BRPI0516408B1 - Derivados de estilbeno e seu uso para ligação e formação de imagem de placas de amilóide - Google Patents

Abstract

derivados de estilbeno e seu uso para ligação e formação de imagem de placas de amilóide. a presente invenção refere-se a um método de formação de imagem de depósitos de amilóide e aos compostos rotulados, e métodos de preparação de compostos rotulados úteis em formação de imagem de depósitos de amilóide. esta invenção também refere-se aos compostos, e métodos de preparação de compostos para inibição da agregação de proteínas amilóides para formar depósitos amilóides, e um método de liberação de um agente terapêutico aos depósitos de amilóide.

Description

DERIVADOS DE ESTILBENO E SEU USO PARA LIGAÇÃO E FORMAÇÃO DE IMAGEM DE PLACAS DE AMILÓIDE Antecedentes da Invenção Campo da Invenção

A presente invenção refere-se aos novos compostos bioativos, métodos de formação de imagem diagnósticos empregando-se compostos radiorrotulados, e métodos de preparação de compostos radiorrotulados.

Técnica Antecedente

Doença de Alzheimer (AD) é um distúrbio neurodegenerativo progressivo caracterizado por declínio cognitivo, perda de memória irreversível, desorientação, e deterioração da linguagem. Exame após a morte de secções de cérebro de AD revelaram placas senis abundantes (SPs) compostas de peptídeos β amiloides (Αβ) e numerosos emaranhamentos neurofibrilares (NFTs) formados por filamentos de proteínas tau altamente fosfori-ladas (para revisões recentes e citações adicionais vide Ginsberg, S. D., e outros, "Molecular Pathology of Alzheimer's Disease and Related Disorders," em Cerebral Cortex: Neurodegenerative and Age-related Changes in Structure and Function of Cerebral Cortex, Kluwer Academic/Plenum, NY (1999), páginas 603-654; Vogelsberg-Ragaglia, V., e outros, "Cell Biology of Tau and Cytoskeletal Pathology in Alzheimer's Disease," Alzheimer's Disease, Lippincot, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (1999), páginas 359-372).

Amiloidose é uma condição caracterizada pelo acúmulo de várias proteínas fibrilares insolúveis nos tecidos de um paciente. Um depósito amiloide é formado pela agregação de proteínas amiloides, seguida também pela combinação de agregados e/ou proteínas amiloides. Formação e acúmulo de agregados de peptídeos β amiloides (Αβ) no cérebro são fatores cruciais no desenvolvimeto e progressão de AD.

Além do papel de depósitos amiloides na doença de Alzheimer, a presença de depósitos amiloides foi mostrada em doenças tais como febre do Mediterrâneo, síndrome de Muckle-Wells, mieloma idiopática, polineuro-patia amiloide, cardiomiopatia amiloide, amiloidose senil sistêmica, polineu- ropatia amiloide, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose, síndrome de Down, Scrapie, doença de Creutzfeldt-Jacob, Kuru, síndrome de Gerst-mann-Straussler-Scheinker, carcinoma medular da tireóide, amilóide atrial isolado, amiloide de β2 microglobulina em pacientes em diálise, miosite de corpo de inclusão, depósitos de β2 amiloide em doença debilitante muscular, e insulinoma de diabetes Tipo II das Ilhotas de Langerhans.

Os agregados fibrilares de peptídeos amiloides, Αβ1-40 e Αβ1_42, são peptídeos metabólicos maiores derivados da proteína precursora de amiloide encontrada em placas senis e depósitos de amiloide cerebrovascular em pacientes de AD (Xia, W., e outros, J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97:9299-9304 (2000)). Prevenção e reversão de formação de placa Αβ estão sendo alvejadas como um tratamento para esta doença (Selkoe, D., J. JAMA 283:1615-1617 (2000); Wolfe, M.S., e outros., J. Med. Chem. 41:6-9 (1998); Skovronsky, D.M., e Lee, V.M., Trends Pharmacol. Sci. 21:161-163 (2000)).

AD familiar (FAD) é causada por mutações múltiplas nos genes de proteína precursora A (APP), presenilina 1 (PS1) e presenilina 2 (PS2) (Ginsberg, S. D., e outros, "Molecular Pathology of Alzheimer's Disease and Related Disorders," em Cerebral Cortex: Neurodegenerative and Age-related Changes in Structure and Function of Cerebral Cortex, Kluwer Acade-mic/Plenum, NY (1999), páginas 603-654; Vogelsberg-Ragaglia, V., e outros, "Cell Biology of Tau and Cytoskeletal Pathology in Alzheimer's Disease," Alzheimer's Disease, Lippincot, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (1999), páginas 359-372).

Ao mesmo tempo que os mecanismos exatos que acompanham a AD não são totalmente entendidos, todas as mutações de FAD patogênicas estudadas até aqui aumentam a produção da forma longa de 42-43 aminoácidos mais amiloidogênica do peptídeo Αβ. Desse modo, pelo menos na FAD, desregulação de produção de Αβ parece ser suficiente para induzir uma cascata de eventos levando a neurodegeneração. De fato, a hipótese de cascata de amiloide sugere que a formação de agregados de Αβ fibrilares extracelulares no cérebro pode ser um evento fundamental em patogênese de AD (Selkoe, D. J., "Biology of β-amiloid Precursor Protein and the Mecha- nism of Alzheimer’s Disease," Alzheimer's Disease, Lippincot Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (1999), páginas 293-310; Selkoe, D. J., J. Am. Med. Assoc. 283:1615-1617 (2000); Naslund, J., e outros, J. Am. Med. Assoc. 283:1571-1577 (2000); Golde, T. E., e outros, Biochimica et Biophysica Acta 1502:172-187 (2000)).

Vários métodos na tentativa de inibir a produção e reduzir o a-cúmulo de Αβ fibrilar no cérebro estão atualmente sendo avaliados como terapias potenciais para AD (Skovronsky, D. M. e Lee, V. M., Trends Pharmacol. Sci. 21:161-163 (2000); Vassar, R., e outros, Science 286:735-741 (1999); Wolfe, M. S., e outros, J. Med. Chem. 41:6-9 (1998); Moore, C. L., e outros, J. Med. Chem. 43:3434-3442 (2000); Findeis, M. A., Biochimica et Biophysica Acta 1502:76-84 (2000); Kuner, P., Bohrmann, e outros, J. Biol. Chem. 275:1673-1678 (2000)). É portanto de interesse desenvolver ligandos que especificamente ligam-se aos agregados de Αβ fibrilares. Uma vez que SPs extracelulares são alvos acessíveis, estes novos ligandos podem ser empregados como instrumentos diagnósticos in vivo e como sondas para visualizar a deposição progressiva de Αβ em estudos de amiloidogênese de AD em pacientes vivos.

Para esta finalidade, diversos métodos de interesse para desenvolver ligandos específicos de agregado de Αβ fibrilar foram relatados (Ash-burn, T. T., e outros, Chem. Biol. 3:351-358 (1996); Han, G., e outros, J. Am. Chem. Soc. 118:4506-4507 (1996); Klunk, W. E., e outros, Biol. Psychiatry 35:627 (1994); Klunk, W. E., e outros, Neurobiol. Aging 16:541-548 (1995); Klunk, W. E., e outros, Society for Neuroscience Abstract 23:1638 (1997); Matis, C. A., e outros, Proc. Xllth Intl. Symp. Radiopharm. Chem., Uppsala, Sweden: 94-95 (1997); Lorenzo, A. e Yankner, B. A., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91:12243-12247 (1994); Zhen, W., e outros, J. Med. Chem. 42:2805-2815 (1999)). O método mais atrativo é baseado na crisamina-G (CG) altamente conjugada e vermelho Congo (CR), e o ultimo foi empregado para manchamento fluorescente de SPs e NFTs em secções de cérebro de AD após a morte (Ashburn, T. Τ., e outros, Chem. Biol. 3:351-358 (1996); Klunk, W. E., e outros, J. Histochem. Cytochem. 37:1273-1281 (1989)). A constante de inibição (Ki) para ligação aos agregados de Αβ fibrilares de CR, CG, e derivados de 3'-bromo-e 3'-iodo de CG são 2.800, 370, 300 e 250 nM, respectivamente (Matis, C. A., e outros., Proc. Xllth Intl. Symp. Radiopharm. Chem., Uppsala, Sweden: 94-95 (1997)). Estes compostos foram mostrados ligarem-se seletivamente aos agregados de peptídeo Αβ (1-40) in vitro bem como aos depósitos de Αβ fibrilares em secções de cérebro de AD (Matis, C. A., e outros., Proc. Xllth Intl. Symp. Radiopharm. Chem., Uppsala, Sweden: 94-95(1997)).

Existem diversos benefícios potenciais de formação de imagem de agregados de Αβ no cérebro. A técnica de formação de imagem melhorará o diagnóstico identificando pacientes potenciais com excesso de placas de Αβ no cérebro; portanto, eles podem estar propensos a desenvolver doença de Alzheimer. Será também útil monitorar a progressão da doença. Quando tratamentos por fármaco antiplaca tornam-se disponíveis, formação de imagem de placas de Αβ no cérebro pode fornecer uma ferramenta essencial para monitorização do tratamento. Desse modo, um método não invasivo simples para detectar e quantificar depósitos de amiloide em um paciente foi ansiosamente procurado. Atualmente, a detecção de depósitos de amiloide envolve análise histológica de materiais por biópsia ou autópsia. Ambos os métodos têm desvantagens. Por exemplo, uma autópsia pode apenas ser empregada para um diagnóstico após a morte.

O formação de imagem direto de depósitos de amiloide in vivo é difícil, quando os depósitos têm muitas das mesmas propriedades físicas (por exemplo, densidade e conteúdo de água) como tecidos normais. Tentativas de imagear depósitos de amiloide empregando-se formação de imagem de ressonância magnética (MRI) e tomografia auxiliada por computador (CAT) foram desapontadas e têm depósitos de amiloide detectados apenas sob certas condições favoráveis. Além disso, esforços para rotular depósitos de amiloide com anticorpos, proteína P amiloide de soro, ou outras moléculas de sonda têm fornecido alguma seletividade na periferia de tecidos, porém têm provido formação de imagem inferior de tecidos interiores.

Ligandos potenciais para detectar agregados de Αβ no cérebro vivo devem atravessar a barreira hematoencefálica intacta. Desse modo, a captação cerebral pode ser melhorada empregando-se ligandos com tamanho molecular relativamente menor (comparado ao Vermelho Congo) e lipo-filicidade aumentada. Tioflavinas altamente conjugadas (S e T) são comumente empregadas como tinturas para manchamento dos agregados de de Αβ no cérebro de AD (Elhaddaoui, A., e outros, Biospectroscopy 1:351-356 (1995)).

Um traçador altamente lipofílico, [18F]FDDNP, para ligação de ambos emaranhamentos (principalmente compostos de proteína tau hiper-fosforilada) e placas (contendo agregados de proteína Αβ) foi reportado. (Shoghi-Jadid K, e outros., Am J Geriatr Psychiatry. 2002; 10:24-35). Empregando-se tomografia de emissão positron (PET), foi reportado que este traçador especificamente rotulou depósitos de placas e emaranhamentos em nove pacientes de AD e sete pacientes de comparação. (Nordberg A. Lancet Neurol. 2004;3:519-27). Empregando-se um novo procedimento de análise farmacocinética chamado o tempo de permanência relativo da região cerebral de interesse versus a ponte, diferenças entre pacientes de AD e pacientes de comparação foram demonstradas. O tempo de permanência relativo foi significantemente maior em pacientes de AD. Isto é também complicado por uma descoberta intrigante de que FDDNP compete com alguns NSAIDs para ligação às fibrilas de Αβ in vitro e às placas de Αβ ex vivo (Agdeppa ED, e outros. 2001; Agdeppa ED, e outros., Neuroscience. 2003;117:723-30).

Formação de imagem de β amiloide no cérebro de pacientes de AD empregando-se um derivado de anilina de benzotiazol, [11C]6-OH-BTA-1 (também referido como [11C]PIB), foi recentemente reportado. (Matis CA, e outros., Curr Pharm Des. 2004; 10: 1469-92; Matis CA, e outros., Arch. Neu-rol. 2005, 62:196-200.). Ao contrário daquilo observado para [18F]FDDNP, [11C]6-OH-BTA-1 liga-se especificamente à Αβ fibrilar in vivo. Pacientes com diagnóstico de AD branda mostraram retenção acentuada de [11C]6-OH-BTA-1 no córtex, conhecido conter grandes quantidades de depósitos de amiloide em AD. No grupo de paciente de AD, retenção de [11C]6-OH-BTA-1 foi aumentada mais proeminentemente no córtex frontal. Grandes aumentos também foram observados nos córtexes parietal, temporal, e ocipital e no estriado. Retenção de [11C]6-OH-BTA-1 foi equivalente em pacientes de AD e pacientes de comparação em áreas conhecidas serem relativamente não afetadas por deposição de amiloide (tal como substância branca subcortical, ponte, e cerebelo). Recentemente, outra sonda de alvejamento de placa de Αβ rotulada por 11C, um derivado de estilbeno-[11C]SB-13, foi estudada. Ligação in vitro empregando-se o [3H]SB-13 sugere que o composto mostrou excelente afinidade de ligação e a ligação pode ser claramente avaliada na substância cinza cortical, porém não na substância branca de casos de AD. (Kung M-P, e outros, Brain Res. 2004; 1025:98-105. Existiu uma ligação específica muito baixa em homogeneizados de tecido cortical de cérebros de controle. Os valores de Kd de [3H]SB-13 em homogeneizados corticais de AD foram 2,4±0,2 nM. Capacidade de ligação elevada e valores comparáveis foram observados (14-45 pmol/mg de proteína) (id.). Como esperado, em pacientes de AD, [11C]SB-B exibiu um acúmulo elevado no córtex frontal (presumivelmente uma área contendo uma densidade elevada de placas de Αβ) em pacientes de AD branda a moderada, porém não em pacientes de controle comparados pela idade. (Verhoeff NP, e outros, Am J Geriatr Psychiatry. 2004;12:584-95).

Seria útil ter uma técnica não invasiva para imagear e quantificar depósitos de amiloide em um paciente. Além disso, seria útil ter compostos que inibem a agregação de proteínas amiloides para formar depósitos de amiloide e um método para determinar uma capacidade de compostos inibirem a agregação de proteína amiloide.

Sumário da Invenção

A presente invenção fornece novos compostos de Fórmulas I, II e 111.

A presente invenção também fornece composições diagnósticas compreendendo um composto radiorrotulado de Fórmula I, II ou III e um diluente ou portador farmaceuticamete aceitável.

A invenção também fornece um método de formação de imagem de depósitos de amiloide, o método compreendendo introduzir em um paci- ente uma quantidade detectável de um composto rotulado de Fórmula I, II ou III ou um sal farmaceutica mete aceitável, éster, amida ou pró-fármaco do mesmo.

A presente invenção também fornece um método para inibir a agregação de proteínas amiloides, o método compreendendo administrar a um mamífero uma quantidade de inibição de amiloide de um composto de Fórmula I, II ou III ou um sal farmaceuticamete aceitável, éster, amida, ou pró-fármaco do mesmo.

Um outro aspecto da mesma invenção é direcionado aos méto- dos e intermediários úteis para sintetizar os compostos de formação de imagem e inibição de amiloide de Fórmula I, II ou III descritos aqui.

Breve Descrição das Figuras

A Figura 1 representa dados de ligação de Ki de diversos compostos da presente invenção.

Descrição Detalhada da Invenção

Em um primeiro aspecto, a presente invenção é direcionada aos compostos de Fórmula I:

ou um sal farmaceuticamete aceitável ou pró-fármaco do mesmo, em que:
R1 é selecionado do grupo consistindo em:

• a. NRaRb, em que Ra e Rb são independentemente hidrogênio, C1-4 alquila, (CH2)d18F, e d é um número inteiro entre 1 e 4,
• b. hidróxi,
• c. C1-4 alcóxi,
• d. hidróxi(C1-4)alquila,
• e. halogênio,
• f. ciano,
• g. hidrogênio,
• h. nitro,
• i. (C1-C4)alquila,
• j. Halo(C1-C4)alquila, e
• k. formila.

R1' é selecionado do grupo consistindo em

• a. 123I,125I,131I,18F, 76Br
• b. hidrogênio,
• c. 18F( C1-4)alquila,
• d. [18F( C1-4)alquil]amino,
• e. [18F(C1-C4)atquil]aiquilamino,
• f. 18F(C1-C4)alcóxi.

R2 é selecionado do grupo consistindo em
i. hidroxila, C-1-4AIcóxi, (C1-C4)-alquiloxoAlc(C1-C4)óxi, (C1-C4)-alquitoxo(C1-C4)-alquiloxo(C1-C4)aicóxi, (C1-C4)-alquiloxo(C1-C4)-alquiloxo(C1-C4)-alquiloxo(C1-C4)alcóxí, carbóxi(C1-C4)Alquila, halo(C1-C4)alcóxi, halo(C1-C4)-alquiloxo(C1-C4)alcóxi, halo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)-alquilóxi, halo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)aiquiloxo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquilóxi, halo(C1-C4)alquila, NR6R6', fenil(C1-C4)alquila, 18F(C1-C4)alcóxi, 18F(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)aicóxi, 18F(C1-C4)alquiioxo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquilóxi, 18F(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquiioxo(C1-C4)alquilóxi, 18F(C1-C4)alquila,
em que R6 e R6' são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi(C1-C4)alquila e C1-C4alquila.

onde q é um número inteiro de um a 10; Z é selecionado do grupo consistindo em 18F, benzoilóxi substituído por 18F, benzilóxi substituído por18F, preferivelmente 18F-fenóxi, fenil(C1-4)alquila substituída por18F, (C1-4)alcóxi substituído por 18F, arilóxi substituído por 18F e uma C6-10 arila substituída por 18F, preferivelmente 18F-fenila; e R30, R31, R32 e R33 são em cada exemplo independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, C1-4 alcóxi, C1-4 alquila, e hidróxi(C1-4)alquila;

em que Z, R30, R31, R32 e R33 são como descritos acima;

onde Y é selecionado do grupo consistindo em 18F, benzoilóxi substituído por 18F, fenil(C1-4)alquila substituída por18F, arilóxi substituído por 18F preferivelmente 18F-fenóxi e C6-10 arila substituída por 18F, preferivelmente 18F-fenila;

U é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, 18F, benzoilóxi substituído por 18F, fenil(C1-4)alquila substituída por 18F, arilóxi substituído por 18F, preferivelmente 18F-fenóxi e C6-10 arila substituída por 18F, preferivelmente 18F-fenila; e

R34, R35, R36, R37, R38, R39 e R40 são em cada exemplo independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, C1-4 alcóxi, C1-4 alquila, e hidróxi(C1-4)alquila; e

R7 e R8 são em cada exemplo independentemente selecionados do grupo consistindo em halogênio, por exemplo F, Cl, Br, hidrogênio, hidróxi, amino, metilamino, dimetilamino, C1-4 alcóxi, C1-4 alquila, e hidróxi(C1-4)alquila, em que pelo menos um de R7 e R8 é halogênio, preferivelmente F.

Em uma modalidade preferida
R1 é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio, por exemplo F, Cl, Br, C1-C4 alquila, ciano, hidroxila, nitro, (C1-C4)alquilamino, di(C1-C4)alquilamino, halo(C1-C4)alquila, formila, e alc(C1-C4)-óxi.

R1' é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, 123l, 125l, 131l, 18F, 18F(C1-4)alquila, [18F(C1-4)alquil]amino, [18F(C1-C4)alquil]alquilamino, 18F(C1-C4)alcóxi e 76Br.

R2 é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidroxila, C1-4alcóxi, (C1-C4)alquiloxoalc(C1-C4)óxi, carbóxi(C1-C4)alquila, ha-lo(C1-C4)-alcóxi, halo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alcóxi, Halo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)-alquiloxo(C1-C4)alquilóxi, halo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquiloxo(C1- C4)alquiloxo-(C1-C4)alquilóxi, halo(C1-C4)alquila, NR6R6’, fenil(C1-C4)alquila, 18F(C1-C4)a1cóxi, 18F(C1-C4)alquiloxo-(C1-C4)alcóxi, 18F(C1-C4)alquiloxo-(C1-C4)-alquÍloxo(C1-C4)alquilóxi, 18F(C1-C4)alqui!oxo(C1-C4)alquiloxo(C1- C4)alquiloxo-(C1-C4)alquilóxi, 18F(C1-C4)alquila.

R6 e R6' são independentemente selecionados do grupo consis tindo em hidrogênio, hidróxi(C1-C4)alquila, e C1-C4alquila,

R7 e R8 são selecionados de H, F, Cl ou Br, em que cada um de R7 e R8 é halogênio.

Em uma outra modalidade preferida
R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, (C1-C4)alquilamino, di(C1-C4)alquilamino, metila e metóxi, em particular em hidrogênio, metilamino, e dimetilamino,

R1’ é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, 123l, 125l, 131l e 18F, em particular em hidrogênio,

R2 é selecionado do grupo consistindo em hidróxi, C1-C4alcóxi, NR6R6', 18F(C1-C4)alcóxi, 18F(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alcóxi, 18F(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquilóxi, 18F(C1-C4)alquiloxo(C1- C4)alquiloxo-(C1-C4)alquiloxo(C1--C4)alquilóxi, 18F(C1-C4)alquila, em particular em (C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alcóxi, 18F(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquilóxi, e 18F(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquiloxo(C1-C4)alquiloxo(C1- C4)alquilóxi,

R6 e R6’ são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi(C1-C4)alquila e C1-C4alquila,

R7 e R8 são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e flúor, em que ou R7 ou R8 é flúor.

Foi surpreendentemente encontrado que derivados de estilbeno que transportam um halogênio adicional, em particular, átomo de flúor na ligação dupla mostram propriedades farmacocinéticas melhoradas e/ou uma estabilidade metabólica aumentada e/ou uma estabilidade geometricamente isomérica aumentada e uniformidade.

Compostos preferidos de Fórmula I têm as seguintes estruturas:

e

em que um de R7 e R8 é hidrogênio, e o outro é halogênio.

Um segundo aspecto da presente invenção é direcionado aos compostos de Fórmula II:

ou um sal farmaceuticamete aceitável dos mesmos, em que:
R1 é selecionado do grupo consistindo em:

• a. NRaRb, em que Ra e Rb são independentemente hidrogênio, C1-4 alquila, (CH2)d18F, e d é uní número inteiro entre 1 e 4, ou Ra e Rb são ambos oxigênio para formar um nitro,
• b. hidróxi,
• c. C1-4 alcóxi, e
• d. hidróxi(C1-4)alquila;

R2 é selecionado do grupo consistindo em:

onde q é um número inteiro de um a 10; Z é selecionado do grupo consistindo em 18F, benzoilóxi substituído por 18F, (C1-4)alcóxi substituído por 18F, benzilóxi substituído por 18F, preferivelmente 18F-fenóxi, fenil(C1-4)alquila substituída por 18F, arilóxi substituído por 18F, e uma C6-10 arila substituída por 18F, preferivelmente 18F-fenila; e R30, R31, R32 e R33 são em cada exemplo independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, C1-4 alcóxi, C1-4 alquila e hidróxi(C1-4)alquila;

em que Z, R30, R31, R32 e R33 são como descritos acima;

onde Y é selecionado do grupo consistindo em 18F, benzoilóxi substituído por18F, fenil(C1-4)alquila substituída por18F, arilóxi substituído por 18F, preferivelmente 18F-fenóxi, e C6-10 arila substituída por 18F, preferivelmente 18F-fenila;

U é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, 18F, benzoilóxi substituído por 18F, fenil(C1.4)alquila substituída por 18F, arilóxi substituído por18F, preferivelmente 18F-fenóxi e C6-10 arila substituída por18F, preferivelmente 18F-fenila; e

R34, R35, R36, R37, R38, R39 e R40 são em cada exemplo independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, C1-4 alcóxi, Cm alquila, e hidróxi(C1-4)alquila; e

R7 e R8 são em cada exemplo independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, amino, metilamino, dimetilamino, C1-4 alcóxi, C1-4 alquila, e hidróxi(C1-4)alquila.

Mais preferivelmente, o valor de cada um de R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 e R40 é em cada exemplo independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, hidróxi, amino, metilamino, dimetilamino e metóxi.

Preferivelmente, R2 está ou na posição meta ou para relativa à ponte de etileno.

o valor preferido para R30 , R 31, R32 e R33 em cada exemplo é hidrogênio, e Z é 18F. Valores úteis de q incluem números inteiros de um a dez. Preferivelmente, q é um número inteiro de 2 a 5. Mais preferivelmente, o valor de q é 3 ou 4.

Modalidades preferidas de Fórmula II incluem as seguintes estruturas em que Ra e Rb são independentemente hidrogênio ou metila, preferivelmente pelo menos um de Ra e Rb é metila:

e X é 18F.

Uma série preferida de compostos de Fórmula II inclui derivados de estilbeno de polietilenoglicol(PEG) rotulado por 18F tendo as seguintes estruturas:

em que, q é um número inteiro de um a dez. Compostos mais preferidos in-cluem aqueles onde q é igual a:
dois,

três,

ou quatro,

Nesta série de compostos, 18F é ligado ao estilbeno através de uma cadeia de PEG, tendo um número variável de grupos de etóxi. Todos dos estilbenos fluorinados exibiram afinidades de ligação elevadas em um ensaio empregando-se homogeneizados de cérebro de AD após a morte (Ki = 2,9-6,7 nM). Como mostrado nos Esquemas 1-3 anexos, radiorrotulagem foi bem-sucedidamente realizada por uma substituição do grupo de mesilato de 10a-d por [18F]fluoreto fornecendo os compostos alvos [18F]12a-d (EOS, atividade específica, 900-1.500 Ci/mmol; pureza radioquímica >99%). Biodistribuição in vivo dos mesmos ligandos de 18F em camundongos normais exibiu excelentes penetrações cerebrais e esgotamentos rápidos após uma injeção iv (6,6-8,1 e 1,2-2,6 %dose/g em 2 minuto e 60 minuto, respectivamente). Auto-radiografia de secções de cérebro de AD após a morte de [18F]12a-d confirmou a ligação específica relacionada com a presença de placas de Αβ. Além disso, rotulagem de placa in vivo pode ser claramente demonstrada com estes agentes rotulados por 18F em camundongos transgênicos (Tg2576), um modelo animal útil para doença de Alzheimer.

A presente invenção é também direcionada aos compostos de Fórmula III:

em que n é um número inteiro entre 1 e 4, R7 e R8 são cada qual como descrito acima, e R41 é selecionado do grupo consistindo em hidróxi e NRaRb, em que Ra e Rb são independentemente hidrogênio, C1-4 alquila ou Ra e Rb são ambos oxigênio para formar um nitro.

Preferivelmente, n é um, e R41 é hidróxi, metilamino ou dimetilamino.

Valores preferíveis sob o escopo de C6-10 arila incluem fenila, naftila ou tetraidronaftila. Valores preferíveis sob o escopo de heteroarila incluem tienila, furila, piranila, pirrolila, piridinila, indolila, e imidazolila. Valores preferíveis sob o escopo de heterociclo incluem piperidinila, pirrolidinila, e morfolinila.

Os compostos de Fórmulas I, IE e III podem também ser solva-dos, especialmente hidratados. A hidratação pode ocorrer durante preparação dos compostos ou composições compreendendo os compostos, ou a hidratação pode ocorrer em tempo prolongado devido à natureza hígroscópi-ca dos compostos. Além disso, os compostos da presente invenção podem existir em formas não solvatadas bem como solvatadas com solventes far-maceuticamete aceitáveis tais como água, etanol, e similares. Em geral, as formas solvatadas são consideradas equivalentes às formas não solvatadas para os propósitos da presente invenção.

Deve-se também entender que a presente invenção é considerada incluir estereoisômeros, tais como ambos isômeros cis e trans dos compostos tipo estilbeno. Também incluídos são: isômeros óticos, por e-xemplo misturas de enantiômeros bem como enantiômeros individuais e diastereômeros, que surgem como uma conseqüência de assimetria estrutural em compostos selecionados de Fórmula I, II ou III.

Quando qualquer variável ocorre mais do que uma vez em qualquer constituinte ou na Fórmula I, II ou III sua definição em cada ocorrência é independente de sua definição em todas as outras ocorrências. Também combinações de substituintes e/ou variáveis são permissíveis somente se tais combinações resultarem em compostos estáveis.

O termo "alquila" como empregado aqui por si mesmo ou como parte de outros grupo refere-se a ambos radicais de cadeia linear e ramificada de até 8 carbonos, preferivelmente 6 carbonos, mais preferivelmente 4 carbonos, tais como metila, etila, propila, isopropila, butila, t-butila, e isobutila.

O termo "alcóxi" é empregado aqui para referir-se a um radical de alquila de cadeia linear ou ramificada, como definido acima, a menos que o comprimento da cadeia seja limitado a ele, ligado a um átomo de oxigênio, incluindo, porém não limitado a, metóxi, etóxi, n-propóxi, isopropóxi, e similares. Preferivelmente a cadeia de alcóxi é de 1 a 6 átomos de carbono de comprimento, mais preferivelmente 1 a 4 átomos de carbono de comprimento.

O termo "monoalquilamina" como empregado aqui por si mesmo ou como parte de outros grupo refere-se a um grupo de amino que é substituído com um grupo de alquila como definido acima.

O termo "dialquilamina" como empregado aqui por si mesmo ou como parte de outros grupo refere-se a um grupo de amino que é substituído com dois grupos de alquila como definido acima.

O termo "halo" ou "halogênio" empregado aqui por si mesmo ou como parte de outros grupo refere-se a cloro, bromo, flúor ou iodo, a menos que definido de outra maneira em usos específicos no texto e/ou reivindicações.

O termo "haloalquila" como empregado aqui refere-se a quaisquer dos grupos de alquila acima substituídos por um ou mais cloro, bromo, flúor ou iodo com flúor e cloro sendo preferidos, tais como clorometila, iodometila, trifluorometila, 2,2,2-trifluoroetila, e 2-cloroetila.

O termo "arila" como empregado aqui por si mesmo ou como parte de outros grupo refere-se a grupos aromáticos monocíclicos ou bicíclicos contendo de 6 a 12 carbonos na porção de anel, preferivelmente 6 a 10 carbonos na porção de anel, tal como fenila, naftila ou tetraidronaftila.

O termo "heterociclo" ou "anel heterocíclico", como empregado aqui exceto onde mencionado, representa um sistema de anel mono-heterocíclico de 5 a 7 membros estável que pode ser saturado ou insaturado, e que consiste em átomos de carbono e em um a três heteroátomos selecionados do grupo consistindo em N, O, e S, e em que o heteroátomo de nitrogênio e enxofre pode opcionalmente ser oxidizado. Especialmente úteis são anéis que contêm um nitrogênio combinado com um oxigênio ou enxofre, ou dois heteroátomos de nitrogênio. Exemplos de tais grupos heterocíclicos incluem piperidinila, pirrolila, pirrolidinila, imidazolila, imidazinila, imidazolidinila, piridila, pirazinila, pirimidinila, oxazolila, oxazolidinila, isoxazolila, isoxazolidinila, tiazolila, tiazolidinila, isotiazolila, homopiperidinila, homopipera-zinila, piridazinila, pirazolila, e pirazolidinila, mais preferivelmente tiamorfolinila, piperazinila, e morfolinila.

O termo "heteroátomo" é empregado aqui para referir-se a um átomo de oxigênio ("O"), um átomo de enxofre ("S") ou um átomo de nitrogênio ("N"). Será reconhecido que quando o heteroátomo é nitrogênio, ele pode formar uma porção de NRaRb, em que Ra e Rb são, independentemente um do outro, hidrogênio ou C1-4 alquila, C2-4 aminoalquila, C1-4 haloalquila, halobenzila, ou R1 e R2 são tomados juntos para formar um anel heterocíclico de 5 a 7 membros opcionalmente tendo O, S ou NRC no referido anel, onde Rc é hidrogênio ou C1-4 alquila.

O termo "heteroarila" como empregado aqui refere-se aos grupos tendo 5 a 14 átomos de anel; 6, 10 ou 14 elétrons π compartilhados em uma disposição cíclica; e contendo átomos de carbono e 1 , 2, 3 ou 4 heteroátomos de oxigênio, nitrogênio ou enxofre (onde exemplos de grupos de heteroarila são: grupos de tienila, benzotienila, nafto[2,3-b]tienila, tiantreni-la, furila, piranila, isobenzofuranila, benzoxazolila, cromenila, xantenila, fenoxatiinila, 2H-pirrolila, pirrolila, imidazolila, pirazolila, piridila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, indolizinila, isoindolila, 3H-índolila, indolila, indazolila, purinila, 4H-quinolizinila, isoquinolila, quinolila, ftalazinila, naftiridinila, quinazolinila, cinolinila, pteridinila, 4aH-carbazolila, carbazolila, 3-carbolinila, fenantri- dinila, acridinila, perimidinila, fenantrolinila, fenazinila, isotiazolila, fenotiazinila, isoxazolila, furazanila e fenoxazinila).

O termo "aralquila" ou "arilalquila" como empregado aqui por si mesmo ou como parte de outros grupo refere-se aos grupos de C1-6alquila como descrito aqui tendo um substituinte de arila, tai como benzila, feniletila ou 2-naftiImetila.

A presente invenção é também direcionada aos métodos de preparação de compostos da Fórmula I, II ou III acima. Os compostos da mesma invenção podem ser preparados por reações descritas nos esquemas 1-8.

O esquema 1 representa uma rotina sintética para formação de tiofeno contendo derivados de Fórmula I, especificamente certos compostos de Fórmula Ia.

Os estilbenos de PEG fluorinados 12a-d foram preparados por reações mostradas no esquema 1. Para preparar compostos com 2 ou 3 grupos de etóxi como a ligação de PEG, cloretos comercialmente disponíveis 2a,b foram acoplados com o grupo de OH de estilbeno de 4-metilamino-4'-hidróxi, 1 (Ono M, e outros, Nucl Med Biol. 2003;30:565-71; Wilson A, e outros, J Labelled Cpd Radiopharm. 2003;46:S61) para obter 3a,b respectivamente. Os grupos de OH livres de 3a,b foram subseqüentemente protegidos com TBDMSCI para fornecer compostos 7a,b. Para preparar compostos com 4 ou 5 grupos de etóxi como a ligação de PEG, brometos 6c,d foram separadamente preparados como mostrado no esquema 2 e em seguida acoplados com estilbeno 1 para fornecer compostos protegidos por TBS 7c,d. Os grupos de proteção de O-TBS nos compostos 7c,d foram removidos por tratamento de TBAF (1M) em THF para fornecer 3c,d. Compostos 8a-d foram obtidos protegendo-se os grupos de metilamino de 7a-d com BOC. Após remover os grupos de proteção de TBS de 8a-d com TBAF (1M)/THF, os grupos de OH livres foram convertidos em mesilatos por reação com MsCl na presença de trietilamina para fornecer 10a-d, Os estilbenos de PEG fluorinados "frios”, 12a-d, foram obtidos com sucesso por refluxo de 10a-d em TBAF/THF anidroso (Cox DP, e outros., J Org Chem. 1984;49:3216-19) seguido por agitação com TFA para remover o grupo de proteção de BOC.

Para preparar os estilbenos de PEG rotulados por 18F desejados, [18F]12a-d, os mesilatos protegidos por N-BOC 10a-d foram empregados como os precursores (Esquema 3). Cada dos mesilatos, 10a-d, foi misturado com [18F]fluoreto/carbonato de potássio e Kryptofix 222 em DMSO e aquecido a 120°C durante 4 minuto. A mistura foi em seguida tratada com HCI a-quoso para remover o grupo de proteção de N-BOC. O produto cru foi purificado por HPLC (pureza radioquímica > 99%, 10-30% de produção radioquí-mica, corregido por declínio). A preparação de cada composto rotulado por 18F, [18F]12a-d, durou cerca de 90 minuto e a atividade específica foi estimada ser 900-1.500 Ci/mmol no final da síntese.
ESQUEMA 1

Legenda: c) TBSCI, imidazol; g) TBAF (anidroso).
ESQUEMA 2

Legenda: a) TBSCl, Et3N, DCM; b) CBr4, PPh3, DCM
ESQUEMA 3

Legenda: Esquema 3 a) 1) [18F]F7K222, K2CO3, DMSO; 2) HCI aquoso

As sínteses dos compostos 15e, 16e e as sínteses dos precursores de radiorrotulagem 15d, 17d para preparação de [18F]15e e [18F]6e são mostradas no Esquema 9. Para preparar o composto 15a, o grupo nitro de estilbeno de 4-nitro-4'-hidróxi, 13a, foi reduzido com SnCI2 em etanol para fornecer a amina correspondente 14a. O grupo de amino foi em seguida tratado com (CHO)n e NaBH3CN para fornecer o composto de dimetilamino 15a. Composto 15b foi obtido por reação do estilbeno de hidroxila, 15a, com brometo 20m (que foi separadamente preparado como mostrado no esquema 10) e carbonato de potássio em DMF anidroso. Composto 15c foi obtido pelo tratamento de 15b com 1N de HCI em acetona. Mono tosilato 15d pode ser isolado de uma mistura de produto de diol em reação 15c com 1,5 equivalentes de cloreto de tosila em piridina. O tosilato 15d foi convertido em fluoreto 15e por refluxo com TBAF anidroso em THF. TBAF deve ser secado a 58 °C sob vácuo elevado (< 0,5 mmHg) durante 24 hr antes do uso. O composto de tosila 15d foi empregado como o material de partida para obter o composto radiorrotulado [18F]15e. O composto nitro 13e foi Similarmente sintetizado por uma reação de acoplamento de 13a com 20m seguida por tosilação e fluorinação. A síntese do composto 16e foi realizada pela redução do grupo nitro de 13e com SnCI2/EtOH seguida pela monometilação do grupo amino com (CHO)n, NaOCH3 e NaBH4. Um intermediário, 13b, foi reduzido para amina, 14c, e em seguida monometilado para fornecer o composto 16c. Para obter [18F]16e, tosilato protegido por Ν 17d foi designado como o precursor para radiorrotulagem, previamente preparado 14a com primeiro monometilado para 16a. O composto 17f foi em seguida preparado por acoplamento de 16a com 20n (Esquema 10) e a introdução de BOC para a 2a amina. Grupo de silila de di-terc-butila de 17f foi removido com 1N de TBAF em THF em temperatura ambiente para fornecer diol 5c, que foi mo- notosilado para produzir o composto 17d.

Um composto relacionado 15h foi também sintetizado como mostrado no esquema 4. O malonato substituído 21 foi reduzido para diol 22 com DIBALH e em seguida reagido com um equivalente de TBSCI para fornecer 23. O OH não protegido foi em seguida convertido em brometo 24 com CBr4/PPh3. O composto 24 foi reagido com 15a para fornecer 15g que foi tratado com TBAF para remover o grupo de TBS para produzir 15h.

Dois derivados de benzila de estilbeno de N,N-dimetila, 14 e 15 foram também sintetizados (Esquema 4). O composto 14 foi obtido pela redução do éster de etila correspondente 133 com LiAIH4. O álcool de benzila foi em seguida convertido no intermediário de brometo de benzila altamente reativo com HBr/HOAc, que foi, sem purificação, convertido imediatamente em éter de metila 15 pela adição de metanol e carbonato de potássio.

Aqueles derivados de estilbeno com um átomo de flúor sendo diretamente ligado à ligação dupla (Fórmula I: R7 ou R8 é flúor) foram sintetizados por métodos bem-conhecidos (por exemplo Tetrahedron Lett. 43, (2002), 2877-2879).

Para obter [18F]15e, o precursor 15d foi misturado com [18F]fluoreto/carbonato de potássio e Kryptofix® 222 em DMSO e aquecido a 120°C durante 4 minuto. O produto cru foi purificado por HPLC para atingir > 99% da pureza radioquímica com 10% de produção radioquímica (declínio corrigido). O procedimento durou 90 minuto e a atividade específica foi estimada ser 70 Ci/mmol no final da síntese. O procedimento similar foi realizado para obter [18F]16e de precursor 17d. Após reação inicial em DMSO, a mistura foi tratada com HCI aquoso para remover o grupo de BOC. Pureza radioquímica foi > 99% após purificação por HPLC e a produção radioquímica foi 1 5%. A síntese total durou 110 minuto e a atividade específica foi estimada ser 90 Ci/mmol no final da síntese.
ESQUEMA4

Legenda: Refluxo; rt = temperatura ambiente.
ESQUEMA 5

ESQUEMA 6

ESQUEMA 7

(a) [18F]HF/K2CO3/K222 DMSO, (b) HCI aquoso
ESQUEMA 8

Alguns dos compostos são também tratáveis por síntese de mi-5 croondas como descrito abaixo nos Exemplos 50-52.

Os compostos radioalogenados da mesma invenção proporcionam a si próprios facilmente formarem materiais que podem ser fornecidos para usuários em kits.

Kits para formação dos agentes de formação de imagem podem conter, por exemplo, um frasconete contendo uma solução fisiologicamente adequada de um intermediário de Fórmula l, em uma concentração e em um pH adequado para condições de complexação ideais. O usuário adicionaria ao frasconete uma quantidade apropriada do radioisótopo, e um oxidante, tal como peróxido de hidrogênio. O ligando rotulado resultante pode então ser administrado intravenosamente a um paciente, e receptores no cérebro ima-geados por meio de avaliação do raio gama ou foto emissões deles.

Quando desejado, o agente diagnóstico radioativo pode conter qualquer aditivo tal como agentes de controle de pH (por exemplo, ácidos, bases, tampões), estabilizantes (por exemplo, ácido ascórbico) ou agentes isotonizantes (por exemplo, cloreto de sódio).

O termo "sal farmaceuticamete aceitável" como empregado aqui refere-se àqueles sais de carboxilato ou sais de adição de ácido dos compostos da presente invenção que incluem-se no escopo de diagnóstico médico seguro, adequados para uso em contato com os tecidos de pacientes sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica, e similares, comensurados com uma relação risco/benefício aceitável, e eficazes para seu uso pretendido, bem como as formas híbridas, onde possível, dos compostos da invenção. O termo "sais" refere-se aos sais de adição de ácido orgânico e inorgânico, relativamente não tóxicos de compostos da presente invenção. São também incluídos aqueles sais derivados de ácidos orgânicos não tóxicos tais como ácidos mono e dicarboxílicos alifáticos, por exemplo ácido a-cético, ácidos alcanóicos substituídos por fenila, ácidos alcanodióicos e alcanóicos de hidróxi, ácidos aromáticos, e ácidos sulfônicos aromáticos e alifáticos. Estes sais podem ser preparados in situ durante o isolamento final e purificação dos compostos ou reagindo-se separadamente o composto purificado em sua forma de base livre com um ácido orgânico ou inorgânico a-dequado e isolamento do sal desse modo formado. Outros sais representativos incluem os sais de hidrobrometo, hidrocloreto, sulfato, bissulfato, nitrato, acetato, oxalato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, sucinato, tartrato, mesilato de naftilato, glucoheptonato, lactiobionato e laurilsulfonato, propio- nato, pivalato, ciclamato, isetionato, e similares. Estes podem incluir cátions baseados nos metais de álcali e alcalino-terrosos, tais como sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio, e similares, bem como, cátions de amônio não tóxico, amônio quaternário e amina incluindo, porém não limitados a amônio, tetrametilamônio, tetraetilamônio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina, e similares. (Vide, por exemplo, Berge S. M., e outros, Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sci. 66:1-19 (1977) que é incorporado aqui por referência.)

A presente invenção é também direcionada a um método de formação de imagem de depósitos de amiloide. Um dos pré-requisitos chaves para um agente de formação de imagem in vivo do cérebro é a capacidade de atravessar a barreira hemato-encefálica intacta após uma injeção iv em bolus.

Nesta primeira etapa do presente método de formação de imagem, um composto rotulado de Fórmula I, II ou III é introduzido em um tecido ou um paciente em uma quantidade detectável. O composto é tipicamente parte de uma composição farmacêutica e é administrado ao tecido ou ao paciente por métodos bem-conhecidos por aqueles versados na técnica.

Por exemplo, o composto pode ser administrado oralmente, retalmente, parenteralmente (intravenosamente, intramuscularmente ou subcutaneamente), intracisternalmente, intravaginalmente, intraperitoneamente, intravesicalmente, localmente (pós, ungüentos ou gotas), ou como um spray bucal ou nasal.

Em uma modalidade preferida da invenção, o composto rotulado é introduzido em um paciente em uma quantidade detectável e após tempo suficiente ter passado para o composto tornar-se associado com depósitos de amiloide, o composto rotulado é detectado não invasivamente dentro do paciente. Em outra modalidade da invenção, um composto rotulado por 18F de Fórmula I, II ou III é introduzido em um paciente, tempo suficiente é permitido para o composto tornar-se associado com depósitos de amiloide, e em seguida uma amostra de tecido do paciente é removida e o composto rotulado no tecido é detectado à parte do paciente. Em uma terceira modali- dade da invenção, uma amostra de tecido é removida de um paciente e um composto rotulado de Fórmula I, II ou III é introduzido na amostra de tecido. Após uma quantidade suficiente de tempo para o composto tornar-se ligado aos depósitos de amiloide, o composto foi detectado.

A administração do composto rotulado a um paciente pode ser por uma rotina de administração geral ou local. Por exemplo, o composto rotulado pode ser administrado ao paciente de modo que ele seja distribuído por todo o corpo. Alternativamente, o composto rotulado pode ser administrado a um órgão ou tecido específico de interesse. Por exemplo, é desejável localizar e quantificar depósitos de amiloide no cérebro a fim de diagnosticar ou rastrear o progresso da doença de Alzheimer em um paciente.

O termo ’’tecido” significa uma parte de um corpo do paciente. Exemplos de tecidos incluem o cérebro, coração, fígado, vasos sangüíneos, e artérias. Uma quantidade detectável é uma quantidade de composto rotulado necessária para ser detectada pelo método de detecção escolhido. A quantidade de um composto rotulado para ser introduzida em um paciente a fim de prover a detecção pode facilmente ser determinada por aqueles versados na técnica. Por exemplo, quantidades crescentes do composto rotulado podem ser dadas a um paciente até o composto ser detectado pelo método de detecção de escolha. Um rótulo é introduzido nos compostos para prover a detecção dos compostos.

O termo "paciente" significa seres humanos e outros animais. Aqueles versados na técnica são também familiarizados com a determinação da quantidade de tempo suficiente para um composto tornar-se associado com depósitos de amiloide. A quantidade de tempo necessária pode facilmente ser determinada introduzindo-se uma quantidade detectável de um composto rotulado de Fórmula I, II ou III em um paciente e em seguida detectando-se o composto rotulado em vários momentos após a administração.

O termo "associado" significa uma interação química entre o composto rotulado e o depósito de amiloide. Exemplos de associações incluem ligações covalentes, ligações iônicas, interações hidrofílicas-hidrofílicas, interações hidrofóbicas-hidrofóbicas, e complexos.

Aqueles versados na técnica são familiarizados com detecção de tomografia de emissão de positron (PET) de um átomo de emissão de positron, tal como 18F. A presente invenção é também direcionada aos compostos específicos onde o átomo 18F é substituído com um átomo de flúor não radiorrotulado.

O agente diagnóstico radioativo deve ter radioatividade suficiente e concentração de radioatividade que possa assegurar diagnóstico seguro. O nível desejado de radioatividade pode ser alcançado pelos métodos fornecidos aqui para preparação de compostos de Fórmula I, II ou III.

A formação de imagem de depósitos de amiloide pode também ser realizada quantitativamente para que a quantidade de depósitos de amiloide possa ser determinada.

Outro aspecto da invenção é um método de inibição de agregação de placa de amiloide. A presente invenção também fornece um método de inibição da agregação de proteínas amiloides para formar depósitos não milóides, por administração a um paciente de uma quantidade de inibição de amiloide de um composto da Fórmula I, II ou III acima.

Aqueles versados na técnica são facilmente capazes de determinar uma quantidade de inibição de amiloide por administração simples de um composto de Fórmula l, II ou III a um paciente em quantidades crescentes até o desenvolvimento de depósitos de amiloide ser diminuído ou interrompido. A taxa de desenvolvimento pode ser estimada empregando-se formação de imagem como descrita acima ou tirando-se uma amostra de tecido de um paciente e observando-se os depósitos de amiloide nele. Os compostos da presente invenção podem ser administrados a um paciente em níveis de dosagem na faixa de cerca de 0,1 a cerca de 1,000 mg por dia. Para um adulto humano normal tendo um peso corporal de cerca de 70 kg, uma dosagem na faixa de cerca de 0,01 a cerca de 100 mg por quilograma de peso corporal por dia é suficiente. A dosagem específica usada, entretanto, pode variar. Por exemplo, a dosagem pode depender de vários fatores incluindo os requisitos do paciente, a severidade da condição a ser tratada, e a atividade farmacológica do composto a ser empregado. A determinação de do- sagens ideais para um paciente particular é bem-conhecida por aqueles versados na técnica.

O agente diagnóstico radioativo deve ter radioatividade suficiente e concentração de radioatividade que possa assegurar diagnóstico seguro. O nível desejado de radioatividade pode ser alcançado pelos métodos fornecidos aqui para preparação de compostos de Fórmula l, II ou III.

A formação de imagem de depósitos de amiloide pode também ser realizada quantitativamente para que a quantidade de depósitos de amiloide possa ser determinada.

Os seguintes exemplos são ilustrativos, porém não limitantes, do método e composições da presente invenção. Outras adaptações e modificações adequadas da variedade de condições e parâmetros normalmente encontrados e óbvios para aqueles versados na técnica incluem-se no espírito e escopo da invenção.

Todos os reagentes empregados na síntese foram produtos comerciais e foram empregados sem outra purificação a menos que de outra maneira indicado. Espectros de 1H RMN foram obtidos em um espectrômetro Bruker DPX (200 MHz) em CDCI3. Modificações químicas são relatadas como valores δ (partes por milhão) com relação ao TMS interno. Constantes de acoplamento são relatadas em hertz. A multiplicidade é definida por s (singleto), d (dupleto), t (tripleto), br (amplo), m (multipleto). Análises elementares foram realizadas por Atlantic Microlab INC. Para cada procedimento, "preparação padrão" refere-se às seguintes etapas: adição de solvente orgânico indicado, lavagem da camada orgânica com água em seguida salmoura, separação da camada orgânica da camada aquosa, secagem das camadas orgânicas combinadas com sulfato de sódio'anidroso, filtragem do sulfato de sódio e remoção do solvente orgânico sob pressão reduzida.

Exemplo 1 2-(2-{4-[2-(4-Metilamino-fenil)-vinil]-fenóxi}-etóxi)-etanol (3a).

Sob a atmosfera de nitrogênio, estilbeno de 4-metilamino-4'-hidróxi, 1 (Ono M, e outros, Nucl Med Biol. 2003; Wilson A, e outros, J Labelled Cpd Radiopharm. 2003) (63 mg, 0,28 mmol) e 2a (42 mg, 0,34 mmol) foram dissolvidos em DMF anidroso (5,0 ml) seguido por uma adição de carbonato de potássio (125 mg, 0,91 mmol). A suspensão foi aquecida para 100°C e agitada durante a noite. Após resfriada para a temperatura ambiente, a preparação padrão com diclorometano foi aplicada e o resíduo foi purificado por TLC preparativa de silica-gel (metanol a 4% em diclorometano) para fornecer o composto 3a (67 mg, 76 %): 1H RMN δ 7,37 (m, 4H), 6,89 (m, 4H), 6,63 (d, 2H, J = 8,48 Hz), 4,16 (t, 2H), 3,88 (t, 2H), 3,78 (t, 2H), 3,68 (t, 2H), 2,87 (s, 3H), 2,20 (br, 1H), 1,55 (br, 1H).

Exemplo 2 2-[-2-(2-{4-[2-(4“Metilamino-fenil)-vinil]-fenóxi}-etóxi)-etóxi]-etanol (3b).

O composto 3b foi preparado de 1 (150 mg, 0,67 mmol), 2b (136 mg, 0,81 mmol), e carbonato de potássio (277 mg, 2,01 mmoles) em DMF (10 ml) com o mesmo procedimento descrito para o composto 3a. 3b (180 mg, 76 %): 1H RMN δ 7,37 (m, 4H), 6,89 (m, 4H), 6,65 (d, 2H, J = 8,50 Hz), 4.15 (t, 2H), 3,87 (t, 2H), 3,72 (t, 6H), 3,62 (t, 2H), 2,87 (s, 3H), 2,20 (br, 1H), 1,60 (b,1H).

Exemplo 3 2-{2-[2-(2-{4-[2-(4-Metilamino-fenil)-vinil]-fenóxi}-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etanol

TBAF (1 M em THF, 0,06 ml) foi adicionado por meio de uma seringa a uma solução do composto 7c (12 mg, 0,023 mmol) em THF (1 ml). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Após preparação padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado por TLC preparativa de silica-gel (metanol a 4,5 % em diclorometano) para fornecer 3c (8,7 mg, 94 %): 1H RMN δ 7,36 (m, 4H), 6,88 (m, 4H), 6,58 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,15 (t, 2H), 3,86 (t, 2H), 3,70 (m, 12H), 2,86 (s, 3H).

Exemplo 4 2-(2-{2-[2-(2-{4-[2-(4-MetiIamino-fenil)-vinil]-fenóxi}-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etanol (3d).

O composto 3d foi preparado de 7d (15 mg, 0,027 mmol) e TBAF (1 M em THF, 0,06 ml) em THF (1 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3c. 3d (7,8 mg, 65 %): 1H RMN δ 7,36 (m, 4H), 6,87 (m, 4H), 6,60 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,14 (t, 2H), 3,85 (t, 2H), 3,66 (m, 16H), 2,86 (s, 3H).

Exemplo 5 2-(2-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silanilóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etanol (5c).

Tetraetileno glicol, 4c (1,12 g, 5,77 mmoles) e TBDMSCl (0,87 g, 5,77 mmoles) foram dissolvidos em diclorometano (25 ml) seguido por trietilamina (1,46 g, 14,4 mmol). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Após preparação padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de silica-gel (acetato de etila a 50 % em hexano) para fornecer 5c (744 mg, 42 %): 1H RMN δ 3,66 (m, 16 H), 2,51 (t, 1H, J = 5,86 Hz), 0,89 (s, 9H), 0,07 (s, 6H).

Exemplo 6 2-[2-(2-{2-[2-(terc-Butil-dimetíl-silanilóxi]-etóxr]-etóxi}-etóxi)-etóxi]-etanol (5d).

O composto 5d foi preparado de pentaetileno glicol, 4d (1,13 g, 4,72 mmoles), TBDMSCl (0,78 g, 5,19 mmoles), e trietilamina (1,2 g, 11,8 mmoles) em diclorometano (25 ml) com o mesmo procedimento descrito pa-ra o composto 5c. 5d (668 mg, 40 %): 1H RMN δ 3,67 (m, 20 H), 2,64 (t, 1H, J = 5,63 Hz), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).

Exemplo 7 (2-{2-[2-(2-Bromo-etóxi)-etóxil-etóxi}-etóxi)-terc-butil-dimetil-silano (6c).

O composto 5c (680 mg, 2,20 mmoles) e tetrabrometo de carbono (947 mg, 2,86 mg) foram dissolvidos em diclorometano (20 ml). A solução foi resfriada para 0°C com um banho de gelo e piridina (2,0 ml) foi adicionada seguida por trifenilfosfina (749 mg, 0,286 mmol). A solução foi agitada a 0°C durante uma hora e meia e em temperatura ambiente durante 2 horas. Após preparação padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de silica-gel (acetato de etila a 20 % em hexano) para fornecero composto 6c (680 mg, 79,6 %): 1H RMN δ 3,79 (m, 4H), 3,66 (m, 8H), 3,56 (t, 2H), 3,47 (t, 2H), 0,89 (s, 9H), 0,07 (s, 6H).

Exemplo 8 [2-(2-{2-[2-(2-Bromoetóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etóxi]-terc-butil-dimetilsilano (6d).

O composto 6d foi preparado de 5d (624 mg, 1,77 mmol), tetrabrometo de carbono (761 mg, 2,30 mmoles), trifenilfosfina (602 mg, 2,30 mmoles), piridina (2,0 ml) em diclorometano (20 ml) com o mesmo procedimento descrito para o composto 6c. 6d (400 mg, 52,3 %): 1H RMN δ 3,79 (m, 4H), 3,66 (m, 12H), 3,55 (t, 2H), 3,47 (t, 2H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).

Exemplo 9 {4-[2-(4-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silanilóxi)-etóxi]-etóxi}-fenil)-vinil]-fenil}-metil-amina (7a).

O composto 3a (45 mg, 0,14 mmol) e TBDMSCI (33 mg, 0,22 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (10 ml) seguido por imidazol (20 mg, 0,29 mmol). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Após preparação padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel (metanol a 1,5 % em diclorometa-no) para fornecer 7a (56 mg, 91 %): 1H RMN δ 7,40 (m, 4H), 6,90 (m, 4H), 6,75 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 4,15 (t, 2H), 3,88 (t, 2H), 3,82 (t, 2H), 3,66 (t, 2H), 2,85 (s, 3H), 0,92 (s, 9H), 0,09 (s, 6H).

Exemplo 10 (4-{2-[4-(2-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silanilóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-fenil]-vinil}-fenil)-metil-amina (7b).

O composto 7b foi preparado de 3b (136 mg, 0,38 mmol), TBDMSCI (86 mg, 0,57 mmol), imidazol (52 mg, 0,76 mmol) em diclorometano (10 ml) com o mesmo procedimento descrito para o composto 7a. 7b (170 mg, 95 %): 1H RMN δ 7,37 (m, 4H), 6,88 (m, 4H), 6,66 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,14 (t, 2H), 3,86 (t, 2H), 3,75 (m, 6H), 3,57 (t, 2H), 2,88 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 0,07 (s, 6H).

Exemplo 11 [4-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silanilóxi)-etóxi]-etóxi]-etóxi)-etóxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-amina (7c).

O composto 7c foi preparado de 1 (98 mg, 0,44 mmol), 6c (210 mg, 0,57 mmol), K2CO3 (300 mg, 2,18 mmol) em DMF (10 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3a. 7c (213 mg, 95 %): 1H RMN δ 7,36 (m, 4H), 6,87 (m, 4H), 6,59 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,14 (t, 2H), 3,86 (t, 2H), 3,75 (m, 10H), 3,55 (t, 2H), 2,86 (s, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).

Exemplo 12 (4-[2-(4-{2-[2-(2-(2-[2-(terc-Butil-dímetil-silanilóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)etóxi]“ etóxi}-feniI)-vinil]-fenil}metil-amina (7d).

O composto 7d foi preparado de 1 (97 mg, 0,43 mmol), 6d (197 mg, 0,47mmol), K2CO3 (297 mg, 2,15 mmoles) em DMF (10 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3a. 7d (220 mg, 91 %): 1H RMN δ 7,36 (m, 4H), 6,87 (m, 4H), 6,59 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,14 (t, 2H), 3,85 (t, 2H), 3,75 (m, 14H), 3,55 (t, 2H), 2,86 (s, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).

Exemplo 13 Éster de terc-butila de ácido {4-[2-(4-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silanilóxi)-etóxi]-etóxi}-fenil)-vinil]-fenil}-metil-carbâmico (8a).

Sob a atmosfera de nitrogênio, 7a (54 mg, 0,13 mmol) foi dissolvido em THF anidroso (5,0 ml) seguido por Boc-anidrido (84 mg, 0,25 mmol). A solução foi refluxada durante a noite. Após preparação padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado por TLC preparativa de silica-gel (metanol a 2 % em diclorometano) para fornecer 8a (60 mg, 90 %): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,14 (t, 2H), 3,87 (t, 2H), 3,80 (t, 2H), 3,64 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 0,90 (s, 9H), 0,08 (s, 6H).

Exemplo 14 Éster de terc-butila de ácido (4-{2-[4-(2-{2-[2-(terc-Butil-dímetil-silanilóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-fenil]-vinil}-fenil)-metil-carbâmico (8b).

O composto 8b foi preparado de 7b (124 mg, 0,26 mmol) e Boc-anidrido (218 mg, 0,66 mmol) em THF (10 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 8a. 8b (130 mg, 86 %): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,15 (t, 2H), 3,87 (t, 2H), 3,75 (t, 6H), 3,57 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 0,90 (s, 9H), 0,07 (s, 6H).

Exemplo 15 Éster de terc-butila de ácido [4-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silanilóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etóxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-carbâmico (8c).

O composto 8c foi preparado de 7c (84 mg, 0,16 mmol) e Boc-anidrido (163 mg, 0,49 mmol) em THF (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 8a. 8c (86 mg, 86 %): 1H RMN δ 7,42 (d, 4H, J = 7,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,15 (t, 2H), 3,87 (t, 2H), 3,73 (t, 10H), 3,57 (t, 2H), 3,26 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 0,89 (s, 9H), 0,07 (s, 6H).

Exemplo 16 Éster de terc-butila de ácido {4-[2-(4-{2-[2-(2-{2-[2-(terc-Butil-dimetil-silaniióxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etóxi]-etóxi}-fenil)-vinil]-fenil}-metil-carbâmico (8d).

O composto 8d foi preparado de 7d (210 mg, 0,51 mmol) e Boc-anidrido (840 mg, 2,54 mmol) em THF (10 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 8a. 8d (174 mg, 66,7 %): 1H RMN δ 7,42 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,15 (t, 2H), 3,86 (t, 2H), 3,72 (t, 14H), 3,55 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).

Exemplo 17 Éster de terc-butila de ácido [4-(2-{4-[2-(2-Hidróxi-etóxi)-etóxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-carbâmico (9a).

O composto 9a foi preparado de 8a (56 mg, 0,11 mmol) e TBAF (1 M em THF, 0,21 ml) em THF (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3c. 9a (36 mg, 82 %): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,18 (t, 2H), 3,88 (t, 2H), 3,78 (t, 2H), 3,68 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 18 Éster de terc-butila de ácido {4-[2-(4-{2-[2-(2-Hidróxi-etóxi)-etóxi)-etóxi]-fenil)-vinil]-fenil}metil-carbâmico (9b).

O composto 9b foi preparado de 8b (118 mg, 0,21 mmol) e TBAF (1 M em THF, 0,42 ml) em THF (10 mi), com o mesmo procedimento descri- to para o composto 3c. 9b (94 mg, 99,7%): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,17 (t, 2H), 3,87 (t, 2H), 3,74 (t, 6H), 3,62 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 19 Éster de terc-butila de ácido (4-{2-[4-(2-{2-[2-(2-Hidróxi-etóxi)-etóxi]-etóxi} etóxi)-fenil]-vinil)-fenil)-metil-carbâmico (9c).

O composto 9c foi preparado de 8b (66 mg, 0,11 mmol), TBAF (1 M em THF, 0,22 ml) e THF (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3c. 9c (50 mg, 93,0%): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,16 (t, 2H), 3,87 (t, 2H), 3,78 (t, 10H), 3,61 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 20 Éster de terc-butila de ácido [4-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(2-Hidróxi-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etóxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-carbâmico (9d).

O composto 9d foi preparado de 8d (76 mg, 0,12mmol) e TBAF (1 M em THF, 0,24 ml) em THF (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 3c. 9d (52 mg, 82,7%): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,16 (t, 2H), 3.87 (t, 2H), 3,75 (t, 14H), 3,60 (t, 2H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 21 Éster de 2-[2-(4-{2-r4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil]-vinil}-fenóxi)-etóxil-etila de ácido metanossulfônico (10a).

O composto 9a (36 mg, 0,087 mmol) foi dissolvido em diclorometano (5 ml) seguido por trietilamina (44 mg, 0,44 mmol). Cloreto de metanossulfonila (30 mg, 0,26 mmol) foi em seguida adicionado por meio de uma seringa. A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas. Após preparação padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado por TLC preparativa de sílica-gel (metanol a 2,0 % em diclorometano) para for-necer 10a (39 mg, 91 %): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,98 (q, 2H), 6,89 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,41 (m, 2H), 4,16 (m, 2H), 3.87 (m, 4H), 3,27 (s, 3H), 3,05 (s, 3H), 1,46 (s, 9H). Análise: (C25H33NO7S) C. H. N.

Exemplo 22 Éster de 2-{2-[2-(4-{2-[4-(terc-butoxicarbonoil-metil-amino)-fenil]-vinil}-fenóxi)-etóxi]-etóxi}-etila de ácido metanossulfônico (10b).

O composto 10b foi preparado de 9b (81 mg, 0,18 mmol), cloreto de metanossulfonila (62 mg, 0,54 mmol) e trietilamina (88 mg, 0,88 mmol) em diclorometano (8 ml), com o mesmo procedimento descrito para o com-posto 10a. 10b (82 mg, 86,5%): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,38 (m, 2H), 4,15 (m, 2H), 3,85 (m, 2H), 3,76 (m, 6H), 3,27 (s, 3H), 3,05 (s, 3H), 1,46 (s, 9H). Análise: (C27H37NO8S) C. H. N.

Exemplo 23 Éster de 2-(2-{2-[2-(4-{2-[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil]-vinil}-fenóxi)-etóxi]-etóxi)-etóxi)-etila de ácido metanossulfônico (10c).

O composto 10c foi preparado de 9c (50 mg, 0,10 mmol), cloreto de metanossulfonila (46 mg, 0,40 mmol) e trietilamina (50 mg, 0,50 mmol) em diclorometano (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 10a. 10c (56 mg, 96,9%): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,37 (m, 2H), 4,16 (m, 2H), 3,86 (m, 2H), 3,76 (m, 10H), 3,27 (s, 3H), 3,06 (s, 3H), 1,46 (s, 9H). A-nálise: (C29H41NO9S) C. H. N.

Exemplo 24 Éster de 2-[2-(2-{2-[2-(4-{2-[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil]-vinil}-fenóxi)-etóxi]-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etila de ácido metanossulfônico (10d).

O composto 10d foi preparado de 9d (58 mg, 0,11 mmol), cloreto de metanossulfonila (49 mg, 0,43 mmol) e trietilamina (54 mg, 0,54 mmol) em diclorometano (5 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 10a. 10d (63 mg, 95%): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,37 (m, 2H), 4,18 (m, 2H), 3,86 (m, 2H), 3,75 (m, 14H), 3,27 (s, 3H), 3,07 (s, 3H), 1,46 (s, 9H). A-nálise: (C31H45NO10S) C. H. N.

Exemplo 25 Éster de terc-butila de ácido [4-(2-(4-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi]-fenil}-vinil-fenil]-metil-carbâmico (11a).

TBAF anidroso (Cox DP, e outros, J Org Chem. 1984;49:3216-19) (38,5 mg, 0,15 mmol) foi adicionado a uma solução de composto 10a (14,5 mg, 0,03 mmol) em THF anidroso (3 ml). A mistura foi refluxada durante 4 horas. Após resfriada para a temperatura ambiente, preparação padrão com diclorometano foi aplicada e o resíduo foi purificado por TLC preparativa de sílica-gel (metanol a 2% em diclorometano) para fornecer o composto 11a (7 mg, 57 %): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,91 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,60 (d, t, 2H, J1 = 47 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,17 (t, 2H), 3,90 (t, 3H), 3,75 (t, 1H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 26 Éster de terc-butila de ácido {4-[2-(4-{2-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi]-etóxi}-fenil)-vinil]-fenil}-metil-carbâmico (11b).

O composto 11b foi preparado de 10b (21 mg, 0,04 mmol) e TBAF (52 mg, 0,2 mmol) em THF (10 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 11a. 11b (17 mg, 94%): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,91 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,58 (d, t, 2H, J1 = 48 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,16 (t, 2H), 3,85 (t, 3H), 3,74 (t, 5H), 3,26 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 27 Éster de terc-butila de ácido (4-{2-[4-(2-{2-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-fenil]-vinila }-fenil)-metil-carbâmico (11c).

O composto 11c foi preparado de 10c (18 mg, 0,03 mmol) e TBAF (42 mg, 0,16 mmol) em THF (5 ml), com o mesmo procedimento des-crito para o composto 11a. 11c (12 mg, 77%): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,6 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,91 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,67 (t, 1H), 4,55 (d, t, 2H, J1 = 48 Hz, J2 = 4,0 Hz), 3,85 (t, 3H), 3,74 (t, 9H), 3,27 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 28 Éster de terc-butila de ácido [4-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxí]-etóxi} etóxi)-etóxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-carbâmico (11 d).

O composto 11d foi preparado de 10d (15 mg, 0,024 mmol) e TBAF (32 mg, 0,12 mmol) em THF (5,0 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 11a. 11d (11 mg, 84%): 1H RMN δ 7,43 (d, 4H, J = 8,4 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (q, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,55 (d, t, 2H, J1 = 48 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,15 (t, 2H), 3,86 (t, 3H), 3,72 (t, 13H), 3,26 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Exemplo 29 [4-(2-{4-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-amina (12a).

Ácido trifluoroacético (0,5 ml) foi adicionado lentamente a uma solução de composto 11a (7,0 mg, 0,017 mmol) em diclorometano (1 ml). A mistura foi em seguida agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Após preparação padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado por TLC preparativa de sílica-gel (metanol a 1,0 % em diclorometano) para fornecer 12a (3 mg, 56%): 1H RMN δ 7,37 (m, 4H), 6,90 (m, 4H), 6,65 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 4,60 (d, t, 2H, J1 = 46 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,17 (t, 2H), 3,90 (t, 3H), 3,76 (t, 1H), 2,88 (s, 3H). Análise: (C19H22FNO2) C. H. N.

Exemplo 30 {4-[2-(4-[2-(2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi]-etóxi}-fenil)-vinil]-fenil}-metil-amina (12b).

O composto 12b foi preparado de 11b (17 mg, 0,037 mmol) em ácido trifluoroacético (1 ml) e diclorometano (2 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 12a. 12b (9 mg, 68%): 1H RMN δ 7,37 (m, 4H), 6,88 (m, 4H), 6,64 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 4,56 (d, t, 2H, J1 = 46 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,15 (t, 2H), 3,87 (m, 3H), 3,70 (m, 5H), 2,87 (s, 3H). Análise: (C21H26FNO3) C. H. N.

Exemplo 31 (4-{2-[4-(2-{2-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-fenil]-vinil}-fenil)-metil-amina (12c).

O composto 12c foi preparado de 11c (12 mg, 0,024 mmol) em ácido trifluoroacético (0,5 ml) e diclorometano (1 ml), com o mesmo proce- dimento descrito para o composto 12a. 12c (7 mg, 73%): 1H RMN δ 7,37 (m, 4H), 6,89 (m, 4H), 6,62 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 4,55 (d, t, 2H, J1 = 46 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,15 (t, 2H), 3,86 (m, 3H), 3,71 (m, 9H), 2,87 (s, 3H). Análise: (C23H30FNO4) C. Η. N.

Exemplo 32 [4-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi]-etóxi}etóxi}-etóxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-amina (12d),

O composto 12d foi preparado de 11d (10 mg, 0,018 mmol) em ácido trifluoroacético (0,3 ml) e diclorometano (1 ml), com o mesmo procedimento descrito para o composto 12a. 12d (6 mg, 73%): 1H RMN Õ 7,37 (m, 4H), 6,88 (m, 4H), 6,64 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 4,55 (d, t, 2H, J1 = 46 Hz, J2 = 4.0 Hz), 4,14 (t, 2H), 3,87 (m, 3H), 3,70 (m, 13H), 2,87 (s, 3H). Análise: (C25H34FN05) C. H. N.

Exemplo 33 [18F][4-(2-{4-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil- amina (18F]12a).

[18F]Fluoreto, produzido por um ciclotron empregando-se reação de 18O(p,n)18F, foi passado através de um cartucho Sep-Pak Light QMA co-mo uma solução aquosa em água enriquecida por [18O]. O cartucho foi secado por fluxo de ar, e a atividade de 18F foi eluida com 2 mL de solução de Kryptofix 222 (K222)/K2C03 (22 mg de K222 e 4,6 mg de K2CO3 em CH3CN/H2O 1,77/0,23). O solvente foi removido a 120°C sob uma corrente de argônio. O resíduo foi azeotrópica mente secado com 1 mL de CH3CN anidroso duas vezes a 120°C sob uma corrente de argônio. Uma solução de precursor de mesilato 10a (4 mg) em DMSO (0,2 mL) foi adicionado ao vaso de reação contendo as atividades de 18F secas. A solução foi aquecida a 120°C durante 4 minutos. Água (2 mL) foi adicionada e a solução foi resfriada durante 1 minuto. HCI (solução aquosa a 10 %, 0,5 mL) foi em seguida adicionado e a mistura foi aquecida novamente a 120°C durante 5 minutos. Solução aquosa de NaOH foi adicionada para ajustar 0 pH para básico (pH 8-9). A mistura foi extraída com acetato de etila (1 mL x 2) e a camada orgânica combinada foi secada (Na2SO4), e o solvente removido sob corrente de argônio com aquecimento suave (55-60°C). O resíduo foi dissolvido em CH3CN e injetado à HPLC para purificação. [Coluna semipreparativa Hamilton PRP-1 (7,0 x 305 mm, 10 μm), tampão de CH3CN/dimetilglutarato (5 mM, pH 7) 9/1; Taxa de fluxo de 2 mL/minuto]. O tempo de retenção de 12a foi de 8,9 minutos neste sistema de HPLC e bem separado do precursor 10a (rt = 12 minutos) bem como o subproduto de hidrólise (rt = 6,2 minutos). A preparação durou 90 minutos e a produção radioquímica foi de 20 % (declínio corrigido). Para determinar a pureza radioquímica e atividade especifica (Spec. Act.), HPLC analítica foi empregada [coluna analítica Hamilton PRP-1 (4,1 x 250 mm, 10 pm), tampão de CH3CN/dimetilglutarato (5 mM, pH 7) 9/1; Taxa de fluxo de 0,5 mL/minuto]. O tempo de retenção de 12a neste sistema foi de 10,8 minutos e RCP foi acima de 99%. A atividade especifica foi estimada por comparação da intensidade de pico de UV de [18F]10 purificado com referência ao composto não radioativo de concentração conhecida. A atividade especifica (Spec. Act.) foi de 1.000-1.500 Ci/mmol após a preparação.

Exemplo 34 [18F] {4-[2-(4-(2-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi]-etóxi}-fenil)-viniI]-fenil}-metil-amina ([18F]12b).

Empregando-se uma reação similar, [18F]12b foi obtido de 10b. A produção radioquímica foi de 30 % (declínio corrigido) e a pureza radioquímica foi >99%. O tempo de retenção de HPLC de 12b foi de 11,7 minutos para o sistema analítico descrito acima (Spec. Act. = 1.300-1.500 Ci/mmol).

Exemplo 35 [18F][([4-{2-[4-(2-{2-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi1-etóxi}-etóxi)-fenil]-vinil}-fenil)-metil-amina ([18F]12c).

Empregando-se uma reação similar, [18F]12c foi obtido de 10c. A produção radioquímica foi de 10 % (declínio corrigido) e a pureza radioquímica foi >99%. O tempo de retenção de HPLC de 12c foi de 11,7 minutos para o sistema analítico descrito acima (Spec. Act. = 900 Ci/mmol).

Exemplo 36 [18F][4-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etóxi]-fenila}-vinil)-fenil]-metil-amina ([18F] 12d).

Empregando-se uma reação similar, [18F]12d foi obtido de 10b. A produção radioquímica foi de 20 % (declínio corrigido) e a pureza radioquí-mica foi >99%. O tempo de retenção de HPLC de 12d foi de 10,7 minutos para o sistema analítico descrito acima (Spec. Act. = 1.000-1.500 Ci/mmol).

Exemplo 37 Estilbeno de 4-Amino-4’-hidroxila (14a)

Cloreto estanoso (11,8 g, 0,062 mol) foi adicionado a uma solução do composto 13a (Frinton Lab) (3,0 g, 0,012 mol) em etanol (100 mL) seguido pela adição de ácido clorídrico concentrado (5,0 mL). A solução foi trazida até o refluxo durante 3 horas e resfriada para a temperatura ambiente agitando durante a noite. Hidróxido de sódio aquoso (1N) foi adicionado para ajustar o pH para 8,5-9. Após preparação padrão com diclorometano, o produto cru 14a foi obtido (2,6 g, ~100 %). O produto foi empregado na etapa seguinte sem outras purificações. 1H RMN (DMSO-d6) δ 9,39 (s, 1H), 7,30 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,80 (m, 2H), 6,72 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,53 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,19 (s, 2H).

Exemplo 38 Estilbeno de 4-N,N'-dimetilamino-4,-hidroxila (15a)

A uma mistura de 14a (211 mg, 1,0 mmoles), paraformaldeído (300 mg, 10 mmoles) e cianoboroidreto de sódio (189 mg, 3,0 mmoles), ácido acético (10 mL) foi adicionado. A mistura total foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e em seguida despejada em 100 mL de água. Carbonato de sódio foi adicionado para ajustar o pH para 8-9. Após preparação padrão com 5 % de metanol em diclorometano, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel (2,5 % de metanol em diclorometano) para fornecer 15a como um sólido branco (214 mg, 89,5 %): 1H RMN δ 7,37 (m, 4H), 6,87 (s, 2H), 6,75 (m, 4H), 4,68 (s, 1H), 2,98 (s, 6H).

Exemplo 39 Estilbeno de 4-N,N'-dimetilamino-4,-(2.2-dimetil-[1,3]dioxano-5-ilmetóxi) (15b)

Sob a atmosfera de nitrogênio, 15a (100 mg, 0,38 mmol) foi dissolvido em DMF anidroso (5,0 mL). Carbonato de potássio (140 mg, 1,0 mmol) foi adicionado a esta solução seguido por 5-bromometil -2,2-dimetil- [1,3]dioxano 20 m1 (105 mg, 0,5 mmol). A mistura foi aquecida para 100°C e agitada durante a noite. Após resfriada para a temperatura ambiente, preparação padrão com diclorometano foi aplicada e o resíduo foi purificado por TLC preparativa de silica-gel (1% de metanol em diclorometano) para fornecer o composto 15b (100 mg, 72 %): 1H RMN δ 7,38 (m, 4H), 6,88 (m, 4H), 6,70 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,08 (m, 4H), 3,87 (m, 2H), 2,96 (s, 6H), 2,13 (m, 1H), 1,46 (s, 3H), 1,42 (s, 3H). Análise: (C23H29NO3) C, Η, N.

Exemplo 40 Estilbeno 4-N,N'-dimetilamino-4,-(1,3-diidróxi-propano-2-ilmetóxi) (15c)

O composto 15b (180 mg, 0,49 mmol) foi suspenso em acetona (5,0 mL) e resfriado para 0°C com um banho de gelo. 1N de HCI (5,0 mL, 5,0 mmoles) foi lentamente adicionado durante 20 minutos. A suspensão tornou-se solução clara durante a adição. A solução foi agitada a 0°C por mais uma hora e meia e em seguida aquecida para a temperatura ambiente em uma hora e meia. Bicarbonato de sódio saturado foi adicionado para ajustar o pH para 8,5-9. Após preparação padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado por TLC preparativa de sílica-gel (5 % de metanol em diclorometano) para fornecer o composto 15c como um sólido branco (140 mg, 87 %): 1H RMN δ 7,40 (m, 4H), 6,88 (m, 4H), 6,74 (m, 2H), 4,10 (d, 2H, J = 5,47 Hz), 3,89 (d, 4H, J = 5,28 Hz), 2,98 (s, 6H), 2,22 (m, 1H). Análise: (C20H25NO3) C. H. N.

Exemplo 41 Estilbeno de 4-N, N'-dimetilamino-4'-( 1 -tosiI-3-hidróxi-propano-2-ilmetóxi) (15d)

O composto 15c (158 mg, 0,49 mmol) foi dissolvido em piridina anidrosa (15 mL) e resfriado para 0°C com um banho de gelo. Cloreto de tosila (137 mg, 0,72 mmol) foi adicionado e a solução foi agitada a 0°C durante 2 horas. Após preparação padrão com diclorometano, o resíduo foi purificado por TLC preparativa de sílica-gel (5% de metanol em diclorometano) para fornecer o composto de monotosilato, 15d , como um sólido branco (95 mg, 41 %): 1H RMN δ 7,75 (d, 2H, J = 8,26 Hz), 7,37 (m, 4H), 7,26 (m, 2H), 6,88 (m, 2H), 6,72 (m, 4H), 4,26 (d, 2H, J = 5,66 Hz), 3,97 (d, 2H, J = 5,96 Hz), 3,79 (d, 2H, J = 5,24 Hz), 2,95 (s, 6H), 2,38 (m, 4H). Análise: (C27H31NO5S) C, Η, N.

Exemplo 42 Estilbeno de 4-N,N'-dimetilamino-4'-(1-fluoro-3-hidróxi-propano-2-ilmetóxi) (15e)

O composto 15d (40 mg, 0,083 mmol) foi dissolvido em THF anidroso (5,0 mL). Sob a atmosfera de nitrogênio, TBAF anidroso (150 mg, 0,5 mmol) em THF anidroso (1,0 mL) foi lentamente adicionado. A solução foi em seguida aquecida até o refluxo durante 3 horas. Após resfriada para a temperatura ambiente, preparação padrão com diclorometano foi aplicada e o resíduo foi aplicado para TLC preparativa de silica-gel (5 % de metanol em diclorometano) para fornecer o produto 15e (17 mg, 62 %): 1H RMN δ 7,40 (m, 4H), 6,89 (m, 4H), 6,70 (d, 2H, J = 8,82 Hz), 4,67 (d d, 2H, J1 = 47,1 Hz, J2 = 5,46 Hz), 4,10 (d, 2H, J = 5,86Hz), 3,88 (d, 2H, J = 5,24 Hz), 2,97 (s, 6H), 2,40 (m, 1H), 1,76 (s, 1H). Análise: (C20H24FNO2) C, Η, N.

Exemplo 43 Estilbeno de 4-nitro-4'-(2.2-dimetil-[1.3]dioxano-5-ilmetóxi) (13b)

O composto 13b foi preparado de 13a (241 mg, 1,0 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 15b. 13b (260 mg, 70 %): 1H RMN δ 8,19 (d, 2H, J = 8,80 Hz), 7,49 (m, 4H), 7,07 (m, 2H), 6,90 (d, 2H, J = 8,80 Hz), 4,12 (m, 4H), 3,89 (d, 2H), 2,10 (m, 1H), 1,48 (s, 3H), 1,43 (s, 3H). Análise calculada: (C21H23NO5) C, Η, N.

Exemplo 44 Estilbeno de 4-nitro-4’-(1.3-diidróxi-propano-2-ilmetóxi) (13c)

O composto 13c foi preparado de 13b (260 mg, 0,7 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 15c. 13c (190 mg, 82 %): 1H RMN (CD3OD) δ 8,19 (d, 2H, J = 8,80 Hz), 7,72 (d, 2H, J = 8,80 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8,70 Hz), 7,24 (q, 2H), 6,96 (d, 2H, J = 8,70 Hz), 4,09 (d, 2H, J = 5,78 Hz), 3,74 (d, 4H, J = 5,94 Hz), 2,14 (m, 1H). Análise: (C18H19NO5) C, Η, N.

Exemplo 45 Estilbeno de 4-nitro-4'-(1-tosil-3-hidróxi-propano-2-ilmetóxi) (13d)

O composto 13d foi preparado de 13c (80 mg, 0,24 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 15d. 13d (66mg, 56 %): 1H RMN δ 8,18 (d, 2H, J = 8,82 Hz), 7,77 (d, 2H, J = 8,32 Hz), 7,58 (d, 2H, J = 8,82 Hz), 7,45 (d, 2H, J = 8,73 Hz), 7,28 (d, 2H, J = 8,18 Hz), 7,09 (q, 2H), 6,81 (d, 2H, J = 8,73 Hz), 4,27 (d, 2H, J = 5,70 Hz), 4,01 (m, 2H), 3,80 (d, 2H, J = 5,61 Hz), 2,40 (m, 4H), 2,02 (s, 1H). Análise: (C25H25NO7S) C, Η, N.

Exemplo 46 Estilbeno de 4-nitro-4'-(1-fluoro-3-hidróxi-propano-2-ilmetóxi) (13e).

O composto 13e foi preparado de 13d (33 mg, 0,069 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 15e. 13e (20 mg, 88 %): 1H RMN δ 8,19 (d, 2H, J = 8,83 Hz), 7,58 (d, 2H, J = 8,84 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 8,74 Hz), 7,10 (q, 2H), 6,94 (d, 2H, J = 8,68 Hz), 4,69 (d d, 2H, J1 = 47,1 Hz, J2 = 5,36 Hz), 4,15 (d, 2H, J = 5,89Hz), 3,90 (d, 2H, J = 5,43 Hz), 2,43 (m, 1H), 1,74 (s, 1H). Análise: (C18H18FNO4) C, Η, N.

Exemplo 47 Estilbeno de 4-amino-4'-(1-fluoro-3-hidróxi-propano-2-ilmetóxi) (14e).

O composto 14e foi preparado de 13e (37 mg, 0,11 mmol) com o mesmo procedimento descrito para o composto 14a. 14e (24 mg, 71 %): 1H RMN δ 7,35 (m, 4H), 6,90 (m, 4H), 6,66 (d, 2H, J = 8,54 Hz), 4,69 (d d, 2H, J1 = 47,1 Hz, J2 = 5,46 Hz), 4,12 (d, 2H, J = 5,84 Hz), 3,90 (d, 2H, J = 5,56 Hz), 3,70 (s, 2H), 2,39 (m, 1H), 1,71 (s, 1H). Análise: (C18H20FNO2) C, Η, N.

Exemplo 48 Estilbeno de 4-N-metil-amino-4,-f1-fluoro-3-hidróxi-propano-2-ilmetóxi) (16e)

Sob a atmosfera de nitrogênio, metóxido de sódio (22 mg, 0,4 mmol) foi adicionado a uma suspensão do composto 14e (24 mg, 0,08 mmol) em metanol (6 mL) seguido por paraformaldeído (12 mg, 0,4 mmol). A solução foi aquecida até o refluxo durante 2 horas e resfriada para 0°C com um banho de gelo. Boroidreto de sódio (15 mg, 0,4 mmol) foi adicionado em porções. A mistura de reação foi trazida até o refluxo novamente durante 1 hora e despejado sobre gelo esmagado. Após preparação padrão com diclorometano, o resíduo foi aplicado para TLC preparativa de sílica-gel (metanol a 4,5 % em diclorometano) para fornecer o produto 16e (23 mg, 92 %): 1H RMN δ 7,37 (m, 4H), 6,87 (m, 4H), 6,59 (d, 2H, J = 8,56 Hz), 4,69 (d, d, 2H, J1 = 47,1 Hz, J2 = 5,44 Hz), 4,12 (d, 2H, J = 5,86 Hz), 4,00 (s, 1H), 3,89, (d, 2H, J = 5,52 Hz), 2,86 (s, 3H), 2,41 (m, 1H), 1,75 (s, 1H). Análise: (C19H22FNO2) C, H, N.

Exemplo 49 Estilbeno de 4-N-metil-amino-4'-hidróxi (16a)

O composto 16a foi preparado de 14a (105 mg, 0,5 mmol) com o mesmo procedimento como descrito para o composto 16e. 16a (100 mg, 89 %): 1H RMN δ 7,34 (m, 4H), 6,86 (s, 2H), 6,79 (d, 2H, J = 8,58 Hz), 6,60 (d, 2H, J = 8,58 Hz), 2,85 (s, 3H).

Exemplo 50 Procedimento por microondas geral para a preparação de estilbeno 12 (n=6,8)

Síntese por microondas: a mistura de 16a, agente de alquilação (1 eq.), K2CO3 (3 eq.) em DMF (1mL/0,05 mmol de SB-13) foi colocada em um tubo selado e aquecida no forno de microondas na seguinte condição: 180°C, 10 minutos, nivel de absorção elevado. O solvente foi em seguida removido e PTLC [CH2CI2-MeOH (97:3) como solvente em desenvolvimento] forneceu o produto desejado (Produção: 42-60% dependendo do agente de alquilação empregado).

Exemplo 51 (4-(2-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi)-etóxi)-etóxi)-etóxi)-etóxi)-fenil)-viníl)-fenil)-metil-amína (12,n = 6):

Produção = 60%. 1Η RMN (200 MHz, CDCI3): δ 7,2-7,5 (4H, m), 6.8- 7,0 (4H, m), 6,59 (2H, d, J = 8,4 Hz), 4,55 (2H, d, t, J, = 46 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,14 (2H, t), 3,8-3,9 (3H, m), 3,6-3,8 (17H, m), 2,86 (3H, s). HRMS (El) m/z calculada para [C27H38FNO6]+ 491,2683, encontrado 491,2667.

Exemplo 52 (4-(2-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-Fluoro-etóxi)-etóxi)-etóxi)-etóxi)- etóxi)-etóxi)-etóxi)-etóxi)-feniI)-vinil)-fenil)-metil-amina (12. n = 8):

Produção: 42%. 1H RMN (200 MHz, CDCI3): δ 7,3-7,5 (4H, m), 6.8- 7,0 (4H, m), 6,73 (2H, d, J = 8,2 Hz), 4,55 (2H, d, t, J, = 46 Hz, J2 = 4,0 Hz), 4,14 (2H, t), 3,8-3,9 (3H, m), 3,5-3,8 (25H, m), 2,89 (3H, s). HRMS (El) m/z calculada para [C31H46FNO8]+ 579,3207, encontrado 579,3192.

Exemplo 53 Preparação de homogeneizados de tecido cerebral

Tecidos cerebrais após a morte foram obtidos de pacientes de AD em autópsia, e diagnóstico neuropatológico foi confirmado por critérios atuais (ΝIA - Reagan Institute Consensus Group, 1997). Homogeneizados foram em seguida preparados de substâncias cinza dissecadas de pacientes de AD em salina tamponada por fosfato (PBS, pH 7,4) na concentração de aproximadamente 100 mg de tecido úmido/ml (homogeneizador de vidro movido a motor com fixação de 6 durante 30 segundos). Os homogeneizados foram aliquotados em porções de 1 ml e armazenados a -70°C durante 6-12 meses sem perda de sinal de ligação.

Exemplo 54 Estudos de ligação

Como previamente reportado, [125I]IMPY, com 2.200 Ci/mmol de atividade específica e maior do que 95% de pureza radioquímica, foi preparado empregando-se a reação de iododestanilação padrão e purificado por uma minicoluna C-4 simplificada (Kung M-P, e outros, Euro J Nucl Med Mol Imag. 2004;31:1136-45). Ensaios de ligação foram realizados em tubos de vidro de borossilicato de 12 x 75 mm. A mistura de reação continha 50 μΙ de homogeneizados cerebrais (20-50 μg), 50 μΙ de [125I]IMPY (0,04-0,06 nM diluído em PBS) e 50 μΙ de inibidores (10-5-10-10 M diluídos serialmente em PBS contendo albumina de soro bovino a 0,1 %, BSA) em um volume final de 1 ml. Ligação não específica foi definida na presença de IMPY (600 nM) nos mesmos tubos de ensaios. A mistura foi incubada a 37°C durante 2 horas e a ligação e a radioatividade livre foram separadas por filtração à vácuo através de filtros de Whatman GF/B empregando-se uma coletora celular Brandel M-24R seguido por lavagens de 2 x 3 ml de PBS em temperatura ambiente. Filtros contendo o ligando 125l de ligação foram ensaiados quanto ao conteúdo de radioatividade em uma registradora gama (Packard 5000) com 70% de eficiência de contagem. Sob as condições de ensaio, a fração de ligação específica foi menor do que 15% da radioatividade total. Os resul- tados de experimentos de inibição foram submetidos à análise de regressão não linear empregando-se EBDA pelo qual os valores de Ki foram calculados. Os resultados são fornecidos na Tabela 1.
Tabela 1.

Cada valor foi obtido de três mensurações independentes realizadas em duplicata.

Os estilbenos de PEG fluorinados (12a-d) mostraram excelentes afinidades de ligação (Kj = 2,9 -6,7 nM); ao mesmo tempo que os análogos substitutos de hidroxila correspondente (3a-d) também exibiram afinidades de ligação muito elevadas (Ki = 2,8 -5,2 nM) (Tabela 1). A lipofilicidade desta série de agentes rotulados, [18F] 12a-d, foi dentro de uma faixa apropriada (valor de logP foi de 2,52, 2,41, 2,05 e 2,28 para n = 2-5, respectivamente). O grupo PEG é capaz de modular o tamanho da molécula e a distância entre o átomo de flúor e a estrutura de núcleo de estilbeno sem afetar a afinidade de ligação específica de placa de Αβ.

Exemplo 55 Auto-radiografia de película

Secções cerebrais de pacientes de AD foram obtidas por congelamento do cérebro em gelo seco em pó e cortado em secções de espessura de 20 micrômeros. As secções foram incubadas com traçadores [18F] (200.000-250.000 cpm/200 μl) durante 1 hora em temperatura ambiente. As secções foram em seguida mergulhadas em Li2C03 saturado em EtOH a 40% (duas lavagens de dois minutos) e lavadas com EtOH a 40% (uma lavagem de dois minutos) seguido por enxágue com água durante 30 segundos. Após secagem, as secções rotuladas por 18F foram expostas à película Kodak MR durante a noite.

Exemplo 56 Rotulagem de placa in vivo com [18F]12b e [18F]12d

A avaliação in vivo foi realizada empregando-se camundongos APP/PS1 transgênicos duplos ou APP2576 transgênicos simples que foram gentilmente fornecidos por AstraZeneca. Após anestesia com isoflurano a 1%, 250 a 300 μCi de [18F]12b ou [18F]12d em 200 μl de solução de BSA a 0,1% foi injetada através da veia do rabo. Os animais foram deixados recuperar durante 60 minutos e em seguida mortos por decapitação. Os cérebros foram imediatamente removidos e congelados em gelo seco em pó. As secções de 20 micrômetros foram cortadas e expostas à película Kodak MR durante a noite. Auto-radiogramas de película ex vivo foram desse modo obtidos.

Exemplo 57 Distribuição de órgão em camundongos normais

Enquanto sob anestesia de isoflurano, 0,15 mL de uma solução de albumina de soro bovino 0,1% contendo traçadores [18F] (5-10 μCi) foi injetado diretamente na veia do rabo de camundongos ICR (22-25 g, macho). Os camundongos (n = 3 para cada ponto do tempo) foram sacrificados por deslocamento cervical em 120 minutos após a injeção. Os órgãos de interesse foram removidos e pesados, e a radioatividade foi ensaiada quanto ao conteúdo de radioatividade com uma registradora gama automática. A percentagem de dose por órgão foi calculada por uma comparação das contas de tecido às alíquotas adequadamente diluídas do material injetado. As atividades totais de sangue foram calculadas sob a suposição de que elas tinham 7% do peso corporal total. O % dose/g de amostras foi calculado comparando-se as contas de amostra com a contagem da dose inicial diluída.
Tabela 2. Biodistribuição em camundongos ICR após injeção iv de [18F]12a-d em BSA a 0.1% (%dose/g. média de 3 camundongos ± SD)

Os compostos radioativos, incluindo [18F]12a-d, barreira hemato- encefálica intacta penetrada exibindo excelente captação cerebral em camundongos normais (6,6-8,1 %dose/g de cérebro) em 2 minutos após injeção iv (Tabela 2A & B). Uma vez que camundongos normais foram empregados para os experimentos de biodistribuição, nenhuma placa de Αβ no cérebro é esperada nestes camundongos jovens; portanto, os agentes rotu-lados, [18F]12a-d, esgotados do cérebro rapidamente (1,2-2,6 %dose/g de cérebro) em 60 minutos após injeção iv. A captação inicial elevada e esgotamento rápido em cérebro de camundongo normal (com nenhuma placa de Αβ no cérebro) são propriedades altamente desejáveis para agentes de formação de imagem de alvejamento de placa de Αβ. Os valores reportados na Tabela 2 são comparáveis àqueles reportados para [11C]PIB e [11C]SB-13 (Mathis CA, e outros, Curr Pharm Des. 2004;10:1469-92; Ono M, e outros., Nucl Med Biol. 2003; Mathis CA, e outros., J Med Chem. 2003).

Uma biodistribuição detalhada de [18F]12b é mostrada na Tabela 2A. Parece que em 2 minutos após injeção, o composto foi capturado no fígado, rim, pulmões e músculo, refletindo um padrão de perfusão sanguínea geral. A captação óssea em 120 minutos foi elevada (2,74% dose/g) sugerindo que pode estar em desfluorinação in vivo. Entretanto, o flúor livre não é captado por tecido cerebral; portanto, a captação óssea foi relativamente baixa. Os outros derivados de estilbeno de PEG, 12a,c,d, mostraram padrões de biodistribuição similares (Tabela 2B).

Exemplo 58 Coeficiente de Divisão

Coeficientes de divisão foram avaliados por mistura do traçador [18F] com 3 g cada de 1-octanol e tampão (0,1 M de fosfato, pH 7,4) em um tubo de teste. O tubo de teste foi vortexado durante 3 minuto em temperatura ambiente, seguido por centrifugação durante 5 minuto. Duas amostras pesadas (0,5 g cada) das camadas de 1-octanol e tampão foram contadas em uma contadora conveniente. O coeficiente de divisão foi determinado calculando-se a relação de cpm/g de 1-octanol àquele do tampão. Amostras da camada de 1-octanol foram redivididas até divisões consistentes em valores de coeficiente serem obtidas (usualmente a 3a ou 4a divisão). A medição foi feita em triplicata e repetida três vezes.

Será entendido por aqueles de experiência ordinária na técnica que o mesmo pode ser realizado dentro de uma faixa ampla e equivalente de condições, formulações, e outros parâmetros sem afetar o escopo da invenção ou qualquer modalidade desta. Todas as patentes, pedidos de pa- tente, e publicações citadas aqui são totalmente incorporadas por referência aqui em sua totalidade.

Claims (10)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (II)

   

   na qual
   R1 é NRaRb, em que Ra e Rb são independentemente hidrogênio ou C1-4 alquila;
   R2 é

   

   em que q é um número inteiro de 2 a 10; Z é selecionado do grupo consistindo em 18F, e (C1-4)alcóxi substituído por 18F; e R30, R31, R32 e R33 são hidrogênio
   R7 e R8 são hidrogênio.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R2 é

   

   em que Z, R30, R31, R32 e R33 são como descritos acima.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que q é um número inteiro de 2 a 5.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte fórmula:

   

   ou

   
5. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido na reivindicação 1, e um excipiente.
6. Composição diagnóstica para formação de imagem de depósitos de amilóide, caracterizada pelo fato de que compreende um composto radiorrotulado, como definido na reivindicação 1, e um excipiente.
7. Composição de acordo com a reivindicação 5 ou composto radiorrotulado de acordo com a reivindicação 1, caracterizada(o) pelo fato de ser para uso na inibição de agregação de placa de amilóide em um mamífero.
8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo em:
   2-[2-(4-{2-[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil]-vinil}-fenóxi)-etóxi]-etil éster de ácido metanossulfônico (10a);
   2-{2[2-(4-{2-[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil]-vinil}-fenóxi)-etóxi}-etil éster de ácido metanossulfônico (10b);
   2-(2-{2-[2-(4-{2-[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil]-vinil}-fenóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etil éster de ácido metanossulfônio (10c);
   2-[2-(2-{2-[2-(4-{2-[4-(terc-butoxicarbonil-metil-amino)-fenil]-vinil} -fenóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi]-etóxi)-etil éster de ácido metanossulfônio (10d);
   terc-butil éster de ácido [4-(2-{4-[2-(2-hidróxi-etóxi)-etóxi]-fenil)-vinil)-fenil)-metil-carbâm ico (9a);
   terc-butil éster de ácido {4-[2-(4-{2-[2-(2-hidróxi-etóxi)-etóxi]-etóxi}-fenil)-vinil]-fenil}-metil-carbâmico (9b);
   terc-butil éster de ácido (4-{2-[4-(2-{2-[2-(2-hidróxi-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-fenil]-vinil}-fenil)-metil-carbâmico (9c); e
   terc-butil éster de ácido [4-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(2-hidróxi-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etóxi]-fenil}-vinil)-fenil]-metil-carbâmico (9d).
9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte fórmula:

   

   em que n é um número inteiro de 2 a 5.
10. Processo de preparação de um composto como definido na reivindicação 1, em que o composto é de Fórmula [18F] 12:

    

    em que n = 2, 3, 4 ou 5,
    caracterizado pelo fato de que compreende reagir um composto de Fórmula 10:

    

    com [18F]F- / Kryptofix 222 ("K222") e K2CO3 em DMSO e tratar a mistura resultante com HCl aquoso.

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