JP2010524965A - ジフェニル−ヘテロアリール誘導体並びにアミロイド斑への結合及び画像化のためのその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、アミロイド沈着の画像化方法及びジフェニル−ヘテロアリール化合物、及びアミロイド沈着の画像化において有用な放射標識ジフェニル−ヘテロアリール化合物をマーキングする方法に関する。本発明はまた、化合物、アミロイド沈着を形成するアミロイドタンパク質の凝集体を阻害する化合物の作製方法、及びアミロイド沈着に治療剤を送達する方法に関する。

Description

本発明は、ジフェニル−ヘテロアリール化合物、アミロイド−β凝集の診断用画像化及び阻害におけるその使用、並びにその化合物を作製する方法に関する。

関連出願の相互参照
本出願は、２００７年４月１９日に出願の米国仮出願第６０／９０７,８４１号に対する利益を請求し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

連邦政府による資金提供を受けた研究の記載
本発明の開発中に実施された研究の一部は、米国連邦政府資金を利用した。米国連邦政府資金は、国立衛生研究所により授与された認可番号ＡＧ−０２２５５９及びＡＧ−０２１８６８の下、本発明について特定の権利を有する。

アルツハイマー病（ＡＤ）は、進行性神経変性障害であり、認知低下、不可逆性記憶消失、見当識障害、及び言語障害を特徴とする。ＡＤ脳切片の検視により、アミロイド−β（Ａβ）ペプチドからなる大量の老人斑（ＳＰ）、及び高度にリン酸化されたタウタンパク質の繊維により形成される多数の神経原線維変化（ＮＦＴ）が明らかになる（最近の概説及び追加の引用については、Ginsberg, S. D., et ah, "Molecular Pathology of Alzheimer's Disease and Related Disorders," in Cerebral Cortex: Neurodegenerative and Age-related Changes in Structure and Function of Cerebral Cortex, Kluwer Academic/Plenum, NY (1999), pp. 603-654; Vogelsberg-Ragaglia, V., et al., "Cell Biology of Tau and Cytoskeletal Pathology in Alzheimer's Disease," Alzheimer's Disease, Lippincot, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (1999), pp. 359-372、を参照されたい）。

アミロイド症は、患者の組織中の様々な不溶性の線維タンパク質の蓄積を特徴とする症状である。アミロイド沈着は、アミロイドタンパク質の凝集と、凝集体及び／又はアミロイドタンパク質のさらなる組み合わせにより形成される。βアミロイド（脳におけるＡβペプチド）の凝集体の形成及び蓄積は、ＡＤの発症及び進行における重要な因子である。

アルツハイマー病におけるアミロイド沈着の役割に加え、アミロイド沈着の存在は、地中海熱、マックル・ウェルズ症候群、特発性骨髄腫、アミロイド多発性神経障害、アミロイド心筋症、全身性老人性アミロイド症、アミロイド多発性神経障害、アミロイド症を伴う遺伝性大脳出血、ダウン症候群、スクラピー、クロイツフェルト−ヤーコプ病、クールー、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー症候群、アミロイドの髄様癌、単離心房性アミロイド、透析患者におけるβ２−ミクログロブリンアミロイド、封入体筋炎、筋るいそう疾患におけるβ２−アミロイド沈着、及びランゲルハンス島２型糖尿病インスリノーマ等の疾患に見られる。

アミロイドペプチドの原線維凝集体、Ａβ_1-40及びＡβ_1-42は、ＡＤ患者の老人斑及び脳血管性アミロイド沈着に見られる、アミロイド前駆体タンパク質由来の代謝性ペプチドである（Xia, W., et al, J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97: 9299-9304 (2000)）。Ａβ斑形成の予防及び回復は、本疾患のための治療として標的とされる（Selkoe, D., J. JAMA 283:1615-1617 (2000); Wolfe, M.S., et al, J. Med. Chem. 41 :6-9 (1998); Skovronsky, D.M., and Lee, V.M., Trends Pharmacol. Sci. 27:161-163 (2000)）。

家族性ＡＤ（ＦＡＤ）は、Ａ前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、プレセレニン１（ＰＳ１）、プレセレニン２（ＰＳ２）遺伝子における多重突然変異により引き起こされる（Ginsberg, S. D., et al., "Molecular Pathology of Alzheimer's Disease and Related Disorders," in Cerebral Cortex: Neurodegenerative and Age- related Changes in Structure and Function of Cerebral Cortex, Kluwer Academic/Plenum, NY (1999), pp. 603-654; Vogelsberg-Ragaglia, V., et al, "Cell Biology of Tau and Cytoskeletal Pathology in Alzheimer's Disease," Alzheimer's Disease, Lippincot, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (1999), pp. 359-372)）。

ＡＤの正確な発症機序は十分に理解されてはいないが、全ての研究対象の病原性ＦＡＤ変異体は、Ａβペプチドのよりアミロイド生成性のある４２〜４３アミノ酸鎖長の形態の生成物を非常に増加させる。すなわち、少なくともＦＡＤでは、Ａβ生成の異常調節は、神経変性を導く事象のカスケードを十分に誘導するように見える。実際、アミロイドカスケード仮説は、脳における細胞外原線維Ａβ凝集体の形成は、ＡＤの病因における極めて重要な事象である可能性が示される（Selkoe, D. J., "Biology of β-amyloid Precursor Protein and the Mechanism of Alzheimer's Disease," Alzheimer's Disease, Lippincot Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (1999), pp. 293-310; Selkoe, D. J., J. Am. Med. Assoc. 283: 1615-1617 (2000); Naslund, J., et al, J. Am. Med. Assoc. 283: 1571-1577 (2000); Golde, T. E., et al, Biochimica et Biophysica Acta 7502:172-187 (2000)）。

脳における原繊維Ａβの生成阻害及び蓄積低減の試みにおける様々な手法は、ＡＤのための潜在的な療法として近年評価されている（Skovronsky, D. M. and Lee, V. M., Trends Pharmacol. ScL 27:161-163 (2000); Vassar, R., et al, Science 286:735-741 (1999); Wolfe, M. S., et al., J. Med. Chem. 41:6-9 (1998); Moore, C. L., et al., J. Med. Chem. 45:3434-3442 (2000); Findeis, M. A., Biochimica et Biophysica Acta 7502:76-84 (2000); Kuner, P., Bohrmann, et al., J. Biol. Chem. 275:1673-1678 (2000)）。そのため原線維Ａβ凝集体に特異的に結合するリガンドの開発は注目される。細胞外ＳＰは利用しやすい標的であるため、生きている患者のＡＤアミロイド生成の研究において進行性沈着を可視化するインビボ（in vivo）診断ツール及びＡβのプローブとして、前記の新規なリガンドを利用できるであろう。

この目的を達成するため、原線維Ａβ凝集特異的リガンドを開発するための、いくつかの興味深い手法が報告されている（Ashburn, T. T., et al., Chem. Biol. 5:351-358 (1996); Han, G., et al., J. Am. Chem. Soc. 118:4506-4507 (1996); Klunk, W. E., et al, Biol. Psychiatry 55:627 (1994); Klunk, W. E., et al, Neurobiol Aging 76:541-548 (1995); Klunk, W. E., et al, Society for Neuroscience Abstract 25:1638 (1997); Mathis, C. A., et al, Proc. XIIth Intl. Symp.Radiopharm. Chem., Uppsala, Sweden:94-95 (1997); Lorenzo, A. and Yankner, B. A., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91:12243-12247 (1994); Zhen, W., et al, J. Med. Chem. 42:2805-2815 (1999)。最も魅力的な手法は、高度に複合化されたｃｈｒｙｓａｍｉｎｅ−Ｇ（ＣＧ）及びコンゴーレッド（ＣＲ）に基づくものである。ここで後者は、死後のＡＤ脳切片におけるＳＰ及びＮＦＴの蛍光染色に使用されている（Ashburn, T. T., et al, Chem. Biol. 5:351-358 (1996); Klunk, W. E., et al, J. Histochem. Cytochem. 57:1273-1281 (1989)）。ＣＲ、ＣＧ、並びにＣＧの３'−臭化及び３'−ヨウ化誘導体の、原線維Ａβ凝集体への結合の阻害定数（Ｋ_i）は、それぞれ2,800、370、300及び250nMである（Mathis, C. A., et al, Proc. XIIth Intl. Symp. Radiopharm. Chem., Uppsala, Sweden:94-95 (1997)）。これらの化合物は、インビトロ（in vitro）でのＡβ（１−４０）ペプチド凝集体、及びＡＤ脳切片での原線維Ａβ沈着への選択的な結合を示した（Mathis, C. A., et al, Proc. XIIth Intl. Symp. Radiopharm. Chem., Uppsala, Sweden:94-95 (1997)）。

脳内のＡβ凝集体の画像化には複数の潜在的な利益がある。画像化技術は、脳内に過剰Ａβ斑を有し、その結果アルツハイマー病が進行する恐れがある、潜在的患者を確認する診断法を改良するであろう。これは本疾患の進行の観測にも有用である。抗斑薬物治療が利用できるようになると、脳内のＡβ斑の画像化は、治療観測のための必須なツールとなるだろう。このように、患者におけるアミロイド沈着を検出し定量化する、単純で非侵襲的な方法が長く求められてきた。現在、アミロイド沈着の検出には、生検又は剖検材料の組織学的分析が必要であるが、いずれの方法も欠点を有する。例えば、剖検は死後診断にしか使用できない。

インビボでのアミロイド沈着の直接画像化は困難であり、それは当該沈着が、多くの通常組織と同じ物理的特性を有する（例えば、密度及び水分含量）ためである。磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）及びコンピュータ支援断層撮影（ＣＡＴ）を使用してアミロイド沈着を画像化する試みは、満足な結果は得られず、特定の有利な条件下でしかアミロイド沈着を検出しない。さらに、抗体、血清アミロイドＰタンパク質、又はその他のプローブ分子を用いてアミロイド沈着を標識する試みは、組織の抹消ではいくらかの選択性をもたらすが、組織内部の画像化は不良好な結果となる。

生きている脳内のＡβ凝集体を検出するためのリガンドは、無傷の血液脳関門を越える必要がある。すなわち、脳の取り込みは、比較的小さい分子サイズ（コンゴーレッドとの比較）のリガンドを用い、親油性を向上させることにより改善できる。ＡＤ脳内のＡβ凝集体を染色するための色素として、高度に複合化されたチオフラビン（Ｓ及びＴ）が通常使用される（Elhaddaoui, A., et al, Biospectroscopy 7:351-356 (1995)）。

脂肪親和性の高いトレーサーである［¹⁸Ｆ］ＦＤＤＮＰは、もつれ（主に高リン酸化タウタンパク質から構成される）及び斑（Ａβタンパク質凝集を含有する）の両方への結合用として報告されている（Shoghi-Jadid K, et al, Am J Geriatr Psychiatry. 2002;10:24-35）。陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）を用いることで、９人のＡＤ患者及び７人の比較対象者において、このトレーサーが斑の沈着及びもつれを特異的に標識することが報告されている（Nordberg A. Lancet Neurol. 2004;3:519-27）。脳橋に対する注目の脳領域の相対的滞留時間と呼ばれる、新規な薬物動態学的解析方法を用いることで、ＡＤ患者と比較対象者との間の差異が実証された。相対的滞留時間は、ＡＤ患者において有意に高かった。これは、ＦＤＤＮＰが、インビトロでＡβ線維に、生体外（ex vivo）でＡβ斑に結合するためのいくつかのＮＳＡＩＤと競合するという興味深い発見により、さらに複雑になる（Agdeppa ED, et al. 2001; Agdeppa ED, et al., Neuroscience. 2003;l 17:723-30）。

ベンゾチアゾールアニリン誘導体、［¹¹Ｃ］６−ＯＨ−ＢＴＡ−１（別名［¹¹Ｃ］ＰＩＢ）を使用する、ＡＤ患者の脳内のβ−アミロイドの画像化が最近報告された（Mathis CA, et al, Curr Pharm Des. 2004;10:1469-92; Mathis CA, et al, Arch. Neurol 2005, 62:196-200）。［¹⁸Ｆ］ＦＤＤＮＰでの観察とは対照的に、［¹¹Ｃ］６−ＯＨ−ＢＴＡ−１はインビボで原線維Ａβに特異的に結合する。軽度のＡＤと診断された患者は、ＡＤの場合、大量のアミロイド沈着を含有することがわかっている皮質において、［¹¹Ｃ］６−ＯＨ−ＢＴＡ−１の顕著な保持を示した。ＡＤ患者群では、前頭皮質で［¹¹Ｃ］６−ＯＨ−ＢＴＡ−１の保持が最も著しく増加した。大量の増加は、頭頂部、側頭部、及び後頭部の皮質、並びに線条でも観察された。比較的アミロイド沈着の影響を受けないことがわかっている領域（皮質下白質、脳橋、及び小脳等）では、ＡＤ患者及び比較対象者における［¹¹Ｃ］６−ＯＨ−ＢＴＡ−１の保持は等しかった。最近、別の¹¹Ｃ標識Ａβ斑標的プローブである、スチブレン誘導型［¹¹Ｃ］ＳＢ−１３が研究されている。インビトロでの結合における［³Ｈ］ＳＢ−１３の使用により、当該化合物が優れた結合親和性を示すとともに、結合が皮質灰白質において明確に測定できるが、ＡＤの事例の白質では明確に測定できないことが示された（Kung M-P, et al. , Brain Res. 2004; 1025 : 89- 105）。対照群の脳の皮質組織ホモジネートには、非常に特異性の低い結合があった。ＡＤ皮質ホモジネートにおける［³Ｈ］ＳＢ−１３のＫｄ値は、2.4±0.2 nMであった。高い結合能及び同等の値が観察された（14-45 pmol/mg タンパク質）（Ｉｄ.）。期待通り、ＡＤ患者における［¹¹Ｃ］ＳＢ−１３は、軽度から中程度のＡＤ患者においては前頭部皮質で高い蓄積量を示したが、年齢が一致するコントロール対象ではそうではなかった（Verhoeff NP, et al., Am J Geriatr Psychiatry. 2004; 12:584-95）。

患者におけるアミロイド沈着を画像化及び定量化するための、非侵襲的技術が有用となるであろう。さらに、アミロイド沈着を形成するアミロイドタンパク質の凝集を阻害する化合物、及びアミロイドタンパク質凝集を阻害する化合物の能力を決定するための方法をも有用になるであろう。

本発明は式Ｉ、Ｉ'、II、I"及びI'"の新規な化合物を提供する。本発明はまた、式Ｉ、Ｉ'、II、I"及びI'"の放射性標識化合物を含んでなるとともに、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤を含んでなる診断用組成物を提供する。本発明は、アミロイド沈着を画像化する方法であって、式Ｉ、Ｉ'、II、I"及びI'"の標識化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、エステル、アミドもしくはプロドラッグの検出可能量を患者に導入することを含んでなる方法をさらに提供する。

本発明はまた、アミロイドタンパク質の凝集を阻害するための方法であって、式Ｉ、Ｉ'、II、I"及びI'"の化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、エステル、アミドもしくはプロドラッグのアミロイド阻害量を、哺乳類に投与することを含んでなる方法を提供する。

本発明のさらなる態様は、アミロイドを阻害し、画像化する、本明細書で記載の式Ｉ、Ｉ'、II、I"及びI'"の化合物を合成するのに有用な、方法及び中間体を対象とする。

図１は、本発明の好ましいトリアゾールの実施態様を示す。 図２は、本発明の好ましいトリアゾールの実施態様と、特定のその個々の結合データを示す。 図３は、本発明の好ましい実施態様のＨＰＬＣプロファイルを示す。ＨＰＬＣ条件：Agilent 1100シリーズ；Gemini C-18分析カラム（4.6 x 250 mm, 5 mm）、ＣＨ₃ＣＮ／ギ酸アンモニウム（10 mM）８／２、１mL／分、２６５nm、ｔＲ＝（ＵＶ）4.5分、（Ｙ）4.8分。放射性ピークとＵＶピークとの間のわずかな保持時間の差は、検出システムの設定による。 図４は、正常マウスにおける、本発明の好ましい放射標識トリアゾールプローブの好ましい実施態様の、脳の取り込み及び洗い出しを示す。 図５は、ＡＤ及びコントロールの事例から作製されたマクロアレイ脳切片の、インビトロオートラジオグラフィフィルムを示す。本発明の２つの好ましい放射性フッ素化プローブを用いて、Ａβ斑は、低バックグラウンドで明確に可視化された。白質の高い標識は、斑の標識に加え、ヨウ化プローブで観察された。 図６は、保存したＡＤ及び対照群の脳組織ホモジネートに対する、本発明の好ましい実施態様の特異的な結合を示す。灰質及び白質は皮質領域から切り取った。より高い特異結合は、主にＡＤの灰質で検出された。比較的低い結合は、ＡＤの白質ホモジネート、及びコントロール脳の灰質及び白質ホモジネートにおいて測定された。 図７は、注入後の時間に対する、アカゲザルの脳の、皮質領域（白丸）及び白質領域（黒丸）における、本発明のある実施態様の標準取り込み値（ｎＣｉ／ｃｃ／注入ｍＣｉ）を示す。皮質における急速な洗い出しを伴う非常に迅速で且つ高い取り込みが見られ、それとともに白質領域における低い非特異結合と洗い出しが見られる。

式Ｉ

（式中、
Ｗ、Ｙ及びＺは、各々独立にＣＨ、Ｎ、ＮＨ、Ｏ又はＳであり、ただしＷ、Ｙ及びＺの少なくとも１つがＮ又はＯであることを条件とし、
Ｖ及びＸは、独立にＣ又はＮであり、
Ａ¹及びＡ²は、可能であれば独立にＮ、ＣＲ³又はＣＲ⁴であり、
Ｒ¹及びＲ²は、独立に、
−（ＣＨ₂）_pＮＲ^aＲ^bであって、Ｒ^a及びＲ^bが、独立に、水素、（Ｃ_1-4）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキル又はハロ（Ｃ_1-4）アルキルであるとともに、ｐは０から５の整数である−（ＣＨ₂）_pＮＲ^aＲ^bであるか、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、ヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキル、ハロゲン、シアノ、水素、ニトロ、（Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル、ハロ（Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル、ホルミル、−ＮＨＣＯ（Ｃ_1-4アルキル）、−ＯＣＯ（Ｃ_1-4アルキル）、又は放射性ハロゲンであり、
Ｒ³は、水素であるか、以下に示されるｉ〜ｖｉ

（式中、ｑは１から１０の整数であり、Ｒ^x及びＲ^yは、水素、ヒドロキシ又は（Ｃ_1-4）アルキルであり、ｔは０、１、２又は３であり、Ｚは、ハロゲン、ヒドロキシ、ＯＴｓ（トシレート）又はアミノであり、並びにＲ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³は、いずれもに独立に、水素、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、（Ｃ_1-4）アルキル、又はヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）、

（式中、Ｒ^x及びＲ^yは、水素、ヒドロキシ又は（Ｃ_1-4）アルキルであり、ｔは０、１、２又は３であり、Ｙは、ハロゲン、ハロゲン置換ベンゾイルオキシ、ハロゲン置換フェニル（Ｃ_1-4）アルキル、ハロゲン置換アリールオキシ、又はハロゲン置換（Ｃ_6-10）アリールであり、Ｕは、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、ハロゲン置換ベンゾイルオキシ、ハロゲン置換フェニル（Ｃ_1-4）アルキル、ハロゲン置換アリールオキシ、又はハロゲン置換Ｃ_6-10アリールであり、並びにＲ³⁴、Ｒ³⁵、Ｒ³⁶、Ｒ³⁷、Ｒ³⁸、Ｒ³⁹及びＲ⁴⁰は、いずれも独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、（Ｃ_1-4）アルキル、又はヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）、
Ｒ⁴は、水素、ハロゲン、放射性ハロゲン又は−（Ｃ_1-4アルキル）₃Ｓｎ、好ましくは（Ｂｕ）₃Ｓｎであり、
iii．ＮＲ'Ｒ"（式中、Ｒ'及びＲ"の少なくとも一方は、（ＣＨ₂）_dＸであり、ここでＸはハロゲン、好ましくはＦ又は¹⁸Ｆであり、ｄは１から４の整数であり、Ｒ'及びＲ"の他方は、水素、（Ｃ_1-4）アルキル、ハロ（Ｃ_1-4）アルキル、又はヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）、
ｉｖ．ＮＲ'Ｒ"−（Ｃ_1-4）アルキル（式中、Ｒ'及びＲ"の少なくとも一方は、（ＣＨ₂）_dＸであり、ここでＸはハロゲン、好ましくはＦ又は¹⁸Ｆであり、ｄは１から４の整数であり、Ｒ'及びＲ"の他方は、水素、（Ｃ_1-4）アルキル、ハロ（Ｃ_1-4）アルキル、又はヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）
ｖ．ハロ（Ｃ_1-4）アルキル、又は
ｖｉ．［ハロ（Ｃ_1-4）アルキル−Ｏ−（Ｃ_1-4）アルキル］−構造を有する、エーテル（Ｒ−Ｏ−Ｒ）、
ただし、Ｒ³及びＲ⁴の一方は水素以外であることを条件とする）、
の化合物、又は医薬的に許容可能なその塩。

好ましい化合物には、構造上に１又は複数個存在するハロゲンが放射標識ハロゲンであるものが含まれる。ここで、当該ハロゲンはＩ、¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、Ｂｒ、⁷⁶Ｂｒ、⁷⁷Ｂｒ、Ｆ又は¹⁸Ｆである化合物も好ましい。特に好ましい化合物は、¹⁸Ｆを含有するものである。¹²³Ｉを含有する化合物も特に好ましい。

Ｒ¹及びＲ²の有用な基は、上に列挙されている。好ましくはＲ¹及びＲ²の一方が水素である。他の好ましい基は、ヒドロキシ又はＮＲ^aＲ^b（ＣＨ₂）_p−であり、ここでｐは０から５の整数であり、Ｒ^a及びＲ^bは、独立に、水素、（Ｃ_1-4）アルキル又は（ＣＨ₂）_dＸであり、ここでＸは、ハロゲンであり、ｄは１から４の整数である。ｐの有用な値は、整数で０から５が含まれる。好ましくは、ｐは０、１又は２である。最も好ましくは、ｐは０であり、Ｒ¹又はＲ²がＮＲ^aＲ^bを表す。好ましい実施態様によれば、Ｒ¹は水素以外であり、各々の架橋に対してメタ位又はパラ位のいずれかである。Ｒ¹の好ましい基はＮＲ^aＲ^bであり、ここでＲ^a及びＲ^bは、独立に水素又は（Ｃ_1-4）アルキルである。この実施態様によれば、（Ｃ_1-4）アルキルはメチルであることが好ましい。好ましくは、Ｒ^a及びＲ^bの一方は水素であり、他方はメチル等の（Ｃ_1-4）アルキルである。最も好ましくは、Ｒ^a及びＲ^bの両方がメチルである。Ｒ¹の別の好ましい基はヒドロキシである。投与後にＲ¹の好ましい基となる任意のプロドラッグ群も好ましい。かかるプロドラッグ群は、当業界で周知である。

Ｒ³の有用な基には、上記に示した下位構造のi、ii、iii、iv、v、及びviが含まれる。式Ｉの好ましい実施態様によれば、Ｒ³は、各々の架橋に対してメタ位又はパラ位のいずれかである。好ましくは、Ｒ³は、下位構造のi又はiiである。これらの実施態様によれば、ｑの有用な値には、１から１０の整数が含まれる。好ましくは、化合物中Ｒ³がｉの場合、ｑは１から５の整数である。最も好ましくは、ｑは１から４であり、特に１から３である。下位構造ｉにおいて、Ｒ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³の有用な基には、独立に、水素、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、（Ｃ_1-4）アルキル、及びヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルが含まれる。好ましい化合物には、Ｒ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³の１又は複数が水素であるものが含まれる。より好ましい化合物には、Ｒ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³の各々が水素であるものが含まれる。

下位構造iiにおいて、Ｙ、Ｕ並びにＲ³⁴、Ｒ³⁵、Ｒ³⁶、Ｒ³⁷、Ｒ³⁸、Ｒ³⁹及びＲ⁴⁰の有用な基は上記のものがある。好ましい化合物には、Ｕがヒドロキシであるものが含まれる。

式Ｉの化合物には、以下の構造

が含まれる。

式Ｉの好ましい化合物は、Ｒ¹及びＲ²の一方が、−ＯＣＯ（Ｃ_1-4アルキル）、モノ（Ｃ_1-4アルキル）アミノ、ジ（Ｃ_1-4アルキル）アミノ又は−ＮＨＣＯ（Ｃ_1-4アルキル）であり、Ｒ¹及びＲ²の他方が水素である。式Ｉ'の好ましい化合物は、Ｒ⁴が、水素、放射性ハロゲン又はハロゲンのものである。式Ｉ'の好ましい化合物は、Ｒが水素又は断片iiのものである。好ましい化合物の例には、以下の

がある。

別の実施態様によれば、本発明は以下の構造

（式中、
Ｗ、Ｙ及びＺは、各々独立にＣＨ、Ｎ、ＮＨ、Ｏ又はＳであり、ただしＷ、Ｙ及びＺの少なくとも１つがＮ又はＯであることを条件とし、
Ｖ及びＸは、独立にＣ又はＮであり、
Ａ¹及びＡ²は、可能であれば独立に、Ｎ、ＣＲ¹³又はＣＲ¹⁴であり、
Ｒ¹¹及びＲ¹²は独立に、
−（ＣＨ₂）_pＮＲ^aＲ^bであって、Ｒ^a及びＲ^bが、独立に、水素、（Ｃ_1-4）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキル又はハロ（Ｃ_1-4）アルキルであるとともに、ｐは０から５の整数である、−（ＣＨ₂）_pＮＲ^aＲ^bであるか、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、ヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキル、ハロゲン、シアノ、水素、ニトロ、（Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル、ハロ（Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル、ホルミル、−ＮＨＣＯ（Ｃ_1-4アルキル）、ｏ−ＯＣＯ（Ｃ_1-4アルキル）であり、
Ｒ¹⁴は、水素であり、
Ｒ¹³は、

（式中、ｑは１から１０の整数であり、Ｒ^x及びＲ^yは、水素、ヒドロキシ又は（Ｃ_1-4）アルキルであり、ｔは０、１、２又は３であり、Ｚ、Ｒ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³は、上記の通りであり、ＺはＣｈである）、

（式中、ＺはＣｈ、Ｒ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³は上記の通りである）、及び

（式中、Ｒ^x及びＲ^yは、水素、ヒドロキシ又は（Ｃ_1-4）アルキルであり、ｔは０、１、２又は３であり、Ｙは−Ｃｈであり、Ｕは水素、ヒドロキシ、ハロゲン、ハロゲン置換ベンゾイルオキシ、ハロゲン置換フェニル（Ｃ_1-4）アルキル、ハロゲン置換アリールオキシ、又はハロゲン置換（Ｃ_6-10）アリールであり、並びにＲ³⁴、Ｒ³⁵、Ｒ³⁶、Ｒ³⁷、Ｒ³⁸、Ｒ³⁹及びＲ⁴⁰は、いずれも独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、（Ｃ_1-4）アルキル、又はヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）、
iv．−（ＣＨ₂）_w−Ｏ−Ｃｈ（式中、ｗは整数１から１０の整数である）、
v．−Ｃｈ、又は
vi．−（ＣＨ₂）_w−Ｃｈ（式中、ｗは整数１から１０の整数である）、
ここで、部分「−Ｃｈ」は、金属キレートを形成する金属と錯体化できるキレートリガンドである）
を有する式IIの化合物、又は医薬的に許容可能なその塩を対象とする。多くのリガンドが当業界で既知であり、本発明の化合物のための、部分の標識のための使用に適する。当業者は、当該リガンドが化合物を標識する方法を提供し、本発明が特定のリガンドに限定されることなく、その多くが相互変換可能であることを理解するであろう。好ましくはこのリガンドは、三座又は四座のリガンドであり、例えばＮ₃、Ｎ₂Ｓ、ＮＳ₂、Ｎ₄及び限定するものではないが、以下の構造で示されるＮ₂Ｓ₂型のもの

（式中、Ｒ^pは、水素又はスルフヒドリル基であり、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ⁴³及びＲ⁴⁴は、いずれも独立に、水素、ヒドロキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、（Ｃ_1-4）アルキル、及びヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）
がある。９９ｍ−Ｔｃ等の金属と錯体化する場合、−Ｃｈは、以下の構造

を有する。

さらに、レニウム放射性同位体は、テクネチウムよりも四座リガンドと錯体化できる。キレート部分が金属と錯体化しない場合、Ｒ^pは両方とも水素であるか、又は硫黄のために利用できる様々な保護基、例えばメトキシメチル、メトキシエトキシメチル、ｐ−メトキシベンジル又はベンジル等のいずれかがあり得る。硫黄保護基については、Greene, T. W. and Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Edition, John Wiley and Sons, Inc., New York (1991)に、詳細な記載がある。保護基Ｒ^pは、有機合成業界で周知の適切な方法により除去でき、例えばトリフルオロ酢酸、塩化水銀又は液体アンモニア中のナトリウム等がある。アセトアミドメチル及びベンザミドメチル等のルイス酸不安定基の場合、Ｒ^pはそのままにしておくことができる。この場合、テクネチウムでのリガンドの標識は、保護基を切断し、保護されたジアミンジチオール等価物を未保護状態にする。さらに、一般的なＮ₂Ｓ₂型の複数のリガンドが知られており、本発明の範囲を変更することなくそれぞれを同じように使用できる。

Ｒ¹¹及びＲ¹²の好ましい基は、ヒドロキシ又はＮＲ^aＲ^b（ＣＨ₂）_p−であり、ここで、ｐは０から５の整数であり、Ｒ^a及びＲ^bは独立に、水素、（Ｃ_1-4）アルキル又は（ＣＨ₂）_dＸ−であり、ここでＸはハロゲンであり、ｄは１から４の整数である。ｐの有用な値には０から５の整数が含まれる。好ましくはｐは０、１又は２である。最も好ましくは、ｐは０であり、Ｒ¹¹又はＲ¹²がＮＲ^aＲ^bを表す。好ましい実施態様によれば、Ｒ¹¹は水素以外であり、各々の架橋に対してメタ位又はパラ位のいずれかである。Ｒ¹¹の好ましい基はＮＲ^aＲ^bであり、ここでＲ^a及びＲ^bは、独立に水素又は（Ｃ_1-4）アルキルである。この実施態様によれば、（Ｃ_1-4）アルキルはメチルであることが好ましい。好ましくは、Ｒ^a及びＲ^bの一方は水素であり、他方はメチル等の（Ｃ_1-4）アルキルであるか、又はＲ^a及びＲ^bの両方がメチルである。Ｒ¹¹の別の好ましい基はヒドロキシである。投与後に体内で代謝又は消化され、上記記載のＲ¹¹の好ましい基となる任意の群も好ましい。かかる群は、プロドラッグを構成することが当業界で既知であり、プロドラッグの形成ができる群は当業者に周知である。

Ｒ¹³の有用な基には、上記の下位構造i、ii、iii、iv、v及びviが含まれる。式Iの好ましい実施態様によれば、Ｒ¹³は、各々の架橋に対してメタ位又はパラ位のいずれかである。好ましくは、化合物においてＲ¹³がiの場合、ｑは２から５の整数である。最も好ましくは、ｑは３又は４である。下位構造iにおいて、Ｒ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³の有用な基は、独立に、水素、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、（Ｃ_1-4）アルキル、及びヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルを含む。好ましい化合物には、Ｒ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³の１又は複数が水素であるものが含まれる。より好ましい化合物には、Ｒ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³の各々が水素であるものが含まれる。

下位構造iiiにおいては、Ｕ並びにＲ³⁴、Ｒ³⁵、Ｒ³⁶、Ｒ³⁷、Ｒ³⁸、Ｒ³⁹及びＲ⁴⁰の有用な基は、上記の通りである。好ましい化合物には、Ｕがヒドロキシであるものが含まれる。

式Ｉの化合物にはまた、式Ｉ"及び式I'"の化合物が含まれる。本発明の別の実施態様によれば、以下の構造

（式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁴、Ａ¹及びＡ²の有用で且つ好ましい基は、式Iでの記載の通りである）
を有する式I"の化合物、又は医薬的に許容可能なその塩がある。式I"の特に好ましい化合物によれば、Ｒ⁴はハロゲン又は放射性ハロゲンである。より好ましくは、Ｒ⁴は放射性ハロゲンである。式Ｉ"の化合物の非制限的な例としては、一置換フェニル又はヘテロアリールが含まれるもの、例えば本明細書に記載のヨウ素で一置換された化合物１０ｂがある。

本発明の別の実施態様によれば、以下の構造

（式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁴、Ａ¹及びＡ²の有用で且つ好ましい基は、式Iでの記載の通りである）
を有する式I"'の化合物、又は医薬的に許容可能なその塩がある。式I"'の特に好ましい化合物によれば、Ｒ³はiiである。式I"'の化合物の非限定的な例は、本明細書記載の化合物１５ｂ、１６ｂ及び１７ｂである。

ｔが０以外である−（ＣＲ^xＲ^y）_tを含有する式Ｉ、II及びI'の全ての実施態様によれば、当該化合物は、置換基と−（ＣＲ^xＲ^y）_tが結合する環との間に、少なくとも１つの炭素−炭素結合がある以下の一般構造を有する。
また、ｔが０以外の、式I"'の化合物がある。

本発明の化合物はまた、放射標識として炭素の放射線同位体を含有することができる。これは、その原子のバックグランドレベル超の特定の活性を伴う、１又は複数の放射線炭素原子、好ましくは¹¹Ｃを含んでなる化合物のことを言う。これに関しては、様々な同位体の形態で存在し、そのいくつかは放射線同位体である天然元素がよく知られている。天然元素の放射線は、これらの同位体の天然の分配又は存在の結果であり、通常バックグランドレベルと呼ばれる。本発明の炭素標識化合物は、天然存在量より高い比放射能を有するため、バックグラウンドレベルを超える。本発明の（１又は複数の）炭素標識化合物を含んでなる、本明細書で請求される組成物は、組成物が、追跡、画像化、放射線療法等のために使用できる、十分量の化合物を有するものである。

本明細書で開示される化合物の特定の実施態様によれば、ハロゲン、好ましくは¹⁸Ｆ、又はキレート剤は、様々な数のエトキシ基を有するＰＥＧ鎖の骨格に結合する。

式I、I'、II、I"及びI'"の化合物は、溶媒和物、特に水和物であってもよい。水和物は、化合物又は化合物を含んでなる組成物の製造の際に生じることも、当該水和物は化合物の吸湿性に起因して経時的に生じることもある。さらに、本発明の化合物は、未溶媒和状態でも、水、エタノール等の医薬的に許容可能な溶媒と共に溶媒和した状態でも存在することができる。一般的には本発明の目的において、溶媒和状態は、未溶媒和状態と同等であると考えられる。

任意の構成物又は式I、I'、II、I"及びI'"において、任意の変数が複数回出現する場合、各出現におけるその定義は、他の全ての出現における定義から独立している。置換基及び／又は変数の組み合わせも、安定な化合物をもたらす組み合わせである限り許容される。

本明細書で単独で又は別の基の一部として使用される「アルキル」なる用語は、炭素数が最大で８個、好ましくは６個、より好ましくは４個の、直鎖及び分岐鎖の両基のことを言い、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、及びイソブチルがある。

本明細書で使用される「アルコキシ」なる用語は、酸素原子が結合した、上記の鎖長を限定しない直鎖又は分岐鎖のアルキル基を意味し、限定するものではないが、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ等がある。好ましいアルコキシ鎖は、炭素原子長が１から６個、より好ましくは１から４個である。

本明細書で単独で又は別の基の一部として使用される「モノアルキルアミン」なる用語は、上記のアルキル基１個で置換されるアミノ基のことを言う。

本明細書で単独で又は別の基の一部として使用される「ジアルキルアミン」なる用語は、上記のアルキル基２個で置換されるアミノ基のことを言う。

本明細書で単独で又は別の基の一部として使用される「ハロ」又は「ハロゲン」なる用語は、塩素、臭素、フッ素又はヨウ素及びその同位体のことを言う。「放射性ハロゲン」なる用語は、特定の放射線ハロゲン同位体のことを言う。

本明細書で使用される「ハロアルキル」なる用語は、１又は複数の塩素、臭素、フッ素又はヨウ素によって置換される、上記任意のアルキル基のことを言い、フッ素及び塩素が好ましく、例えばクロロメチル、ヨードメチル、トリフルオロメチル、２,２,２−トリフルオロエチル、及び２−クロロエチル等がある。

本明細書で単独で又は別の基の一部として使用される「アルキルチオ」なる用語は、構造：Ｒ−Ｓのチオエーテルのことを言い、ここでＲは上記定義のＣ_1-4アルキルである。

本明細書で単独で又は別の基の一部として使用される「アルキルスルホニル」なる用語は、構造：Ｒ−ＳＯ₂のことを言い、ここでＲは上記定義のＣ_1-4アルキルである。

本明細書で単独で又は別の基の一部として使用される「アリール」なる用語は環状部分に炭素原子を６から１２個、好ましくは６から１０個含有する、単環又は二環の芳香族基のことを言い、例えばフェニル、ナフチル又はテトラヒドロナフチル等がある。

特に言及する場合を除いて本明細書で使用される「ヘテロシクル」又は「ヘテロシクシクロ環」なる用語は、置換されていても未置換でもよい、安定な５〜７員の単環式ヘテロシクロ環系を表し、炭素原子と、Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から選択される１から３個のヘテロ原子からなり、ここで、窒素及び硫黄のヘテロ原子は任意に酸化されていてもよい。１個の酸素又は硫黄と組み合わせた１個の窒素を含有する環、又は２個の窒素へテロ原子を含有する環は特に有用である。当該へテロ環系の例としては、ピペリジニル、ピロリル、ピロリジニル、イミダゾリル、イミダジニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル。オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソキサゾリル、イソキサゾリジニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、ホモピペリジニル、補もピペラジニル、ピリダジニル、及びモルホリニルがある。

「ヘテロ原子」なる用語は、本明細書で酸素原子（Ｏ）、硫黄原子（Ｓ）又は窒素原子（Ｎ）を意味して使用される。ヘテロ原子が窒素である場合それはＮＲＲ部分を形成し、ここでＲ基は、各々独立に、水素又はＣ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アミノアルキル、Ｃ_1-4ハロアルキル、ハロベンジルであるか、又はＲ¹及びＲ²は、任意にＯ、Ｓ又はＲ^Cを有する、５〜７員のヘテロシクロ環を当該環において共に形成し、ここでＲ^Cは水素又はＣ_1-4アルキルである。

本明細書で使用される「ヘテロアリール」なる用語は、５から１４個の環原子；６、１０又は１４個の環配列で共有するΠ電子を有し、炭素原子と、１、２、３又は４個の酸素、窒素又は硫黄のへテロ原子を含有する基のことを言う。（ここでのヘテロアリール基の例としては、チエニルｍ、ベンゾ［ｂ］チエニル、ナフト［２,３−ｂ］チエニル、チアンスレニル、フリル、ピラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、クロメニル、キサンセニル、フェノキサチイニル（phenoxathiinyl）、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キナゾリニル、シンノニリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、α、β、もしくはγ−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナントリニル、フェナンジニル、イソチアゾリル、フェノチアジニル、イソキサオゾリル、フラザニル及びフェノキサジニル基がある）。

本明細書で単独で又は別の基の一部として使用される「アラルキル」又は「アリールアルキル」なる用語は、アリール置換基を有する上記記載のＣ_1-6アルキル基のことを言い、例えばベンジル、フェニルエチル、又は２−ナフチルメチル等がある。

Ｃ_6-10アリールの範囲で好ましい基には、フェニル、ナフチル又はテトラヒドロナフチルがある。ヘテロアリールの範囲で好ましい基には、チエニル、フリル、ピラニル、ピロリル、ピリジニル、インドリル、及びイミダゾリルがある。ヘテロシクルの範囲で好ましい基には、ピペリジニル、ピロリジニル、及びモルホリニルがある。Ｃ_6-10アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクル、ヘテロシクル（Ｃ_1-4）アルキル又はＣ_3-6シクロアルキルの好ましい実施態様は、以下の、Ｃ_1-4アルキルチオ、Ｃ_1-4アルキルスルホニル、メトキシ、ヒドロキシ、ジメチルアミノ又はメチルアミノのうちの１個で置換された環が含まれる。

本発明の別の態様は、式I、I'、II、I"及びI'"の化合物を調製する方法に関する。

本明細書で記載の、Ａβ斑を標的とするプローブを集積する化学を使用する利点としては、１）合成は、フラグメントと重要な集積ステップに分解できる；２）本反応は、様々な置換基を用いてフラグメントに適用できるので、置換基の誘導基の集積を促進できる；３）コア構造（例えばジフェニルトリアゾールの三環系）が３つの窒素を含有し、これにより同等のチオフェン類似体と比較して親油性が低減する；４）窒素及び酸素原子の振り分けの組み合わせを含む、トリアゾール環の追加のバリエーションが、高い結合親和性をプローブに提供するのに適する５員環の範囲をさらに広げることができる；５）３環系上の様々な置換基により、生物動力学を調整する容易に調製されたプローブを提供でき、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ画像法によるシグナルのノイズ比の向上をもたらす。Sharplessと共同研究者等により報告されたＣｕ（Ｉ）触媒アジド−アルキン付加環化法を、ヨウ化リガンド１０ａ（７０％）及び１０ｂ（９８％）を集積するために利用した（スキーム１）。硫酸銅（II）／アスコルビン酸ナトリウムの組み合わせを、銅（I)をインサイツ（in situ）で調製するために利用し、「クリック反応（click reaction）」は室温１日で達成された。その後、パラジウム触媒トランス−スタンニル化により、トリブチルスズ前駆体１１ａ及び１１ｂを得て、放射標識し、それぞれ４５％及び６６％の収率であった。放射ヨウ素標識化リガンドについては、［¹²⁵］ヨウ化ナトリウム、過酸化水素及び塩酸を使用する標準的ヨウ素化脱スタンニル化反応が、［¹²⁵Ｉ］１０ａ及び［¹²⁵Ｉ］１０ｂの生成にうまく適用され、優れた収率（８０〜８５％）及び９５％超の放射化学純度が得られた。Fokin等により報告されたワンポット二段階アプローチは、フッ化及びヒドロキシペグ化ジフェニルトリアゾール誘導体１３ａ〜ｂの合成に利用した（スキーム２）。アルキル化ヨウ化ベンゼン１２ａ〜ｂ、末端アルキン８ａ〜ｂ及びアジ化ナトリウムをワンポット反応で直接反応させることにより、所望のジフェニルトリアゾール１３ａ〜ｂを、許容可能な収率で（６２％及び６５％）合成した。さらに、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）を０℃で0.5時間１３ｂと反応させることにより、フッ素ペグ化合物リガンド１３ｃを２０％の収率で得た。

所望のジフェニルトリアゾール誘導体１５ａ〜ｂを、Liang等により開発された修正ワンポット二段階アプローチにより調製した。この反応において、キレートリガンドトランス−Ｎ,Ｎ'−ジメチル−1,２−シクロヘキサンジアミン、ヨウ化銅（Ｉ）及び当量のアスコルビン酸ナトリウムを触媒として使用し、所望の反応を室温３時間で達成させ、その反応収率はそれぞれ９９％及び９２％であった。その後アルコール１５ａ〜ｂをトシル化１７ａ〜ｂに変換し（９６％及び９０％）、超音波支援フッ素化反応により、最終生成物１７ａ〜ｂを得た（８０％及び９９％）。

［¹⁸Ｆ］１７ａ及び［¹⁸Ｆ］１７ｂを得るため、ＤＭＳＯ中、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ ２２２及び炭酸カリウムの存在下で、対応するトシル化前駆体１６ａ及び１６ｂを、［¹⁸Ｆ］フッ素と１２０℃で４分間反応させた。得られた¹⁸Ｆ標識粗生成物をＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を７０分で得て、合成の最後で比放射能が、［¹⁸Ｆ］１７ａ及び［¹⁸Ｆ］１７ｂそれぞれ、６００及び８００ ｍＣｉ／μｍｏｌであった。放射化学純度は両リガンドとも＞９９％であり、放射化学収率は［¹⁸Ｆ］１７ａが５０％、［¹⁸Ｆ］１７ｂが３０％であった（減衰補正値）。

Ｔｃ−９９ｍ錯体は以下の通りに調製できる。少量の非放射標識化合物（１〜２ｍｇ）を１００μＬ ＥｔＯＨ中に溶解させ、２００μＬ ＨＣｌ（１Ｎ）及び１ｍＬ Ｓｎ−グルコヘプトネート溶液（８〜３２μｇ ＳｎＣｌ₂及び８０〜３２０μｇ Ｎａ−グルコヘプトネート含有、ｐＨ 6.67）及び５０μＬ ＥＤＴＡ溶液（0.1Ｎ）と混合する。その後［^99mＴｃ］過テクネチウム酸（１００〜２００μＬ、２〜２０ｍＣｉの範囲）食塩水を添加する。反応物を３０分間１００℃に加熱し、その後室温に冷却する。反応混合物を、生成物構造及び純度確認のため、ＴＬＣ（ＥｔＯＨ：濃ＮＨ₃ ９：１）で分析する。混合物は、リン酸バッファでｐＨ5.0に中性化できる。

本発明はさらに、本発明によるテクネチウム−９９ｍ錯体を調製する方法に関する。当該方法は、還元剤及び任意の好適なキレート剤の存在下、適切なＣｈ−含有化合物と、過テクネチウム酸状態のテクネチウム−９９ｍを反応させることによる。

還元剤は、生理食塩水中でモリブデン−テクネチウム発生器から溶出される、Ｔｃ−９９ｍ過テクネチウム酸を還元する機能を持つ。好適な還元剤は、例えば、亜ジチオン酸塩、ホルムアミジンスルフィン酸、ジアミノエタンジスルフィネート、又は好適な金属還元剤、Ｓｎ（II）、Ｆｅ（II）、Ｃｕ（Ｉ）、Ｔｉ（III）又はＳｂ（III）等がある。Ｓｎ（II）は、特に好適であることがわかっている。

上記の錯体形成反応については、テクネチウム−９９ｍを、本発明の適切な化合物と反応させ、塩又は比較的弱いキレート剤と結合したテクネチウムの状態とする。後者の場合、所望のテクネチウム−９９ｍ錯体は、リガンド交換により形成される。放射性核種用の好適なキレート剤の例としては、ジカルボン酸、例えばシュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、オルトフタル酸（orthophtalic acid）、リンゴ酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、サリチル酸又はこれらの酸の誘導体；リン化合物、例えばピロリン酸；又はエノラートがある。クエン酸、酒石酸、アスコルビン酸、グルコヘプトネート又はこれらの誘導体は、本目的にとって特に好適なキレート剤であり、それは、これらのキレート剤の１つを伴うテクネチウム−９９ｍのキレートは、所望のリガンド変換が特に容易に起きるためである。

［Ｔｃ^vＯ］⁺³Ｎ₂Ｓ₂錯体の調製のための、最も一般的に使用される方法は、一般的出発物質である［^99mＴｃ］過テクネチウム酸の塩化スズ（II）還元に基づくものである。標識方法は通常、Ｔｃ−９９ｍ（Ｓｎ）−グルコヘプオネートとＮ₂Ｓ₂リガンドとの間の、Ｔｃ−９９ｍリガンド変換反応による。塩化スズ（II）の調製及び一貫したスズ（II)状態での保存は、標識反応の成功のために非常に重要である。空気感受性第一スズイオンの安定化のために、核医学における定法は凍結乾燥キットを使用することであり、ここで凍結乾燥粉末状態の第一スズイオンを、窒素又はアルゴン等の不活性ガス下でグルコヘプトネートの過剰量と混合する。凍結乾燥塩化スズ／グルコヘプトネートキットの調製により、標識反応が、再現性良く且つ予測可能であることが保証される。Ｎ₂Ｓ₂リガンドは通常空気感受性であるので（チオールが空気により容易に酸化される）、リガンドの分解を導く後続反応が存在する。リガンドを保存する、最も便利且つ予想可能な方法は、１００〜５００μｇのリガンドを含有する凍結乾燥キットをアルゴン又は窒素下で作製することである。

本発明の化合物が造影剤として使用される場合、これは好適な放射線ハロゲン同位体で標識される必要がある。¹²⁵Ｉ−同位体は研究室での試験に有用であるが、¹²⁵Ｉの比較的長期の半減期（６０日）とガンマ線放射性の低さ（３０〜６５Ｋｅｖ）のために、実際の診断目的では一般的に有用でないだろう。同位体¹²³Ｉは、１３時間の半減期と、１５９Ｋｅｖのガンマ放射性を有するため、診断目的で使用されるリガンドの標識がこの同位体であることが期待される。その他の同位体としては¹³¹Ｉ（半減期２時間）を使用してもよい。好適な臭素同位体には、⁷⁷Ｂｒ及び⁷⁶Ｂｒがある。

本発明の放射ハロゲン化化合物は、その材料を使用者にキットとして提供し、それらの材料から形成する、という形態にも容易に適用することができる。当該造影剤を形成するためのキットは、例えば、最適な錯体形成条件に適する濃度及びｐＨで、式I、I'、II、I"及びI'"の中間体の好適な生理的溶液を含有するバイアルを含むことができる。使用者は、かかるバイアルに適切な量のＮａ¹²³Ｉ等の放射性同位体、及びか酸化水素等の酸化剤を添加できる。得られた標識リガンドは、その後、患者に静脈内投与され、ガンマ線又はその光放出の測定により脳における受容体が画像化される。

本発明の放射性医薬組成物が容易且つ単純に調製できるので、かかる調製は、使用者が容易に実施できる。従って、本発明は以下の、
（１）本発明の非放射標識化合物、当該化合物は任意に乾燥条件下であり；またそこに添加された不活性で医薬的に許容可能な担体及び／又は補助物質を任意に有する；及び
（２）還元剤と任意のキレート剤；
ここで、成分（１）及び（２）は任意に組み合わせられてもよい；
を含んでなるキットに関し、
さらにここで、成分（１）及び（２）を、過テクネチウム酸溶液状態のテクネチウム−９９ｍと反応させる上記の方法を実施するための記載を伴った使用のための指示書を任意に含有してもよい。

上記キット用の好適な還元剤及びキレート剤の例は、上記で列挙している。使用者は、過テクネチウム酸溶液を、モリブデン−テクネチウム発生器から得ることができる。当該発生器は、放射線診断学の方法を実施する多数の指示において利用可能である。上記の通り、成分（１）及び（２）は、混合可能な場合、組み合わせてもよい。かかる単一成分キットは、好ましくは組み合わせ成分が凍結乾燥されるが、使用者が単純な方法で過テクネチウム酸溶液を用いて反応するため非常に好適である。

所望の場合、放射線診断剤は、ｐＨ制御剤（例えば酸、塩基、バッファ）、安定化剤（例えばアスコルビン酸）又は等張化剤（例えば、塩化ナトリウム）等の任意の付加剤を含有してもよい。

本明細書で使用される「医薬的に許容可能な塩」なる用語は、本発明の化合物のカルボン酸塩又は酸付加塩等のことを言い、これは信頼できる医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応等がない患者の組織と接触する使用に好適で、ベネフィット／リスク比が妥当で、及び意図する使用に対して有効であるものであり、また可能な場合は本発明の化合物の両性イオン形態のことを言う。「塩」なる用語は、本発明の化合物の、比較的非イオン性の、無機及び有機酸付加塩のことを言う。また、脂肪族モノ及びジカルボン酸等の非毒性有機酸由来の塩、例えば酢酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸及びカルカン二酸、芳香族酸、並びに脂肪族及び芳香族スルホン酸等がある。これらの塩は、化合物の最終的な単離及び精製の間にインサイツで、又は別々に、遊離塩基状態のその精製化合物を好適な有機又は無機酸と反応させ、その結果形成された塩を単離することにより調製できる。さらに代表的な塩としては、臭化水素、塩化水素、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、古草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリル酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル化物、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル化メシル酸塩、グルコヘプタネート、ラクトビオン酸塩及びラウリルスルホン酸塩、プロピオン酸塩、ピバル酸塩、シクラミン酸塩、イセチオン酸塩等がある。これらは、アルカリ及びアルカリ土類金属上のカチオン塩基を含んでもよく、例えばリチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等があり、また非毒性アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミン等がある（例えばBerge S. M., et al, Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sci. 66:1-19 (1977) を参照のこと。これは参照により、本明細書に組み込まれる）。

本画像化方法の第一ステップにおいて、式I、I'、II、I"及びI'"の標識化合物を検出可能量で、組織又は患者に導入する。当該化合物は典型的には医薬的に許容可能な組成物の一部であり、当業者に周知の方法で組織又は患者に対して投与される。

標識化合物の患者への投与は、一般的又は局所的投与経路により行うことができる。例えば、当該化合物は、経口、経直腸、非経口（筋肉内又は皮下による静脈内）、大槽内経由、経膣、腹腔内経由、膀胱内経由、局所的（粉末、軟膏又はドロップ）、又は経頬もしくは経鼻スプレーとして、投与できる。標識化合物は、身体全体に送達されるよう患者に投与してもよい。あるいは、標的化合物を、注目の特定器官又は組織に投与することができる。例えば、患者におけるアルツハイマー病の進行を診断又は追跡するため、脳におけるアミロイド沈着を、位置付け及び定量化することが望まれる。脳の造影剤として最も望まれる特徴の１つは、ボーラスｉｖ注入後に、無傷の血液脳関門を通過する能力である。

本発明の好ましい実施態様によれば、標的化合物が検出可能量で患者に導入され、当該化合物がアミロイド沈着に結合するのに十分な時間経過後に、標識化合物が患者の内側で非侵襲的に検出される。本発明の別の実施態様によれば、式I、I'、II、I"及びI'"の標識化合物が患者に投入され、十分な時間で化合物をアミロイド沈着と結合させ、その後患者由来の組織サンプルが除去されるとともに、組織内の標識化合物が患者から分離して検出される。本発明の第三の実施態様によれば、組織サンプルが患者から除去され、式I、I'、II、I"及びI'"の標識化合物が当該組織サンプルに導入される。化合物がアミロイド沈着に結合するのに十分な時間の経過後、この化合物が検出される。

「組織」なる用語は、患者の身体の一部を意味する。組織の例としては、脳、心臓、肝臓、血管、及び動脈がある。検出可能量は、所定の検出方法により検出されるために必要な標識化合物の量である。検出用として提供するための患者へ導入する標識化合物の量は、当業者が容易に決定できる。例えば、標識化合物量の増加は、化合物が所定の検出方法で検出されるまで患者に与えることができる。標識は、化合物の検出用として提供する化合物に導入される。

「患者」なる用語は人及び他の動物を意味する。当業者であれば、化合物がアミロイド沈着と結合するための十分な時間量の決定にも精通している。必要な時間量は、式I、I'、II、I"及びI'"の標識化合物の検出可能量を、患者に導入し、その後投与後の様々な時間で標識化合物を検出することにより、容易に決定できる。

「結合する（associated）」なる用語は、標識化合物とアミロイド沈着との間の化学的相互作用を意味する。結合の例としては、共有結合、イオン結合、親水性−親水性相互作用、疎水性−疎水性相互作用、及び錯体が含まれる。

当業者であれば、標識化合物を検出する様々な経路に精通する。例えば、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）、又は単光子放出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）が、標識化合物の検出に使用できる。化合物に導入した標識は、所望の検出法に依存する。例えば、検出法としてＰＥＴを選択する場合、化合物は¹¹Ｃ又は¹⁸Ｆ当の陽電子放出原子を有する必要がある。放射線診断剤は、信頼できる診断を確保でいる、十分な放射線と放射線濃度を有するべきである。例えば、放射線金属がテクネチウム−９９ｍの場合、投与時に通常、約0.5〜5.0ｍｌ中0.1〜50ｍＣｉの量で含まれていてもよい。式I、I'、II、I"及びI'"の化合物量は、放射線金属を伴う安定なキレート化合物の状態等でもよい。すなわち、放射線診断剤としての形成されたキレート化合物は十分に安定であり、そのためすぐに投与されても、その使用まで保存されてもよい。所望の場合には、放射線診断剤は、ｐＨ制御剤（例えば酸、塩基、バッファ）、安定化剤（例えばアスコルビン酸）又は等張化剤（例えば、塩化ナトリウム）等の任意の付加剤を含有してもよい。

アミロイド沈着の画像化は定量的に行うことができ、そのためアミロイド沈着の量を決定することができる。

画像化用の好ましい化合物には、¹¹Ｃ、¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、¹⁸Ｆ、⁷⁶Ｂｒ又は⁷⁷Ｂｒが含まれる。

本発明の別の態様は、アミロイド斑凝集を阻害する方法である。本発明はまた、上記式I、I'、II、I"及びI'"の化合物のアミロイド阻害量を患者に投与することにより、アミロイド沈着を形成するアミロイドタンパク質の凝集を阻害する方法を提供する。

当業者であれば、アミロイド沈着の成長が減少又は停止するまでの増加量で、患者に対し、式I、I'、II、I"及びI'"の化合物を単純に投与することにより、アミロイド阻害量を容易に決定できる。成長比率は、上記の画像法の使用、又は患者から組織を採取しその中のアミロイド沈着を観察することにより評価できる。本発明の化合物は、患者に対し、１日当たり約0.1〜約1,000ｍｇの範囲の投薬量レベルで投与できる。体重が約７０ｋｇの正常な成人の場合、１日当たり体重ｋｇ当たり約0.01〜約100ｍｇの範囲の投薬量が十分である。ただし、使用される特定の投薬量は変動し得る。例えば、投薬量は多数の因子に依存する可能性があり、例えば、患者の要請、治療される症状の重症度、及び使用される化合物の薬学的活性がある。特定の患者のための最適な投薬量の決定は、当業者に周知である。

以下の例は限定するものではないが、本発明の方法及び組成物を例示するものである。その他の、通常行われる及び当業者に自明な、様々な条件及びパラメータの好適な変更及び適合化は、本発明の精神及び範囲内である。使用される全ての試薬は、市販の製品であり、特に指示がない限りさらなる精製を行わずに用いた。フラッシュクロマトグラフィ（ＦＣ）は、シリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ、Sigma- Aldrich）を用いて行った。調製用薄層クロマトグラフィ（ＰＴＬＣ）は、蛍光測定器を備えるシリカゲルプレート上で行い、２５４ｎｍの光で可視化した（Analtech）。各方法における「標準的作業」は、以下のステップのことを言う：指示した有機溶媒の添加、水その後のブラインでの有機層の洗浄、水層からの有機層の分離、硫酸ナトリウム又は硫酸マグネシウムでの混合有機層の乾燥、固体の濾別、及び減圧下での濾液の濃縮、である。¹Ｈ ＮＭＲスペクトルを２００ＭＨｚで観察し、¹³ＣＮＭＲスペクトルを５０ＭＨｚで記録した（Bruker DPX spectrometer）。ケミカルシフトを、内部ＴＭＳに対するδ値（百万分率）として記録した。カップリング定数は、ヘルツで記録した。多重度は、ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）、ｔ（トリプレット）、ｂｒ（ブロード）又はｍ（マルチプレット）により定義する。高解像度ＭＳ実験は、Micromass/Waters ＧＣＴ 装置を用いる質量分析用のMcMaster Regional Centreで行った（ＧＣ−ＥＩ／ＣＩ飛行時間質量分析）。本セクションで列挙したいくつかの化合物の純度を確認するため、２つのシステムを使用した。システムＡ条件：: Hamilton PRP-I逆相分析カラム（4.1 x 250 mm, 10 μm）、８０/２０ ＣＨ₃ＣＮ／１ｍＭ ギ酸アンモニウム（ｐＨ＝７）水バッファ、1.0ｍＬ／分、ＵＶ ３５０ｎｍ；システムＢ条件：Phenomenex シリカカラム（4.6 x 250 mm, 5 μm）、４０/６０ ＥｔＯＡｃ/ヘキサン、1.0ｍＬ／分、ＵＶ ３５０ｎｍである。本紙面で報告する全ての化合物は、両方のシステムで９５％超の純度を示した。

実施例１：調製化合物の合成
４−（１−（４−ヨードフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−４−イル）−Ｎ−メチルベンゼンアミン（１０ａ）
アルケン８ａ（0.042 g, 0.32 mmol）、アジド９（0.32 mmol, 0.079 g）及びアスコルビン酸ナトリウム（0.16 mL、新たに調製した1.0Ｍ溶液）を、tert−ブタノール/Ｈ₂Ｏ（１/１、２ｍＬ）に添加し、混合物全体を窒素で１０分間脱気した。硫酸銅（II）（ＣｕＳＯ₄、1.0Ｍ 水溶液、１６μＬ）を添加し、反応混合物を室温で（ｒ.ｔ.）２４時間、勢いよく攪拌した。氷冷水（１０ｍＬ）で希釈後、混合物を濾過し、冷水及び氷冷ＥｔＯＨで洗浄した。固体を真空下で乾燥させ、１０ａ（0.084 g, 70%）を淡緑色固体として得た。¹H NMR ((CD₃)₂CO) δ8.75 (s, 1 H), 7.99 (d, 2 H, J= 8.8 Hz), 7.82-7.72 (m, 4 H), 6.69 (d, 2 H, J= 8.7 Hz), 5.19 (brs, 1 H), 2.85, 2.83 (s, s, 3 H, -NCH3)。 ¹³C NMR (DMSOd₆) δ150.0, 148.4, 138.5, 136.4, 126.4, 121.6, 117.3, 117.0, 111.7, 93.7, 29.6. ＨＲＭＳ 計算値（計算値） Ｃ₁₅Ｈ₁₃ＩＮ₄ (Ｍ⁺)、376.0185； 実測値（found）、376.0168。

４−（１−（４−ヨードフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−４−イル）−Ｎ,Ｎ−ジメチルベンゼンアミン（１０ｂ）
１０ａの調製方法に従い、化合物１０ｂを、アルキン８ｂ（0.073 g, 0.50 mmol）及び９（0.147 g, 0.60 mmol）から調製し、淡黄色固体として得た（0.191 g, 98% 収率）。¹H NMR ((CD₃)₂CO)δ8.81 (s, 1 Η), 7.99 (d, 2 Η, J= 8.9 Hz), 7.86-7.73 (m, 4 H), 6.84 (d, 2 H, J= 8.9 Hz), 3.00 (s, 6 H)。 ¹³C NMR (DMSO-d₆). 8.81 (s, 1 H), 7.99 (d, 2 H, J= 8.9 Hz), 7.86-7.73 (m, 4 H), 6.84 (d, 2 H, J= 8.9 Hz), 3.00 (s, 6 H)。 ＨＲＭＳ 計算値Ｃ₁₆Ｈ₁₅ＩＮ₄ (Ｍ⁺), 390.0341; 実測値 390.0332。

４−（１−（４−（２−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−４−イル）−Ｎ−メチルベンゼンアミン（１３ａ）
２０ｍＬシンチレーションバイアルに、アルキン８ａ（0.040 g, 0.3 mmol）、ヨードベンゼン１２ｂ（0.106 g, 0.3 mmol）、Ｎａ₂ＣＯ₃（0.003 g, 0.03 mmol）、Ｌ−プロリン（0.0035 g, 0.003 mmol）、ＮａＮ₃（0.029 g, 0.45 mmol）、アスコルビン酸ナトリウム（0.006 g, 0.03 mmol）、ＣｕＳＯ₄（1.0 Ｍ水溶液、0.015 mL）及びＤＭＳＯ及びＨ₂Ｏ（９/１ Ｖ／Ｖ）の混合溶液1.0 mLを添加した。反応混合物を、脱酸素化のために窒素で１０分間パージし、その後６５℃で２４時間加熱した。ｒ.ｔ.に冷却後、反応混合物を、希釈アンモニア（２０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×１５ｍＬ）。混合した有機相をブラインで洗浄し（２×１０ｍＬ）、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残存物をＦＣに供し（ＥｔＯＡｃ/ヘキサン ７０/３０）、薄茶色固体１３ａを得た（0.745 g, 62%）。¹H NMR (CDCl3) δ7.97 (s, 1 H), 7.76-7.63 (m, 4 H), 7.06 (dt, 2 H, J1 = 9.0 Hz, J2 = 2.7 Hz), 6.72(d, 2 H, J= 8.6 Hz), 4.72-4.68 (m, IH), 4.49- 4.44 (m, IH), 4.20 (t, 2H, J= 2.5 Hz), 3.94-3.68 (m, 8H), 2.90 (s, 3 H)。 ¹³C NMR (CDCl₃) δ 159.0, 149.6, 148.9, 131.0, 127.1, 122.1, 119.5, 116.4, 115.6, 112.6, 85.0, 81.6, 71.04, 71.00, 70.8, 70.4, 69.8, 68.0, 30.7. ＨＲＭＳ 計算値 for Ｃ₂₁Ｈ₂₅ＦＮ₄Ｏ₃ (Ｍ⁺), 400.1911; 測定値 400.1895。

２−（２−（２−（４−（４−（４−（ジメチルアミノフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−１−イル）フェニル）エトキシ）エトキシ）エタノール（１３ｂ）
１３ａの調製方法に従い、化合物１３ｂを、１２ａ（0.176 g, 0.5 mmol）から調製し、薄黄色固体として得た（0.135 g, 65% 収率）。¹H NMR (CDCl₃)δ7.97 (s, 1 Η), 7.76 (d, 2 Η, J= 8.7 Hz), 7.64 (d, 2 H, J= 8.9 Hz), 7.02 (d, 2 H, J= 8.9 Hz), 6.79(d, 2 H, J = 8.6 Hz), 4.17 (t, 2H, J= 4.6 Hz), 3.85 (t, 2H, J= 4.6 Hz), 3.72-3.60 (m, 8H), 2.99 (s, 6 H), 2.61 (brs, IH)。 ¹³C NMR (CDCl₃) δ 159.0, 150.5, 148.8, 131.0, 129.4, 126.9, 122.1, 116.5, 115.6, 112.8, 72.6, 71.0, 70.5, 69.8, 68.0, 61.9, 40.7. ＨＲＭＳ 計算値 Ｃ₂₂Ｈ₂₈Ｎ₄Ｏ₄ (Ｍ⁺), 412.2111; 測定値 412.2106。

４−（ｌ−（４−（２−（２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−４−イル）−Ｎ,Ｎ−ジメチルベンゼンアミン（１３ｃ）
氷浴で（０℃）冷却したＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）中の１３ｂ（0.062 g, 0.15 mmol）の攪拌した溶液に、三フッ化ジエチルアミノ硫酸（ＤＡＳＴ, 0.039 mL, 0.30 mmol）を滴下しながら添加した。添加後に、反応混合物を0.5時間０℃に維持し、ＰＴＬＣに供し（ＥｔＯＡｃ/ヘキサン ７０/３０）薄茶色固体を１３ｃとして得た（0.013 g, 21%）。¹H NMR (CDCl₃) δ7.99 (s, 1 H), 7.79(d, 2 H, J= 8.7 Hz), 7.68 (d, 2 H, J= 9.0 Hz), 7.06 (d, 2 H, J= 9.0 Hz), 6.86 (d, 2 H, J= 8.1 Hz), 4.70 (t, IH, J= 4.2 Hz), 4.46 (t, IH, J= 4.2 Hz), 4.21 (t, 2H, J= 4.7 Hz), 3.93-3.68 (m, 8H), 3.02 (s, 6 H)。 ¹³C NMR (CDCl₃) δ 159.2, 148.8, 131.1, 127.1, 122.2, 116.6, 115.7, 113.4, 85.0, 81.7, 71.2, 71.1, 70.9, 70.5, 70.0, 69.8, 68.1, 41.1。 ＨＲＭＳ 計算値 Ｃ₂₂Ｈ₂₇ＦＮ₄Ｏ₃ (Ｍ⁺), 414.2067; 測定値 414.2067。

２−（４−（４−（４−（ジメチルアミノフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−１−イル）フェノキシ）エタノール（１５ａ）
１５ｍＬの２首フラスコに、アルキン８ａ（0.145 g, 1.0 mmol）、ヨードベンゼン１４ａ（0.264 g, 1.0 mmol）、トランス−Ｎ,Ｎ'−ジメチル−１,２−シクロヘキサンジアミン（0.024 mL, 0.15 mmol）、ＮａＮ₃（0.072 g, 1.1 mmol）、アスコルビン酸ナトリウム（0.02 g, 0.10 mmol）、ＣｕＩ（0.019 g, 0.10 mmol）及び３ｍＬのＤＭＳＯとＨ₂Ｏの混合溶液（5/1, V/V）を添加した。反応混合物を、脱酸素化のために窒素で１０分間パージし、ｒ.ｔ.で３時間、勢いよく攪拌した。氷冷水（１５ｍＬ）で希釈後、混合物を濾過し、氷冷水及び氷冷Ｅｔ₂Ｏで洗浄した。固体を乾燥させ、淡黄色固体１５ａを得た（0.323 g, 98%収率）。¹H NMR ((CD₃)₂CO) δ8.64 (s, 1 H), 7.87-7.76 (m, 4 H), 7.16 (dt, 2 H, J1 = 9.1 Hz, J2 = 2.8 Hz), 6.83 (dt, 2 H, J1 = 9.0 Hz, J2 = 2.1 Hz), 4.17 (t, 2 H, J= 4.8 Hz), 4.03-3.88 (m, 3 H, -OH, -CH₂), 3.00 (s, 6 H)。 ¹³C NMR ((CD₃)₂CO) δ 160.1, 151.6, 149.4, 131.9, 127.4, 122.5, 120.0, 117.6, 116.4, 113.4, 71.2, 61.4, 61.3, 40.6。 ＨＲＭＳ 計算値 Ｃ₁₈Ｈ₂₀Ｎ₄Ｏ₂ (Ｍ⁺), 324.1586; 測定値 324.1583。

３−（４−（４−（４−（ジメチルアミノフェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−１−イル）フェノキシ）プロパン−１−オール（１５ｂ）
１５ａの調製方法に従い、化合物１５ｂをヨウ化ベンゼン１４ｂ（0.278 g, 1.0 mmol）から調製し、淡黄色固体を得た（0.310 g, 92%収率）。¹H NMR ((CD₃)₂CO) δ8.64 (s, 1 H), 7.85-7.78 (m, 4 H), 7.15 (dt, 2 H, J1 = 9.0 Hz, J2 = 2.7 Hz), 6.83 (d, 2 H, J= 8.9 Hz), 4.20 (t, 2 H, J= 6.3 Hz), 3.75 (t, 2 H, J= 6.0 Hz), 2.99 (s, 6 H), 2.00 (pentet, 2 H,J= 6.2 Hz)。 ¹³C NMR ((CD₃)₂CO) δ 160.2, 151.6, 131.8, 127.4, 122.6, 120.0, 117.7, 116.3, 113.4, 66.2, 59.1, 58.9, 40.6, 33.4。 ＨＲＭＳ 計算値 Ｃ₁₉Ｈ₂₃Ｎ₄Ｏ₂ (Ｍ＋Ｈ⁺), 339.1822; 測定値 339.1825。

２−（４−（４−（４−（ジメチルアミノ）フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−１−イル）フェノキシ）エチル−４−メチルベンゼンスルホネート（１６ａ）
氷浴で（０℃）冷却したＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）中の１５ｂ（0.162 g, 0.5 mmol）の攪拌した溶液に、Ｅｔ3Ｎ（0.35 mL, 2.5 mmol）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（TsCl, 0.143 g, 0.75 mmol）及び触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、0.005g）を添加した。添加後に、反応混合物を０℃で１０分間維持した。氷浴を除去し、反応混合物を0.5時間ｒ.ｔ.に維持し、標準的作業に供した（溶媒：ＣＨＣｌ₃/ＭｅＯＨ、 90/10）。粗生成物をＦＣで精製し（ＣＨＣｌ₃/ＭｅＯＨ、 97/3）、淡白色固体として化合物を得た（0.228 g, 96%）。¹H NMR (CDCl₃) δ8.01 (s, 1 H), 7.86-7.79 (m, 4 H), 7.67 (d, 2 H, J= 9.0 Hz), 7.37 (d, 2 H, J= 8.5 Hz), 6.96-6.91 (m, 4 H), 4.44-4.40 (m, 2 H), 4.25-4.21 (m, 2 H), 3.05 (s, 6 H), 2.47 (s, 3H)。 ¹³C NMR (CDCl₃) δ 158.3, 148.8, 145,3, 132,8, 131.3, 130.0, 128.1, 126.9, 122.2, 116.8, 115.6, 113.2, 68.1, 66.0, 40.8, 21.7。

３−（４−（４−（４−（ジメチルアミノ）フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−１−イル）フェノキシ）プロピル−４−メチルベンゼンスルホネート（１６ｂ）
１６ａの調製方法に従って、化合物１６ｂを、アルコール１５ｃ（0.169 g, 0.5 mmol）から調製し、淡白色固体として得た（0.221 g, 90%収率）。¹H NMR ((CD₃)₂CO) δ8.65 (s, 1 Η), 7.84-7.77 (m, 6 Η), 7.40 (d, 2 Η, J= 8.0 Hz), 7.03 (dt, 2 H, J1 = 9.0 Hz, J2 = 2.8 Hz), 6.83 (d, 2 H, J= 8.9 Hz), 4.29 (t, 2 H, J= 6.0 Hz), 4.08 (t, 2 H, J= 5.9 Hz), 2.99 (s, 6 H), 2.38 (s, 3 H), 2.16 (pentet, 2 H, J= 6.0 Hz)。 ¹³C NMR ((CD₃)₂CO) δ 159.6, 151.6, 145.9, 131.0, 128.7, 127.4, 126.1, 122.5, 120.0, 117.7, 116.2, 113.4, 68.2, 64.7, 40.6, 21.6。

４−（ｌ−（４−（２−フルオロエトキシ）フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−４−イル）−Ｎ,Ｎ−ジメチルベンゼンアミン（１７ａ）
ＴＨＦ（1mL）中のトシル化物１６ａ（0.096 g, 0.20 mmol）溶液に、ＴＢＡＦ溶液（ＴＨＦ中1.0Ｍ、1.0 mL）を添加した。反応溶液を超音波発生器中で0.5時間、110℃に加熱した。冷却後、ＥｔＯＡｃと共に標準的作業を行い、残存物をＰＴＬＣで精製し（ＥｔＯＡｃ/ヘキサン、５０/５０）、薄茶色固体８ｃを得た（0.052 g, 80%）。¹H NMR ((CD₃)₂CO) δ 8.65 (s, 1 Η), 7.90-7.78 (m, 4 Η), 7.20 (dt, 2 Η, J1 = 9.1 Hz, J2 = 2.8 Hz), 6.83 (d, 2 H, J= 8.9 Hz), 4.96-4.923 (m, 1 H), 4.72-4.68 (m, 1 H), 4.48-4.44 (m, 1 H), 4.33-4.29 (m, 1 H), 3.00 (s, 6 H)。 ¹³C NMR ((CD₃)₂CO) δ 159.6, 151.7, 149.4, 132.3, 127.4, 122.6, 120.0, 117.7, 116.4, 113.4, 84.6, 81.3, 69.0, 68.6, 40.6。 ＨＲＭＳ 計算値 Ｃ₁₈Ｈ₁₉ＦＮ₄Ｏ (Ｍ⁺), 326.1543; 測定値 326.1532。

４−（ｌ−（４−（３−フルオロプロポキシ）フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−４−イル）−Ｎ,Ｎ−ジメチルベンゼンアミン（１７ｂ）
１７ａの調製方法に従って、化合物１７ｂを、トシル化物１６ａ（0.099 g, 0.2 mmol）から調製し、白色固体として得た（0.068 g, 100%収率）。¹H NMR ((CD₃)₂CO) δ 8.64 (s, 1 Η), 7.88-7.78 (m, 6 Η), 7.18 (dt, 2 Η, J1 = 6.8 Hz, J2 = 2.8 Hz), 6.83 (d, 2 H, J= 8.9 Hz), 4.79 (t, 1 H, J= 5.9 Hz), 4.56 (t, 1 H, J= 5.9 Hz), 4.23 (t, 2 H, J= 6.2 Hz), 2.99 (s, 6 H), 2.28 (pentet, 1 H, J= 6.0 Hz), 2.15 (pentet, 1 H, J= 6.0 Hz)。 ¹³C NMR ((CD₃)₂CO) δ 159.8, 151.6, 149.4, 132.1, 127.4, 122.6, 120.0, 117.7, 116.3, 113.4, 83.1, 79.9, 65.0, 40.6, 31.4, 31.0。 ＨＲＭＳ 計算値 Ｃ₁₉Ｈ₂₂ＦＮ₄Ｏ (Ｍ＋Ｈ⁺), 341.1779; 測定値 341.1776。

放射ヨウ素化
放射ヨウ素化化合物、［¹²⁵Ｉ］１０ａ及び１０ｂを、ヨウ素脱スタンニル化反応を介し、対応するトリブチルスズ前駆体１１a及び１１ｂから、既報の方法で調製した。過酸化水素（50 μL, 3% w/v）を、密封バイアル中の50 μLのトリブチルスズ前駆体（4 μg/μL EtOH）、50 μLの１Ｎ ＨＣｌ及び［¹²⁵Ｉ］ＮａＩ（１〜５ｍＣｉ、Perkin Elmerから購入）の混合物に添加した。反応を１０分間室温で進行させ、１００μＬの飽和ＮａＨＳＯ₃の添加により停止させた。1.5ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム溶液で中性化した反応混合物を、小サイズの予備調整したＣ−４ミニカラムにロードした。１０％、２０％エタノール溶液での連続的なリンスの後に、所望の生成物［¹²⁵Ｉ］１０ａ及び１０ｂを得た。放射化学純度を、逆相カラムを用いるＨＰＬＣで確認した（Phenomenex Gemini Ｃ18 分析カラム、4.6 x 250 mm, 5 μm、ＣＨ3ＣＮ/ギ酸アンモニウムバッファ（１ｍＭ） ８／２；流速0.5 mL/分）。担体未付加生成物を、−２０℃で最大６週間まで、動物実験、ホモジネート結合及びオートラジオグラフィ試験のために保存した。

放射フッ素化
［¹⁸Ｆ］フッ素を、¹⁸Ｏ（ｐ,ｎ）¹⁸Ｆ反応を用いるＪＳＷ ＢＣ３０１５型サイクロトロンにより調製し、Ｓｅｐ−Ｐａｋ Ｌｉｇｈｔ ＱＭＡカートリッジを通過させ、「¹⁸Ｏ］濃縮水中の水溶液として得た。カートリッジを気流で乾燥させ、¹⁸Ｆ活性物（activity）を1.3mLのＫｒｙｐｔｏｆｉｘ ２２２ （Ｋ２２２）/Ｋ₂ＣＯ₃溶液で溶出した（ＣＨ₃ＣＮ/Ｈ₂Ｏ 1.12/0.18中の、Ｋ２２２及び2.6 ｍｇのＫ₂ＣＯ₃が11 ｍＬ）。１２０℃アルゴン流動下で溶媒を除去した。残存物を、１ｍＬの無水ＣＨ₃ＣＮで、窒素流動下、共沸しながら２回乾燥させた。ＤＭＳＯ（0.2 ml）中のトシル化前駆体１６ａ又は１６ｂ（２ｍｇ）の溶液を、乾燥¹⁸Ｆ活性物を含有する反応容器に添加した。混合物を４分間１２０℃に加熱した。水（５ｍＬ)を添加し、混合物を、事前調整したＯＡＳＩＳ ＨＬＢカートリッジ（３ｃｃ）（Ｗａｔｅｒｓ）に通した。カートリッジを１０ｍＬの水で洗浄し、標識化合物を２ｍＬのＣＨ₃ＣＮで溶出した。溶出した化合物をＨＰＬＣで精製した。［Phenonemex Gemini Ｃ18 セミプレップカラム（10 x 250 mm, 5 μm）、ＣＨ₃ＣＮ/水 ７／３、流速３ｍＬ／分、ｔ_R＝１１分］。放射化学純度及び比放射能（specific activity）を、分析ＨＰＬＣにより決定した［Phenonemex Gemini Ｃ18分析カラム、(4.6 x 250 mm, 5 μm）、ＣＨ₃ＣＮ/ギ酸アンモニウムバッファ（１０ｍＭ） ８／２；流速１ｍＬ／分；ｔ_R＝4.8分（［¹⁸Ｆ］１７ａ）、5.7分（［¹⁸Ｆ］１７ｂ）］。比放射能は、既知の濃度の非放射線化合物の参照と、精製［¹⁸Ｆ］標識化合物のＵＶピーク強度を比較することにより推定した。

結合実験
ＡＤ死後脳組織をワシントン大学のアルツハイマー疾患研究センターから入手した。神経病理学的診断は、現行基準で確認された（NIA-Reagan Institute Consensus Group, 1997）。その後ホモジネートを、リン酸バッファ化食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ7.4）中の４人のプールＡＤ患者由来の解剖灰質から、およそ１００ｍｇ湿組織/ｍｌの濃度で調製した（モーター駆動ガラスホモジナイザーで６にセットして３０秒）。ホモジネートを１ｍＬずつ分割し、結合シグナルの消失がない限り最大２年まで−７０℃に保存した。

比放射能２，２００Ｃｉ／ｍｍｏｌと放射化学純度９５％超のリガンド［¹²⁵Ｉ］２を、標準的ヨウ素化脱スタンニル化反応を用いて調製し、上述の単純化Ｃ−４ミニカラムで精製した。結合アッセイを、12 x 75 mmホウケイ酸ガラス管中で実施した。競合実験のために、反応混合物には、５０ＤＬのプールＡＤ脳ホモジネート（２０〜５０μｇ）、５０μｌの［¹²⁵Ｉ］２（0.04〜0.06ｎＭ、ＰＢＳ希釈）及び５０μＬの阻害剤（１０^-5〜１０^-10Ｍ、0.1％ウシ血清アルブミン含有のＰＢＳで段階希釈）を、最終体積１ｍＬ中に含有させた。非特異結合を、同じアッセイ管中、６００ｎＭの２の存在下で規定した。混合物を３７℃で２時間インキュベートするとともに、室温で２×３ｍＬのＰＢＳ洗浄後のＢｒａｎｄｅｌ Ｍ-２４細胞ハーベスターを用いる、Ｗｈａｔｍａｎ ＧＦ／Ｂフィルターを通す真空濾過により、結合及び遊離の放射線を分離した。結合¹²⁵Ｉリガンドを、７０％の計数効率のガンマ計数器（Packard 5000）で計数した。アッセイ条件下で、非特異的結合フラクションは、２０％未満の総放射線であった。阻害事件の結果は、Ｋi値を計算する平衡結合データ解析を使用して、非線形回帰分析に供した。

同様に、ＡＤ及び対照者の脳組織の灰質及び白質から調製したホモジネートに対する、放射ヨウ素化及び放射フッ素化リガンドの特異結合（［¹²⁵Ｉ］プローブでは0.06ｎＭ、［¹⁸Ｆ］プローブでは0.5ｎＭ）は、対応する２μＭの非放射線プローブの存在下で決定した。

斑結合の特異性をさらに特徴付けるために、ＡＤ及び対照者の脳組織から調製した（異なる脳領域由来の）ホモジネートを使用する、直接インビトロ結合アッセイにより、［¹²⁵Ｉ］１０ａ及び［¹⁸Ｆ］１７ａを評価した。両リガンドとも、特異結合のシグナルは主にＡＤの灰質ホモジネートにおいて検出された。それとは対照的に、ＡＤ脳の白質ホモジネートにおいて、［¹²⁵Ｉ］１０ａ及び［¹⁸Ｆ］１７ａ両方の結合シグナルは、非常に低いか存在しなかった（図５）。対照者脳組織のホモジネートにおいて（灰質及び白質の両方）特異結合シグナルは低かった。これは、ＡＤ脳について高度に選択的であるが、それが単にこれらの脳サンプル中に沈着したＡβ斑の存在が原因であることを示唆した。

インビトロオートラジオグラフィ
ヒト脳組織の類似する切片を使用する異なるプローブの比較のために、ＡＤ症例と確認された６人と対照者の１人由来の、ヒトマクロアレイ脳切片を集めた。切片上の斑の存在及び位置を、モノクローナルＡβ抗体４Ｇ８（Sigma）を用いる免疫組織化学染色で確認した。凍結切片を、［¹²⁵Ｉ］及び［¹⁸Ｆ］トレーサー（200,000-250,000 cpm/200 μL）と共に室温で１時間インキュベートした。その後切片を、４０％ＥｔＯＨ中の飽和炭酸リチウム中に浸漬させ（２回の２分洗浄）、４０％ＥｔＯＨで洗浄し（１回の２分洗浄）、その後水で３０秒間洗浄した。乾燥後、¹²⁵Ｉ−又は¹⁸Ｆ−標識切片をＫｏｄａｋ Ｂｉｏｍａｘ ＭＲフィルムに一晩晒した。

正常マウスにおける器官分布
イソフルラン麻酔をかけた状態で、［¹²⁵Ｉ］又は［¹⁸Ｆ］トレーサー含有（５〜１０μＣｉ）の、0.15ｍＬの0.1％牛血清アルブミン溶液をＩＣＲマウス（２２〜２５ｇ、雄）の尾静脈に直接注入した。マウス（各時点でｎ＝３）を、注入後の指定時点で、頸椎脱臼により犠牲にした。注目の器官を除去して重量測定をし、放射線を自動ガンマ計数器で計数した。器官当たりの割合用量を、注入物質の適切に希釈した分割物についての組織計数の比較により計算した。血液の総活性は、それが総体重の７％であると想定して計算した。サンプルの％用量／ｇは、希釈した初回用量の計数と、サンプルの計数を比較することにより計算した。

フィルムオートラジオグラフィ
［¹⁸Ｆ］トレーサー：ＡＤ対象者由来の脳切片を、粉末ドライアイス中で凍結し、２０マイクロメーター厚の切片に切り分けることにより得た。切片を［¹⁸Ｆ］トレーサー（200,000-250,000 cpm/200 μl）と共に１時間室温でインキュベートした。４０％ＥｔＯＨ中の飽和Ｌｉ₂ＣＯ₃中に浸漬させ（２回の２分洗浄）、４０％ＥｔＯＨで洗浄し（１回の２分洗浄）、その後水で３０秒間洗浄した。乾燥後、¹⁸Ｆ−標識切片をＫｏｄａｋ ＭＲフィルムに一晩晒した。結果を図２のフィルムに示す。

［¹²⁵Ｉ］トレーサー：ヒト脳組織の類似する切片を使用する異なるプローブの比較のために、ＡＤ症例と確認された６人と対照者の１人由来の、ヒトマクロアレイ脳切片を集めた。切片上の斑の存在及び位置を、モノクローナルＡβ抗体４Ｇ８（Sigma）を用いる免疫組織化学染色で確認した。凍結切片を、［¹²⁵Ｉ］トレーサー（200,000-250,000 cpm/200 μL）と共に室温で１時間インキュベートした。その後切片を、４０％ＥｔＯＨ中の飽和Ｌｉ₂ＣＯ₃中に浸漬させ（２回の２分洗浄）、４０％ＥｔＯＨで洗浄し（１回の２分洗浄）、その後水で３０秒間洗浄した。乾燥後、¹²⁵Ｉ−標識切片をＫｏｄａｋ Ｂｉｏｍａｘ ＭＲフィルムに一晩晒した。

マクロアレイブロックを、ＡＤ症例と確認された７人からなる死後ヒト脳サンプルを使用して構築した。このマクロアレイブロックを区分した後、同じ病態生理を反映する隣接した切片を使用した。インビトロフィルムオートラジオグラフィを、これら新規な¹²⁵Ｉ又は¹⁸Ｆ標識ジフェニルトリアゾールプローブを用いて行った。試験したプローブの中で、［¹⁸Ｆ］１７ａ及び［¹⁸Ｆ］１７ｂは、ＡＤ脳の白質領域において、最も顕著なＡβ斑標識及び最小レベルのバックグラウンドを示した（図５）。標識パターンは、Ａβ特異的な抗体（４Ｇ８）と共に免疫組織化学標識することにより観察されるものと一致した（データは示さない）。斑に加え、標識［¹²⁵Ｉ］１０ａは、同様のインキュベーション条件下で、顕著な白質標識を示した（図５）。同様のパターンはまた、放射ヨウ素化Ｎ,Ｎ'−ジメチル化プローブ［¹²⁵Ｉ］１０ａで観察された（データは示さない）。［¹²⁵Ｉ］１０ａ及び［¹²⁵Ｉ］１０ｂで観察されたバックグラウンド標識の高さが、その親油性の高さと関連する可能性がある（それぞれ、log P = 3.0 及び 3.4）。

分配係数
［¹²⁵Ｉ］又は［¹⁸Ｆ］トレーサーを、各々３ｇの１−オクタノール及びバッファ（0.1Ｍ リン酸、ｐＨ7.4）と、試験管中で混合することにより、分配係数を測定した。試験管を、室温で３分間ボルテックスにかけ、５分間の遠心分離を行った。１−オクタノール及びバッファ層から得た２つの重量サンプル（各0.5ｇ）を、ウェル計数器で計数した。分配係数を、１−オクタノールcpm／gの、バッファのものに対する比率で計算することにより決定した。１−オクタノール層由来のサンプルは、整合的な分配係数が得られるまで再分配した。測定は三重に行い、３回繰り返した。

中程度の親油性（log P = 1〜3.5）はかなり望ましい特性と考えられる。放射フッ素化ジフェニルトリアゾール［¹⁸Ｆ］１７ａ及び［¹⁸Ｆ］１７ｂは、２つの放射ヨウ素化トリアゾール［¹²⁵Ｉ］１０ａ及び［¹²⁵Ｉ］１０ｂが示すそれぞれlog P ＝3.0及び3.4と比較して、より低いＰＣ（log P = 2.7）を示した。

生体内分布
正常マウスでこれらの放射標識トリアゾールを評価した全動物分布から、優れた初期の脳透過性が示された（２分で6〜9.5% 用量/g）（図３）。これらの放射標識プローブで観察された初期の（注入後２分での）高い脳取り込み、特に放射ヨウ素化プローブ［¹²⁵Ｉ］１０ａ及び［¹²⁵Ｉ］１０ｂは、注入後２時間での脳への残存が0.5％用量／ｇ未満という急速な洗い出しがその後に起きた（図４）。［¹⁸Ｆ］１７ａ及び［¹⁸Ｆ］１７ｂは、当初は急速な洗い出しを示し、その後はマウス脳からの段階的且つより低速なクリアランスが続き、より高い残存放射線を維持した（トレーサー注入後２時間で１〜２％用量／ｇ）。すなわち、２つのヨウ素化プローブ［¹²⁵Ｉ］１０ａ及び［¹²⁵Ｉ］１０ｂは、より高く且つより良好な各々5.66及び3.72の脳洗い出し指標となり、これは［¹⁸Ｆ］１７ａ及び［¹⁸Ｆ］１７ｂの、より低い各々2.34及び2.31の指標と比較すると、Ａβ斑の検出においてより好ましい。インビボにおいて多量の脱フッ素化（骨取り込みを反映する）が［¹⁸Ｆ］１７ａ（4.64％用量／ｇ、補強データ）及び［¹⁸Ｆ］１７ｂ（18.59％用量／ｇ、補強データ）で観察された。これらの値は、従前のＰＥＴリガンドで報告された値と比較して、５〜１０倍高い。以下の表１に、化合物［¹⁸Ｆ］１７ｂの生体内分布データを示す。

表１．0.1％ＢＳＡ中の［¹⁸Ｆ］１７ｂ／水中の＜１％ＥｔＯＨの静脈内注入後のＩＣＲマウスにおける生体内分布（％用量／ｇ、３匹のマウスの平均±ＳＤ）

２−（４−（４−（４−（ジメチルアミノ）フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−１−イル）−２−ヨードフェノキシ）エタノール

２−（４−（４−（４−（ジメチルアミノ）フェニル）−１Ｈ−１,２,３−トリアゾル−１−イル）−２−［¹²³Ｉ］ヨードフェノキシ）エタノール

総括
¹²³Ｉ−３３は、アルツハイマー病によると思われる認知障害を持つ患者における、アミロイド−β（Ａβ）病変（アミロイド斑の主要な構成成分）のＳＰＥＣＴ画像化に有用な可能性がある新規なトレーサーである。¹²³Ｉで標識されたＳＰＥＣＴ剤は、長い半減期（およそ１３時間）を持つため、集中的に調製され、局所的又はその場での放射合成に関与する潜在的なコスト及び変動性を低減できる。これらの固有の利点は、¹²³Ｉ−３３の優れたアミロイド結合特性と共に、¹²³Ｉ−３３をＡβ造影剤として試験する強力な論拠を提供する。

化合物３３は、アミロイド斑への高親和性と特異結合を示し、これは既知のアミロイド結合剤¹²⁵Ｉ−ＩＭＰＹ（６−ヨード−２−（４'−ジメチルアミノ）フェニル−イミダゾ［１,２−α］ピリジン）を用いる競合結合試験により実証される。これらの実験において、化合物３３は、7.5 ± 0.5 nMのＫiを示し、他の実験用アミロイド造影剤と同等であった。トレーサー濃度で適用された場合、¹²³Ｉ−３３は、病理学的に確認されたＡＤに罹患する患者由来の切片におけるＡβ斑を特異的に標識する。

表２．化合物３３の薬学特性

マウスのインビボ実験において、¹²³Ｉ−３３は、脳造影剤としての適切な生体内分布を示した。雄マウスにｉ.ｖ.投与する場合、¹²³Ｉ−３３は脳に素早く進入し、投与後２分以内に3.7％用量／ｇの脳内濃度のピークに達し、６０分以内に0.25％用量／ｇまで落ちた。同様の結果は、雌のマウスでも見られた。マウスのデータからの外挿に基づくヒトの線量測定の推定では、用量限定器官は（甲状腺遮断を仮定すると）腸管であることが示される。提案された５ｍＣｉヒト用量で、およそ3.8ｒｅｍを受けると推定される大腸が低下するほど、およそ3.3ｒｅｍの暴露を受けると推定される大腸が上昇する。およそ1.26ｒｅｍの推定ヒト有効用量（ＥＤ）は、¹²³Ｉ−ＭＩＢＧ、¹²³Ｉ−ＩＭＰＹ及び¹²³Ｉ−βＣＩＴ等の、その他の¹²³Ｉ−標識ＳＰＥＣＴ画像化放射線医薬の推奨用量のものと同等である。

¹²⁵Ｉ−ＩＭＰＹ結合の阻害により測定される、ＡＤ脳ホモジネートにおける化合物３３の結合親和性
死後の脳組織を入手し、神経病理学的診断をＮＩＡ−Reagan Institute Consensus Groupの基準に従って確認した。その後、ホモジネートを、リン酸バッファ化食塩水中にプールされ１ｍＬに分割（１００ｍｇ湿組織／ｍｌ）した解剖灰質から調製した。これは結合シグナルの消失のない限り３〜６ヶ月、−７０℃で保存できる。結合アッセイのために、脳ホモジネートを、¹²⁵Ｉ−ＩＭＰＹ（0.04〜0.06ｎＭ、リン酸バッファ化食塩水（ＰＢＳ）で希釈）及び試験化合物（１０^-5〜１０^-10Ｍ、0.1％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）含有ＰＢＳで希釈）と共にインキュベートした。非特異的結合は、ＩＭＰＹ（６００ｎＭ）の存在下で規定された。結合及び遊離の放射線は、真空濾過により分離され、２×３ｍｌのＰＢＳ洗浄が後続した。結合¹²⁵Ｉリガンドを含有するフィルターを、ガンマ計数器で評価した。

化合物３３は本アッセイにおいて¹²⁵Ｉ−ＩＭＰＹ結合を、Ｋi＝7.5 ± 0.5 nMで強力に阻害した。これはヒトで試験されたものと推定される他のアミロイド造影剤として既報のＫｉ値と同等である（表３）。

表３．ＡＤ脳ホモジネートへの、化合物３３及び他のアミロイド斑リガンドの結合親和性（Ｋｉ 対 ¹²⁵Ｉ−ＩＭＰＹ）

ＰＩＢ＝Ｎ−メチル［¹¹Ｃ］２−４'メチルアミノフェニル−６−ヒドロキシベンザチアゾール（ピッツバーグ化合物 Ｂ）
ＦＤＤＮＰ＝２−（１−｛６−［（２−フルオロエチル）（メチル）アミノ］−２−ナフチル｝エチリデン）マロノニトリル

正常マウスにおける器官分布
イソフルラン麻酔をかけた状態で、¹²³Ｉ−３３含有（５〜１０μＣｉ）の、0.15ｍＬの0.9％食塩水をＩＣＲマウス（２２〜２５ｇ、雄）の尾静脈に直接注入した。マウス（性別当たり各時点でｎ＝３）を犠牲にし、注目の器官を除去して重量測定をし、自動ガンマ計数器で計数した。器官当たりの割合用量を、注入物質の適切に希釈した分割物についての組織計数の比較により計算した。血液の総活性は、それが総体重の７％であると想定して計算した。サンプルの％用量／ｇは、希釈した初回用量の計数と、サンプルの計数を比較することにより計算した。結果（表４）は、¹²³Ｉ−３３が容易に透過し、迅速に正常マウスの脳から除去されることを示した。

表．４：正常マウスにおける静脈内注入後の¹²³Ｉ−３３の生体内分布（３匹のマウスの平均±ＳＤ）％用量／器官及び％用量／血液、筋肉、皮膚及び骨のｇは、これらの組織が、それぞれ体重の７％、４０％、１５％及び１４％を表すという想定で計算した。
％用量／器官

血液、筋肉、皮膚及び骨の％用量／器官は、これらの組織が、それぞれ体重の７％、４０％、１５％及び１４％であるという想定で計算した。
（血液：７％、筋肉：４０％、皮膚：１５％、骨：１４％）

％用量／ｇ

分配係数
３３を、各々３ｇの１−オクタノール及びバッファ（0.1Ｍ リン酸、ｐＨ7.4）と、試験管中で混合することにより、分配係数を測定した。試験管を、室温で３分間ボルテックスにかけ、５分間の遠心分離を行った。１−オクタノール及びバッファ層から得た２つの重量サンプル（各0.5ｇ）を、ウェル計数器で計数した。分配係数を、１−オクタノールcpm／gの、バッファのものに対する比率で計算することにより決定した。１−オクタノール層由来のサンプルは、整合的な分配係数が第三分配から得られるまで再分配した。測定は三重に行い、３回繰り返した。¹²³Ｉ−３３の分配係数は、１７８８（logP = 3.25）と決定された。

0.1％ＢＳＡ中の［¹⁸Ｆ］１７ｂ／水中の＜１％ＥｔＯＨの静脈内注入後のＩＣＲマウスにおける生体内分布
（％用量／器官、３匹のマウスの平均±ＳＤ）

（％用量／ｇ、３匹のマウスの平均±ＳＤ）

本発明の化合物を、Ａβオリゴマー及び原線維の形成を阻害する能力を、確立されたインビトロ免疫ブロットアッセイ（Yang F, Liim GP, Begum AN et al. Curcumin inhibits formation of amyloid β oligomers and fibrils, binds plaques, and reduces amyloid in-vivo. J. Biol. Chem. 280:5892-5901, 2005）で試験する。天然分子のクルクミンは、ポジティブコントロールとして機能する。本発明の化合物は、１〜１００μＭの濃度でクルクミンと同様の方法で凝集Ａβを阻害できる。

当業者であれば、本発明又はその任意の実施態様の範囲に影響を及ぼすことなく、条件、処方、及び他のパラメータの幅広く且つ同等の範囲内で、同じものが実施できると解される。本明細書で引用される、全ての特許文献、特許出願、及び刊行物は、その全体が本明細書に参照により完全に組み込まれる。

Claims (25)

1. 式Ｉ
   

   

   （式中、
   Ｗ、Ｙ及びＺは、各々独立にＣＨ、Ｎ、ＮＨ、Ｏ又はＳであり、ただしＷ、Ｙ及びＺの少なくとも１つがＮ又はＯであることを条件とし、
   Ｖ及びＸは、独立にＣ又はＮであり、
   Ａ¹及びＡ²は、可能であれば独立にＮ、ＣＲ³又はＣＲ⁴であり、
   Ｒ¹及びＲ²は、独立に、
   −（ＣＨ₂）_pＮＲ^aＲ^bであって、Ｒ^a及びＲ^bが、独立に、水素、（Ｃ_1-4）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキル又はハロ（Ｃ_1-4）アルキルであるとともに、ｐは０から５の整数である−（ＣＨ₂）_pＮＲ^aＲ^bであるか、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、ヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキル、ハロゲン、シアノ、水素、ニトロ、（Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル、ハロ（Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル、ホルミル、−ＮＨＣＯ（Ｃ_1-4アルキル）、−ＯＣＯ（Ｃ_1-4アルキル）、又は放射性ハロゲンであり、
   Ｒ³は、水素であるか、以下のｉ〜ｖｉ
   

   

   （式中、ｑは１から１０の整数であり、Ｒ^x及びＲ^yは、水素、ヒドロキシ又は（Ｃ_1-4）アルキルであり、ｔは０、１、２又は３であり、Ｚは、ハロゲン、ヒドロキシ、ＯＴｓ（トシレート）又はアミノであり、並びにＲ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³は、いずれも独立に、水素、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、（Ｃ_1-4）アルキル、又はヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）、
   

   

   （式中、Ｒ^x及びＲ^yは、水素、ヒドロキシ又は（Ｃ_1-4）アルキルであり、ｔは０、１、２又は３であり、Ｙは、ハロゲン、ハロゲン置換ベンゾイルオキシ、ハロゲン置換フェニル（Ｃ_1-4）アルキル、ハロゲン置換アリールオキシ、又はハロゲン置換（Ｃ_6-10）アリールであり、Ｕは、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、ハロゲン置換ベンゾイルオキシ、ハロゲン置換フェニル（Ｃ_1-4）アルキル、ハロゲン置換アリールオキシ、又はハロゲン置換Ｃ_6-10アリールであり、並びにＲ³⁴、Ｒ³⁵、Ｒ³⁶、Ｒ³⁷、Ｒ³⁸、Ｒ³⁹及びＲ⁴⁰は、いずれも独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、（Ｃ_1-4）アルキル、又はヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）、
   iii．ＮＲ'Ｒ"（式中、Ｒ'及びＲ"の少なくとも一方は、（ＣＨ₂）_dＸであり、ここでＸはハロゲン、好ましくはＦ又は¹⁸Ｆであり、ｄは１から４の整数であり、Ｒ'及びＲ"の他方は、水素、（Ｃ_1-4）アルキル、ハロ（Ｃ_1-4）アルキル、又はヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）、
   ｉｖ．ＮＲ'Ｒ"−（Ｃ_1-4）アルキル（式中、Ｒ'及びＲ"の少なくとも一方は、（ＣＨ₂）_dＸであり、ここでＸはハロゲン、好ましくはＦ又は¹⁸Ｆであり、ｄは１から４の整数であり、Ｒ'及びＲ"の他方は、水素、（Ｃ_1-4）アルキル、ハロ（Ｃ_1-4）アルキル、又はヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）
   ｖ．ハロ（Ｃ_1-4）アルキル、
   ｖｉ．［ハロ（Ｃ_1-4）アルキル−Ｏ−（Ｃ_1-4）アルキル］−構造を有する、エーテル（Ｒ−Ｏ−Ｒ）
   の少なくとも１つであり、
   及び
   Ｒ⁴は、水素、ハロゲン、放射性ハロゲン又は−（Ｃ_1-4アルキル）₃Ｓｎであり、
   ここでＲ³及びＲ⁴の一方は水素以外であることを条件とする）
   の化合物、又は医薬的に許容可能なその塩。
2. Ｖ、Ｗ及びＸが、各々Ｎであり、式Ｉ'
   

   

   を有する、請求項１の化合物。
3. Ｒ²が、水素、ハロゲン又は放射性ハロゲンである、請求項１の化合物。
4. Ｒ²が水素である、請求項１の化合物。
5. Ｒ¹が、ヒドロキシ又はＮＲ^aＲ^b（ＣＨ₂）_p−であり、ここでＲ^a及びＲ^bは独立に、水素又は（Ｃ_1-4）アルキルであるとともに、ｐは０である、請求項１の化合物。
6. Ｒ³が、
   

   

   である、請求項１の化合物。
7. ｑが、１から１０の整数である、請求項６の化合物。
8. ｑが、１、２又は３である、請求項６の化合物。
9. ｔが０である、請求項６の化合物。
10. Ｒ³⁰、Ｒ³¹、Ｒ³²及びＲ³³が、いずれも水素である、請求項６の化合物。
11. Ｗ、Ｙ及びＺがＯである、請求項１の化合物。
12. 

    

    

    である、請求項１の化合物。
13. 前記化合物が放射性ハロゲンを含んでなる、請求項１２の化合物。
14. Ｒ³が、
    

    

    である、請求項１の化合物。
15. Ｒ³⁴、Ｒ³⁵、Ｒ³⁶及びＲ³⁷、Ｒ³⁸、Ｒ³⁹及びＲ⁴⁰が、いずれも水素であり、ｔが０である、請求項１４の化合物。
16. Ｙがヒドロキシであり、Ｕがハロゲンである、請求項１５の化合物。
17. 以下の構造
    

    

    （式中、
    Ｗ、Ｙ及びＺは、各々独立にＣＨ、Ｎ、ＮＨ、Ｏ又はＳであり、ただしＷ、Ｙ及びＺの少なくとも１つがＮ又はＯであることを条件とし、
    Ｖ及びＸは、独立にＣ又はＮであり、
    Ａ¹及びＡ²は、可能であれば独立に、Ｎ、ＣＲ¹³又はＣＲ¹⁴であり、
    Ｒ¹¹及びＲ¹²は、独立に、
    −（ＣＨ₂）_pＮＲ^aＲ^bであって、Ｒ^a及びＲ^bが、独立に、水素、Ｃ_1-4アルキル、ヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキル又はハロ（Ｃ_1-4）アルキルであるとともに、ｐは０から５の整数である−（ＣＨ₂）_pＮＲ^aＲ^bであるか、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、ヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキル、ハロゲン、シアノ、水素、ニトロ、（Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル、ハロ（Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル、ホルミル、−ＮＨＣＯ（Ｃ_1-4アルキル）、又は−ＯＣＯ（Ｃ_1-4アルキル）であり、
    Ｒ¹⁴は、水素であり、
    Ｒ¹³は、
    

    

    （式中、ｑは１から１０の整数であり、Ｒ^x及びＲ^yは、水素、ヒドロキシ又は（Ｃ_1-4）アルキルであり、ｔは０、１、２又は３であり、Ｚは、−Ｃｈである）、
    

    

    （式中、Ｒ^x及びＲ^yは、水素、ヒドロキシ又はＣ_1-4アルキルであり、ｔは０、１、２又は３であり、Ｙは、−Ｃｈであり、Ｕは、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、ハロゲン置換ベンゾイルオキシ、ハロゲン置換フェニル（Ｃ_1-4）アルキル、ハロゲン置換アリールオキシ、又はハロゲン置換（Ｃ_6-10）アリールからなる群から選択され、並びにＲ³⁴、Ｒ³⁵、Ｒ³⁶、Ｒ³⁷、Ｒ³⁸、Ｒ³⁹及びＲ⁴⁰は、いずれも独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、及びヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）、
    ｉｖ．−（ＣＨ₂）_w−Ｏ−Ｃｈ（式中、ｗは１から１０の整数である）、
    ｖ．−Ｃｈ、
    ｖｉ．−（ＣＨ₂）_w−Ｃｈ（式中、ｗは１から１０の整数である）
    ここで、部分「−Ｃｈ」は、金属キレートを形成するように金属と錯体化できるキレートリガンドである）
    を有する化合物、又は医薬的に許容可能なその塩。
18. 前記−Ｃｈ部分が、以下の構造
    

    

    （式中、Ｒ^Pは、水素又はスルフヒドリル保護基であり、並びにＲ⁹、Ｒ¹⁰、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ⁴³及びＲ⁴⁴は、いずれも独立に、水素、ヒドロキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、（Ｃ_1-4）アルコキシ、（Ｃ_1-4）アルキル、又はヒドロキシ（Ｃ_1-4）アルキルである）
    を有する、請求項１７の化合物。
19. 前記−Ｃｈ部分が、以下の構造
    

    

    を有する、請求項１７の化合物の放射性金属錯体。
20. 以下の構造
    

    

    を有する、請求項１の化合物。
21. 以下の一般構造
    

    

    を有する、請求項１の化合物。
22. 請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物を含んでなる、医薬組成物。
23. 請求項１〜２１のいずれか１項に記載の放射標識化合物を含んでなる、アミロイド沈着を画像化するための、診断用組成物。
24. アミロイド沈着を画像化する方法であって、
    ａ．請求項２３の診断用組成物の検出可能量を哺乳類に導入すること、
    ｂ．標識化合物がアミロイド沈着と結合するための十分な時間をとること、
    ｃ．１又は複数のアミロイド沈着と結合する標識化合物を検出すること、
    を含んでなる方法。
25. 請求項２２の組成物を、アミロイド斑凝集の阻害有効量で投与することを含んでなる、哺乳類においてアミロイド斑凝集を阻害する方法。

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