thr Thr Ser Thr Val He Ser Thr Asp Ala Phe Arg Pro Gly Val 580 585 590

Arg Tyr Asp Phe Arg He Tyr Gly Leu Ser Thr Lys Arg He Ala Cys 595 600 605

Leu Leu Glu Lys Lys Thr Gly Tyr Ser Gin Glu Leu Ala Pro Ser Asp 610 615 620

Asn Pro His Val Leu Val Asp Met Leu Thr Ser His Ser Phe Thr Leu 625 630 635 640

Ser Trp Lys Asp Tyr Ser Thr Glu Ser Gin Pro Gly Phe lie Gin Gly 645 650 655

Tyr His Val Tyr Leu Lys Ser Lys Ala Arg Gin Cys His Pro Arg Phe 660 665 670

Gin Lys Ala Val Leu Ser Asp Gly Ser Glu Cys Cys Lys Tyr Lys He 675 680 685

Asp Asn Pro Glu Glu Lys Ala Leu He Val Asp Asn Leo Lys Pro Glu 690 695 700

Ser Phe Tyr Glu Phe Phe Val Thr Pro Phe Thr Ser Ala Gly Glu Gly 705 710 715 720

Pro Asn Ala Thr Phe Thr Lys Val Thr Thr Pro Asp Glu His Ser Ser 725 730 735

Met Leu He Arg He Leu Leu Pro Met Val Phe Cys Val Leu Leu He 740 745 750

Met He Val Cys Tyr Leu Lys Ser Gin Trp lie Lys Glu Thr Cys Tyr .755 760 765

Pro Asp He Pro Asp Pro Tyr Lys Ser Ser He Leu Ser Leu He Lys 770 775 780

Phe Lys Glu Asn Pro His Leu Thr lie Met Asn Val Ser Asp Cys He 785 790 795 800

Pro Asp Ala He Glu Val Val Ser Lys Pro Glu Gly Thr Lys lie Girt 805 810 815

Leu Leu Gly Thr Arg Lys Ser Leu Thr. Glu Thr Glu Leu Thr Lys Pro 820 825 830

Asn Tyr Leu Tyr Leu Leu Pro Thr Glu Lys Asn His Ser Gly Pro Gly 835 840 845

Pro Cys lie Cys Phe Glu Asn Phe Thr Tyr Asn Gin Ala Ala Ser Asp 850 855 860

Ala Gly Ser Cys Gly His Val Pro Val Pro Pro Lys Ala Pro Pro Ser 865 870 875 880

Met Leu Gly Leu Met Thr Ser Pro Glu Asn Val Leu Lys Ala Leu Glu 885 890 895

Lys Asn Tyr Met Asn Ser Leu Gly Glu Val Pro Ala Gly Glu Thr Ser 900 905 910

Leu Asn Tyr Val Ser Gin Leu Ala Ser Pro Met Ser Gly Asp Lys Asp 915 920 925

Ser Leu Pro Thr Asn Pro Val Glu Pro Pro His Cys Ser Glu Tyr Lys 930 935 940

Met Gin Met Ala Val Pro Leu Arg Leu Ala Leu Pro Pro Pro Thr Glu 945 950 955 960

Asn Ser Ser Leu Ser Ser lie Thr Leu Leu Asp Pro Gly Glu His Tyr 965 970 975

Arg

<210> 71 <211> 1665 <212> ADN <213> Macaca fascicularis <400> 71 atgatgtgga cctgggcact gtggatgttc cctttaetct gcaaattcgg cctggcagct 60. ctgccagcta agcctgagaa catttcctgt gtctactact ataggaaaaa tttaacctgc 120 acttggagtc caggaaagga aactagttat acccagtaca cagctaagag aacttacgct 180 tttggaaaaa aacatgataa ttgtacaacc agtagttcta caagtgaaaa tcgtgcttcg 240 tgctcttttt tccttccaag aataaçgatc ccagataatt ataccattga ggtggaagct 300 gaaaatggag atggtgtaat t.aaatctgat atgacatgtt ggagattaga ggacatagcg 360 aaaactgaac cacctgagat tttcagtgtg aaaccagttt tgggcatcaa acgaatgatt 420 cggattgaat ggataaàgcc tgagttggca cctgtttcat ctgatttaaa atatgcactt 480 cgattcagga cagtcaatag taccagctgg atggaagtca acttcgctaa gaaccgtaaa 540 gatacaaacc aaacctacaa ccttatgggg ctgcaggctt ttacagágta tgtcgtagct · 600 ctgcgatgtg cggtcaagga gtcaaagttc tggágtgact ggagccaaga aaaaatggga 660 atgactgagg aagaagctcc atgtggcctg gaactgtgga gagtectgaa accaactgag 720 gtggatggaa gaaggccagt gcggttgtta tggaagaagg caagaggagc cccagtccta 780 gagaaaacac ttggctacaa catatggtac tttccagaaa acaacactaa cctcacagag 840 acagtgaaca ccactaacca gcagcttgaa ctgcatctgg gaggcgagag ctattgggtg 900 tctatgattt cttataattc tcttgggaag tctccagtga ccaccctgag gattccagcc 960 attcaggaaa agtcatttcg gtgcattgag gtcatgcagg cctgccttgc tgaggaccag 1020 ctagtggtga agtggcaaag ctctgctcta gacgtgaaca cttggatgat tgaatggttt 1080 ccggacatgg actcagagca ccccactctt tcctgggaat ctgtgtctca ggccacgaac 1140 tggacaatcc agcaagataa attaaaacct ttctggtgct ataacatctc tgtgtatcca 1200 atgttgcacg acaaagttgg cgagccatat tccatccagg cttatgccaa, agaaggcatt 1260 ccatcaaaag gtcctgagac caaggtggag aacattggcg tgaagacggt cacgatcaca 1320 hggâQpgggg ttCCCclâÇfclÇí tCfclÇfclÇíclããÇJ ÇÇtStCâtCt CJCSSCtSCSC Cât-CttttSC 1380 caagctgaag gtggaaaagg attctccaag acagtcaact ccagcatctt gcagtatggc 1440 ctggagtccc tgaaacgaaa gacctcttac actgttcggg tcatggccag caccagtgct 1500 gggggaatca acgggaccag cataaatttc aagacattgt cattcagtgt ttttgagatt 1560 atccttataa cttctctgat tggtggaggc cttcttattc tcattatcct gacggtggca 1620 tatggtctca aaaaacccaa caaattgact cacctgtgtt aatga 1665

<210> 72 <211> 553 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <4Ο0> 72

Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Phe Pro Leu Leu Cys Lys Phe 15 10 15

Gly Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Tyr 20 25 30

Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 35 40 45

Ser Tyr Thr Gin Tyr Thr Ala Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Lys Lys 50 55 60

His Asp Asn Cys Thr Thr Ser Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 70 75 80

Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg lie Thr lie Pro Asp Asn Tyr Thr lie 85 90 95

Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val lie Lys Ser Asp Met Thr 100 105 110

Cys Trp Arg Leu Glu Asp lie Ala Lys Thr Glu Pro Pro Glu lie Phe 115 120 125

Ser Vai Lys Pro Vai Leu Gly lie Lys Arg Met lie Arg lie Glu Trp 130 135 ' 140 lie Lys Pro Glu Leu Ala Pro Vai Ser Ser Asp Leu Lys Tyr' Ala Leu 145 150 155 160

Arg Phe Arg Thr Vai Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Vai Asn Phe Ala 165 170 175

Lys Asn Arg Lys Asp Thr Asn Gin Thr Tyr Asn Leu Met Gly Leu Gin 180 185 190

Ala Phe Thr Glu' Tyr Vai Vai Ala Leu Arg Cys Ala Vai Lys Glu Ser 195 200 205

Lys Phe Trp.Ser Asp Trp Ser Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 210 215 220

Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Vai Leu Lys Pro Thr Glu 225 230 235 240

Vai Asp Gly Arg Arg Pro Va] Arg Léu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly .245 250 255

Ala Pro Vai Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn lie Trp Tyr Phe Pro 260 265 270

Glu Asn Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Vai Asn Thr Thr Asn Gin Gin 275 280 285

Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Tyr Trp vai Ser Met lie Ser 290 295 300

Tyr Asn Ser Léu Gly Lys. Ser Pró Vai Thr ihr Léu Arg lie Pro Ala 305 310 , 315 320

Ile Gin Glu Lys Ser Phe Arg Cys He Glu vai Met Gin Ala Cys Leu 325 330 335

Ala Glu Asp Gin Leu Vai Vai Lys Trp Gin Ser Ser Ala Leu Asp Vai 340 345 350

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Thr Leu Ser Trp Glu Ser Vai Ser Gin Ala Thr Asn Trp Thr Ile Gin 370 375 380

Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn Ile Ser Vai Tyr Pro 385 390 395 400

Met Leu His Asp Lys Vai Gly Glu Pro.Tyr Ser Ile Gin Ala Tyr Ala 405 410 415

Lys Glu Gly lie Pro Ser Lys Gly Pro Glu Thr Lys Vai Glu Asn Ile 420 425 430

Gly Vai Lys Thr Vai Thr lie Thr Trp Lys Glu lie Pro Lys Ser Glu 435 440 445

Arg Lys Gly lie lie Cys Asn Tyr Thr lie Phe Tyr Gin Ala Glu Gly 450 455 460

Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser He Leu Gin Tyr Gly 465 470 475 480

Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr Thr Val Arg Val Met Ala 485 490 495

Ser Thr Ser Ala Gly Gly lie Asn Gly Thr Ser He Asn Phe Lys Thr 500 505 510

Leu Ser Phe Ser Val Phe Glu lie lie Leu lie Thr Ser Leu He Gly 515 520 525

Gly Gly Leu Leu He Leu He He Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu Lys 530 535 540

Lys Pro Asn Lys Leu Thr His Leu Cys 545 550

<210> 73 <211> 1665 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 73 atgatgtgga cctgggcact gtggatgctc ccctcactct gcaaattcag cctggcagct 60 ctgccagcta agcctgagaa catttcctgt gtctactact ataggaaaaa tttaacctgc 120 acttggagtc caggaaagga aaccagttat acccagtaca cagttaagag aacttacgct 180 tttggagaaa aacatgataa ttgtacaacc aatagttcta caagtgaaaa tcgtgcttcg 24Ó ; tgctcttttt tccttccaag aataacgatc ccagataatt ataccattga ggtggaagct 300 gaaaatggag atggtgtaat taaatctcat atgacatact ggagattaga gaacatagcg 360 aaaactgaac cacctaagat tttccgtgtg aaaccagttt tgggcatcaa acgaatgatt 420 caaattgaat ggataaagcc tgagttggcg cctgtttcat ctgatttaaa atacacactt 480 cgattcagga cagtcaacag taccagctgg atggaagtca acttcgctaa gaaccgtaag 540 gataaaaacc aaacgtacaa cctcacgggg ctgcagcctt ttacagaata tgtcatagct 600 ctgcgatgtg cggtcaagga gtcaaagttc tggagtgact ggagccaaga aaaaatggga 660 atgactgagg aagaagctcc atgtggcctg gaactgtgga gagtcctgaa accagctgag 720 gcggatggaa gaaggccagt gcggttgtta tggaagaagg caagaggagc cccagtccta 780 gagaaaacac ttggctacaa catatggtac tatccagaaa gcaacactaa cctcacagaa 840 acaatgaaca ctactaacca gcagcttgaa ctgcatctgg gaggcgagag cttttgggtg 900 tctatgattt cttataattc tcttgggaag tctccagtgg ccaccctgag gattccagct 960 attcaagaaa aatcgtttca gtgcattgag gtcatgcagg cctgcgttgc tgaggacóag 1020 ctagtggtga agtggcaaag ctctgctcta gacgtgaaca cttggatgat tgaatggttt 1080 ccggatgtgg actcagagcc caccaccctt tcctgggaat ctgtgtctca ggccacgaac 1140 tggacgatcc agcaagataa attaaaacct ttcCggtgct ataacatctc tgtgtatcca 1200 atgttgcatg acaaagttgg cgagccatat tccatccagg cttatgccaa agaaggcgtt 1260 ccatcagaag gtcctgagac caaggtggag aacattggcg tgaagacggt cacgatcaca 1320 tggaaagaga ttcccaagag tgagagaaag ggtatcatct gcaactacac catcttttac 1380 caagctgaag gtggaaaagg attctccaag acagtcaatt ccagcatctt gcagtacggc 1440 ctggagtccc tgaaacgaaa gacctcttac attgttcagg tcatggccag caccagtgct 1500 gggggaacca acgggaccag cataaatttc aagacattgt cattcagtgt ctttgagatt 1560 atcctcataa cttctctgat tggtggaggc cttcttattc tcattatcct gacagtggca 1620 tatggtctca aaaaacccaa caaattgact catctgtgtt aatga 1665

<210> 74 <211> 553 <212> PRT <213> Homo sapiens

Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe 1 5 10 15

Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Tyr 20 25 30

Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr . 35 40 45

Ser Tyr Thr Gin Tyr, Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys 50 55 60

His Ásp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 6.5 70 75 80

Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg lie Thr lie Pro Asp Asn Tyr Thr lie 85 90 95

Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val lie Lys Ser His Met Thr 100 105 110

Tyr Trp Arg Leu Glu Asn He Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys lie Phe 115 120 125

Arg Val Lys Pro Val Leu Gly He Lys Arg Met lie Gin He Glu,Trp 130 135 140 lie Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu 145 150 . 155 160

Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 165 170 ... 175

Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gin Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gin 180 185. 190

Pro Phe Thr Glu Tyr Val lie Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser 195 200 205

Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 210 215 220

Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg. Val Leu Lys Pro Ala Glu 225 230 235 240

Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly 245 250 255

Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn He Trp Tyr Tyr Pro 260 265 270

Glu Ser Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gin Gin 275 280 285

Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp val Ser Met lie Ser 290 295 300

Tyr, Asn Ser Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg lie Pro Ala 305 310 315 320

He Gin Glu Lys Ser Phe Gin Cys lie Glu Val Met Gin Ala Cys Val 325 330 335

Ala Glu Asp Gin Leu Val Val Lys Trp Gin Ser Ser Ala Leu Asp Val 340 345 350

Asn Thr Trp Met lie Glu Trp Phe Pro Asp val Asp Ser Glu Pro Thr 355 360 365

Thr,Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gin Ala Thr Asn Trp Thr He Gin 370 375 J 380

Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn lie Ser Val Tyr Pro 385 390 '395 . 400

Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser He Gin Ala Tyr Ala 405 410 415

Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn lie 420 425 430

Gly Val Lys Thr Val Thr lie Thr Trp Lys Glu He Pro Lys Ser Glu 435 440 445

Arg Lys Gly He He Cys Asn Tyr Thr He Phe Tyr Gin Ala Glu Gly 450 455 460 .

Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser lie Leu Gin Tyr Gly 465 470 475 480

Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr lie Val Gin Val Met Ala 485 490 495

Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser Ile Asn Phe Lys Thr 500 505 510

Leu Ser Phe Ser vai Phe Glu lie lie Leu lie Thr Ser Leu lie Gly 515 520 525

Gly Gly Leu Leu lie Leu lie Ile Leu Thr Vai Ala Tyr Gly Leu Lys 530 535 540

Lys Pro Asn Lys Leu Thr His Leu Cys 545 550

<210> 75 <211> 2199 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 75 atgatgtgga cctgggcact gtggatgctc ccctcactct gcaaattcag cctggcagct 60 ctgccagcta agcctgagaa catttcctgt gtctactact ataggaaaaa tttaacctgc 120 acttggagtc caggaaagga aaccagttat acccagtaca cagttaagag aacttacgct 180 tttggagaaa aacatgataa ttgtacaacc aatagttcta caagtgaaaa tcgtgcttcg 240 tgctcttttt tccttccaag aataacgatc ccagataatt ataccattga ggtggaagct 300 gaaaatggag atggtgtaat taaatctcat atgacatact ggagattaga gaacatagcg 360 aaaactgaac cacctaagat tttccgtgtg aaaccagttt tgggcatcaa acgaatgatt 420 caaattgaat ggataaagcc tgagttggcg cctgtttcat ctgatttaaa atacacactt 480 cgattcagga cagtcaacag taccagctgg atggaagtca acttcgctaa gaaccgtaag 540 gataaaaacc aaacgtacaa cctcacgggg ctgcagcctt ttacagaata tgtcatagct 600 ctgcgatgtg cggtcaagga gtcaaagttc tggagtgact ggagccaaga aaaaatggga 660 atgactgagg aagaagctcc atgtggcctg gaactgtgga gagtcctgaa accagctgag 720 gcggatggaa gaaggccagt gcggttgtta tggaagaagg caagaggagc cccagtccta 780 gagaaaacac ttggctacaa catatggtac tatccagaaa gcaacactaa cctcacagaa 840 acaatgaaca ctactaacca gcagcttgaa ctgcatctgg gaggcgagag cttttgggtg 900 tctatgattt cttataattc tcttgggaag tctccagtgg ccaccctgag gattccagct 960 attcaagaaa aatcgtttca gtgcattgag gtcatgcagg cctgcgttgc tgaggaccag 1020 ctagtggtga agtggcaaag ctctgctcta gacgtgaaca cttggatgat tgaatggttt 1080 ccggatgtgg actcagagcc caccaccctt tcctgggaat ctgtgtctca ggccacgaac 1140 tggacgatcc agcaagataa attaaaacct ttctggtgct ataacatctc tgtgtatcca 1200 atgttgcatg acaaagttgg cgagccatat tccatccagg cttatgccaa agaaggcgtt 1260 ccatcagaag gtcctgagac caaggtggag aacattggcg tgaagacggt cacgatcaca 1320 tggaaagaga ttcccaagag tgagagaaag ggtatcatct gcaactacac catcttttac 1380 caagctgáag gtggaaaagg attctccaag acagtcaatt ccagcatctt gcagtacggc 1440 ctggagtccc tgaaacgaaa gacctcttac attgttcagg tcatggccag caccagtgct 1500 gggggaaçça acgggaccag cataaatttc aagacattgt cattcagtgt ctttgagatt 1560 atcctcataa cttctctgat tggtggaggc cttcttattc tcattatcct gacagtggca 1620 tatggtctca aaaaacccaa caaattgact catctgtgtt ggcccaccgt tcccaaccct 1680 gctgaaagta gtatagccac atggcatgga gatgatttca aggataagct aaacctgaag 1740 gagtctgatg actctgtgaa cacagaagac aggatcttaa aaccatgttc cacccccagt 1800 gacaagttgg tgattgacaa gttggtggtg aactttggga atgttctgca agaaattttc 1860 acagatgaag ccagaacggg tcaggaaaac aatttaggag gggaaaagaa tgggtatgtg 1920 acctgcccct tcaggcctga ttgtcccctg gggaaaagtt ttgaggagct cccagtttca 1980 cctgagattc cgcccagaaa atcccaatac ctacgttcga ggatgccaga ggggacccgc 2040 ccagaagcca aagagcagct tctcttttct ggtcaaagtt tagtaccaga tcatctgtgt 2100 gaggaaggag ccccaaatcc atatttgaaa aattcagtga cagccaggga atttcttgtg 2160 tctgaaaaac ttccagagca caccaaggga gaagtctaa 2199

<210> 76 <211> 732 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76

Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe 1 5 10 15

Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Tyr 20 25 30

Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 35 40 45

Ser Tyr Thr Gin Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys 50 55 60

His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 70 75 80

Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg lie Thr lie Pro Asp Asn Tyr Thr lie 85 90 95

Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly. Val lie Lys Ser His Met Thr 100 105 110

Tyr Trp Arg Leu Glu Asn lie Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys lie Phe 115 120 .125

Arg Val Lys Pro Val Leu Gly lie Lys Arg Met lie Gin lie Glu Trp 130 135 '140 lie Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu 145 150 155 160

Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 165 170 175

Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gin Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gin 180 185 190

Pro Phe Thr Glu Tyr Val lie Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser 195 200 205

Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 210 . 215 220

Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala Glu 225 230 235 240

Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly 245 250 255

Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn lie Trp Tyr Tyr Pro 260 265, 270

Glu Ser Asn Thr Asn Léu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gin Gin 275 280 285

Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met lie Ser 290 295 - 300

Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Set Pro Val Ala Thr Leu Arg lie Pro Ala 305 310 315 320 lie Gin Glu Lys Ser Phe Gin Cys lie Glu Val Met Gin Ala Cys Val 325 330 335

Ala Glu Asp Gin Leu Val Val Lys Trp Gin Ser Ser Ala Leu Asp Val 340 345 350

Asn Thr Trp Met lie Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro Thr 355 360 365 .

Thr Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gin Ala Thr Asn Trp Thr lie Gin 370 375 380

Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn lie Ser Val Tyr Pro 385 390 395 400

Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser lie.Gin Ala Tyr Ala 405 410 415

Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn lie 420 425 430

Gly Val Lys Thr Val Thr lie Thr Trp Lys Glu He Pro Lys Ser Glu 435 440 445

Arg Lys Gly lie lie Cys Asn Tyr Thr lie Phe Tyr Gin Ala Glu Gly 450 455 460

Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser lie Leu Gin Tyr Gly 465 470 475 480

Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr lie Val Gin Val Met Ala 485 490 495

Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser lie Asn Phe Lys Thr 500 505 510

Leu Ser Phe Ser Val Phe Glu lie lie Leu lie Thr Ser Leu lie Gly 515 520 525

Gly Gly Leu Leu lie Leu lie lie Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu Lys 530 535 540

Lys Pro Asn Lys Leu Thr His Leu Cys Trp Pro Thr Val Pro Asn Pro 545 550 555 560

Ala Glu Ser Ser lie Ala Thr Trp His Gly Asp Asp Phe Lys Asp Lys 565 570 575

Leu Asn Leu Lys Glu Ser Asp Asp Ser Val Asn Thr Glu Asp Arg lie 580 585 590

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Val Val Asn Phe Gly Asn Val Leu Gin Glu lie Phe Thr Asp Glu Ala 610 615 620

Arg Thr Gly Gin Glu Asn Asn Leu Gly Gly Glu Lys Asn Gly Tyr Val ,625 630 635 . 640

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Leu Pro Val Ser Pro Glu He Pro Pro Arg Lys Ser Gin Tyr Leu Arg 660 665 670

Ser Arg Met Pro Glu Gly Thr Arg Pro Glu Ala Lys Glu Gin Leu Leu 675 680 685

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Pro Asn Pro Tyr Leu Lys Asn Ser Val Thr Ala Arg Glu Phe Leu Val 705 710 715 720

Ser Glu Lys Leu Pro Glu His Thr Lys Gly Glu Val 725 730

<210> 77 <211> 1542 <212> ADN <213> Homo sapiens <4Ο0> 77 atgatgtgga cctgggcact gtggatgctc ccttcactct gcaaattcag cctggcagct 60 ctgccagcta agcctgagaa catttcctgt.gtctactact ataggaaaaa tttaacctgc 120 acttggagtc caggaaagga aaccagttat acccagtaca cagttaagag aacttacgct 180 tttggagaaa aacatgataa ttgtacaacc aatagttcta caagtgaaaa tcgtgcttcg 240 tgctcttttt tccttccaag aataacgatc ccagataatt ataccattga ggtggaagct· 300 gaaaatggag atggtgtaat taaatctcat atgacatact ggagattaga gaacatagcg- 360 aaaactgaác cacctaagat tttccgtgtg aaaccagttt tgggcatcaa acgaatgatt 420 caaattgaat ggataaagcc tgagttggcg cctgtttcat ctgatttaaa atacacactt 480 cgattcagga cagtcaacag taccagctgg atggaagtca acttcgctaa gaaccgtaag 540 gataaaaacc aaacgtacaa cctcacgggg ctgcagcctt ttacagaata tgtcatagct 600 ctgcgatgtg cggtcaagga gtcaaagttc tggagtgact ggagccaaga aaaaatggga 660 atgactgagg aagaagctcc atgtggcctg gaactgtgga gagtcctgaa accagctgag 720 gcggatggaa gaaggccagt gcggttgtta tggaagaagg caagaggagc cccàgtccta 780 gagaaaacac ttggctacaa catatggtac tatccagaaa gcaacactaa cctcacagaa 840 acaatgaaca ctactaacca gcagcttgaa ctgcatctgg gaggcgagag cttttgggtg 900 tctatgattt cttataattc tcttgggaag tctccagtgg ccaccctgag gattccagct 960 attcaagaaa aatcgtttca gtgcattgag gtcatgcagg cctgcgttgc tgaggaccag 1020 ctagtggtga agtggcaaag ctctgctcta gacgtgaaca cttggatgat tgaatggttt 108.0 ccggatgtgg' actcagagcc caccaccctt tcctgggaat ctgtgtctca ggccacgaac 1140 tggacgatcc agcaagataa attaaaacct ttctggtgct ataacatctc tgtgtatcca . 1200 atgttgcatg acaaagttgg cgagccatat tccatccagg cttatgccaa agaaggcgtt 1260 ccatcagaag gtcctgagac caaggtggag aacattggcg tgaagacggt cacgatcaca 1320 tggaaagaga ttcccaagag tgagagaaag ggtatcatct gcaactacac catcttttac 1380 caagctgaag gtggaaaagg attctccaag acagtcaatt ccagcatctt gcagtacggc 1440 ctggagtccc tgaaacgaaa gacctcttac attgttcagg tcatggccag caccagtgct 1500 gggggaacca acgggaccag cataaatttc aagacattgt ca 1542

<210> 78 <211> 514 <212> PRT <213> Homo sapiens

Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe 1 5 10 15

Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Tyr 20 25 -30

Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 35 40 45

Ser Tyr Thr Gin Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys 50 55 60

His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 70 75 80

Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg He Thr lie Pro Asp Asn Tyr Thr He 85 90 95

Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val lie Lys Ser His Met Thr 100 105 110

Tyr Trp Arg Leu Glu Asn He Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys lie Phe 115 120 125

Arg Val Lys Pro Val Leu Gly lie Lys Arg Met lie Gin' lie Glu Trp 130 135 140 lie Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu 145 150 155 160

Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 165 170 175

Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gin Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gin 180 185 190

Pro Phe Thr Glu Tyr Val He Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser 195 200 205

Lys Phe. Trp Ser Asp Trp Ser Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 210 215 220

Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu L,ys Pro Ala Glu 225 230 235 240

Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly 245 250 255

Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn He Trp Tyr Tyr Pro 260 265 270

Glu Ser Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gin Gin 275 280 285

Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met lie Ser 290 295 300

Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg lie Pro Ala 305 310 315 320

He Gin Glu Lys Ser Phe Gin Cys He Glu Val Met Gin Ala Cys Val 325 330 335

Ala Glu Asp Gin Leu Val Val Lys Trp Gin Ser Ser Ala Leu Asp Val 340 345 350

Asn Thr Trp Met He Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro Thr 355 360 365

Thr Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gin Ala Thr Asn Trp Thr lie Gin 370 375 380

Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn He Ser Val Tyr Pro 385 390 395 400

Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser lie Gin Ala Tyr Ala 405 410 415

Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn lie 420 425 430

Gly Val Lys Thr Val Thr He Thr Trp Lys Glu He Pro Lys Ser Glu 435 440 445

Arg Lys Gly lie lie Cys Asn Tyr Thr He Phe Tyr Gin Ala Glu Gly 450 455 460

Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser He Leu Gin Tyr Gly 465 470 475 480

Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr lie Val Gin Val Met Ala 485 490 495

Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser He Asn Phe Lys Thr 500 505 510

Leu Ser

<210> 79 <211> 662 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79

Met Lys Leu Ser Pro Gin Pro Ser Cys Val Asn Leu Gly Met Met Trp 1 5 10 15

Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe Ser Leu Ala 20 25 30

Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn He Ser Cys Val Tyr Tyr Tyr Arg 35 40 45

Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr Ser Tyr Thr 50 55 60

Gin Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys His Asp Asn 65 70 75 80

Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser Cys Ser Phe 85 90 95

Phe Leu Pro Arg lie Thr lie Pro Asp Asn Tyr Thr lie Glu Val Glu 100 105 110

Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val lie Lys Ser His Met Thr Tyr Trp Arg 115 120 125

Leu Glu Asn lie Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys lie Phe Arg Val Lys 130 135 - 140

Pro val Leu Gly lie Lys Arg Met lie Gin lie Glu Trp lie Lys Pro . 145 150 155 160

Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu Arg Phe Arg .-.165 170 175

Thr Val Asn Ser Thr Scr Trp Met Glu Val Asn Phe Ala Lys Asn Arg 180 185 190

Lys Asp Lys Asn Gin Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gin Pro Phe Thr 195 200 205

Glu Tyr Val lie Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser Lys Phe Trp 210 215 220

Ser Asp Trp Ser Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu Glu Ala Pro 225 230 235 240

Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala Glu Ala Asp Gly 245 250 255

Arg Airg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly Ala Pro Val 260 265 270 , Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn lie Trp Tyr Tyr Pro Glu Ser Asn 275 280 285

Thr Asn Leu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gin Gin Leu Glu Leu 290 295 300

His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met lie Ser Tyr Asn Ser 305 310 315 320

Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg lie Pro Ala He Gin Glu 325 .330 335

Lys Ser Phe Gin Cys lie Glu Val Met Gin Ala Cys Val Ala Glu Asp 340 345 350

Gin Leu Val Val Lys Trp Gin Ser Ser Ala Leu Asp Val Asn Thr Trp 355 360 365

Met lie Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro Thr Thr Leu Ser 370 375 380

Trp Glu Ser Val Ser Gin Ala Thr Asn Trp Thr He Gin Gin Asp Lys 385 390 395 400

Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn He Ser Val Tyr Pro Met Leu His 405 " 410 415

Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser lie Gin Ala Tyr Ala Lys Glu Gly. 420 425 430

Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn· Ile Gly Vai Lys 435 440 445

Thr Val Thr lie Thr Trp Lys Glu lie Pro Lys Ser Glu Arg Lys Gly 450 455 460 lie Ile Cys Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Gin Ala Glu Gly Gly Lys Gly 465 470 475 480 '

Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser Ile Leu Gin Tyr Gly Leu Glu Ser 485 490 495

Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr lie Val Gin Val Met Ala Ser Thr Ser 500 505 510

Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser Ile Asn Phe Lys Thr Leu Ser Phe 515 520 525

Ser Val Phe Glu Ile Ile Leu Ile Thr Ser Leu Ile Gly Gly Gly Leu 530 535 540

Leu lie Leu lie lie Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu Lys Lys Pro Asn 545 550 555 560

Lys Leu Thr His Leu Cys Trp Pro Thr Val Pro Asn Pro Ala Glu Ser 565 570 575

Ser lie Ala Thr Trp His Gly Asp Asp Phe Lys Asp Lys Leu Asn Leu 580 585 590

Lys Glu Ser Asp Asp Ser Val Asn Thr Glu Asp Arg lie Leu Lys Pro 595 600 605

Cys Ser Thr Pro Ser Asp Lys'Leu Val Ile Asp Lys Leu Val Val Asn 610 615 620

Phe Gly Asn Val Leu Gin Glu Ile Phe Thr Asp Glu Ala Arg Thr Gly 625 630 635 640

Gin Glu Asn Asn Leu Gly Gly Glu Lys Asn Gly Thr Arg Ile Leu Ser 645 650 655

Ser Cys Pro Thr Ser Ile 660

<210> 80 <211> 732 <212> PRT <213> Homo sapiens <22 0> <221> SINAL <222> (1)..(20) <22 0> <221> TRANSMEM <222> (520) .. (543) <400> 80

Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe 1 5 10 15

Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Tyr 20 25 30

Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 35 40 45

Ser Tyr Thr Gin Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys 50 55 60

His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 70 75 80

Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg lie Thr lie Pro Asp Asn Tyr Thr lie 85 90 95

Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val lie Lys Ser His Met Thr 100 105 110

Tyr Trp Arg Leu Glu Asn lie Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys lie Phe 115 120 125

Arg Val Lys Pro Val Leu Gly lie Lys Arg Met lie Gin lie Glu Trp 130 135 140 lie Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu 145 150 155 160

Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 165 170 175

Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gin Thr Tyr Asn Leu Thr'Gly Leu Gin 180 185 ' 190

Pro Phe Thr Glu Tyr Val lie Ala Leu Arg Cys A.la Val Lys Glu Ser 195 200 205

Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 210 215 220

Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala Glu 225 230 235 240

Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly 245 250 255

Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn lie Trp Tyr Tyr Pro 260 265 270

Glu Ser Asn Thr Asn Leu ThrGlu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gin Gin 275 280 285

Leu. Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met lie Ser 290 295 300

Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg lie Pro Ala 305 310 315 320 lie Gin Glu Lys Ser Phe Gin Cys lie Glu Val Met Gin Ala Cys Val 325 330 335

Ala Glu Asp Gin Leu Val Val Lys Trp Gin Ser Ser Ala Leu Asp Val 340 345 350

Asn Thr Trp Met lie Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro Thr 355 360 365

Thr Leu Ser Trp Glu Ser val Ser Gin Ala Thr Asn Trp Thr lie Gin 370 375 380

Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn He Ser Val Tyr Pro 385 390 395 400

Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser lie Gin Ala Tyr Ala 405 410 - 415

Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn lie 420 425 430

Gly Val Lys Thr Val Thr He Thr Trp Lys Glu lie Pro Lys Ser Glu 435 440 445

Arg Lys Gly He He Cys Asn Tyr Thr He Phe Tyr Gin Ala Glu Gly 450 455 460

Gly Lys Gly Phe Ser Lys. Thr Val Asn Ser Ser He Leu Gin Tyr Gly 465 470 475 480

Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser lyr He Val Gin Val Met Ala 485 490 495

Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser He Asn Phe Lys Thr 500 505 510

Leu Ser Phe Ser Val Phe Glu He He Leu He Thr Ser Leu He Gly 515 520 525

Gly Gly Leu Leu He Leu He lie Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu Lys 530 535 540

Lys Pro Asn Lys Leu Thr His Leu Cys Trp Pro Thr Val Pro Asn Pro 545 550 555 560

Ala Glu Ser Ser He Ala Thr Trp His Gly Asp Asp Phe Lys Asp Lys 565 570 575

Leu Asn Leu Lys Glu Ser Asp Asp Ser Val Asn Thr Glu Asp Arg He 580 585 590

Leu Lys Pro Cys Ser Thr Pro Ser Asp Lys Leu Val He Asp Lys Leu 595 600 605

Val Val Asn Phe Gly Asn Val Leu Gin Glu He Phe Thr Asp Glu Ala 610 615 620

Arg Thr Gly Gin Glu Asn Asn Leu Gly Gly Glu Lys Asn Gly Tyr Val 625 630 635 640

Thr Cys Pro Phe Arg Pro Asp Cys Pro Leu Gly Lys Ser Phe Glu Glu 645 650 655

Leu Pro Val Ser Pro Glu lie Pro Pro Arg Lys Ser Gin Tyr Leu Arg 660 665 \ 670

Ser Arg Met Pro Glu Gly Thr Arg Pro Glu Ala Lys Glu Gin Leu Leu 675 680 685

Phe Ser Gly Gin Ser Leu Val Pro Asp His Leu Cys Glu Glu Gly Ala 690 695 700

Pro Asn Pro Tyr Leu Lys Asn Ser Val Thr Ala Arg Glu Phe Leu Val 705 710 715 720

Ser Glu Lys Leu Pro Glu His Thr Lys Gly Glu Val 725 730

<210> 81 <211> 716 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 81

Met Trp Thr Leu Ala Leu Trp Ala Phe Ser Phe Leu Cys Lys Phe Ser 1 5 10 15

Leu Ala Val Leu Pro Thr Lys Pro Glu Asn lie S.er Cys Val Phe Tyr 20 25 30

Phe Asp Arg Asn Leu Thr Cys Thr Trp Arg Pro Glu Lys Glu Thr Asn 35 40 45

Asp Thr Ser Tyr lie Val Thr Leu Thr Tyr Ser Tyr Gly Lys Ser Asn 50 55 60

Tyr Ser Asp Asn Ala Thr Glu Ala Ser Tyr Ser Phe Pro Arg Ser Cys 65 70 75 80

Ala Met Pro Pro Asp lie Cys Ser Val Glu Val Gin Ala Gin Asn Gly 85 90 95

Asp Gly Lys Val Lys Ser Asp lie Thr Tyr Trp His Leu lie Ser lie 100 105 110

Ala Lys Thr Glu Pro Pro lie lie Leu Ser Val Asn Pro lie Cys Asn 115 120 125

Arg Met Phe Gin lie Gin Trp Lys Pro Arg Glu Lys Thr Arg Gly Phe 130 135 140

Pro Leu Val Cys Met Leu Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Ser Arg Trp 145 150 155 160

Thr Glu Val Asn Phe Glu Asn Cys Lys'Gin Val Cys Asn Leu Thr Gly 165 .170 175

Leu Gin Ala Phe Thr Glu.Tyr Val Leu Ala Leu Arg Phe Arg Phe Asn 180 185 190

Asp Ser Arg Tyr Trp Ser Lys Trp Ser Lys Glu Glu Thr Arg Val Thr . 195 200 205

Met Glu Glu Vai Pro His Vai Leu Asp Leu Trp Arg lie Leu Glu Pro 210 215 220

Ala Asp Met Asn Gly Asp Arg Lys Vai Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala 225 230 235 240

Arg Gly Ala Pro Vai Leu Glu Lys Thr Phe Gly Tyr His Ile Gin Tyr 245 250 255

Phe Ala Glu Asn Ser Thr Asn Leu Thr Glu Ile Asn Asn Ile Thr Thr 250 265 270

Gin Gin Tyr Glu Leu Leu Leu Met Ser Gin Ala His Ser Vai Ser Vai 275 280 285

Thr Ser Phe Asn Ser Leu Gly Lys Ser Gin Glu Àla Ile Leu Arg Ile 290 295 300

Pro Asp Vai His Glu Lys Thr Phe Gin Tyr Ile Lys Ser Met Lys Ala 305 310 315 320

Tyr lie Ala Glu Pro Leu Leu Vai Vai Asn Trp Gin Ser Ser lie Pro 325 330 335

Ala Vai Asp Thr Trp lie Vai Glu Trp Leu Pro Glu Ala Ala Met Ser 340 345 350

Lys Phe Pro Ala Leu Ser Trp Glu Ser Vai Ser Gin Vai Thr Asn Trp 355 350 355

Thr lie Glu Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Thr Cys Tyr Asn Ile Ser 3 /0 375 .380

Vai Tyr Pro Vai Leu Gly His Arg Vai Gly Glu Pro Tyr Sèr Ile Gin 385 390 395 400

Ala Tyr Ala Lys Glu Gly Thr Pro Leu Lys Gly Pro Glu Thr Arg Vai 405 410 415

Glu Asn lie Gly Leu Arg Thr Ala Thr lie Thr Trp Lys Glu lie Pro 420 425 430

Lys Ser Ala Arg Asn Gly Phe Ile Asn ASn Tyr Thr Vai Phe Tyr Gin 435 440 445

Ala Glu Gly Gly Lys Glu Leu Ser Lys Thr Vai Asn Ser His Ala Leu 450 455 ' 460

Gin Cys Asp Leu Glu Ser Leu Thr Arg Arg Thr Ser Tyr Thr Vai Trp 465 470 475 480

Vai Met Ala Ser Thr Arg Ala Gly Gly Thr Asn Gly Vai Arg Ile Asn 485 490 495

Phe Lys Thr Leu Ser Ile Ser Vai Phe Glu Ile Vai Leu Leu Thr Ser 500 . 505 .510

Leu Vai Gly Gly Gly Leu Leu,Leu Leu Ser Ile Lys Thr Vai Thr Phe 515 520 525

Gly Leu Arg Lys Pro Asn Arg Leu Thr Pro Leu Cys Cys Pro Asp Val 530 535 .540

Pro Asn Pro Ala Glu Ser Ser Leu Ala Thr Trp Leu Gly Asp Gly Phe 545 550 555 560

Lys Lys Ser Asn Met Lys Glu Thr Gly Asn Ser Gly Asp Thr Glu Asp 565 570 575

Val Val Leu Lys Pro Cys Pro Val Pro Ala Asp Leu lie Asp Lys Leu 580 585 590

Val Val Asn Phe Glu Asn Phe Leu Glu Val Val Leu Thr Glu Glu Ala 595 600 605

Gly Lys Gly Gin Ala Ser lie Leu Gly Gly Glu Ala Asn Glu Tyr Val 610 615 620

Thr Ser Pro Ser Arg Pro Asp Gly Pro Pro Gly Lys Ser Phe Lys Glu 625 630 635 640

Pro Ser Val Leu Thr Glu Val Ala Ser Glu Asp Ser His Ser Thr Cys 645 650 655

Ser Arg Met Ala Asp Glu Ala Tyr Ser Glu Leu Ala Arg Gin Pro Ser 660 665 670

Ser Ser Cys Gin Ser Pro Gly Leu Ser Pro Pro Arg Glu Asp Gin Ala 675 680 685 . Gin Asn Pro Tyr Leu Lys Asn Ser Val Thr Thr Arg Glu Phe Leu Val 690 695 700

His Glu Asn lie Pro Glu His Ser Lys Gly Glu Val 705 710 . .715. <210> 82 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 82

Gly Gly Gly Ser 1 <210> 83 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 83

Ser Gly Gly Gly 1 <210> 84 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 84

Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 85 <211> 5

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 85

Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 86 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 86

Gly Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 87 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <223> uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 87

Ser Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 88 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 88

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 89 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 89

Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 90 <211> 40 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência de um iniciador artificialmente sintetizada <400> 90 taatagcggc cgctcattat ttaccaggag agtgggagag 40 <210> 91 <211> 40 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência de um iniciador artificialmente sintetizada <400> 91 taatagcggc cgctcattaa cactcattcc tgttgaagct 40 <210> 92 <211> 33 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência de um iniciador artificialmente sintetizada <400> 92 gacgaattcc accatgggat ggagctggat ctt 33 <210> 93 <211> 33 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência de um iniciador artificialmente sintetizada <400> 93 gacgaattcc accatgagtg tgcccactca ggt 33 <210> 94 <211> 33

<212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência de um iniciador artificialmente sintetizada <400> 94 gacgaattcc accatggaat gtaactggat act 33 <210> 95 <211> 33 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> uma sequência de um iniciador artificialmente sintetizada <400> 95 gacgaattcc accatggatt ttctggtgca gat 33

<210> 96 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 9 6

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20. 25 ..... 30

<210> 97 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97

Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10

<210> 98 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98

Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30

<210> 99 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 99

Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 100 <211> 23

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 100

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys 20

<210> 101 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 101

Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 1 5 10 15

<210> 102 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 <4 Ο 0> 102

Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30

<210> 103 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 103

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 1 5 10

<210> 104 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 104

Asp Val Gin Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser lie Thr Ser Asp 20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp lie Arg Gin Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45

Met Gly Tyr lie Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Val Ser lie Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Phe 65 70 75 80

Leu Gin Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Pro Met lie Thr Thr Asp Trp Phe Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly 100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 105 <211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 105

Ser Asp Tyr Ala Trp Asn 1 5

<210> 106 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 106

Tyr lie Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 1 5 10 15 <210> 107 <211> 10 <213> Mus musculus <4 0 0> 107

<212> PRT

Met lie Thr Thr Asp Trp Phe Phe Asp Val 1 5 10

<210> 108 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 108

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Asp Arg' Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser His Asp lie Ser Asp Phe . 20 25 30

Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 '40 45

Lys Tyr Ala Ser Gin Ser lie Ser Gly He Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gin Asn Gly His Ser Phe Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105

<210> 109 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 109

Arg Ala Ser His Asp lie Ser Asp Phe Leu His 1 5 10

<210> 110 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 110

Tyr Ala Ser Gin Ser He Ser .1 ' .-5

<210> 111 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 111

Gin Asn Gly His Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 112 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 112

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Xrp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr-Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 113 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 113

Glu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 1 5 10 15

Gly <210> 114 <211> 17

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 114

Leu lie Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 1 5 10 15

Gly <210> 115 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 115

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Asp Lys Phe Lys 1 510 15

Gly <210> 116 <211> 17

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 116

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Gin Phe Lys 15 10 15

Gly <210> 117 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 117

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Gin 15 10 15

Gly <210> 118 <211> 17

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 118

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 1 5 10 15

Asp <210> 119 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 119

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Gin 15 10 15

Asp <210> 120 <211> 14

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 120

Trp Val Gin Gin Ser Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 121 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 121

Gin Thr Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe Leu Ala 1 5 '10 <210> 122 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <4 0 0> 122

Arg Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Phe Leu Ala 1. 5 10 <210> 123 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 123

Asp Ala Lys Thr Leu Ala Lys 15 <210> 124 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 124

Asn Ala Gin Thr Leu Ala Lys 1 5 <210> 125 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 125

Asn Ala Lys Thr Glu Ala Lys 1 5 <210> 126 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 126

Asn Ala Lys Thr Leu Ala Gin 1 5 <210> 127 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 127

Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp 1 5 <210> 128 <211> 324 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 128

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pró Ser Ser Lys 1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu G.ly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp.Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Sér Asn Phe Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110

Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125

Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140

Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 165 170 175

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp 180 185 190

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205

Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu 210 215 220

Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240

Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie 245 250 255

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr '260 265 . 270

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Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300

Ser Leu Ser Pro <210> 129 <211> 326

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu 305 310 315 320

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 129

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Set Lys .15 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr 65 70 75. 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys . 85 90 95

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Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125

Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 165 170 175

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp 180 185 190

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205

Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu 210 215 220

Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240

Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Ásp lie " 245 250 255

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270

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Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300

Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 130 <211> 447

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu 305 310 315 320

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 130

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 3C 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 . 75 80

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Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vat His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser LeuSer Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 , 430

His- ASn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 131 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <4 0 0> 131

Arg Vai Xhr lie .Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 132 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 132

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr- 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110

Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125

Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160

Val GlU Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 165 170 175

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp 180 185 190

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205

Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu 210 215 220

Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240

Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie 245 250 255

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270

Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys . 290 295 300

Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu 305 310 315 320 <210> 133 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 133

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr. Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 . 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr Ile Cys Asn Vai Asn His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 340 345 _ 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser 355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445

Pro Gly Lys 450 <210> 134 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 134

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Gys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe' Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 ·

Vai Leu Thr Vai Vai His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 . - 320

Cys Lys Vai Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys' Thr Ile 325 -330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai Glu Trp Glu Ser Àsn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu 420 425 . 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 135 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 135

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly.Ala 1 5 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Árg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 . 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr;Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 . 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Vàl Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser He Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 . : 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 .440 445 <210> 136 <211> 445

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 136

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro .Gly Ala 1 5 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 .

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 · 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser' Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 1 ΛΕ Ο Λ Λ ΟΛΕ j. y j u ^>u j

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys' Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 ‘ 235 240

Phe Leu Phe Pro .Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255-

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Vãl Ser Gin Glu Asp,Pro Glu 260 265 270

Vai Gin Phe Ash Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 '330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg· Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 · 410 415

Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 <210> 137 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 137

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Gin Gin Ser Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 .

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65. 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 138 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 138

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Sèr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Glu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50- 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 139 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 139

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Gly Leu lie Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60'

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 ' 80

Met. Glu Leu Ser Ser.Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 ' 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr. Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 140 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 140

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 t'Ser Val Lys Vàl Sér Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Asp Lys Phe 50 55 60 .

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 .95.

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 . 105 . 110

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Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 '30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Gin Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 142 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 142

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 .90 95

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Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 143 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 143

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 · 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arq Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin T-hr Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe 20 25 · 30

Leu Ala Trp Tyr' Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 .75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 145 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 145

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asp lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser .Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100· 105 <210> 146 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 146

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 147 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 147

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Gin Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 148 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 148

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn He Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Glu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 ‘75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 · 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 149 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 149

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Gin Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie.Lys 100 105 <210> 150 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 150

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn He Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 . 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys.Gin His His Tyr Glu Ser Pro Léu 85 90 95

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Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 8b ' 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Thr Ser Glu Asp lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

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Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

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Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

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Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 , 95

Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 .

Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125

Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 165 170 175

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp 180 185 190

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205

Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu 210 215 220

Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240'

Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie 245 250 255

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Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300

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Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

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Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu'Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser'Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80

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Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205

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Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240

Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie 245 250 255

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Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu 305 310 315 320

Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 . <210> 155 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 155

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin 1 5 10 15

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Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 . 105 110

Ser Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 156 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 156

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser vai Gly 1 5 10 15

Asp Arg Vai Thr Ile Thr.Cys Arg Ala Ser Gin Asp Ile Ser Ser Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Ero Lys Leu Leu Ile 35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Gly Asn Thr Leu Pro Tyr. 85 90 95

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Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr-Val Ser Gly Tyr Ser lie Thr Ser Asp 20 25 30

His Ala Trp Ser Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp 35 40 45 lie Gly Tyr lie Ser Tyr Ser Gly lie Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60

Lvs Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 * 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Ser Leu Val Thr Val Sêr Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 '

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 ‘ 175

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190

Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 245 .250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin 260 265 - ' 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Ârg Val Val Ser Val Leu 290 295 300

Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 325 ' 330 335

Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 405 410 415

Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430

His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys . 435 440 445 <210> 158 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 158

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser lie Thr Ser Asp 20 25 30

Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 . 110

Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu'Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140

Gly Cys Leu val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala val Leu 165 170 175

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu'Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190

Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Ser Val Glu 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Lea 225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu val Gin 260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300

Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie Ser Lys 325 330 . 335

Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cy-s Leu Val Lys

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Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 405 410 .415

Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430

His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445'. <210> 159 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 159

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser lie Thr Ser Asp 20 25 30

Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp ,Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 .

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205-

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215. . 220

Thr His Thr Cys Pro Pro.Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240

Ser.Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 325 330 335

Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380

Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415

Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445

Lys <210> 160 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 160

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin 1 5 10. 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser lie Thr Ser Asp 20 25 30

His Ala Trp Ser Trp Val, Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Lèu Glu Trp 35 40 45 lie Gly Tyr lie Ser Tyr Ser Gly He Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 . 55 .60

Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn. Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala-Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190

Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin 260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300

Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys.Lys 305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 325 330 335

Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 . 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin 405 410 415

Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430

His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 161 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 161

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser lie Thr Ser Asp 20 25 30

Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser . 65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Ser Leu Val Thr val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190

Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser Cys Vai Glu 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin 260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300

Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys- Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 325 330 335

Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 370 375 380

Pro.Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 385 - 390 395 400 Sér Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 405 410 415

Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430

His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 162 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Sêr Ala Ser Val Gly 1 5 10 lb <4 Ο 0> 162

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 SO

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ash Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 163 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada

Gin Vai Gin Léu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Vai Arg Pro Ser Gin 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Vai Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Sèr Asp 20 25 30

His Ala Trp Ser Trp Vai Arg Gin Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp 35 40 45 lie Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly lie Thr.Thr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60

Lys Ser Arg Vai Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys· Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala val Leu 165 170 175

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser, 180 185 190

Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp-Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro ,Glu 245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu. ValGin · 260 265 270 '

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 ' 280 285

Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300

Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 325 330 335

Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 ' 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 405 410 415

Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Ásn •420 425 430

His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 164 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 164

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gin 1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser lie Thr Ser Asp 20 25 30

Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80.

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr. Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190

Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val.Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro.Glu 245. 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin 260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300

Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys '325 1 330' 335

Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350

Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 385 290 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430

His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 <210> 165 <211> 267 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 Ο 0>

Ala Glu Ser His Leu Ser Leu Leu Tyr His Leu Thr Ala Vai Ser Ser 1 5 10 15

Pro Ala Pro Gly Thr Pro Ala Phe Trp Vai Ser Gly Trp Leu Gly Pro 20 25 30

Gin Gin Tyr Leu Ser Tyr Asn Ser Leu Arg Gly Glu Ala Glu Pro Cys 35 40 45 165

Gly Ala Trp Vai Trp Glu Asn Gin Vai Ser Trp Tyr Trp Glu Lys Glu 50 55 60

Thr Thr Asp Leu Arg Ile Lys Glu Lys Leu Phe Leu Glu Ala Phe Lys 65 70 75 80

Ala Leu Gly Gly Lys Gly Pro Tyr Thr Leu Gin Gly Leu Leu Gly Cys 85 90 95 . Glu Leu Gly Pro Asp Asn Thr Ser Vai Pro Thr Ala Lys Phe Ala Leu 100 105 110

Asn Gly Glu Glu Phe Met Asn Phe Asp Leu Lys Gin Gly Thr Trp Gly 115 120 125

Gly Asp Trp Pro Glu Ala Leu Ala Ile Ser Gin Arg Trp Gin Gin Gin 130 135 140

Asp Lys Ala Ala Asn Lys Glu Leu Thr Phe Leu Leu Phe Ser Cys Pro 145 150 155 160

His Arg Leu Arg Glu His Leu Glu Arg Gly Arg Gly Asn Leu Glu Trp 165 170 175

Lys Glu Pro Pro Ser Met Arg Leu Lys Ala Arg Pro Ser Ser Pro Gly 180 185 190

Phe Ser Vai Leu Thr Cys Ser Ala Phe Ser Phe Tyr Pro Pro Glu Leu 195 200 205

Gin Leu Arg Phe Leu Arg Asn Gly Leu Ala Ala Gly Thr Gly Gin Gly 210 215 220

Asp Phe Gly Pro Asn Ser Asp Gly Ser Phe His Ala Ser Ser Ser Leu 225 230 235 240

Thr Vai Lys Ser Gly Asp Glu His His Tyr Cys Cys Ile Vai Gin His 245 250 255

Ala Gly Leu Ala Gin Pro Leu Arg Vai Glu Leu 260 265 <210> 166 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <4 0 0> 166

He Gin Arg Thr Pro Lys Ile Gin Vai Tyr Ser Arg His Pro Ala Glu 1 5 10 15

Asn Gly Lys Ser Asn Phe Leu Asn Cys Tyr Vai Ser Gly Phe His Pro 20 25 30

Ser Asp lie Glu Vai Asp Leu Leu Lys Asn Gly Glu Arg Ile Glu Lys 35 40 45

Vai Glu His Ser Asp Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe Tyr Leu 50 55 60

Leu Tyr Tyr Thic Glu Phe Thr . Pro Thr Glu Lys Asp Glu Tyr Ala Cys 65 70 7b . 80.

Arg Vai Asn His Vai Thr Leu Ser Gin Pro Lys Ile Vai Lys Trp Asp 85 90. 95

Arg Asp Met <210> 167 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 167

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser.Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

He Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Gin Phe 50 .55 60

Gin Asp Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 · 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 168 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 168

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro .Ser Ser Leu Ser Ala. Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Thr Ser Glu Asp He Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro. Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Gin Thr Glu Ala Gin Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 <210> 169 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 169

Gin Thr Ser Glu Asp He Tyr Ser Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 170 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 170

Asn Ala Gin Thr Glu Ala Gin 1 5 <210> 171 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 171

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Gin Phe Gin 1 5 10 lt

Asp <210> 172 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 172

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Sêr Tyr Asn Asp Gin Phe Gin 1 5 10 15

Asp <210> 173 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 173

Gly Tyr Val Met Asn 1 5 <210> 174 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 174

Gly Tyr lie lie Asn 15 <210> 175 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 175

Gly Tyr lie Leu Asn 1 5 <210> 176 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 176

Gly Tyr Ala Met Asn 1 5 <210> 177 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 177

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15

Gly <210> 178 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 178

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Pro Lys Phe Lys 15 10 15

Gly <210> 179 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 179

Asp Gly Leu Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr 15 10 <210> 180 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 180

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Tyr 15 10 <210> 181 <211> 12

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 181

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Glu Tyr 1 5 10 <210> 182 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 182

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Thr 1 5 10 <210> 183 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <4 0 0> 183

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr.Thr Met Asp Ser 15 10 <210> 184 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 184

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr 1 5 10 <210> 185 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 185

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Glu Thr 1 5 10 <210> 186 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 186

Asp Gly Leu Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Glu Thr 1 5 10 <210> 187 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 187

Asp Gly Leu Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Glu Ser 1 5 10. <210> 188 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 188

Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Arg Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 189 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 189

Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe Val Ala 1 5 ' 10 <210> 190 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 190 .Arg Thr Ser Glu Asn He Tyr Arg Phe Val Ala 1 5 10 <210> 191 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 191

Arg Ala Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 192 <211> 11

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 192

Arg Ser Ser Glu Asn lie Tyr Ser Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 193 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 193

Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 194 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <4 0 0> 194

Gin His His Tyr Glu Asp Pro Leu Thr 15 <210> 195 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 0 0> 195

Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu Phe 1 5 <210> 196 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 196

Gly Tyr Val Leu Asn 15 <210> 197 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4 Ο 0> 197

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe Gin 1 5 10 15

Asp <210> 198 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe Gin 'l 5 10 15 <4 Ο 0> 198

Gly <210> 199 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4 0 0> 199

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Gin Phe Gin 15 10 15

Asp <210> 200 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4Ο0> 200

Gin Thr Ser Glu Asp He Tyr Arg Phe Val Ala 1 5 10 <210> 201 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 201

Gin Thr.Ser Glu Asp lie Tyr Ser Phe Val Ala 1 5 10 <210> 202 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 202

Gin Ala Ser Glu Asp He Tyr Ser Phe Val Ala 1 5 10 <210> 203 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 203

Gin Ala Ser Glu Asp He Tyr Ser Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 204 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 204

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Val Leu Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 205 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 205

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala" 1 .. , 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val, Ser Ser 115 120. <210> 206 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 206

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 ’ 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Val Leu Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin. Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 207 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 207

Gin Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Alá Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 .10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro’ Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 208 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 208

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Ala Met. Asn Trp Val Arq Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu He Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 .70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 209 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 209

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Vãl Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Val Leu Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 210 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 210

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 .5 iO 1 5

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly: Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 ~ 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 211 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 211

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie A'sn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly ' 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120. <210> 212 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 212

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr. Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 , 105 110

Gin Gly Thr Le.u Val Thr Val Ser Ser 115 ' 120 <210> 213 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 213

Gin Vai Gin Lèu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Ala Met Asn Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Vai Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 ' 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110·

Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser 115 120 <210> 214 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 214

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr- 65 70 '75 ' 30

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 215 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 215

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 ..Ala Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 216 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 216

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp. Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 . Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 217 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 217

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val. Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 218 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 218

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 1 15 - Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Thr Ser Glu Asp lie Tyr Arg Phe 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Gin Thr Glu Ala Gin Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 : 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 219 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 219

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Thr Ser Glu Asp lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Gin Thr Glu Ala Gin Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 220 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 220

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Ala Sèr Glu Asp lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Gin Thr Glu Ala Gin Gly Val Pro Ser, Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 221 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 221

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Ala Ser Glu Asp lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Asn Ala Gin Thr Glu Ala Gin Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 ’ 80 .

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr.Tyr Cys Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 - 105 . <210> 222 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 222

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe ThrGly Tyr 20 25 30

Val Leu Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu He Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125'

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser.Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Glh Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Ásn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg - 405 410 415

Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 <210> 223 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 223

Gin Val- Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 . 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 .55 60

Gin Asp Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr. Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys .Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 A.sp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro '435 440 445 <210> 224 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 224

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Val Leu Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro. Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Àla 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser. Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Ash Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 250 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg v'al Val Ser 290 295 · 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 , 445 <210> 225 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 225

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro' Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr- Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Pro Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gl>u Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

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Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 .Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

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Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Alá 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

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Ala Leu Gly Cys Leu val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

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Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

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Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly.Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

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Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

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Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

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Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

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Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30. lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr. Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val'Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

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Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

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Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 .

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 <210> 233 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 233

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

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Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140,

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 ' 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser,Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 . 230 . 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Vãl Thr Cys' Val Val Val Asp· Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr.Lys Pro Arg Glu Giu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 <210> 234 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 234

Gin Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pró' Gly Ala 1 5 10 15 -

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin- Gin Phé 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80.

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu val Thr val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140

Ala LeU Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr· 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 <210> 235 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 235

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1-5 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser.Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Giu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 '295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Qlu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser .385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 <210> 236 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 236

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Vai Gly 1 5 10 lò

Asp Arg Vai Thr Ile Thr Cys Gin Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Arg Phe 20 25 30

Vai Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45

Tyr Asn Ala Gin Thr Glu Ala Gin Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Vai Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 . Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Ásn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin :.145 150 155 160

Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser,Ser Pro Vai Thr Lys Ser 195 200' 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 237 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4Ο0> 237

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Thr Ser Glu Asp lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Gin Thr Glu Ala Gin Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 ' 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu . 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly lib 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 238 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 238

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Vai Gly 1 5 10 15

Asp Arg Vai Thr Ile Thr Cys Gin Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Phe 20 25 30

Vai Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45

Tyr Asn Ala Gin Thr Glu Ala Gin Gly Vai Pro 3θγ Ary Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu Ile Lys Arg Thr Vál Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Vai Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 .155 150

Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 239 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4Ο0> 239

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Set Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Ala Ser Glu Asp lie Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Asn Ala Gin Thr Glu Ala Gin Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 ‘80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 ,. 175 1

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Ly.s Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 240 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 240

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 '45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr- Asn Gin Gin Phe 50 55. 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr LeU Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 1.40

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 1.45 150 155 ' 160,

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 ' 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Vál Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 . Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335 . Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Girt Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys T.eu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 ,425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 <210> 241 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4Ο0> 241

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Prb Gly Ala .1 5 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Gin Phe 50 55 60

Gin Asp Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 ; 140 -

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 170 . 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu . Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Cys Cys 210 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Léu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys . 305 .310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr He 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 242 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 242

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 . Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 '55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie. Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr , 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 135 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser. Cys 210 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 ^ 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 - 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe. Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met. Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu. Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 243 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 243

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe.Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met' 35 40 45

Gly Lèu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala' Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly.Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 - 170 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 19Ò

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205

Lys Pro·Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Ar.q Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 ' . ' 415.

Trp Gin Gin' Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 . 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 244 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 244

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe ' 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Leu Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Glu Thr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Ásp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser vai Vai Thr Vai 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240'

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val val Ser 290 295 300 Vál Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Scr Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415·

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro. Gly Lys 435 440 445 <210> 245 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 245

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly.Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Leu Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Glu Ser Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser' Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 24Ό

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 . Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 ’ 310 - 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val.Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 -380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val -Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu. Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 246 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 246

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Val Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Set Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 .175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 .240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 . 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala. Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375. 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 .410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 ' 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 247 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 247

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr. 20 25 30 lie lie Asn Xrp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro. Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 1B5 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205 ‘ Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 . 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335.

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro · 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375· 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 248 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 248

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Leu Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn G.ln Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90. 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 - 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Sér Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 Π0 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser . Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met. Leu Asp. Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu. Ala Leu . 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445' <210> 249 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 249

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly. Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gin Lys Phe c r\ c c c n

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Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 . 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 155 170 175-

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vâl Thr Vai 180 185 190'

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Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 ' 255

Pro Glu Val Thr· Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 -Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro, lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 , 3.65

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys.Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 40Ó

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Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 250 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 250

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Pro Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

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Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 . 150 155 160

Ser Xrp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr, Phe Pro Ala 165 . 170 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 .190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vál Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr He 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 . 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 . <210> 251 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4Ο0> 251

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 '15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Arg Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 . Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu, Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 , 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 252 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 252

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Vai Gly 15 10 15

Asp Arg Vai Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Arg Phe 20 25 30

Vai Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 . 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Vai Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 -Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser'Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Prò Vai Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 253 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <4Ο0> 253

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp. Arg-;Val Thr He Thr Cys Arg Thr Sèr Glu Asn lie. Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe' Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120. 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 254 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 254

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Vai Gly 1 5 10 15

Asp Arg Vai Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Phe 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser.Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Léu Gin Pró 65 70 . 75 80

Glu.Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Glu Asp Pro, Leu 85 90 .95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Vai Phe lie Phe Pro Pro Sêr Asp'Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser G'ln 145 150 155 160

Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170- 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 255 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 255

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Val lie Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu .Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro GluPro Vai Thr Vai 145 150 ' 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 170 Π5

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 . 270 val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 .

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 256 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 256

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Gin Thr Ser Glu Asn lie Tyr Arg Phe 20 - 25 . 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Sér Gly Ser Gly-Thr Asp Phe Thr Leu Thr·lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 . 110

Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 · 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 ' 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 257 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 257

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 lie Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu.Glu Trp Met 35 40 45

Gly Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60 .

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser.Thr Ser Thr Ala Xyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 ’ 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140'

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys. Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300'

Vai Leu Thr Vai Vai His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Vai Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr Ile 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Glu Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445

<210> 258 <211> 530 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 258

Met Met Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe 1 5 10 15

Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Tyr 20 25 30

Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 35 40 45

Ser Tyr Thr Gin Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys 50 55 60

His Asp Aán Cys. Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 Ί0 . 75 80

Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg lie Thr lie Pro Asp Asn Tyr Thr lie 85 90 95

Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val lie Lys Ser His Met Thr 100 105 110

Tyr Trp Arg Leu Glu Asn lie Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys He Phe 115 120 125

Arg Val Lys Pro Val Leu Gly lie Lys Arg Met He Gin lie Glu Trp 130 135 140 '

He Lys Pro Glu Leu Ala Pro Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu 145 150 155 160

Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 165 170 175

Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gin Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gin 180 185 190

Pro Phe Thr Glu Tyr Val He Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser 195 200 205

Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 210 215 220

Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala Glu 225 230 235 240

Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly 245 250 255

Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn He Trp Tyr Tyr Pro 260 265 270

Glu Ser Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gin Gin 275 280 285

Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met lie Ser 290 295 300

Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg He Pro Ala 305 310 315 320 lie Gin Glu Lys Ser Phe Gin Cys lie Glu Val Met Gin Ala Cys Val 325 330 335

Ala Glu Asp Gin Leu Val Val Lys Trp Gin Ser Ser Ala Leu Asp Val 340 345 350

Asn Thr Trp Met lie Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro Thr 355 360 365

Thr Leu-Ser Trp Glu Ser Val Ser" Gin Ala Thr Asn Trp Thr lie Gin 370 375 380

Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn lie Ser Val Tyr Pro 385 390 395 400

Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser lie Gin Ala Tyr Ala 405 410 415

Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn lie 420 425 430

Gly Val Lys Thr Val Thr lie Thr Trp Lys Glu lie Pro Lys Ser Glu 435 440 445

Arg Lys Gly lie He Cys Asn Tyr Thr lie Phe Tyr Gin Ala Glu Gly 45.0 455 460

Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser lie Leu Gin Tyr Gly 465 470 475 480

Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr lie Val Gin Val Met Ala 485 490 495

Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly.Thr Ser He Asn Phe Lys Thr 500 505 510

Leu Ser His His His His His His Glu Gin Lys Leu lie Ser Glu Glu 515 520 525

Asp Leu 530

<210> 259 <211> 517 <212> PRT <213> Mus musculus

Met Trp Thr Leu Ala Leu Trp Ala Phe Ser Phe Leu Cys: Lys Phe Ser 1 5 10 15

Leu Ala Val Leu Pro Thr Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Phe Tyr 20 25 30

Phe Asp Arg Asn Leu Thr Cys Thr Trp Arg Pro Glu Lys Glu Thr Asn 35 40 45

Asp Thr Ser Tyr lie Val Thr Leu Thr Tyr Ser Tyr Gly Lys Ser Asn 50 55 60

Tyr Ser Asp Asn Ala Thr Glu Ala Ser Tyr Ser Phe Pro Arg Ser Cys 65 70 75 80

Ala Met Pro Pro Asp lie Cys Ser Val Glu Val Gin Ala Gin Asn Gly 85 90 95

Asp Gly Lys Val Lys Ser Asp lie Thr Tyr Trp His Leu lie Ser lie 100 105 110

Ala Lys Thr Glu Pro Pro lie lie Leu Ser Val Asn Pro lie Cys Asn 115 120 125

Arg Met Phe‘ Gin lie Gin Trp Lys Pro Arg Glu Lys Thr Arg Gly Phe 130 135 140

Pro Leu Val Cys Met Leu Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Ser Arg Trp 145 150 155 160

Thr Glu Val -Asn Phe Glu Asn Cys Lys Gin Val Cys Asn Leu Thr Gly 165 170 175

Leu Gin Ala Phe Thr Glu Tyr Val Leu Ala Leu Arg Phe Arg Phe Asn 180 185 190

Asp Ser Arg Tyr Trp Ser Lys Trp Ser Lys Glu Glu Thr Arg Val Thr 195 200 205

Met Glu Glu Val Pro His Val Leu Asp Leu Trp Arg lie Leu Glu Pro 210 215 220

Ala Asp Met Asn Gly Asp Arg Lys Val Arg Leu Leu trp Lys Lys Ala 225 230 235 240

Arg Gly Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Phe Gly Tyr His lie Gin Tyr 245 250 255

Phe Ala Glu Asn Ser Thr Asn Leu Thr Glu lie Asn Asn lie Thr Thr 260 265 270

Gin Gin Tyr Glu Leu Leu Leu Met Ser Gin Ala His Ser Val Ser Val 275 280 285

Thr Ser Phe Asn Ser Leu Gly Lys Ser Gin Glu Thr lie Leu Arg lie 290 295 300

Pro Asp Val His Glu Lys Thr Phe Gin Tyr lie Lys Ser Met Gin Ala 305 310 315 320

Tyr lie Ala Glu Pro Leu Leu Val Val Asn Trp Gin Ser Ser lie Pro 325 330 335

Ala Val Asp Thr Trp He Val Glu Trp Leu Pro Glu Ala Ala Met Ser 340 345 350

Lys Phe Pro Ala Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gin Val Thr Asn Trp 355 360 365

Thr lie Glu Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Thr Cys Tyr Asn lie Ser 370 375 ' 380

Val Tyr Pro Val Leu Gly His Arg Val Gly Glu Pro Tyr Ser He Gin 385 390 395 400

Ala Tyr Ala Lys Glu Gly Thr Pro Leu Lys Gly Pro Glu Thr Arg Val 405 410 415

Glu Asn He Gly Leu Arg Thr Ala Thr lie Thr Trp Lys Glu He Pro 420 425 430

Lys. Ser Ala Arg Asn Gly Phe He Asn Asn Tyr Thr Val Phe Tyr Gin 435 440 445

Ala Glu Gly Gly Lys Glu Leu Ser Lys Thr Val Asn Ser His Ala Leu 450 455 460

Gin Cys Asp Leu Glu Ser Leu Thr Arg Arg Thr Ser Tyr Thr Val Trp 465 470 475 480

Val Met Ala Ser Thr Arg Ala Gly Gly Thr Asn Gly Val Arg.lie Asn 485 490 495

Phe Lys Thr Leu Ser His His His His His His Glu Gin Lys Leu lie 500 505 510

Ser Glu Glu Asp Leu 515 <210> 260 <211> 531 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 260

Met Met Trp Thr Trp Ala^ Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe 1 5 10 15

Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Tyr 20 25 30

Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 35 40 45

Ser Tyr Thr Gin Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly (Glu Lys 50 55 "60

His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 70 75 80

Cys Ser Phe Phe. Leu Pro Arg lie Thr lie Pro Asp Asn Tyr Thr lie 85 90 95

Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val lie Lys Ser His Met Thr 100 105 110

Tyr Trp Arg Leu Glu Asn lie Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys lie Phe 115 · 120 125

Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Thr Ser Trp Met Glu Val Asn Phe Ala 165 170 175

Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn Gin Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gin 180 185 190

Pro Phe Thr Glu Tyr Val lie Ala Leu Arg Cys Ala Val Lys Glu Ser 195 200 205

Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu 210 215 220

Glu Ala Pro His Val Leu Asp Leu Trp Arg lie Leu Glu Pro Ala Asp 225 230 235 240

Met Asn Gly Asp Arg Lys Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly 245 250 255

Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Phe Gly Tyr His lie Gin Tyr Phe Ala 260 265 270

Glu Asn Ser Thr Asn Leu Thr Glu lie Asn Asn lie Thr Thr Gin Gin 275 280 285

Tyr Glu Leu Leu Leu Met Ser Gin Ala His Ser Val Ser Val Thr Ser 290 295 300

Phe Asn Ser Leu Gly Lys Ser Gin Glu Thr lie Leu Arg lie Pro Asp 305 310 315 320

Val His Glu Lys Thr Phe Gin Tyr lie Lys Ser Met Gin Ala Tyr lie 325 330 335

Ala Glu Pro Leu Leu Val Val Asn Trp Gin Ser Ser lie Pro Ala Val 340 345 350

Asp Thr Trp lie Val Glu Trp Leu Pro Glu. Ala Ala Met Ser Lys Phe 355 360 365

Pro Ala Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gin Val Thr Asn Trp Thr He 370 375 380

Glu Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Thr Cys Tyr Asn lie Ser Val Tyr 385 390 395 400

Pró Vai Leu Gly His Arg Vai Gly Glu Pro Tyr Ser He Gin Ala Tyr 405 410 415

Ala Lys Glu Gly Thr Pro Leu Lys Gly Pro Glu Thr Arg Vai Glu Asn 420 425 430 ’

He Gly Leu Arg Thr Ala Thr He Thr Trp Lys Glu He Pro Lys Ser 435 440 445

Ala Arg Asn Gly Phe He Ash Asn Tyr Thr Vai Phe Tyr Gin Ala Glu 450 455 460

Gly Gly Lys Glu Leu Ser Lys Thr Vai Asn Ser His Ala Leu Gin Cys 465 470 475 480

Asp Leu Glu Ser Leu Thr Arg Arg Thr Ser Tyr Thr Vai Trp Vai Met 485 490 495

Ala Ser Thr Arg Ala Gly Gly Thr Asn Gly Vai Arg He Asn Phe Lys 500 505 510

Thr Leu Ser His His His His His His Glu Gin Lys Leu He Ser Glu 515 520 ' 525

Glu Asp Leu 53Ό <210> 261 <211> 516 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 261

Met Trp Thr Leu Ala Leu Trp Ala Pile Ser Phe Leu Cys Lys Phe Ser 1 5 10 15

Leu Ala Val Leu Pro Thr Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Phe Tyr 20 25 30

Phe Asp Arg Asn Leu Thr Cys Thr Trp Arg Pro Glu Lys Glu Thr Asn 35 40 . 45

Asp Thr Ser Tyr lie Val Thr Leu Thr Tyr Ser Tyr Gly Lys Ser Asn 50 55 60

Tyr Ser Asp Asn Ala Thr Glu Ala Ser Tyr Ser Phe Pro Arg Ser Cys 65 70 75 80

Ala Met Pro Pro Asp lie Cys Ser Val Glu Val Gin Ala Gin Asn Gly 85 90 95

Asp Gly Lys Val Lys Ser Asp lie Thr Tyr Trp His Leu lie Ser He 100 105 110

Ala Lys Thr Glu Pro Pro lie He Leu Ser Val Asn Pro He Cys Asn 115 120 125

Arg Met Phe Gin He Gin Trp Lys Pro Arg Glu Lys Thr Arg Gly Phe 130 135 140

Pro Leu Val Cys Met Leu Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser Ser Arg Trp 145 150 155 160

Thr Glu Val Asn Phe Glu Asn Cys Lys Gin Val Cys Asn Leu Thr Gly 165 170. 175

Leu Gin Ala Phe Thr Glu Tyr Val Leu Ala Leu Arg Phe Arg Phe Ãsn 180 185 190

Asp Ser Arg Tyr Trp Ser Lys Trp Ser Lys Glu Glu Thr Arg Val Thr 195 200 205

Met Glu Glu Val Pro Cys Gly Leu Glu Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro 210 215 220

Ala Glu Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala 225 230 235 240

Arg Gly Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr Leu Gly Tyr Asn He Trp Tyr 245 250 255

Tyr Pro Glu Ser Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn 260 ‘265 270

Gin Gin Leu Glu Leu His Leu Gly Gly Glu Ser Phe Trp Val Ser Met 275 280 285 lie Ser Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg lie 290 295 300

Pro Ala lie Gin Glu Lys Ser Phe Gin Cys lie Glu Val Met Gin Ala 305 310 315 320

Cys Val Ala Glu Asp Gin Leu Val Val Lys Trp Gin Ser Ser Ala Leu 325 330, 335

Asp Val Asn Thr Trp Met lie Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu 340 345 350

Pro Thr Thr Leu Ser Trp Glu Ser Val Ser Gin Ala Thr Asn Trp Thr 355 360 365 lie Gin Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe Trp Cys Tyr Asn lie Ser Val 370 375 380

Tyr Pro Met Leu His Asp Lys Val Gly Glu Pro Tyr Ser lie Gin Ala 385 390 395 400

Tyr Ala Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu 405 410 415

Asn lie Gly Val Lys Thr Val Thr He Thr Trp Lys Glu lie Pro Lys 420 425 430

Ser Glu Arg Lys Gly lie lie Cys Asn Tyr Thr lie Phe Tyr Gin Ala 435 440 445

Glu Gly Gly Lys Gly Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Ser He Leu Gin 450 455 460

Tyr Gly Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys Thr Ser Tyr lie Val Gin Val 465 470 475 480

Met Ala Ser Thr.Ser Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Ser lie Asn Phe 485 490 495

Lys Thr Leu Ser His His His His His His Glu Gin Lys Leu lie Ser 50 0 505 510

Glu Glu Asp Leu 515 <210> 262 <211> 524 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 262

Met Met' Trp Thr Trp Ala Leu Trp Met Leu Pro Ser Leu Cys Lys Phe 1 5 10 . 15

Ser Leu Ala Ala Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Tyr 20 25 30

Tyr Tyr Arg Lys Asn Leu Thr Cys Thr Trp Ser Pro Gly Lys Glu Thr 35 40 45

Ser Tyr Thr Gin Tyr Thr Val Lys Arg Thr Tyr Ala Phe Gly Glu Lys 50 55 60

His Asp Asn Cys Thr Thr Asn Ser Ser Thr Ser Glu Asn Arg Ala Ser 65 70 75 80

Cys Ser Phe Phe Leu Pro Arg lie Thr lie Pro Asp Asn Tyr Thr lie 85 90 95

Glu Val Glu Ala Glu Asn Gly Asp Gly Val lie Lys Ser His Met Thr 100 105 110

Tyr Trp Arg Leu Glu Asn lie Ala Lys Thr Glu Pro Pro lie lie Leu 115 ' 120 125

Ser Val Asn Pro lie Cys Asn Arg Met Phe Gin lie Gin Trp Lys Pro 130 135 140

Arg Glu Lys Thr Arg Gly Phe Pro Leu Val Cys Met Leu Arg Phe Arg .145 150 155 160

Thr Val Asn Ser Ser Arg Trp Thr Glu Val Asn Phe Glu Asn Cys Lys 165 170 175 t

Gin Val Cys Asn Leu Thr Gly Leu Gin Ala Phe Thr Glu Tyr Val Leu 180 185 190

Ala Leu Arg Phe Arg Phe Asn Asp Ser Arg Tyr Trp Ser Lys Trp Ser 195 200 205

Lys Glu Glu Thr Arg Val Thr Met Glu Glu Val Pro His Val Leu Asp 210 215 220

Leu Xrp Arg He Leu Glu Pro Ala Asp Met Asn Gly Asp Arg Lys Val 225 230 23S 240

Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly Ala Pro Val Leu Glu Lys Thr 245 250 255

Phe Gly Tyr His lie Gin Tyr Phe Ala Glu Asn Ser Thr Asn Leu Thr 260 265 270

Glu lie Asn Asn He Thr Thr Gin Gin Tyr Glu Leu Leu Leu Met Ser 275 280 285

Gin Ala His Ser Val Ser Val Thr Ser Phe Asn Ser Leu Gly Lys Ser 290 295 300

Gin Glu Thr He Leu Arg He Pro Asp Val His Glu Lys Thr Phe Gin 305 310 315 320

Tyr He Lys Ser Met Gin Ala Tyr He Ala Glu Pro Leu Leu Val Val 325 330 335

Asn Trp Gin Ser Ser He Pro Ala Val Asp Thr Trp lie Val Glu Trp 340 345 350

Leu Pro Glu Ala Ala Met Ser Lys Phe Pro Ala Leu Ser:Trp Glu Ser 355 360 365

Val Ser Gin Val Thr Asn Trp Thr lie Glu Gin Asp Lys Leu Lys Pro 370 375 380

Phe Thr Cys Tyr Asn He Ser Val Tyr Pro Val Leu Gly His Arg Val 385 390 395 400

Gly Glu Pro Tyr Ser He Gin Ala Tyr Ala Lys Glu Gly Thr Pro Leu 405 410 415

Lys Gly Pro Glu Thr Arg Val Glu Asn He Gly Leu Arg Thr Ala Thr 420 425 430 lie Thr Trp Lys Glu He Pro Lys Ser Ala Arg Asn Gly Phe He Asn 435 440 445

Asn Tyr Thr Val Phe Tyr Gin Ala Glu Gly Gly Lys Glu Leu Ser Lys 450 455 460

Thr Vai Asn Ser His Ala Leu Gin Cys Asp Leu Glu Ser Leu Thr Arg 465 470 475 480

Arg Thr Ser Tyr Thr Val Trp Val Met Ala Ser Thr Arg Ala Gly Gly 485 490 495

Thr Asn Gly Val Arg lie Asn Phe.Lys Thr Leu Ser His His His His 500 505 510

His His Glu Gin Lys Leu lie Ser Glu Glu Asp Leu 515 520 <210> 263 <211> 524 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 263

Met Trp Thr Leu Ala Leu Trp Ala Phe Ser Phe Leu Cys Lys Phe Ser 1 5 10 15

Leu Ala Val Leu Pro Thr Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Phe Tyr 20 25 30

Phe Asp Arg Asn Leu Thr Cys Thr Trp Arg Pro Glu Lys Glu Thr Asn 35 40 45

Asp Thr Ser Tyr lie Val Thr Leu Thr Tyr Ser Tyr Gly Lys Ser Asn 50 55 60

Tyr Ser Asp Asn Ala Thr Glu Ala Ser Tyr Ser Phe Pro Arg Ser Cys 65 70 75 80

Ala Met Pro Pro Asp lie Cys Ser Val Glu Val Gin Ala Gin Asn Gly 85 90 95

Asp Gly Lys Val Lys Ser Asp lie Thr Tyr Trp His Leu lie Ser lie 100 105 110

Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys lie Phe Arg Val Lys Pro Val Leu Gly 115 120 125 lie Lys Arg Met lie Gin lie Glu Tip lie Lys Pro Glu Leu Ala Pro 130 135 . 140

Vai Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu Arg Phe Arg Thr Vai Asn Ser 145 . 1.50 155 160

Thr Ser Trp Met Glu Vai Asn Phe Ala Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn 165 170 175

Gin Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gin Pro Phe Thr Glu Tyr Vai Ile 180 185 190

Ala Leu Arg Cys Ala Vai Lys Glu Ser Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser 195 200 205

Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu Glu Ala Pro His Vai Leu Asp 210 215 220

Leu Trp Arg lie Leu Glu Pro Ala Asp Met Asn Gly Asp Arg Lys Vai 225 230 235 240

Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly Ala Pro Vai Leu Glu Lys Thr 245 250 255

Phe Gly Tyr His Ile Gin Tyr Phe Ala Glu Asn Ser Thr Asn Leu Thr 260 265 270

Glu lie Asn Asn lie Thr Thr Gin Gin Tyr Glu Leu Leu Leu Met Ser 275 280 285

Gin Ala His Ser vai Ser Vai Thr Ser Phe Asn Ser Leu Gly Lys Ser 290 295 300

Gin Glu Thr lie Leu Arg lie Pro Asp Vai His Glu Lys Thr Phe Gin 305 310 315 320

Tyr Ile Lys Ser Met Gin Ala Tyr lie Ala Glu Pro Leu Leu Vai Vai 325 330 335

Asn Trp Gin Ser Ser lie Pro Ala Vai Asp Thr Trp Ile Vai Glu Trp 340 345 3.50

Leu Pro Glu Ala Ala Met Ser Lys Phe Pro Ala Leu Ser Trp Glu Ser 355 360 365

Vai Ser Gin Vai Thr Asn Trp Thr lie Glu Gin Asp Lys Leu Lys Pro 370 375 380

Phe Thr Cys Tyr Asn lie Ser Val Tyr Pro Val Leu Gly His Arg Val 385 390 395 400 ·

Gly Glu Pro Tyr Ser lie Gin Ala Tyr Ala Lys Glu Gly Thr Pro Leu 405 410 415

Lys Gly Pro Glu Thr Arg Val Glu Asn lie Gly Leu Arg Thr Ala Thr 420 425 430 lie Thr Trp Lys Glu lie Pro Lys Ser Ala Arg Asn Gly Phe lie Asn 435 440 445

Asn Tyr Thr Val Phe Tyr Gin Ala Glu Gly Gly Lys Glu Leu Ser Lys 450 455 460

Thr Val Asn Ser His Ala Leu Gin Cys Asp Leu Glu Ser Leu Thr Arg 465 470 475 480

Arg Thr Ser Tyr Thr Val Trp Val Met Ala Ser Thr Arg Ala Gly Gly 485 490 495

Thr Ash Gly Val Arg lie Asn Phe Lys Thr Leu Ser His His His His 500 . 505 510

His His Glu Gin Lys Leu lie Ser Glu Glu Asp Leu 515 520 <210> 264 <211> 523 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 264

Met Trp Thr Leu Ala Leu Trp Ala Phe Ser Phe Leu Cys Lys Phe Ser 1 5 10 15

Leu Ala Val Leu Pro Thr Lys Pro Glu Asn lie Ser Cys Val Phe Tyr 20 25 30

Phe Asp Arg Asn Leu Thr Cys Thr Trp Arg Pro Glu Lys Glu Thr Asn 35 40 45

Asp Thr -Ser Tyr lie Val Thr Leu Thr Tyr Ser Tyr Gly Lys Ser Asn. 50 55 60

Tyr Ser Asp Asn Ala Thr Glu Ala Ser Tyr Ser Phe Pro Arg Ser Cys 65 70 '75 80 AJs Met Pro· Pro Asp lie Cys Ser Val Glu Val Gin Ala Gin Asn Gly 85 90 95

Asp Gly Lys Val Lys Ser Asp lie Thr Tyr Trp His Leu lie Ser lie 100 105 110

Ala Lys Thr Glu Pro Pro Lys lie Phe Arg Val Lys Pro Val Leu Gly 115 120 125 lie Lys Arg Met lie Gin lie .Glu Trp lie Lys Pro Glu Leu Ala Pro 130 135 140

Val Ser Ser Asp Leu Lys Tyr Thr Leu Arg Phe Arg Thr Val Asn Ser 145 150 155 150

Thr Ser Trp .Met Glu Val Asn Phe Ala Lys Asn Arg Lys Asp Lys Asn 165 170 175

Gin Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gin Pro Phe Thr Glu Tyr Val lie 180 185 190

Ala Leu Arg Cys Ala val Lys Glu Ser Lys Phe Trp Ser Asp Trp Ser 195 200 205

Gin Glu Lys Met Gly Met Thr Glu Glu Glu Ala Pro Cys Gly Leu Glu 210 215 220

Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala Glu Ala Asp Gly Arg Arg Pro Val 225 230 235 240

Arg Leu Leu Trp Lys Lys Ala Arg Gly Ala Pro val Leu Glu Lys Thr 245 250 255

Leu Gly Tyr Asn lie Trp Tyr Tyr Pro Glu Ser Asn Thr Asn Leu Thr 260 265 270

Glu Thr Met Asn Thr Thr Asn Gin Gin Leu Glu Leu His Leu Gly Gly 275 280 285

Glu Ser Phe Trp Val Ser Met lie Ser Tyr Asn Ser Leu Gly Lys Ser 290 295. 300

Pro Val Ala Thr Leu Arg lie Pro Ala lie Gin Glu Lys Ser Phe Gin 305 310 315 320

Cys lie Glu Val Met Gin Ala Cys Val Ala Glu Asp Gin Leu Val Val 325 330 335

Lys Trp Gin Ser Ser Ala Leu Asp Val Asn Thr Trp Met lie Glu Trp 340 345 350

Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro Thr Thr Leu Ser Trp Glu Ser Val 355 360 365

Ser Gin Ala Thr Asn Trp Thr lie Gin Gin Asp Lys Leu Lys Pro Phe 370 375 380

Trp Cys Tyr Asn lie Ser Val Tyr Pro Met Leu His Asp Lys Val Gly 385 390 395 400

Glu Pro Tyr Ser lie Gin Ala Tyr Ala Lys Glu Gly Val Pro Ser Glu 405 410 415

Gly Pro Glu Thr Lys Val Glu Asn lie Gly Val Lys Thr Val Thr lie 420 425 430

Thr Trp Lys Glu lie Pro Lys Ser Glu Arg Lys Gly lie lie Cys Asn 435 440 445

Tyr Thr lie Phe Tyr Gin Ala Glu Gly Gly Lys Gly Phe Ser Lys Tiir 450 455 460

Val Asn Ser Ser lie Leu Gin Tyr Gly Leu Glu Ser Leu Lys Arg Lys 465 470 475 480

Thr Ser Tyr lie Val Gin Val Met Ala Ser Thr Ser Ala Gly Gly Thr 485 490 495

Asn Gly Thr Ser lie Asn Phe Lys Thr Leu Ser His His His His His 500 505 510

His Glu Gin Lys Leu lie Ser Glu Glu Asp Leu 515 520 <210> 265 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 265

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 266 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 266

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Leu Glu Thr 1 5 10 <210> 267 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 267

Asp Gly Tyr Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Glu Thr 1 5 10 <210> 268 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 268

Asp Gly Leu-Asp Asp Gly Pro Tyr Thr Met Glu Thr 1 5 10 <210> 269 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 269

Asp Gly Leu Asp Asp Gly Pro Tyr thr Met Glu Ser 1 5 10 <210> 270 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 270

Gly Tyr He Met Asn 1 5 <210> 271 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 271

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15

Gly <210> 272 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 272

Gly Tyr Val Met Asn 1 5 <210> 273 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 273

Gly Tyr lie lie Asn 1 5 <210> 274 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 274

Gly Tyr lie Leu Asn 1 '5 <210> 275 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 275

Gly

Leu lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 1 5 10 1 15 <210> 276 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 276

LeU lie Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Pro Lys Phe Lys 1 5 10 15

Gly <210> 277 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 277

Arg Thr Ser Glu Asn He Tyr Ser Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 278 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 278

Gin His His Tyr Glu Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 279 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 279

Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Arg Phe Leu Ala 15 10 <210> 280 <211> 11

<212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 280

Arg Thr Ser Glu Asn lie Tyr Arg Phe Val Ala 1 5 10 <210> 281 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 281

Gin His His Tyr Asp Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 282 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <400> 282

Gin His His Tyr Glu Asp Pro Leu Thr 1 5 <210> 283 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 283

Gin His His Thr Glu Ser Pro Leu Phe 1 5 <210> 284 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <223> Uma sequência peptídica artificialmente sintetizada <22 0> <400> 284

Gly Tyr Ala Met Asn 1 5 <210> 285 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <400> 285

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 286 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência peptidica artificialmente sintetizada <4Ο0> 286

Arg Ser Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 287 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <22 0> <223> Uma sequência artificialmente sintetizada <400> 287

His His His His His His Glu Gin Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 15 10 15

Lisboa, 29 de Setembro de 2015.

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Um anticorpo anti-NRIO que pode ser um de entre: (1) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDRl com a SEQ ID NO: 9, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H30, H44) e uma região variável da cadeia leve contendo uma CDRl com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L17); (2) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDRl com a SEQ ID NO: 196, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H28, H42) e uma região variável da cadeia leve contendo uma CDRl com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L17); (3) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDRl com a SEQ ID NO: 176, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 197, CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H34, H46) e uma região variável da cadeia leve contendo uma CDRl com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L17); (4) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 9, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 198, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H57, H78) e uma região variável da cadeia leve contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L17); (5) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 176, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 198, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H71, H92) e uma região variável da cadeia leve contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 202, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L17); e (6) um anticorpo incluindo uma região variável da cadeia pesada contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 9, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 199, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 184 (H97, H98) e uma região variável da cadeia leve contendo uma CDR1 com a SEQ ID NO: 203, uma CDR2 com a SEQ ID NO: 170, e uma CDR3 com a SEQ ID NO: 193 (L50).
2. O anticorpo anti-NR10 antibody da reivindicação 1, que seja qualquer um de entre: (1) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 210 (H44) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H44L17); (2) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 207 (H30) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H30L17); (3) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 209 (H42) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H42L17); (4) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 206 (H28) e uma região variável da cadeia leve contendo uma (L17) (H28L17); sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (5) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 211 (H46) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H46L17); (6) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 208 (H34) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H34L17); (7) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 214 (H78) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H78L17); (8) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 212 (H57) e uma região variável da cadeia leve contendo uma (L17) (H57L17); sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (9) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 215 (H92) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H92L17); (10) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 213 (H71) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 220 (L17) (H71L17); (11) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 217 (H98) e uma região variável da cadeia leve contendo uma sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 221 (L50) (H98L50); e (12) um anticorpo contendo uma região variável da cadeia pesada que inclua a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 216 (H97) e uma região variável da cadeia leve contendo uma (L50) (H97L50). sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 221 3. 0 anticorpo anti-NRIO da reivindicação 1 ou da 2, que seja um anticorpo humanizado. 4. 0 anticorpo anti-NRIO da reivindicação 2, que seja qualquer um de entre: (1) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 228 (H44) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H44L17); (2) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 225 (H30) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H30L17); (3) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 227 (H42) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H42L17); (4) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 224 (H28) e uma cadeia leve contendo a (L17) (H28L17); sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (5) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 229 (H46) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H46L17); (6) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 226 (H34) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H34L17); (7) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 232 (H78) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H78L17); (8) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 230 (H57) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H57L17); (9) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 233 (H92) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H92L17); (10) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 231 (H71) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 238 (L17) (H71L17); (11) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 235 (H98) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 239 (L50) (H98L50); e (12) um anticorpo incluindo uma cadeia pesada contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 234 (H97) e uma cadeia leve contendo a sequência de aminoácidos com a SEQ ID NO: 239 (L50) (H97L50).
5. Uma composição farmacêutica incluindo o anticorpo anti-NRIO de qualquer uma das reivindicações 1 a 4 .
6. O anticorpo anti-NRIO de qualquer uma das reivindicações 1 a 4 para utilização mo tratamento de uma doença inflamatória.
7. A utilização do anticorpo anti-NRIO de qualquer uma das reivindicações 1 a 4 no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença inflamatória. Lisboa, 29 de Setembro de 2015.