PT2219647E - Usos terapêuticos de compostos tendo atividade combinada de sert, 5-ht3 e 5-ht1a - Google Patents

Description

ΡΕ2219647 1

DESCRIÇÃO

"USOS TERAPÊUTICOS DE COMPOSTOS TENDO ATIVIDADE COMBINADA DE SERT, 5-HT3 E 5-HTia "

Campo da Invenção A presente invenção diz respeito ao uso terapêutico de compostos que têm uma atividade combinada de SERT, 5-HT3 e 5-HTia.

Antecedentes da Invenção

Os inibidores de recaptação da serotonina seletivos (SSRIs) têm sido há anos favorecidos pelos médicos para o tratamento de muitas doenças do SNC, tais como depressão e ansiedade porque eles são eficazes e têm um perfil de segurança que é favorável comparado com a geração anterior de fármacos do SNC, isto é os assim chamados triciclicos. Todavia, os SSRIs são também impedidos por uma fração significativa de não respondentes, isto é pacientes que não respondem ou não respondem completamente ao tratamento. Além disso, tipicamente um SSRI não começa a mostrar efeito senão depois de semanas de tratamento. Finalmente, ainda que os SSRIs tipicamente deem origem a menos efeitos adversos do que os triciclicos, a administração de SSRIs muitas vezes provoca efeitos adversos, tais como efeitos secundários sexuais e pertur- 2 ΡΕ2219647 bações do sono. Estes efeitos adversos têm difícil convívio com muitos pacientes e são causa de abandono do tratamento para uma fração significativa de pacientes que recebem SSRIs. É conhecido que uma combinação da inibição do transportador de serotonina (SERT) com uma atividade num ou mais recetores de serotonina pode ser benéfica. Tem sido relatado que a combinação de pindolol, que é um agonista parcial de 5-HTiA, com um inibidor de recaptação da serotonina a originar um começo rápido do efeito [Psych. Res., 125 (2004) 81-86]. Isto implicará um começo mais curto do efeito dos níveis de serotonina aumentados na clínica e um aumento ou potenciação do efeito terapêutico do inibidor de recaptação da serotonina.

Doenças relacionadas com SNC, tais como e.g. depressão, ansiedade e esquizofrenia são muitas vezes co-mórbidas com outras perturbações ou disfuncionalidades, tais como défices ou enfraquecimentos cognitivos [Scand. J. Psych., 43 (2002) 239-251; Am. J. Psych., 158 (2001) 1722- -1725]. Vários neurotransmissores são tidos como estando envolvidos nos eventos neuronais que regulam a cognição. Em particular, o sistema colinérgico desempenha um papel proeminente na cognição, e os compostos que afetam o sistema colinérgico são por conseguinte potencialmente úteis para o tratamento do enfraquecimento cognitivo. Os compostos que afetam o recetor 5-HTiA e/ou o recetor 5-HT3 3 ΡΕ2219647 são conhecidos por afetarem o sistema colinérgico, e eles podem como tal ser úteis no tratamento de enfraquecimento cognitivo.

Por isso, um composto exercendo atividade no recetor 5-HTiA e/ou 5-HT3 deverá ser esperado ser útil no tratamento de enfraquecimento cognitivo. Um composto que além disso também exerce atividade SERT seria particularmente útil para o tratamento do enfraquecimento cognitivo em pacientes que são também sofredores duma doença que beneficiará dum aumento (mais rápido) nos níveis de serotonina. 0 pedido de patente internacional publicado como WO 03/029232 revela uma gama de compostos incluindo 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)fenil]piperazina (Exemplo le) tendo atividade de inibição da recaptação da serotonina. O pedido de patente internacional WO 2007/144005 que foi publicado depois da data de prioridade do presente pedido revela que 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)fenil]-piperazina é também um antagonista 5-HT3 e um agonista parcial 5-HTiA.

Sumário da Invenção

Os inventores presentes surpreendentemente encontraram que 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)-fenil]piperazina exerce uma combinação de inibição de SERT, antagonismo de 5-HT3 e agonismo de 5-HTiA. 4 ΡΕ2219647

Numa incorporação, a invenção diz respeito ao uso de 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)fenil]piperazina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença selecionada de entre depressão, ansiedade, dor de abuso ou crónica, em que o referido medicamento é para uso num paciente que recebeu previamente uma outra medicação para o tratamento da referida doença, medicação essa que cessou ou foi reduzida devido ao sono ou eventos adversos sexualmente relacionados .

Numa incorporação, a invenção proporciona 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)-fenil]piperazina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de uma doença selecionada de entre depressão, ansiedade, abuso ou dor crónica num paciente que recebeu previamente uma outra medicação para o tratamento da referida doença medicação essa que cessou ou foi reduzida devido ao sono ou eventos sexualmente adversos relacionados.

Figuras

Figura 1: Figura 2: Figura 3: Figura 4: XRPD de base cristalina XRPD de forma alfa do sal hidrobrometo XRPD de forma beta do sal hidrobrometo XRPD de forma gama do sal hidrobrometo

Figura 5: XRPD de hemi-hidrato do sal hidrobrometo 5 ΡΕ2219647

Figura 6: Mudança no item 4 na classificação HAM-D (Insónia Precoce) para placebo, 5 mg e 10 mg do composto I (sal de HBr) ao longo de 6 semanas. Houve aproximadamente 100 pacientes em cada grupo

Figura 7: Mudança no item 5 na classificação HAM-D (Insónia a Meio) para placebo, 5 mg e 10 mg de composto I (sal de HBr) ao longo de 6 semanas. Houve aproximadamente 100 pacientes em cada grupo

Figura 8: Mudança no item 6 na classificação HAM-D (Insónia Tardia) para placebo, 5 mg e 10 mg de composto I (sal de HBr) ao longo de 6 semanas. Houve aproximadamente 100 pacientes em cada grupo

Figura 9: Efeito do composto I no teste de formalina intradérmico. O eixo dos XX mostra a quantidade de composto administrado; o eixo dos YY' mostra a quantidade de tempo (s) gasto a lamber a pata.

Figura 9a: Resposta no período 0-5 minutos.

Figura 9b: Resposta no período 20-30 minutos.

Figura 10a: Níveis de acetilcolina extracelular no córtex pré-frontal em ratazanas que se movem livremente após a administração de sal de HBr de 1-[2-(2,4-dimetil-fenilsulfanil)fenil]piperazina.

Figura 10b: Níveis de acetilcolina extracelular no hipocampo ventral em ratazanas que se movem livremente na administração de sal de HBr de 1-[2-(2,4-dimetilfenil-sulfanil)fenil]-piperazina.

Figura 11: Efeito do sal de HBr de 1-[2-(2,4-dimetil- 6 ΡΕ2219647 fenilsulfanil)fenil]piperazina no condicionamento do medo contextuai em ratazanas Sprague-Dawley quando dado 60 minutos antes da aquisição. 0 comportamento de congelamento foi pontuado durante o período de habituação de 58 s antes do choque nas patas US (aquisição de pré-choque) (barras brancas) . O comportamento de congelamento foi medido 24 h depois do treino (teste de retenção) (barras pretas).

Figura 12: Efeito do sal de HBr de 1-[2-(2,4-dimetil-fenilsulfanil)fenil]piperazina no condicionamento do medo contextuai em ratazanas Sprague-Dawley quando dado 1 h antes do teste de retenção. 0 comportamento de congelamento foi pontuado durante 58 s, antes do choque nas patas US (aquisição) (barras brancas). O comportamento de congelamento foi medido 24 h depois do treino (teste de retenção) (barras pretas).

Figura 13: Efeito do sal de HBr de 1-[2-(2,4-dimetil-fenilsulfanil)fenil]piperazina no condicionamento do medo contextuai em ratazanas Sprague-Dawley quando dado imediatamente após a aquisição. O comportamento de congelamento foi pontuado durante 58 s, antes do choque nas patas US (aquisição pré-choque) (barras brancas). O comportamento de congelamento foi medido 24 h depois do treino (teste de retenção) (barras pretas).

Descrição detalhada da invenção A invenção diz respeito ao uso do composto I, isto é 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)-fenil]piperazina, cuja estrutura é 7 ΡΕ2219647

e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Numa incorporação, os referidos sais farmaceuti-camente aceitáveis são sais de adição de ácido de ácidos que são não tóxicos. Os referidos sais incluem sais feitos a partir de ácidos orgânicos, tais como os ácidos maleico, fumárico, benzóico, ascórbico succinico, oxálico, bis-metilenossalicílico, metanossulfónico, etanodissulfónico, acético, propiónico, tartárico, salicilico, cítrico, glucónico, lático, málico, mandélico, cinâmico, citracóni-co, aspártico, esteárico, palmítico, itacónico, glicólico, p-aminobenzóico, glutâmico, benzenossulfónico, ácidos teo-filina-acéticos, bem como as 8-haloteofilinas, for exemplo 8-bromoteofilina. Os referidos sais podem também ser feitos a partir de sais inorgânicos, tais como ácidos clorídrico, bromídrico, sulfúrico, sulfâmico, fosfórico e nítrico. É feita menção particular aos sais feitos a partir de ácido metanossulfónico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido mesotartárico, ácido (+)-tartárico, ácido (-)-tartárico, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosforoso e ácido nítrico. É feita menção distinta do sal hidrobrometo. ΡΕ2219647

Numa incorporação, a invenção diz respeito ao uso do composto I conforme revelado com a condição de que o referido composto não seja a base livre de 1—[2— (2,4 — -dimetilfenilsulfanil)fenil]piperazina numa forma não cristalina.

As formas de dosagem orais, e em particular os comprimidos, são muitas vezes preferidas pelos pacientes e médico praticante devido à facilidade de administração e à consequente melhor aceitação. Para comprimidos, é preferível que os ingredientes ativos sejam cristalinos. Numa incorporação, a invenção diz respeito ao uso de compostos que são cristalinos. A cristalinidade de compostos usados na presente invenção é evidenciada pelo XRPD mostrado nas Figuras 1-5. WO 2007/144005 revela reflexões de XRPD de outros sais usados na presente invenção. O quadro abaixo sumaria as maiores reflexões de XRDP de alguns compostos usados na presente invenção.

Posições de pico de raios X selecionadas (°2Θ), todos os valores ±0,Io__

Base cristalina 11,10 16, 88 17, 42 22,23 -hidrobrometo (a) 5, 85 9, 30 17, 49 18,58 -hidrobrometo (β) 6, 89 9, 73 13,78 14, 62 -hidrobrometo (Y) 11, 82 16, 01 17,22 18, 84 -hidrobrometo (hidrato) 10, 69 11, 66 15,40 17,86

Numa incorporação os cristais usados na presente 9 ΡΕ2219647 invenção são solvatos, isto é, cristais em que as moléculas de solvente fazem parte da estrutura cristalina. 0 solvato pode ser formado a partir de água, caso em que os solvatos são muitas vezes referidos como hidratos. Alternativamente, os solvatos podem ser formados a partir de outros solventes, tais como e.g. etanol, acetona ou acetato de etilo. A quantidade exata de solvato muitas vezes depende das condições. Por exemplo, os hidratos perderão tipicamente água à medida que a temperatura é aumentada ou à medida que a humidade relativa é diminuída.

Numa incorporação, os compostos da presente invenção são cristais não solvatados.

Alguns compostos são higroscópicos, isto é eles absorvem água quando expostos à humidade. A higroscopici-dade é geralmente olhada como uma propriedade não desejada para compostos que vão ser apresentados numa formulação farmacêutica, em particular numa formulação seca, tal como comprimidos. Numa incorporação, a invenção proporciona cristais com baixa higroscopicidade. Para formas de dosagem orais usando ingredientes ativos cristalinos é também benéfico se os referidos cristais estiverem bem definidos. No presente contexto, o termo "bem definido" em particular significa que a estequiometria é bem definida, isto é que a proporção entre os iões que formam o sal é a proporção entre pequenos inteiros, tais como 1:1, 1:2, 2:1, 1:1:1, etc. Numa incorporação, os compostos da presente invenção são cristais bem definidos. 10 ΡΕ2219647

Os compostos cristalinos usados na presente invenção podem existir em mais do que uma forma, isto é, eles podem existir em formas polimórficas. As formas polimórficas existem se um composto pode cristalizar em mais do que uma forma. A presente invenção tem a intenção de abranger todas tais formas polimórficas, quer na forma de compostos puros quer na forma de suas misturas.

Numa incorporação, a presente invenção usa compostos numa forma purificada. 0 termo "forma purificada" tem a intenção de indicar que o composto está essencialmente livre doutros compostos ou outras formas do mesmo composto, conforme possa ser o caso.

Conforme evidenciado e.g. pelas Figuras 2-5, os compostos usados na presente invenção, no caso o sal hidrobrometo, podem existir em várias formas, isto é ser polimórficos. As formas polimórficas têm propriedades diferentes, e as mostradas no Exemplo 2, a forma beta do sal hidrobrometo é a mais estável conforme demonstrado pelo ponto de fusão por DSC mais alto e a solubilidade mais baixa. Além disso, a forma beta tem uma combinação atrativa de baixa higroscopicidade e solubilidade, o que torna este composto particular adequado para fazer comprimidos. Por isso, numa incorporação, a invenção proporciona o uso do sal hidrobrometo de 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)-fenil]piperazina com reflexões no XRDP em aproximadamente 6, 89, 9, 73, 13,78 e 14,62 (°2Θ), e em particular com um XRPD conforme mostrado na Figura 3. 11 ΡΕ2219647 A solubilidade dum ingrediente ativo é também significativa para a escolha da forma de dosagem visto que ela pode ter um impacto direto na biodisponibilidade. Para formas de dosagem orais, uma solubilidade mais alta do ingrediente ativo é geralmente tida como sendo benéfica uma vez que aumenta a biodisponibilidade.

Conforme mostrado no Exemplo 1, os compostos usados na presente invenção são inibidores potentes do transportador de serotonina humano, isto é eles inibem a recaptação da serotonina. Além disso, os compostos são antagonistas potentes no recetor 5-HT3 do rato, ratazana, porquinho da india e canino. No recetor 5-HT3 humano, clonado em oócitos, os compostos foram encontrados como sendo antagonistas em baixas concentrações (CI50 aprox. 20 nM), ao passo que em concentrações mais altas os compostos revelam propriedades agonisticas (ED50 = 2,1 μΜ) . Uma aplicação subsequente dos compostos da presente invenção em alta concentração não mostra qualquer resposta agonistica, o que poderá ser devido a rápida dessensibilização ou antagonismo direto in vitro. Por conseguinte, em baixas concentrações os compostos da presente invenção revelam um marcado antagonismo no recetor humano 5-HT3 conforme observado no recetor 5-HT3 de outras espécies. Os dados também mostram que os compostos usados na presente invenção são agonistas no recetor 5-HTiA com um valor Ki de 15 nM e 96% de atividade intrínseca (ou eficácia). WO 2007/144005 revela valores ligeiramente 12 ΡΕ2219647 diferentes. Acredita-se contudo que esta diferença é uma matéria de grau e que não diz respeito a uma mudança fundamental na perceção do composto.

Conforme acima mencionado, existem razões teóricas para que os compostos que são agonistas de 5-HTia e/ou antagonistas de 5-HT3 sejam esperados como sendo úteis no tratamento de défices cognitivos, e isto é suportado por evidência clinica. T. Sumiyoshi, Am. J. Psych., 158 (2001) 1722-1725, relata um estudo em que pacientes receberam antipsicóticos típicos, tais como haloperidol, sulprida e pimozida, todos com falta de atividade em 5-HTiA em combinação com placebo ou tandospirona, a qual é um agonista de 5-HTia. Os pacientes que receberam tandospirona no topo dos antipsicóticos mostraram uma melhoria no seu desempenho cognitivo enquanto os pacientes que receberam placebo não. De modo semelhante, antipsicóticos atípicos, tais como clozapina, que são também agonistas de 5-ΗΤχΑ acentuam a cognição em pacientes esquizofrénicos, enquanto antipsicóticos típicos, tais como haloperidol que não têm atividade em 5-HTiA, não: [Y. Chung, Brain Res.f 1023 (2004) 54-63]. Num estudo cruzado duplo cego aleatorizado em indivíduos masculinos saudáveis, as avaliações da memória verbal e espacial e atenção sustentada demonstraram que o antagonista de 5-HT3, alosetrom atenuou défices induzidos por escopolamina na memória verbal e espacial [Preston, Recent Advances in the treatment of Neurodegenerative disorders and cognitive function, Racagni e Langer (eds.), Basel Karger, 1994, p 89-93]. 13 ΡΕ2219647

Conforme mostrado no Exemplo 5 os compostos da presente invenção dão origem a um aumento no nível extracelular de acetilcolina no córtex pré-frontal e hipocampo ventral em ratazanas. Espera-se que estes achados pré-clínicos traduzam um efeito clínico no tratamento de enfraquecimentos cognitivos, cf. o uso de inibidores de acetilcolina-esterase no tratamento de enfraquecimentos cognitivos, e.g. na doença de Alzheimer. Outro suporte para esta posição pode ser encontrado no Exemplo 6, em que os dados mostram que os compostos da presente invenção acentuam a memória contextuai em ratazanas. Tudo considerado, o perfil farmacológico dos compostos da presente invenção combinado com os efeitos sobre os níveis de acetilcolina e a memória em ratazanas sugerem fortemente que os compostos usados na presente invenção são úteis no tratamento de enfraquecimento cognitivo ou tratamento de doenças em que o paciente também sofre de enfraquecimento cognitivo. 0 enfraquecimento cognitivo está entre as caraterísticas clássicas da depressão, tais como, e.g., perturbação depressiva major. As perturbações cognitivas podem até alguma extensão ser secundárias a depressão no sentido de que uma melhoria no estado depressivo conduzirá também a uma melhoria do enfraquecimento cognitivo. Contudo, existe também clara evidência de que as perturbações cognitivas são, na verdade, independentes da depressão. Por exemplo, estudos têm mostrado persistente enfraquecimento cognitivo na recuperação da depressão [J. 14 ΡΕ2219647

Nervous Mental Dísease, 185 (1997) 748-754]. Além disso, o efeito diferencial dos antidepressivos na depressão e enfraquecimentos cognitivos ajuda a suportar melhor a noção de que a depressão e o enfraquecimento cognitivo são independentes, ainda que muitas vezes condições comórbidas. Ainda que medicamentos de serotonina e noradrenalina proporcionem melhorias comparáveis nos sintomas depressivos, vários estudos têm mostrado que a modulação do sistema noradrenérgico não melhora as funções cognitivas tanto quanto a modulação da serotonina [Brain Res. Buli., 58 (2002) 345-350; Hum. Psychopharmacol. , 8 (1993) 41-47].

As funções cognitivas são muitas vezes enfraquecidas em pacientes esquizofrénicos, e podem fazer parte dos assim chamados sintomas negativos de esquizofrenia. As funções cognitivas são também enfraquecidas em pacientes de DDAH.

Os défices cognitivos ou enfraquecimento cognitivo incluem um declínio nas funções cognitivas ou domínios cognitivos, e.g. memória de trabalho, atenção e vigilância, aprendizagem e memória verbal, aprendizagem e memória visual, raciocínio e resolução de problemas e.g. função executiva, velocidade de processamento e/ou cognição social. Em particular, os défices cognitivos ou enfraquecimento cognitivo podem indicar défices na atenção, pensamento desorganizado, pensamento lento, dificuldade na compreensão, fraca concentração, enfraquecimento na resolução de problemas, memória fraca, dificuldades na expres- 15 ΡΕ2219647 são de pensamentos e/ou dificuldades na integração de pensamentos, sentimentos e comportamento, ou dificuldades na extinção de pensamentos irrelevantes. Os termos "défices cognitivos" e "enfraquecimento cognitivo" têm a intenção de indicar o mesmo e são usados intermutavelmente.

Os dados apresentados no Exemplo 4 mostram que o composto I é útil no tratamento da dor, e que pode mesmo ter um efeito analgésico; estudos adicionais num modelo animal de dor neuropática confirmam esta observação. Por isso, o composto I pode ser útil no tratamento da dor e perturbações afetivas ou do humor, tais como depressão e ansiedade associadas com dor, e em particular dor crónica. A dor crónica inclui indicações tais como dor do membro fantasma, dor neuropática, neuropatia diabética, neuralgia pós-herpética (PHN), sindrome do túnel cárpico (CTS), sindrome do túnel társico, compressão do nervo ulnar, compressão espinal, neuropatia VIH, sindrome de dor regional complexa (CPRS), nevralgia do trigémeo/neuralgia facial/tique doloroso, intervenção cirúrgica (e.g. analgésicos pós-operatórios), vasculopatia diabética, resistência capilar ou sintomas diabéticos associados com insulite, dor associada com angina, dor associada com menstruação, dor associada com cancro, dor dental, dor de cabeça, enxaqueca, dor de cabeça do tipo tensão, neuralgia trigémica, sindrome da articulação temporomandibular, lesão muscular de dor miofascial, sindrome da fibromialgia, dor óssea e da articulação (osteoartrite), artrite reumatoide, artrite reumatoide e edema resultante de trauma associado com queimaduras, entorses ou fratura de osso, dor devida a 16 ΡΕ2219647 osteoartrite, osteoporose, metástases ósseas ou razões desconhecidas, gota, fibrosite, dor miofascial, síndromes do desfiladeiro torácico, dor na parte superior das costas ou dor na parte inferior das costas (em que a dor nas costas resulta de doença sistemática, regional ou da espinha primária (radiculopatia), dor pélvica, dor de peito cardíaca, dor de peito não cardíaca, dor associada a lesão da medula espinal (LME ou SCI), dor pós-acidente vascular cerebral central, neuropatia do cancro, dor da SIDA, dor de drepanócito, efeito de chicotada na cabeça e dor geriátrica. 0 Composto I foi testado em ensaios clínicos usando HAM-D (Hamilton Rating Scale for Depression ou Escala de Avaliação de Hamilton para a Depressão) como ponto final clínico. A escala HAM-D pode ser usada para avaliar a severidade da depressão em pacientes por meio dum questionário de 24 itens. Os itens 4, 5 e 6 da escala referem-se a como os pacientes dormem, isto é, é fácil adormecer (Insónia Inicial), o paciente acorda durante a noite (Insónia Intermédia), e o paciente acorda cedo de manhã (Insónia Tardia). 0 composto foi testado a 5 e 10 mg diários contra placebo com aproximadamente 100 pacientes por braço. Os dados nas Figuras 6-8 mostram claramente que o composto I origina uma melhoria grande e dependente da dose do padrão do sono que é superior ao proporcionado por placebo. É bem conhecido que o distúrbio no sono é um efeito adverso geral da maioria dos antidepressivos. Em particular ISRSs e compostos que inibem o transportador de noradrenalina são relatados como dando origem a problemas 17 ΡΕ2219647 com o inicio e manutenção do sono e problemas com insónia são também muitas vezes relatados [Int. Clin. Psychopharm., 21 (supl 1) (2006) S25-S29]. Outros reportam que tais compostos originam a sono REM suprimido, latência de sono aumentada, menos sono eficiente, aumento nos despertares noturnos, e fragmentação do sono [Hum. Psychopharm. Clin. Exp., 20 (2005) 533-559]. É por conseguinte um resultado surpreendente que a administração de composto I não esteja associada com efeitos adversos no sono, mas de facto proporcione uma melhoria do padrão do sono. Por isso, o composto usado na presente invenção pode ser útil no tratamento de perturbações do sono, tais como dificuldades em adormecer, acordamentos noturnos frequentes e despertares matinais precoces. O ensaio clinico acima mencionado também capturou efeitos sexuais adversos relatados pelos pacientes. O quadro abaixo mostra o número de pacientes que relatam os tipos especificados de efeitos adversos sexualmente relacionados .

Efeito adverso relatado Placebo 5 mg 10 mg Anorgasmia 0 0 0 Ejaculação retardada 0 0 0 Disfunção erétil 0 0 0 Libido diminuída 0 1 1 Orgasmo anormal 2 0 0 Perda de libido 0 1 0 Sensação orgásmica diminuída 0 0 0 18 ΡΕ2219647 É bem conhecido que o tratamento com antidepres-sivos em geral e ISRSs em particular pode ser associado com disfunção sexual o que frequentemente conduz à descon-tinuação do tratamento. Tanto como 30-70% dos pacientes com ISRSs reportam défices na função sexual [J. Clin. Psych., 66 (2005) 844-848], défices esses que incluem libido diminuídos, orgasmos retardados, reduzidos ou ausentes, excitação diminuída e disfunção erétil. Os resultados acima que mostram que o efeito adverso sexual do composto I é similar ao do placebo é por conseguinte muito melhor do que o que seria normalmente esperado de um antidepressivo, e em particular um ISRS. Os compostos usados na presente invenção podem ser úteis no tratamento de disfunções sexuais, tais como anorgasmia, ejaculação retardada, disfunção erétil, libido diminuída, orgasmo anormal, perda de libido ou sensação orgásmica diminuída.

Os efeitos adversos que interrompem o sono e a atividade sexual podem ser muito difíceis de aceitar pelos pacientes e em particular paciente a longo prazo, para não mencionar o tratamento crónico, e eles podem causar saídas, abandonos, do tratamento. A ausência destes efeitos adversos em tratamentos compreendendo a administração do composto I torna o composto I particular útil em intervenções terapêuticas ao longo de um período de tempo estendido, tal como e.g. prevenção de recidiva de depressão.

Os efeitos benéficos sobre o padrão do sono provocados pelo composto I torna particularmente atrativo 19 ΡΕ2219647 usar o composto I conforme aqui descrito no tratamento de pacientes que já têm problemas com o sono ou sofrem duma perturbação do sono ou em pacientes com desordens sexualmente relacionadas.

Os compostos usados na presente invenção podem também ser úteis como segunda linha de tratamento para pacientes que não podem usar outros fármacos, tais como outros antidepressivos, tais como inibidores seletivos de recaptação da serotonina (ISRS), inibidores de recaptação da noradrenalina (IRN) seletivos, inibidores de recaptação da serotonina e da noradrenalina (IRSN) ou triciclicos (TCA) devido ao sono ou eventos adversos sexualmente relacionados. Nesta incorporação, o paciente a ser tratado recebeu uma outra medicação (ou está ainda a recebê-la), medicação essa que cessou ou foi reduzida (ou tem de cessar ou ser reduzida) devido ao sono ou eventos adversos sexualmente relacionados. Tipicamente, o paciente está sofrendo de transtornos do humor, tais como depressão e ansiedade, distúrbios de abuso (álcool, narcóticos, etc.) ou dor crónica. 0 termo "tratamento" e "tratando" conforme aqui usado significa a gestão e cuidado de um paciente para o propósito de combater uma condição, tal como uma doença ou uma desordem. 0 termo tem a intenção de incluir o espetro completo de tratamentos para uma dada condição da qual o paciente está a sofrer, tal como a administração do composto ativo para aliviar os sintomas ou complicações, 20 ΡΕ2219647 para atrasar a progressão da doença, desordem ou condição, para aliviar ou mitigar os sintomas e complicações, e/ou para curar ou eliminar a doença, desordem ou condição bem como para prevenir a condição, em que a prevenção é para ser compreendida como a gestão e cuidado dum paciente para o propósito de combater a doença, condição ou desordem e inclui a administração dos compostos ativos para prevenir o começo dos sintomas ou complicações. Não obstante, os tratamentos profilático (preventivo) e terapêutico (curativo) são dois aspetos separados da invenção. O paciente a ser tratado é preferivelmente um mamífero, em particular um ser humano.

Tipicamente, o tratamento da presente invenção envolverá a administração diária dos compostos da presente invenção. Isto pode envolver a administração uma vez ao dia, ou a administração duas vezes ao dia ou mesmo mais frequentemente.

Numa incorporação, a invenção diz respeito ao uso do composto I no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença selecionada de entre depressão, ansiedade, abuso e dor crónica num paciente que previamente recebeu (ou está ainda a receber) uma outra medicação, tal como outro antidepressivo, tal como e.g. inibidores seletivos de recaptação da serotonina (ISRS), inibidores de recaptação da noradrenalina (IRN) seletivos, inibidores de recaptação da serotonina/noradrenalina (IRSN) ou tricí-clicos (TCA) para o tratamento da referida doença, medica- 21 ΡΕ2219647 ção essa que cessou ou foi reduzida (ou tem de ser cessada ou reduzida) devido ao sono ou eventos adversos sexualmente relacionados.

Numa incorporação, a invenção diz respeito a um composto I para uso no tratamento de uma doença selecionada de entre depressão, ansiedade, abuso e dor crónica num paciente que previamente recebeu (ou está ainda a receber) uma outra medicação, tal como outro antidepressivo, tal como e.g. inibidores seletivos de recaptação da serotonina (ISRS), inibidores de recaptação da noradrenalina (IRN) seletivos, inibidores de recaptação da serotonina/-noradrenalina (IRSN) ou tricíclicos (TCA) para o tratamento da referida doença, medicação essa que cessou ou foi reduzida (ou tem de ser cessada ou reduzida) devido ao sono ou eventos adversos sexualmente relacionados. 0 composto I é convenientemente apresentado numa composição farmacêutica a qual pode ser preparada por métodos convencionais na técnica. É feita menção particular de comprimidos, os quais podem ser preparados por mistura do ingrediente ativo com adjuvantes e/ou diluentes ordinários e subsequentemente comprimindo a mistura numa máquina convencional de fazer comprimidos. Exemplos de adjuvantes ou diluentes compreendem: hidrogenofosfato de cálcio anidro, PVP, copolimeros de PVP-VA, celulose microcristalina, glicolato de amido e sódio, amido de milho, manitol, amido de batata, talco, estearato de magnésio, gelatina, lactose, gomas, e semelhantes. 22 ΡΕ2219647

Quaisquer outros adjuvantes ou aditivos usualmente usados para tais propósitos tais como corantes, aromatizantes, conservantes etc. podem ser usados com a condição de que eles sejam compatíveis com os ingredientes ativos.

As soluções para injeções podem ser preparadas pela dissolução do ingrediente ativo e possíveis aditivos numa parte do solvente para injeção, preferivelmente água estéril, ajustamento da solução ao volume desejado, esterilização da solução e seu enchimento em ampolas ou frascos adequados. Qualquer aditivo adequado convencionalmente usado na técnica pode ser adicionado, tais como agentes de tonicidade, conservantes, antioxidantes, etc.

As composições farmacêuticas fabricadas de acordo com esta invenção podem ser administradas por qualquer caminho adequado, for exemplo oralmente na forma de comprimidos, cápsulas, pós, xaropes, etc., ou parenterica-mente na forma de soluções para injeção. Para a preparação de tais composições, métodos bem conhecidos na técnica podem ser usados, e quaisquer agentes de suporte, diluentes, excipientes ou outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis normalmente usados na técnica podem ser usados.

Convenientemente, o composto I é administrado em forma de dosagem unitária contendo o referido composto numa quantidade desde cerca de 1 até 50 mg. Acredita-se que uma dose superior seja estabelecida pela dependência da concentração da atividade de 5-HT3. A dose diária total 23 ΡΕ2219647 está usualmente no intervalo de cerca de 1-20 mg, tal como cerca de 1 até 10 mg, cerca de 5-10 mg, cerca de 10-20 mg ou cerca de 10-15 mg do composto da invenção. É feita menção particular de doses diárias de 2,5, 5, 10, 15 ou 2 0 mg.

Os comprimidos compreendendo um composto I podem convenientemente ser preparados por granulação a húmido. Usando este método, os sólidos secos (ingredientes ativos, agente de enchimento, ligante, etc.) são misturados e humidificados com água ou um outro agente molhante (e.g. um álcool) e os aglomerados ou grânulos são feitos a partir de sólidos humidificados. O amassamento a húmido é continuado até um desejado tamanho de partícula homogéneo ter sido alcançado, ponto em que o produto granulado é seco. O composto I é tipicamente misturado com mono hidrato de lactose, amido de milho e copovidona num misturador de alto corte em conjunto com água. A seguir à formação de granulados, estes granulados podem ser peneirados num peneiro com um tamanho de peneiro adequado e secos. Os granulados secos resultantes são em seguida misturados com celulose microcristalina, croscarmelose sódica e estearato de magnésio, e a seguir os comprimidos são sujeitos a compressão. Alternativamente, a granulação a húmido dos compostos da presente invenção pode ser alcançada usando manitol, amido de milho e copovidona, cujos granulados são misturados com celulose microcristalina, glicolato de amido e sódio e estearato de magnésio antes dos comprimidos serem sujeitos a compressão. Alternativamente, granulação a 24 ΡΕ2219647 húmido do composto I pode ser alcançada usando hidrogenofosfato de cálcio anidro, amido de milho e copovidona, cujos granulados são misturados com celulose microcristalina, glicolato de amido e sódio (tipo A), talco e estearato de magnésio antes dos comprimidos serem sujeitos a compressão. A copovidona é um copolimero de PVP-VA.

Numa incorporação, o composto I é o sal hidrobro-meto, e.g. na forma beta, e os comprimidos adequados podem ser compostos como segue - as percentagens indicadas são m/m%: sal de HBr 3-8% hidrogenofosfato de cálcio anidro 35-45% amido de milho 15-25% copovidona 2-6% celulose microcristalina 20-30% glicolato de amido e sódio 1-3% talco 2-6% estearato de magnésio 0,5-2%

Em particular, os como segue: sal de HBr hidrogenofosfato de cálcio amido de milho copovidona celulose microcristalina glicolato de amido e sódio talco estearato de magnésio comprimidos podem ser compostos aproximadamente 5% anidro aproximadamente 39% aproximadamente 20% aproximadamente 3% aproximadamente 25% aproximadamente 3% aproximadamente 4% aproximadamente 1% 25 ΡΕ2219647

Os comprimidos com quantidades diferentes de composto ativo, tais como os correspondentes a e.g. 2,5, 5, 10, 20, 25, 30, 40, 50, 60 ou 80 mg da base livre podem ser obtidos por escolha da quantidade certa do composto I em combinação com um comprimido de um tamanho apropriado. O composto I pode ser administrado isolado ou em combinação com um outro composto terapeuticamente ativo, em que os dois compostos podem ser administrados simultaneamente ou sequencialmente. Exemplos de compostos terapeuticamente ativos que podem vantajosamente ser combinados com o composto I incluem sedativos ou hipnóticos, tais como benzodiazepinas; anticonvulsivos, tais como lamotrigine, ácido valpróico, topiramato, gabapentina, carbamazepina; estabilizantes do humor tais como lítio; fármacos dopaminérgicos, tais como agonistas de dopamina e L-Dopa; fármacos para tratar DDAH, tais como atomoxetina; psicosti-mulantes, tais como modafinil, cetamina, metilfenidato e anfetamina; outros antidepressivos, tais como mirtazapina, mianserina e buproprião; hormonas, tais como T3, estrogénio, DHEA e testosterona; antipsicóticos atípicos, tais como olanzapina e aripiprazole; antipsicóticos típicos, tais como haloperidol; fármacos para tratar doença de Alzheimer, tais como inibidores colinesterase e memantina, folato; S-adenosil-metionina; imunomoduladores, tais como interferões; opiatos, tais como buprenorfinas; antagonistas do recetor 1 da angiotensina II (antagonistas ATI); inibidores ACE; estatinas; e antagonista adrenérgico-alfa 1, tais como prazosina. 26 ΡΕ2219647 A base livre do composto I pode ser preparada conforme revelado em WO 2003/029232 ou WO 2007/144005. Os sais usados na presente invenção podem ser preparados dissolvendo a base livre num solvente apropriado, adicionando o ácido relevante, seguido por precipitação. A precipitação pode ser conseguida ou pela adição de um segundo solvente, e/ou evaporação, e/ou arrefecimento. Alternativamente, a base livre usada na presente invenção pode ser sintetizada numa reação catalisada por paládio conforme descrito nos exemplos. O uso dos termos "um" e "uma" e "o" e "a" e referentes similares no contexto da descrição da invenção são para serem construídos para cobrir não só o singular mas também o plural, a menos que aqui indicado de maneira diferente ou claramente contraditado pelo contexto. Por exemplo, a frase "o composto" é para ser entendida como referindo-se a vários compostos da invenção ou aspeto particular descrito, a menos que indicado de maneira diferente. A menos que indicado de maneira diferente, todos os valores exatos aqui proporcionados são representativos dos valores aproximados correspondentes (e.g., todos os valores exemplares exatos proporcionados com respeito a um fator ou medição particular podem ser considerados também a proporcionar uma medição aproximada correspondente, modificada por "cerca de", onde apropriado). 27 ΡΕ2219647 A descrição aqui de qualquer aspeto ou aspeto da invenção usando termos tais como "compreendendo", "tendo", "incluindo" ou "contendo" com referência a um elemento ou elementos tem a intenção de proporcionar suporte para um aspeto similar ou aspeto da invenção que "consiste de", "consiste essencialmente de", ou "compreende substancial-mente" que elemento ou elementos particulares, a menos que indicado de maneira diferente ou claramente contraditado pelo contexto (e.g., uma composição aqui descrita como compreendendo um elemento particular deverá ser entendida como descrevendo também uma composição constituída por aquele elemento, a menos que indicado de maneira diferente ou claramente contraditado pelo contexto).

Exemplos Métodos analíticos

Os espetros 1H-RMN são registados em 500,13 MHz num instrumento Bruker Avance DRX500. Dimetilsulfóxido (99,8%D) é usado como solvente, e tetrametilsilano (TMS) é usado como padrão de referência interno.

Os pontos de fusão são medidos usando calorimetria diferencial de varrimento (DSC). O equipamento é um TA-Instruments DSC-Q1000 calibrado a 5°/min para dar o ponto de fusão como valor de começo. Cerca de 2 mg de amostra são aquecidos a 5°/min num recipiente frouxamente fechado sob fluxo de azoto. 28 ΡΕ2219647 A análise termogravimétrica (TGA) usada para estimativa do conteúdo de solvente/água no material seco é realizada usando um TA-instruments TGA-Q500. 1-10 mg de amostra são aquecidos a 10°/min num recipiente aberto sob fluxo de azoto.

Os difratogramas de raios X pelo método do pó foram medidos num PANalytical X'Pert PRO X-Ray Diffractometer usando radiação CuKai. As amostras foram medidas em modo de reflexão em 2Θ intervalo 5-40° usando um detetor X'celerador. Os valores de reflexão proporcionados são ±0,1 ( °2Θ) .

Exemplo 1

Farmacologia do recetor in vitro

Transportador de serotonina na ratazana: CI50 5,3 nM (bloqueio de captação de 5-HT)

Transportador de serotonina humana: CI50 5,4 nM (bloqueio de captação de 5-HT)

Recetor 5-HTiA Humano: K± 15 nM com agonismo (eficácia ou atividade intrínseca 96%)

Recetor 5-HT3 da ratazana: CI50 0,2 nM (antagonismo em ensaio funcional)

Recetor 5-HT3A Humano: CI50 à volta de 20 nM (antagonismo em ensaio funcional). Em concentração mais alta, o composto exibe atividade agonística com uma DE50 de 2,1 μΜ. O composto da invenção também mostrou alta 29 ΡΕ2219647 afinidade para o recetor 5HT3 humano num ensaio de ligação in vitro (Ki 4,5 nM).

Exemplo 2 a

Preparação duma base livre de composto I 10 gramas de hidrobrometo de 1-[2-(2,4-dimetil-fenilsulfanil)-fenil]piperazina foram tratados com uma mistura agitada de 100 mL de NaOH 3 M e 100 mL de acetato de etilo durante 10 minutos. A fase orgânica foi separada, lavada com 100 mL de NaCl (aq) 15%m/m, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada em vácuo produzindo 7,7 gramas (98%) de base do composto I na forma dum óleo incolor. RMN concorda com a estrutura.

Exemplo 2b

Preparação de base cristalina do composto I 3,0 gramas de óleo incolor de 1-[2-(2,4-dimetil-fenilsulfanil)-fenil]piperazina foram tratados com 70 mL de acetonitrilo e aquecidos até ao refluxo. A solução quase límpida foi filtrada e o filtrado límpido foi arrefecido espontaneamente depois do que a precipitação começou logo a seguir à filtração. A mistura foi agitada à temperatura ambiente (22 °C) durante 2 horas e o produto foi isolado por filtração e seco em vácuo (40 °C) durante a noite. A base cristalina foi isolada na forma dum sólido branco com 2,7 gramas (90%) . RMN concorda com a estrutura. Análise elementar: 72,40%C, 9,28%N, 7,58%H (teoria: 72,26%C, 9,3 6%N, 7,42%H) 30 ΡΕ2219647

Exemplo 2 c

Caraterização da base cristalina do composto I A base, conforme preparada no Exemplo 2b, é cristalina (XRPD) - ver Figura 1. Tinha um ponto de fusão de ~117 °C. Não é higroscópica e tem uma solubilidade de 0,1 mg/mL em água.

Exemplo 2d

Preparação da forma alfa do sal hidrobrometo do composto I

2,0 gramas de 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)--fenil]piperazina foram dissolvidos em 30 mL de acetato de etilo quente e adicionados 0,73 mL de HBr (ag) 48%m/m. Esta adição causou a formação duma pasta espessa e foram adicionados mais 10 mL de acetato de etilo de maneira a ter agitação apropriada. A pasta foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. Filtração e secagem em vácuo (20 °C) durante a noite produziram 2,0 gramas do produto na forma dum sólido branco (80%) . RMN concorda com a estrutura. Análise elementar: 57,05%C, 7,18%N, 6,16%H (Teoria para sal 1:1: 56,99%C, 7,39%N, 6,11%H).

Exemplo 2e

Caraterização da forma alfa do hidrobrometo do composto I A forma alfa do hidrobrometo, conforme preparada no Exemplo 2d, é cristalina (XRPD) - ver Figura 2. Tem um ponto de fusão de ~226°C. Absorve cerca de 0,3% de água 31 ΡΕ2219647 quando exposta a humidade relativa alta e tem uma solubilidade de 2 mg/mL em água.

Exemplo 2f

Preparação da forma beta do sal hidrobrometo do composto I 49,5 gramas de 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)--fenil]piperazina óleo incolor foram dissolvidos em 500 mL de acetato de etilo e adicionados a 18,5 mL de HBr (aq) 48% m/m. Esta adição causou a formação duma pasta espessa que foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A filtração e secagem em vácuo (50 °C) durante a noite produziram o produto com 29,6 gramas na forma dum sólido branco (47%). NMR concorda com a estrutura. Análise elementar: 56,86%C, 7,35%N, 6,24%H (Teoria para sal 1:1: 56,99%C, 7,39%N, 6,11%H).

Exemplo 2g

Caraterização da forma beta do hidrobrometo, sal do

composto I A forma beta do hidrobrometo, conforme preparada no Exemplo 2f, é cristalina (XRPD) , ver Figura 3. Tem um ponto de fusão de ~231 °C. Absorve cerca de 0,6% de água quando exposta a humidade relativa alta e tem uma solubilidade de 1,2 mg/mL em água.

Exemplo 2h

Preparação da forma gama do sal hidrobrometo do composto I 32 ΡΕ2219647 1 g de hidrobrometo de 1-[2-(2,4-dimetilfenil-sulfanil)-fenil]piperazina conforme preparada no Exemplo 2d foi adicionado a 20 mL de água e aquecido a 85°C. A solução estava quase límpida. A adição de 1 gota de HBr tornou-a límpida. HBr foi adicionado até ser observado um ponto nebuloso. A solução foi arrefecida até à temperatura ambiente e seca. RMN concorda com a estrutura. Análise elementar: 56,63%C, 7,18%N, 6,21%H (Teoria para sal 1:1: 56,99%C, 7,39%N, 6,11%H).

Exemplo 2i

Caraterização da forma gama do hidrobrometo do composto I O hidrobrometo, conforme preparado no Exemplo 2h é cristalino (XRPD) - ver Figura 4. A curva DSC mostra alguns eventos térmicos a cerca de 100 °C; provavelmente mudança em forma de cristal. Em seguida funde a cerca de 220°C. Absorve cerca de 4,5% de água quando exposta a humidade relativa alta e em 30%HR à temperatura ambiente cerca de 2% de água é absorvida.

Exemplo 2j

Preparação do hidrato do hidrobrometo do composto I 1,4 gramas de óleo 1-[2-(2,4-dimetilfenil-sulfanil)-fenil]piperazina foram adicionados a 20 mL de água, e aquecidos a 60 °C. 0 pH foi ajustado a 1 usando HBr 48%. A solução foi arrefecida até à temperatura ambiente e seca. RMN concorda com a estrutura. Análise elementar: 55,21%C, 7,16%N, 6,34%H (Teoria para o sal hemi-hidrato 1:1: 55,68%C, 7,21%N,6,23%H). 33 ΡΕ2219647

Exemplo 2k

Caraterização do hemi-hidrato do hidrobrometo do composto I 0 hidrato conforme preparado no Exemplo 2j é cristalino (XRPD) - ver figure 5. 0 conteúdo de água depende fortemente da humidade relativa. À temperatura ambiente e 95%HR o conteúdo de água é cerca de 3,7%. Ocorre desidratação por aquecimento a cerca de 100°C.

Exemplo 3

Preparação de composto I

815 g de NaOBu1^ (8,48 mol) , 844 g de piperazina (9,8 mol), 6,6 g de Pd(dba)2 (11,48 mmol) e 13,6 g de rac--BINAP (21,84 mmol) foram agitados com 4 L tolueno durante 50 minutos. 840 g de 2-bromo-iodobenzeno (2,97 mol) foram em seguida adicionados junto com 1,5 L de tolueno e a agitação continuou durante 30 min. 390,8 g de 2,4-dimetil-tiofenol (2,83 mol) foram finalmente adicionados com 1,5 L de tolueno. A suspensão foi aquecida até ao refluxo e o refluxo continuou durante 5 horas. A mistura reacional foi arrefecida durante a noite. 2 L de água foram adicionados e agitou-se durante 1 hora antes da mistura ser filtrada através da ajuda de filtro. O filtrado foi em seguida 34 ΡΕ2219647 lavado com 3x1 L de água salgada. As fases de água combinadas foram em seguida extraídas com 600 mL de tolueno. As fases de tolueno combinadas foram em seguida aquecidas até 70°C seguido por adição de 329, 2 mL de HBr (aq) 48% m/m e 164,6 mL de água. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente durante a noite. O produto final (hidrobrometo de 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)-fenil]-piperazina) foi recolhido por filtração e seco em vácuo (60 °C) produzindo 895 g (84% de rendimento).

Exemplo 4

Efeitos da dor no teste de formalina intradérmica no rato

Neste modelo, os ratos receberam uma injeção de formalina (4,5%, 20 pL) na pata posterior esquerda. A irritação causada pela injeção de formalina elicia a resposta comportamental bifásica caraterística, conforme quantificada por uma quantidade de tempo gasto a lamber a pata lesada. A primeira fase (~0-10 minutos) representa irritação química direta e nociceção, ao passo que a segunda fase (~20-30 minutos) pensa-se que representa a dor de origem neuropática. As duas fases são separadas por um período quiescente no qual o comportamento regressa ao normal. A eficácia dos compostos de teste para reduzir o estímulo dolorosa é avaliada pela contagem duma quantidade de tempo gasto a lamber a pata lesada nas duas fases. O composto I mostrou uma redução significativa nas pontuações da dor da segunda fase (Figura 9a) , 35 ΡΕ2219647 indicando eficácia contra a dor de origem neuropática. Além disso, os compostos da presente invenção mostram uma redução significativa nas pontuações da primeira fase (Figura 9b) , indicando uma ação mais analgésica na dose mais alta. Em suma, estes resultados indicam que os compostos da presente invenção são plausivelmente eficazes no tratamento de desordens da dor.

Exemplo 5

Efeitos sobre níveis extracelulares de acetilcolina no cérebro de ratazanas que se movem livremente

Aos animais foi administrado 1-[2-(2,4-dimetil-fenilsulfanil)fenil]piperazina, sal de HBr.

Animais

Ratazanas machos Sprague-Dawley, inicialmente pesando 275-300 g, foram usadas. Os animais foram alojados sob um ciclo luz/escuridão de 12 h sob condições controladas para temperatura (21±2 °C) e humidade (55±5%) interiores regulares com comida e água da torneira disponíveis ad libitum.

Cirurgia e experimentos de microdiálise

As ratazanas foram anestesiadas com hypnorm/-dormicum (2 mL/kg) e cânulas guias intracerebrais (CMA/12) foram estereotaxicamente implantadas no cérebro, visando o posicionamento da ponta da sonda de diálise no hipocampo ventral (coordenadas: 5,6 mm posterior à bregma, lateral- 36 ΡΕ2219647 5.0 mm, 7,0 mm ventral à dura) ou no córtex pré-frontal (coordenadas: 3,2 mm anterior à bregma; lateral, 0,8 mm; 4.0 mm ventral à dura). Parafusos Anchor e cimento acrílico foram usados para fixação das cânulas guias. A temperatura do corpo dos animais foi monitorizada por sonda retal e mantida a 37 °C. As ratazanas foram deixadas a recuperar da cirurgia durante 2 dias, alojadas isoladamente em gaiolas. No dia do experimento uma sonda de microdiálise (CMA/12, diâmetro 0,5 mm, comprimento 3 mm) foi inserida através da cânula guia.

As sondas foram conectadas via um pivô de canal dual a uma bomba de microinj eção. A perfusão da sonda de microdiálise com solução de Ringer filtrada (NaCl 145 mM, KC1 3 mM, MgCl2 1 mM, CaCl2 1,2 mM contendo neostigmine 0,5 μΜ) foi começada rapidamente a seguir à inserção da sonda no cérebro e continuada para a duração do experimento a uma velocidade de fluxo constante de 1 pL/min. Após 180 min de estabilização, os experimentos foram iniciados.

Os dialisados foram recolhidos todos os 20 min. Após os experimentos, os animais foram sacrificados, os seus cérebros removidos, congelados e fatiados para a verificação da colocação da sonda. 0 composto dissolvido em HPbetaCD 10% e injetado subcutaneamente (2,5-10 mg/kg). As doses são expressas como mg de sal/kg de massa corporal. 0 composto foi administrado num volume de 2,5 mL/kg. 37 ΡΕ2219647

Análise de dialisado de acetilcolina A concentração de acetilcolina (ACh) nos dialisados foi analisada por meio de HPLC com deteção electroquimica usando uma fase móvel consistindo de hidrogenofosfato de dissódio 100 mM, ácido octanossulfónico 2,0 mM, cloreto de tetrametilamónio 0,5 mM e 0, 005% MB (ESA) , pH 8,0. Um reator de enzima em pré-coluna (ESA) contendo colina-oxidase imobilizada eliminou colina da amostra injetada (10 pL) antes da separação de ACh na coluna analítica (ESA ACH-250); velocidade de fluxo 0,35 mL/min, temperatura: 35°C. Depois da coluna analítica a amostra passou através dum reator de fase sólida pós--coluna (ESA) contendo acetilcolina-esterase imobilizada e colina-oxidase. O último reator converteu ACh a colina e subsequentemente colina a betaína e H2O2. 0 último foi detetado electroquimicamente usando um elétrodo de platina (Célula analítica: ESA, modelo 5040).

Apresentação de dados

Em experimentos de injeção única o valor médio de 3 amostras de ACh consecutivas precedendo imediatamente a administração do composto servido como nível basal para cada experimento e os dados foram convertidos a percentagem de basal (média de valores de pré-injeção basal normalizada para 100%).

Resultados 0 composto aumentou significativamente os níveis 38 ΡΕ2219647 extra-celulares de ACh no córtex pré-frontal e hipocampo ventral da ratazana - ver figura 10a e 10b.

Exemplo 6

Condicionamento de medo contextuai em ratazanas O composto administrado no presente experimento foi sal de HBr de 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)fenil]-piperazina. Nós estudamos o efeito do composto na aquisição, consolidação e recordação do condicionamento de medo contextuai em ratazanas. No paradigma do condicionamento de medo os animais aprendem a associar um ambiente neutro (contexto, a câmara de treino, CS) com uma experiência repelente (um choque elétrico no pé, US) . Durante a re-exposição à câmara de treino, os animais expressam um comportamento de paralisia/imobilidade, o qual é tomado como uma medida direta da memória relacionada com o medo [Pavlov J. Biol. Sei., 15 (1980) 177-182]. A neuroanatomia do condicionamento de medo contextuai tem sido profundamente investigado e vários estudos têm demonstrado que o hipocampo e a amígdala são necessários para a formação desta memória [Hippocampus, 11 (2001) 8-17; J. Neurosci., 19 (1999) 1106-1114; Behav. Neurosci., 106 (1992) 274-285].

Animais e fármacos

Ratazanas Sprague-Dawley machos adultas (pesando 250-300 g no momento do treino) de Charles River Labo- 39 ΡΕ2219647 ratories, alojadas duas por gaiola sob um ciclo luz/es-curidão de 12 h, foram usadas. Comida e água estiveram disponíveis ad libitum. As ratazanas foram usadas 1 semana depois da chegada. 0 composto foi dissolvido em HPbetaCD 10% e injetado subcutaneamente. O fármaco foi administrado num volume de 2,5 mL/kg.

Aparelhos

0 treino e a testagem foram conduzidos numa câmara à prova de som (30x20x40 cm), alojada numa sala isolada e conectada a um sistema de ventilação A iluminação foi proporcionada por uma luz branca (60 Watt). O chão da câmara consistiu duma grade de metal ligada a um gerador de choques elétricos. Antes do treino e testagem, a câmara foi limpa com uma solução de etanol 70%. Uma câmara de video permitiu as observações comportamentais e registo da sessão de treinamento para análise «off-line».

Aquisição e teste de retenção

Durante a aquisição, os animais foram deixados a explorar livremente o novo ambiente durante um período de habituação de 1 min, o que coterminou com um choque no pé inescapável (estimulo não condicionado, US) através do chão de grelha eletrificável. O choque nas patas teve uma duração de 2 s e uma intensidade de 0,75 mA. Os animais permaneceram na câmara de condicionamento durante outros 60 s após o US. 0 comportamento de paralisia foi pontuado durante os primeiros 58 s (aquisição de pré-choque; 40 ΡΕ2219647 experimentador cego a grupos) para determinar as respostas de paralisia ao contexto de linha de base. No fim da aquisição os animais foram gentilmente removidos e colocados nas sua gaiolas lares. Após 24 h os mesmos animais foram reintroduzidos no contexto de treinamento (câmara de condicionamento de medo) e foi realizado um teste de retenção de 2 min. Durante este período nenhuns choques nas patas foram aplicados. O comportamento de paralisia foi pontuado durante todo o período de teste com o experimentador cego a grupos e apresentados como percentagem do período de teste total.

Resultados e Discussão O efeito do composto no condicionamento do medo contextuai em ratazanas foi estudado (i) na aquisição (fármaco aplicado antes da aquisição, Figura 11), (ii) na evocação da memória (fármaco aplicado antes do teste, Figura 12) e (iii) na consolidação (fármaco aplicado imediatamente após a aquisição, Figura 13) . No primeiro conjunto de experimentos, o composto (1, 5 e 10 mg/kg) foi administrado 1 h antes da sessão de aquisição. A Figura 11 desenha a aquisição de comportamento de paralisia/-imobilidade durante o treinamento (58 s antes do choque de comida) e o teste de retenção 24 depois. As seguintes descobertas foram observadas: 0 composto não afeta o comportamento de paralisia de linha de base antes da apresentação do choque nas patas em qualquer dose testada. 41 ΡΕ2219647 0 composto a 5 mg/kg tem a tendência para aumentar o tempo gasto na paralisia durante o teste de retenção, 24 h após a aquisição (39,24+13,76%, n=6, contra 24,3014,40%, n=16, nos animais tratados com veiculo). O composto a 10 mg/kg significativamente aumenta o tempo gasto na paralisia durante o teste de retenção, 24 h após a aquisição (52,1515,68%, n=10, contra 24,3014,40%, n=16, nos animais tratados com veiculo, p<0,01). O modelo do condicionamento do medo, conforme descrito na Figura 11, é um procedimento padrão descrito na literatura para a investigação da aprendizagem e memória. De maneira a elucidar mais os efeitos agudos deste fármaco sobre a evocação da memória, o composto (5, 10 e 20 mg/kg) foi aplicado 1 h antes do teste de retenção. Foi observado que o composto inibe a expressão do comportamento de paralisia a 5 mg/kg durante o teste de memória (12,8613,57%, n=9, contra 33,6114,29%, n=13, nos animais tratados com veiculo, p<0,05) (Figura 13).

Conforme descrito acima, o composto por si próprio não afeta o comportamento de paralisia de linha de base antes do começo do US (Figura 11), por conseguinte a hipótese mais plausível é que o efeito observado na Figura 12 é devido a um efeito ansiolítico. A memória condicionada é avaliada via comportamento de paralisia, uma resposta que é reduzida por compostos com efeitos ansiolíticos 42 ΡΕ2219647 potenciais. Este experimento demonstra que o composto dado agudamente antes da evocação da memória tem eficácia ansiolítica, é por conseguinte improvável que a paralisia aumentada mostrada na Figura 11 seja devida a um efeito ansiogénico do composto.

De maneira a reforçar que o composto não é ansiogénico mas possui potencial pró-cognitivo, o composto foi administrado a 5, 10 e 20 mg/kg após a sessão de aquisição. Consequentemente, neste conjunto de experimentos, o composto não estava no ativo nem durante a aquisição nem ao longo do teste de retenção. Aqui, foi observado que o composto a 5 mg/kg aumenta significativamente o tempo gasto na paralisia durante o teste de retenção, 24 h após a sessão de aquisição (45,5814,50%, n=8, contra 25,2613,57%, n=19, nos animais tratados com veículo, p<0,05). A percentagem de tempo gasto em paralisia durante a reexpo-sição ao contexto tem sido descrita como uma medida duma memória relacionada com o medo [Pavlov J. Biol. Sei., 15 (1980) 177-182], que é aumentada em ratazanas tratadas com composto quando se compara com animais tratados com veículo (Figuras 11 e 12) . Tomados em conjunto, os dados mostram que o composto aumenta a memória contextuai.

Lisboa, 5 de Março de 2012

Claims (4)

1. ΡΕ2219647 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um uso de 1-[2-(2,4-dimetilfenilsulfanil)-fenil]piperazina e seus sais farmaceuticamente aceitáveis no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença selecionada de entre depressão, ansiedade, dor de abuso ou crónica, em que o referido medicamento é para uso num paciente que recebeu previamente uma outra medicação para o tratamento da referida doença medicação essa que cessou ou foi reduzida devido ao sono ou eventos adversos sexualmente relacionados.
2. 2. 0 uso de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal f armaceuticamente aceitável é o sal hidrobrometo.
3. 3 . 1-[2-(2,4-Dimetilfenilsulfanil)fenil]piperazina e seus sais farmaceuticamente aceitáveis para uso no tratamento de uma doença selecionada de entre depressão, ansiedade, dor de abuso ou crónica num paciente que recebeu previamente uma outra medicação para o tratamento da referida doença, medicação essa que cessou ou foi reduzida devido ao sono ou eventos adversos sexualmente relacionados.
4. 4. 1-[2-(2,4-Dimetilfenilsulfanil)fenil]piperazina e sais farmaceuticamente aceitáveis para uso de acordo com a reivindicação 3, que é o sal hidrobrometo. Lisboa, 5 de Março de 2012