PT2170857E - Derivados 3',4',5-trimetoxiflavona como estimulantes da secreção de muco, método correspondente e composição farmacêutica compreendendo os referidos derivados - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "DERIVADOS 3 ' , 4 ' ,5—TRIMETOXIFLAVONA COMO ESTIMULANTES DA SECREÇÃO DE MUCO, MÉTODO CORRESPONDENTE E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO OS REFERIDOS DERIVADOS"

DOMÍNIO TÉCNICO A presente invenção refere-se a um derivado 3',4',5-trimetoxiflavona e um respetivo sal farmaceuticamente aceitável, sua preparação, e uma composição farmacêutica para o tratamento e prevenção da síndroma do olho seco compreendendo o referido derivado como ingrediente ativo.

ANTECEDENTES DA TÉCNICA Á síndroma do olho seco é um estado clínico comum caracterizado por produção deficiente de lágrimas ou evaporação excessiva de lágrimas, que pode dever-se a uma variedade de fatores causativos. Por exemplo, a inflamação das glândulas lacrimais (dacrioadenite) e denervação corneana podem restringir a produção de lágrimas, ao passo que uma disfunção das glândulas meibomianas e perturbações das pálpebras, como fecho incompleto das pálpebras, são frequentemente responsáveis por evaporação rápida de lágrimas. Além disso, foi relatado que respostas inflamatórias mediadas por células T são responsáveis pela patogénese da síndroma do olho seco (Eye Contact Lens, 29_ (1 Suplemento): S96-100, 2003; e Ophthalmologe, 103: 9-17, 2006) .

Um filme lacrimal segrega continuamente uma dada quantidade de lágrimas que não só irão proporcionar efeitos de esterilização mas também participar no revestimento suave e lubrificação de superfícies oculares, desempenhando um 2 papel importante na manutenção da visão. Três camadas principais constituem o filme lacrimal. Especificamente, a camada mais interna é uma camada de mucina produzida por células de Goblet da conjuntiva, a camada intermédia é uma camada aquosa segregada pela glândula lacrimal e a camada mais superficial é uma camada muito fina de lipidos (gorduras ou óleos) segregados pela glândula meibomiana.

Habitualmente, os pacientes com síndroma do olho seco podem sentir ardor e picadas, sensação arenosa ou de corpos estranhos, prurido, vermelhidão e os outros sintomas de desconforto ocular. Em casos graves, a visão pode ser substancialmente enfraquecida. No início, a síndroma do olho seco foi reconhecida como um sinal caracteristico do envelhecimento que é comum em mulheres na idade da pós-menopausa. Com o aumento recente de ver televisão, utilização de computadores e uso de lentes de contacto, este estado torna-se frequente em homens e mulheres. Além disso, a idade de surgimento da síndroma do olho seco tem vindo a diminuir gradualmente (4Gynecol Endocrinol, 20: 289-98, 2005; e Surv Ophthalmol, 5_0: 253-62, 2005).

Como abordagens para contornar a síndroma do olho seco podem mencionar-se a instilação de lágrimas artificiais para suplementação artificial de lágrimas, instilação de colírios anti-inflamatórios esteroides para inibir respostas inflamatórias, uso de lentes de contacto terapêuticas (LCT), oclusão cirúrgica do punctum para suprimir o escape de lágrimas do olho com a finalidade de se obter retenção ocular prolongada de soluções ou substitutos de lágrimas artificiais, e afins (J Korean Ophthalmol Soc, _46: 1774-1779, 2005). Estas abordagens terapêuticas têm sido amplamente utilizadas até 3 recentemente, mas colocam uma variedade de desvantagens e problemas potenciais. Por exemplo, as preparações de lágrimas artificiais proporcionam meramente efeitos temporários e de curta duração, desse modo sofrendo de desvantagens, como a necessidade de várias aplicações diárias das preparações lacrimais e ausência de efeitos protetores contra danos na córnea, ao passo que preparações esteroides podem causar o risco de efeitos secundários irreversíveis, como glaucoma, por administração crónica do fármaco esteroide. Adicionalmente, lentes de contacto terapêuticas podem ser inconvenientes para utilizadores não familiarizados com o uso de lentes de contacto, e também podem ser uma fonte potencial de infeções bacterianas. Além disso, a cirurgia de oclusão do punctum ainda sofre de desvantagens, como a sensação de rejeição mental devido à operação cirúrgica, e dificuldade de restabelecer o estado anterior por ocorrência de efeitos secundários adversos. No entanto, a fraqueza mais notória das abordagens convencionais acima mencionadas é o facto de serem meramente terapias sintomáticas, não centradas no tratamento ou abordagem das causas subjacentes aos estados de olho seco.

Em 2006, a empresa americana Allergan, Inc. desenvolveu e comercializou Restasis (emulsão oftálmica de ciclosporina), que é um agente terapêutico para o tratamento da síndroma do olho seco empregando o imunomodulador ciclosporina. Foi recentemente relatado que o Restasis inibe a produção e ativação de imunócitos associados à ocorrência de queratoconjuntivite seca e aumenta o nível de secreção lacrimal (Ophthalmology, 107: 967-74, 2000; e Ophthalmology, 107; 631-9, 2000) . O Restasis exerce a sua eficácia como fármaco via ação anti-inflamatória, de modo 4 que infelizmente é requerida administração repetida de longa duração do fármaco durante vários meses para se obterem efeitos terapêuticos que sejam satisfatórios para pacientes. Adicionalmente, a administração de Restasis é acompanhada, de modo desvantajoso, de uma frequência de ocorrência relativamente elevada (17%) de um efeito secundário típico, por exemplo, sensação de ardor (Ophthalmology, 107: 631-9, 2000; e Thomson Pharma, www. thomsonpharma . com.) .

Com este objetivo, há uma necessidade urgente de desenvolvimento de um agente terapêutico que não seja um terapêutico sintomático, meramente aliviando sintomas do estado em questão, e que seja capaz de tratar as causas subjacentes da síndroma do olho seco simultaneamente garantindo segurança de medicações do fármaco devido a baixa manifestação de efeitos secundários adversos. A síndroma do olho seco é uma doença multifatorial resultante de diversas causas patogénicas, como discutido aqui anteriormente, e tem sido tentada uma variedade de abordagens para tratar esse estado. Inter alia, uma grande parte da investigação tem estado ativamente centrada em estimulantes da secreção lacrimal, isto é, estimulantes de lágrimas. Por exemplo, têm sido feitas tentativas para desenvolver um fármaco que estimule a lacrimação (secreção de lágrimas) de células acinares lacrimais através do meio da neurotransmissão colinérgica, ou que aumente o fluxo lacrimal da conjuntiva via estimulação de recetores purinérgicos (Arthritis Rheum, _46_: 748-54, 2002; e Curr Eye Res, 2_1: 782-7, 2000). Em particular, uma camada de mucina ocular diminui a tensão superficial da água, permitindo uma distribuição uniforme de água por toda a superfície ocular, 5 e desempenha um papel importante na provisão de proteção corneana contra um ambiente externo hostil, como danos oculares ou infeção por materiais estranhos ou agentes patogénicos. Em consequência, têm sido ativamente empreendidos muitos estudos extensos pré-clinicos baseados em animais e clínicos baseados em humanos para descobrir fármacos que estimulem a secreção de mucinas a partir de células de Goblet da conjuntiva (Exp Eye Res, 6_7: 341-6, 1998; Cornea, 2jL: 818-24, 2002; Cornea, 23: 613-9, 2004; e

Thomson Pharma, www.thomson-pharma.com). 0 muco é composto maioritariamente por mucina e sais inorgânicos. A mucina consiste em hidratos de carbono e proteínas e é responsável pela proteção de células epiteliais da mucosa e ação de lubrificação. Até à data foram identificados 21 genes diferentes de mucina humana.

Os genes de mucina ocular incluem 9 classes de genes, designadas MUC1, MUC2 , MUC4, MUC5AC, MUC 7, MUC 13, MUC15, MUC16 e MUC 17, que podem ser adicionalmente subdivididas em mucina transmembranar e mucina secretora (Prog Retin Eye Res, 2_3: 449-74, 2004). Substâncias com atividade estimuladora da secreção de mucinas transmembranares e secretoras em filmes lacrimais podem ser terapeuticamente eficazes para o tratamento da síndroma do olho seco por prevenção de danos corneanos que podem surgir de secura excessiva do olho. ou apoplexia A patente US-6,136,848 divulga um derivado flavona para utilização na terapia de uma doença selecionada do grupo que consiste em asma, rinite alérgica, dermatite alérgica, conjuntivite alérgica, urticária, psoríase, reumatismo, colite inflamatória, isquemia cerebral cerebral. 6 A patente US-6,025,387 divulga flavonas/compostos flavanona ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis e um processo para a sua preparação, destinados à proteção de tratos gastrointestinais contra gastrite, úlceras e doença inflamatória do intestino.

Em resultado de uma variedade de estudos e experiências extensos e intensivos para resolver os problemas descritos acima e para lidar com a necessidade de desenvolvimento de um agente terapêutico eficaz para o tratamento da sindroma do olho seco, os inventores da presente invenção tiveram êxito na sintese de novos derivados 3',4'-5-trimetoxiflavona e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, e descobriram que estes compostos exibem excelentes efeitos na estimulação da secreção de muco conjuntival e inibição de danos na superfície ocular. Adicionalmente, os presentes inventores descobriram que mono-hidratos de 7-carboximetil-oxi-3',4'-5-trimetoxiflavona, previamente estudados nas

Patentes coreanas N°s 447918, 327621 e 644928, atribuídas ao presente requerente, têm atividade anti-inflamatória, atividade estimuladora da secreção de muco gástrico e atividade promotora da secreção de muco conjuntival, desse modo proporcionando efeitos inibidores acentuados da ocorrência de danos na superfície ocular. A presente invenção foi completada com base nestas descobertas.

DIVULGAÇÃO DA INVENÇÃO

PROBLEMA TÉCNICO

Um objetivo da presente invenção consiste em proporcionar um novo derivado 3',4'-5-trimetoxiflavona ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 7

Outro objetivo da presente invenção consiste em proporcionar uma composição farmacêutica para o tratamento e prevenção de síndroma do olho seco, compreendendo um derivado 3',4'-5-trimetoxiflavona ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como ingrediente ativo.

Ainda outro objetivo da presente invenção consiste em proporcionar uma composição farmacêutica para o tratamento e prevenção de síndroma do olho seco, compreendendo 7-carboximetiloxi-3',4'-5-trimetoxiflavona mono-hidratada como ingrediente ativo.

SOLUÇÃO TÉCNICA

De acordo com um aspeto da presente invenção, os objetivos acima e outros podem ser alcançados proporcionando um novo derivado 3',4'-5-trimetoxiflavona representado pela Fórmula 1:

em que Ri é selecionado do grupo que consiste em tetrazolilo, carbamoílo, cianocarbamoílo, N-benzenossulfonilcarbamoílo, hidrofosforilo, hidroxi-isopropilfosforilo, aminossulfonilcarbamoílo, metil-sulfonilcarbamoílo, carbamilcarbamoílo, formilcarbamoílo e acetilcarbamoílo; ou um respetivo sal farmaceuticamente aceitável. 8

De acordo com outro aspeto da presente invenção, é proporcionada uma composição farmacêutica para o tratamento e prevenção da síndroma do olho seco compreendendo o composto acima mencionado de Fórmula 1 como ingrediente ativo. 0 composto de Fórmula 1 de acordo com a presente invenção pode formar um sal com um metal alcalino básico, como Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Zn2+, ou afins.

Daqui em diante, a presente invenção será descrita mais pormenorizadamente. A presente invenção proporciona um novo derivado 3',4'-5-trimetoxif lavona de Fórmula 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Especificamente, a presente invenção proporciona um composto selecionado do grupo que consiste nos seguintes: 7-(tetrazol-5-ilmetiloxi)-3',4',5-trimetoxiflavona, sal de potássio de 7-(tetrazol-5-ilmetiloxi)-3',4',5- trimetoxiflavona, 7-{(carbamoí1)metiloxi}-3 ',4',5-trimetoxiflavona, 7-{(N-cianocarbamoí1)metiloxi}-3',4 ',5-trimetoxiflavona, 7-{ (N-benzenossulfonilcarbamoí1)metiloxi}-3',4 ', 5-trimetoxiflavona, 7-{(hidrofosforil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona, 7-{(hidroxiisopropilfosforil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxi-flavona, 7-{(aminossulfonilcarbamoí1)metiloxi}-3',4',5-trimetoxi-flavona, 9 7-{(metilsulfonilcarbamoí1)metiloxi}-3',4 ',5-trimetoxi-flavona, 7-{(carbamilcarbamoíl)metiloxi}-3',4 ',5-trimetoxiflavona, 7-{(formilcarbamoil)metiloxi}-3',4', 5-trimetoxiflavona, e 7-{(acetilcarbamoil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona.

Na presente invenção, o composto de Fórmula 1 em que Ri é selecionado do grupo que consiste em carbamoilo, cianocarbamoilo, N-benzenossulfonilcarbamoilo, aminossulfo-nilcarbamoílo, metilsulfonilcarbamoilo, carbamilcarbamoilo, formilcarbamoílo e acetilcarbamoilo (daqui em diante designado "composto de Fórmula 1-1'") pode ser preparado por condensação de um anidrido de 7-carboximetiloxi-3 ',4', 5-trimetoxiflavona de Fórmula 2 com R2NH2, em que R2 é como definido em baixo.

em que R2 é hidrogénio, ciano, benzenossulfonilo, aminossulfonilo, metilsulfonilo, carbamilo, formilo ou acetilo.

Isto é, o composto de Fórmula 1-1' de acordo com a presente invenção pode ser preparado por condensação do anidrido de 7-carboximetiloxi-3',4'-5-trimetoxiflavona de Fórmula 2 com 10 R2NH2. A condensação pode ser efetuada por desidratação com utilização direta de diciclo-hexilcarbodiimida (DCC), diisopropilcarbodiimida (DIC) ou 1-[3-(dimetilamino) propil]-3-etilcarbodiimida (EDC), ou então pode ser efetuada tornando um grupo carboxilo do composto de Fórmula 2 numa forma altamente reativa, como um anidrido de ácido ou um cloreto de ácido, seguido de reação com NH2R2. A temperatura reacional situa-se preferivelmente num intervalo de 0°C até 100°C. O composto de Fórmula 1-1' pode formar um sal com um metal alcalino básico, por exemplo, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Zn2+, ou afins.

Dos compostos de Fórmula 1, a presente invenção também proporciona 7-(tetrazol-5-ilmetiloxi)-3',4',5-trimetoxi-flavona de Fórmula 1-2', em que Rx é tetrazolilo, e um seu sal farmaceuticamente aceitável. O composto de Fórmula 1-2' é preparado por alquilação regiosseletiva da posição 7-hidroxi numa 5,7-di-hidroxi-3',4'-dimetoxiflavona de Fórmula 3 como material de partida para preparar um composto de Fórmula 4, metilação da posição 5-hidroxi do composto de Fórmula 4 com uma base e um reagente de metilação na presença de um solvente aprótico para preparar um composto de Fórmula 5, e ciclização do composto de Fórmula 5 com azida de sódio na presença de um solvente aprótico, como dimetilformamida, para desse modo preparar uma 7-(tetrazol-5-ilmetiloxi)-3' , 4',5-trimetoxiflavona de Fórmula 1-2'. 0 reagente de metilação utilizado para preparar o composto de Fórmula 5 pode ser iodeto de etano ou sulfato de dimetilo. A temperatura reacional situa-se preferivelmente num intervalo de 0°C até 150°C. Adicionalmente, a base pode ser selecionada do grupo que consiste em carbonato de potássio, 11 hidróxido de sódio, hidróxido de potássio e carbonato de sódio. Não há nenhum limite particular para o solvente aprótico, desde que seja conhecido dos profissionais. Por exemplo, podem mencionar-se 1,4-dioxano, tetra-hidrofurano, acetato de etilo, éter de etilo, éter de t-butilmetilo, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, N-metilpiperidona, diclorometano, 1,2-dicloroetano, acetonitrilo e afins. 0 composto de Fórmula 1-2' também pode formar um sal com um metal alcalino básico, por exemplo, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Zn2+, ou afins .

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OH O 12

Adicionalmente, a presente invenção proporciona um composto de Fórmula 1 em que Ri é hidrof osf orilo ou hidroxi-isopropilfosforilo, e um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Dos compostos de Fórmula 1, prepara-se um composto em que Ri é hidrofosforilo ou hidroxiisopropilfosforilo (composto de Fórmula 1-3' ou 1-3") fazendo reagir uma 7-hidroxi-3' , 4',5-trimetoxiflavona de Fórmula 6 com um haleto de fosfonilo protegido com um alquilo de cadeia curta ( (R4O) 2POCH2X) para se obter um composto de Fórmula 7, e aquecendo o composto de Fórmula 7 com azida de sódio na presença de um solvente aprótico, ou agitando o composto de Fórmula 7 sob refluxo numa solução aquosa ácida, para remover o grupo protetor de Ri.

Como usado aqui, o termo "solução aquosa ácida" refere-se a uma solução aquosa de ácido forte. Por exemplo, podem mencionar-se uma solução aquosa de ácido clorídrico, uma solução aquosa de ácido sulfúrico, uma solução aquosa de ácido fosfórico e afins. A remoção do grupo protetor de Ri é efetuada por qualquer esquema de desproteção utilizando NaN3, ácido clorídrico e afins. Seguindo um desses processos, um composto de Fórmula 1-3' ou 1-3" de acordo com a presente invenção pode ser 13 seletivamente obtido do composto de Fórmula 7.

Adicionalmente, o composto de Fórmula 1-3' ou 1-3" pode formar um sal após a reação com um metal alcalino básico, tal como Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Zn2+, ou afins.

em que R4 é Ci-C6 alquilo de cadeia curta, incluindo metilo, etilo e isopropilo. 14

No haleto de fosfonilo ( (R4O) 2POCH2X) , R4 é como definido acima e X é cloro, bromo ou iodo.

Adicionalmente, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica para o tratamento e prevenção da síndroma do olho seco, compreendendo um derivado 3',4'—5— trimetoxif lavona de Fórmula 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como ingrediente ativo. Além disso, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica para o tratamento e prevenção da síndroma do olho seco, compreendendo uma 7-carboximetiloxi-3',4'-5-trimetoxiflavona mono-hidratada, divulgada na Patente coreana N° 447918, 327621 ou 644928, como ingrediente ativo.

Devido aos seus excelentes efeitos na estimulação da secreção de muco conjuntival e inibição de danos na superfície ocular, os compostos de Fórmula 1 e 7-carboximetiloxi-3',4'-5-trimetoxiflavonas mono-hidratadas podem ser eficazes, de modo terapêutico e profilático, para síndroma do olho seco.

Além disso, a presente invenção proporciona um método para o tratamento e prevenção da síndroma do olho seco, que compreende administrar, a um mamífero (incluindo humano) necessitado, uma composição compreendendo um composto de Fórmula 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou uma 7-carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxiflavona mono- hidratada como ingrediente ativo.

Além disso, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de Fórmula 1, ou um seu sal farmaceuticamente 15 aceitável, ou uma 7-carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxi-flavona mono-hidratada para a preparação de um medicamento destinado ao tratamento e prevenção da síndroma do olho seco.

Dependendo das aplicações desejadas, a composição farmacêutica da presente invenção pode ser administrada por uma via convencional, por exemplo, por administração perorai ou por administração parentérica (intradérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, retal, intranasal e intraocular). Além disso, a composição farmacêutica também pode compreender um ou mais excipientes convencionais, tomando em consideração formas galénicas desejadas. 0 composto de Fórmula 1 de acordo com a presente invenção pode ser administrado numa dose de 0,001 até 1 mg/kg de peso do corpo, uma ou várias vezes por dia, apesar de uma dose diária maior ou menor poder ser requerida para alguns pacientes. Como será claro para os profissionais, a dose eficaz do composto ativo pode variar dependendo de vários fatores, como fármacos coadministrados e gravidade da doença.

EFEITOS VANTAJOSOS A presente invenção proporciona novos derivados 3',4',5-trimetoxiflavona e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Devido ao facto de possuírem excelentes efeitos estimuladores da secreção de muco na conjuntiva e excelentes efeitos inibidores de danos na superfície ocular, os derivados 3',4'-5-trimetoxiflavona acima mencionados podem ser eficazes, de modo terapêutico e profilático, para síndroma do olho seco. 16

MODO PARA A INVENÇÃO

Agora, a presente invenção será descrita mais pormenorizadamente com referência aos Exemplos seguintes. Estes exemplos são apresentados apenas para ilustrar a presente invenção, e não devem ser considerados limitadores do âmbito e espirito da presente invenção.

Exemplo 1: Preparação de 7-(tetrazol-5-ilmetiloxi)-3'4',5-trimetoxiflavona

Passo 1: Preparação de 7-propan-2-in-l-iloxi-5-hidroxi-4' , 5' —dimetoxiflavona

Dissolveu-se 5,7-di-hidroxi-4',5'-dimetoxiflavona (20 g, 63,6 mmol, preparada de acordo com o método divulgado na Patente coreana N° KR644928, atribuída ao presente requerente, Dong-A Pharm. Co., Ltd., Coreia) e carbonato de potássio anidro (20,3 g, 152,7 mmol) em N,N'-dimetil-formamida (400 mL) à qual se adicionou gota-a-gota bromo-acetonitrilo (6 mL, 76,3 mmol) à temperatura ambiente, seguido de reação durante 13 horas. A solução reacional foi inversamente dispersa numa solução misturada 1:4 (1000 mL) de acetato de etilo e n-hexano e depois foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os sólidos resultantes foram filtrados e secos sob vácuo, obtendo-se quantitativamente 22,5 g do composto do título. XH NMR (400 MHz, DMSO-de) : 12,98 (s, 1H) , 7,71 (dd, 1H 7, 58 (d, 1H ), 7,14 (d, 1H), 7,09 (s , 1H) , 6,97 (d, 1H 6, 54 (d, 1H) , 3,87 (s, 3H) e 3,84 (s, 3H) .

Passo 2: Preparação de 7-propan-2-in-l-iloxi-3',4',5- trimetoxiflavona 7-Propan-2-in-l-iloxi-5-hidroxi-4',5'-dimetoxiflavona (22,5 g) , preparada no Passo 1, e carbonato de potássio anidro 17 (51,7 g, 373,8 mmol) foram adicionados gota-a-gota a 500 mL de acetona à qual se adicionou depois, gota-a-gota, sulfato de dimetilo (6,6 mL, 70 mmol), seguido de agitação sob refluxo durante 13 horas. A solução reacional foi arrefecida para a temperatura ambiente e adicionou-se clorofórmio (500 mL) gota-a-gota. Em seguida, a solução misturada foi agitada durante 30 minutos e filtrada através de celite. A almofada de celite foi lavada com clorofórmio (1000 mL) e o filtrado foi evaporado, para remover o solvente. Os sólidos resultantes foram dissolvidos em clorofórmio (1000 mL) e lavados com água. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, depois foi evaporada para remover o solvente e suspensa com agitação num solvente misturado 1:1 (1000 mL) de acetato de etilo e n-hexano durante 2 horas. Os sólidos resultantes foram secos sob vácuo durante 3 horas, dando origem a 6,47 g (rendimento: 28%) do composto do titulo. XH NMR (Varian 400 MHz, DMSO-d6) : 7,63 (dd, 1H) , 7,52 (d, 1H), 7,11 (d, 1H), 7,03 (d, 1H) , 6,82 (s, 1H) , 6,63 (d, 1H), 5,34 (s, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 3,84 (s, 3H) e 3,44 (s largo).

Passo 3: Preparação de 7-(tetrazol-5-ilmetiloxi)-3',4',5-trimetoxiflavona

Dissolveu-se 7-propan-2-in-l-iloxi-3',4',5-trimetoxiflavona (0,3 g, 0,82 mmol), obtida no Passo 2, cloreto de amónio (0,13 g, 2,45 mmol) e azida de sódio (0,08 g, 1,23 mmol) em N, N' -dimetilf ormamida (6 mL) . Depois de a reação ter sido conduzida a 120°C durante 3 horas, a solução reacional foi arrefecida para a temperatura ambiente. Os sólidos resultantes foram filtrados e lavados com acetato de etilo e n-hexano. Os sólidos lavados foram dissolvidos num solvente misturado 3:1 de clorofórmio e metanol e foram 18 secos em sulfato de sódio anidro, para remover o solvente. 0 resíduo resultante foi recristalizado a partir de um solvente misturado 1:1 de acetato de etilo e clorofórmio, dando origem a 0,195 g (rendimento: 58%) do composto do título. XH NMR (Va .rian 400 MHz, DMSO· -d6) : 7,61 (dd, 1H) , 7, 50 (d 1H), 7, . 10 (d, 1H) , 7, 04 (d, 1H) , 6,76 (s, 1H) , 6, 58 (d 1H), 5, 41 (s, 2H) , 3,87 (s, 3H) , 3,83 (s, 3H) e 3, 81 (s 3H) .

Exemplo 2: Preparação de sal de potássio de 7-(tetrazol-5-ilmetiloxi)-3',4',5-trimetoxiflavona

Dissolveu-se 7-(tetrazol-5-ilmetiloxi)-3',4',5-trimetoxi- flavona (0,13 g), preparada no Exemplo 1, numa solução de hidróxido de potássio 1 N (5 mL) . A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e o material de partida que não reagiu foi filtrado. A solução aquosa resultante foi liofilizada, dando origem a 0,140 g (rendimento: 99%) do composto do título. ΧΗ NMR (Varian 40 0 MHz, DMSO-de) : 7, 62 (dd, 1H) , 7, 50 (d, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 6,75 (s, 1H) , 6,57 (d, 1H), 5,28 (s, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 3,80 (s, 3H) e 3,35 (largo).

Exemplo 3; Preparação de 7-{(carbamoil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona

Anidrido de 7-carboximetiloxi-3',4', 5-trimetoxiflavona (1 g, 2,59 mmol, preparado de acordo com o método divulgado na Patente coreana N° KR447918, atribuída ao presente requerente, Dong-A Pharm. Co., Ltd., Coreia) foi dissolvido em N, N' -dimetilf ormamida (20 mL) , à qual se adicionou depois, gota-a-gota, piridina (130 pL), dicarbonato de di-t-butilo (0,73 g, 3,34 mmol) e carbonato de amónio (0,27 g, 19 3,34 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas e depois foi lavada várias vezes com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca em sulfato de magnésio anidro, foi destilada sob pressão reduzida para remover o solvente, suspensa com agitação em acetona durante 2 horas e filtrada. Os sólidos filtrados foram secos sob vácuo, dando origem a 0,44 g (rendimento: 44%) do composto do titulo. XH NMR (Varian 400 MHz, DMSO-d6) : 7,62 (d, 1H) , 7,42 (d, 1H), 7,10 (d, 1H), 6,83 (d, 1H) , 6,77 (s, 1H) , 6,60 (d, 1H), 4,59 (s, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 3,82 (s, 3H) e 3,31 (s, 2H).

Exemplo 4: Preparação de 7-{(N-cianocarbamoíl)metiloxi}-3',4',5—trimetoxiflavona

Anidrido de 7-carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxiflavona (1 g, 2,59 mmol, preparado de acordo com o método divulgado na Patente coreana N° KR447918, atribuída ao presente requerente, Dong-A Pharm. Co., Ltd., Coreia), cloridrato de Ν-3-dimetilaminopropil-N'-etilcarbodiimida (0,55 g, 2,87 mmol, Aldrich), dimetilaminopiridina (0,35 g, 2,87 mmol) e cianamida (0,12 g, 2,87 mmol) foram adicionados gota-a-gota a 00C e depois reagiram à temperatura ambiente durante 4 horas. Adicionaram-se gota-a-gota 20 mL de água, para separar a camada orgânica da camada aquosa, e a camada aquosa foi destilada sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna utilizando um solvente misturado 20:1 de diclorometano e metanol como eluente, desse modo dando origem a 0,33 g (rendimento: 31%) dos compostos do título. XH NMR (400 MHz, DMS0-d6): 7,55 (dd, 1H) , 7,46 (s, 1H) , 7,04 (d, 1H), 6,69 (s, 1H) , 6,59 (d, 1H) , 6,38 (d, 1H) , 20 4,36 (s, 2H), 3,86 (s, 3H) , 3,81 (s, 3H) , 3,76 (s, 3H) e 3,31 (s, 2H) .

Exemplo 5: Preparação de 7-{(N-benzenossulfonilcarbamoil) metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona

Anidrido de 7-carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxiflavona (5 g, 12,9 mmol, preparado de acordo com o método divulgado na Patente coreana N° KR447918, atribuída ao presente requerente, Dong-A Pharm. Co., Ltd., Coreia), cloridrato de 1,3-dimetilaminopropil-3-etilcarbodiimida (2,48 g, 12,9 mmol, Aldrich) e 4-dimetilaminopiridina (2,37 mg, 19,4 mmol) foram adicionados a 150 mL de diclorometano e agitados à temperatura ambiente durante 20 minutos. Depois adicionou-se gota-a-gota benzenossulfonamida (4,07 g, 25,88 mmol), seguido de reação à temperatura ambiente durante 13 horas. Adicionaram-se gota-a-gota 20 mL de água, para separar a camada orgânica da camada aquosa, e a camada aquosa foi destilada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna utilizando um solvente misturado 30:1 de diclorometano e metanol como eluente, desse modo dando origem a 1,02 g (rendimento: 15 %) do composto do título • 1R NMR (Varian 400 MHz, DMSO-de) : 7, 55 (dd, 1H) , 7, 46 (s, 1H), 7,04 (d, 1H) , 6,69 (s, 1H) , 6,59 (d, 1H) , 6,38 (d, 1H), 4,36 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,76 (s, 3H) e 3,31 (s, 2H).

Exemplo 6: Preparação de 7-{(hidrofosforil)metiloxi}- 3',4',5-trimetoxiflavona

Passo 1: Preparação de 7-{(diisopropilfosforil)metiloxi}-3'4',5-trimetoxiflavona 21

Dissolveu-se 7-hidroxi-3', 4', 5-trimetoxiflavona (3 g, 9,14 mmol, preparada de acordo com o método divulgado na Patente coreana N° KR447918, atribuída ao presente requerente, Dong-A Pharm. Co. , Ltd., Coreia) em dimetilformamida (50 mL) , à qual se adicionaram posteriormente carbonato de potássio (2,5 g, 2 eq,) e bromometilfosfonato de diiso-propilo (3,5 g, 1,5 eq.) . Depois de a reação ter sido conduzida a 90°C durante 16 horas, a solução reacional foi arrefecida para a temperatura ambiente e extraída duas vezes com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca em sulfato de magnésio e o solvente foi destilado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel utilizando um solvente misturado 1:4 de acetato de etilo e n-hexano como eluente, desse modo dando origem a 1,46 g (rendimento: 32%) do composto do título. XH NMR (400 MHz, DMS0-d6) : 7,52 (d, 1H) , 7,32 (dd, 1H) , 6, 95 (d, 1H) f 6, 65 (s, 1H), 6,48 (d, 1H) , 4, 86 (m, 2H) , 4, 31 (d, 2H) , 3, 97 (s, 3H), 3,96 (s, 3H) , 3,95 (s, 3H) , 1,40 (s, 3H), 1,39 (s, 6H) e 1,37 (s, 3H).

Passo 2: Preparação de 7-{(hidrofosforil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona 7-{(Diisopropilfosforil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona (0,6 g, 1,18 mmol), obtida no Passo 1, foi adicionada gota-a-gota a água (15 mL) e ácido clorídrico concentrado (15 mL) , seguido de agitação sob refluxo durante 2 horas. A solução reacional foi arrefecida para a temperatura ambiente. Os sólidos resultantes foram filtrados sob pressão reduzida, foram lavados com água e acetona e depois secos, dando origem a 0,21 g (rendimento: 42%) do composto do título. 22 XH NMR (Varian . 400 MHz, DMSO-de) : 7,63 (dd, \—1 7, 52 (d, 1H) , 7,09 (d, 1H), 6,97 (d, 1H), 6,77 (s, 1H) , 6,51 (d, 1H) , 4,26 (d, 2H) , 3,87 (s, 3H) e 3,83 (s, 6H ) .

Exemplo 7: Preparação de 7-{(hidroxiisopropilfosforil)-metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona 7-{(Diisopropilfosforil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona (0,5 g, 0,99 mmol, produzida no Passo 1 do Exemplo 6) e azida de sódio (0,5 g, 7,69 mmol) foram adicionados gota-a-gota a N,N-dimetilformamida (20 mL) e aquecidos a 100°C durante 8 horas. A solução reacional foi arrefecida para a temperatura ambiente e adicionaram-se, gota-a-gota, 50 mL de acetato de etilo e 50 mL de água, seguido de separação da camada orgânica da camada aquosa. Adicionaram-se gota-a-gota 10 mL de ácido clorídrico concentrado à camada aquosa, que foi depois extraída com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com solução salina saturada, foi seca em sulfato de sódio anidro e depois evaporada, dando origem a 0,15 g (rendimento: 33%) do composto do título. XH NMR (Varian 400 MHz, DMSO -d6) : 7,61 (dd, 1H) , 7, 50 (d, 1H) , 7, 08 (d, 1H) , 6,97 (d, 1H) , 6,76 (s, 1H) , 6, 52 (d, 1H) , 4, 62 (m, 1H) , 4,36 (d, 1H) , 3,88 (s, 3H) , 3, 87 (s, 3H) , 3, 85 (s, 3H) e 1,25 (d, 6H) .

Exemplo 8; Preparação de 7-{(aminossulfonilcarbamoíl) metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona

Anidrido de 7-carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxiflavona (1 g, 2,59 mmol, preparado de acordo com o método divulgado na Patente coreana N° KR447918, atribuída ao presente requerente, Dong-A Pharm. Co. , Ltd., Coreia), sulfamida (0,27 g, 2,85 mmol) e diisopropilet ilamina (0,9 mL, 5,18 mmol) foram adicionados a 10 mL de diclorometano e depois agitados à temperatura ambiente durante 20 minutos. A 23 solução reacional foi arrefecida para -20°C e adicionou-se gota-a-gota hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi-tris-pirrolidinofosfónio (1,48 g, 2,85 mmol, Aldrich) , seguido de reação à temperatura ambiente durante 8 horas. Depois de a reação estar completada, os sólidos resultantes foram filtrados e destilados sob pressão reduzida, para remover o solvente. 0 residuo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando um solvente misturado 20:1 de diclorometano e metanol como eluente, desse modo dando origem a 0,16 g (rendimento: 13%) do composto do titulo. XH NMR (Va r ian 400 MHz, DMSO- -d6) : 13,16 (s, 1H) , 7,63 (dd 1H), 7, 59 (d, 1H) , 6,84 (d, 1H) , 6,76 (s, 1H) , 6,52 (d 1H), 4, 85 (s, 2H) , 3,86 (s, 3H) , 3,83 (s, 3H) e 3, 82 (s 3H) .

Exemplo 9: Preparação de 7-{(metilsulfonilcarbamoil) metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona

Anidrido de 7-carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxiflavona (10 g, 25,9 mmol, preparado de acordo com o método divulgado na Patente coreana N° KR447918, atribuída ao presente requerente, Dong-A Pharm. Co., Ltd., Coreia), cloridrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (4,96 g, 25,9 mmol, Aldrich) e 4-dimetilaminopiridina (4,74 mg, 38,8 mmol) foram adicionados a 300 mL de diclorometano e depois o sistema foi agitado à temperatura ambiente durante 20 minutos. Adicionou-se gota-a-gota metanossulfonamida (4,92 g, 51,76 mmol), seguido de reação à temperatura ambiente durante 13 horas. Depois de a reação estar completada, os sólidos resultantes foram filtrados e destilados sob pressão reduzida, para remover o solvente. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando um solvente misturado 30:1 de diclorometano e metanol como 24 eluente, desse modo dando origem a 2,15 g (rendimento: 18%) dos compos tos do ti tulo. XH NMR (Va .rian 400 MHz, DMSO- -d6) : 12, 08 (s, NH) , 7,62 (dd 1H) , 7,51 (d, 1H) , 7, 10 (d, 1H) , 6, 82 (d, 1H) , , 6,78 (s 1H) , 6,56 (d, 1H) , 4, 87 (s, 2H) , 3, 86 (s, 3H) , , 3, 83 (s 3H) , 3,78 (s, 3H) e 3,29 (s, 3H) .

Exemplo 10: Preparação de 7-{(carbamilcarbamoíl)metiloxi)-3'4'5-trimetoxiflavona

Anidrido de 7-carboximetiloxi-3', 4', 5-trimetoxiflavona (1 g, 2,59 mmol, preparado de acordo com o método divulgado na Patente coreana N° KR447918, atribuída ao presente requerente, Dong-A Pharm. Co., Ltd., Coreia), cloridrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (0,50 g, 2,59 mmol, Aldrich) e 4-dimetilaminopiridina (0,47 mg, 3,88 mmol) foram adicionados a 300 mL de diclorometano e depois o sistema foi agitado à temperatura ambiente durante 20 minutos. Adicionou-se gota-a-gota ureia (0,17 g, 2,83 mmol), seguido de reação à temperatura ambiente durante 13 horas. Depois de a reação estar completada, os sólidos resultantes foram filtrados e destilados sob pressão reduzida, para remover o solvente. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando um solvente misturado 30:1 de diclorometano e metanol como eluente, desse modo dando origem a 0,17 g (rendimento: 15 %) do composto do título. ΧΗ NMR (Varian 400 MHz, DMSO-de) : 10,29 (s, NH) , 7, 62 (d, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,09 (d, 1H), 6,82 (d, 1H) , 6,78 (s, 1H), 6,57 (d, 1H), 4,90 (s, 2H), 3,86 (s, 3H) , 3,83 (s, 3H) e 3,78 (s, 3H).

Exemplo 11: Preparação de 7-{(formilcarbamoil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona 25

Anidrido de 7-carboximetiloxi-3', 4', 5-trimetoxiflavona (1 g, 2,59 mmol, preparado de acordo com o método divulgado na Patente coreana N° KR447918, atribuída ao presente requerente, Dong-A Pharm. Co., Ltd., Coreia), cloridrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (0,50 g, 2,59 mmol, Aldrich) e 4-dimetilaminopiridina (0,47 mg, 3,88 mmol) foram adicionados a 300 mL de diclorometano e depois o sistema foi agitado à temperatura ambiente durante 20 minutos. Adicionou-se gota-a-gota formilamida (0,11 mL, 2,84 mmol), seguido de reação à temperatura ambiente durante 14 horas. Depois de a reação estar completada, os sólidos resultantes foram filtrados e destilados sob pressão reduzida, para remover o solvente. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando um solvente misturado 30:1 de diclorometano e metanol como eluente, desse modo dando origem a 0,18 g (rendimento: 17%) dos compostos do título. XH NMR (Varian 400 MHz, DMSO -d5) : 8,23 (s, 1H) , 8,0 (s, NH) , 7, 65 (dd, 1H) , 7,52 (d, 1H) , 7, 11 (d, 1H) , 7, 02 (d, 1H) , 6, . 80 (s, 1H) , 6,61 (d, 1H) , 5, 26 (s, 2H) , 3, 87 (s, 3H), 3,85 (s, 3H) e 3,83 (s, 3H).

Exemplo 12: Preparação de 7—{(acetilcarbamoíl)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona

Anidrido de 7-carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxiflavona (1 g, 2,59 mmol, preparado de acordo com o método divulgado na Patente coreana N° KR447918, atribuída ao presente requerente, Dong-A Pharm. Co., Ltd., Coreia), cloridrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (0,50 g, 2,59 mmol, Aldrich) e 4-dimetilaminopiridina (0,47 mg, 3,88 mmol) foram adicionados a 300 mL de diclorometano e depois o sistema foi agitado à temperatura ambiente durante 20 minutos. Adicionou-se gota-a-gota acetamida (0,17 g, 2,84 26 mmol), seguido de reação à temperatura ambiente durante 13 horas. Depois de a reação estar completada, os sólidos resultantes foram filtrados e destilados sob pressão reduzida, para remover o solvente. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando um solvente misturado 30:1 de diclorometano e metanol como eluente, desse modo dando origem a 0,18 g (rendimento: 17 %) do composto do título. XH NMR (Varian 400 MHz, DMSO -d6) : : 8,23 (s, 1H) , 8,0 (s NH) , 7, 65 (dd, 1H) , 7,52 (d, 1H) , 7, 11 (d, 1H) , 7, 02 (d 1H) t 6, . 80 (s, 1H) , 6,61 (d, 1H) , 5,26 (s, 2H) , 3, 87 (s 3H), 3,85 (s, 3H) e 3,83 (s, 3H).

Para investigar efeitos benéficos de derivados 3',4',5-trimetoxiflavona, obtidos nos Exemplos anteriores, e 7-carboximetiloxi-3',4'-5-trimetoxiflavonas mono-hidratadas na síndroma do olho seco, os compostos acima foram estudados quanto a efeitos de secreção de mucina na linha de células de carcinoma pulmonar mucoepidermoide humano, e quanto a efeitos terapêuticos em coelhos onde foi induzida síndroma do olho seco.

Exemplo Experimental 1: Efeitos de derivados 3’,4’,5-trimetoxiflavona na secreção de mucina

Para examinar os efeitos estimuladores de derivados 3', 4', 5-trimetoxiflavona de acordo com a presente invenção na secreção de mucina realizaram-se as seguintes experiências in vitro.

Semearam-se 2 x 105 células/cavidade da linha de células de carcinoma pulmonar mucoepidermoide humano NCI-H292 (ATCC; CRL-1848) numa placa de 96 cavidades, tendo sido tratadas com derivados 3',4',5-trimetoxiflavona a várias 27 concentrações de 0,16 até 100 pg/mL durante 24 horas. Seguidamente mediram-se os níveis de secreção de mucina transmembranar MUC4 e mucina secretora MUC5AC representativas por ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA). Os resultados obtidos desse modo estão apresentados na Tabela 1 em baixo.

[Tabela 1] Efeitos estimuladores de derivados 3 ' ,4 ' ,5-trimetoxiflavona na secreção de mucina (% aumento da secreção de mucina versus grupo de controlo não tratado)

Compostos Concentrações (pg/mL) 0,8 4 20 100 Exemplo 1 18,7 28,1 57, 8 52,0 Exemplo 3 2,2 6,6 10,4 15, 8 Exemplo 4 - - 4,3 25,2 Exemplo 5 43,9 45, 4 35, 4 70,9 Exemplo 8 4,4 10,2 15, 4 21, 4 Exemplo 9 9,7 15, 9 37, 4 43,3 Exemplo 10 - 6,7 15, 4 25, 9 Exemplo 12 15,2 13,6 20,5 30,2 7-carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxif lavona mono-hidratada 24, 8 39,1 52,5 75, 9 A partir dos resultados experimentais foi confirmado que derivados 3',4',5-trimetoxiflavona têm efeitos estimuladores na secreção de mucina. Estes resultados sugerem que derivados 345-trimetoxiflavona da presente invenção promovem a secreção de mucinas transmembranares e secretoras e, em consequência, podem ser eficazmente usados para o tratamento da síndroma do olho seco.

Exemplo Experimental 2: Efeitos terapêuticos de derivados 3',4',5-trimetoxiflavona no modelo da síndroma do olho seco de coelho

Coelhos Brancos da Nova Zelândia (NZW) machos foram aleatoriamente atribuídos a dois grupos, cada um consistindo em 5 animais. Para induzir síndroma do olho seco, N-acetilcisteína foi primeiramente dissolvida, a uma 28 concentração de 20%, em solução salina fisiológica. Em seguida, a pálpebra inferior dos coelhos foi ligeiramente afastada do globo ocular para formar uma configuração em taça, e a solução de N-acetilcisteina acima preparada foi instilada no saco conjuntival seis vezes a cada 2 horas, levando ao estabelecimento de um modelo animal de síndroma do olho seco. Derivados 3',4',5-trimetoxiflavona foram dissolvidos, a uma concentração de 0,5%, numa solução de hidróxido de sódio 0,1 N, que depois foi titulada para pH 7,0 até 8,0 com ácido acético a 10%. Desde o dia seguinte à indução da síndroma do olho seco, os derivados 3',4',5-trimetoxiflavona titulados foram repetidamente instilados nos sacos conjuntivais de animais a uma frequência de dose de 4 vezes/dia (0,1 mL/cada vez) durante sete dias consecutivos. No dia seguinte à indução da síndroma do olho seco e depois de completada a experiência, avaliou-se o grau de danos na superfície ocular para calcular uma taxa de diminuição de danos (%) utilizando o ensaio de Rose Bengal, e a secreção de muco na conjuntiva foi quantitativamente analisada utilizando o ensaio de Alcian Blue. Mais especificamente, referindo-nos ao ensaio de Rose Bengal, 10 pL de uma solução de Rose Bengal a 1% foram gotejados nos olhos dos animais, e pontuou-se a distribuição e intensidade da coloração de Rose Bengal de acordo com o método divulgado em Urashima et al., Cornea, 23: 613-9, 2004. Para o ensaio de Alcian Blue, as conjuntivas dos coelhos foram excisadas, pesadas, coradas com uma solução de Alcian Blue a 0,1% durante 2 horas e depois lavadas com uma solução de sucrose 0,25 M. Após extração com uma solução de cloreto de magnésio 0,5 M mediu-se a absorvância a 605 nm. Os resultados obtidos deste modo estão apresentados na Tabela 2 em baixo. 29 [Tabela 2] Efeitos terapêuticos de derivados 3 ' ,4' ,5-trimetoxiflavona no modelo de coelho de síndroma do olho seco

Compostos Ensaio de Rose Bengal Ensaio de Alcian Blue Taxa de diminuição de danos (%) Absorvância/g de tecido Grupo de animais normais 0,0 ± 0,0 0,56 ± 0,18 Grupo de controlo de veículo 49,3 ± 6,5 0,16 ± 0,05 Exemplo 4 83,8 ± 4,6* 0,24 ± 0,19* Exemplo 5 70,1 ± 5,2* 0,32 ± 0,09* Exemplo 9 76,8 ± 8,4* 0,35 ± 0,13* 7-carboximetiloxi-3', 4', 5-trimetoxiflavona mono-hidratada 88,5 ± 4,7* 0,38 ± 0,08* Valores apresentados em Média ± D.P. * Estatisticamente significativo em comparação com o grupo de controlo de veiculo (p < 0,05)__

Como pode observar-se dos resultados da Tabela 2, foi confirmado que os grupos de animais com administração de uma solução de hidróxido de sódio 0,1 N após indução de síndroma do olho seco por N-acetilcisteína exibem secreção decrescida de muco conjuntival, levando à ocorrência de danos oculares, em comparação com o grupo de animais normais. No entanto, após instilação repetida de derivados 3 ' , 4' , 5-trimetoxiflavona durante 7 dias, as conjuntivas dos grupos que receberam fármaco exibiram um aumento estatisticamente significativo da quantidade de secreção de muco em comparação com o grupo de controlo de veículo. Além disso, danos oculares também foram significativamente inibidos nos grupos administrados com derivado 3',4',5-trimetoxiflavona. Estes resultados significam que derivados 3', 4', 5-trimetoxiflavona da presente invenção podem ser eficazmente usados como agente terapêutico para o tratamento da síndroma do olho seco, devido ao facto de possuírem efeitos estimuladores da secreção de muco nas conjuntivas. 30

Daqui em diante ilustrar-se-á um Exemplo de Preparaçao para um agente terapêutico da presente invenção.

Exemplo de Formulação 1: Preparação farmacêutica oftálmica

Preparação de um colírio (1%) 3', 4',5-Trimetoxiflavona de Fórmula 1 ............ 1 g

Agente de ajustamento do pH (NaOH) ............... 0,11 g

Agente de ajustamento do pH (HC1) ............... 0,0135 g

Conservante (Cloreto de benzalcónio) ............. 0,01 g

Agente espessante (PVA) .......................... 1 g

Agente regulador da pressão osmótica (NaCl) ...... 0,83 g

Solubilizador (água purificada esterilizada) ..... 100 mL

Os ingredientes listados acima foram misturados para preparar um colírio, como desejado.

APLICABILIDADE INDUSTRIAL

Como é claro da descrição acima, a presente invenção proporciona novos derivados 3',4',5-trimetoxiflavona e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Devido ao facto de possuírem efeitos notáveis na estimulação da secreção de muco conjuntival e inibição de danos na superfície ocular, os derivados 3', 4', 5-trimetoxiflavona são terapêutica e profilaticamente eficazes para síndroma do olho seco.

Lisboa, 18 de Novembro de 2011

Claims (10)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Compostos derivados 3',4',5-trimetoxiflavona representados pela Fórmula 1:

OCH0 V) Ris^O em que Ri é selecionado do grupo que consiste em tetrazolilo, carbamoílo, cianocarbamoílo, N- benzenossulfonilcarbamoílo, hidrofosforilo, hidroxi- isopropilfosforilo, aminossulfonilcarbamoílo, metil- sulfonilcarbamoílo, carbamilcarbamoílo, formil-carbamoílo e acetilcarbamoílo; ou um respetivo sal farmaceuticamente aceitável.

2. Composto da reivindicação 1, em que o composto é selecionado do grupo que consiste nos seguintes: 7-(tetrazol-5-ilmetiloxi)-3',4',5-trimetoxiflavona, sal de potássio de 7-(tetrazol-5-ilmetiloxi)-3',4',5-trimetoxiflavona, 7-{(carbamoil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona, 7-{(N-cianocarbamoí1)metiloxi}-3,,4,,5-trimetoxi-flavona, 7-{(N-benzenossulfonilcarbamoí1)metiloxi} - 3',4',5-trimetoxiflavona, 7-{(hidrofosforil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona, 7-{(hidroxiisopropilfosforil)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona, 7-{(aminossulfonilcarbamoí1)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona, 2 7-{(metilsulfonilcarbamoí1)metiloxi}-3 ',4 ',5-trimetoxi-flavona, 7 - { (carbamilcarbamoí 1) metiloxi}-3',4', 5-trimetoxi-flavona, 7-{(formilcarbamoí1)metiloxi}-3',4',5-trimetoxiflavona, e 7 - { (acet ilcarbamoí 1) metiloxi}-3,,4'', 5-trimetoxif lavona .

3. Composto da reivindicação 1, em que o sal farmaceuticamente aceitável é um sal com um metal alcalino básico selecionado do grupo que consiste em Na+, K+, Ca2+, Mg2+ e Zn2+.

4. Processo para a preparação de um composto representado pela Fórmula 1-1':

em que R2 é hidrogénio, ciano, benzenossulfonilo, aminossulfonilo, metilsulfonilo, carbamilo, formilo ou acetilo, que compreende: i) condensar um anidrido de 7-carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxiflavona de Fórmula 2:

com R2NH2 (R2 é como definido para a Fórmula 1-1') para preparar um composto de Fórmula 1-1'; e 3 ii) opcionalmente, fazer reagir o composto de Fórmula 1-1' com um metal alcalino para preparar um sal do composto de Fórmula 1-1' .

5. Processo para a preparaçao de um composto representado pela Fórmula 1-2':

que compreende: i) alquilar a posição 7-hidroxi de um composto de Fórmula 3:

para preparar um

ii) metilar a posição 5-hidroxi do composto de Fórmula 4 com uma base e um reagente de metilação na presença de um solvente aprótico, para preparar um composto de Fórmula 5: 4

iii) ciclizar o composto de Fórmula 5 com azida de sódio na presença de um solvente aprótico, para preparar um composto de Fórmula 1-2'; e iv) opcionalmente, fazer reagir o composto de Fórmula 1-2' com um metal alcalino para preparar um sal do composto de Fórmula 1-2'.

6. Processo para a preparação de um composto representado pela Fórmula 1-3': em que Fórmula

ou pela 1-3" :

que compreende: i) fazer reagir um composto de Fórmula 6: 5 och3 HO.

och3 OCHP (6) com haleto de fosfonilo ( (R40) 2POCH2X: R4 é como definido para a Fórmula 1-3' e X é bromo, cloro ou iodo) para preparar um composto de Fórmula 7:

em que cada R4 é como definido para a Fórmula 1-3', e ii) aquecer o composto de Fórmula 7 com azida de sódio na presença de um solvente aprótico, ou agitar o composto de Fórmula 7 sob refluxo numa solução aquosa ácida, para preparar um composto de Fórmula 1-3' ou 1-3"; e ii) opcionalmente, fazer reagir o composto de Fórmula 1-3' ou 1-3" com um metal alcalino para preparar um sal do composto Fórmula 1-3' ou 1-3".

7. Composição farmacêutica para o tratamento e prevenção de síndroma do olho seco, que compreende um composto de Fórmula 1 da reivindicação 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como ingrediente ativo.

8. Composição farmacêutica para o tratamento e prevenção de síndroma do olho seco, que compreende uma 7- 6 carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxiflavona mono-hidratada como ingrediente ativo.

9. Utilização de um composto de Fórmula 1 da reivindicação 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para a preparação de um medicamento destinado à prevenção e tratamento de síndroma do olho seco.

10. Utilização de uma 7-carboximetiloxi-3',4',5-trimetoxi-flavona mono-hidratada para a preparação de um medicamento destinado à prevenção e tratamento de síndroma do olho seco. Lisboa, 18 de Novembro de 2011