PT2213652E - Derivados do estilbeno e a sua utilização para ligação e diagnóstico por imagem de placas amiloides - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "DERIVADOS DO ESTILBENO E A SUA UTILIZAÇÃO PARA LIGAÇÃO E DIAGNÓSTICO POR IMAGEM DE PLACAS AMILOIDES"

Antecedentes da Invenção

Campo da Invenção

Esta invenção refere-se a novos compostos bioativos, métodos de diagnóstico por imagem utilizando compostos radiomarcados, e métodos para fazer compostos radiomarcados. Técnica Antecedente A doença de Alzheimer (DA) é um distúrbio neurodegenerativo progressivo caracterizado pelo declinio cognitivo, perda de memória irreversível, desorientação, e comprometimento da linguagem. 0 exame pós-morte de secções de cérebro de DA revela placas senis abundantes (SPs) compostas de péptidos de amiloide-β (Αβ) e numerosos emaranhados neurofibrilares (NFTs) formados por filamentos de proteínas tau altamente fosforiladas (para revisões recentes e citações adicionais ver Ginsberg, S. D., et al., "Molecular Pathology of Alzheimer's Disease and Related Disorders," em Cerebral Córtex: Neurodegenerative and Age-related Changes in Structure and Function of Cerebral Córtex, Kluwer Academic/Plenum, NY (1999), pp. 603-654; Vogelsberg-Ragaglia, V., et al., "Cell Biology of Tau and Cytoskeletal Pathology in Alzheimer's Disease," Alzheimer's Disease, Lippincot, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (1999), pp. 359-372). A amiloidose é uma condição patológica caracterizada pela acumulação de várias proteínas insolúveis, fibrilares nos tecidos de um paciente. Um depósito amiloide é formado pela agregação de proteínas amiloides, seguida pela combinação adicional de agregados e/ou proteínas amiloides. A formação e acumulação de agregados de péptidos de β-amiloide (Αβ) no cérebro são fatores criticos no desenvolvimento e progressão da DA.

Adicionalmente ao papel dos depósitos amiloides na doença de Alzheimer, a presença dos depósitos amiloides tem sido demonstrada em doenças tais como a febre do Mediterrâneo, sindrome de Muckle-Wells, mieloma idiopático, polineuropatia amiloide, cardiomiopatia amiloide, amiloidose senil sistémica, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose, sindrome de Down, tremor epizoótico, doença de Creutzfeldt-Jacob, Kuru, sindrome de Gerstamnn-Straussler-Scheinker, carcinoma medular da tiroide, amiloide auricular isolado, amiloide de 32-microglobulinina em pacientes de diálise, miosite por corpos de inclusão, depósitos de P2-amiloide na doença da atrofia muscular, e insulinoma da diabetes Tipo II das Ilhotas de Langerhans.

Os agregados fibrilares dos péptidos amiloides, Αβχ-40 e Αβχ-42, são péptidos metabólicos principais derivados a partir da proteina precursora amiloide encontrada nas placas senis e depósitos amiloides cerebrovasculares em pacientes com DA (Xia, W. , et ai., J. Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 97:9299-9304 (2000) ) . A prevenção e reversão da formação de placas de Αβ têm sido alvos como forma de tratamento para esta doença (Selkoe, D. , J. JAMA 283:1615-1617 (2000); Wolfe, M.S., et al., J. Med. Chem. 41:6-9 (1998); Skovronsky, D.M., e Lee, V.M., Trends Pharmacol. Sei. 21:161-163 (2000)). A DA Familiar (DAF) é causada por múltiplas mutações na proteina precursora A (APP), nos genes da presenilina 1 (PS1) e presenilina 2 (PS2) (Ginsberg, S. D., et ai., "Molecular Pathology of Alzheimer's Disease and Related Disorders," em Cerebral Córtex: Neurodegenerative and Age-related Changes in Structure and Function of Cerebral Córtex, Kluwer Academic/Plenum, NY (1999), pp. 603-654; Vogelsberg-Ragaglia, V., et ai., "Cell Biology of Tau and Cytoskeletal Pathology in Alzheimer's Disease," Alzheimer's Disease, Lippincot, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (1999), pp. 359-372).

Enquanto os mecanismos exatos subjacentes à DA não são completamente compreendidos, todas as mutações patogénicas da DAF estudadas, até ao momento, aumentam a produção da forma mais amiloidogénica de 42-43 aminoácidos de comprimento do péptido de Αβ . Assim, pelo menos na DAF, a desregulação da produção de Αβ parece ser suficiente para induzir uma cascata de eventos que levam à neurodegeneração. Com efeito, a hipótese da cascata amiloide sugere que a formação de agregados de Αβ fibrilares extracelulares no cérebro pode ser um evento fundamental na patogénese da DA (Selkoe, D. J., "Biology of β-amyloid Precursor Protein and the Mechanism of Alzheimer's Disease," Alzheimer's Disease, LippincotWilliams & Wilkins, Philadelphia, PA (1999), pp. 293-310; Selkoe, D. J., J. Am. Med. Assoe. 283:1615-1617 (2000); Naslund, J., et al., J. Am. Med. Assoe. 283:1571-1577 (2000); Golde, T. E., et al., Biochimica et Biophysica Acta 1502:172-187 (2000)). Várias abordagens na tentativa de inibir a produção e reduzir a acumulação da Αβ fibrilar no cérebro estão atualmente a ser avaliadas como terapêuticas potenciais para a DA (Skovronsky, D. M. e Lee, V. M., Trends Pharmacol. Sei. 21:161-163 (2000); Vassar, R., et al., Science 286:735-741 (1999); Wolfe, M. S., et al., J. Med. Chem. 41:6-9 (1998); Moore, C. L., et al., J. Med. Chem. 43:-3434-3442 (2000); Findeis, Μ. A., Biochimica et Biophysica Acta 1502:76-84 (2000); Kuner, P., Bohrmann, et al., J. Biol. Chem. 275:1673-1678 (2000)). É por isso de interesse desenvolver ligandos que se ligam especificamente aos agregados fibrilares de Αβ . Uma vez que os SPs extracelulares são alvos acessíveis, estes novos ligandos podem ser utilizados como ferramentas de diagnóstico in vivo e como sondas para visualizar a deposição progressiva da Αβ em estudos da génese da amiloidose na DA em pacientes vivos.

Para esta finalidade, várias abordagens interessantes para desenvolver ligandos específicos para a Αβ fibrilar têm sido relatadas (Ashburn, T. T., et al., Chem. Biol., 3:351-358 (1996) ; Han, G. , et al., J. Am. Chem. Soc. 118:4506-4507 (1996); Klunk, W. E., et al., Biol., Psychiatry 35:627 (1994); Klunk, W. E., et al., Neurobiol. Aging 16:541-548 (1995); Klunk, W. E., et al., Society for Neuroscience Abstract 23:1638 (1997); Mathis, C. A., et al., Proc. Xllth Inti. Symp. Radiopharm. Chem., Uppsala, Sweden:94-95 (1997); Lorenzo, A. e Yankner, B. A., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 91:12243-12247 (1994);Zhen, W., et al., J. Med. Chem. 42:2805-2815 (1999)). A abordagem ma is atrativa baseia-se na crisamina-G (CG) altamente conjugada e vermelho do Congo (CR), e a última tem sido utilizada para a coloração fluorescente de SPs e NFTs em secções de cérebros de DA pós-morte. T. T., et al., Chem. Biol., 3:351-358 (1996); Klunk, W. E., et al., J. Histochem. Cytochem. 37:1273-1281 (1989)). As constantes de inibição (Ki) para ligação aos agregados fibrilares de Αβ do CR, CG, e derivativos 3'- bromo-e 3'-iodo do CR são de 2.800, 370, 300 e 250 nM, respetivamente (Mathis, C. A., et al., Proc. Xllth Inti. Symp. Radiopharm. Chem., Uppsala, Sweden:94-95 (1997); Estes compostos têm demonstrado ligar-se seletivamente a agregados do péptido Αβ (1-40) in vitro bem como a depósitos fibrilares de Αβ nas secções de cérebros de DA (Mathis, C. A., et al., Proc. Xllth Inti. Symp. Radiopharm. Chem., Uppsala, Sweden:94-95 (1997)).

Existem vários benefícios potenciais do diagnóstico por imagem dos agregados de Αβ no cérebro. A técnica de diagnóstico por imagem irá melhorar o diagnóstico através da identificação de pacientes potenciais com excesso de placas de Αβ no cérebro e gue, portanto, podem estar predispostos a desenvolver doença de Alzheimer. Também será útil para monitorizar a progressão da doença. Quando os tratamentos com fármacos anti-placas se tornarem disponíveis, o diagnóstico por imagem das placas de Αβ no cérebro poderá proporcionar uma ferramenta essencial para monitorizar o tratamento. Assim, um método simples, não invasivo para detetar e quantificar os depósitos amiloides num paciente tem sido avidamente procurado. Atualmente, a deteção dos depósitos amiloides envolve a análise histológica de materiais de biópsias ou autópsias. Ambos os métodos têm desvantagens. Por exemplo, uma autópsia pode apenas ser utilizada para um diagnóstico pós-morte. 0 diagnóstico por imagem direto dos depósitos amiloides in vivo é dificil, uma vez gue os depósitos têm muitas das mesmas propriedades fisicas (por exemplo, densidade e conteúdo em água) dos tecidos normais. Tentativas para diagnosticar por imagem os depósitos amiloides utilizando ressonância magnética (RM) e tomografia axial computadorizada (TAC) têm sido dececionantes e detetaram depósitos amiloides apenas sob determinadas condições favoráveis. Adicionalmente, esforços para marcar os depósitos amiloides com anticorpos, proteina P amiloide sérica, ou outras moléculas sonda têm proporcionado alguma seletividade na periferia dos tecidos, mas têm permitido um fraco diagnóstico por imagem do interior dos tecidos.

Ligandos potenciais para detetar agregados de Αβ no cérebro vivo devem atravessar a barreira hematoencefálica intacta. Assim a captação no cérebro pode ser melhorada através da utilização de ligandos com um tamanho molecular relativamente mais pegueno (comparado com o Vermelho do Congo) e lipofilicidade aumentada. Tioflavinas altamente conjugadas (S e T) são comumente utilizadas como corantes para corar os agregados de Αβ no cérebro de DA (Elhaddaoui, A., et al., Biospectroscopy 1:351-356 (1995)).

Um traçador altamente lipofilico, FDDNP[18F], para ligação tanto a emaranhados (principalmente compostos por proteina tau hiperfosforilada) e placas (contendo agregados de proteina Αβ) foi relatado. (Shoghi-Jadid K, et al., AmJGeriatr Psychiatry. 2002;10:24-35). Utilizando tomografia de emissão de positrões (PET), foi relatado que este traçador marcou especificamente depósitos de placas e emaranhados em nove pacientes com DA e sete sujeitos de comparação (Nordberg A. LancetNeurol. 2004;3:519-27). Utilizando um novo procedimento de análise farmacocinética chamado o tempo de residência relativo da região do cérebro de interesse contra a protuberância, diferenças entre os pacientes de DA e os sujeitos de comparação foram demonstradas. O tempo de residência relativo foi significativamente mais alto em pacientes com DA. Isto é adicionalmente complicado por um descobrimento intrigante de gue o FDDNP compete com alguns AINEs pela ligação às fibrilas de Αβ in vitro e às placas de Αβ ex vivo (Agdeppa ED, et al. , 2001; Agdeppa ED, et al., Neuroscience. 2003;117:723-30). O diagnóstico por imagem de β-amiloide no cérebro de pacientes com DA através da utilização de um derivativo do benzotiazol anilina, 6-OH-BTA-l[nC] (também referido como PIB[11C]), foi recentemente relatado. (Mathis CA, et al., Curr Pharm Des. 2 0 0 4; 10:1469-92; Mathis CA, et al., Arch. Neurol. 2005, 62:196-200.). Ao contrário do observado para o FDDNP [18F], o 6-OFI-BTA-l [11C] liga-se especif icamente à Αβ fibrilar in vivo. Pacientes com DA leve diagnosticada demonstraram uma marcada retenção de 6-OFI-BTA-l[11C] no córtex, conhecido por conter grandes guantidades de depósitos amiloides na DA. No grupo de pacientes com DA, a retenção de 6-OFI-BTA-l[nC] foi aumentada mais proeminentemente no córtex frontal. Grandes aumentos também foram observados nos córtices parietal, temporal e occipital e no corpo estriado. A retenção do 6-OFI-BTA-l[31Ο] foi eguivalente nos pacientes com DA e sujeitos de comparação nas áreas conhecidas por serem relativamente não afetadas pela deposição amiloide (tal como a substância branca subcortical, protuberância e cerebelo) . Recentemente, outra sonda direcionada para as placas de Αβ marcadas com Χ1Ο, um derivativo do estilbeno - SB-13[11C], foi estudado. A ligação in vitro utilizando o SB-13 [3H] sugere gue o composto demonstrou uma excelente afinidade de ligação e a ligação pode ser claramente medida na substância cinzenta cortical, mas não na substância branca nos casos de DA. (Kung M-P, et al., BrainRes. 2004(1025) 98-105. Existiu uma ligação especifica muito baixa nos homogeneizados do tecido cortical dos cérebros de controlo. Os valores de Kd do SB-13 [3H] nos homogeneizados corticais da DA foram de 2,4 ± 0,2 nM. A alta capacidade de ligação e valores comparáveis foram observados (14-45 pmol/mg de proteína) (Id.). Conforme esperado, nos pacientes com DA, o SB-13[11C] exibiu uma alta acumulação no córtex frontal (presumivelmente uma área contendo uma alta densidade de placas de Αβ) em pacientes com DA leve a moderada, mas não em sujeitos de controlo com a mesma idade (Verhoeff NP, et al., Am J Geriatr Psychiatry. 2004;12:584-95). O documento WO 03/018070 divulga derivativos do estilbeno e a sua utilização para ligação e diagnóstico por imagem das placas de amiloide.

Seria útil dispor de uma técnica não invasiva para o diagnóstico por imagem e guantificação dos depósitos amiloides num paciente. Adicionalmente, seria útil dispor de compostos gue inibem a agregação das proteínas amiloides para formar depósitos amiloides e um método para determinar a capacidade de um composto para inibir a agregação da proteína amiloide. Sumário da Invenção A presente invenção proporciona novos compostos da Fórmula II. A presente invenção também proporciona composições de diagnóstico que compreendem um composto radiomarcado da Fórmula II e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável. A invenção proporciona adicionalmente um método para realizar o diagnóstico por imagem de depósitos amiloides, o método gue compreende a introdução num paciente de uma guantidade detetável de um composto marcado da Fórmula II ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. A presente invenção também proporciona um composto da Fórmula II ou uma composição gue o contém, para utilização num método para a inibição da agregação de proteínas amiloides, o método que compreende a administração a um mamífero de uma quantidade inibidora da amiloide de um composto da Fórmula II ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Um aspeto adicional desta invenção está direcionado a métodos e intermediários úteis para a síntese dos compostos da

Fórmula II inibidores da amiloide e para diagnóstico por imagem, descritos no presente documento.

Breve Descrição das Figuras A Fig. 1 retrata os dados de ligação de K± de vários compostos da presente invenção.

Descrição Detalhada da Invenção

Num primeiro aspeto, a presente invenção está direcionada para compostos da Fórmula II:

Π ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, em gue: R1 é selecionado a partir do grupo gue consiste em: a. NRaRb, em que Ra e Rb são independentemente hidrogénio, C1-4 alquilo, (CH2)d)18F, e d é um número inteiro entre 1 e 4, ou Ra e Rb são ambos oxigénio para formar um nitro, b. hidroxi, c. C1-4 alcoxi, e d. hidroxi (C1-4) alquilo; R2 é selecionado a partir do grupo que consiste em:

onde q é um número inteiro de 2 a 10; Zé selecionado a partir do grupo que consiste em 18F, e (C1-4) alcoxi substituído com 18F; e R , R , R e R são em cada caso rndependentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, hidroxi, C1-4 alcoxi, C1-4 alquilo e hidroxi (C1-4) alquilo; e R7 e R8 são em cada caso independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, hidroxi, amino,

metilamino, dimetilamino, C1-4 alcoxi, C1-4 alquilo, e hidroxi (C1-4) alquilo. q n q -1 q 0

Mais preferivelmente, o valor de cada de R , R , R , R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 e R40 são em cada caso independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, hidroxi, amino, metilamino, dimetilamino e metoxi.

Preferivelmente, R2 está tanto na posição meta ou para relativamente à ponte de etileno.

Quando R2 é i.

q q q -1 qq qq o valor preferido para R , R , R e R em cada caso e hidrogénio, e Z é 18F. Valores úteis de q incluem números inteiros de dois a dez. Preferivelmente, q é um número inteiro de 2 a 5. Mais preferivelmente, o valor de q é 3 ou 4.

Uma série preferida de compostos da Fórmula II inclui derivativos de polietilenoglicol(PEG)-estilbeno marcados com 18F tendo a seguinte estrutura:

em que, q é um número inteiro de dois a dez. Compostos mais preferidos incluem aqueles onde q é igual a: dois,

três,

ou quatro,

Nesta série de compostos, 18F está ligado ao estilbeno através de uma cadeia de PEG, tendo um número variável de grupos etoxi. Todos os estilbenos fluorinados exibiram grandes afinidades de ligação num ensaio utilizando homogeneizados de cérebro de DA pós-morte (K± = 2,9-6,7 nM). Conforme mostrado nos Esquemas 1-3 no presente documento, a radiomarcação foi realizada com êxito através de uma substituição do grupo mesilato de lOa-d por f luoreto [18F] dando os compostos alvo 12a-d[18F] (EOS, atividade especifica, 900-1.500 Ci/mmol; pureza radioquimica >99%). A biodistribuição in vivo destes ligandos de 18F em ratinhos normais exibiu excelentes penetrações cerebrais e rápidas eliminações depois de uma injeção iv (6,6-8,1 e 1,2-2,6 dose%/g a 2 min e 60 min, respetivamente). A autorradiografia de secções de cérebro de DA pós-morte de 12a-d[18F] confirmou a ligação especifica relacionada com a presença de placas de Αβ. Adicionalmente, a marcação in vivo das placas pode ser claramente demonstrada com estes agentes marcados com 18F em ratinhos transgénicos (Tg2576), um modelo animal útil para a doença de Alzheimer.

Os compostos da Fórmula II também podem ser solvatados, especialmente hidratados. A hidratação pode ocorrer durante o fabrico dos compostos ou composições que compreendem os compostos, ou a hidratação pode ocorrer ao longo do tempo devido à natureza higroscópica dos compostos. Adicionalmente, os compostos da presente invenção podem existir nas formas não solvatadas bem com solvatadas com solventes farmaceuticamente aceitáveis tais como água, etanol e semelhantes. Em geral, as formas solvatadas são consideradas como eguivalentes às formas não solvatadas para os propósitos da presente invenção.

Também deve ser compreendido gue a presente invenção é considerada como incluindo estereoisómeros, tais como ambos os isómeros cis e trans dos compostos do tipo estilbeno. Adicionalmente incluídos estão: isómeros óticos, por exemplo, misturas de enantiómeros bem como enantiómeros individuais e diasterómeros, que surgem como consequência de uma assimetria estrutural nos compostos selecionados da Fórmula II.

Quando alguma variável ocorre mais do que uma vez em qualquer constituinte ou na Fórmula II a sua definição em cada ocorrência é independente da sua definição em qualquer outra ocorrência. Também combinações de substituintes e/ou variáveis são permissiveis apenas se tais combinações resultam em compostos estáveis. 0 termo "alquilo" conforme empregue no presente documento, por si só, ou como parte de outro grupo refere-se tanto a radicais de cadeia linear como ramificada de até 8 carbonos, preferivelmente 6 carbonos, mais preferivelmente 4 carbonos, tais como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, t-butilo, e isobutilo. 0 termo "alcoxi" é utilizado no presente documento para significar um radical de alquilo de cadeia linear ou ramificada, conforme definido acima, a não ser que o comprimento da cadeia seja limitado a isso, ligado a um átomo de oxigénio, que inclui, mas não está limitado a, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, esemelhantes. Preferivelmente a cadeia de alcoxi tem de 1 a 6 átomos de carbono de comprimento, mais preferivelmente 1-4 átomos de carbono de comprimento. 0 termo "monoalquilamina" conforme empregue no presente documento por si só, ou como parte de outro grupo refere-se a um grupo amino que é substituído com um grupo alquilo conforme definido anteriormente. 0 termo "dialquilamina" conforme empregue no presente documento por si só, ou como parte de outro grupo refere-se a um grupo amino gue é substituído com dois grupos alguilo conforme definido anteriormente. 0 termo "halo" ou "halogénio" empregue no presente documento por si só ou como parte de outro grupo, refere-se a cloro, bromo, flúor ou iodo, a não ser que considerado de outra forma em utilizações específicas no texto e/ou reivindicações. 0 termo "haloalquilo" conforme empregue no presente documento refere-se a qualquer um dos grupos alquilo acima substituído por um ou mais de cloro, bromo, flúor ou iodo com flúor e cloro sendo preferidos, tais como clorometilo, iodometilo, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, e 2-cloroetilo. 0 termo "arilo" conforme empregue no presente documento, por si só, ou como parte de outro grupo refere-se a grupos aromáticos monocíclicos ou bicíclicos que contêm de 6 a 12 carbonos na porção de anel, preferivelmente 6-10 carbonos na porção de anel, tal como fenilo, naftilo ou tetrahidronaftilo. O termo "heterociclo" ou "anel heterocíclico", conforme utilizado no presente documento, exceto onde indicado, representa um sistema de anel mono-heterocíclico de 5 a 7 membros que podem ser saturado ou não saturado, e o qual consiste em átomos de carbono e a partir de um a três heteroátomos selecionados a partir do grupo que consiste em N, O, e S, e em que o heteroátomo de azoto e enxofre pode ser opcionalmente oxidado. Especialmente úteis são anéis que contêm um azoto combinado com um oxigénio ou enxofre, ou dois heteroátomos de azoto. Exemplos de tais grupos heterocíclicos incluem piperidinilo, pirrolilo, pirrolidinilo, imidazolilo, imidazinilo, imidazolidinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolilo, isoxazolidinilo, tiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, homopiperidinilo, homopiperazinilo, piridazinilo, pirazolilo, e pirazolidinilo, mais preferivelmente tiamorfolinilo, piperazinilo, e morfolinilo. 0 termo "heteroátomo" é utilizado no presente documento para significar um átomo de oxigénio ("0"), um átomo de enxofre ("S") ou um átomo de azoto ("N"). Será reconhecido que quando um heteroátomo é azoto, pode formar uma fração NRaRb, em que Ra e Rb são, independentemente um do outro, hidrogénio ou C1-4 alquilo, aminoalquilo C2-4/ C1-4 haloalquilo, halo benzilo, ou R1 e R2 são tomados em conjunto para formar um anel heterociclico de 5 a 7 membros opcionalmente tendo 0, ou NRC no dito anel, onde Rc é hidrogénio ou C1-4 alquilo. 0 termo "heteroarilo" conforme empregue no presente documento refere-se a grupos tendo 5 a 14 átomos de anel; 6, 10 ou 14 II eletrões num arranjo ciclico; e contendo átomos de carbono e 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos de oxigénio, azoto ou enxofre (onde exemplos de grupos heteroarilo são: grupos tienilo, benzo[b]tienilo, nafto[2,3-b]tienilo, tiantrenilo, furilo, piranilo, isobenzofuranilo, benzoxazolilo, cloromenilo, xantenilo, fenoxatinilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolizinilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolilo, indazolilo, purinilo, 4H-quinolizinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinazolinilo, cinolinilo, pteridinilo, 4aH-carbazolilo, carbazolilo, β-carbolinilo, fenatridinilo, acridinilo, perimidinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, isotiazolilo, fenotiazinilo, isoxazolilo, furazanilo e fenoxazinilo) . 0 termo "aralquilo" ou "arilalquilo" conforme empregue no presente documento por si só ou como uma parte de outro grupo refere-se a grupos C1-6 alquilo conforme discutido acima tendo uma substituinte de arilo, tal como benzilo, feniletilo ou 2-naftilmetilo. A presente invenção está adicionalmente direcionada a métodos para a preparação dos compostos da Fórmula II acima. Os compostos desta invenção, bem como compostos relacionados que não são parte da invenção podem ser preparados através das reações descritas nos esquemas 1-8.

Os PEG-estilbenos fluorinados 12a-d foram preparados através das reações mostradas no esquema 1. Para preparar compostos com 2 ou 3 grupos etoxi como a ligação de PEG, cloretos comercialmente disponíveis 2a,b foram acoplados com o grupo OH de 4-metilamino-4'-hidroxi estilbeno, 1 (Ono M, et al., Nucl Med Biol. 2003;30:565-71; Wilson A, et al., J Labelled Cpd Radiopharm. 2003;46:S6I) para obter 3a,b respetivamente. Os grupos OH livres de 3a,b foram subsequentemente protegidos com TBDMSCI para dar os compostos 7a,b. Para preparar compostos com 4 ou 5 grupos etoxi como a ligação de PEG, os brometos 6c,d foram preparados separadamente conforme mostrado no esquema 2 e depois acoplados com estilbeno 1 para dar os compostos 7c,d protegidos com TBS. Os grupos protetores O-TBS nos compostos 7c,d foram removidos através de tratamento de TBAF (1 M) em THF para dar 3c,d. Os compostos 8a-d foram obtidos através da proteção dos grupos metilamino de 7a-d com BOC. Depois de remover os grupos de proteção de TBS de 8a-d com TBAF (1 M) /THF, os grupos OH livres foram convertidos em mesilatos através da reação com MsCl na presença de trietilamina para dar lOa-d. Os PEG-estilbenos fluorinados "frios", 12a-d, foram obtidos com êxito através do refluxo de lOa-d em TBAF/THF anidro (Cox DP, et al., J Org Chem. 1984;49:3216-19) seguido de agitação com TFA para remover o grupo de proteção BOC.

Para fazer os PEG-estilbenos marcados com 18F, 12a-d[18F], os mesilatos protegidos por N-Boc lOa-d foram empregues como os precursores (Esquema 3) . Cada um dos mesilatos, lOa-d, foi misturado com fluoreto[ 18F]/carbonato de potássio e Kryptofix 222 em DMSO e aquecido a 120 °C durante 4 minutos. A mistura foi depois tratada com HC1 aquoso para remover o grupo protetor N-BOC. O produto em bruto foi purificado através de HPLC (pureza radioquímica >99%, rendimento radioquímico 10-30%, declínio corrigido). A preparação de cada composto marcado com 18F, 12a-d[18F] , levou cerca de 90 minutos e a atividade específica foi estimada como sendo 900-1.500 Ci/mmol no final da síntese.

A síntese dos compostos 15e, 16e e as sínteses dos precursores de radiomarcação 15d, 17d para preparar 15e[18F] e 6e[18F] são mostradas no Esquema 9. Para preparar o composto 15a, o grupo nitro de 4-nitro-4'-hidroxi estilbeno, 13a, foi reduzido com SnCl2 em etanol para dar a amina correspondente 14a. 0 grupo amino foi depois tratado com (CHO)n e NaBH3CN para dar o composto de dimetilamino 15a. 0 composto 15b foi obtido através da reação do hidroxil estilbeno, 15a, com o brometo 20m (que foi preparado separadamente conforme mostrado no Esquema 10) e carbonato de potássio em DMF anidro. O composto 15c foi obtido através do tratamento de 15b com HC1 a 1 N em acetona. 15d monotosilado poderia ser isolado a partir de uma mistura de produtos do diol reativo 15c com 1,5 equivalentes de cloreto de tosilo em piridina. O tosilado 15d foi convertido no fluoreto 15e através do refluxo com TBAF anidro em THF. O TBAF tem de ser seco a 58 °C sob vácuo elevado (<0,5 mmHg) durante 24 horas antes da utilização. O composto de tosilo 15d foi utilizado como o material de iniciação para obter o composto radiomarcado 15e[18F] . O composto de nitro 13e foi sintetizado de forma semelhante através de uma reação de acoplamento de 13a com 20m seguida por tosilação e fluorinação. A síntese do composto 16e foi alcançada através da redução do grupo nitro de 13e com SnCl2/EtOH seguida pela monometilação do grupo amino com (CHO)n, NaOCH3 e NaBH4. Um intermediário, 13b, foi reduzido a amina, 14c, e depois monometilado para dar o composto 16c. Para obter 16e [18F] , o tos ilado N-protegido 17d foi desenhado como o precursor para a radiomarcação. O 14a previamente preparado foi primeiramente monometilado a 16a. O composto 17f foi depois preparado através do acoplamento de 16a com 20n (Esquema 10) e da introdução de BOC à 2a amina. O grupo Di-terc-butil sililo de 17f foi removido com TBAF a 1 N em THF à temperatura ambiente para dar o diol 5c, que foi monotosilado para produzir o composto 17d.

Um composto relacionado 15h foi também sintetizado conforme mostrado no Esquema 4 . O malonato substituído 21 foi reduzido ao diol 22 com DIBALH e depois reagido com um equivalente de TBSCI para dar 23. 0 OH não protegido foi depois convertido no brometo 24 com CBr4/PPh3. 0 composto 24 foi reagido com 15a para dar 15g que foi tratado com TBAF para remover o grupo TBS para produzir 15h.

Dois derivativos de benzilo de Ν,Ν'-dimetil estilbeno, 14 e 15 foram também sintetizados (Esquema 4). 0 composto 14 foi obtido através da redução do éster de etilo correspondente 133 com LiAlH4. 0 álcool benzilico foi então convertido no intermediário de brometo de benzilo altamente reativo com HBr/HOAc, que foi, sem purificação, convertido imediatamente no éter de metilo 15 através da adição de metanol e carbonato de potássio.

Aqueles derivativos do estilbeno com um átomo de flúor estando diretamente ligado à ligação dupla foram sintetizados através de métodos bem conhecidos (por exemplo, Tetrahedron Lett. 43, (2002), 2877-2879).

Para obter 15e[18F], 15d precursor foi misturado com fluoreto [ 18F]/carbonato de potássio e Kryptofix® 222 em DMSO e aquecido a 120 °C durante 4 min. O produto em bruto foi purificado através de HPLC para obter >99% da pureza radioquimica com 10% de rendimento radioquimico (declinio corrigido). O procedimento levou 90 minutos e a atividade especifica foi estimada como sendo 70 Ci/mmol no final da sintese. O procedimento semelhante foi levado a cabo para obter [18F]16e a partir de 17d precursor. Depois da reação inicial em DMSO, a mistura foi tratada com HC1 aquoso para remover o grupo BOC. A pureza radioquimica foi >99% depois da purificação através de HPLC e o rendimento radioquimico foi de 15%. A sintese total levou 110 minutos e a atividade especifica foi estimada como sendo 90 Ci/mmol no final da sintese.

a) SnCl2, HCl(c), EtOH; b}(CHO)„, NaBH3CN, AcOH,ta; c) (l)NaOMe, MeOH, (CHO)n; (2) NaBH4; d) 8m K2CO3, DMF, 100 °C; e) HC1, CH2COCH3,ta; f) TsCl, Py,0°C; g) TBAF, THF,refluxo; h) 8n, K2CO3, DMF,100 °C; i) (BOC)2O, THF,refluxo; j) TBAR (1M), THF,ta. ESQUEMA 5

a) 7m(CH3O)2C(CH3)2, TSOH; 7n:HOBT, Si(í-BU)2Cl2, Et3N, DCM; b) CBr4, PPh3, Py, DCM

(a)HF[18F]/K2CO3ZK222 DMSO, (b)HClaq

Alguns dos compostos são também passíveis de síntese por micro-ondas conforme descrito abaixo nos Exemplos 50-52.

Os compostos radiohalogenados desta invenção prestam-se facilmente à formação a partir de materiais que poderiam ser fornecidos aos utilizadores em kits. Kits para a formação dos agentes de diagnóstico por imagem podem conter, por exemplo, um frasco que contém uma solução fisiologicamente adequada de um intermediário da Fórmula II, numa concentração e num pH adequados para condições ideais de complexação. 0 utilizador adicionaria ao frasco uma quantidade apropriada do radioisótopo, e um oxidante, tal como peróxido de hidrogénio. 0 ligando marcado resultante pode então ser administrado por via intravenosa a um paciente, e os recetores no cérebro diagnosticados por imagem por meio da medição das emissões de raios gama ou foto emissões a partir dos mesmos.

Quando desejado, o agente de diagnóstico radioativo podem conter um aditivo tal como agentes controladores do pH (por exemplo, ácidos, bases, tampões), estabilizantes (por exemplo, ácido ascórbico) ou agentes de isotonicizantes (por exemplo, cloreto de sódio). 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável" conforme utilizado no presente documento refere-se aqueles sais carboxilados ou sais de adição de ácidos dos compostos da presente invenção que estão, dentro do âmbito do bom julgamento médico, adequados para a utilização em contacto com os tecidos dos pacientes sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica, e semelhantes, comensuráveis com uma razão de risco/benefício razoável, e eficaz para a utilização pretendida, bem como as formas zwiteriónicas, onde possivel, dos compostos da presente invenção. 0 termo "sais" refere-se aos sais de adição de ácidos inorgânicos e orgânicos relativamente não tóxicos, da presente invenção. Estão também incluidos aqueles sais derivados a partir de ácidos orgânicos não tóxicos tais como ácidos alifáticos mono ou dicarboxilicos, por exemplo ácido acético, ácidos alcaloides substituidos com fenilo, ácidos hidroxi alcanoicos e alcanodioicos, ácidos aromáticos, e ácidos sulfónicos alifáticos e aromáticos. Estes sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação finais dos compostos ou através da reação em separado do composto purificado na sua forma de base livre com um ácido orgânico ou inorgânico adequado e isolando o sal assim formado. Sais representativos adicionais incluem os sais bromidrato, cloridrato, sulfato, bissulfato, nitrato, acetato, oxalato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartarato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato e laurilssulfonato, propionato, pivalato, ciclamato, isotionato, e semelhantes. Estes podem incluir catiões baseados nos metais alcalinos e alcalino terrosos, tais como sódio, litio, potássio, cálcio, magnésio, e semelhantes, bem como, catiões de amónio, amónio quaternário e de amina não tóxicos incluindo, mas não limitados a amónio, tetrametilamónio, tetraetilamónio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina, e semelhantes. (Ver, por exemplo, Berge S. M., et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sei. 66:1-19 (1977) que é incorporado como referência no presente documento.) A presente invenção está adicionalmente direcionada a um método para realizar o diagnóstico por imagem de depósitos amiloides. Um dos pré-requisitos para um agente de diagnóstico por imagem do cérebro in vivo é a capacidade para atravessar a barreira hematoencefálica intacta após uma injeção intravenosa em bólus.

Na primeira etapa do presente método para diagnóstico por imagem, um composto marcado da Fórmula II é introduzido num tecido ou num paciente numa quantidade detetável. 0 composto é tipicamente parte de uma composição farmacêutica e é administrado ao tecido ou ao paciente através de métodos bem conhecidos para aqueles peritos na especialidade.

Por exemplo, o composto pode ser administrado por via oral, retal, parentérica (intravenosa, intramuscular ou subcutânea), intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, intravesical, local (pós, pomadas ou gotas), ou como uma pulverização bucal ou nasal.

Numa forma de realização preferida da invenção, o composto marcado é introduzido num paciente numa quantidade detetável e depois de passado tempo suficiente para o composto se tornar associado com os depósitos amiloides, o composto marcado é detetado de forma não invasiva dentro do paciente. Noutra forma de realização da invenção, um composto marcado com 18F da Fórmula II é introduzido num paciente, é permitido tempo suficiente para que o composto se torne associado com os depósitos amiloides, e depois uma amostra de tecido a partir do paciente é removida e o composto marcado no tecido é detetado de forma afastada do paciente. Numa terceira forma de realização da invenção, uma amostra de tecido é removida a partir de um paciente e um composto marcado da Fórmula II é introduzido na amostra de tecido. Depois de uma quantidade de tempo suficiente para que o composto se torne ligado aos depósitos amiloides, o composto é detetado. A administração do composto marcado a um paciente pode ser através de uma via de administração geral ou local. Por exemplo, o composto marcado pode ser administrado ao paciente de tal forma que é distribuído por todo o corpo. Alternativamente, o composto marcado pode ser administrado a um órgão especifico ou tecido de interesse. Por exemplo, é desejável localizar e quantificar os depósitos amiloides no cérebro de forma a diagnosticar ou controlar o progresso da doença de Alzheimer num paciente. 0 termo "tecido" significa uma parte do corpo de um paciente. Exemplos de tecidos incluem o cérebro, coração, figado, vasos sanguíneos, e artérias. Uma quantidade detetável é uma quantidade de composto marcado necessária para ser detetada através do método de deteção elegido. A quantidade de um composto marcado para ser introduzida num paciente de forma a proporcionar a deteção, pode ser prontamente determinada por aqueles peritos na especialidade. Por exemplo, quantidades crescentes do composto marcado podem ser dadas a um paciente até que o composto seja detetado através do método de deteção de eleição. Um marcador é introduzido nos compostos para proporcionar a deteção dos compostos. 0 termo "paciente" significa humanos e outros animais. Aqueles peritos na especialidade são também familiares com a determinação da quantidade de tempo suficiente para que um composto se torne associado com os depósitos amiloides. A quantidade de tempo necessária pode ser facilmente determinada através da introdução de uma quantidade detetável de um composto marcado da Fórmula II num paciente e depois da deteção do composto marcado em vários momentos depois da administração. 0 termo "associado" significa uma interação química entre o composto marcado e o depósito amiloide. Exemplos de associações incluem as ligações covalentes, ligações iónicas, interações hidrofílicas-hidrofílicas, interações hidrofóbicas-hidrofílicas, e complexos.

Aqueles peritos na especialidade estão familiarizados com a deteção de um átomo emissor de positrões por tomografia de emissão de positrões (PET) , tal como 18F. A presente invenção também está direcionada a compostos específicos onde o átomo 18F é substituído por um átomo de flúor não radiomarcado. 0 agente de diagnóstico radioativo deverá ter radioatividade e concentração de radioatividade suficientes que possam assegurar um diagnóstico fiável. 0 nível desejado de radioatividade pode ser alcançado através dos métodos proporcionados no presente documento para a preparação dos compostos da Fórmula II. 0 diagnóstico por imagem dos depósitos amiloides pode também ser levado a cabo quantitativamente para que a quantidade de depósitos amiloides possa ser determinada.

Outro aspeto da invenção é um composto da Fórmula II ou uma composição que o contém, para utilização num método para inibição da agregação de placas amiloides. A presente invenção também proporciona um composto da Fórmula II ou uma composição que o contém, para utilização num método para a inibição da agregação de proteínas amiloides para formar depósitos amiloides, através da administração a um paciente de uma quantidade de inibição da amiloide de um composto da Fórmula II acima.

Aqueles peritos na especialidade são rapidamente capazes de determinar uma quantidade de inibição da amiloide através da simples administração de um composto da Fórmula II a um paciente em quantidades crescentes até que o crescimento dos depósitos amiloides seja diminuído ou interrompido. A taxa do crescimento pode ser avaliada utilizando diagnóstico por imagem conforme descrito acima ou através da recolha de uma amostra de tecido a partir de um paciente e da observação dos depósitos amiloides na mesma. Os compostos da presente invenção podem ser administrados a um paciente em níveis de dosagem no intervalo de cerca de 0,1 até cerca de 1.000 mg por dia. Para um humano adulto normal tendo um peso corporal de cerca de 70 kg, uma dosagem no intervalo de cerca de 0,01 até cerca de 100 mg por quilograma de peso corporal por dia é suficiente. A dosagem específica utilizada, no entanto, pode variar. Por exemplo, a dosagem pode depender de uma série de fatores incluindo as necessidades do paciente, a gravidade da condição a ser tratada, e a atividade farmacológica do composto a ser utilizado. A determinação das dosagens ótimas para um paciente particular é bem conhecida para aqueles peritos na especialidade. O agente de diagnóstico radioativo deverá ter radioatividade e concentração de radioatividade suficientes que possam assegurar um diagnóstico fiável. O nível desejado de radioatividade pode ser alcançado através dos métodos proporcionados no presente documento para a preparação dos compostos da Fórmula II. O diagnóstico por imagem dos depósitos amiloides pode também ser levado a cabo quantitativamente para que a quantidade de depósitos amiloides possa ser determinada.

Os seguintes exemplos 1-24, 33-36, e 53-58 são ilustrativos, mas não limitantes, do método e composições da presente invenção.

Todos os reagentes utilizados nas sínteses foram produtos comerciais e foram utilizados sem purificação adicional a não ser que indicado em contrário. Os espectros de ΧΗ RMN foram obtidos num espectrómetro DPX de Bruker (200 MHz) em CDCI3. Os desvios quimicos são relatados como valores δ (partes por milhão) relativamente ao TMS interno. As constantes de acoplamento são relatadas em hertz. A multiplicidade é definida por s (singleto), d (dupleto), t (tripleto), 1 (largo), m (multipleto) . Análises elementares foram realizadas pelo Atlantic Microlab INC. Para cada procedimento, "processamento padrão" refere-se às seguintes etapas: adição do solvente orgânico indicado, lavagem da camada orgânica com água e depois salmoura, separação da camada orgânica da camada aquosa, secagem das camadas orgânicas combinadas com sulfato de sódio anidro, filtração do sulfato de sódio e remoção do solvente orgânico sob pressão reduzida.

Exemplo 1 2- (2—{4—[2-(4-Metilamino-fenil)-vinil]-fenoxi}-etoxi) -etano 1 (3a).

Sob a atmosfera de azoto, 4-metilamino-4'-hidroxi estilbeno, 1 (Ono M, et al., Nucl Med Biol. 2003; Wilson A, et al., J Labelled Cpd Radiopharm. 2003) (63 mg, 0,28 mmol) e 2a (42 mg, 0,34 mmol) foram dissolvidos em DMF anidro (5,0 ml) seguindo-se uma adição de carbonato de potássio (125 mg, 0,91 mmol). A suspensão foi aquecida até 100 °C e agitada durante a noite. Depois de arrefecida até à temperatura ambiente, o processamento padrão com diclorometano foi aplicado e o residuo foi purificado através de TLC preparativa em gel de silica (metanol a 4% em diclorometano) para dar o composto 3a (67 mg, 7 6%) : XH RMN δ 7,37 (m, 4H) , 6,8 9 (m, 4H) , 6, 63 (d, 2H, J = 8,4 8 Hz), 4,16 (t, 2H) , 3,88 (t, 2H) , 3,78 (t, 2H) , 3,68 (t, 2H) , 2,87 (s, 3H), 2,20 (1, 1H), 1,55 (1, 1H).

Exemplo 2 2-[-2-(2—{4—[2-(4-Metilamino-fenil)-vinil]-fenoxi)-etoxi)-e toxi]-etanol (3b) . O composto 3b foi preparado a partir de 1 (150 mg, 0,67 mmol) , 2b (136 mg, 0, 81 mmol) , e carbonato de potássio (277 mg, 2,01 mmol) em DMF (10 ml) com o mesmo procedimento descrito para o composto 3a. 3b (180 mg, 76%) : ΧΗ RMN δ 7,37 (m, 4H) , 6,89 (m, 4H) , 6,65 (d, 2H, J= 8,50 Hz), 4,15 (t, 2H) , 3,87 (t, 2H) , 3,72 (t, 6H) , 3,62 (t, 2H) , 2,87 (s, 3H) , 2,20 (1, 1H) , 1,60 d, 1H) .

Exemplo 3 2- {2-[2-(2—{4—[2-(4-Metilamino-fenil)-vinil]-fenoxi)-etoxi) -e toxi]-etoxi}-etanol (3c) . TBAF (1 M em THF, 0,06 ml) foi adicionado através de uma seringa a uma solução do composto 7c (12 mg, 0,023 mmol) em THF (1 ml). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois do processamento padrão com diclorometano, o residuo foi purificado através de TLC preparativa em gel de silica (metanol a 4,5% em diclorometano) para dar 3c (8,7 mg, 94%) : XH RMN 5 7,36 (m, 4H) , 6,88 (m, 4H) , 6,58 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,15 (t, 2H), 3,86 (t, 2H), 3,70 (m, 12H), 2,86 (s, 3H). Exemplo 4 2 - (2-{2-[2-(2 —{4 —[2-(4-Metilamino-fenil)-vinil]-fenoxi}-eto xyi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etanol (3d) . O composto 3d foi preparado a partir de 7d (15 mg, 0,027 mmol) e TBAF (1 M em THF, 0,0 6 ml) em THF (1 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3c. 3d (7,8 mg, 65%) : XH RMN δ 7,36 (m, 4H) , 6,87 (m, 4H) , 6,60 (d, 2H, J=8,5Hz), 4,14 (t, 2H) , 3,85 (t, 2H) , 3,66 (m, 16H), 2,86 (s, 3H) .

Exemplo 5 2- (2—{2—[2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etoxi]-etoxi}-et oxi)-etanol (5c) .

Tetraetilenoglicol, 4c (1,12 g, 5,77 mmol) e TBDMSCI (0, 87 g, 5,77 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (25 ml) seguido por trietilamina (1,46 g, 14,4 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois do processamento padrão com diclorometano, o residuo foi purificado através de cromatografia de coluna em gel de silica (acetato de etilo a 50% em hexano) para dar 5c (744 mg, 42%): ^ΚΜΝδβ,ββ (m, 16H), 2,51 (t, 1H, J= 5,86 Hz), 0,89 (s, 9H) , 0,07 (s, 6H).

Exemplo 6 2- [2- (2—{2—[2- (terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etoxi]-etoxi} -etoxi)-etoxi]-etanol (5d) . O composto 5d foi preparado a partir de pentaetilenoglicol, 4d (1,13 g, 4,72 mmol) , TBDMSCI (0,78 g, 5,19mmol), e trietilamina (1,2 g, 11,8 mmol) em diclorometano (25 ml) com o mesmo procedimento descrito para o composto 5c. 5d (668 mg, 40%) : RMN δ 3, 67 (m, 20 H) , 2, 64 (t, 1H, J = 5, 63

Hz), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).

Exemplo 7 (2—{2—[2-(2-Bromo-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-terc-butil-di metilsilano (6c) . O composto 5c (680 mg, 2,20 mmol) e tetrabrometo de carbono (947 mg, 2,86 mg) foram dissolvidos em diclorometano (20 ml) . A solução foi arrefecida até 0 °C com um banho de gelo e piridina (2,0 ml) foi adicionada seguida de trifenilfosfina (749 mg, 0,286 mmol) . A solução foi agitada a 0 °C durante uma meia hora à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois do processamento padrão com diclorometano, o residuo foi purificado através de cromatografia de coluna em gel de silica (acetato de etilo a 20% em hexano) para dar o composto 6c (680 mg, 7 9,6%): ΧΗ RMN 5 3,79 (m, 4H), 3,66 (m, 8H), 3,56 (t, 2H), 3,47 (t, 2H), 0,89 (s, 9H), 0,07 (s, 6H).

Exemplo 8 [2-(2—{2—[2-(2-Bromoetoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-terc -butil-dimetilsilano (6d) . O composto 6d foi preparado a partir de 5d (624 mg, 1,77 mmol), tetrabrometo de carbono (761 mg, 2,30 mmol), trif enilf osf ina (602 mg, 2,30 mmol), piridina (2,0 ml) em diclorometano (20 ml) com o mesmo procedimento descrito para o composto 6c. 6d (400 mg, 52,3%): ΧΗ RMN 5 3,79 (m, 4H), 3,66 (m, 12H) , 3,55 (t, 2H) , 3,47 (t, 2H) , 0,89 (s, 9H) , 0,06 (s, 6Η) .

Exemplo 9 {4-[2- (4—{2—[2- (terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etoxi]-etoxi }-fenil)-vinil]-fenil}-metil-amina (7a). 0 composto 3a (45 mg, 0,14 mmol) e TBDMSCI (33 mg, 0,22 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (10 ml) seguido por trietilamina (20 mg, 0,29 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois do processamento padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em gel de sílica (metanol a 1,5% em diclorometano) para dar 7a (56 mg, 91%) : 1H RMN δ 7,40 (m, 4H) , 6,90 (m, 4H) , 6,75 (d, 2H, J=7,9Hz), 4,15 (t, 2H) , 3,88 (t, 2H) , 3,82 (t, 2H) , 3,66 (t, 2H) , 2,85 (s, 3H) , 0,92 (s, 9H) , 0,09 (s, 6H).

Exemplo 10 (4—{2— [4- (2-{2- [2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etoxi]-et oxi} -etoxi)-fenil]-vinil}-fenil)-metil-amina (7b) . O composto 7b foi preparado a partir de 3b (136 mg, 0,38 mmol), TBDMSCI (86 mg, 0,57 mmol), imidazol (52 mg, 0,76 mmol) em diclorometano (10 ml) com o mesmo procedimento descrito para o composto 7a. 7b (170 mg, 95%) : ΧΗ RMN δ 7,37 (m, 4H), 6,88 (m, 4H) , 6,66 (d, 2H, J=8,6Hz), 4,14 (t, 2H) , 3,86 (t, 2H) , 3,75 (m, 6H), 3,57 (t, 2H), 2,88 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 0,07 (s, 6H) .

Exemplo 11 [4- (2—{4— [2- (2-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi) -etoxi] -etoxi}-etoxi)-etoxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-amina (7c) . O composto 7c foi preparado a partir de 1 (98 mg, 0,44 mmol), 6c (210 mg, 0,57 mmol), K2CO3 (300 mg, 2,18 mmol) em DMF (10 ml) , com o mesmo procedimento descrito para o composto 3a. 7c (213 mg, 95%) : ΧΗ RMN δ 7,36 (m, 4H), 6,87 (m, 4H), 6, 59 (d, 2H, J=8,5Hz), 4,14 (t, 2H) , 3,86 (t, 2H) , 3,75 (m, 10H), 3,55 (t, 2H), 2,86 (s, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).

Exemplo 12 [4- (2—{4— [2- (2-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi) -etoxi] -etoxi}-etoxi)-etoxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-amina (7c) . 0 composto 7d foi preparado a partir de 1 (97 mg, 0,43 mmol) , 6d (197 mg, 0,47 mmol) , K2CO3 (297 mg, 2,15 mmol) em DMF (10 ml) , com o mesmo procedimento descrito para o composto 3a. 7d (220 mg, 91%): RMN δ 7,36 (m, 4H), 6,87 (m, 4H), 6,59 (d, 2H, J=8,5Hz), 4,14 (t, 2H) , 3,85 (t, 2H) , 3,75 (m, 14H) , 3,55 (t, 2H), 2,86 (s, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).

Exemplo 13 Éster terc-butílico de ácido {4- [2- (4—{2—[2- (terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etoxi]-etiox i}-fenil)-vinil]-fenil}-metil-carbâmico (8a) .

Sob a atmosfera de azoto, 7a (54 mg, 0,13 mmol) foi dissolvido em THF anidro (5,0 ml) seguido por Boc-anidrido (84 mg, 0,25 mmol). A solução foi submetida a refluxo durante a noite. Depois do processamento padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado através de TLC preparativa em gel de sílica (metanol a 2 % em diclorometano) para dar 8a (60 mg, 90%) : XH RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (g, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,7Hz), 4,14 (t, 2H) , 3,87 (t, 2H) , 3,80 (t, 2H) , 3,64 (t, 2H) , 3,27 (s, 3H) , 1,46 (s, 9H) , 0, 90 (s, 9H), 0,08 (s, 6H) .

Exemplo 14 Éster terc-butílico de ácido (4—{2— [4- (2—{2— [2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etoxi]-et ioxi}-etoxi)-fenil]-vinil}-fenil)-metil-carbâmico (8b) . O composto 8b foi preparado a partir de 7b (124 mg, 0,26 mmol) e Boc-anidrido (218 mg, 0,66 mmol) em THF (10 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 8a. 8b (130 mg, 8 6%) : XH RMN δ 7,4 3 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,2 0 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (g, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,7Hz), 4,15 (t, 2H) , 3,87 (t, 2H) , 3,75 (t, 6H) , 3,57 (t, 2H) , 3,27 (s, 3H) , 1,46 (s, 9H) , 0, 90 (s, 9H), 0,07 (s, 6H) .

Exemplo 15 Éster terc-butílico de ácido [4- (2—{4— [2- (2-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi) -etoxi] -etioxi}-etoxi)-etoxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-carbâmico (8c) . 0 composto 8c foi preparado a partir de 7c (84 mg, 0,16 mmol) e Boc-anidrido (163 mg, 0,49 mmol) em THF (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 8a. 8c (86 mg, 86%) : ΧΗ RMN δ 7,42 (d, 4H, J = 7,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,7Hz), 4,15 (t, 2H) , 3,87 (t, 2H), 3,73 (t, 10H), 3,57 (t, 2H), 3,26 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 0,89 (s, 9H), 0,07 (s, 6H) .

Exemplo 16 Éster terc-butílico de ácido {4 - [2 - (4 —{2 — [2 - (2-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi) -eto xi]-etoxi}-etoxi)-etoxi]-etoxi]-fenil}-vinil]-fenil}-metil-carbâmico (8d) . O composto 8d foi preparado a partir de 7d (210 mg, 0,51 mmol) e Boc-anidrido (840 mg, 2,54 mmol) em THF (10 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 8a. 8d (174 mg, 66,7%): XH RMN δ 7,42 (d, 4H, J = 8,4 Hz) , 7,20 (d, 2H, J = 8, 4 Hz), 6,97 (q, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,7Hz), 4,15 (t, 2H) , 3,86 (t, 2H) , 3,72 (t, 14H), 3,55 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H) .

Exemplo 17 Éster terc-butílico de ácido [4-(2—{4—[2-(2-Hidroxi-etoxi)-etoxi]-fenil}-vinil)-fenil]-m etil-carbâmico (9a) . O composto 9a foi preparado a partir de 8a (56 mg, 0,11 mmol) e TBAF (1 M em THF, 0,21 ml) em THF (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3c. 9a (36 mg, 82%) : ΧΗ RMN δ 7,4 3 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,2 0 (d, 2H, J = 8, 4 Hz) , 6,97 (q, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,7Hz), 4,18 (t, 2H) , 3,88 (t, 2H) , 3,78 (t, 2H), 3,68 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 18 Éster terc-butílico de ácido {4-[2- (4—{2—[2- (2-Hidroxi-etoxi)-etoxi]-etioxi}-fenil)-vini 1]-fenil]-metil-carbâmico (9b). 0 composto 9b foi preparado a partir de 8b (118 mg, 0,21 mmol) e TBAF (1 M em THF, 0,42 ml) em THF (10 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3c. 9b (94 mg, 99,7%) : RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,7Hz), 4,17 (t, 2H) , 3,87 (t, 2H), 3,74 (t, 6H), 3,62 (t, 2H), 3,27 (s, 3H) , 1,46 (s, 9H) . Exemplo 19 Éster terc-butílico de ácido (4 —{2 — [4 - (2-{2 - [2-(2-Hidroxi-etoxi)-etoxi]-etioxi}-etoxi) - f enil]-vinil}-fenil)-metil-carbâmico (9c). O composto 9c foi preparado a partir de 8b (66 mg, 0,11 mmol), TBAF (1 M em THF, 0,22 ml) em THF (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3c. 9c (50 mg, 93,0%): XH RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,7Hz), 4,16 (t, 2H) , 3,87 (t, 2H), 3,78 (t, 10H), 3,61 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H). Exemplo 20 Éster terc-butílico de ácido [4-(2- {4— [2— (2 — {2-[2-(2-Hidroxi-etoxi)-etoxi]-etoxi] -etoxi)-etoxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-carbâmico (9d). O composto 9d foi preparado a partir de 8d (76 mg, 0,12 mmol) e TBAF (1 M em THF, 0,24 ml) em THF (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3c. 9d (52 mg, 82,7%) : ΧΗ RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,7Hz), 4,16 (t, 2H) , 3,87 (t, 2H), 3,75 (t, 14H), 3,60 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H). Exemplo 21 Éster 2- [2- (4—{2— [4- (terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil]-vini 1}-fenoxi)-etoxi]-etílico de ácido metanossulfónico (10a). O composto 9a (36 mg, 0,087 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (5 ml) seguido por trietilamina (44 mg, 0,44 mmol) . Cloreto de metanossulfonilo (30 mg, 0,26 mmol) foi depois adicionado através de uma seringa. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Depois do processamento padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado através de TLC preparativa em gel de sílica (metanol a 2,0 % em diclorometano) para dar 10a (39 mg, 91%) : XH RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz, 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,98 (g, 2H) , 6,89 (d, 2H, J = 8, 6 Hz), 4,41 (m, 2H) , 4,16 (m, 2H) , 3,87 (m, 4H) , 3,27 (s, 3H) , 3,05 (s, 3H) , 1,46 (s, 9H) . Anál. (C25H33NO7S) C. H. N.

Exemplo 22 Éster 2— {2 — [2- (4—{2— [4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil]-v inil}-fenoxi)-etoxi]-etoxi}-etílico de ácido metanossulfónico (10b). O composto 10b foi preparado a partir de 9b (81 mg, 0,18 mmol), cloreto de metanossulfonilo (62 mg, 0,54 mmol) e trietilamina (88 mg, 0,88 mmol) em diclorometano (8 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 10a. 10b (82 mg, 8 6,5%): XH RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8, 6 Hz) , 7,20 (d, 2H, J = 8, 4 Hz), 6,97 (g, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,6Hz), 4,38 (m, 2H) , 4,15 (m, 2H) , 3,85 (m, 2H) , 3,76 (m, 6H) , 3,27 (s, 3H) , 3,05 (s, 3H) , 1,46 (s, 9H) . Anál. (C27H37NO8S) C. Η. N.

Exemplo 23 Éster 2- (2—{2— [2- (4—{2—[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil ]-vinil}-fenoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etílico de ácido metanossulfónico (10c). O composto 10c foi preparado a partir de 9c (50 mg, 0,10 mmol), cloreto de metanossulfonilo (46 mg, 0,40 mmol) e trietilamina (50 mg, 0,50 mmol) em diclorometano (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 10a. 10c (56 mg, 9 6,9%): XH RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8, 6 Hz) , 7,20 (d, 2H, J = 8, 4 Hz), 6,97 (g, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,6Hz), 4,37 (m, 2H) , 4,16 (m, 2H) , 3,86 (m, 2H) , 3,76 (m, 10H) , 3,27 (s, 3H) , 3,06 (s, 3H) , 1,46 (s, 9H) . Anál. (C29H4iN09S) C. Η. N.

Exemplo 24 Éster 2- [2- (2—{2— [2- (4—{2—[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fe nil]-vinil}-fenoxi)-etoxi]-etoxi]-etoxi]-etoxi)-etilico de ácido metanossulfónico (lOd) . O composto lOd foi preparado a partir de 9d (58 mg, 0,11 mmol), cloreto de metanossulfonilo (49 mg, 0,43 mmol) e trietilamina (54 mg, 0,54 mmol) em diclorometano (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 10a. lOd (63 mg, 95%) : RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8, 6 Hz), 7,2 0 (d, 2H, J = 8,4

Hz), 6,97 (g, 2H) , 6,90 (d, 2H, J=8,6Hz), 4,37 (m, 2H) , 4,18 (m, 2H) , 3,86 (m, 2H) , 3,75 (m, 14H) , 3,27 (s, 3H) , 3,07 (s, 3H) , 1,46 (s, 9H) . Anál. (C31H45NO10S) C. Η. N.

Exemplo 25 Éster terc-butilico de ácido [4- (2—{4— [2- (2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-fenil}-vinil) -fenil] -me til-carbâmico (Ha) . TBAF anidro (Cox DP, et al., J Org Chem. 1984; 49:3216-19) (38,5 mg, 0,15 mmol) foi adicionado a uma solução do composto 10a (14,5 mg, 0,03 mmol) em THF anidro (3 ml). A mistura foi submetida a refluxo durante 4 horas. Depois de arrefecida até à temperatura ambiente, o processamento padrão com diclorometano foi aplicado e o residuo foi purificado através de TLC preparativa em gel de silica (metanol a 2% em diclorometano) para dar o composto 11a (7 mg, 57%): RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H) , 6,91 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,60 (d, t, 2H, J = 47 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,17 (t, 2H), 3,90 (t, 3H), 3,75 (t, 1H), 3,27 (s, 3H) , 1,46 (s, 9H) .

Exemplo 26 Éster terc-butilico de ácido {4 - [2 - (4 —{2 —[2 - (2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-etioxi}-fenil)-vinil ]-fenil]-metil-carbâmico (Hb) . 0 composto 11b foi preparado a partir de 10b (21 mg, 0, 04 mmol) e TBAF (52 mg, 0,2 mmol) em THF (10 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 11a. 11b (17 mg, 94%): RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (g, 2H) , 6,91 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,58 (d, t, 2H, J1 = 48 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,16 (t, 2H), 3,85 (t, 3H), 3,74 (t, 5H), 3.26 (s, 3H), 1,46 (s, 9H) .

Exemplo 27 Éster terc-butilico de ácido (4 — { 2 — [4 - (2-{2 - [2 - (2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-etioxi}-etoxi) - fe nil]-vinil}-fenil)-metil-carbâmico (He) . O composto 11c foi preparado a partir de 10c (18 mg, 0, 03 mmol) e TBAF (42 mg, 0,16 mmol) em THF (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 11a. 11c (12 mg, 77%): XH RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (g, 2H) , 6,91 (d, 2H, J=8,6Hz), 4,67 (t, 1H) , 4,55 (d, t, 2H, J1 = 48 Hz, J2 = 4,0 Hz), 3,85 (t, 3H), 3,74 (t, 9H), 3.27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 28 Éster terc-butilico de ácido [4 - (2-{4 - [2 - (2-{2-[2-(2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi} -etoxi)-etoxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-carbâmico (11 d). O composto 11 d foi preparado a partir de lOd (15 mg, 0,024 mmol) e TBAF (32 mg, 0,12 mmol) em THF (5,0 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 11a. 11 d (11 mg, 84%) : XH RMN δ 7,4 3 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,2 0 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (g, 2H) , 6,90 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,55 (d, t, 2H, J1 = 48 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,15 (t, 2H), 3,86 (t, 3H), 3,72 (t, 13H), 3,26 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 29 [4- (2—{4—[2-(2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-fenil}-vinil) -fenil]-me til-amina (12a). Ácido trifluoroacético (0,5 ml) foi adicionado lentamente a uma solução do composto 11a (7,0 mg, 0,017 mmol) em diclorometano (1 ml), A mistura foi depois agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Depois do processamento padrão com diclorometano, o residuo foi purificado através de TLC preparativa em gel de silica (metanol a 1,0 % em diclorometano) para dar 12a (3 mg, 56 %) : RMN δ 7,37 (m, 4H) , 6,90 (m, 4H) , 6,65 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 4,60 (d, t, 2H, J1 = 46 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,17 (t, 2H) , 3,90 (t, 3H) , 3,76 (t, 1H) , 2,88 (s, 3H) . Anál. (C19H22FNO2) C. Η. N.

Exemplo 30 {4 - [2 - (4 —{2 —[2 - (2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi}-fenil)-vinil] -fenil}-metil-amina (12b).

O composto 12b foi preparado a partir de 11b (17 mg, 0, 037 mmol) em ácido trifluoroacético (1 ml) e diclorometano (2 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 12a. 12b (9 mg, 68%) : RMN δ 7,37 (m, 4H) , 6,88 (m, 4H) , 6,64 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 4,56 (d, t, 2H, J1 = 46 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,15 (t, 2H) , 3,87 (m, 3H) , 3,70 (m, 5H) , 2,87 (s, 3H). Anál. (C21H26FNO3) C. Η. N.

Exemplo 31 (4 — { 2 —[4-(2-{2-[2-(2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi)-etoxi)-fen il]-vinil}-fenil)-metil-amina (12c). O composto 12c foi preparado a partir de 11c (12 mg, 0, 024 mmol) em ácido trifluoroacético (0,5 ml) e diclorometano (1 ml) , com o mesmo procedimento descrito para o composto 12a. 12c (7 mg, 73%) : XH RMN δ 7,37 (m, 4H) , 6,89 (m, 4H) , 6, 62 (d, 2H, J = 8,4 Hz) , 4,55 (d, t, 2H, J1 = 46 Hz, J2 = 4, 0 Hz) , 4,15 (t, 2H) , 3,86 (m, 3H) , 3,71 (m, 9H) , 2,87 (s, 3H). Anál. (C23H3oFN04) C. Η. N.

Exemplo 32 [4-(2 —{4 —[2-(2-{2-[2-(2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi) -etoxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-amina (12d) . O composto 12d foi preparado a partir de lld (10 mg, 0, 018 mmol) em ácido trifluoroacético (0,3 ml) e diclorometano (1 ml) , com o mesmo procedimento descrito para o composto 12a. 12d (6 mg, 7 3%) : XH RMN δ 7,37 (m, 4H), 6,88 (m, 4H), 6,64 (d, 2H, J = 8,4 Hz) , 4,55 (d, t, 2H, J1 = 46 Hz, J2 = 4, 0 Hz) , 4,14 (t, 2Η) , 3, 87 (m, 3H) , 3,70 (m, 13H) , 2,87 (s, 3H) . Anál. (C25H34FNO5) C. Η. N.

Exemplo 33 [18F] [4-(2-{4-[2-(2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-fenil}-vinil) - feni 1]-metil-amina (12a[18F]) .

Fluoreto [ 18F] , produzido através de um ciclotron utilizando uma reação de 18O (pn) 18F, foi passado através de um cartucho de Sep-Pak Light QMA como uma solução aquosa em água enriquecida com [18O] . O cartucho foi seco através de fluxo de ar, e a atividade de 18F foi eluída com 2 ml de solução de Kryptofix 222 (K222)/K2CC>3 (22 mg de K222 e 4,6 mg de K2CO3 em CH3CN/H2O 1,77/0,23) . O solvente foi removido a 120 °C sob uma corrente de árgon. O resíduo secou-se azeotropicamente com 1 ml de CH3CN anidro duas vezes a 120 °C sob uma corrente de árgon. Uma solução do precursor de mesilato 10a (4 mg) em DMSO (0,2 ml) foi adicionada ao recipiente de reação contendo as atividades de 18F seco. A solução foi aquecida a 120 °C durante 4 minutos. Água (2 ml) foi adicionada e a solução foi arrefecida durante 1 minuto. HC1 (solução aquosa a 10%, 0,5 ml) foi depois adicionado e a mistura foi novamente aquecida a 120 °C durante 5 minutos. Uma solução aquosa de NaOH foi adicionada para ajustar o pH para básico (pH 8-9). A mistura foi extraída com acetato de etilo (1 ml x 2) e a camada orgânica combinada foi seca (Na2SC>4) , e o solvente removido sob corrente de árgon com aquecimento suave (55-60 °C) . O resíduo foi dissolvido em CH3CN e injetado em HPLC para purificação. [Coluna semi-preparativa Hamilton PRP-1 (7, 0 x 305 mm, 10 pm) , tampão de CH3CN/dimetilglutarato (5 mM, pH 7) 9/1; Taxa de fluxo 2 ml/min]. O tempo de retenção de 12a foi de 8,9 minutos neste sistema de HPLC e bem separado do precursor 10a (tr = 12 min) bem como o subproduto da hidrólise (tr =6,2 min) . A preparação levou 90 minutos e o rendimento radioquímico foi de 20% (declínio corrigido). Para determinar a pureza radioquímica e a atividade específica (At. Esp.), foi utilizada HPLC analítica [coluna analítica de Hamilton PRP-1 (4,1 x 250 mm, 10 pm) , tampão de CHaCN/dimetilglutarato (5 mM, pH 7) 9/1; Taxa de fluxo 0,5 ml/min] . O tempo de retenção 12a neste sistema foi de 10,8 minutos e o RCP foi mais de 99%. A atividade especifica foi estimada através da comparação da intensidade do pico UV de 10[18F] purificado com o composto não radioativo de referência de concentração conhecida. A atividade especifica (At. Esp.) foi de 1.000-1.500 Ci/mmol depois da preparação.

Exemplo 34 [18F] {4-[2-(4 —{2 —[2-(2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi}-fenil)-v inil] -fenil] -metil-amina (12b[18F] ) .

Utilizando uma reação semelhante, 12b[18F] foi obtido a partir de 10b. O rendimento radioquimico foi de 30% (declinio corrigido) e a pureza radioquimica foi >99% . O tempo de retenção de HPLC do 12b foi de 11,7 minutos para o sistema analitico descrito acima (At. Esp. = 1.300-1.500 Ci/mmol).

Exemplo 35 [18F] [(4—{2 — [4 — (2—{2—[2 — (2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi]-etox i)-fenil]-vinil]-fenil)-metil-amina (12c[18F]).

Utilizando uma reação semelhante, 12b[18F] foi obtido a partir de 10b. O rendimento radioquimico foi de 10 % (declinio corrigido) e a pureza radioquimica foi >99% . O tempo de retenção de HPLC do 12c foi de 11,7 minutos para o sistema analitico descrito acima (At. Esp. = 900 Ci/mmol).

Exemplo 36 [18F] [[4-(2 —{4 —[2-(2-{2-[2-(2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi}-e toxi)-etoxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-amina 12d[18F] ) .

Utilizando uma reação semelhante, 12d[18F] foi obtido a partir de 10b. O rendimento radioquimico foi de 20% (declinio corrigido) e a pureza radioquimica foi >99% . O tempo de retenção de HPLC do 12d foi de 11,7 minutos para o sistema analitico descrito acima (At. Esp. = 1.000-1.500 Ci/mmol).

Exemplo 37 4-Amino-4'-hiroxil estilbeno (14a)

Cloreto de estanho (11,8 g, 0,062 mol) foi adicionado a uma solução do composto 13a (Frinton Lab) (3,0 g, 0,012 mol) em etanol (100 ml) seguido pela adição de ácido clorídrico concentrado (5,0 ml) . A solução foi levada a refluxo durante 3 horas e arrefecida até à temperatura ambiente agitando-se durante a noite. Hidróxido de sódio aguoso (1 N) foi adicionado para ajustar o pH para 8,5-9. Depois do processamento padrão com diclorometano, o produto em bruto 14a foi obtido (2,6 g, -100%). O produto foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. XH RMN (DMSO-dg) δ 9,39 (s, 1H), 7,30 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,80 (m, 2H) , 6,72 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,53 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,19 (s, 2H) .

Exemplo 38 4-77,77'-Dimetilamino-4' -hidroxil estilbeno (15a) A uma mistura de 14a (211 mg, 1, 0 mmol) , paraformaldeído (300 mg, 10 mmol) e cianoborohidreto de sódio (189 mg, 3,0 mmol), ácido acético (10 ml) foi adicionado. Toda a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e, depois deitada em 100 ml de água. Carbonato de sódio foi adicionado para ajustar o pH para 8-9. Depois do processamento padrão com metanol a 5% em diclorometano, o resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna em gel de sílica (metanol a 2,5% em diclorometano) para dar 15a como um sólido branco (214 mg, 8 9,5%): XH RMN δ 7,37 (m, 4H) , 6,87 (s, 2H) , 6,75 (m, 4H) , 4,68 (s, 2H) 2,98 (s, 6H) .

Exemplo 39 4- 77,77' -Dimetilamino-4' - (2,2-dimetil - [1,3] dioxano-5-ilmetoxi ) estilbeno (15b)

Sob uma atmosfera de azoto, 15a (100 mg, 0,38 mmol) foi dissolvido em DMF anidro (5,0 ml). Carbonato de potássio (140 mg, 1,0 mmol) foi adicionado a esta solução seguido de 5- bromometil-2,2-dimetil - [ 1,3] dioxano ΣΟπι1 (105 mg, 0,5 mmol) . A mistura foi aguecida até 100 °C e agitada durante a noite. Depois de arrefecida até à temperatura ambiente, o processamento padrão com diclorometano foi aplicado e o resíduo foi purificado através de TLC preparativa em gel de sílica

(metanol a 1 % em diclorometano) para dar o composto 15b (100 mg, 72%) : RMN δ 7,38 (m, 4H) , 6,88 (m, 4H) , 6,70 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,08 (m, 4H) , 3,87 (m, 2H) , 2,96 (s, 6H) , 2,13 (m, 1H) , 1,46 (s, 3H) , 1,42 (s, 3H) . Anál. (C23H29NO3) C, Η, N.

Exemplo 40 4-N,N'-Dimetilamino-4' - (1,3-dihidroxi-propan-2-ilmetoxi) estilbeno (15c) O composto 15b (180 mg, 0,49 mmol) foi suspendido em acetona (5,0 ml) e arrefecido até 0 °C com um banho de gelo. HC1 a 1 N (5,0 mL, 5,0 mmol) foi lentamente adicionado ao longo de 20 minutos. A suspensão tornou-se numa solução límpida durante a adição. A solução foi agitada a 0 °C durante uma meia hora adicional e depois aquecida até à temperatura ambiente em meia hora. Carbonato de sódio saturado foi adicionado para ajustar o pH para 8,5-9. Depois do processamento padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado através de TLC preparativa em gel de sílica (metanol a 5 % em diclorometano) para dar o composto 15c como um sólido branco (140 mg, 87%): RMN δ 7,40 (m, 4H) , 6,88 (m, 4H) , 6,74 (m, 2H) , 4,10 (d, 2H, J = 5,4 7 Hz) , 3,8 9 (d, 4H, J = 5,2 8 Hz) , 2,98 (s, 6H) , 2,22 (m, 1H) . Anál. (C2oH25N03) C, Η, N.

Exemplo 41 4-N,.N'-Dimetilamino-4' - (l-tosil-3-hidroxi-propan-2-ilmetoxi ) estilbeno (15d) O composto 15c (158 mg, 0,49 mmol) foi dissolvido em piridina anidra (15 ml) e arrefecido até 0 °C com um banho de gelo. Cloreto de tosilo (137 mg, 0,72 mmol) foi adicionado e a solução foi agitada a 0 °C durante 2 horas. Depois do processamento padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado através de TLC preparativa em gel de sílica (metanol a 5 % em diclorometano) para dar o composto de monosilato, 15d, como um sólido branco (95 mg, 41%) : XH RMN δ 7,75 (d, 2H, J = 8,26 Hz), 7,37 (m, 4H) , 7,26 (m, 2H) , 6,88 (m, 2H) , 6,72 (m, 4H) , 4,26 (d, 2H, J = 5,66 Hz), 3,97 (d, 2H, J = 5,96 Hz), 3,79 (d, 2H, J = 5,24 Hz), 2,95 (s, 6H) , 2,38 (m, 4H) . Anál. (C27H31NO5S) C, Η, N.

Exemplo 42 4-N,.N'-Dimetilamino-4' - (1-fluoro-3-hidroxi-propan-2-ilmetox i) estilbeno (15e) 0 composto 15d (40 mg, 0,083 mmol) foi dissolvido em THF anidro (5,0 ml) . Sob a atmosfera de azoto, TBAF anidro (150 mg, 0,5 mmol) em THD anidro (1,0 ml) foi lentamente adicionado. A mistura foi depois aquecida até refluxo durante 3 horas. Depois de arrefecida até à temperatura ambiente, o processamento padrão com diclorometano foi aplicado e o resíduo foi aplicado para TLC preparativa em gel de sílica (metanol a 5% em diclorometano) para dar o composto 15e (17 mg, 62%): XH RMN δ 7,40 (m, 4H), 6,89 (m, 4H), 6,70 (d, 2H, J = 8,82 Hz), 4,67 (d, 2H, Ji = 4 7, 1 Hz, J2 = 5, 4 6 Hz) , 4,10 (d, 2H, J = 5, 8 6 Hz) , 3,8 8 (d, 2H, J = 5,24 Hz, 2,97 (s, 6H), 2,40 (m, 1H), 1,76 (s, 1H). Anál. (C20H24FNO2) C, Η, N.

Exemplo 43 4-Nitro-4(2,2-dimetil-[1,3] dioxano-5-ilmetoxi) estilbeno (13b) O composto 13b foi preparado a partir de 13a (241 mg, 1, 0 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 15b. 13b (2 60 mg, 7 0%) : RMN δ 8, 19 (d, 2H, J = 8, 8 0 Hz) , 7,4 9 (m, 4H) , 7,07 (m, 2H) , 6,90 (d, 2H, J = 8,80Hz), 4,12 (m, 4H) , 3,89 (d, 2H), 2,10 (m, 1H), 1,48 (s, 3H), 1,43 (s, 3H). Anál. calc. (C2iH23NO5) C, H, N.

Exemplo 44 4-Nitro-4'-(1,3-dihidroxi-propan-2-ilmetoxi) estilbeno (13c) O composto 13c foi preparado a partir de 13b (260 mg, 0,7 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 15c. 13c (190 mg, 82%) : XH RMN (CD3OD) δ 8, 19 (d, 2H, J = 8,80 Hz) , 7,72 (d, 2H, J = 8,80 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8,70 Hz), 7,24 (q, 2H) , 6,9 6 (d, 2H, J = 8,7 0 Hz) , 4,0 9 (d, 2H, J = 5,7 8 Hz) , 3,7 4 (d, 4H, J = 5,94 Hz, 2,14 (m, 1H) . Anál. (C18H19NO5) C, Η, N.

Exemplo 45 4-Nitro-4'-(l-tosil-3-hidroxi-propan-2-ilmetoxi) estilbeno (13d) 0 composto 13d foi preparado a partir de 13c (80 mg, 0,24 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 15d. 13d (66 mg, 5 6%) : ΧΗ RMN 5 8,18 (d, 2H, J = 8, 82 Hz), 1.11 (d, 2H, J = 8,32 Hz), 7,58 (d, 2H, J = 8,82 Hz), 7,45 (d, 2H, J = 8,73 Hz), 7,28 (d, 2H, J = 8,18 Hz), 7,09 (g, 2H) , 6,81 (d, 2H, J = 8,7 3 Hz) , 4,2 7 (d, 2H, J = 5,7 0 Hz) , 4,01 (m, 2H) , 3,8 0 (d, 2H, J = 5,61Hz), 2,40 (m, 4H) , 2,02 (s, 1H). Anál. (C25H25NO7S) C, Η, N.

Exemplo 46 4-Nitro-4' -(l-fluoro-3-hidroxi-propan-2-ilmetoxi) estilbeno (13e). O composto 13e foi preparado a partir de 13d (33 mg, 0, 069 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 15e. 13e (2 0 mg, 88%) : ΧΗ RMN 5 8,19 (d, 2H, J = 8, 83 Hz), 7,58 (d, 2H, J= 8,84 Hz), 7,48 (d, 2H, J= 8,74 Hz), 7,10 (g, 2H) , 6,94 (d, 2H, J = 8,68 Hz), 4,69 (d, 2H, Ji = 47,1 Hz, J2 = 5,36 Hz), 4,15 (d, 2H, J = 5, 8 9 Hz), 3,90 (d, 2H, J = 5,4 3 Hz) , 2,4 3 (m, 1H) , 1,74 (s, 1H) . Anál. (C18H18FNO4) C, Η, N.

Exemplo 47 4-Amino-4'-(l-fluoro-3-hidroxi-propan-2-ilmetoxi) estilbeno (14e). O composto 14e foi preparado a partir de 13e (37 mg, 0, 11 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 14a. 14e (24 mg, 71%) : XH RMN 5 7,35 (m, 4H), 6,90 (m, 4H), 6, 66 (d, 2H, J = 8,54 Hz), 4,69 (d, 2H, Jr = 47,1 Hz, J2 = 5,46 Hz), 4,12 (d, 2H, J = 5,84 Hz), 3,90 (d, 2H, J = 5,56 Hz), 3,70 (s, 2H), 2,39 (m, 1H), 1,71 (s, 1H). Anál. (Ci8H20FNO2) C, Η, N.

Exemplo 48 4-N-Metil-amino-4'-(l-fluoro-3-hidroxi-propan-2-ilmetoxi) estilbeno (16e)

Sob a atmosfera de azoto, metóxido de sódio (22 mg, 0,4 mmol) foi adicionado a uma suspensão do composto 14e (24 mg, 0,08 mmol) em metanol (6 ml) seguido por paraformaldeido (12 mg, 0,4 mmol). A solução foi levada a refluxo durante 2 horas e arrefecida até 0 °C com um banho de gelo. Borohidrato de sódio (15 mg, 0,4 mmol) foi adicionado em porções. A mistura de reação foi levada a refluxo novamente durante 1 hora e deitada em gelo mordo. Depois do processamento padrão com diclorometano, o residuo foi aplicado para TLC preparativa em gel de silica (metanol a 4,5% em diclorometano) para dar o produto 16e (23 mg, 92%) : RMN δ 7,37 (m, 4H) , 6,87 (m, 4H) , 6,59 (d, 2H, J = 8,56 Hz), 4,69 (d, d, 2H, Ji. = 47,1 Hz, J2 = 5,44 Hz), 4,12 (d, 2H, J = 5, 8 6 Hz), 4,0 0 (s, 1H), 3,8 9 (d, 2H, J = 5,52 Hz), 2,86 (s, 3H) , 2,41 (m, 1H) , 1,75 (s, 1H) . Anál. (C19H22FNO2) C, Η, N.

Exemplo 49 4-N-Metil-amino-4'-hidroxi estilbeno (16a) O composto 16a foi preparado a partir de 14a (105 mg, 0,5 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 16e. 16a (100 mg, 89%) : XH RMN δ 7,34 (m, 4H) , 6,86 (s, 2H) , 6,79 (d, 2H, J = 8,58 Hz), 6,60 (d, 2H, J = 8,58 Hz), 2,85 (s, 3H) . Exemplo 50 O procedimento geral de micro-ondas para a preparação de 12 (n=6, 8) estilbeno

Sintese por micro-ondas: A mistura de 16a, agentes alguilante (1 eg. ) , K2CO3 (3 eg. ) em DMF (1 ml/0, 05 mmol SB-13) foi colocada num tubo selado e aguecida no forno de micro-ondas sob a seguinte condição: 180 °C, 10 minutos, nivel de absorção elevado. O solvente foi depois removido e a PTLC [CH2CI2-MeOH (97:3) como solvente de desenvolvimento] deu o produto desej ado (Rendimento: 42-60% dependendo do agente alguilante utilizado).

Exemplo 51 (4- (2- (4- (2- (2- (2-(2-(2-(2-Fluoro-etoxi)-etoxi)-etoxi)-etox i)-etoxi)-etoxi)-fenil)-vinil)-fenil)-metil-amina (12, n = 6) :

Rendimento = 60%. RMN (200 MHz, CDC13) : δ 7,2-7,5 (4H, m) , 6,8-7,0 (4H, m) , 6,59 (2H, d, J = 8,4 Hz), 4,55 (2H, d, t, Ji = 46 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,14 (2H, t) , 3,8-3,9 (3H, m) , 3,6-3,8 (17H, m) , 2,86 (3H, s). HRMS (El) m/z calc. para [C27H38FNO6] + 491,2683, encontrada 491,2667.

Exemplo 52 (4 - (2 - (4 - (2 - (2 - (2 - (2 - (2-(2-(2-(2-Fluoro-etoxi)-etoxi)-etoxi )-etoxi)-etoxi)-etoxi)-etoxi)-etoxi)-fenil)-vinil)-fenil)-m etil-amina (12, n = 8):

Rendimento: 42%). XH RMN (200 MHz, CDC13) : δ 7,3-7,5 (4H, m) , 6,8-7,0 (4H, m) , 6,73 (2H, d, J = 8,2 Hz), 4,55 (2H, d, t, J3 = 46 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,14 (2H, t) , 3,8-3,9 (3H, m) , 3,5-3,8 (25H, m) , 2,89 (3H, s). HRMS (El) m/z calc. para [C31H46FNO8]+ 579,3207, encontrada 579,3192.

Exemplo 53

Preparação de homogeneizados de tecido cerebral

Tecidos cerebrais pós-morte foram obtidos a partir de pacientes com DA na autópsia, e o diagnóstico neuropatológico foi confirmado através dos critérios atuais (NIA-Reagan Institute Consensus Group, 1997). Os homogeneizados foram preparados a partir de substâncias brancas de pacientes com DA em solução salina tamponada com fosfato (PBS, pH 7,4) na concentração de aproximadamente 100 mg de tecido húmido/ml (homogeneizador de vidro motorizado com configuração de 6 durante 30 segundos). Os homogeneizados foram divididos em aliquotas em porções de 1 ml e armazenados a -70 °C durante 6-12 meses sem perda de sinal de ligação.

Exemplo 54

Estudos de ligação

Como relatado anteriormente, IMPY[125I], com 2.200 Ci/mmol de atividade especifica e pureza radioquimica superior a 95%, foi preparado utilizando a reação padrão de iododestanilação e purificado através de uma mini coluna C-4 simplificada (Kung M-P, et al., Euro J Nucl Med Mol lmag. 2004;31:1136-45). Os ensaios de ligação foram levados a cabo

em tubos de vidro de borosilicato de 12 x 75 mm. A mistura de reação continha 50 μΐ de homogeneizados cerebrais (20-50 pg), 50 μΐ de IMPY[125I] (0, 04-0, 06 nM diluido em PBS) e 50 μΐ de inibidores (10-5-10-10 M diluidos em série em PBS contendo albumina sérica bovina a 0,1%, BSA) num volume final de 1 ml. A ligação não especifica foi definida na presença de IMPY (600 nM) nos mesmos tubos de ensaio. A mistura foi incubada a 37°C durante 2 horas e a radioatividade ligada e livre foram separadas através da filtração a vácuo através de filtros Whatman GF/B utilizando um recoletor de células Brandel M-24R seguida de por lavagens de 2 x 3 ml de PBS à temperatura ambiente. Os filtros contendo o ligando 125I ligado foram ensaiados para o conteúdo em radioatividade num contador gama (Packard 5000) com uma eficiência de contagem de 70%. Sob as condições do ensaio, a fração especificamente ligada foi menos do que 15% da radioatividade total. Os resultados das experiências de inibição foram sujeitos a uma análise de regressão não linear utilizando EBDA através da qual os valores de Ki foram analisados. Os resultados são dados no Quadro 1. Quadro 1.

Os PEG-estilbenos fluorinados (12a-d) demonstraram excelentes afinidades de ligação (K± = 2,9-6,7 nM); enquanto os análogos substitutos de hidroxilo correspondentes (3a-d) também demonstraram afinidades de ligação muito elevadas (K± = 2,8-5,2 nM) (Quadro 1). A lipofilicidade desta série de agentes marcados, 12a-d[18F], esteve dentro de um intervalo apropriado (valor de logP foi de 2,52, 2,41, 2,05 e 2,28 para n = 2-5, respetivamente). O grupo PEG é capaz de modular o tamanho de molécula e a distância entre o átomo de flúor e a estrutura do núcleo de estilbeno sem afetar a afinidade de ligação especifica às placas de Αβ.

Exemplo 55

Autoradiografia com pelicula

Secções cerebrais de sujeitos com DA foram obtidas através da congelação do cérebro em gelo seco em pó e cortadas em secções de 20 micrómetros de espessura. As secções foram incubadas com traçadores[ 18F] (200.000-250.000 cpm/200 μΐ) durante 1 hora à temperatura ambiente. As secções foram então mergulhadas em LÍ2CO3 saturado em EtOH a 40% (lavagens de dois minutos) e lavadas com EtOH a 40% (lavagem de um a dois minutos) seguindo-se por enxaguado com água durante 30 segundos. Depois da secagem, as secções marcadas com 18F foram expostas a uma pelicula Kodak MR durante a noite.

Exemplo 56

Marcação de placas in vivo com 12b [18F] e 12d[18F] A avaliação in vivo foi realizada utilizando tanto ratinhos transgénicos duplos APP/PS1 ou transgénicos simples APP2576 gue foram gentilmente cedidos por AstraZeneca. Após a anestesia com isoflurano a 1%, 250-300 pCi de 12b [18F] ou 12d[18F] em 200 μΐ de solução de BSA a 0,1% foram injetados através da veia da cauda. Deixou-se os animais recuper durante 60 minutos e foram depois mortos por decapitação. Os cérebros foram imediatamente removidos e congelados em gelo seco em pó. As secções de 20 micrómetros foram cortadas e expostas a uma pelicula Kodak MR durante a noite . Autoradiogramas com pelicula ex vivo foram assim obtidas.

Exemplo 57

Distribuição orgânica em ratinhos normais

Enguanto sob anestesia com isoflurano, 0,15 ml de uma solução de albumina sérica bovina a 0,1% contendo traçadores[ 18F] (5-10 pCi) foram injetados diretamente na veia

da cauda de ratinhos ICR (22-25 g, machos) . Os ratinhos foram sacrificados (n= 3 por cada ponto de tempo) através de deslocação cervical aos 120 minutos após injeção. Os órgãos de interesse foram removidos e pesados, e a radioatividade foi testada para o conteúdo em radioatividade com um contador gama automático. A dose percentual por órgão foi calculada através da comparação das contagens teciduais para diluir adeguadamente aliguotas do material injetado. As atividades totais do sangue foram calculadas sob a mesma suposição de que eram 7% do peso corporal total. A dose %/g das amostras foi calculada através da comparação das contagens das amostras com as contagens da dose inicial diluida.

Quadro 2. Biodistribuição em ratinhos ICR depois da injeção iv de 12a-d[18F] em BSA a 0,1% (dose %/g, média de 3 ratinhos ± DP)

Os compostos radioativos, incluindo 12a-d[18F], penetraram a barreia hematoencefálica intacta, mostrando uma excelente captação no cérebro em ratinhos normais (6, 6-8, 1 dose %/g de cérebro) aos 2 minutos após injeção iv (Quadro 2A e B) . Uma vez que os ratinhos normais foram utilizados para experiências de biodistribuição, não são esperadas nenhumas placas de Αβ no cérebro destes ratinhos jovens; desta forma, os agentes marcados, 12a-d[18F], foram eliminados a partir do cérebro rapidamente (1,2-2,6 dose %/ g de cérebro) aos 60 minutos após injeção iv. A captação inicial elevada e a rápida eliminação no cérebro de ratinhos normais (sem placas de Αβ no cérebro) são propriedades altamente desejáveis para os agentes de diagnóstico por imagem direcionados às placas de Αβ. Os valores relatados no Quadro 2 são comparáveis com aqueles relatados para PIB[11C] e SB-13[11C] (Mathis CA, et al., Curr PharmDes. 2 0 04; 10:1469-92; Ono M, et al., Nucl Med Biol. 2003; Mathis CA, et al., J Org Chem. 2003) .

Uma biodistribuição detalhada de 12b[18F] é mostrada no Quadro 2A. Parece que, aos 2 minutos depois da injeção, o composto foi captado pelo figado, rim, pulmões e músculo, refletindo um padrão de perfusão sanguíneo geral. A captação óssea aos 120 minutos foi alta (2,74 dose %/g) sugerindo que pode existir defluorinação in vivo. No entanto, o flúor livre não é captado pelo tecido cerebral; desta forma, a captação óssea foi relativamente baixa. Os outros derivativos de PEG-estilbeno, 12a,c,d, demonstraram padrões de biodistribuição semelhantes (Quadro 2B).

Exemplo 58

Coeficiente de partição

Os coeficientes de partição foram medidos através da mistura do traçador[ 18F] com 3 g de cada 1-octanol e tampão (fosfato a 0,1 M, pH 7,4) num tubo de teste. O tubo de teste foi submetido a vórtice durante 3 minutos à temperatura ambiente, seguido por centrifugação durante 5 minutos. Duas amostras pesadas (0,5 g cada) a partir das camadas de 1-octanol e tampão foram contadas num contador de poços. O coeficiente de partição foi determinado através do cálculo da razão de cpm/g de 1-octanol para a de tampão. Amostras da camada de 1-octanol foram reparticionadas até que partições consistentes de valores de coeficiente foram obtidas (normalmente a 3a ou 4a partição). A medição foi realizada em triplicado e repetida três vezes.

Será entendido por aqueles peritos na especialidade que a mesma pode ser realizada dentro de uma ampla e equivalente gama de condições, formulações, e outros parâmetros sem afetar o âmbito da invenção ou uma forma de realização da mesma, conforme definido nas reivindicações em anexo.

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • WO 03018070 A [0014]

Documentos de não patente citados na descrição • Molecular Pathology of Alzheimer's Disease and Related

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Claims (13)

REIVINDICAÇÕES

1. Um composto da Fórmula II,

II em que, R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em: a. NRaRb, em que Ra e Rb são independentemente hidrogénio, Ci-4 alquilo, (CH2)dX/ onde X é 18F, e d é um número inteiro entre 1 e 4, ou Ra e Rb são ambos oxigénio para formar um nitro; b. hidroxi, c. Ci-4 alcoxi, e d. hidroxi (C1-4) alquilo; R2 é

em que q é um número inteiro de 2 a 10; Zé selecionado a partir do grupo que consiste em 18F, e (C1-4) alcoxi substituído com 18F; e R30, R31, R32 e R33 são em cada caso independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, hidroxi, C1-4 alcoxi, C1-4 alquilo e hidroxi (C1-4) alquilo; e R7 e R8 são em cada caso independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, hidroxi, amino, metilamino, dimetilamino, C1-4 alcoxi, C1-4 alquilo, e hidroxi (C1-4) alquilo.

2. 0 composto da reivindicação 1, em que R1 é NRaRb, em que Ra e Rb são independentemente hidrogénio ou C1-4 alquilo.

3. 0 composto da reivindicação 2, em que R2 é

q q q ί q q qq em que Z, R , R , R e R são conforme defrnrdo acrma.

4. 0 composto da reivindicação 3, em que q é um número inteiro de 2 a 5.

5. 0 composto da reivindicação 4, em que R7 e R8 são cada um q q q -1 q q qq hrdrogenro; e em que opcronalmente R , R , R e R são, em cada caso, hidrogénio.

6. 0 composto da reivindicação 5, que tem a fórmula seguinte: ou

7. Uma composição farmacêutica que compreende um composto da reivindicação 1.

8. Uma composição de diagnóstico para o diagnóstico por imagem de depósitos amiloides, que compreende um composto radiomarcado da reivindicação 1.

9. Um método para realizar o diagnóstico por imagem de depósitos amiloides, gue compreende: a. a introdução num mamífero de uma guantidade detetável de uma composição de diagnóstico da reivindicação 8; b. permitir tempo suficiente para gue o composto marcado se associe aos depósitos amiloides; e c. a deteção do composto marcado associado a um ou mais depósitos amiloides.

10. A composição da reivindicação 7 ou do composto radiomarcado da reivindicação 1 para utilização para a inibição da agregação de placas amiloides num mamífero.

11. Um composto selecionado a partir do grupo gue consiste em: éster 2- [2- (4—{2—[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil]-vi nil}-fenoxi)-etoxi]-etílico de ácido metanossulfónico (10a); éster 2—{2 — [2 — (4—{2—[4 — (terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil] -vinil}-fenoxi)-etoxi]-etoxi}-etílico de ácido metanossulfónico (10b); éster 2- (2—{2— [2- (4 — {2—[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fen il]-vinil}-fenoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi)-etílico de ácido metanossulfónico (10c); éster 2- [2 (2—{2— [2- (4—{2—[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-f enil]-vinil}-fenoxi)-etoxi]-etoxi}-etoxi]-etoxi)-etílico de ácido metanossulfónico (10d) ; éster terc-butílico de ácido [4- ( (2—{4—[2- (2-Hidroxi-etoxi)-etoxi]-fenil}-vinil)-fenil ]-metil-carbâmico (9a) ; éster terc-butílico de ácido {4-[2-(4—{2—[2-(2-Hidroxi-etoxi)-etoxi]-etioxi)-fenil)-vi

nil]-fenil]-metil-carbâmico (9b) ; éster terc-butílico de ácido (4 —{2 —[4 - (2-{2-[2-(2-Hidroxi-etoxi)-etoxi]-etioxi}-etoxi) -fenil]-vinil}-fenil)-metil-carbâmico (9c); e éster terc-butilico de ácido [4 - ( (2 —{4 — [2 - (2-{2-[2-(2-Hidroxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-eto xi)-etoxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-carbâmico (9d) .

12. Um composto que tem a fórmula seguinte:

em que n é um número inteiro de 2 a 5.

13. Um processo para produzir o composto da reivindicação 1, em que o composto é da Fórmula 12 [18F] :

em que n = 2, 3, 4 ou 5, que compreende fazer reagir um composto de Fórmula 10:

com F“[18F] /Kryptofix 222 ("K222") e K2CO3 em DMSO e tratar a mistura resultante com HC1 aquoso.