PT2155717E - 2-[4-(pirazol-4-ilalquil)piperazin-1-il]-3-fenil-pirazinas e -piridinas e 3-[4-(pirazol-4-ilalquil)piperazin-1-il]-2- fenil-piridinas como antagonistas do recetor 5-ht7 - Google Patents

2-[4-(pirazol-4-ilalquil)piperazin-1-il]-3-fenil-pirazinas e -piridinas e 3-[4-(pirazol-4-ilalquil)piperazin-1-il]-2- fenil-piridinas como antagonistas do recetor 5-ht7 Download PDF

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Michael Philip Cohen
Patrick Gianpietro Spinazze
Sandra Ann Filla
Sarah Lynne Hellman
Valentina O Badescu
Peter Thaddeus Gallagher
Maria Ann Whatton
Anne Marie Camp
Barry Peter Clark
Michael Philip Mazanetz
Marta Mariapineiro-Nunez
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Description

ΡΕ2155717 1
DESCRIÇÃO "2-[4-(PIRAZOL—4—ILALQUIL)PIPERAZIN-l-IL]-3-FENIL-PIRAZINAS E —PIRIDINAS E 3—[4—(PIRAZOL—4—ILALQUIL)PIPERAZIN—1—IL]—2— FENIL—PIRIDINAS COMO ANTAGONISTAS DO RECETOR 5-HT7" O neurotransmissor serotonina (5-hidroxitripta-mina, 5-HT) tem uma farmacologia rica resultante de uma população heterogénea de pelo menos 14 recetores distintos. Cada recetor tem uma distribuição distinta, embora frequentemente sobreposta ao longo de todo o corpo e um único local de ligação a serotonina conduzindo a diferentes afinidades para serotonina e respostas fisiológicas diferentes à interação com serotonina. 0 recetor 5-HT7 tem demonstrado ter papéis funcionais importantes na termor-regulação, ritmo circadiano, aprendizagem e memória, sinalização do hipocampo, e sono. 0 recetor 5-HT7 tem também sido relacionado com várias perturbações neurológicas incluindo enxaqueca e ansiedade, bem como com a dor persistente, mais especificamente dor inflamatória e dor neuropática.
Antagonistas do recetor 5-HT7 de afinidade elevada iriam proporcionar terapêuticas úteis para o tratamento dos distúrbios associados ao recetor 5-HT7 mencionados anteriormente incluindo enxaqueca, e dor persistente, particularmente, dor inflamatória e neuropática. Antagonistas do recetor 5-HT7 de afinidade elevada que também são 2 ΡΕ2155717 seletivos para o recetor 5-HT7, iriam proporcionar tal beneficio terapêutico sem os indesejáveis eventos adversos associados à modulação da outra subclasse de recetores serotoninérgicos, tais como 5-HTiA, 5-HTiB e 5-HTiD. A obtenção de seletividade para o recetor 5-HT7 revelou-se dificil no processo de projeção de antagonistas 5-HT7. Agonistas do recetor 5-HTiA têm sido associados ao sindroma de serotonina. 5-HTiD e agonistas do recetor 5-ΗΤχΒ têm sido associados a eventos adversos tais como dor torácica.
Leopoldo, M. (2004) recetores de Serotonina(7) (5-HT(7)Rs) e seus ligandos. Curr. Med. Chem. 11, 629-661), descreve várias abordagens anteriores para a obtenção de ligandos do recetor 5-HT7. WO 2004/067703 revela uma série de compostos contendo fenilo que são descritos como antagonistas 5HT7 e agonistas inversos. A presente invenção proporciona novos antagonistas potentes do recetor 5-HT7. Certos compostos da presente invenção são seletivos para o recetor 5-HT7 em comparação com outros recetores de serotonina. A presente invenção proporciona compostos antagonistas do recetor 5-HT7 seletivo da Fórmula I:
I 3 ΡΕ2155717 onde : A e B são cada um independentemente -C(H)= ou -N=, desde que pelo menos um de A e B é -N=; n é 1, 2, ou 3; m é 0, 1, 2, ou 3; R1 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidrogénio, ii) (Ci-C6)alquilo opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, ou em alternativa, opcionalmente substituído com hidroxi e 1 a 3 substituintes fluoro, iii) (C3-C7)cicloalquil-(Co-C2)alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, iv) (C1-C2)alquil-O-(C1-C2) alquil-, v) Ph1- (C0-C2) alquil-, vi) Ar1- (Co-C2) al-quil-, vii) (Ci-C2) alquil-S (O) 2-(Co-C3) alquil-, viii) Ph1-S(0)2-, ix) Ar1-S (O) 2~, x) (C1-C2) alquil-NH-(C1-C2) alquil-, xi) ( (Ci-C2) alquil) 2-N-(Ci-C2) alquil-, xii) (Ci-C2) alquil-NH-C (O) - (C0-C2) alquil-, xiii) ( (Ci-C2) alquil) 2-N-C (O) - (Co-C2) alquil-, xiv) pirrolidin-l-il-C (O) - (C0-C2) alquil-, xv) (Ci-C2) alquil-C (O)-NH-(C1-C2) alquil-, xvi) (Ci-C2) alquil) -C (O) -N (Ci-C2 alquil) - (Ci-C2) alquil-, xvii) (C1-C2) alquil-S (O) 2~NH-(Ci-C2)alquil-, e xviii) 2-oxo-oxazolidin-5-il-; R2 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidrogénio, ii) halo, iii) hidroxi, iv) (C1-C4) alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, e v) (C1-C2) alquil-O- (Co-C2) alquil-; R3 é selecionado a partir do grupo constituído por hidrogénio, halo, e (C1-C4)alquil-;
Cada R4 é independentemente selecionado a partir do grupo constituído por i) halogénio, ii) (Ci-C2) alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes 4 ΡΕ2155717 fluoro, iii) (Ci-C2)alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, iv) ciclopropil-(C0-C1) alquil-O-, v) ciano, vi) (C1-C2) alquil-S (0) 2-, e vii) (C1-C4) alquil-C (0) ou em alternativa, m é 1 ou 2, um substituinte R4 é selecionado a partir do grupo constituído por viii) (Cq-C4)alquilo substituído adicionalmente com um substituinte selecionado a partir do grupo constituído por (hidroxi, (C1-C4) alcoxi, ciano, e amino) , ix) (C1-C2) alquil-O-C (0)-, x) (C1-C2) alquil-S (0) 2-(Ci-C2) alquil-, xi) (C1-C4) alquil-C(0)-N(R6)-, xii) (C1-C4) alquil-C (0) -N (R6) -metil-, xiii) ciclopropil-C (0) -NH-metil-, xiv) (C1-C2) alquil-S (0) 2-N (R6) -(C1-C2) alquil-, xv) (C1-C2) alquil-O- (C0-C2) alquil-C (0) -N (R6) -opcionalmente substituído adicionalmente com um grupo fluoro, xvi) (C1-C2) alquil-O-(Co-C2) alquil-C (0)-N (R6)-metil-opcionalmente substituído adicionalmente com um grupo fluoro, xvii) (R6) (R7) N-C (0) - (C1-C2) alquil-, xviii) (Ci-C2) alquil-C (0) -NH-metil-C (0)-, xix) (R6) (R7) N-C (0) -N (H) -metil-, xx) (R6) (R7) N-C (S)-N (H)-metil-, xxi) (R6) (R7) N-C (0) -0-metil-, xxii) (R6) (R7) N-C (0) metoxi-, e xxiii) (R6) (R7)N-C(0)metoximetil-, e se presente, o segundo substituinte R4 é fluoro ou cloro; R6 é hidrogénio ou metilo; R7 é hidrogénio ou (C1-C3) alquilo;
Ph1 é fenilo opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo constituído por halo, (Ci-C2)alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro, e (C1-C2) alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro; 5 ΡΕ2155717
Ar1 é uma porção heteroarilo selecionada a partir de piridilo, pirimidilo, imidazolilo, pirrolilo, tienilo, pirazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, e isotia-zolilo, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído adicionalmente com 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de metilo e etilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção também proporciona composições farmacêuticas compreendendo um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em associação com um veiculo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.
Num outro aspeto da presente invenção, é ai proporcionado um ou mais compostos da Fórmula I, ou seu (s) sal(is) farmaceuticamente aceitável(is) para uso terapêutico. Este aspeto inclui o uso de um ou mais compostos da Fórmula I, ou seu(s) sal (is) farmaceuticamente aceitável (is) para uso como fármaco. Da mesma forma, este aspeto da invenção proporciona um ou mais compostos da Fórmula I, ou seu(s) sal (is) farmaceuticamente aceitável(is) para o tratamento de enxaqueca em mamíferos, particularmente humanos, o tratamento profilático de enxaqueca em mamíferos, o tratamento de dor persistente, particularmente dor inflamatória ou neuropática, em mamíferos, particularmente humanos .
Ainda outro modelo de realização da invenção 6 ΡΕ2155717 proporciona um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de ansiedade em mamíferos. Preferencialmente, o mamífero é um humano.
Num outro aspeto da presente invenção, é proporcionado o uso de um composto da Fórmula I, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, no fabrico de um medicamento para o tratamento e/ou o tratamento profilático de enxaqueca.
Num outro aspeto da presente invenção, é proporcionado o uso de um composto da Fórmula I, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, no fabrico de um medicamento para o tratamento de dor persistente, particularmente dor inflamatória e/ou neuropática.
Num outro aspeto da presente invenção, é proporcionado o uso de um composto da Fórmula I, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, no fabrico de um medicamento para o tratamento de ansiedade.
Adicionalmente, a presente invenção proporciona uma formulação farmacêutica adaptada para o tratamento de enxaqueca e/ou para o tratamento profilático de enxaqueca, compreendendo um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em associação com um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis. 7 ΡΕ2155717
Da mesma forma, a presente invenção proporciona uma formulação farmacêutica adaptada para o tratamento de dor persistente, particularmente dor inflamatória e/ou neuropática, compreendendo um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em associação com um veiculo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.
Adicionalmente, a presente invenção proporciona uma formulação farmacêutica adaptada para o tratamento de ansiedade compreendendo um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em associação com um veiculo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.
Os termos químicos gerais utilizados ao longo do documento têm os seus significados habituais. Por exemplo, o termo "alquilo" refere-se a um grupo hidrocarboneto saturado ramificado ou não ramificado. A título de ilustração, mas sem limitação, o termo " (Ci-C4) alquilo" refere-se a metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, e sec-butilo. 0 termo " (Ci-C6) alquilo" refere-se a todos os grupos alquilo saturados ramificados e não ramificados possuindo de um a seis átomos de carbono. Tal como aqui utilizado, o termo " (C0-C2) alquilo" refere-se a uma ligação simples, ou a uma porção de ligação metileno ou etileno. 0 termo " (C3-C7) cicloalquilo" refere-se a ciclo- ΡΕ2155717 propilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo e ciclo-heptilo. (C3-C7) cicloalquil (C0-C2) alquilo, refere-se a uma porção cicloalquilo possuindo de 3 a 7 átomos de carbono no anel, que estão ligados através de uma ligação simples (i.e. Co-alquilo) ou um grupo de ligação alquileno possuindo 1 ou 2 átomos de carbono. Cada grupo alquilo, cicloalquilo, e cicloalquilalquilo pode ser opcionalmente substituído como para aqui previsto. 0 termo "alcoxi" refere-se a um grupo alquilo que é ligado através de uma átomo de oxigénio. 0 termo "halo" refere-se a fluoro, cloro, bromo, ou iodo. Grupos halo preferidos são fluoro, cloro, e bromo. Grupos halo mais preferidos são fluoro e cloro. 0 termo "grupo de proteção de amino" tal como utilizado nesta especificação refere-se a um substituinte comummente empregue para bloquear ou proteger uma funcionalidade amino enquanto outros grupos funcionais reagem no composto. A espécie de grupo de proteção de amino empregue não é crítica desde que o grupo amino derivado esteja estável para as condições das reações subsequentes noutras posições da molécula e possa ser removido no momento apropriado sem interromper o remanescente da molécula. A seleção e uso (adição e subsequente remoção) de grupos protetores de amino é bem conhecida no âmbito das habilidades ordinárias da técnica. Exemplos de grupos adicionais a que se faz referência através dos termos já apresentados são 9 ΡΕ2155717 descritos por T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3a edição, John Wiley and Sons, Nova Iorque, NI, 1999, capitulo 7, a seguir referidos como "Greene". 0 termo "farmacêutico" ou "farmaceuticamente aceitável" quando aqui utilizado como um adjetivo, significa substancialmente não tóxico e substancialmente não deletério para o recipiente.
Por "composição farmacêutica" entende-se ainda que o veiculo, solvente, excipientes e/ou sal deve ser compatível com o ingrediente ativo da composição (e.g. um composto da Fórmula I). É entendido por aqueles de conhecimento comum nesta técnica que o termos "formulação farmacêutica" e "composição farmacêutica" são geralmente interpermutáveis e são por isso utilizados para o propósito desta aplicação. 0 termo "quantidade eficaz" significa uma quantidade de um composto da Fórmula I que é capaz de antagonizar recetores 5-HT7 e/ou causar um dado efeito farmacológico. 0 termo "solvente adequado" refere-se a qualquer solvente, ou mistura de solventes que solubiliza suficientemente os reagentes para proporcionar um meio no qual se efetua a reação desejada e que não interfira com a reação desej ada. 10 ΡΕ2155717 É entendido que compostos da presente invenção podem existir como estereoisómeros. Como tal, todos os enantiómeros, diastereómeros, e suas misturas, são incluídos dentro do âmbito da presente invenção. Quando as estereoquímicas específicas são identificadas neste pedido de patente, as designações Cahn-Prelog-Ingold de (R) - e (S)- e a designação cis e trans de estereoquímica relativa são utilizadas para fazer referência a isómeros específicos e estereoquímica relativa. Rotações óticas conhecidas são designadas por (+) e (-) para dextrógiro e levógiro, respetivamente. Quando um composto quiral é resolvido nos seus isómeros, mas configurações absolutas ou rotações óticas não são determinadas, os isómeros são designados arbitrariamente como isómero 1, isómero 2, etc. Embora todos os enantiómeros, diastereómeros, e suas misturas, sejam contemplados na presente invenção, modelos de realização preferidos são enantiómeros individuais e diastereómeros individuais.
Handbook of Pharmaceutical Salts: É geralmente entendido pelos especialistas nesta técnica, que compostos destinados ao uso em composições farmacêuticas são rotineiramente, embora não necessariamente, convertidos numa forma de sal num esforço para otimizar caraterísticas tais como as propriedades de manuseamento, estabilidade, farmacocinética, e/ou biodisponibi-lidade, etc. Métodos para converter um composto numa dada forma de sal são bem conhecidos na técnica (ver, e.g., P. Stahl, et al., 11 ΡΕ2155717
Properties, Selection and Use, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); Berge, S.M, Bighley, L.D., e Monkhouse, D.C., J. Pharm. Sei., 66:1, (1977)). Nos casos em que os compostos da presente invenção são aminas e portanto de natureza básica, eles reagem prontamente com uma variedade alargada de ácidos orgânicos e inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis para formar com estes sais de adição de ácido farmaceu-ticamente aceitáveis. Tais sais são também modelos de realização desta invenção. É bem sabido que tais compostos podem formar sais em várias proporções molares com o ácido para proporcionar, por exemplo, o sal hemi-ácido, mono-ácido, di-ácido, etc. Quando no procedimento de formação de sal, o ácido é adicionado numa proporção estequiométrica específica, a não ser que seja de outro modo analisado para confirmar, presume-se que o sal, embora não se saiba, se formar nessa proporção molar.
Abreviaturas aqui utilizadas são definidas como se segue: "BINAP" significa (±)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'- binaftaleno. "Salmoura" significa uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada. "DCE" significa 1,2-dicloroetano. "DCM" significa diclorometano. "EDC" significa cloridrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodi-imida. 12 ΡΕ2155717 "HOBt" significa hidrato de 1-hidroxibenzotriazole. "ISPA" significa ensaio de proximidade de cintilação de imunoadsorção. "MsCl" significa cloreto de mesilo (CH3-S (0) 2-Cl) . "MS (ES)" significa espectroscopia de massa usando ionização por electropulverização. "MTBE" significa éter t.-butil-metí lico. "PPE" significa extravasamento de proteina de plasma. "Cromatografia SCX" significa cromatografia numa coluna ou cartuxo SCX. "Coluna SCX" ou "cartuxo SCX", tal como utilizados aqui, dizem respeito a uma coluna ou cartuxo descartável ou equivalente (como por Exemplo um cartuxo SCX-2) de resina de permuta catiónica forte à base de sílica Varian Bond Elute®. "SPA" significa ensaio de proximidade de cintilação, que pode ou não ser uma ensaio do tipo imunoadsorção. "TBAS" significa bissulfito de tetrabutilamónio.
Embora todos os compostos da presente invenção sejam úteis como antagonistas 5-HT7, certas classes são preferidas, como por exemplo, compostos possuindo a Fórmula I (e)
onde: 13 ΡΕ2155717 A e B são cada um independentemente -C(H)= ou -N=, desde que pelo menos um de A e B é -N= ; R1 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidrogénio, ii) (Ci-Cô)alquil- opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, ou em alternativa, opcionalmente substituído com hidroxi e 1 a 3 substituintes fluoro, iii) (C3-C7)cicloalquil-(Co_C2)alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, iv) (C1-C2)alquil-O-(C1-C2) alquil-, v) Ph1- (C0-C2) alquil-, vi) Ar1- (C0-C2) alquil-, vii) (Ci-C2) alquil-S (0) 2“ (C0-C3) alquil-, viii) Ph1-S (0) 2-, ix) Ar1-S (0) 2-, x) (C1-C2) alquil-NH-(C1-C2) alquil-, xi) ( (C1-C2) alquil) 2-N-(C1-C2) alquil-, xii) (Ci-C2) alquil-NH-C (0) - (Co-C2) alquil-, xiii) ( (Ci-C2) alquil) 2-N-C (0) - (Co_C2) alquil-, xiv) pirrolidin-l-il-C (0) - (Co-C2) alquil-, xv) (Ci~ C2) alquil-C (0)-NH-(C1-C2) alquil-, xvi) (C1-C2) alquil) -C (0) -N (C1-C2 alquil) - (C1-C2) alquil-, xvii) (C1-C2) alquil-S (0) 2-NH-(Ci-C2) alquil-, e xviii) 2-oxo-oxazolidin-5-il-; R2 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidrogénio, ii) halo, iii) hidroxi, iv) (C1-C4) alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, e v) (Ci-C2) alquil-0- (Co_C2) alquil-; R3 é selecionado a partir do grupo constituído por hidrogénio, halo, e (C1-C4)alquil-;
Cada R4 é independentemente selecionado a partir do grupo constituído por halogénio, (Ci-C2)alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, (Ci-C2)alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, ciclopropil- (C0-C1) alquil-0-, ciano, (C1-C2) alquil-S (0) 2-, e (C1-C4) alquil-C (0)-; 14 ΡΕ2155717
Ph1 é fenilo opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo constituído por halo, (Cx-C2)alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro, e (C1-C2)alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro;
Ar1 é uma porção heteroarilo selecionada a partir de piridilo, pirimidilo, imidazolilo, pirrolilo, tienilo, pirazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, e isotiazo-lilo, qualquer um dos quais poderá ser opcionalmente substituído adicionalmente com 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de metilo e etilo; n é 1, 2, ou 3; m é 0, 1, 2, ou 3; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Outras classes preferidas de compostos da Fórmula I e I(e) são compostos possuindo qualquer uma das seguintes seleções enumeradas de substituintes: 1) R1 é hidrogénio, (C1-C3)alquilo opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 3 substituintes fluoro, (Οχ- C2) alcoxi- (Cx-C2) alquilo, Ph1- (C0-C2) alquilo, Ar1- (C0-C2) alquilo, (Ci-C2) alquil-S (0) 2- (C0-C3) alquilo, Ph1 -S(0)2-, Ar1-S (0) 2~, (C1-C2) alquil-NH-(C1-C2) alquilo, ( (C1-C2) alquil) 2-N- (Cx-C2) alquilo, (Ci-C2) alquil-NH-C (0) - (Co-C2) alquilo, ( (Cx-C2) alquil) 2-N-C (0) - (C0-C2) alquilo, (Cx-C2) alquil-C (0) -NH- «3χ-C2) alquilo, (Cx-C2) alquil)-C (0)-N (C1-C2 alquil) - (Cx~C2) alquilo ou (Cx-C2) alquil-S (0) 2-NH-(Cx-C2) alquilo; 2) R1 é hidrogénio, (Cx-C3)alquilo opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 3 substituintes fluoro, (Οχ- 15 ΡΕ2155717 C2) alcoxi-(Ci-C2) alquilo, Ph1- (C0-C2) alquilo, ou Ar1- (C0-C2) alquilo; 3) R1 é hidrogénio, (Ci-C2)alquilo opcionalmente substituído com 1 a 3 substituintes fluoro, (C2-C3) alquilo opcionalmente substituído com hidroxi ou hidroxi e 1 a 3 substituintes fluoro, (C1-C2) alcoxi-(Ci-C2) alquilo, Ph1- (Co-C2) -alquilo, ou Ar1-(Co-C2) alquilo; 4) R1 é (Ci-C2)alquilo opcionalmente substituído com 1 a 3 substituintes fluoro, (C2-C3)alquilo opcionalmente substituído com hidroxi ou hidroxi e 1 a 3 substituintes fluoro, ou (Ci-C2) alcoxi- (C1-C2) alquilo; 5) R1 é (Ci-C2)alquilo opcionalmente substituído com 1 a 3 substituintes fluoro, ou (C1-C2) alcoxi- (Ci-C2) alquilo; 6) R1 é Ph1- (C0-C2) alquilo ou Ar1- (C0-C2) alquilo; 7) R1 é fenilo ou benzilo opcionalmente substituído com fluoro; 8) R1 é piridinilo, imidazolilo, ou pirazolilo; 10) R1 é (Ci-C2) alquil-S (O) 2_ (C0-C3) alquilo, Ph1-S(0)2-/ ou Ar1-S(0)2-; 11) R1 é (C1-C2) alquil-NH-(C!-C2) alquilo, ( (C)-C2) alquil) 2-N-(C) -C2) alquilo, (C1-C2) alquil-NH-C (0) - (Ci~C2) alquilo, ( (Ci — C2) alquil) 2-N-C (0) - (Ci-C2) alquilo, (C1-C2) alquil-C (0) -NH- (Ci-C2) alquilo, ou (Ci-C2) alquil) -C (0) -N (Ci-C2 alquil) - (Ci-C2) -alquilo; 13) R2 é hidrogénio, halo, metilo, etilo, -CF3, -CH2CF3, hidroxi, hidroximetilo, metoximetilo; 14) R2 é hidrogénio, cloro, metilo, etilo, ou -CF3; 15) R2 é hidrogénio ou metilo; 16) R3 é hidrogénio, halo, metilo, ou etilo; 17) R3 é hidrogénio ou metilo; 16 ΡΕ2155717 18) R4 é halo, (C1-C2)alquilo opcionalmente substituído adi cionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro, (C1-C2) alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro, ciano, ou CH3-C(0)-; 19) R4 é fluoro, cloro, -CF3, (Ci~C2) alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro, ciano, ou CH3-C(0)-; 20) R4 é fluoro, cloro, -CF3, metoxi, -0-CF3, ou CH3-C(0)-; 21) R4 é fluoro, cloro, -CF3, metoxi, ou -O-CF3; 22) R4 é fluoro ou cloro; 23) R4 é fluoro; 24) R4 é 4-fluoro. 25) R4 é cloro; 26) R4 é 4-cloro;
Geralmente, para compostos onde m é 2 ou 3, compostos particularmente preferidos são aqueles onde cada
R é fluoro, cloro, metilo, ou -CF3. Destes compostos preferidos, os mais preferidos são aqueles compostos onde cada R4 é fluoro ou cloro.
Um qrupo de compostos favorito da presente invenção é o representado pela Fórmula (Ia):
Ia 17 ΡΕ2155717 onde : R1 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidrogénio, ii) (Ci-C6)alquil- opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, ou em alternativa, opcionalmente substituído com hidroxi e 1 a 3 substituintes fluoro, iii) (C3-C7)cicloalquil-(C0-C2)alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, iv) (C1-C2)alquil-O-(C1-C2) alquil-, v) Ph1- (C0-C2) alquil-, vi) Ar1- (C0-C2) alquil-, vii) (C1-C2) alquil-S (0) 2-(C0-C3) alquil-, viii) Ph1-S(0)2-, ix) Ar1-S (0) 2-/ x) (C1-C2) alquil-NH-(Ci-C2) alquil-, xi) ( (Ci~ C2) ) alquil) 2-N-(C1-C2) alquil-, xii) (C1-C2) alquil-NH-C (0)-(C0-C2) alquil-, xiii) ( (C1-C2) alquil) 2-N-C (0) - (C0-C2) alquil-, xiv) pirrolidin-l-il-C (0) - (C0-C2) alquil-, xv) (Ci-C2) alquil-C (0)-NH-(C1-C2) alquil-, xvi) (C1-C2) alquil) -C (0) -N (Ci-C2 alquil) - (C1-C2) alquil-, xvii) (C1-C2) alquil-S (0) 2-NH- (Ci~C2) alquil-, e xviii) 2-oxo-oxazolidin-5-il-; r2 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidrogénio, ii) halo, iii) hidroxi, iv) (C1-C4) alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, e v) (Ci-C2) alquil-0- (C0-C2) alquil-; r3 é selecionado a partir do grupo constituído por hidrogénio, halo, e (C1-C4) alquil-;
Cada R4 é independentemente selecionado a partir do grupo constituído por halogénio, (C1-C2)alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, (Ci_C2)alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, ciclopropil-(C0-C1)alquil-0-, ciano, (C1-C2) alquil-S (0) 2-, e (C1-C4) alquil-C (0)-; ph1 é fenilo opcionalmente substituído com um substituinte 18 ΡΕ2155717 selecionado a partir do grupo constituído por halo, (Ci~ C2)alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro, e (C1-C2) alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro;
Ar1 é a porção heteroarilo selecionada a partir de piri-dilo, pirimidilo, imidazolilo, pirrolilo, tienilo, pira-zolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, e isotiazolilo, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído adicionalmente com 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de metilo e etilo; n é 1, 2, ou 3; m é 0, 1, 2, ou 3; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Outro grupo favorito de compostos da presente invenção é o representado pela Fórmula (Ib)j_
onde: R1 é selecionado a partir do grupo consistindo em i) hidrogénio, ii) (Ci-C6)alquil- opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, ou em alternativa, opcionalmente substituído com hidroxi e 1 a 3 substituintes fluoro, iii) (C3-C7)cicloalquil-(C0-C2)alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, iv) (C1-C2)alquil-O- 19 ΡΕ2155717 (C) -C2) alquil-, v) Ph1-(C0-C2) alquil-, vi) Ar1-(Co-C2) al-quil-, vii) (Ci-C2) alquil-S (0) 2-(C0-C3) alquil-, viii) Ph1-S(0)2-, ix) Ar1-S(0)2-, x) (Ci-C2) alquil-NH-(Ci_C2) alquil-, xi) ( (C1-C2) alquil) 2-N-(C1-C2) alquil-, xii) (C1-C2) alquil-NH-C (0) - (C0-C2) alquil-, xiii) ( (Ci-C2) alquil) 2-N-C (0) - (C0-C2) alquil-, xiv) pirrolidin-l-il-C (0) - (Co_C2) alquil-, xv) (Ci~ C2) alquil-C (0)-NH-(C1-C2) alquil-, xvi) (C1-C2) alquil) -C (0) -N (Ci-C2 alquil)- (C1-C2) alquil-, xvii) (C1-C2) alquil-S (0)2-NH-(Ci-C2)alquil-, e xviii) 2-oxo-oxazolidin-5-il-; R2 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidrogénio, ii) halo, iii) hidroxi, iv) (C1-C4) alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, e v) (Ci-C2) alquil-0- (Co-C2) alquil-; R3 é selecionado a partir do grupo constituído por hidrogénio, halo, e (C1-C4)alquil-;
Cada R4 é independentemente selecionado a partir do grupo constituído por halogénio, (Ci-C2)alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, (Ci-C2)alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, ciclopropil- (Co_Cl)alquil-0-, ciano, (Ci-C2) alquil-S (0) 2-, e (C1-C4) alquil-C (0) -;
Ph1 é fenilo opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo constituído por halo, (Ci— C2)alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro, e (Ci-C2) alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro;
Ar1 é a porção heteroarilo selecionado a partir de piri- dilo, pirimidilo, imidazolilo, pirrolilo, tienilo, pirazo- lilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, e isotiazolilo, 20 ΡΕ2155717 qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído adicionalmente com 1 ou 2 substituintes independentemente selecionado a partir de metilo e etilo; n é 1, 2, ou 3; m é 0, 1, 2, ou 3; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Ainda num outro grupo de compostos da presente invenção favorecido é aquele representado pela Fórmula (Ic) :
onde: R1 é selecionado a partir do grupo consistindo de i) hidrogénio, ii) (Ci-C6)alquil- opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, ou em alternativa, opcionalmente substituído com hidroxi e 1 a 3 substituintes fluoro, iii) (C3-C7)cicloalquil-(C0-C2)alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, iv) (Ci-C2) alquil-O-(Ci-C2) alquil-, v) Ph1- (C0-C2) alquil-, vi) Ar1- (C0-C2) alquil-, vii) (C1-C2) alquil-S (O) 2-(C0-C3) alquil-, viii) Ph1-S(0)2-, ix) Ar1-S (O) 2~ r x) (C1-C2) alquil-NH-(C1-C2) alquil-, xi) ( (C1-C2) alquil) 2-N-(C1-C2) alquil-, xii) (Ci-C2) alquil-NH-C (O) - (Co-C2) alquil-, xiii) ( (Ci-C2) alquil) 2-N-C (O) - (Co_C2) alquil-, xiv) pirrolidin-l-il-C (O) - (Co“C2) alquil-, xv) (Ci — C2) alquil-C (O)-NH-(C1-C2) alquil-, xvi) (C1-C2) alquil) -C (O) -N(C)-C2 alquil) - (C1-C2) alquil-, xvii) (C1-C2) alquil-S (O) 2- 21 ΡΕ2155717 NH-(C1-C2)alquil-, e xviii) 2-oxo-oxazolidin-5-il-; R2 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidrogénio, ii) halo, iii) hidroxi, iv) (C1-C4) alquil- opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, e v) (Ci-C2) alquil-O- (C0-C2) alquil-; R3 é selecionado a partir do grupo constituído por hidrogénio, halo, e (C1-C4)alquil-;
Cada R4 é independentemente selecionado a partir do grupo constituído por halogénio, (C1-C2) alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, (Ci~C2) alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, ciclopropil-(C0-C1)alquil-O-, ciano, (Ci-C2) alquil-S (0) 2_, e (C1-C4) alquil-C (0) -;
Ph1 é fenilo opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo constituído por halo, (Ci-C2)alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro, e (C1-C2) alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro; Ar1 é uma porção heteroarilo selecionada a partir de piri-dilo, pirimidilo, imidazolilo, pirrolilo, tienilo, pirazo-lilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, e isotiazolilo, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído adicionalmente com 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de metilo e etilo; n é 1, 2, ou 3; m é 0, 1, 2, ou 3; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Dentro de cada grupo de compostos favoritos de 22 ΡΕ2155717 acordo com a Fórmula (Ia), (Ib), e (Ic) as seleções preferidas de substituintes R1’4 são aquelas de acordo com as seleções preferidas 1 a 26 delineadas anteriormente para a Fórmula geral I.
Geralmente, compostos de acordo com a Fórmula (Ia) são preferidos sobre compostos da Fórmula (Ib) e (Ic).
Dos grupos preferidos de compostos já referidos são também geralmente preferidos os compostos em que n é 1.
As definições preferidas listadas nos parágrafos de 1) a 26) são as seleções preferidas para cada substi-tuinte R1, R2, R3, e R4 individualmente e independentemente umas das outras. Como tal, para qualquer dada seleção de um substituinte R1-4 preferido já referido, compostos preferidos adicionais são aqueles que possuem o primeiro substituinte selecionado preferido e também que possuem uma seleção preferida para um ou mais dos outros substituintes R1”4 já referidos. Da mesma forma, tais combinações de seleções preferidas de substituintes R1-4 aplicam-se a compostos preferidos da Fórmula (Ia), (Ib), e/ou (Ic). A titulo de Exemplo de tais combinações preferidas, mas não pretendendo ser interpretadas como limitação, as combinações de seleções preferidas que se seguem são combinações preferidas: 27) qualquer uma das seleções de acordo com os parágrafos de 1) a 26) em que n é 1; 28) qualquer uma das seleções preferidas de acordo com os 23 ΡΕ2155717 parágrafos de 1) a 12) (i.e. seleções preferidas para R1) em combinação com qualquer uma das seleções preferidas de acordo com os parágrafos de 13) a 15) (i.e. seleções preferidas para R2) e/ou em combinação com qualquer uma das seleções preferidas de acordo com os parágrafos 16) ou 17) (i.e. seleções preferidas for R3) ; 29) qualquer uma das combinações preferidas de acordo com o parágrafo 28) em que n é 1. 30) qualquer uma das combinações preferidas de acordo com qualquer um dos parágrafos 27, 28, ou 29 em combinação com qualquer um dos parágrafos 18) a 26) (i.e. as seleções preferidas para R4) .
Destas combinações preferidas, combinações particularmente preferidas incluem, mas não se limitam a: 31) compostos em que R1 é (Ci-C2) alquilo, R2 e R3 são cada um independentemente hidrogénio, metilo ou etilo; n é 1, m é 1, e R4 é fluoro, cloro, -CF3, metoxi, -0-CF3, ou CH3-C(0)-; 32) compostos em que R1 é (Ci-C2)alquilo, R2 e R3 são cada um independentemente hidrogénio, metilo ou etilo; n é 1, m é 2, e cada R4 é independentemente fluoro, cloro, ou -CF3; 33) compostos em que R1 é Ph1- (Co-C2) alquilo, ou Ar1-(Co_ C2)alquilo, R2 e R3 são cada um independentemente hidrogénio, metilo ou etilo; n é 1, m é 1, e R4 é fluoro, cloro, - CF3, metoxi, -0-CF3, ou CH3-C(0)-; 34) compostos em que R1 é Ph1- (Co-C2) alquilo, ou Ar1-(Co_ C2)alquilo, R2 e R3 são cada um independentemente hidrogénio, metilo ou etilo; n é 1, m é 2, e cada R4 é independentemente fluoro, cloro, ou -CF3. 24 ΡΕ2155717
Ainda outro grupo de compostos favoritos da presente invenção é o representado pela Fórmula (Id)j_
R1 é selecionado a partir de i) hidrogénio, ii) (Ci — C3)alquil- opcionalmente mono-substituido com hidroxi, iii) fenilo, iv) benzilo, e v) piridilo; R2 é selecionado a partir de hidrogénio e (C1-C3)alquil-; R3 é selecionado a partir de hidrogénio e (C1-C3)alquil-; R4 é selecionado a partir do grupo constituido por i) (Ci~ C4)alquilo adicionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo constituido por hidroxi, (CR-C4)alcoxi, ciano, e amino, ii) (C1-C2) alquil-O-C (0) -, iii) (Ci-C2) alquil-S (0) 2-(Ci-C2) alquil-, iv) (C1-C4) alquil-C (0) -N(R6)-, v) (Ci-C4) alquil-C (0) -N (R6) -metil-, vi) ciclopropil-C (0) -NH-metil-, vii) (C1-C2) alquil-S (0) 2-N (R6) - (C1-C2) alquil-, viii) (C1-C2) alquil-0-(C0-C2) alquil-C (0)-N (R6) - opcionalmente substituído adicionalmente com um grupo fluoro, ix) (Ci-C2) alquil-0-(C0-C2) alquil-C (0)-N (R6)-metil- opcionalmente substituído adicionalmente com um grupo fluoro, x) (R6) (R7)N-C (0) - (C1-C2) alquil-, xi) (C1-C2) alquil-C (0)-NH-metil-C (0) -, xii) (R6) (R7) N-C (0)-N (H)-metil-, xiii) 25 ΡΕ2155717 (R6) (R7)N-C (S)-N (H)-metil-, xiv) (R6) (R7) N-C (0) -0-metil-, xv) (R6) (R7) N-C (0) metoxi-, e xvi) (R6) (R7) N-C (0) metoxime-til-; R5 é fluoro ou cloro; R6 é hidrogénio ou metilo; R7 é hidrogénio ou (Ci-C3) alquilo; pé 0 ou 1; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Dos compostos da Fórmula (Id), são preferidas as seguintes seleções enumeradas de substituintes: 35) R1 é metilo ou etilo; 36) R1 é fenilo ou benzilo; 37) R2 é hidrogénio ou metilo; 38) R3 é hidrogénio ou metilo; 39) um de R2 ou R3 é hidrogénio e o outro é metilo; 40) R2 é hidrogénio e R3 é metilo; 41) R4 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidroximetilo, ii) hidroxietilo, iii) metoximetilo, iv) cianometilo, v) metil-C(0)-N (H)-metil-, vi) metil-S(0)2_ N(H)-metil-, vii) metoxi-C(0)-NH-metil-, viii) metoximetil-C(0)-NH-metil-, e ix) (R6) (R7)N-C(0)-metil-; 42) R4 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidroximetilo, ii) hidroxietilo, iii) metoximetilo, iv) cianometilo, v) metil-C(0)-N(H)-metil-, vi) metil-S (0)2_ N(H)-metil-, vii) metoximetil-C(0)-NH-metil-, e viii) metil-N (R6) -C (0) -metil-; 43) R4 é selecionado a partir do grupo constituído por i) iii) metoximetilo hidroximetilo, ii) hidroxietilo, iii) metoximetilo, iv) 26 ΡΕ2155717 cianometilo, v) metil-C(0)-N(H)-metil-, e vi) metil-S(0) 2_ N (H)-metil-; 44) p é 0; 45) R1 é metilo, etilo, ou fenilo; R2 é hidrogénio ou metilo; R3 é hidrogénio ou metilo; p é 0; e R4 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidroxi-metilo, ii) hidroxietilo, iii) metoximetilo, iv) cianometilo, v) metil-C(0)-N(H)-metil-, e vi) metil-S (0)2_ N(H)-metil-; 46) R1 é metilo ou etilo, um de R2 ou R3 é hidrogénio e o outro é metilo, e R4 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidroximetilo, ii) hidroxietilo, iii) metoximetilo, iv) cianometilo, v) metil-C(0)-N(H)-metil-, e vi) metil-S (0)2-N(H)-metil-; 47) R1 é metilo ou etilo, um de R2 ou R3 é hidrogénio e o outro é metilo, e R4 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidroximetilo, ii) hidroxietilo, iii) metoximetilo, e iv) metil-C(0)-N(H)-metil-; 48) R1 é fenilo ou benzilo, um de R2 ou R3 é hidrogénio e o outro é metilo, e R4 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidroximetilo, ii) hidroxietilo, iii) metoximetilo, iv) cianometilo, v) metil-C(0)-N(H)-metil-, vi) metil-S (0)2-N(H)-metil-, vii) metoxi-C(0)-NH-metil-, viii) metoximetil-C (0)-NH-metil-, e ix) (R6) (R7)N-C(0)-metil-; 49) R1 é fenilo ou benzilo, um de R2 ou R3 é hidrogénio e o outro é metilo, e R4 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidroximetilo, ii) hidroxietilo, iii) metoximetilo, iv) cianometilo, v) metil-C(0)-N(H)-metil-, e 27 ΡΕ2155717 vi) metil-S (0)2_N(H)-metil-; e 50) R5 é fluoro.
Deverá ser tido em conta que as definições preferidas dos vários substituintes aqui referidas podem ser consideradas individualmente ou em combinação com outras definições preferidas de diversos outros substituintes. A titulo de exemplo, mas não pretendendo ser interpretadas como limitação, as combinações de seleções preferidas que se seguem são combinações preferidas: 51) qualquer uma das seleções de acordo com o parágrafos de 35) a 43) em que p é 0; 52) seleção preferida 35) ou 36) (i.e. seleções preferidas para R1) em combinação com qualquer uma das seleções preferida de acordo com os parágrafos 37) a 40) (i.e. seleções preferidas para R2 e/ou R3) ; 53) uma combinação preferida de acordo com o 52) em combinação com qualquer uma das combinações preferidas de acordo com os parágrafos 41) a 43) (i.e. combinando um dos padrões de substituição preferidos para a porção pirazolilo com uma das seleções preferidas para R4) .
Compostos preferidos específicos da presente invenção são os descritos nos Exemplos que aqui se encontram, incluindo os bases livres e os seus sais farmaceu-ticamente aceitáveis. Dois compostos particularmente preferidos da presente invenção são 2-[4-(3'-Fenil-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil)-pirazol-l-il]-eta- 28 ΡΕ2155717 nol e seus sais farmaceuticamente aceitáveis (o composto do Exemplo 198) e N-{4-[4-(1,5-Dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilo}-acetamida e seus sais farmaceuticamente aceitáveis (o composto de Exemplo 32 m).
Esquemas Gerais
Os compostos da presente invenção podem ser preparados de acordo com os seguintes esquemas sintéticos através de métodos bem conhecidos e considerados na técnica. Condições de reação adequadas para os passos destes esquemas são bem conhecidos na técnica e substituições apropriadas de solventes e co-reagentes encontram-se dentro do âmb i t o da perícia da técnica. Da mesma forma, será tido em conta pelos peritos na técnica que intermediários sintéticos podem ser isolados e/ou purificados através de várias técnicas bem conhecidas à medida que for necessário ou desejado, e que frequentemente, será possivel utilizar vários intermediários diretamente em passos sintéticos subsequentes com pouca ou nenhuma purificação. Além disso, os peritos na técnica terão em conta que em algumas circunstâncias, a ordem segundo a qual as porções são introduzidas não é critica. A ordem particular dos passos necessários para produzir os compostos da Fórmula I depende do composto particular a ser sintetizado, do composto de partida, e da labilidade relativa das porções substituídas, como é bem considerado pelos quimicos entendidos. Todos os substituintes, a não 29 ΡΕ2155717 ser que indicado de outro modo, são como definido previa-mente, e todos os reagentes são bem conhecidos e considerados na técnica. 0 Esquema I adiante, mostra uma síntese adequada de quatro passos para compostos pirazina da presente invenção. Neste esquema, 2,3-dicloropirazina (1) é nucleofili-camente substituída com piperazina mono-N-protegida para dar piperazinopirazina (2). A reação de Suzuki utilizando um ácido fenilborónico substituído apropriadamente ou insubstituído (3) na presença de uma catálise com paládio adequada proporciona a fenilpiperazinopirazina correspondente (4). Desproteção proporciona a amina secundária (5) que é então aminada redutivamente com o pirazoloaldeído apropriadamente substituído ou insubstituído (6) para proporcionar o composto desejado (7).
Esquema I
Embora o ácido fenilborónico (3) seja usado na ilustração acima será tido em conta que outros reagentes 30 ΡΕ2155717 podem ser usados para proporcionar a fenilpiperazino-pirazinas (4) (e.g. fenilestananos, zincatos de fenilo, ou Grignards de fenilo com um catalisador apropriado). Da mesma forma uma variedade de grupos N-protetores podem ser usados, juntamente com métodos de desproteção apropriados, como é prontamente considerado na técnica. Exemplos de grupos de proteção incluem, mas não se limitam a Boc, acetilo, benzilo, benziloxicarbonilo ou etoxicarbonilo. Os peritos quimicos vão também ter em conta que as reações referidas sejam passíveis de ser utilizadas com uma variedade de solventes e condições de reação e que condições ótimas vão depender do composto particular a ser sintetizado. A ordem dos passos de acoplamento no Esquema I pode ser invertida se desejado. Desta forma pirazoloaldeído (6) pode ser primeiro acoplado com a piperazina N-protegida, seguindo-se desproteção e acoplamento com 2,3-dicloropirazina (1), seguido-se finalmente a reação Suzuki para adicionar a porção fenilo.
Como uma alternativa para os passos de aminação redutiva, o intermediário (5) pode ser submetido a acilação com ácidos carboxilicos (8) na presença de EDC e HOBt tal como mostrado no Esquema II. Isto proporciona a amida (9), que após redução com dimetilsulfureto de borano ou similares, proporciona o composto (7). 31 ΡΕ2155717
Ssíjaeissa II
Embora o esquema anterior ilustre o uso de EDC e HOBt para ativar o ácido carboxilico para facilitar o acoplamento com a amina, será tido em conta que outros reagentes acilantes podem ser usados, como por exemplo, mas não se limitando a, diciclo-hexilcarbodi-imida ou tetra-fluoroborato de 2-(lH-benzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrame-tilurónio na presença de di-isopropiletilamina. Da mesma forma outros agentes de redução podem ser usados no passo de redução, como por exemplo, mas não se limitando a, alumino-hidreto de litio ou hidreto de di-isobutilaluminio. Da mesma forma, solventes alternativos e uma variedade de condições de reação podem ser empregues como é evidente para os peritos quimicos, como por Exemplo triacetoxiboro-hidreto de sódio em cloreto de metileno e similares para o passo de aminação redutiva.
Esquema III ilustra uma variação do Esquema II em que o éster de metilo ou etilo (10) do ácido carboxilico (8) do Esquema II é usado na presença de um agente redutor 32 ΡΕ2155717 tal como alumino-hidreto de lítio para proporcionar o composto (7). Ver Esquema III.
Tal como com o Esquema I, a ordem das reações nos Esquemas II e III pode ser modificada de tal forma que a piperazina mono-N-protegida pode ser reagida com 2,3-dicloropirazina (1), seguida ou por desproteção e por aminação redutiva para adicionar o pirazoloaldeído, ou pela reação de Suzuki para adicionar a porção fenilo. A outra reação é então executada, quer a reação de Suzuki para adicionar a porção fenilo, quer a desproteção e a aminação redutiva para adicionar o aldeido/éster de pirazolo, como apropriado para completar a síntese.
Uma via adicional para alcançar os compostos da invenção é através de alquilação do intermediário (5) como por Exemplo por reação dos mesilatos de alquilo (11) sob condições básicas tais como carbonato de potássio em acetonitrilo ou similares. (Ver Esquema IV) Será tido em contaque sulfonatos alternativos (e.g toluenossulfonatos ou trifluorometanossulfonatos) ou haletos de alquilo (e.g. brometos de benzilo, cloretos de benzilo) podem ser usados em vez de mesilatos de alquilo em tal passo de alquilação. ΡΕ2155717 33
Sscp.ierj:à IV
Compostos pirazole 3,5-dimetilados da presente invenção podem ser obtidos como ilustrado no Esquema V. Assim pentano-2,4-diona é reagida com benzil-hidrazina para dar 3,5-dimetilpirazole N-protegido (12), que é então formilado com oxicloreto de fósforo em DMF para se obter o correspondente benzilpirazolcarboxaldeído (13) . Em alternativa qualquer diona simétrica pode ser usada no lugar de pentano-2,4-diona (e.g. heptano-3,5-diona, ou nonano-4,6-diona) para se obterem os correspondentes 3,5 dialquil-pirazoles (e.g. 2,3-dietil- ou 3,5-dipropil-pirazole). Estes são então aminados redutivamente com o intermediário (5) para proporcionar o composto benzilodimetilpirazole (14). Outras substituições no azoto do pirazolilo são então facilmente acessíveis através de remoção do grupo benzilo como por exemplo, por hidrogenação na presença de formato de amónio e de um catalisador de paládio adequado para se obter (15). Entender-se-á que sob certas circunstâncias a aminação redutiva pode ser realizada com o pirazolecar-boxaldeído sem N-proteção, conduzindo assim diretamente ao composto/intermediário (15) sem a necessidade de um passo de desproteção. 34 ΡΕ2155717
Será prontamente considerado pelos peritos na técnica, que o intermediário (15) pode ser derivado adicionalmente opcionalmente para se obter N-pirazoles substituídos adicionais (16-19) através de um número de métodos bem conhecidos, como por exemplo, alquilação, acilação, sulfonilação, ou adição de epóxido, como mostrado no Esquema V e demostrado nas preparações e exemplos que se encontram adiante.
Compostos da invenção em que n é 2 ou 3 podem ser sintetizados com métodos análogos usando éster de etilo de ácido bromoacético ou éster de etilo de ácido bromopro-piónico num solvente adequado em vez de DMF.
35 ΡΕ2155717 em que R5 é (C1-C5) alquil-, (C3-C7) cicloalquil-(C1-C2) alquil-, Ph1-(C0-C2) alquil-, ou Ar1- (C0-C2) alquil-; R6 é (C1-C2) alquil-, Ph1-, ou Ar1 R7 e R8 são independentemente hidrogénio ou (C1-C4) alquil-opcionalmente substituído com 1 a 3 substituintes fluoro, desde que R7 e R8 juntos não contenham mais do que 4 átomos de carbono ou mais do que 3 substituintes fluoro.
Compostos em que R1 é a porção sulfonilamido-alquilo podem ser obtidos como ilustrado no Esquema VI. 0 apropriado intermediário pirazolilo (20) é alquilado com o cloreto de aminoalquilo desejado (cloreto de R-aminoetilo é ilustrado, embora cadeias de alquilo de vários comprimentos possam ser usadas). A amina livre é então sulfonilada com o cloreto de sulfonilo substituído apropriadamente. A metilssulfonilamida é ilustrada, embora outros substituintes possam ser obtidos de maneira similar.
Compostos de piridilo da presente invenção podem ser sintetizados por uma série de vias usando químicas convencionais incluindo as descritos nos Esquemas VII-XII. 36 ΡΕ2155717
No Esquema VII, compostos piridilo possuindo a porção piperazinilo adjacente ao azoto do piridilo são proporcionados através uma síntese de 3 passos. Desta forma 2-bromopiridina (23) é desprotonada e acoplada aos iodetos de fenilo na presença de cloreto de zinco e de uma catálise com paládio adequada para se obter a 3-fenil-2-bromo-piridina (24). Intermediário (24) é então reagido com piperazina sob condições de reação de Buchwald para proporcionar a 3-fenil-2-piperazinopiridina (25), que por sua vez é aminada redutivamente com o apropriado pirazolo-aldeído (6) para proporcionar o composto de 3-fenil-2-(4-pirazoloalquilopiperazin-l-il)piridina desejado (26).
2s<jaema VII
Em alternativa, 3-bromo-2-cloropiridina pode ser usada como mostrado no Esquema VIII. Assim, 3-bromo-2-cloropiridina (27) é aquecida com piperazina para proporcionar 1-(3-bromopiridin-2-il)piperazina (28), seguido por acoplamento de Suzuki da porção fenilo para proporcionar o intermediário fenilpiperazina (25) . ΡΕ2155717 37
Ssqroema VIII
Compostos de piridilo da presente invenção possuindo a porção fenilo adjacente ao azoto do piridilo podem ser obtidos fazendo reagir 2,3-dibromopiridina (29) com o apropriado ácido fenilborónico (3) sob condições de reação de Suzuki para proporcionar 2-fenil-3-bromopiridina (30) . Isto por sua vez pode ser substituído com piperazina sob condições de reação de Buchwald para se obter a correspondente 2-fenil-3-piperazinopiridina (31), que pode então ser aminada redutivamente com um apropriado pirazoloaldeído (6) para proporcionar o composto final (32). (Ver Esquema IX.)
Escpaesa rx
ΡΕ2155717 38
Em alternativa, intermediário (31) pode ser obtido como ilustrado no Esquema X que se encontra adiante. Assim, 2-cloro-3-iodo-piridina (33) é acoplada com piperazina mono-N-protegida (34) na presença de um catalisador de paládio adequado para proporcionar a correspondente 2-cloro-3-piperazinopiridina N-protegida (35). Isto é seguido pelo acoplamento de Suzuki com o ácido fenilborónico (3) substituído opcionalmente e desproteção tal como já aqui descrito para proporcionar o intermediário desejado (31).
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Embora um ácido fenilborónico seja usado na ilustração acima, será tido em conta que outros reagentes de fenilação podem também ser usados (e.g. fenilestananos, zincatos de fenilo, ou Grignards de fenilo com catálise apropriada).
Como uma alternativa ao passo de aminação 39 ΡΕ2155717 redutiva, compostos (25) ou (31) podem ser submetidos a acilação com ácidos carboxilicos (8) na presença de EDC e HOBt como mostrado no Esquema XI.
Isto proporciona amidos (37) ou (38) respetivamente os quais após redução com borano-dimetilsulfureto ou similares proporciona o composto (26) ou (32) respetivamente .
Embora o esquema acima mostre o uso de EDC e HOBt para ativar o ácido carboxilico para acoplar à amina, vai ser tido em conta que outros reagentes acilantes podem ser usados (e.g. diciclo-hexilcarbodi-imida ou 2-(lH-benzotri-azol-l-il)"1/1/3,3-tetrametilurónio tetrafluoroborato na presença de di-isopropiletilamina) . Da mesma forma, outros agentes de redução podem ser usados no passo de redução (e.g. alumino-hidreto de litio ou hidreto de di-isobutilalumínio). 40 ΡΕ2155717
Vai ser tido em conta que, tal como com os esquemas sintéticos para os compostos pirazinilo da presente invenção já referidos, a ordem dos passos individuais para acoplamento do pirazole à piperazina, acoplamento da piperazina à piridina, e acoplamento de piridina ao fenilo, é geralmente irrelevante e pode ser reordenada como desejado para adequação ao composto a ser sintetizado. Da mesma forma, a porção pirazolilo pode ser adicionalmente substituída antes ou depois de acoplar a porção pirazolilo à porção piperazinilo. Além disso, tal como no caso da síntese dos compostos pirazinilo já referida, a porção pirazolilo pode ser adicionada através de reações de alquilação típica tal como com mesilatos ou similares tal como mostrado no Esquema χχχ adiante.
Desta forma mesilatos de alquilo (-q) podem ser sujeitos a reação sob condições básicas (como por Exemplo 41 ΡΕ2155717 carbonato de potássio em acetonitrilo) para proporcionar compostos (26) e (32). Vai ser tido em conta que sulfonatos alternativos (e.g. toluenossulfonatos ou trifluorometanos-sulfonatos) ou haletos de alquilo (e.g. brometos de ben-zilo, cloretos de benzilo) podem ser usados em vez dos mesilatos de alquilo ilustrados anteriormente.
Esquema XIII mostra um método adequado para gerar um éster borónico (509) de um haleto de arilo (8) correspondente. Note-se que variações referentes à escolha de fonte de paládio catalítico, ligando, base, e solvente, são comuns na técnica.
Esqaeasa XIII
Como mostrado no Esquema XIV, estéres borónicos alquilados (511) podem ser sintetizados através de desprotonação benzílica (510) e reação com haletos de metilo tal como iodeto de metilo, para se obterem produtos alquilados (511)
Ssqjaesia XIV
42 ΡΕ2155717
Outros estéres borónicos podem ser funciona-lizados antes da formação de éster borónico tal como no Esquema XV. Cloreto de ácido (512) é convertido em amida (513) a qual pode então ser convertida em éster borónico (514) usando as condições descritas anteriormente.
Pirazoles substituídos poderão ser sintetizados através do procedimento do conhecimento geral mostrado no Esquema XVI. Quando R não é igual a R , produtos regioi-soméricos (515) devem ser separados usando técnicas croma-tográficas comuns.
Esqaeasa XVI
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Pirazoles (517) funcionalizados podem ser sintetizados tal como mostrado no Esquema XVII, particularmente onde R1 é (C1-C3)alquil- substituído com hidroxi.
43 ΡΕ2155717
Vai ser tido em conta que compostos funciona-lizados podem ser adicionalmente elaborados utilizando a funcionalidade reativa pendente. A titulo de Exemplo e tal como mostrado no Esquema XVIII, um álcool benzílico (528) pode ser feito reagir com cloreto de tionilo para formar o cloreto de benzilo (529). 0 cloreto de benzilo (529) pode então submeter-se a deslocamento nucleofilico com uma variedade de nucleófilos de azoto para chegar aos compostos (530) . R11 é definido pelo nucleófilo amina usado que pode incluir, mas não é limitado a lactamas, triazoles, pirazo-les, imidazoles, ureias, carbamatos, sultamas, ou amidas.
De um modo semelhante o cloreto de benzilo ele-trofílico (529) pode ser deslocado com um enxofre nucleo-fílico para se obter uma sulfona (531) tal como mostrado no Esquema XIX. R8 pode ser alquilo ou alquilo ramificado. 8* 8* 44 ΡΕ2155717
Ssqiiema XIX
R«SOsMs m Dfiíf
Álcool benzílico (528) pode ser funcionalizado via alquilação ou via reação de Mitsunobu como mostrado no Esquema XX. Vai ser tido em conta que muitas destas reações de funcionalização do álcool benzilico também pode ser aplicadas para o correspondente álcool fenólico. Nos Esquemas, R9 pode ser metilo ou etilo.
Ssgaems XX
0 álcool benzílico pendente (528) também pode ser acilado para se obterem carbamatos tal como no Esquema XXI. Ativação do álcool benzilico com carbonildi-imidazole seguido de reação com uma amina primária origina os correspondentes carbamatos (534). Carbamatos (535) podem ser formados através de desprotonação do álcool (528) com uma base adequada seguida de reação com um cloreto de carbamoílo. 45ΡΕ2155717 ír Γ'Γύ
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Tal como com o álcool benzílico, a derivação de uma amina de benzilo primária pendente pode conduzir a uma variedade de grupos funcionais adicionais tais como ureias, tioureias, carbamatos, e amidas tal como mostrado no Esquema XXI Ij_ Amina (536) pode ser ativada com carbonildi-imidazole e reagida com uma amina primária para se obterem ureias (537). Adicionalmente, (536) pode ser reagida com um cloroformato para se obterem carbamatos (538). Ureias (539) podem ser realizadas através de reação de (536) com cloretos de carbamoilo. Ureias ou tioureias (540) podem ser obtidas fazendo reagir amina (536) ou com isocianatos ou com tioisocianatos. (536) pode ainda adicionalmente, também ser funcionalizado para se obterem amidas (541) através de acoplamento de amida convencional através de cloretos de ácido ou de outras técnicas de acoplamento de ácido carbo-xilico comummente empregues. No Esquema XI, R10 pode ser - 46 ΡΕ2155717 (Ci-C4) alquilo, ciclopropil0' ou (C1-C2) alquil-O- (C1-C2) al-quil-.
Funcionalização adicional pode ser realizada via amidação de um ácido carboxilico pendente (542) com uma amina para se obter amida (543) . Isto pode ocorrer através do cloreto de ácido tal como no Esquema XXIII ou através do ácido carboxilico diretamente com ativação tradicional através de reagentes de formação de ligação de amida. R11 é definido a partir do reagente amina o qual pode ser alquilo ou arilo e pode ser primário ou secundário.
Ssqoesia. XXI u
47 ΡΕ2155717
Funcionalização de Mitsunobu também pode ocorrer na funcionalidade de azoto reativo pendente tal como sulfonamida (544) para se obterem produtos alquilados tal como (545) no Esquema XXIV.
PPHj. sset-síaal D£ÂO
As seguintes Preparações e Exemplos são ilustrativos de métodos úteis para a síntese dos compostos da presente invenção. Os nomes para muitos dos compostos ilustrados nas preparações e exemplos são proporcionados a partir de estruturas desenhadas com software ChemDraw®, versão 7.0 ou Autonom 2000 para ISIS/Draw.
Preparação 1: Éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico
Carregar um balão de fundo redondo de 2 L de 3 tubuladuras com 2,3-dicloropirazina (78,7 g, 0,532 mol) , éster de t-butilo de ácido piperazino-l-carboxílico (100 g, 0,537 mol), carbonato de potássio (88,2 g, 0,638 mol) seguido de DMA (0,780 L) , e aqueça a lama resultante a 110°C sob azoto com agitação vigorosa. Arrefecer até à 48 ΡΕ2155717 temperatura ambiente, adicionar água (0,390 L) e MTBE (0,390 L) , e agitar a mistura durante 60 min. Parar de agitar e separar as camadas. Lavar a camada orgânica com água (2 x 200 mL) , secar sobre MgS04, filtrar e concentrar para dar a Preparação em epigrafe como um xarope amarelo (145 g, rendimento de 91%).
Preparação 2 : Dicloridrato de 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Carregar um reator com 2,3-dicloropirazina (73,6 g, 0,497 mol, 1,0 equiv), éster de t-butilo de ácido piperazino-l-carboxilico (101,9 g, 0,547 mol, 1,1 equiv) e carbonato de potássio em pó (164,8 g, 1,19 mol, 2,4 equiv). Adicionar N,N-dimetilacetamida (1,1 L) e aquecer até aos 110°C sob azoto ao longo de 5 h. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente, e adicionar ácido 4-fluorofenilbo-rónico (83,4 g, 0,596 mol, 1,2 equiv), tetraquis(trifenil-fosfina)paládio (0) (2,87 g, 2,5 mmol, 0,005 equiv) e água (442 mL). Aquecer a reação até aos 110°C sob uma atmosfera de azoto ao longo de 5 h Arrefecer a reação até aos 60°C e diluir com água (800 mL) e éter t.-butil-metílico (1,0 L) . Arrefecer até à temperatura ambiente e separar as camadas resultantes. Lavar a camada orgânica com 200 mL de água, separar as camadas, e concentrar para dar 3-(4-fluorofe-nil)-2-[4-(t-butiloxicarbonil)piperazin-l-il]pirazina como um sólido amarelo claro que é retomado no próximo passo sem purificação adicional. 49 ΡΕ2155717
Carregar a 3-(4-fluorofenil)-2-[4-(t-butiloxicar-bonil)piperazin-l-il]pirazina bruta num reator juntamente com n-butanol (1,67 L) e tolueno (99 mL). Aquecer a mistura de reação até aos 60°C, e adicionar à reação gota a gota uma solução de HC1 em n-butanol (835 mL, preparado através da adição de 2,33 moles de cloreto de acetilo a 668 mL de n-butanol a 0°C) in situ. Depois da adição estar completa, agitar a 60°C ao longo de 2 h e arrefecer até à temperatura ambiente. Agitar os sólidos resultantes à temperatura ambiente, filtrar, lavar com n-butanol (200 mL), e secar de um dia para o outro num forno de vácuo a 70°C para dar o intermediário em epígrafe como um sólido amarelo (148,95 g, rendimento de 86% ao fim de quatro passos, corrigindo para o n-butanol retido nos sólidos) . MS (ES)j_ m/z = 259 [M+H]+.
Preparação 3: 3'-m-Tolil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi- razina
Dissolver éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (6,0 g, 20,2 mmol) e ácido 3-metilbenzenoborónico (3,3 g, 24,0 mmol) em dimetoxietano (20 mL) e água (10 mL) . Adicionar tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (2,3 g, 2,0 mmol) e carbonato de potássio (7,5 g, 54 mmol). Aquecer ao longo de 17h a 102°C e permitir que arrefeça cerca de 1,5 h até à temperatura ambiente. Partilhar a mistura de reação entre acetato de etilo e água. Separar camadas. Lavar camada orgânica com salmoura, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica 50 ΡΕ2155717 eluindo com acetato de etilo:hexanos 10:90 a 20:80), para dar éster de t-butilo de ácido 3'-m-tolil-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (3,3 g, 47%). MS (ES)j_ m/z = 355 [M+H] + .
Dissolver éster t-butilo de ácido 3'-m-tolil- 2.3.5.6- tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxilico (3,3 g, 9,32 mmol) em DCM (10 mL). Adicionar ácido trifluoroacético (42,6 g, 28,8 mL) frio (do frigorifico). Agitar durante 2 h à temperatura ambiente. Partilhar a mistura de reação entre cloreto de metileno e NaOH 5N (pH aquoso=14). Separar camadas. Extrair a camada aquosa com cloreto de metileno (2 x 20 mL). Combinar camadas orgânicas, secar sobre sulfato de sódio anidro, filtrar e concentrar para dar a Preparação em epígrafe (2,35 g, 99%) . MS (ES)j_ m/z = 255 [M+H] + .
Preparação 4: 3'-(3-Fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina A Preparação em epígrafe é obtida usando métodos similares aos da Preparação 3, usando ácido 3-fluorobenz-enoborónico (rendimento de 89%). MS (ES)j_ m/z = 259 [M+H] + .
Preparação 5: Dicloridrato de 3'- (2-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazina Éster t-butilo de ácido 3'-(2-fluoro-fenil)- 2.3.5.6- tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico é preparado usando o método da Preparação 3 usando ácido 2- 51 ΡΕ2155717 fluorobenzenoborónico (rendimento de 82%, MS (ES)j_ m/z -359 [M+H] +) .
Adicionar HC1 4M em dioxano (8 mL) a uma solução de éster de t-butilo de ácido 3'- (2-fluorofenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']-bipirazinil-4-carboxílico (1,48 g, 4,13 mmol) em 1,4-dioxano (8 mL) , e agitar a mistura à temperatura ambiente durante 3 h depois a 40°C durante 16h. Deixar arrefecer a reação, separar o sólido precipitado por filtração, lavar com 1,4-dioxano e secar sob pressão reduzida a 60°C, para dar a Preparação em epígrafe como um sólido amarelo (960 mg, 70%). MS (ES) m/z = 259 [M+H].
Preparação 6: 3'-Fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi- razina
Dissolver éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (2,50 g, 8,40 mmol) e ácido fenilborónico (1,23 g, 10,08 mmol) em N, N-dimetilacetamida (25 mL) e água (10 mL) . Adicionar tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,49 g, 0,42 mmol) e carbonato de potássio (2,80 g, 20,16 mmol). Aquecer ao longo de 4 h a 114°C e permitir que arrefeça durante cerca de 1,5 h até à temperatura ambiente. Partilhar a mistura de reação entre MTBE e água. Separar camadas. Secar camada orgânica (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica eluindo com acetato de etilo:hexanos 10:90 a 30:70), para dar éster de t-butilo de ácido 3'-(fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (2,49 g, 87%). MS (ES): m/z = 341 [M+H]+. 52 ΡΕ2155717
Desproteger usando o procedimento da Preparação 3 para proporcionar a Preparação em epígrafe (rendimento de 96%). MS (ES)j_ m/z = 241 [M+H] + .
Preparação 7 : l-[4-(3,4,5,6-Tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi- nil-3'-il)-fenil]-etanona
Utilizar o método da Preparação 6 usando ácido 4-acetilbenzenoborónico para obter éster de t-butilo de ácido 3'-(fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carbo-xílico (rendimento de 91%). MS (ES)j_ m/z = 383 [M+H] + .
Desproteger usando o método da Preparação 3 para obter a Preparação em epígrafe (rendimento de 100%) . MS (ES) m/z = 283. [M+H] + .
Preparação 8 : 3'-(4-Cloro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H- [1,2']bipirazina
Acoplar 2,3-dicloropirazina (0,302 g, 2,03 mmol) e ácido 4-clorofenilborónico (0,320 g, 2,05 mmol), usando tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,124 g, 0,107 mmol), e fluoreto de potássio (0,355 g, 6,11 mmol) em tolueno (19 mL) e água (5 mL), a 100°C ao longo de 17,5 h. Arrefecer a reação, partilhar as camadas e extrair a camada aquosa com acetato de etilo. Lavar as camadas orgânicas combinadas com cloreto de sódio aquoso saturado, secar (sulfato de magnésio), concentrar e purificar (cromatografia de gel de 53 ΡΕ2155717 sílica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 35:65), para dar 2-cloro-3-(4-clorofenil)-pirazina (0,199 g, 44%) .
Acoplar 2-cloro-3-(4-clorofenil)-pirazina (0,148 g, 0,710 mmol) e éster de t-butilo de ácido piperazino-1-carboxílico (0,216 g, 1,16 mmol), usando 2-(diciclo-hexilofosfino)bifenilo (0,0321 g, 0,0916 mmol), tris(diben-zilidenoacetona)dipaládio (0,0328 g, 0,0388 mmol), e o sal de sódio de 2-metilopropan-2-ol (0,104 g, 1,09 mmol) em tolueno (9 mL) a 82°C ao longo de 17h. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente, diluir com éter dietílico (50 mL) , filtrar através de uma almofada de 1 cm de gel de sílica, enxaguar a almofada com éter dietílico (2 x 25 mL) , combinar as soluções orgânicas, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 1:1) para dar éster de t.-butilo de ácido 3'-(4-cloro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipira-zinil-4-carboxí lico (0,143 g, 56%). MS (ES)j_ m/z = 303 [M+H-isobutileno] +.
Dissolver éster de t-butilo de ácido 3'-(4-cloro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico em DCM (10 mL), adicionar HC1 aquoso 4 M (5 equiv) e agitar ao longo de 2 h à temperatura ambiente. Concentrar sob pressão reduzida, dissolver em metanol (2 mL) e purificar através de SCX, eluindo o produto da resina de permuta iónica usando NH3 2 M em metanol, para dar a Preparação em epígrafe (0,103 g, 100%) . MS (ES)j_ m/z = 259 [M+H] + . 54 ΡΕ2155717
Preparação 9 : 3'-(4-Trifluorometil-fenil)-3,4,5, 6-tetra- hidro-2H-[l,2'Jbipirazina
Preparar 2-cloro-3-(4-trifluorometilfenil)-pira-zina em 30% de acordo com o procedimento usado para fazer 2-cloro-3-(4-clorofenil)-pirazina. Acoplar 2-cloro-3-(4-trifluorometilfenil)-pirazina (0,570 g, 2,20 mmol) e piperazina (4,31 g, 50,0 mmol), a 125°C ao longo de 111 min. Arrefecer a reação até cerca de 70°C, adicionar água (50 mL) , agitar até que a temperatura da reação esteja abaixo dos 35°C e diluir com DCM (70 mL) . Separar as camadas, extrair a camada aquosa com DCM (2 x 70 mL) , lavar as camadas orgânicas combinadas com cloreto de sódio aquoso saturado, secar (sulfato de magnésio), concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 1:1), para dar a Preparação em epígrafe (0,384 g, 57%) . MS (ES)j_ m/z = 309 [M+H] + .
Preparação 10: 2-cloro-3-(3,4-dicloro-fenil)-pirazina
Dissolver 2,3-dicloropirazina (2,42 g, 2,03 mmol) e ácido 3,4-diclorobenzenoborónico (0,406 g, 2,13 mmol) em tolueno (6 mL). Adicionar uma solução de fluoreto de potássio (0,36 g; 6,2 mmol) em água desionisada (5 mL) . Adicionar tetraquis-trifenilfosfina (0,124 gm; 0,11 mmol). Sujeitar a reação e refluxo ao longo de 17 h, arrefecer até à temperatura ambiente, e adicionar EtOAc (10 mL) e água (10 mL) . Separar a camada orgânica, voltar a extrair a 55 ΡΕ2155717 camada aquosa com EtOAc (2 x 40 mL) , e combinar as camadas orgânicas. Lavar a solução orgânica com NaHCCb aq saturado e salmoura (2x), secar sobre MgS04 filtrar e concentrar. Purificar através de cromatografia de gel de silica eluindo acetato de etilo a 0-40%/hexanos para dar a Preparação em epígrafe (0,124 g, rendimento de 23%). MS (ES) m/zj_ 274, 276 (M) +.
Preparação 11: 3'-(3,4-dicloro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro- 2H-[1,2']bipirazina
Combinar 2-cloro-3-(3,4-dicloro-fenil)-pirazina (0,124 g, 0,477 mmol) e piperazina (1,40 gm; 16,3 mmol) e aquecer a mistura ao longo de 2 h a 120°C. Arrefecer até à temperatura ambiente, e adicionar DCM (50 mL) e água (50 mL) . Separar as camadas e extrair a camada aquosa com DCM (2 x 25 mL) . Combinar as camadas orgânicas, lavar com salmoura, secar (MgSCu) e concentrar. Purificar através de cromatografia de gel de sílica eluindo metanol a 0-15% em DCM para dar a Preparação em epígrafe (0,118 gm, 80%). MS (ES + ) m/zj_ 310 (M+H) + .
Preparação 12: 4 - (3,4,5,6-Tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il)-benzonitrilo
Dissolver éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (9,19 g, 30,8 mmol) e ácido 4-cianobenzenoborónico (5,18 g, 35,2 mmol) em N, N-dimetilacetamida (90 mL) e água (35 mL) , 56 ΡΕ2155717 purgar com azoto durante 0,5 h e depois adicionar tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,170 g, 0,15 mmol).
Aquecer ao longo de 3 h a 110°C, deixar arrefecer durante cerca de 1,5 h até à temperatura ambiente, filtrar e depois secar o sólido num forno de um dia para o outro para dar éster de t-butilo de ácido 3'-(4-cianofenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico como um sólido branco (9,94 g, 88%). MS (ES)j_ m/z = 366 [M+H] + . Adicionar HCl 4 M em 1,4-dioxano (10 mL) a éster de t-butilo de ácido 3' — (4 — cianofenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carbo-xílico (3,29 g, 9,0 mmol). Adicionar mais HCl 4 M em 1,4-dioxano (10 mL) à mistura de reação e aquecer a 40°C ao longo de 3 h. Separar o sólido por filtração e lavar com uma mistura de 1,4-dioxano/iso-hexano para dar o sal dicloridrato como um sólido amarelo (4,2 g) . MS (ES)j_ m/z = 266 [M+H]+. Dissolver o dicloridrato em água (20 mL), adicionar hidróxido de sódio 2 N (10 mL), extrair com DCM e concentrar o extrato DCM para dar a Preparação em epigrafe como um sólido amarelo (1,8 g) . MS (ES)_^_ m/z = 266 [M+H] + .
Preparação 13: 3'-(4-Metanossulfonil-fenil)-3,4,5, 6-tetra- hidro-2H-[l,2'Jbipirazina
Dissolver éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxilico (6, 92 g, 30,75 mmol), carbonato de potássio (7,34 g, 53,09 mmol) e ácido 4-metanossulfonilbenzenoborónico (5,31 g, 26,55 mmol) em N,N-dimetilacetamida (90 mL) e purgar durante 15 min. Adicionar água (35 mL) e purgar adicionalmente a 57 ΡΕ2155717 mistura por mais 15 min. Adicionar tetraquis(trifenilfos-fina) paládio ( 0 ) (0,130 g, 0,11 mmol) e aquecer ao longo de 2 h 10 min a 110°C. Deixar arrefecer até aos 65°C, adicionar água (30 mL) e éter t-butil-metílico (70 mL) e agitar durante 0,5 h. Separar o sólido por filtração e secar num forno de vácuo para dar éster de t-butilo de ácido 3' — (4 — metanossulfonilfenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazi-nil-4-carboxílico (8,3 g, 86%). MS (ES)j_ m/z = 419 [M+H]+.
Desproteger usando o método usado na Preparação 12 para obter a Preparação em epigrafe com rendimento essencialmente quantitativo. MS (ES)j_ m/z = 319,1 [M+H] + .
Preparação 14: 3'-(4-Metoxifenil)-2,3,5,6-tetra-hidro- [1,2']bipirazina
Usar o método usado para fazer 2-cloro-3-(4-clorofenil)-pirazina, usando ácido 4-metoxifenilborónico para obter 2-cloro-3-(4-metoxifenil)-pirazina (rendimento de 54%) .
Acoplar 2-cloro-3-(4-metoxifenil)-pirazina (0,236 g, 1,07 mmol) e piperazina (3,10 g, 36,0 mmol) em tetra-hidrofurano (5 mL) e aquecer a 120°C ao longo de 2 h. Purificar usando cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 20:80, para dar a Preparação em epígrafe (0,220 g, 76%). MS (ES): m/z = 271 [M+H]+. 58 ΡΕ2155717
Preparação 15: Via alternativa para 3'-(4-metoxifenil)-2,3,5, 6-tetra-hidro-[1,2'Jbipirazinilo
Usar o método da Preparação 3, usando ácido 4-metoxifenilborónico, para obter a Preparação em epígrafe (rendimento global de 70%). MS (ES)j_ m/z = 271,2 [M+H] + .
Preparação 16: 3' - (4-Etoxifenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H- [1,2']bipirazina
Acoplar éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (0,726 g, 2,43 mmol) e ácido 4-etoxifenilborónico (0,95 g, 5,991 mmol), na presença de trifenilfosfina (0,202 g, 0,770 mmol), acetato de paládio (0,056 g, 0,243 mmol), carbonato de sódio (3,8 mL de uma solução 2 N em água) numa mistura de acetonitrilo (42 mL) e água (8 mL) . Sujeitar a refluxo ao longo de 3 h. Purificar através de cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 25:75, para dar éster de t-butilo de ácido 3'-(4-etoxifenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (1,79 g, 96%).
Desproteger éster de t-butilo de ácido 3' — (4 — etoxifenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carbo-xílico (1,80 g, 4,7 mmol) usando HC1 4 M em 1,4-dioxano (38 mL) em DCM (100 mL) . Concentrar e dissolver o resíduo em DCM e carbonato de sódio aquoso a 10%. Separar as camadas e extrair a camada aquosa com DCM (2 x 150 mL) . Combinar as 59 ΡΕ2155717 camadas orgânicas, lavar com cloreto de sódio aquoso saturado, secar (sulfato de magnésio) e concentrar para dar a Preparação em epígrafe (1,12 g, 84%). MS (ES)j_ m/z = 285 [M+H]+.
Preparação 17: 3'- (4-Isopropoxifenil)-2,3,5,6-tetra-hidro- 2H-[1,2']bipirazina
Acoplar éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (0,135 g, 0,452 mmol) e ácido 4-isopropoxifenilborónico (0,134 g, 0,743 mmol), na presença de trifenilfosfina (0,0482 g, 0,184 mmol), acetato de paládio (0,0118 g, 0,0526 mmol), carbonato de sódio aquoso 2 N (0,3 mL) numa mistura de n-propanol (4 mL) e água (0,3 mL) . Sujeitar a refluxo ao longo de 17,5 h, arrefecer até à temperatura ambiente e extrair com DCM. Purificar através de cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 1:1, para dar éster de t-butilo de ácido 3' — (4 — isopropoxifenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (0,144 g, 80%).
Desproteger usando o método da Preparação 16 para obter a Preparação em epígrafe (0,158 g, 100%). MS (ES)j_ m/z = 299 [M+H]+.
Preparação 18: 3'-(4-Trifluorometoxifenil)-3,4,5,6-tetra- hidro-2H-[l,2'Jbipirazina
Dissolver éster de t-butilo de ácido 3'-cloro- 60 ΡΕ2155717 2,3,5, 6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (0,400 g, 1,34 mmol) em tolueno (2,68 mL) . Adicionar ácido 4-(trifluorometoxi)fenilborónico (0,303 g, 1,47 mmol), seguido por tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,077 g, 0, 067 mmol). Adicionar etanol (2,68 mL) , seguido por uma solução aquosa de carbonato de sódio 2 N (2,68 mL). Sujeitar a reação a refluxo ao longo de 18h. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente e concentrar. Adicionar acetato de etilo e lavar com água. Extrair a camada de água uma vez com acetato de etilo. Secar (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 20:80), para dar éster de t-butilo de ácido 3'-(4-tri-fluorometoxifenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxilico (534 mg, 94%). MS (ES)j_ m/z = 425 [M+H] + .
Desproteger usando o método da Preparação 16 para proporcionar a Preparação em epigrafe (rendimento de 100%) . MS (ES)j_ m/z = 271,2 [M+H] + .
Preparação 19: Dicloridrato de 3'-(2-Trifluorometilfenil)- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver éster de t-butilo de ácido 3'-cloro- 2.3.5.6- tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (1,00 g, 3,35 mmol) em N,N-dimetilacetamida (purgado com azoto) (12 mL) . Adicionar carbonato de potássio (1,11 g, 8,04 mmol) e ácido 2-trifluorometilbenzenoborónico (764 mg, 4,02 mmol) depois purgar com azoto durante 15 min. Adicionar 61 ΡΕ2155717 água desoxigenada (6 mL) e tetraquis(trifenilfosfina)-paládio(0) (0,039 g, 0,034 mmol) e purgar com azoto durante 15 min. Aquecer a 115°C ao longo de 21h sob azoto. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (20 mL) e extrair com DCM (4 x 20 mL). Concentrar os extratos de DCM e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 10:90 a 20:80), para dar éster de t-butilo de ácido 3 ' - (2-trifluorometilfenil)-2,3,5, 6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (408 mg, 29%). MS (ES)j_ m/z = 409 [M+H] + .
Suspender éster de t.-butilo de ácido 3' — (2 — trifluorometilfenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (408 mg, 1,00 mmol) em HC1 em éter dietilico (1 M, 10 mL) , agitar ao longo de 2 h depois concentrar in vacuo. Adicionar mais HC1 em éter dietilico (1 M, 20 mL) e agitar de um dia para o outro à temperatura ambiente e concentrar. Adicionar HC1 em dioxano (4 M, 10 mL) e agitar ao longo de 2 h, depois concentrar para dar a Preparação em epígrafe como sólido amarelo (471 mg, 123%) . MS (ES)j_ m/z = 309 [M+H] +.
Preparação 20 : Dicloridrato de 3'-(2,6-dimetilfenil)-3,4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (1,00 g, 3,35 mmol) em N,N-dimetilacetamida (purgada com azoto) (12 mL) . Adicionar carbonato de potássio (1,11 g, 8,04 62 ΡΕ2155717 mmol) depois ácido 2,6-dimetilbenzenoborónico (602 mg, 4,02 mmol) e purgar com azoto durante 10 min. Adicionar água desoxigenada (6 mL) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,039 g, 0,034 mmol) e purgar com azoto durante 10 min. Aquecer a 115°C ao longo de 20 h sob azoto. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (20 mL) , extrair com DCM (3 x 20 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit® e concentrar. Dissolver em metanol, separar o sólido por filtração e purificar o filtrado através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol. Concentrar, depois agitar em HC1 em dioxano (4 M, 50 mL) durante 3 h à temperatura ambiente. Reduzir o solvente, adicionar carbonato de potássio (2 g) , filtrar e concentrar filtrado. Purificar através de cromatografia SCX-2®, lavagem com metanol depois eluindo com amoníaco 4 M em metanol, e concentrar. Adicionar HC1 em éter dietílico (1 M, 20 mL) e concentrar, depois secar sob vácuo a 40 °C para dar a Preparação em epígrafe como cristais amarelos (650 mg, 57%) . MS (ES)j_ m/z = 269 [M+H] + .
Preparação 21: 3'- (2-Fluoro-3-trifluorometil-fenil)-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Combinar l-bromo-2-fluoro-3-trifluorometilbenzeno (0,424 g, 1,77 mmol), 5,5,5',5'-tetrametil-[2,2']bi[1,3,2]-dioxaborinanilo] (0,458 g, 2,03 mmol), 1,1'-bis(difenilfos-fino) ferrocenodicloropaládio (0,0632 g, 0,0774 mmol), e acetato de potássio (0,499 g, 5,08 mmol) em DMF (10 mL), e purgar com azoto durante 0,5 h. Aquecer ao longo de 2 h a 63 ΡΕ2155717 80 °C e arrefecer até à temperatura ambiente. Adicionar éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (0,406 g, 1,36 mmol), carbonato de sódio (4,0 mL de uma solução 2 M em água) e bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaládio (0,052 g, 0,0638 mmol). Aquecer a reação a 80°C ao longo de 20 h. Purificar pela cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo: hexanos 5:95 a 40:60 para dar o éster de t.-butilo de ácido 3'-(2 — fluoro-3-trifluorometil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxilico (0,102 g, 18%).
Adicionar HC1 4 M em 1,4-dioxano (5 mL) a uma solução de éster de t-butilo de ácido 3'- (2-fluoro-3-tri-fluorometil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxilico (0,101 g, 0,237 mmol) em DCM (10 mL) e agitar durante 19 h. Concentrar, dissolver o resíduo em metanol (20 mL) e purificar através de cromatografia SCX (pré-lavar a coluna com metanol), carregar o material, eluir com amoníaco 2 M em metanol, e concentrar para dar a Preparação em epígrafe como um sólido amarelo (0,0985 g) . MS (ES)j_ m/z = 327 [M+H] + .
Preparação 22: 3'-(4-Fluoro-3-trifluorometil-fenil)-3, 4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Usar o procedimento da Preparação 21, usando 1-bromo-4-fluoro-3-trifluorometilbenzeno para obter a Preparação em epígrafe (rendimento global de 71%). MS (ES)j_ m/z = 327 [M+H]+. 64 ΡΕ2155717
Preparação 23: 1-[2-(4-Fluorofenil)-piridin-3-il]-pipera- zina
Dissolver 2-cloro-3-iodopiridina (4,00 g, 16,74 mmol) em tolueno anidro (25 mL) . Adicionar éster de t.-butilo de ácido piperazino-l-carboxilico (2,96 g, 15,90 mmol), seguido de acetato de paládio (0,113 g, 0,50 mmol), 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binafetilo (0,313 g, 0,502 mmol), trietilamina (0,034 g, 0,047 mL, 0,335 mmol) e carbonato de césio (27,3 g, 83,7 mmol). Aquecer a refluxo durante 18 h. Concentrar e partilhar o resíduo entre DCM e uma solução de bicarbonato de sódio saturada. Extrair a fase aquosa duas vezes com DCM e uma vez com acetato de etilo. Secar os extratos combinados orgânicos (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 5:95 a 20:80), para dar éster de t-butilo de ácido 4-(2-Cloro-piridin-3-il)-piperazino-l-carboxílico (54%). MS (ES)j_ m/z = 298 [M+H].
Dissolver éster de t.-butilo de ácido 4- (2-Cloropiridin-3-il)-piperazino-l-carboxílico (2,7 g, 9,1 mmol) em tolueno (30 mL). Adicionar ácido 4-fluorofenil-borónico (1,92 g, 13,70 mmol) seguido de bis(dibenzilideno-acetona)paládio(0) (0,42 g, 0,46 mmol), 1,2,3,4,5-penta- fenil-1'-(di-t-butilfosfino)ferroceno (CTC-Q-PHOS) (0,65 g, 0,91 mmol) e fosfato de potássio (5,8 g, 27,3 mmol). Aquecer a mistura de reação a 100°C ao longo de 23h. Arrefecer 65 ΡΕ2155717 até à temperatura ambiente, concentrar e partilhar o residuo entre acetato de etilo e hidróxido de sódio 1 N (pH = 11). Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 20:80), para dar éster de t-butilo de ácido 4-[2-(4-fluorofenil)-piridin-3-il]-piperazino-1-carboxílico (28%) . MS (ES)_^_ m/z = 358 [M+H] .
Dissolver éster de t.-butilo de ácido 4— [2— (4 — fluorofenil)-piridin-3-il]-piperazino-l-carboxílico (0,9 g, 2,52 mmol) em DCM (25 mL). Adicionar ácido trifluoroacético (8,6 g, 5,8 mL, 75,6 mmol). Agitar a mistura à temperatura ambiente ao longo de 2 h. Purificar através de uma coluna de permuta iónica SCX para dar a Preparação em epígrafe. MS (ES) m/z = 258 [M+H] .
Preparação 24 : 1-[2- (2-Fluoro-fenil)-piridin-3-il]-pipera-zina
Dissolver 2-cloro-3-iodopiridina (2,0 g, 8,37 mmol) em tolueno (7 mL) . Adicionar éster de t-butilo de ácido piperazino-l-carboxílico (1,2 g, 6,4 mmol), seguido da adição de tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (0,12 g, 0,13 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (0,23 g, 0,39 mmol), e t-butóxido de sódio (0,93 g, 9,7 mmol). Aguecer a 100°C ao longo de 3,5 h. Concentrar e partilhar o resíduo entre EtOAc e água. Extrair a fase aguosa duas vezes com acetato de etilo. Lavar as camadas orgânicas 66 ΡΕ2155717 combinadas com salmoura. Secar os extratos orgânicos (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromato-grafia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:he-xanos 0:100 a 20:80), para dar éster de t-butilo de ácido 4-(2-Cloro-piridin-3-il)-piperazino-l-carboxilico (95%). MS (ES)j_ m/z = 298 [M+H] + .
Dissolver éster de t-butilo de ácido 4- (2-cloropiridin-3-il)-piperazino-l-carboxílico (0,9 g, 3,0 mmol) numa mistura de 5 mL de 1,2-dimetoxietano e 4 mL de água. Adicionar ácido 2-fluorofenilborónico (0,51 g, 3,64 mmol) seguido de tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,35 g, 0,30 mmol), e carbonato de potássio (1,13 g, 8,2 mmol). Aquecer a mistura de reação a 100°C ao longo de 22h. Arrefecer até à temperatura ambiente, concentrar e partilhar o residuo entre acetato de etilo e água. Extrair a camada de água com acetato de etilo. Lavar as camadas orgânicas combinadas com salmoura. Secar os extratos orgânicos (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromato-grafia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:he-xanos 10:90 a 30:70), para dar éster de t-butilo de ácido 4-[2- (2-Fluoro-fenil)-piridin-3-il]-piperazino-l-carboxilico (91%). MS (ES)j_ m/z = 358 [M+H] + .
Desproteger usando o método usado na Preparação 21 para obter a Preparação em epígrafe (rendimento de 100%). MS (ES): m/z = 258 [M+H]+. 67 ΡΕ2155717
Preparação 25: 1-[3- (4-Fluorofenil)-piridin-2-il]-pipera- zina
Dissolver 2-bromopiridina (5 mL, 51,3 mmol) em tetra-hidrofurano (125 mL). Arrefecer até aos -78°C e adicionar di-isopropilamideto de litio (28,2 mL, 56,4 mmol, solução 2 M em heptano/tetra-hidrofurano/etilbenzeno). Agitar durante 45 min. a -78°C, adicionar cloreto de zinco (102,5 mL, 51,3 mmol, solução 0,5 M em tetra-hidrofurano) e aquecer até aos 25°C ao longo de 1 h. Adicionar l-fluoro-4-iodobenzeno (5,91 mL, 51,3 mmol) e tetraquis(trife-nilfosfina)paládio(0) (2,96 g, 2,56 mmol) e sujeitar a mistura a refluxo ao longo de 18 h. Arrefecer a mistura até à temperatura ambiente, diluir com bicarbonato de sódio aquoso saturado e extrair 3 vezes com DCM. Combinar os extratos orgânicos, secar (sulfato de sódio), filtrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 20:80) para dar 2-bromo-3-(4-fluorofenil)-piridina (4,27 g, rendimento de 33%).
Dissolver 2-bromo-3-(4-fluorofenil)-piridina (4,4 g, 17,5 mmol) em tolueno (185 mL) e adicionar piperazina (4,5 g, 52,4 mmol), tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (0,8 g, ,873 mmol), t-butóxido de sódio (2,35 g, 24,4 mmol) e 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binafetilo racémico (1,63 g, 2,62 mmol). Sujeitar a mistura a refluxo durante 18 h, depois arrefecer até à temperatura ambiente e filtrar através deCelite®. Diluir a mistura com acetato de etilo e lavar com bicarbonato de sódio aquoso saturado, cloreto de 68 ΡΕ2155717 sódio aquoso saturado, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com amoniaco 2 M em metanol: DCM 15:85) para dar a Preparação em epigrafe como um sólido amarelo (3,9 g, 87%). MS (APCI) m/z = 258 [M+H] + .
Preparação 26: 1- (3-Fenil-piridin-2-il)-piperazina
Adicionar 3-bromo-2-cloro-piridina (10,08 g, 52,4 mmol) a piperazina (45 g) e dicloridrato de piperazina (83,4 g) . Aquecer a mistura até aos 190°C com agitação ao longo de 1 h. Deixar a mistura arrefecer até cerca de 80°C depois verter o material em água e extrair 5 vezes com DCM. Secar a solução (sulfato de sódio), filtrar e concentrar. Purificar usando cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol (com amoniaco 2 M) : DCM 15:85 para dar 1-(3-bromo-piridin-2-il)-piperazina como um sólido branco (8,98 g, 71%) .
Dissolver 1-(3-bromo-piridin-2-il)-piperazina (0,579 g, 2,39 mmol) em éter dimetilico de etilenoglicol (8 mL) . Adicionar carbonato de sódio (2 M em água, 2,6 mL) depois ácido fenilborónico (0,321 g, 2,63 mmol). Adicionar tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,138 g, 0,120 mmol) e sujeitar a refluxo durante 18 h. Arrefecer até à temperatura ambiente depois diluir com bicarbonato de sódio aquoso saturado e extrair 3 vezes com acetato de etilo. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol 15:85 69 ΡΕ2155717 (com amoníaco 2 M:DCM), para dar a Preparação em epígrafe como um óleo amarelo (0,404 g, 71%) . MS (ES)j_ m/z = 240 [M+H]+.
Em alternativa, 1-(3-Fenil-piridin-2-il)-pipera-zina pode ser realizada da seguinte formaj_ 1-óxido de 3-fen±l-p±r±dina±_ dissolver 3-f enilpiridina (5,0 g, 32,2 mmol) em ácido acético glacial (20 mL). Adicionar peróxido de hidrogénio a 30% (3,25 mL, 28,6 mmol, 30% em água).
Aquecer a reação até aos 80°C ao longo de 2,25 h. Adicionar peróxido de hidrogénio a 30% (4,0 mL, 35,2 mmol, 30% em água). Aquecer a reação a 80°C ao longo de 1,75 h. Adicionar peróxido de hidrogénio a 30% (1,0 mL, 8,8 mmol, 30% em água). Aquecer a reação a 80°C ao longo de 1,5 h.
Arrefecer a reação até à temperatura ambiente de um dia para o outro. Concentrar a mistura de reação sob pressão reduzida mas não até à secura. Purificar o resíduo através de cromatografia de gel de sílica. Eluir com acetato de etilo-hexanos para remover impurezas depois eluir com metanol-diclorometano para dar 4,4 g (80%) de 1-óxido de 3-fenil-piridina como um sólido branco. MS (m/z)j_ 172 (M+l). 2-cloro-3-fenil-piridina\_ Dissolver 1-óxido de 3-fenil-piridina (1,0 g, 5,84 mmol) em oxicloreto de fósforo (14 mL, 153 mmol). Aquecer a reação até aos 105°C ao longo de 6 h, arrefecer até à temperatura ambiente e lentamente verter a mistura de reação sobre gelo com agitação para temperar o excesso de oxicloreto de fósforo. Basificar com hidróxido de amónio concentrado e extrair com diclorometano. Lavar o 70 ΡΕ2155717 extrato orgânico com salmoura, secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida. Purificar o residuo através de cromatografia de gel de silica (eluen-tej_ acetato de etilo-hexanos) para dar 315 mg (28%) de 2-cloro-3-fenil-piridina como um liquido amarelo. MS (m/z)j_ 190 (M+l, 100), 192 (M+l, 60). ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,42 (dd, 1H, J=4,6, 2,0 Hz), 7,87 (dd, 1H, J=7,5, 1,8 Hz), 7,54-7,41 (m, 6H). 1- (3-fenil-piridin-2-il)-piperazinap Aquecer uma mistura de 2- cloro-3-fenil-piridina (1,12 g, 5,9 mmol) e piperazina (5,08 g, 59,0 mmol) num tubo selado a 165°C ao longo de 23 h. Arrefecer até à temperatura ambiente. Dissolver a mistura de reação em água e acetato de etilo. Extrair a camada aquosa com acetato de etilo (3X). Lavar os extratos orgânicos com água (2X) e salmoura. Extrair novamente as lavagens aquosas com acetato de etilo. Combinar todos os extratos de acetato de etilo, secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida. Purificar o residuo através de cromatografia de gel de silica (eluente:amoníaco 2 N em metanol-diclorometano) para dar 1,36 g (96%) da Preparação em epígrafe como um óleo amarelo. HRMS-FAB (m/z)j_ [M+H]+ calcul. para Ci5Hi8N3, 240,1500; encontrado, 240,1492.
Preparações 27-31 são preparadas essencialmente tal como descrito para a Preparação 26 usando o ácido borónico apropriado e 1-(3-bromo-piridin-2-il)-piperazina. 71 ΡΕ2155717
Prep Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] + 27 1-[3-(4-Trifluorometil-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 84 308 28 1-[3-(3-Trifluorornetil-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 60 308 29 1-[3-(2,5-Difluoro-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 77 276 30 1-[3-(5-Fluoro-2-metoxi-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 86 288 31 1-[3-(2-Fluoro-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 92 258
Preparação 32 : 3-Metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxa-borolan-2-il)-benzonitrilo
Agitar conjuntamente 4-bromo-3-metilbenzonitrilo (5,20 mmol, 1,02 g), bis(pinacolato)diboro (5,62 iranol, 1,43 g) , acetato de potássio (15,6 mmol, 1,53 g) , e acetato de paládio (0,16 mmol, 40 mg) em N,N-dimetilformamida seca (20 mL). Purgar a reação ao longo de 30 min depois aquecer até aos 85°C de um dia para o outro. Partilhar entre água (100 mL) e acetato de etilo (100 mL) , lavar camada aquosa com acetato de etilo (100 mL) . Combinar as lavagens de acetato de etilo e secar sobre sulfato de magnésio, filtrar e concentrar in vacuo. Purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 0:100 a 20:80) para dar a Preparação em epígrafe como um pó branco (560 mg, rendimento de 44%). MS (ES)j_ m/z = 244 [M+H]+.
Preparação 33: l-Bromo-2-etanossulfonil-etano
Dissolver 2-etanossulfonil-etanol (1,06 g, 7,67 mmol) em DCM (18 mL) e adicionar tribrometo de fósforo (0,8 mL, 8,44 mmol). Agitar a mistura à temperatura ambiente de 72 ΡΕ2155717 um dia para o outro depois separar a solução por decantação do óleo sedimentado. Lavar a solução com bicarbonato de sódio aquoso saturado depois secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar para dar a Preparação em epigrafe como um óleo amarelo (0,582 g, 38%). ^-NMR (400 MHz, CDC13) δ 3,67 (t, J = 7,6 Hz, 2H) , 3,46 (t, J = 7,6 Hz, 2H) , 3,06 (q, J = 7,5 Hz, 2H) , 1,41 (t, J = 7,5 Hz, 3H) .
Preparação 34: 4-(3-Bromo-propil)-1-metil-lH-pirazole
Dissolver 3-(l-metil-lH-pirazol-4-il)-propan-l-ol (0,250 g, 1,783 mmol) em clorofórmio seco (15 mL). Adicionar resina de PS-trifenilfosfina (1,824 g, 3,923 mmol) e tetrabrometo de carbono (0,650 g, 1,961 mmol). Agitar à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 3 h. Filtrar a reação sobre papel com DCM. Concentrar o filtrado in vacuo para obter a Preparação em epigrafe (0,362 g, rendimento de 100%). GC-MS (m/z)j_ 202/204 (M+) , 95.
Preparação 35: l-Metil-3-trifluorometil-lH-pirazole-4-car-baldeído
Dissolver éster de etilo de ácido 3-trifluoro-metil-lH-pirazole-4-carboxílico (2,0 g, 9,61 mmol) em N,N-dimetilformamida (20 mL) e arrefecer até aos 0°C. Adicionar hidreto de sódio (0,58 g, 14,42 mmol, dispersão em óleo a 60%) e agitar a 0°C ao longo de 20 min. Adicionar iodo-metano (0,90 mL, 14,42 mmol) e deixar aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Partilhar entre acetato 73 ΡΕ2155717 de etilo (100 mL) e água (50 mL). Separar a camada orgânica e lavar com água (5 x 50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL). Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 90:10), para dar éster de etilo de ácido l-metil-3-trifluorometil-lH-pirazole-4-carboxilico (1,74 g, 81,7%). 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,92 (s, 1H) , 4,27 (q, 2H) , 3,95 (s, 3H) , 1,33 (t, 3H) .
Dissolver éster de etilo de ácido l-metil-3-trifluorometil-lH-pirazole-4-carboxilico (1,74 g, 7,83 mmol) em tetra-hidrofurano (100 mL) e arrefecer até aos 0°C. Adicionar hidreto de di-isobutilalumínio (47,0 mL, 47,0 mmol, 1 M em tolueno) gota a gota ao longo de 15 min. Deixar a mistura de reação aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 16 h. Partilhar entre acetato de etilo (100 mL) e solução aquosa saturada de tartarato de sódio e potássio (50 mL) e agitar à temperatura ambiente durante mais 16 h. Separar a camada orgânica; secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar para dar (l-metil-3-trifluoro-metil-lH-pirazol-4-il)-metanol (1,42 g, 100%). ^-NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,42 (s, 1H) , 4,63 (s, 2H) , 3,90 (s, 3H) , 1,80 (bs, 1H) .
Dissolver (l-metil-3-trifluorometil-lH-pirazol-4-il)-metanol (1,41 g, 7,83 mmol) em DCM (25 mL) e dimetilssulfóxido (2,22 mL, 31,3 mmol) e arrefecer até aos -78°C. Adicionar cloreto de oxalilo (1,91 mL, 21,9 mmol) 74 ΡΕ2155717 gota a gota ao longo de 15 min. e agitar a -78°C ao longo de mais 1 h. Adicionar trietilamina (6,55 mL, 47,0 mmol) gota a gota e agitar durante mais 1 h. Temperar com água (20 mL) e diluir com DCM (50 mL) e aquecer até à temperatura ambiente durante 1 h. Separar a camada orgânica; secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 80:20), para dar a Preparação em epígrafe (0,98 g, 71%). 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 9,94 (s, 1H) , 7,97 (s, 1H), 3,99 (s, 3H) .
Preparação 36: 1,5-Dimetil-3-trifluorometil-lH-pirazole-4- carbaldeído
Dissolver 5-metil-3-(trifluorometil)pirazole (1,00 g, 6,66 mmol) em 60% de ácido acético aquoso (13 mL). Adicionar acetato de sódio (0,819 g, 9,99 mmol) e arrefecer até aos 0°C. Adicionar bromo (1,17 g, 7,33 mmol) gota a gota ao longo de 10 min. Agitar a 0°C ao longo de 3 h, depois à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Adicionar acetato de etilo e solução aquosa saturada de sulfito de sódio. Separar orgânicos e lavar uma vez com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada seguida de cloreto de sódio aquoso saturado. Secar (sulfato de magnésio), filtrar e concentrar para dar 4-bromo-5-metil-3-trifluorometil-lH-pirazole (1,50 g, 100%) . GC-MSj_ m/z = 229 [M+] .
Dissolver 4-bromo-5-metil-3-trifluorometil-lH-pi-razole (1,53 g, 6,66 mmol) em acetona (20 mL) . Adicionar 75 ΡΕ2155717 carbonato de potássio (1,84 g, 13,3 iranol) seguido de iodometano (2,84 g, 19,9 iranol). Agitar a 70°C ao longo de 18 h. Arrefecer até à temperatura ambiente e concentrar.
Adicionar água e acetato de etilo e separar orgânicos. Extrair a camada de água 2 vezes com acetato de etilo.
Secar camadas de acetato de etilo combinadas (sulfato de magnésio), filtrar e concentrar afim de obter 4-bromo-l,5-dimetil-3-trifluorometil-lH-pirazole (1,08 g, 67%). GC-MSj_ m/z = 243 [M+].
Dissolver 4-bromo-l,5-dimetil-3-trifluorometil-lH-pirazole (0,30 g, 1,23 mmol) em tetra-hidrofurano (14,7 mL). Arrefecer até aos -78°C e adicionar t-butilitio 1,7 M em pentano (2,9 mL) gota a gota. Agitar durante 3 min. a -78°C e depois adicionar dimetilformamida (669 pL, 8,64 mmol). Agitar durante trinta min. a -78°C, depois aquecer até aos 0°C durante 2 h. Adicionar ácido clorídrico 2 N (12,3 mL) e agitar à temperatura ambiente durante uma hora. Separar as camadas e extrair a camada aquosa 2 vezes com DCM. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 15:85), para dar a Preparação em epígrafe (79 mg, 33%). GC-MSj_ m/z =192 [M+] .
Preparação 37: (1,3,5-Trimetil-lH-pirazol-4-il)-acetaldeído
Adicionar pentano-2,4-diona (2,0 g, 20,6 mmol) em tetra-hidrofurano (30 mL) a uma suspensão arrefecida (0°C) 76 ΡΕ2155717 de hidreto de sódio a 60% (0,99 g, 24,7 mmol) em tetra- hidrofurano (40 mL) . Agitar durante 1 h. Depois adicionar gota a gota éster de etilo do ácido bromoacético (2,73 mL, 24,7 mmol) em tetra-hidrofurano (30 mL). Agitar a 0°C até à temperatura ambiente ao longo de 16 h. Partilhar entre éter dietilico (100 mL) e solução de cloreto de amónio aquosa saturada (50 mL). Separar a camada orgânica, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos: acetato de etilo 9:1), para dar éster de etilo de ácido 3-acetil-4-oxopentanóico (3,34 g, 94%). ΧΗ NMR (CDCI3) δ 5,15 (q, 2H), 5,1 (t, 1H), 2,84 (d, 2H), 2,23 (s, 6H), 1,22 (t, 3H).
Dissolver éster de etilo de ácido 3-acetil-4-oxopentanóico (3,35 g, 19,5 mmol) em ácido acético glacial (20 mL) e adicionar metil-hidrazina (1,13 mL, 21,4 mmol) gota a gota. Agitar a mistura resultante à temperatura ambiente ao longo de 16 h. Concentrar e partilhar o residuo entre acetato de etilo (100 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (50 mL) . Separar a camada orgânica, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos: acetato de etilo 7:3) para dar éster de etilo de ácido (1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-il)-acético (2,8 g, 73%) como um óleo. ΧΗ NMR (CDC13) δ 4,08 (q, 2H) , 3,67 (s, 3H) , 3,29 (s, 2H), 2,18 (s, 6H), 1,21 (t, 3H).
Dissolver éster de etilo de ácido (1,3,5-trime-til-lH-pirazol-4-il)-acético (2,8 g, 14,3 mmol) em tetra- 77 ΡΕ2155717 hidrofurano (200 mL) e arrefecer até aos -78°C. Adicionar hidreto de di-isobutilaluminio (42,8 mL, 42,8 mmol, 1 M em tolueno) gota a gota durante 30 min. Agitar 2 h adicionais a -78°C. Partilhar entre solução aquosa saturada de tar-tarato de sódio e potássio (150 mL) e acetato de etilo (500 mL) e agitar durante 16 h à temperatura ambiente. Separar a camada orgânica, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 1:1), para dar a Preparação em epígrafe (0,26 g, 12%). NMR (CDC13) δ 9,54 (t, 1H) , 3,71 (s, 3H), 3,38 (d, 2H), 2,15 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) .
Preparação 38: (1,3,5-Trietil-lH-pirazol-4-il)-acetaldeído
Combinar éster de etilo de ácido 4-oxo-3-propionil-hexanóico (2,49 g, 11,6 mmol) e hidrato de hidra-zina (0,70 g, 13,9 mmol) em ácido acético glacial (20 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 88 h. Concentrar até um óleo. Partilhar este resíduo entre acetato de etilo (100 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (50 mL). Separar a camada orgânica; secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar para proporcionar éster de etilo de ácido (3,5-dietil-lH-pirazol-4-il)-acético (2,4 g, 98%). 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,64 (bs, 1H) , 4,08 (q, 2H) , 3,35 (s, 2H) , 2,61 (q, 4H) , 1,21 (m, 9H) .
Suspender hidreto de sódio (0,23 g, 5,71 mol, dispersão em óleo a 60%) em tetra-hidrofurano (10 mL) e 78 ΡΕ2155717 arrefecer até aos 0°C. Adicionar uma solução de éster de etilo de ácido (3,5-dietil-lH-pirazol-4-il)-acético (1,0 g, 4,76 mmol) em tetra-hidrofurano (10 mL) gota a gota. Depois de agitar a 0°C ao longo de 30 min, adicionar iodoetano (0,46 mL, 5,71 mmol). Deixar a mistura de reação aquecer até à temperatura ambiente enquanto se agita durante 18 h. Partilhar entre acetato de etilo (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de amónio (50 mL) . Separar a camada orgânica, secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar para dar éster de etilo de ácido (1,3,5-trietil-lH-pirazol-4-il)-acético como um óleo (0,92 g, 81%). 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 4,09 (q, 2H) , 4,01 (q, 2H) , 3,33 (s, 2H) , 2,58 (m, 4H), 1,38 (t, 3H), 1,20 (m, 9H).
Arrefecer uma solução de éster de etilo de ácido (1,3,5-trietil-lH-pirazol-4-il)-acético (0,92 g, 3,86 mmol) em tetra-hidrofurano (50 mL) até aos -78°C e adicionar hidreto de di-isobutilaluminio (16,2 mL, 16,2 mmol, 1 M em tolueno) gota a gota. Agitar a mistura resultante durante 5 h a -78°C. Temperar a mistura de reação com solução de tartarato de sódio e potássio aquosa saturada (30 mL) e acetato de etilo (100 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 16 h. Separar a camada orgânica; secar (sulfato de sódio) , filtrar e concentrar para dar a Preparação em epígrafe como um óleo (0,65 g, 87%) . 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) δ 9,57 (t, 1H), 4,01 (q, 2H) , 3,38 (d, 2H) , 2,57 (q, 4H), 1,39 (t, 3H), 1,20 (t, 3H), 1,15 (t, 3H). 79 ΡΕ2155717
Preparação 39: 3-(1,3,5-Trimetil-lH-pirazol-4-il)-propio- naldeído
Dissolver 4-acetil-5-oxo-hexanoato de etilo (2,00 g, 9, 99 mmol) em ácido acético (21 mL) . Adicionar metil-hidrazina (589 yL, 10,99 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Concentrar e dissolver o residuo em acetato de etilo. Lavar a camada de acetato de etilo com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada. Extrair a camada aquosa duas vezes com acetato de etilo, secar (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 100%) para dar éster de etilo de ácido 3-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-il)-propiónico (1,95 g, 93%). MS (ES)j_ m/z = 211 [M+H] + .
Dissolver éster de etilo de ácido 3-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-il)-propiónico (1,94 g, 9,23 mmol) em tetra-hidrofurano (78 mL) . Arrefecer até aos -78°C num banho de gelo seco/acetona e tratar gota a gota com hidreto de di-isobutilaluminio 1 M em tolueno (10,15 mL) . Agitar a mistura de reação a -78°C ao longo de uma hora e adicionar hidreto de di-isobutilaluminio 1 M em tolueno (10,15 mL) . Agitar a mistura de reação a -7 8°C ao longo de uma hora e adicionar hidreto de di-isobutilaluminio 1 M em tolueno (10,15 mL). Agitar a mistura de reação a -78°C ao longo de lhe adicionar hidreto de di-isobutilaluminio 1 M em tolueno (10,15 mL) . Agitar a mistura de reação a -78°C ao longo de 1 h e temperar com solução saturada aquosa de 80 ΡΕ2155717 tetra-hidrato de tartarato de sódio e potássio. Adicionar acetato de etilo (150 mL) , e agitar durante 3 h à temperatura ambiente. Separar a camada orgânica, extrair a camada aquosa 3 vezes com acetato de etilo, secar (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (croma-tografia de gel de silica, eluindo com acetato de eti-lorhexanos 1:1 a 100%), para dar a Preparação em epigrafe (760 mg, 51%). GC-MS m/z = 166 [M+].
Preparação 4 0: l-Benzil-3,5-dimetil-lH-pirazole-4-carbal-deído
Dissolver 2,4-pentanodiona (5,09 g, 50,8 mmol) e dicloridrato de benzil-hidrazina (10,91 g, 55,9 mmol) em ácido acético (40 mL). Adicionar lentamente trietilamina (15,6 mL, 0,112 mol) e agitar a mistura ao longo de 18 h. Concentrar a solução depois diluir o residuo com bicarbonato de sódio aquoso saturado e extrair 3 vezes com acetato de etilo. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 40:60), para dar 1-benzil-3,5-dimetil-lH-pirazole como um óleo amarelo (8,703 g, 92%) .
Dissolver l-benzil-3,5-dimetil-lH-pirazole (3,088 g, 16,6 mmol) em N,N-dimetilformamida (12,8 mL) e aquecer a mistura até aos 95°C, depois adicionar gota a gota oxicloreto de fósforo (13,4 mL) . Agitar a mistura ao longo de 3 h a 95°C depois arrefecer e adicionar muito lentamente 81 ΡΕ2155717 água com gelo. Ajustar a mistura aproximadamente até ao pH = 4 usando hidróxido de sódio 5 N, extrair a mistura preta com éter dietilico 3 vezes, secar (sulfato de sódio) e filtrar para dar a Preparação em epigrafe como um sólido amarelo (2,65 g, 75%). 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2,282 (s, 3H); 2,433 (s, 3H); 5,233 (s, 2H); 7,13 (m, 2H); 7,21-7,34 (m, 3H); 9,800 (s, 1H).
Preparação 41: l-Benzil-3,5-dietil-lH-pirazole-4-carbal- deído
Utilizar os métodos da Preparação 40, usando 3,5-heptanodiona, para obter a Preparação em epigrafe. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 0, 952 (t, J = 7,6 Hz, 3H) , 1,128 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 2,734 (q. J = 7,6 Hz, 2H) , 2,873 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 5,298 (s, 2H) , 7,12 (m, 2H) , 7,21-7,33 (m, 3H) , 9, 844 (s, 1H) .
Preparação 42: 3-Etil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeido
Adicionar ácido acético (1,00 mL, 17,45 mmol) e fenil-hidrazina (1,98 mL, 20,00 mmol) a uma solução de 2-butanona (2,15 mL, 24,00 mmol) em etanol (90 mL) à temperatura ambiente. Agitar a reação ao longo de 1 h, depois remover os solventes in vacuo para dar N-[l-metil-prop-(E)-ilideno]-N'-fenil-hidrazina como um óleo cor de laranja bruto (3,21 g, 99%). MS (ES)j_ m/z = 163 [M+H]+. A uma solução arrefecida com gelo de N,N- 82 ΡΕ2155717 dimetilformamida (4,59 mL, 59,36 iranol) e cloreto de fosforilo (5,52 mL, 59,36 mmol) adicionar gota a gota uma solução de N-[1-metil-prop-(E)-ilideno]-N'-fenil-hidrazina (3,21 g, 19,79 mmol) em N,N-dimetilformamida (2 mL). Aquecer até à temperatura ambiente, depois aquecer até aos 75°C ao longo de 5 h. Arrefecer até à temperatura ambiente e verter dentro de uma solução saturada de carbonato de potássio arrefecida com gelo. Extrair com DCM (3 x 20 mL) , passar através de um IST Phase Separator Frit® e concentrar. Purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 0:100 a 20:80), para dar o composto em epígrafe como um sólido castanho (600 mg, 15%). MS (ES)j_m/z = 201 [M+H] + .
Preparação 43 : 1-(4-metoxibenzil)-3,5-dimetil-lH-pirazole- 4-carbaldeído
Dissolver 3,5-dimetilpirazole (0,331 g, 3,44 mmol) em N,N-dimetilformamida (7 mL) e adicionar hidreto de sódio (0,165 g, 4,13 mmol). Depois de 10 min, arrefecer até aos 0°C e adicionar gota a gota cloreto de 4-metoxibenzilo (0,654 mL, 4,82 mmol). Agitar a mistura a 25°C ao longo de 18 h depois diluir com cloreto de amónio saturado. Extrair com acetato de etilo 3 vezes, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 40:60), para dar 1-(4-metoxibenzil)-3,5-dimetil-lH-pirazole como um óleo incolor (0, 682 g, 92%). MS (APCI)j_ m/z = 217 [M+H] . 83 ΡΕ2155717
Utilizar o método da Preparação 39 usando 1-(4-metoxibenzil)-3,5-dimetil-lH-pirazole para obter a Preparação em epigrafe (rendimento de 46%) . 1H-NMR (400 MHz, DMSO-de) δ 2,27 (s, 3H) , 2,43 (s, 3H) , 3,67 (s, 3H) , 5,15 (s, 2H) , 6,85 (m, 2H) , 7,10 (m, 2H) , 9,79 (s, 1H) .
Preparação 44: 3,5-Dimetil-l-piridin-4-il-lH-pirazole-4- carbaldeido
Utilizar o método da Preparação 43 usando piri-din-4-il-hidrazina para obter a Preparação em epigrafe (rendimento de 62% para 4-(3,5-dimetilpirazol-l-il)-piridina, MS (ES)j_ m/z = 174 [M+H] ; depois rendimento de 60% para 3,5-dimetil-l-piridin-4-il-lH-pirazole-4-carbal-deído, 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2,15 (s, 3H) , 2,40 (s, 3H) , 7,61 (m, 2H) , 8,69 (m, 2H) , 9,95 (s, 1H) .
Preparação 45: 3,5-Dimetil-l-piridin-2-il-lH-pirazole-4- carbaldeido
Dissolver éster de etilo de ácido 2-acetil-3-oxobutirico (20,74 g, 0,120 mol) e 2-piridil-hidrazina (14,5 mL, 0,133 mol) em ácido acético (160 mL) e agitar a mistura ao longo de 18 h. Concentrar, diluir com DCM, lavar com bicarbonato de sódio saturado, secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar para dar éster de etilo de ácido 3,5-dimetil-l-piridin-2-il-lH-pirazole-4-carboxilico como um óleo (28,6 g, 97%) . MS (APCI)j_ m/z = 246 [M+H] + . 84 ΡΕ2155717
Suspender alumino-hidreto de lítio (0,359 g, 9,46 mmol) em tetra-hidrofurano (25 mL) a -10°C e adicionar éster de etilo de ácido 3,5-dimetil-l-piridin-2-il-lH-pirazole-4-carboxilico (1,160 g, 4,73 mmol) gota a gota em tetra-hidrofurano (5 mL). Deixar a mistura aquecer até aos 25°C e agitar durante 4 h. Arrefecer a mistura até aos 0°C depois Temperar cuidadosamente com solução de sulfato de sódio saturada (1 mL) . Deixar a mistura agitar à temperatura ambiente ao longo de 2 h depois separar por filtração o precipitado, secar a solução e concentrar para dar (3,5— dimetil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-metanol como um sólido amarelo (0,821 g, 86%). 1H-NMR (400 MHz, DMSO) 8,408 (m, X \—1 7,889 (m, X \—1 7,738 (m, 1H); 7,256 (m, 1H); 4,269 (s, 2H) ; 2,459 (s, 3H) ; 2,181 (s, 3H) .
Dissolver dimetilssulfóxido (0,324 mL, 4,56 mmol) em DCM (10 mL) e arrefecer a solução até aos -78°C. Adicionar gota a gota cloreto de oxalilo (0,239 mL, 2,74 mmol) à mistura e agitar a -78°C ao longo de 20 min.
Adicionar (3,5-dimetil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-metanol (0,369 g, 1,82 mmol) em DCM (10 mL) e agitar a mistura a -78°C ao longo de 1 h. Adicionar trietilamina (1,27 mL, 9,12 mmol) à mistura e aquecer até à temperatura ambiente depois agitar durante 18 h. Adicionar bicarbonato de sódio aquoso saturado e extrair a camada aquosa 3 vezes com DCM, secar a solução orgânica depois filtrar e concentrar. Purificar usando cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 20:80 para dar a Preparação em epigrafe como um sólido amarelo (0,358 g, 97%). MS (APCI): m/z = 202 [M+H]+. 85 ΡΕ2155717
Preparação 46: (3-Isobutil-5-metil-l-piridin-2-il-lH-pira- zol-4-il)-acetaldeído
Adicionar gota a gota uma solução de 6-metil-heptano-2,4-diona (5,0 g, 35,16 mmol) em tetra-hidrofurano (50 mL) a uma suspensão arrefecida (0°C) de hidreto de sódio (1,69 g, 42,2 mmol, dispersão em óleo a 60%) em tetra-hidrofurano (50 mL) . Depois de 1 h, adicionar éster de etilo de ácido bromoacético (4,28 mL, 38,68 mmol) gota a gota e agitar a 0°C até à temperatura ambiente ao longo de 88 h. Partilhar a mistura de reação entre acetato de etilo (200 mL) e solução de cloreto de amónio aquosa saturada (100 mL) . Separar a camada orgânica, secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar. Purificar usando cromato-grafia de gel de silica (hexanos:acetato de etilo 95:5) para dar éster de etilo de ácido 3-acetil-6-metil-4-oxo- heptanóico (5,81 g, 73%) . ^-NMR (400 MHz, CDCI3) δ 4,10 (m, 4H), 2,81 (d, 2H), 2,41 (t, 1H), 2,22 (s, 3H), 1,23 (m, 4H) , 0, 92 (m, 6H) .
Combinar éster de etilo de ácido 3-acetil-6- metil-4-oxo-heptanóico (3,0 g, 13,1 mmol) e piridin-2-il-hidrazina (1,72 g, 15,72 mmol) em ácido acético glacial (25 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 68 h. Concentrar até um óleo e partilhar o residuo entre acetato de etilo (150 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (50 mL). Separar a camada orgânica, secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar. Purificar usando cromato- 86 ΡΕ2155717 grafia de gel de sílica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 90:10, para dar éster de etilo de ácido (3-isobutil-5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-acético (3,35 g, 85%). 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,38 (m, 1H), 7,77 (m, 2H) , 7,13 (m, 1H) , 4,12 (q, 2H) , 3,41 (s, 2H) , 2,98 (d, 2H) , 2,27 (s, 3H), 1,82 (m, 1H), 1,22 (t, 3H) , 0,80 (d, 6H) .
Dissolver éster de etilo de ácido (3-isobutil-5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-acético (3,35 g, 11,11 mmol) em tetra-hidrofurano (50 mL) e arrefecer até aos -78°C. Adicionar gota a gota hidreto de di- isobutilalumínio (33,3 mL, 33,3 mmol, 1 M em tolueno). Continuar a agitação a -78°C ao longo de 6 h. Temperar com solução de tartarato de sódio e potássio aquosa saturada (50 mL) e aquecer ate à temperatura ambiente ao longo de 16 h. Extrair com acetato de etilo (2 x 100 mL) . Combinar camadas orgânicas, secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar. Purificar usando cromatografia de gel de sílica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 90 O \—1 para dar a Preparação em epígrafe (1,60 g, 56%) . λΆ· -NMR (400 MHz, CDCI3) δ 9,62 (t, 1H) , 8,39 (m, 1H) , 7,77 (m, 2H) , 7,15 (m, 1H) , 3,45 (d, 2H) , 2,96 (d, 2H) , 2,22 (s, 3H) , 1,80 (m, 1H), 0,81 (d, 6H) .
Preparação 47: 3,5-Dimetil-l-pirimidin-2-il-lH-pirazole-4- carbaldeído
Dissolver 2-cloropirimidina (10,04 g, 87,7 mmol) em piridina (200 mL) e adicionar hidrazina (35,8 mL, 1,14 87 ΡΕ2155717 mol) à mistura seguida de piridina (100 mL) . Agitar a mistura ao longo de 3 h à temperatura ambiente depois concentrar. Suspender o residuo em água e filtrar. Lavar o bolo com metanol frio. Recolher o pó e secar sob vácuo para dar pirimidin-2-il-hidrazina como um pó branco (8,05 g, 83%) .
Dissolver 2,4-pentanodiona (0,81 mL, 7,85 mmol) e pirimidin-2-il-hidrazina (1,037 g, 9,42 mmol) em ácido acético (10 mL) . Agitar a mistura ao longo de 69 h à temperatura ambiente depois concentrar. Diluir o residuo com bicarbonato de sódio aquoso saturado, extrair 3 vezes com DCM, secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar para dar 2-(3,5-dimetilpirazol-l-il)-pirimidina como um sólido branco (1,333 g, 97%). MS (ES)j_ m/z = 175 [M+H] + .
Utilizar o método da Preparação 43, usando 2-(3,5-dimetilpirazol-l-il)-pirimidina para obter a Preparação em epígrafe (rendimento de 13%) . 1H-NMR (400 MHz, DMSO-de) δ 2,38 (s, 3H) , 2,77 (s, 3H) , 6,10 (m, 1H) , 7,55 (m, 1H) , 8,92 (m, 1H) , 9,98 (s, 1H) .
Preparação 48: 5-Metil-l-piridin-2-il-lH-pirazole-4-carbal-deído
Adicionar acetoacetato de etilo (15 mL, 0,118 mol) a dimetoximetil-dimetil-amina (19 mL, 0,142 mol) e sujeitar a mistura a refluxo durante 1 h. Evaporar a mistura para dar éster de etilo de ácido 2-dimetilamino-metileno-3-oxo-butírico (21,7 g, 99%). 88 ΡΕ2155717
Dissolver éster de etilo de ácido 2-dimetilamino-metileno-3-oxo-butirico (0,662 g, 3,57 mmol) e piridin-2-il-hidrazina (0,410 g, 3,75 mmol) em etanol (15 mL) e sujeitar a refluxo durante 2 h. Evaporar a mistura depois diluir com bicarbonato de sódio saturado e extrair 3 vezes com acetato de etilo. Secar a solução (sulfato de sódio), filtrar e concentrar. Purificar usando cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilorhexano 50:50 para dar éster de etilo de ácido 5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazole-4-carboxílico como um sólido branco (0,700 g, 85%). MS (ES)j_ m/z = 232 [M+H] + .
Adicionar alumino-hidreto de litio (0,225 g, 5,92 mmol) a tetra-hidrofurano (15 mL) a 0°C depois adicionar lentamente éster de etilo de ácido 5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazole-4-carboxilico (0,685 g, 2,96 mmol) em tetra-hidrofurano (5 mL) gota a gota. Aquecer a mistura até à temperatura ambiente e agitar durante 2 h depois arrefecer a solução até aos 0°C. Adicionar sulfato de sódio aquoso saturado (0,5 mL) , aquecer até à temperatura ambiente depois agitar durante 2 h. Separar por filtração os materiais sólidos depois secar a solução (sulfato de sódio), filtrar e concentrar para dar (5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-metanol como um sólido branco (0,501 g, 89%).
Dissolver dimetilsulfóxido (0,751 mL, 10,6 mmol) em DCM (20 mL) e arrefecer até aos -78°C. Adicionar cloreto de oxalilo (0,577 mL, 6,62 mmol) gota a gota em DCM (8 mL) 89 ΡΕ2155717 e agitar durante 15 min. Adicionar (5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-metanol (0,501 g, 2,65 mmol) em DCM (20 mL) gota a gota e agitar durante lha -78°C. Adicionar trietilamina (1,85 mL, 13,2 mmol) e aquecer a mistura até à temperatura ambiente ao longo de uma hora. Diluir a mistura com bicarbonato de sódio saturado e extrair 3 vezes com DCM. Secar (sulfato de sódio) a solução, filtrar e concentrar para dar a Preparação em epigrafe como um sólido branco (0,496 g, 100%). MS (ES)j_ m/z = 188 [M+H] + .
Preparação 49: 5-Metil-l-piridin-4-il-lH-pirazole-4-carbal-deído
Dissolver éster de etilo de ácido 2-dimetilamino-metileno-3-oxo-butírico (0,550 g, 2,96 mmol), cloridrato de piridin-4-il-hidrazina (0,454 g, 3,12 mmol) e trietilamina (0,435 mL, 3,12 mmol) em etanol (12 mL) e sujeitar a refluxo durante 2 h. Evaporar a mistura depois diluir com bicarbonato de sódio saturado e extrair 3 vezes com acetato de etilo. Secar (sulfato de sódio) a solução, filtrar e concentrar. Purificar usando cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilorhexano 50:50 para dar éster de etilo de ácido 5-metil-l-piridin-4-il-lH-pirazole-4-carboxílico como um sólido castanho-amarelado (0,520 g, 76%). MS (ES)j_ m/z = 232 [M+H] + .
Utilizando o método da Preparação 48 usando éster de etilo de ácido 5-metil-l-piridin-4-il-lH-pirazole-4-car-boxílico, preparar a Preparação em epígrafe em rendimento 90 ΡΕ2155717 essencialmente quantitativo. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,93 (s, 1H) , 8,73 (m, 2H) , 8,21 (d, 1H) , 7,66 (m, 2H) , 2, 67 (s, 3H) .
Preparação 50: 1-(3,5-dimetilisoxazol-4-ilmetil)-lH-pirazo-le-4-carbaldeido
Adicionar N,N-dimetilformamida (3 mL) a hidreto de sódio (0,092 g, 2,29 mmol) e agitar a 0°C. Adicionar 1-H-pirazole-4-carboxaldeido (0,200 g, 2,08 inmol) e agitar a 0°C ao longo de 20 min. Dissolver 4-clorometil-3,5-dime-tilisoxazole (0,318 g, 2,18 mmol) em N,N-dimetilformamida (4 mL) e adicionar à mistura de reação. Agitar a reação à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Temperar com solução de bicarbonato de sódio saturada aquosa. Adicionar acetato de etilo e separar a camada orgânica. Extrair a camada aquosa duas vezes com acetato de etilo. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 25:75 a 75:25), para dar a Preparação em epigrafe (387 mg, 91%) . GC-MSj_ m/z = 205 [M+].
Preparação 51: 1-(2-metiltiazol-4-ilmetil)-lH-pirazole-4- carbaldeído
Preparar a Preparação em epígrafe usando o método da Preparação 50 usando 4-clorometil-2-metil-l,3-tiazole, (350 mg, 81%). GC-MS: m/z = 207 [M+]. 91 ΡΕ2155717
Preparação 52: 1- (2-Hidroxi-etil)-lH-pirazole-4-carbaldeido
Combinar lH-pirazole-4-carbaldeído (0,110 g, 1,14 mmol), 2-bromoetanol (0,172 g, 1,37 mmol), e carbonato de potássio (0,236 g, 1,71 mmol) em acetonitrilo (2 mL). Aquecer num micro-ondas a 150°C ao longo de 20 min. Arrefecer até à temperatura ambiente e filtrar, lavando com acetonitrilo. Concentrar o filtrado para dar a Preparação em epigrafe (0,155 g, 97%) . GC-MSj_ m/z = 140 [M+] .
Preparação 53: l-Ciclopropilometil-lH-pirazole-4-carbal- deido
Adicionar lH-pirazole-4-carbaldeído (0,200 g, 2,08 mmol) a uma suspensão de hidreto de sódio (0, 092 g, 2,29 mmol) em DMF (3 mL) a 0°C. Agitar durante 20 min a 0°C. Adicionar uma solução de 1-(bromometil)ciclopropano (0,295 g, 2,18 mmol) em DMF (4 mL) gota a gota à mistura de reação. Agitar a reação até à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Temperar com solução de bicarbonato de sódio saturado aquoso e adicionar acetato de etilo. Separar a camada orgânica. Extrair a camada aquosa duas vezes com acetato de etilo, secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 60:40) para dar a Preparação em epigrafe (175 mg, 56%). GC-MS: m/z = 150 [M+]. 92 ΡΕ2155717
Preparação 54: l-Ciclopropil-lH-pirazole-4-carbaldeído
Dissolver lH-pirazole-4-carboxaldeído em N,N-dimetilformamida (1,9 mL). Adicionar carbonato de potássio (0,539 g, 3,90 mmol) e brometo de ciclopropilo (0,346 g, 2,86 mmol) . Aquecer num tubo de pressão até aos 130°C ao longo de 18 h. Arrefecer até à temperatura ambiente e adicionar DCM e água. Separar as camadas e extrair a camada de água 3 vezes com DCM. Lavar as camadas DCM combinadas com salmoura, secar (sulfato de magnésio), filtrar, e concentrar para dar a base livre da Preparação em epígrafe. GC-MSj_ m/z = 136 [M+] .
Preparação_55 : 1- (2,2,2-Trifluoro-etil)-lH-pirazole-4- carbaldeído
Adicionar lH-pirazole-4-carbaldeído (0,400 g, 4,16 mmol) como uma solução em DMF (2 mL) gota a gota a uma suspensão de hidreto de sódio (0,333 g, 8,32 mmol) em DMF (5 mL) a 0°C. Agitar durante 15 min. a 0°C. Adicionar p-toluenossulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (1,27 g, 5,00 mmol) e DMF (3 mL) à mistura de reação. Aquecer até aos 60°C ao longo de 18 h. Temperar com solução de bicarbonato de sódio saturada aquosa e adicionar acetato de etilo. Separar a camada orgânica. Extrair a camada aquosa duas vezes com acetato de etilo, lavar as camadas orgânicas combinadas com salmoura, secar (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de 93 ΡΕ2155717 sílica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 100:0) para dar a Preparação em epígrafe (309 mg, 42%) . GC-MSj_ m/z = 178 [M+].
Preparação 56: 1-(2-Hidroxi-propil)-lH-pirazole-4-carbal-deído racémico
Combinar lH-pirazole-4-carbaldeído (0,150 g, 1,56 mmol), l-bromo-2-propanol racémico (0,260 g, 1,87 mmol), e carbonato de potássio (0,323 g, 2,34 mmol) em acetonitrilo (2 mL) . Aquecer num micro-ondas a 150°C durante 20 min. Filtrar, lavar com acetonitrilo e concentrar o filtrado. Purificar através de cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 100:0) para dar a Preparação em epígrafe (177 mg, 73%) . GC-MSj_ m/z = 154 [M+].
Preparações 57-60 são preparadas essencialmente como descritas para a Preparação 55 usando o haleto de alquilo apropriado.
Prep Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 57 1-(3,3,3-Trifluoro-2-hidroxi-propil)-lH-pirazole-4-carbaldeído 74 208 58 1-(2-Metoxi-etil)-lH-pirazole-4-carbaldeído 100 154 59 l-Metoximetil-lH-pirazole-4-carbaldeído 49 140 60 1-(3-Hidroxi-propil)-lH-pirazole-4-carbaldeído 62 154 94 ΡΕ2155717
Preparação 61: 1-(1,2-Dimetil-lH-imidazole-4-sulfonil)-1H- pirazole-4-carbaldeído
Dissolver lH-pirazole-4-carboxaldeído (0,150 g, 1,56 mmol) em DCM (5 mL) . Adicionar trietilamina (240 pL, 1,72 mmol) e cloreto de 1,2-dimetil-lH-imidazole-4-sulfo-nilo (0,334 g, 1,72 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Concentrar, e purificar através de croma-tografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0 para dar a Preparação em epigrafe (317 mg, 80%) . GC-MSj_ m/z = 254 [M+] .
Preparação 62 : 1-(l-Metil-lH-imidazol-4-il)-lH-pirazole-4- carbaldeído
Num balão seco em estufa, combinar 4-bromo-l-metil-lH-imidazole (0,200 g, 1,24 mmol), iodeto de cobre(I) (0,022 g, 0,113 mmol), N,N-dimetilglicina (0,023 g, 0,226 mmol), e carbonato de potássio (0,312 g, 2,26 mmol). Purgar 3 vezes com azoto. Adicionar l-H-pirazole-4-carboxaldeído (0,109 g, 1,13 mmol), e DMSO (1,7 mL) . Aquecer até aos 110°C ao longo de 48 h. Arrefecer até à temperatura ambiente e partilhar entre acetato de etilo e água. Separar a camada orgânica e extrair a camada aquosa duas vezes com acetato de etilo. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio), filtrar e concentrar. Adicionar iodeto de cobre (I) (0,022 g, 0,113 mmol), N, N-dimetilglicina (0,023 g, 0,226 mmol), carbonato de potássio (0,312 g, 2,26 mmol), e DMSO (1,7 mL) . Purgar 3 vezes com azoto. Aquecer 95 ΡΕ2155717 até aos 110°C ao longo de 18 h. Arrefecer até à temperatura ambiente e partilhar entre acetato de etilo e água. Separar a camada orgânica e extrair a camada aquosa duas vezes com acetato de etilo. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio) , filtrar, concentrar, e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0) para dar a Preparação em epígrafe (39 mg, 20%) . GC-MSj_ m/z = 176 [M+] .
Preparação 63 : 2-[4-(2-Bromoetil)-3,5-dietilpirazol-l-il]- 96 ΡΕ2155717
Utilizando o método da Preparação 43, usando éster de etilo de ácido 4-oxo-3-propionil-hexanóico, preparar éster de etilo de ácido (3,5-dietil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-acético (rendimento de 95%). 1H-NMR (400 MHz, CDCls) δ 8,39 (m, 1H) , 7, 80 (d, 1H) , 7, 73 (m, 1H) , 7,09 (m, 1H) , 4,12 (q, 2H) , 3, 40 (s, 2H) , 3, 07 (q, 2H) , 2, 63 (q, 2H), 1 , 22 (ir l, 6H), 1, 15 (t, 3H) • Dissolver éster de etilo de : ác ddo (3,5- -dietil -1- piridin-2- il-lH-pira zol-4- il) -acéti co (0 ,54 g, i ,88 mmol) em tetra-hidrofurano (20 mL) e arrefecer até aos -78°C. Adicionar hidreto de di-isobutilaluminio (7,52 mL, 7,52 mmol, 1 M em tolueno) gota a gota e continuar a agitar durante 2,5 h. Aquecer até à temperatura ambiente durante 1 h depois Temperar com solução aquosa saturada de tartarato de sódio e potássio (50 mL) . Adicionar acetato de etilo (100 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 16 h. Separar a camada orgânica, secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar. Purificar usando cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 80:20, para dar 2-(3,5-dietil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-etanol como um sólido branco (0,30 g, 66%). 1H-NMR (400 MHz, CDCls) δ 8,39 (m, 1H) , 7,80 (d, 1H) , 7,73 (m, 1H) , 7,12 (m, 1H) , 3,72 (m, 2H) , 3,08 (q, 2H) , 2,67 (m, 4H) , 1,58 (bs, 1H), 1,28 (t, 3H), 1,15 (t, 3H).
Combinar 2-(3,5-dietil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-etanol (0,68 g, 2,78 mmol) e trifenilfosfina (1,09 g, 97 ΡΕ2155717 4.18 iranol) em DCM (20 mL) e arrefecer até aos 0°C. Adicionar uma solução de tetrabrometo de carbono (1,39 g, 4.18 mmol) e trietilamina (0,77 mL, 5,56 iranol) em DCM (5 mL) gota a gota. Aquecer a mistura de reação até à temperatura ambiente e agitar durante 3 h. Diluir com éter di-etílico (20 mL) e filtrar. Concentrar o filtrado e purificar usando cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 90:10, para dar a Preparação em epígrafe como um óleo (0,8 g, 93%)1H-NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,39 (m, 1H) , 7,80 (m, 1H) , 7,75 (m, 1H) , 7,15 (m, 1H) , 3,39 (m, 2H) , 3,08 (q, 2H) , 2,98 (m, 2H) , 2,64 (q, 2H) , 1,28 (t, 3H), 1,15 (t, 3H).
Preparação 64: 3'-Cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilme- til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina A uma solução de éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (10 g, 33,4 mmol, 1 eq) em 1,4-dioxano (160 mL) adicionar uma solução de ácido clorídrico 4 M em 1,4-dioxano (80 mL, 0,3 mol, 10 eq) e agitar sob azoto à temperatura ambiente de um dia para o outro. Diluir com DCM (600 mL) depois basificar com hidróxido de sódio aquoso a 50%. Adicionar água (100 mL), separar as camadas e extrair a camada aquosa duas vezes com DCM (200 mL) . Combinar os extratos orgânicos, lavar com cloreto de sódio aquoso saturado, secar (sulfato de magnésio), filtrar, e concentrar para dar 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um óleo viscoso que solidifica ao repousar (6,39 g, 96%). MS (ES) : m/z = 199, 1, 201,1 [M+H] + . 98 ΡΕ2155717 A uma solução de 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (3 g, 15,1 mmol, 1 eq) e 1,3-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (2,0 g, 16,6 mmol, 1,1 eq) em DCE (75 mL) adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,8 g, 22,6 mmol, 1,5 eq) e agitar à temperatura ambiente durante o fim de semana. Adicionar hidróxido de sódio 2 N (100 mL), separar a camadas, extrair a camada aquosa duas vezes com DCM (75 mL) , secar (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 10:90). Combinar apenas as frações que contêm o componente principal e concentrar para dar a Preparação em epígrafe como um óleo amarelo viscoso (2,14 g, 46%) . Combinar todas as outras frações que contêm o componente principal mais as impurezas, concentrar depois repetir o passo de cromatografia para recuperar material adicional (1,6 g, 35%, rendimento total de 81%). MS (ES)j_ m/z= 307,1 [M+H] +.
Preparação 65: 3'-Cloro-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinilo (3,43 g, 17,3 mmol) em tetra-hidrofurano (100 mL) . Adicionar l-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (2,244 g, 20,38 mmol) em tetra-hidrofurano seco (5 mL) , agitar durante 10 min à temperatura ambiente, adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,32 g, 20,4 mmol) e submeter a reação a agitação com ultra-sons durante 6 h à temperatura 99 ΡΕ2155717 ambiente. Adicionar hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (100 mL) depois hidróxido de sódio 2 N (10 mL) à mistura e extrair com DCM (2 x 200 mL). Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 8:92), para dar a Preparação em epigrafe como um sólido cristalino (5,21 g, 92%). MS (ES)j_ m/z = 293, 1 [M+H] + .
Preparação 66: 3'-Cloro-4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Adicionar a éster de t-butilo de ácido 3'-cloro- 2.3.5.6- tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxilico (3,00 g, 10,0 mmol, 1 eq) uma solução de ácido clorídrico 4 M em 1,4-dioxano (100 mL, 400 mmol, 40 eq) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 3 h. Filtrar o precipitado e lavar com éter dietílico. Secar o pó em forno de vácuo de um dia para o outro para dar dicloridrato de 3'-cloro- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um pó amarelo pálido (2,11 g, 78%). MS (ES)j_ m/z = 199 [M+H] + . A uma suspensão de dicloridrato de 3'-cloro- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (2,11 g, 7,77 mmol, 1 eq) em tetra-hidrofurano (20 mL) adicionar 1,3,5-trimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (1,61 g, 11,65 mmol, 1,5 eq) . Agitar durante 10 min e adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,20 g, 19,40 mmol, 2,5 eq) numa porção. Agitar à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 1 h, 100 ΡΕ2155717 depois adicionar ainda 1,3,5-trimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,50 g, 3,6 mmol, 0,47 eq). Agitar durante 30 min, adicionar lentamente hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (100 mL), e depois extrair com DCM (3 x 50 mL). Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol: DCM 2:98 a 5:95), para dar a Preparação em epigrafe como um pó branco (2,468 g, 98%). MS (ES)j_ m/z = 321 [M+H] + .
Preparação 67: 2-[4-(3'-Cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bi— pirazinil-4-ilmetil)-pirazol-l-il]-etanol A uma solução de 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (0,789 g, 4,01 mmol) e 1-(2-hidroxi-etil)-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,562 g, 4,01 mmol) em DCE (35 mL) adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,28 g, 6,02 mmol) e ácido acético (0,382 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 20h. Adicionar bicarbonato de sódio aquoso saturado, separar as camadas, extrair a camada aquosa duas vezes com DCM, secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar. Purificar usando cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol (com amoniaco 2 N):DCM 6:94 para dar a Preparação em epigrafe como um óleo amarelo (1,16 g, 90%) . MS (ES)j_ m/z = 323 [M+H] + .
Preparação 68: [3'-(4-Fluorofenil)-2,3,5,6-tetra-hidro- [1,2']bipirazinil-4-il]-(l-isopropil-lH-pirazol-4-il)-metanona 101 ΡΕ2155717
Dissolver ácido l-isopropil-lfí-pirazole-4-carbo-xílico (0,120 g, 0,780 mmol) em DCM (5 mL). Adicionar HOBt (0,088 g, 0,650 mmol) seguido de cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (0,125 g, 0,650 mmol). Adicionar 3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,168 g, 0,650 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Adicionar DCM e água e separar as camadas. Extrair a camada aquosa 3 vezes com DCM, secar (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo/hexanos 25:75 a 100:0), para dar a Preparação em epígrafe (211 mg, 82%) . MS (ES) : m/z = 395 [M+H]+.
Preparações 69-71 podem ser preparadas essencialmente como descrito na Preparação 68 usando quer 3' — (4 — fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo quer a (fenil-piridin-2-il)-piperazina apropriada, e o ácido carboxilico apropriado.
Prep Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 69 [3(4-Fluorofenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2'Jbipirazi-nil-4-il]-(3-metil-l-propil-lH-pirazol-4-il)-metanona 87 409 70 {4-[3-(4-Fluoro-fenil)-piridin-2-il]-piperazin-l-il}-(l-isopropil-lH-pirazol-4-il)-metanona 95 394 71 (l-Isopropil-lH-pirazol-4-il)-{4-[3-(4-trifluorometil-fenil)-piridina-2-il]piperazin-l-il}-metanona 90 444 102 ΡΕ2155717
Exemplo 1: Cloridrato de 4-(3,5-dimetil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'- (4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver 3'- (4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,200 g, 0,774 mmol) em DCE (10 mL). Adicionar 3,5-dimetil-l-fenilpirazole-4-carboxaldeído (0,186 g, 0,929 mmol), e agitar à temperatura ambiente ao longo de 10 min. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,247 g, 1,16 mmol) seguido de ácido acético (47 yL, 0,813 mmol) . Agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 10:90, seguido-se cromatografia de fase reversa para dar a base livre do composto em epígrafe (221 mg, 65%). Dissolver a base livre (0,099 g, 0,225 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (0,012 g, 0,225 mmol) num volume mínimo de metanol. Chocalhar durante 1 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (108 mg, 100%) . MS (ES)j_ m/z = 443 [M+H]+.
Exemplo 2: Sal cloridrato de 3'- (4-fluoro-fenil)-4-(1-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 103 ΡΕ2155717
Formar a base livre de dicloridrato de 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol. Dissolver 3 * — (4 — fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,200 g, 0,774 mmol) em DCE (5 mL). Adicionar 1-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,200 g, 1,16 mmol, 1,5 eq.).
Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20-30 min. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,33 g, 1,55 mmol, 2 eq.) seguido de ácido acético (0,048 g, 0,81 mmol, 1,05 eq.). Agitar a mistura de reação à temperatura ambiente ao longo de 48 h. Purificar através de cartuxo SCX, seguido de cromatografia de fase reversa para obter a base livre do composto em epígrafe (0,360 g, 0,87 mmol, rendimento de 100%). MS (ES)j_ m/z = 415,3 [M+H] . Dissolver em metanol (5 mL) . Adicionar cloreto de amónio (0, 047 g, 0,87 mmol, 1 eq.). Agitar a mistura de reação à temperatura ambiente ao longo de 2 h e concentrar para dar o composto em epígrafe (0,327 g, rendimento de 83% para a formação do sal). MS (ES)j_ m/z = 415,3 [M+H] + .
Exemplo 3: Cloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-4-(1,3,5-trime-til-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina ΡΕ2155717 104
Preparar ο método do Exemplo 1 carbaldeído (182 mg, composto em epígrafe utilizando o usando 1,3, 5-trimetil-lH-pirazole-4-62%). MS (ES): m/z = 381 [M+H]+.
Exemplo 4: Cloridrato de 4-(l-Etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazina
Dissolver 3'-fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']— bipirazinilo (0,28 g, 1,18 mmol) em DCE (5 mL) . Adicionar l-etil-5-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,24 g, 1,76 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 2 0 min. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,5 g, 2,36 mmol) seguido de ácido acético (0,07 mL, 1,24 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 16 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida através de cromatografia de gel de sílica, eluindo com amoníaco 7 N em metanol:acetato de etilo 3:97 a 7:93, para dar a base livre do composto em epígrafe (0,22 g, 52%). MS (ES)j_ m/z = 363,3 [M+H] + .
Dissolver a base livre (0,22 g, 0,61 mmol) em acetonitrilo (1 mL) e água (2 mL). Adicionar HC1 1 M aquoso 105 ΡΕ2155717 (1 eq, 0,61 mmol, 0,61 mL) e liofilizar durante 48 h para dar o composto em epígrafe (0,26 g, 100%) . MS (ES)j_ m/z = 363,3 [M+H] +.
Os compostos dos Exemplos 5-13 podem ser preparados essencialmente como descrito no Exemplo 4 usando a 3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina e aldeído apropriados .
Ex Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 5 My O OQ* ^ HC, Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-m-tolil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 64 363 6 fVOC<· i.J «Cl F Cloridrato de 3'-(3-fluoro-fenil)-4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 51 381 7 fV-OOO· mg, t? T F Cloridrato de 4-[1-(4-fluoro-fenil)-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil]-3'-(4-metoxi-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 35 459 8 OjV» HCI 1 Cloridrato de 4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)—3'—(4— metoxi-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 24 379 9 rY°"3^· NvO HCI Cloridrato de 3'-(2-fluoro-fenil)-4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 57 381 ΡΕ2155717 106 (continuação)
Ex Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 10 .N / ν' N jQ HCI Cloridrato de 4-(l-etil-5-me-til-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(2-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 35 381 11 HCI rVOÇc> po d ^ F Cloridrato de 3'-(2-fluoro-fe-nil)-4-[1-(4-fluoro-fenil)-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 41 447 12 CO IXo HC| Cloridrato de 1—{4—[4—(1,3— dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanona 58 391 13 HCI . _ ί'^'^Γ.Ν Cloridrato de 4-(1-etil-lH-pirazol-4-ilmetil)—3'—(4— metoxi-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 60 379
Exemplo 14; Cloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-4-[2-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-il)-etil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Combinar (1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-il)-acetal-deído (0,35 g, 2,27 mmol) e 3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,71 g, 2,76 mmol) em 107 ΡΕ2155717 DCM (10 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 10 min. Adicionar ácido acético glacial (0,21 mL, 3,44 mmol) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,73 g, 3,44 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 2 h. Concentrar, dissolver em metanol (5 mL) e carregar numa coluna SCX de 10 g. Lavar com metanol (2 x 50 mL) . Eluir com amoníaco 2 M em metanol (2 x 30 mL) . Concentrar o eluente e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com hexanos:DCM:etanol 45:45:10), para dar a base livre do composto em epígrafe (48 mg, 5%). Dissolver a base livre (0,041 g, 0,104 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (0,006 g, 0,104 mmol) num volume mínimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (50 mg, 95%). MS (ES)j_ m/z = 395 [M+H] + .
Exemplo 15: Cloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-4-[3-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-il)-propil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver 3' -(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,300 g, 1,16 mmol) em DCE (15 mL) . Adicionar 3-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-il)-propionaldeído (0,232 g, 1,39 mmol), e agitar à temperatura ambiente ao longo de 10 min. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio 108 ΡΕ2155717 (0,369 g, 1,74 iranol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Purificar através de cromatograf ia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica, eluindo com DCM:hexanos:etanol 45:45:10, para dar a base livre do composto em epigrafe (368 mg, 78%). Dissolver a base livre (0,362 g, 0,888 mmol) em metanol e adicionar a solução de cloreto de amónio (0,047 g, 0,888 mmol) num volume minimo de metanol. Chocalhar durante 3 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epigrafe (395 mg, 100%). MS (ES)j_ m/z = 409 [M+H] + .
Os compostos de base livre dos Exemplos 16-41 podem ser preparados essencialmente como descrito no Exemplo 15 usando o 3'-fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo e aldeido apropriados. O sal de HC1 de cada um pode ser preparado quer pelo método descrito no Exemplo 5, quer através de agitação da base livre com uma quantidade equimolar de HCl 2 M/éter dietilico em IPA e éter dietilico, seguida de precipitação do sal de HCl.
ΡΕ2155717 109 (continuação) EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] + 18 HCI l Cloridrato de 4-(5-cloro-3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 89 463 19 HCI Cloridrato de 4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofe-nil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 89 429 20 HCI j rrr* *a> Cloridrato de 4-(l-etil-3-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofe-nil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 89 381 21 N iXHCI Cloridrato de 4-(5-Cloro-l,3-dime-til-lH-pirazol-4-ilmetil)—3'—(4— fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 91 401 22 cf3 ΛΤΑ nXM Cloridrato de 4-(l,5-dimetil-3-tri-fluorometil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 61 435 23 ,N CTX" -xc Cloridrato de 4-(1-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-trifluorome-tilfenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 40 403 24 fVcn6 αχ;;' Cloridrato de 4-(1,3-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'-(4-trifluorome-tilfenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 41 417 25 íVcnó· OX” Cloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-4-(3-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 100 353 ΡΕ2155717 110 (continuação) EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] + 26 HCI i Oo. b Cloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 94 429 27 r 1νΛ0.0 hci Cloridrato de 4-(1,3-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'-(4-trifluoro-metoxifenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 88 433 28 HCI / Cloridrato de 4-(l-t-butil-3,5-di-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 84 423 29 •Ç1^ hc, '-y s Cloridrato de 4-[1-(3,5-dimetiliso-xazol-4-ilmetil)-lH-pirazol-4-ilmetil]-3'-(4-fluorofenil)-3, 4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 72 448 30 Cloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-4-[1-(2-metiltiazol-4-ilmetil)-1H-pirazol-4-ilmetil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 40 450 31 p O HC, KX Cloridrato de 3'-(2-fluorofenil)-4-(l-metil-lH-pirazole-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] bipirazina 44 353 32 N. 'tTq" Kl Cloridrato de 4-(1-etil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(2-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']— bipirazina 27 367 33 /=\ N N HC' o o Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'-(2-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']— bipirazina 48 367 ΡΕ2155717 111 (continuação) EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] + 34 ΓίΥ, •dx ^ 4-(l-Ciclopropilmetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 50 393 35 4-(l-Ciclopropil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 7 379 36 Ι^'ϊ'ν,Ν 4-(l-Etil-3-metil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(2-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 36 381 37 $ F F 3'-(4-Fluoro-fenil)-4-[1-(4-fluoro-fenil) -5-metil-lH-pirazol-4-ilme-til]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 93 447 38 ΟΎ.ν (-ix t? F F 3'-(4-Fluoro-fenil)-4-[1-(4-fluoro-fenil) -lH-pirazol-4-ilmetil]-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 89 433 39 rrr» N^J % ^o, 1 3'-(4-Fluoro-fenil)-4-[1-(2-metoxi-etil)-lH-pirazol-4-ilmetil]-3,4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 45 397 40 rm <=£. \ 3'-(4-Fluoro-fenil)-4-(1-metoxime-til-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 44 383 41 rpt> *-Ν 3'-Fenil-4-(lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 78 321
Exemplo 42 : Cloridrato de 3'-(3,4-dicloro-fenil)-4-(3,5-dimetil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 112 ΡΕ2155717
Combinar 3'-(3,4-dicloro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,0590 g, 0,191 mmol) e 3,5-dimetil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,0592 gm, 0,300 mmol) em DCE (5 mL) , agitar 10 min, e adicionar triace-toxiboro-hidreto de sódio (0,838 gm, 0,400 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 44 h e purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica, eluindo com 0-50% THF em hexanos para dar a base livre do composto em epígrafe (0,017 gm, 18%). Converter a base livre no sal cloridrato através da adição de 0,17 mL de uma solução de cloreto de amónio 0,2 M em metanol para dar o composto em epígrafe (0,017 gm) . MS (ES + ) m/zj_ 494 [M+H]+.
Exemplo 43: Cloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-4-[2-(1,3,5-trietil-lH-pirazol-4-il)-etil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Combinar (1,3,5-trietil-lH-pirazol-4-il)-acetal-deído (0,16 g, 0,82 mmol) e 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,24 g, 0,91 mmol) em 113 ΡΕ2155717 DCM (10 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 15 min. Depois adicionar ácido acético glacial (0,07 mL, 1,23 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,26 g, 1,23 mmol) e agitar durante 3 h à temperatura ambiente. Purificar usando cromatografia SCX e purificar adicionalmente usando cromatografia de gel de silica (amoníaco 7 M em metanol a 5%/DCM). Dissolver a base livre em metanol (5 mL) e tratar com cloreto de amónio (0,037 g). Concentrar a solução resultante para dar o composto em epígrafe (0,032 g, 83%). MSj_ m/z = 437,3 [M+H] + .
Exemplo 44: Cloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-4-[2-(3-iso-butil-5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-etil]-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Combinar (3-isobutil-5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-acetaldeído (0,21 g, 0,82 mmol), 3' — (4 — fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,21 g, 0,82 mmol) em DCM (10 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 15 min. Adicionar ácido acético glacial (0,07 mL, 1,23 mmol) depois triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,26 g, 1,23 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20 h. Concentrar, depois purificar usando cromatografia SCX e purificar adicionalmente usando 114 ΡΕ2155717 cromatografia de gel de sílica, eluindo com amoníaco em metanol 7 M a 5%:DCM. Dissolver a base livre em metanol (5 mL) e tratar com cloreto de amónio (0,022 g). Concentrar a solução resultante para dar o composto em epígrafe como um pó branco (0,22 g, 50%) . MSj_ m/z = 500,3 [M+H] + .
Exemplo 45: Dicloridrato de 3 ' - (4-fluorofenil)-4-(1-metil-3-trifluorometil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
F
Combinar l-metil-3-trifluorometil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,17 g, 0,97 mmol) e dicloridrato de 3' — (4 — fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,35 g, 1,06 mmol) em DCM (20 mL) e tratar com trietilamina (0,30 mL, 2,12 mmol). Depois de agitar durante 15 min, adicionar ácido acético glacial (0,08 mL, 1,46 mmol) depois triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,31 g, 1,46 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Concentrar e purificar usando cromatografia SCX e purificar adicionalmente usando cromatografia de gel de sílica (amoníaco em metanol 7 M a 5%/DCM). Dissolver a base livre em metanol (5 mL) e tratar com cloreto de amónio (0,107 g). Concentrar a solução resultante para dar o composto em epígrafe (0,39 g, 81%). MS: m/z = 421,3 [M+H]+. 115 ΡΕ2155717
Exemplo 46: Cloridrato de 2-{4-[3'-(4-fluoro-fenil)-2,3, 5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-etanol
Dissolver 3'- (4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,320 g, 1,24 mmol) em DCE (5 mL) . Adicionar 1-(2-hidroxi-etil)-lH-pirazole-4-carbaldeido (0,243 g, 1,73 inmol) , e agitar à temperatura ambiente. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,394 g, 1,86 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 20:80 depois 0:100 depois metanol:acetato de etilo 5:95 depois metanol:acetato de etilo 10:90, para dar a base livre do composto em epigrafe (296 mg, 62%) . Dissolver a base livre (0,290 g, 0,760 mmol) em acetonitrilo e adicionar solução aquosa de HC1 1 N (913 yL, 0,913 mmol) e chocalhar à temperatura ambiente ao longo de 30 min. Congelar e liofilizar para dar o composto em epigrafe (315 mg, 99%). MS (ES)^m/z = 383 [M+H]+.
Exemplo 47: Cloridrato de 4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 116 ΡΕ2155717
Dissolver 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,183 g, 0,708 mmol) em DCE (8,5 mL). Adicionar l-etil-5-metil-lH-pirazole-4-carbaldeido (0,117 g, 0,850 mmol) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,225 g, 1,06 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 50:50 depois 0:100 depois metanol:acetato de etilo 10:90, seguida de cromatografia de fase reversa para dar a base livre do composto em epígrafe (149 mg, 55%). Dissolver a base livre (0,138 g, 0,363 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (0,019 g, 0,363 mmol) num volume mínimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (149 mg, 99%) . MS (ES)j_ m/z = 381 [M+H] +.
Exemplo 48: Cloridrato de 3'-(4-fluoro-fenil)-4-[1-(2,2,2-trifluoro-etil)-lH-pirazol-4-ilmetil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver 3 ' - (4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi- 117 ΡΕ2155717 dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,150 g, 0,581 mmol) em DCE (5 mL) . Adicionar 1-(2,2,2-trifluoro-etil)-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,124 g, 0,697 mmol) seguido de triacetoxi-boro-hidreto de sódio (0,185 g, 0,872 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Adicionar 1— (2,2,2 — trifluoro-etil)-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,062 g, 0,349 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 2 h. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,092 g, 0,436 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 72 h. Purificar através de cromatografia SCX. Adicionar iso-cianato ligado a resina (0,796 g, 1,16 mmol) e DCM (8 mL) e chocalhar à temperatura ambiente ao longo de 4 h. Filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 100:0 a 0:100, depois metanol:acetato de etilo 10:90) para dar a base livre do composto em epígrafe (103 mg, 42%). Dissolver a base livre (0,099 g, 0,237 mmol) em metanol e adicionar a solução de cloreto de amónio (0,013 g, 0,237 mmol) num volume mínimo de metanol. Agitar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (108 mg, 100%). MS (ES): m/z = 421 [M+H]+.
Exemplo 49: Cloridrato de 2-{4-[3'-(2-fluoro-fenil)-2,3, 5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-etanol í* ΟΎ.ν
«O 118 ΡΕ2155717
Dissolver 3'- (2-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[ 1,2 ' ] bipirazinilo (0,213 g, 0,825 inmol) em DCE (5 mL). Adicionar 1-(2-hidroxi-etil)-lH-pirazole-4-carbaldeido (0,137 g, 0, 990 inmol) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,262 g, 1,24 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Adicionar mais 1-(2-hidroxi-etil)-1H-pirazole-4-carbaldeido (0,093 g, 0,663 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Purificar através de cromatografia SCX seguida de cromatografia de gel de silica, (eluindo com hexanos:acetato de etilo 100:0 a 0:100, depois metanol:acetato de etilo 10:90), para dar a base livre do composto em epigrafe (116 mg, 37%). Dissolver a base livre (0,114 g, 0,298 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (0,016 g, 0,298 mmol) num volume minimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epigrafe (125 mg, 100%) . MS (ES)j_ m/z = 383 [M+H] + .
Exemplo 50: Cloridrato de 3-{4-[3'-(4-fluoro-fenil)-2,3, 5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-propan-l-ol
Dissolver 3'- (4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,150 g, 0,581 mmol) em DCE (5 mL). Adicionar 1-(3-hidroxi-propil)-lH-pirazole-4-car-baldeído (0,107 g, 0,697 mmol) seguido de triacetoxiboro- 119 ΡΕ2155717 hidreto de sódio (0,185 g, 0,872 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de sílica (hexanos:acetato de etilo 0:100 depois metanol: acetato de etilo 10:90), seguida de cromatografia de fase reversa, cromatograf ia SCX e cromatograf ia de gel de sílica (hexanos:acetato de etilo 100:0 a 0:100 depois metanol:acetato de etilo 10:90 até metanol:acetato de etilo 20:80), para dar a base livre do composto em epígrafe (103 mg, 45%). Dissolver a base livre (0,099 g, 0,251 mmol) em metanol e adicionar a solução de cloreto de amónio (0,013 g, 0,251 mmol) num volume mínimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (105 mg, 97%) . MS (ES)_^_ m/z = 397 [M+H]+.
Exemplo 51: 4-[1-(1,2-Dimetil-lH-imidazole-4-sulfonil)-1H- pirazol-4-ilmetil]-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Utilizar o método do Exemplo 50, usando 1-(1,2-dimetil-lH-imidazole-4-sulfonil)-lH-pirazole-4-carbaldeído para preparar o composto em epígrafe (100 mg, 35%) . MS (ES): m/z =497 [M+H]+. 120 ΡΕ2155717
Exemplo 52 : Cloridrato de 3'-(4-fluoro-fenil)-4-[1-(1-me-til-lH-imidazol-4-il)-lH-pirazol-4-ilmetil]-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo
Dissolver 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,053 g, 0,204 mmol) em DCE (2,1 mL) . Adicionar 1-(l-metil-lH-imidazol-4-il)-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,036 g, 0,204 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 1 h. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,065 g, 0,306 mmol) e ácido acético (19 pL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 72 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica (hexanos:acetato de etilo 50:50 a 0:100 depois metanol:acetato de etilo 10:90 a 20:80) para dar a base livre do composto em epigrafe (61 mg, 71%).
Dissolver a base livre (0,059 g, 0,141 mmol) em acetonitrilo (169 pL) , adicionar solução aquosa HC1 1 N (169 pL, 0,169 mmol), e chocalhar durante 15 min. à temperatura ambiente. Secar por congelação para dar o composto em epigrafe (64 mg, 100%). MS (ES)j_ m/z = 419 [M+H]+.
Exemplos 53 e 54: Cloridrato de 1-{4-[3(4-fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-1-il}-propan-2-ol, Isómero 1 e 2 respetivamente 121 ΡΕ2155717
Dissolver 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,160 g, 0,619 mmol) em DCE (5 mL). Adicionar 1-(2-hidroxi-propil)-lH-pirazole-4-car-baldeido racémico (0,175 g, 1,14 mmol) seguido de tri-acetoxiboro-hidreto de sódio (0,262 g, 1,24 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 72 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 100:0 a 0:100 depois metanol:acetato de etilo 10:90, para dar a mistura racémica das bases livres dos compostos em epígrafe (223 mg, 91%) .
Purificar quiralmente as bases livres racémicas em epígrafe numa coluna Chiralpak AD-H de 4,6 x 150 mm com eluente 100% de 3A + 0,2% de DMEA (fluxo de 0,6 mL/min) . Separadamente dissolver cada base livre (Isómero lj_ 0,080 g, 0,202 mmol, Isómero 2j_ 0,010 g, 0,187 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (equimolar em cada caso) num volume mínimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar os compostos em epígrafe. (Isómero lj_ 85 mg, 98% MS (ES)j_ m/z = 397 [M+H]+, Rt=6,00; Isómero 2\_ (81 mg, 100%). MS (ES)j_ m/z = 397 [M+H] +, Rt=-12,00.) 122 ΡΕ2155717
Exemplos 55 e 56: Cloridrato de 1,1,1-trifluoro-3-{4-[3'-(4 — fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-propan-2-ol, Isómeros 1 e 2 respetivamente
Dissolver 3'-(4 — fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,143 g, 0,554 mmol) em DCE (5 mL) . Adicionar 1-(3,3,3-trifluoro-2-hidroxi-propil)-lH-pi-razole-4-carbaldeído racémico (0,236 g, 1,13 mmol) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,235 g, 1,11 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica (eluindo com hexanos:acetato de etilo 100:0 a 0:100 depois metanol:acetato de etilo 3:97), para dar uma mistura racémica das bases livres dos compostos racémicos em epígrafe (166 mg, 67%).
Purificar quiralmente as bases livres numa coluna Chiralpak AD-H de 4,6 x 150 mm com eluente 100% de 3A + 0,2% de DMEA (fluxo de 0,6 mL/min). Dissolver separadamente cada base livre (Isómero lj_ 0,064 g, 0,142 mmol; Isómero 2j_ 0,060 g, 0,133 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (equimolar) num volume mínimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe. (Isómero lj_ 69 mg, 100%, MS (ES)j_ m/z = 451 [M+H]+, Rt=4,00; Isómero 2j_ 65 mg, 100%, MS (ES) : m/z = 451 [M+H]+, Rt=-10,00). 123 ΡΕ2155717
Exemplo 57 : Cloridrato de 3'-(4 — fluoro-fenil)-4-(2-metil-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2’]— bipirazina
HCI
Dissolver 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,151 g, 0,585 mmol) em DCE (5 mL). Adicionar 5-metil-l-(2-metilfenil)-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,140 g, 0,702 mmol) seguido de triacetoxi-boro-hidreto de sódio (0,186 g, 0,878 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 72 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica (eluindo com hexanos:acetato de etilo 100:0 a 0:100 depois metanol:acetato de etilo 10:90), para dar a base livre do composto em epígrafe (222 mg, 86%) . Dissolver a base livre (0,217 g, 0,490 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (0,026 g, 0,490 mmol) num volume mínimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (235 mg, 100%). MS (ES)j_ m/z = 443 [M+H] + .
Exemplo 58: Cloridrato de 4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
124 ΡΕ2155717
Dissolver 3'-(4-Fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,183 g, 0,708 mmol) em DCE (8,5 mL). Adicionar l-etil-5-metil-lH-pirazole-4-carbaldei-do (0,117 g, 0,850 mmol) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,225 g, 1,06 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica (eluindo com hexanos:acetato de etilo 50:50 depois 0:100 depois metanol: acetato de etilo 10:90), seguida de cromatografia de fase reversa para dar a base livre do composto em epigrafe (149 mg, 55%). Dissolver a base livre (0,138 g, 0,363 mmol) em metanol e adicionar a solução de cloreto de amónio (0,019 g, 0,363 mmol) num volume minimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar Cloridrato de 4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi-nilo (149 mg, 99%). MS (ES)j_ m/z = 381 [M+H] + .
Exemplo 59: Cloridrato de 4-(l-ciclopropil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-(1,2'Jbipirazinilo
Dissolver 3'-(4-Fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,157 g, 0,608 mmol) em DCE (5 mL). Adicionar l-ciclopropil-lH-pirazole-4-carbaldeído 125 ΡΕ2155717 (0,354 g, 2,60 mmol) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,193 g, 0,912 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Purificar através de cromatografia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica (eluindo com hexanos:acetato de etilo 100:0 a 0:100 depois metanol: acetato de etilo 10:90), para dar a base livre do composto em epígrafe (16 mg, 7%). Dissolver esta base livre (0,014 g, 0,038 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (0,002 g, 0,038 mmol) num volume mínimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (15 mg, 100%). MS (ES)j_ m/z = 379 [M+H] + .
Exemplo 60: Cloridrato de 1-{4-[4-(5-metil-l-fenil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenilo}-etanona
Dissolver 1- [4 - (3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bi-pirazinil-3'-il)-fenil]-etanona (0,250 g, 0,885 mmol) em 1,2 dicloroetano (4 mL). Adicionar 5-metil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (1,5 eq., 0,250 g, 1,33 mmol). Agitar durante 30 min. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,0 eq., 0,375 g, 1,77 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 48 h. Purificar através de coluna SCX seguida de cromatografia de fase normal com um gradiente de EtOAc a 100% até amoníaco 7 N em metanol a 5%/EtOAc para 126 ΡΕ2155717 dar a base livre do composto em epígrafe, (0,312 g, rendimento de 78%). MS(ES)j_ m/z = 453,2 [M+H] . Dissolver numa mistura de acetonitrilo (2 mL) e água (3 mL). Adicionar HC1 1 N aquoso (1 eq., 0,69 mmol, 0,69 mL). Congelar a solução até aos -78°C num banho de gelo-seco/acetona. Colocar a solução no liofilizador durante 48 h para dar o composto em epígrafe (0,268 g, rendimento de 80%). MS(ES)j_ m/z = 453,2 [M+H]+.
Exemplo 61: Cloridrato de 1-{4-[4-(5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-fenil}-etanona
Dissolver 1—[4—(3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bi— pirazinil-3'-il)-fenil]-etanona (0,200 g, 0,710 mmol) em 1,2 dicloroetano (4 mL) . Adicionar 5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazole-4-carbaldeído (1,5 eq., 0,200 g, 1,07 mmol). Agitar durante 30 min. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,0 eq., 0,300 g, 1,42 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 48 h. Purificar através de coluna SCX seguida de cromatografia de fase normal com um gradiente de EtOAc 100% até NH3 7 N em metanol a 5%/EtOAc para dar a base livre do composto em epígrafe (0,273 g, rendimento de 85%). MS(ES)j_ m/z = 454,2[M+H] + . Dissolver esta base livre (0,273 g, 0,60 mmol) numa mistura de acetonitrilo (2 mL) e 127 ΡΕ2155717 água (3 mL) . Adicionar HC1 1 N aquoso (1 eq., 0,60 mmol, 0,60 mL) . Congelar uma solução até aos -78°C num banho de gelo-seco/acetona. Colocar a solução no liofilizador por 48 h para dar o composto em epígrafe (0,295 g, rendimento de 100%). MS(ES): m/z = 454,2 [M+H]+.
Exemplo 62: Cloridrato de 1-{4-[4-(3-metil-l-fenil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanona
Dissolver 1— [4— (3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bi — pirazinil-3'-il)-fenil]-etanona (0,5 g, 1,77 mmol) em 1,2 dicloroetano (4 mL). Adicionar 3-metil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (1,5 eq., 0,495 g, 2,66 mmol). Agitar durante 30 min. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,0 eq., 0,75 g, 3,54 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 48 h. Purificar através de coluna SCX seguida de cromatografia de fase normal com um gradiente de EtOAc a 100%-NH3 7 N em metanol a 5%/EtOAc para dar a base livre do composto em epígrafe (0,15 g, rendimento de 18%). MS (ES)j_ m/z = 453,2 [M+H]+. Dissolver (0,15 g, 0,33 mmol) numa mistura de acetonitrilo (2 mL) e água (3 mL). Adicionar HC1 aq. 1 N (1 eq., 0,33 mmol, 0,33 mL). Congelar a solução até aos -78°C num banho de gelo-seco/acetona. Colocar a solução no liofilizador durante 48 h para dar o composto em 128 ΡΕ2155717 epígrafe (0,156 g, 97% de rendimento) . MS (ES)j_ m/z = 453,2 [M+H]+.
Exemplo 63; Cloridrato de 3'-(4 — fluoro-fenil)-4-[1-(4-meto-xi-fenil)-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil]-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazina
Utilizar os métodos do Exemplo 55 usando 5-metil-1-(4-metoxifenil)-lH-pirazole-4-carbaldeído para preparar o composto em epígrafe (240 mg, 91%) . MS (ES)j_ m/z = 459 [M+H]+.
Exemplo 64: Cloridrato de 3(4-clorofenil)-4-(3,5-dimetil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Acoplar 3'- (4-clorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (0,103 g, 0,400 mmol) e 3,5-dimetil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,083 g, 0,679 mmol) na presença de ácido acético (0,035 mL, 0,61 mmol) e tri-acetoxiboro-hidreto de sódio (0,105 g, 0,491 mmol) em DCE 129 ΡΕ2155717 (5 mL) durante 44 h. Purificar através de cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol: DCM 0:100 a 10:90. Dissolver a base livre em metanol e adicionar cloreto de amónio (6,0 mg, 0,2 mmol). Agitar de um dia para o outro, concentrar sob pressão reduzida, adicionar éter dietilico e agitar de um dia para o outro. Isolar o produto sólido através de filtração e secagem sob vácuo de um dia para o outro para dar o composto em epigrafe (0,0637 g, 46%). MS (ES)j_ m/z = 460 [M+H] + .
Exemplo 65: Cloridrato de 3(4-metoxifenil)-4-(1,3,5-tri-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']— bipirazina
Acoplar 3'-(4-metoxifenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,103 g, 0,400 mmol) e 1,3,5-trime-til-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,0727 g, 0,526 mmol) usando triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,167 g, 0,788 mmol) em DCE (5 mL). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h, e adicionar a mistura de reação a uma coluna SCX. Eluir com amoniaco 2 M em metanol. Purificar através de cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 20:80. Dissolver o residuo em metanol e adicionar cloreto de amónio (1,3 mL de uma solução 0,2 M de cloreto de amónio em metanol, 0,26 mmol). Agitar de um dia para o outro, 130 ΡΕ2155717 concentrar, adicionar éter dietilico e agitar de um dia para o outro. Isolar o produto sólido através de filtração e secar sob vácuo de um dia para o outro para dar o composto em epígrafe (100 mg, 58%). MS (ES)j_ m/z = 393 [M+H]+.
Exemplo 66: Succinato de 3'- (4-etoxifenil)-4-(1,3,5-tri-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']— bipirazina
k
COOH
Acoplar (4-etoxifenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (0,745 g, 2,50 mmol) e 3,5-dimetil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,368 g, 2,66 mmol) em DCE (42 mL) usando triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,820 g, 3,87 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 43 h, adicionar hidróxido de sódio 1 N (20 mL) , e extrair com DCM. Purificar através de cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 7:93, para dar a base livre (0,839 g, 83%). Dissolver a porção da base livre (0,160 g, 0,39 mmol) em metanol (5 mL), adicionar ácido succínico (0,0459 g, 0,39 mmol) e agitar de um dia para o outro. Concentrar, dissolver o resíduo em metanol (1 mL) , adicionar acetato de etilo, concentrar até um volume de cerca de 1-2 mL e arrefecer até aos -25°C de um dia para o outro. Isolar o produto sólido por filtração, lavar com éter dietilico 131 ΡΕ2155717 frio, e secar sob vácuo de um dia para o outro para dar o composto em epigrafe (0,111 g, 54%). MS (ES)j_ m/z = 407 [M+H] +.
Exemplo 67 : Succinato de 3'-(4-isopropoxifenil)-4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
o A.
Combinar (4-isopropoxifenil)-3,4,5,6-tetra-hidro- 2H-[1,2']bipirazinilo (0,158 g, 0,557 mmol) e 1,3,5-trimetil-l-lH-pirazole-4-carbaldeido (0,0853 g, 0,617 mmol) em DCE (12 mL), e adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,239 g, 1,13 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 24 h e adicionar diretamente a um cartuxo SCX (pré-lavar a coluna com metanol, depois DCM), e eluir com amoniaco 2 M em metanol e concentrar. Purificar através de cromatografia de gel de silica, eluindo com tetra-hidro-furano:hexanos 0:100 a 1:1, para dar a base livre (0,158 g, 68%) . GC-MSj_ m/z= 421 [M+H] + . Preparar o sal essencialmente como descrito para Succinato de 3'- (4-etoxifenil)-4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2'] bipirazinilo (0, 0700 g, 23%). GC-MSj_ m/z = 421 [M+H]+. 132 ΡΕ2155717
Exemplo 68: Cloridrato de 4-(l,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(2-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipi-razinilo
Carregar um tubo de reação com 3'- (2-fluoro-fe-nil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (595 pmoles; 154 mg) em 3,5 mL de MeOH seco, seguido de 10 mL de uma solução a 10% de anidrido trimetilacético (TMAA) em dioxano, e 1,3-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (396 ymoles; 50 mg) . À mistura de reação, adicionar cianoboro-hidreto ligado a silica (1200 ymoles; 1000 mg), selar a suspensão e agitar a temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrar o material bruto, lavar com MeOH, e evaporar até à secura. Dissolver o residuo em 50 mL de DCM, tratar com água, salmoura, e evaporar as camadas orgânicas combinadas para dar um óleo amarelo pálido. Disolver o material bruto em DCM e verter numa coluna SCX pré-lavada com 10 mL de MeOH. Lavar o material com 10 mL de MeOH, e libertar o produto com 2 0 mL de uma solução NH3 2 N/MeOH. Evaporar para dar um pó branco. Submeter o material bruto a purificação de fase reversa (CH3CN isocrático a 22%/NH4HC03 0,01 M em água, 80 mL/min, durante 8 min, numa coluna C18 Xterra de 30 x 75 mm,) para proporcionar a base livre como um sólido branco (0,088 g, 40% de rendimento, MS ES + (m/z) 367 [M+H]+). Converter o material purificado no sal clori- 133 ΡΕ2155717 drato por dissolução em CH3CN à temperatura ambiente e adição de 1 eq. de HC1 1 N em água. Depois de 5 min, liofilizar a solução para dar o composto em epigrafe como um sólido branco num rendimento quantitativo, MS ES + (m/z) 367 [M+H] +) .
Exemplo 69: Cloridrato de 3'- (2-fluoro-3-trifluorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3, 4,5, 6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazina
Dissolver 3'-(2-fluoro-3-trifluorometil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinilo (0,0910 g, 0,279 mmol) e 1,5-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeido (0,0591 g, 0,476 mmol) em DCE (10 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 10 min. Adicionar esta mistura a uma suspensão de cianoboro-hidreto de sódio ligado a polistireno (Biotage-Argonaut; carga de 2,3 mmol/gm; 0,29 g, 0,67 mmol) seguido de ácido acético (0,5 mL). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Purificar através de cromato-grafia SCX, seguida de cromatografia de gel de silica (eluindo com metanol :DCM 0:100 a 10:90), para dar a base livre (120 mg, 99%). Dissolver a base livre (0,119 g, 0,274 mmol) em acetonitrilo (6 mL), adicionar 0,30 mL de HC1 1 M (aq), e liofilizar para dar o composto em epigrafe (127 mg, 100%). MS (ES): m/z = 435 [M+H]+. 134 ΡΕ2155717
Exemplo 70: Succinato de 3'-(4 — fluoro-3-trifluorometil-fenil) -4- (1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmet.il) -3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Utilizar os métodos do Exemplo 69 usando 3' — (4 — fluoro-3-trifluorometil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']-bipirazinilo para obter o composto em epigrafe (rendimento global de 54%) . MS (ES)j_ m/z = 327 [M+H]+.
Exemplo 71: Cloridrato de 1-[2-(4-fluorofenil)-piridin-3-il]-4- (lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina
Dissolver 1- [2- (4 — fluoro-fenil)-piridin-3-il]-pi-perazina (0,140 g, 0,54 mmol) em DCE (5 mL). Adicionar 1H-pirazole-4-carbaldeído (0,106 g, 1,10 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20-30 min. Adicionar triace-toxiboro-hidreto de sódio (0,233 g, 1,10 mmol) seguido de ácido acético (0,049 g, 0,81 mmol). Agitar a mistura de reação à temperatura ambiente ao longo de 48 h. Verificar a mistura de reação por LC-MS. Adicionar DMSO (3 mL) como um 135 ΡΕ2155717 co-solvente. Agitar à temperatura ambiente ao longo de 72 h. Purificar através de cartuxo SCX, seguido de croma-tografia de fase reversa e cromatografia de fase normal (eluir com um gradiente de 20:80 a 0:100 de NH3 7 N em metanol a 5%/EtOAc:EtOAc) para obter a base livre (0,099 g, 54%). Dissolver a base livre (0,099 g, 0,293 mmol) em metanol (5 mL). Adicionar cloreto de amónio (0,016 g, 0,293 mmol, 1 eq.) . Agitar a mistura de reação à temperatura ambiente ao longo de 2 h e concentrar para dar o composto em epigrafe (0,103 g, 94%) . MS (ES)j_ m/z = 338 [M+H] + .
Exemplo 72: Cloridrato de 1-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-4-[2-(4-fluorofenil)-piridin-3-il]-piperazina
Dissolver 1-[2-(4-fluoro-fenil)-piridin-3-il]-piperazina (0,140 g, 0,54 mmol) em DCE (5 mL). Adicionar 1,3-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,137 g, 1,10 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20-30 min. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,233 g, 1,10 mmol) seguido de ácido acético (0,049 g, 0,81 mmol). Agitar a mistura de reação à temperatura ambiente ao longo de 48 h. Purificar através de cartuxo SCX, seguido de cromato-grafia de fase reversa para obter a base livre (0,103 g, 52%) . Dissolver a base livre em metanol (5 mL) . Adicionar 136 ΡΕ2155717 cloreto de amónio (0,015 g, 0,282 mmol, 1 eq.) . Agitar a mistura de reação à temperatura ambiente ao longo de 2 h e concentrar para dar o composto em epígrafe (0,100 g, 88%). MS (ES): m/z = 366 [M+H]+.
Exemplo 73: Cloridrato de 1-(l-etil-lH-pirazol-4-ilmetil)-4- [2- (4-fluorofenil)-piridin-3-il]-piperazina
HCI
Preparado de acordo com os métodos do Exemplo 72 usando l-etil-lH-pirazole-4-carbaldeído (51%). MS (ES)j_ m/z = 366 [M+H]\
Exemplo 74: Cloridrato de 1-[2-(4-fluoro-fenil)-piridin-3-il]-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina
Dissolver 1-[2- (4-fluoro-fenil)-piridin-3-il]-pi-perazina (0,150 g, 0,63 mmol) em DCE (5 mL) . Adicionar 1-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,139 g, 1,26 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20-30 min. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,267 g, 1,26 mmol) seguido de ácido acético (0,040 g, 0,66 mmol). Agitar 137 ΡΕ2155717 a mistura de reação à temperatura ambiente ao longo de 14 h. Partilhar a mistura de reação bruta entre DCM e NaHCCb sat. aquoso. Secar a camada orgânica sobre de Na2SC>4 anidro, filtrar e concentrar. Purificar através de cromato-grafia de fase normal (eluir com um gradiente de 100:0 a 80:20 de EtOAc:NH3 7 N em CH3OH) para obter a base livre (0,157 g, 71%). Dissolver a base livre em metanol (5 mL). Adicionar cloreto de amónio (0,024 g, 0,450 mmol, 1 eq.). Agitar a mistura de reação à temperatura ambiente ao longo de 2 h e concentrar para dar o composto em epígrafe (0,150 g, 86%). MS (ES)j_ m/z = 352 [M+H] + .
Exemplos 75-81 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 74 usando o pirazole-4-carbaldeído apropriado. EX Estrutura Conposto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] + 75 O r>· [Çv"— c|An HCI Cloridrato de 1-(5-cloro-l,3-dime-til-lH-pirazol-4-ilmetil)-4-[2-(4-fluorofenil)-piridin-3-il]-piperazina 91 400 76 HCI ívCOQ "Xl O Cloridrato de 1-[2-(4-fluorofenil)-piridin-3-il]-4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 74 428 77 HCI rjyyr °τχ 8 h F Cloridrato de 1-[1-(4-fluorofenil)-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil]-4-[2-(4-fluorofenil)-piridin-3-il]-piperazina 100 446 78 N]íX HCI Cloridrato de 1- [2-(4-fluoro-fenil) -piridin-3-il]-4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 81 380 138 ΡΕ2155717
Exemplo 79: Cloridrato de 1-[1-(4 — fluoro-fenil)-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil]-4-[2-(2 — fluorofenil)-piridin-3-il]-pipe- razina
Preparar o composto em epígrafe usando métodos similares ao Exemplo 4 usando 2-(2 — fluorofenil)-3-pipera-zinilpiridina e 1-(4 — fluorofenil)-5-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído. Rendimento de 52%, MS (ES) m/z = 446 [M+H].
Exemplo 80: Cloridrato de 1-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-4-[2-(4 — fluoro-fenil)-piridin-3-il]-piperazina
Preparar o composto em epígrafe usando métodos similares ao Exemplo 4 usando 2- (4 — fluorofenil)-3-pipe-razinilpiridina e 1,5-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído. Rendimento de 92%, MS (ES) m/z = 336 [M+H].
Exemplo 81: Cloridrato de 2-(4-{4-[2-(2-Fluoro-fenil)-piri-din-3-il]-piperazin-l-ilmetil}-pirazol-l-il)-etanol
139 ΡΕ2155717
Preparar o composto em epígrafe usando métodos similares ao Exemplo 72 usando 1-[2-(2 — fluoro-fenil)-piri-din-3-il]-piperazina e 1-(2-hidroxietil)-lH-pirazole-4-car-baldeído. Rendimento de 86%, MS (ES) m/z = 382 [M+H].
Exemplo 82: Dicloridrato de 4-(l-benzil-3,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'- (4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
N N
Dissolver 3'- (4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (1,834 g, 7,10 mmol) em dicloroetano (85 mL) e adicionar l-benzil-3,5-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (1,521 g, 7,10 mmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,257 g, 10,7 mmol) e ácido acético (0,60 mL). Agitar a mistura ao longo de 18 h depois diluir com acetato de etilo e lavar com bicarbonato de sódio aquoso saturado e cloreto de sódio aquoso saturado. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo) para dar a base livre como um vidro amarelo (1,83 g, 56%). Dissolver a base livre em metanol, adicionar cloreto de amónio e sonicar a mistura durante 10 min. Concentrar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo. MS (ES)j_ m/z = 457 [M+H] + . 140 ΡΕ2155717
Os compostos dos Exemplos 83-109 podem ser preparados essencialmente como descrito no Exemplo 82 usando a fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazina ou fe-nil-piridin-2-il-piperazina e pirazole-4-carbaldeído apropriados. O rendimento calculado é baseado na base livre. Os dados de espectroscopia de massa baseiam-se no composto final como o sal mono ou dicloridrato. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS(ES) [M+H] 83 I 1 HCI Cloridrato de 1-(3,5-dimetil-l-fe-nil-lH-pirazol-4-ilmetil)-4-[3-(4-fluorofenil)-piridin-2-il]-piperazina 79 442 84 (Yo yi: 2 HCI __ Dicloridrato de 1- [3-(4-fluorofe-nil)-piridin-2-il]-4-(1,3,5-trimet-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 35 380 85 2 HC| / nXif Ò Dicloridrato de 4-(3,5-dimetil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 52 444 86 tcrt· ^O., Ò Dicloridrato de 1-(3,5-dimetil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-4-[3-(4-fluorofenil)-piridin-2-il]-piperazina 46 443 87 «a, t HCI Cloridrato de 1-[1-(4-fluoro-fenil)-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil]-4-[3-(4-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 80 446 88 “ oncv Cloridrato de 1- [3-(4-fluoro-fenil) -piridin-2-il]-4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 82 428 89 Cloridrato 1- (l-etil-lH-pirazol-4-ilmetil)-4-[3-(4-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 92 366 ΡΕ2155717 141 (continuação) EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS(ES) [M+H] 90 Cloridrato de 1-[3-(4-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-4-(1-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 86 352 91 Cloridrato de 1-(1,3-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-4-[3-(4-fluoro-fenil) -piridin-2-il]-piperazina 93 366 92 Cloridrato de 1-(1,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-4-[3-(4-fluoro-fenil) -piridin-2-il]-piperazina 96 366 93 fYcrn < " OH Cloridrato de 2-(4—{4—[3-(4-fluoro-fenil) -piridin-2-il]-piperazin-1-ilmetil}-pirazol-l-il)-etanol 35 382 94 HCI ΟΎ" «ob Cloridrato de 1-[3-(4-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-4-(5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 57 429 95 HCI ΓΥΎ\ 0 Cloridrato de 1-[3-(4-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-4-(5-metil-l-piridin-4-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 53 429 96 l"iÇi hci F Cloridrato de 1-[3-(3-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-4-(1-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 94 352 97 cg*· hci F Cloridrato de 1-[3-(3-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 84 366 98 o2^ hci Cloridrato de 1-[3-(2-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-4-(1-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 89 352 99 orri Cx!x^ ' HCI Cloridrato de 1-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-4-[3-(2-fluoro-fenil) -piridin-2-il]-piperazina 84 366 ΡΕ2155717 142 (continuação) EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS(ES) [M+H] 100 Cloridrato de 1-(1-etil-lH-pirazol-4-ilmetil)-4-[3-(2-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 88 366 101 Cloridrato de 2-(4—{4—[3-(2-fluoro-fenil) -piridin-2-il]-piperazin-1-ilmetil}-pirazol-l-il)-etanol 46 382 102 II J HCI Cloridrato de 1-(1,3-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-4-[3-(5-fluoro-2-metoxi-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 95 396 103 rçno· CCv ' II J MCI Cloridrato de 1-(1,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-4-[3-(5-fluoro-2-metoxi-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 90 396 104 °ÍC. Cloridrato de 1-(1,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-4-[3-(4-trifluoro-metil-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 86 416 105 rn> 1 JL HCI Cloridrato de 1-(1-etil-lH-pirazol-4-ilmetil)-4-[3-(4-trifluorometil-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 86 416 106 ^ooq· HCI CFa Cloridrato de 1-(1,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-4-[3-(3-trifluoro-metil-fenil)-piridin-2-il]-piperazina 98 416 107 ^CTt> ^10 HC. Cloridrato de 1-(1-etil-lH-pirazol-4-ilmetil)-4-[3-fenil-piridin-2-il]-piperazina 93 348 108 ΐ',γΟΟ^" » Cloridrato de 31-fenil-4-(1,3,5-tri-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 72 363 143 ΡΕ2155717 (continuação) EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS(ES) [M+H] 109 HCI _____ Cloridrato de 3'-(4-fluoro-fenil)-4-(5-metil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'[bipirazina 51 430
Exemplo 110: Dicloridrato de 4-(l-benzil-3,5-dietil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver 3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (1,082 g, 4,19 mmol) em dicloroetano (50 mL) e adicionar l-benzil-3,5-dietil-lH-pirazole-4-carbaldeído (1,015 g, 4,19 mmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,332 g, 6,28 mmol) e ácido acético (0,35 mL). Agitar a mistura ao longo de 18 h depois diluir com acetato de etilo e lavar com bicarbonato de sódio aquoso saturado, cloreto de sódio aquoso saturado, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 25:75) para dar a base livre como um óleo amarelo (1,36 g, 67%) . Dissolver a base livre em metanol e adicionar cloreto de amónio (0,300 g, 5,61 mmol) depois sonicar a mistura durante 10 min. Concentrar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo. MS (ES)j_ m/z = 485 [M+H] + . 144 ΡΕ2155717
Exemplo 111: Dicloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-4-[1-(4-me-toxibenzil)-3,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil]-3, 4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazina
Dissolver 3'- (4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,344 g, 1,33 mmol) em DCM (15 mL) e adicionar 1-(4-metoxibenzil)-3,5-dimetil-lH-pirazole-4-car-baldeído (0,325 g, 1,33 mmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,422 g, 2,00 mmol) e ácido acético (0,12 mL). Agitar a mistura ao longo de 18 h depois diluir com acetato de etilo, lavar com bicarbonato de sódio aquoso saturado, cloreto de sódio aquoso saturado, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 25:75), para dar a base livre como um óleo incolor (0,281 g, 43%). Dissolver a base livre em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Concentrar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. MS (ES)j_ m/z = 487 [M+H] + .
Exemplo 112: Dicloridrato de 4-(3,5-dimetil-l-piridin-4-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2'Jbipirazina 145 ΡΕ2155717
Dissolver dicloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,271 g, 0,870 mmol) em dicloroetano (11 mL) e adicionar 3,5-dimetil-l-piridin-4-il-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,210 g, 1,04 mmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,332 g, 1,57 mmol), trietilamina (0,320 mL, 2,30 mmol) e ácido acético (0, 090 mL) . Agitar durante 18 h, diluir com acetato de etilo, lavar com bicarbonato de sódio aquoso saturado, cloreto de sódio aquoso saturado, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo) , para dar a base livre como um óleo amarelo (0,124 g, 32%). Dissolver a base livre em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Concentrar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo. MS (ES)j_ m/z = 444 [M+H] +.
Exemplo 113: Dicloridrato de 4- (5-cloro-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazina
146 ΡΕ2155717
Dissolver dicloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,426 g, 1,29 mmol) em dicloroetano (13 mL) e adicionar 5-cloro-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,319 g, 1,54 mmol), triaceto-xiboro-hidreto de sódio (0,409 g, 1,93 mmol), trietilamina (0,394 mL, 2,83 mmol) e ácido acético (0,108 mL) . Agitar a mistura ao longo de 18 h, diluir com acetato de etilo, lavar com bicarbonato de sódio aquoso saturado e cloreto de sódio aquoso saturado, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo) , para dar a base livre como um espuma oleosa amarela (0,279 g, 48%) . Dissolver a base livre em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Concentrar a solução para dar o composto em epigrafe como um sólido amarelo. MS (ES)j_ m/z = 449,451 [M+H]+.
Exemplo 114: Dicloridrato de 4-(3,5-dimetil-l-pirimidin-2-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver dicloridrato de 3 ' - (4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,257 g, 0,776 mmol) em dicloroetano (8 mL) e adicionar 3,5-dimetil-l-pirimidin-2-il-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,157 g, 0,776 147 ΡΕ2155717 mmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,247 g, 1,16 mmol), trietilamina (0,238 mL, 1,71 mmol) e ácido acético (0,065 mL) . Agitar a mistura ao longo de 18 h, depois diluir com acetato de etilo. Lavar com bicarbonato de sódio aquoso saturado, cloreto de sódio aquoso saturado, secar (sulfato de sódio) , filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo), para dar a base livre como um sólido amarelo (0,211 g, 61%) . Dissolver a base livre em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Concentrar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo. MS (ES)j_ m/z = 445 [M+H] + .
Exemplo 115: Cloridrato de 1-[3-(2,5-difluoro-fenil)-piri-din-2-il]-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina
Combinar l-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,090 g, 0,726 mmol) e 1-[3-(2,5-difluoro-fenil)-piridin-2-il]-piperazina (0,200 g, 0,726 mmol) em dicloroetano (7 mL). Adicionar ácido acético glacial (68 pL) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,231 g, 1,09 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20 h. Diluir com bicarbonato de sódio aquoso saturado depois extrair 3 vezes usando DCM. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, (eluindo com 148 ΡΕ2155717 4,5:95,5 amoníaco 2 M em metanol: DCM) , para dar um óleo castanho. Purificar o óleo usando HPLC, (eluindo com acetonitrilo: água 40:60 (com 0,25% TFA) para dar um óleo claro. Dissolver o óleo em metanol e aplicar a uma coluna SCX de 10 g. Lavar a coluna com metanol depois eluir com amoníaco 2 N em metanol para dar a base livre como um óleo transparente. Dissolver o óleo em metanol, adicionar cloreto de amónio e sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (0,053 g, 18%). MS (ES)j_ m/z = 370 [M+H] + .
Exemplo 116: Cloridrato de 1-[3-(2,5-difluoro-fenil)-piri-din-2-il]-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina
Utilizar os métodos do Exemplo 115 usando 1,5-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído para obter o composto em epígrafe (37%), MS (ES)_^_ m/z = 384 [M+H] + .
Exemplo 117: 4-(1,3,5-Trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-cianofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazina
CN 149 ΡΕ2155717
Suspender 4 - (3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il)-benzonitrilo (0,179 g, 0,675 mmol) em tetra-hidrofurano (4 mL). Adicionar 1,3,5-trimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,098 g, 0,71 mmol) em tetra-hidrofurano (490 pL) , depois triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,15 g, 0,071 mmol) e agitar sob azoto à temperatura ambiente ao longo de 3 h. Adicionar à mistura hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL) seguido de hidróxido de sódio 2 N (1 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar, e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 12:88), para dar o composto em epigrafe (153,5 mg, 59%). MS (ES)j_ m/z = 388 [M+H]+.
Exemplo 118: 3'-(4-Metanossulfonilfenil)-4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zina
Suspender 3'-(4-Metanossulfonilfenil)-3,4,5,6-te-tra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,191 g, 0,60 mmol) em tetra-hidrofurano (4 mL) . Adicionar 1,3,5-trimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,087 g, 0,63 mmol) em tetra-hidrofurano (435 pL) , depois triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,13 g, 0,63 mmol). Submeter a reação a ultra-sons durante 30 seg depois agitar sob azoto à temperatura ambiente 150 ΡΕ2155717 durante 7 h. Adicionar à mistura hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL) seguido de hidróxido de sódio 2 N (1 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 12:88), para dar o composto em epigrafe (241,9 mg, 91%). MS (ES)j_ m/z = 441,2 [M+H]+.
Exemplo 119: Fumarato de ácido 3 ' - (2,β-dimetil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil(E)-but-2-enodióico
Agitar dicloridrato de 3'- (2,6-dimetil-fenil) -3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (156 mg, 0,46 mmol) em tetra-hidrofurano seco (3 mL) , e adicionar 1,5-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (86 mg, 0,69 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 10 min, e depois adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (146 mg, 0,69 mmol). Agitar a reação durante 18 h à temperatura ambiente, depois a 50°C ao longo de 5 h sob azoto. Verter a mistura de reação em bicarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL), extrair com DCM (3 x 10 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar usando croma- 151 ΡΕ2155717 tografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 10:90 para dar a base livre como um óleo. Dissolver o óleo em etanol e adicionar 1 equivalente de ácido fumárico. Recristalizar para dar o composto em epígrafe como um pó branco (67 mg, 30%) . MS (ES)j_ m/z = 377 [M+H] + .
Exemplo 120: Fumarato de ácido 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3-trifluorometil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil(E)-but-2-enodióico
Agitar dicloridrato de 3'-(3-trifluorometil-fe-nil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (157 mg, 0,41 mmol) em tetra-hidrofurano seco (3 mL) , e adicionar 1,5-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (76 mg, 0,615 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 10 min, e depois adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (130 mg, 0,615 mmol) . Agitar a reação ao longo de 18 h à temperatura ambiente, depois temperar com bicarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL) , extrair com DCM (3 x 10 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar usando cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 10:90 para obter a base livre como um óleo. Dissolver o óleo em etanol e adicionar 1 equivalente de ácido fumárico. Remover o solvente para dar o 152 ΡΕ2155717 composto em epígrafe como um pó de cor branca/creme (137 mg, 68%). MS (ES)j_m/z = 417 [M+H] + .
Exemplo 121: Cloridrato de 4-(l-etil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (636 mg, 3 mmol) a um suspensão agitada de dicloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo (497 mg, 1,5 mmol) e l-etil-lH-pirazole-4-carboxaldeído (279 mg, 2,25 mmol) em tetra-hidrofurano (5 mL). A suspensão amarela espessa torna-se móvel dentro de 10 min. Temperar depois de 30 min adicionando bicarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL) , hidróxido de sódio 2 N (3 mL) , água (3 mL) e extrair com DCM (10 mL) . Separar o extrato orgânico através de uma frita hidrofóbica e concentrar para dar um óleo castanho (740 mg). Purificar usando cromato-grafia de gel de sílica, eluindo com metanol: DCM 2:98 a 7:93, para dar a base livre como um óleo amarelo (577 mg). Redissolver em isopropanol aquecido (12 mL) e adicionar a solução de HC1 2 M em éter dietílico (0,8 mL) para cristalizar um sólido branco depois de repousar. Filtrar e secar in vácuo a 60°C para dar o composto em epígrafe (456 mg, 75%) . MS (ES)j_ m/z = 367 [M+H] + . 153 ΡΕ2155717
Exemplo 122: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] bi-pirazina
Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (233 mg, 1,1 mmol) a uma mistura agitada de 3'-(4-fluorofenil) -3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (190 mg, 0,74 mmol) e 1,5-dimetil-lH-pirazole-4-carboxaldeido (137 mg, 1,1 mmol) em tetra-hidrofurano (4 mL). Temperar depois de 4 h adicionando bicarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL), hidróxido de sódio 2 N (1 mL) e extrair com DCM (10 mL) . Separar o extrato orgânico através de um frita hidrofóbica e concentrar para dar um óleo amarelo (321 mg) . Purificar usando cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol: DCM 2:92 a 20:90, para dar a base livre como um óleo incolor (234 mg). Redissolver em isopropanol (3 mL) e adicionar a solução de HC1 2 M em éter dietilico (0,5 mL) para cristalizar um sólido amarelo depois de repousar. Filtrar e secar in vacuo a 60°C para dar o composto em epigrafe (217 mg, 73%). MS (ES)j_ m/z = 273 [M+H] + .
Compostos dos Exemplos 123-132 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 122 usando o 154 ΡΕ2155717 aldeído apropriado e triacetoxiboro-hidreto de sódio em tetra-hidrofurano. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 123 xouc- HCI F Cloridrato de 4-(1-metil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razina 65 353 124 iT^N Λ vj' HCI \ F Cloridrato de 4-(1,3-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil) -3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 88 367 125 Λ Vj HCI /~\ F Cloridrato de 4-(1-benzil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razina 73 429 126 iT> NY^n^, γν. HCI F Cloridrato de 3'-(4-fluorofenil)-4-(lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 24 339 127 ir> , TCO> F HCI Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 64 367 128 (T> r- N r Ό rN· U-i HCI Cloridrato de 4-(1-etil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-fenil-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 71 349 129 íT> XOJO· HCI Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'-fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 61 349 130 r> xcu> HCI Cloridrato de 4-(1-etil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 48 367 155 ΡΕ2155717
Exemplo 131: Cloridrato de 4-(3-etil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'- (4 — fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] — bipirazinilo
Dissolver dicloridrato de 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (400 mg, 1,208 mmol) em metanol e formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2®, lavar com metanol depois eluir com amoníaco 2 M em metanol e concentrar para dar um óleo amarelo (320 mg, 100%). Agitar 3'-(4-fluoro-fenil )-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (160 mg, 0,60 mmol) e 3-etil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (120 mg, 0,60 mmol) em tetra-hidrofurano seco (5 mL) à temperatura ambiente ao longo de 10 min. Adicionar triacetoxi-boro-hidreto de sódio (152 mg, 0,719 mmol) e agitar a reação ao longo de 1 h sob azoto. Verter a mistura de reação em bicarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL), extrair com DCM (3 x 20 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar usando cromatografia de gel de sílica (eluindo com metanol:DCM 5:95). Purificar adicionalmente através de HPLC de fase reversa de pH elevado e concentrar. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó branco (52 mg, 18%) . MS (ES): m/z = 443,2 [M+H]+. 156 ΡΕ2155717
Exemplo 132: Dicloridrato de 1-(3,5-dimetil-l-fenil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-4-(3-fenil-piridin-2-il)-piperazina
Adicionar ácido acético glacial (81 pL, 1,38 mmol) a uma solução de 1-(3-fenil-piridin-2-il)-piperazina (275 mg, 1,15 mmol) e 3,5-dimetil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (276 mg, 1,38 mmol) em tetra-hidrofurano (6 mL) . Agitar a mistura de reação à temperatura ambiente ao longo de 1,17 h. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (365 mg, 1,72 mmol) e enxaguar com tetra-hidrofurano (3 mL) . Agitar a mistura de reação à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Diluir a mistura de reação com éter dietilico e solução saturada de bicarbonato de sódio. Separar as camadas e extrair a camada aquosa com éter dietilico. Combinar os extratos de éter dietilico e lavar com água e salmoura, secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida. Purificar o resíduo através de cromatografia de gel de sílica. Eluir com metanol-DCM para dar a base livre do composto em epígrafe (370 mg, 76%) HRMS-FAB (m/z)j_ [M+H]+ calcul. para C27H30N5, 424,2501; encontrado, 424,2531.
Adicionar cloreto de acetilo (126 pL, 1,77 mmol) 157 ΡΕ2155717 a etanol (10 mL) e agitar a solução à temperatura ambiente ao longo de 10 min. Dissolver esta base livre (375 mg, 0,88 mmol) em éter dietilico e filtrar. Adicionar uma solução etanólica de ácido clorídrico à solução de base livre. Concentrar a mistura sob pressão reduzida e concentrar duas vezes mais a partir de éter dietilico. Secar o resíduo sob pressão reduzida ao longo de 18 h para dar o composto em epígrafe como uma espuma branca (415 mg, 94%) . HRMS-FAB (m/z)j_ [M+H]+ calcul. para C27H30N5, 424,2501; encontrado, 424,2504.
Exemplo 133: Cloridrato de 4- (3-metil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinilo
A uma suspensão agitada de dicloridrato de 3'-fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,4 g, 1,28 mmol, 1 eq) e 3-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,27 g, 2,45 mmol, 1,92 eq) em tetra-hidrofurano (20 mL) adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,88 g, 4,15 mmol, 3 eq) numa porção sob a forma de um sólido. Agitar a mistura à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 70 h. Adicionar uma porção adicional de 3-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (70 mg, 0,639 mmol, 0,5 eq) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (271 mg, 1,28 mmol, 1 eq) e agitar por mais 21 h adicionais. Adicionar solução aquosa de hidróxido 158 ΡΕ2155717 de sódio 2 M (10 mL) e DCM (20 mL) separar e extrair a camada aquosa com DCM (20 mL) . Combinar as camadas orgânicas, secar sobre sulfato de magnésio, filtrar e concentrar. Purificar através de cromatografia "flash" em coluna de gel de silica, eluindo com metanol a 5% em DCM, e depois metanol a 5-10% em DCM. Dissolver este material (157 mg, 0,47 mmol) na quantidade mínima de acetonitrilo aquoso a 50%. Adicionar cloreto de hidrogénio 2 M aquoso (235 yL, 0,47 mmol) e liofilizar para dar o composto em epígrafe (159 mg, 34%). MS (ES)j_m/z = 335,2 [M+H] + .
Exemplo 134: Cloridrato de 4-(l-etil-3,5-dimetil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
HCI A uma suspensão agitada de dicloridrato de 3' — (4 — fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo (0,3 g, 0,906 mmol, 1 eq) e l-etil-3,5-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (207 mg, 1,36 mmol, 1,5 eq) em tetra- hidrofurano (10 mL) adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (480 mg, 2,26 mmol, 2,5 eq) numa porção sob a forma de um sólido. Agitar a mistura à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 19 h. Adicionar solução aquosa de hidróxido de sódio 2 M (10 ml) e DCM (20 ml) separar e extrair a camada aquosa com DCM (20 ml) . Combinar as camadas 159 ΡΕ2155717 orgânicas, secar sobre sulfato de magnésio, filtrar e concentrar. Purificar por HPLC de fase reversa de pH elevado. Dissolver este material (49 mg, 0,12 mmol) , na quantidade minima de acetonitrilo aquoso a 50%. Adicionar de cloreto de hidrogénio aquoso 2 M (60 yL, 0,12 mmol) e liofilizar para dar o composto em epígrafe (58 mg, 15%) . MS (ES)j_ m/z = 395,2 [M+H] + .
Exemplo 135: Cloridrato de 3 ' - (4-fluorofenil)-4-(3-metil-l-propil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']— bipirazina
Dissolver [3'-(4-fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hi-dro-[1,2']bipirazinil-4-il]-(3-metil-l-propil-lH-pirazol-4-il)-metanona (0,190 g, 0,465 mmol) em tetra-hidrofurano (5 mL). Adicionar complexo de borano-dimetilsulfureto 2 M (349 pL, 0, 697 mmol) . Sujeitar a refluxo a 75°C ao longo de 18 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, e temperar com metanol. Adicionar solução de hidróxido de sódio 5 N (5 mL) e sujeitar a refluxo durante 1,5 h. Arrefecer até à temperatura ambiente e concentrar sob pressão reduzida. Adicionar acetato de etilo e água e separar as camadas. Extrair a camada aquosa 3 vezes com acetato de etilo. Secar as camadas orgânicas sobre sulfato de magnésio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida. Purificar com cromato- 160 ΡΕ2155717 grafia de gel de sílica eluindo com acetato de etilo/he-xanos a 50-100% depois metanol/acetato de etilo a 10% para dar a base livre (66 mg, rendimento de 36%) . Dissolver a base livre (0,061 g, 0,156 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (0,008 g, 0,156 mmol) num volume mínimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (67 mg, 100%). MS (ES): m/z = 395 [M+H]+.
Exemplo 13 6: Cloridrato de 3(4-fluorofenil)-4-(1-isopro-pil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bi-pirazina
Preparar o composto em epígrafe utilizando os métodos do Exemplo 135 começando com [3'-(4-fluorofenil) -2,3,5,6-tetra-hidro-[l,2']bipirazinil-4-il]-(1-isopropil- lH-pirazol-4-il) -metanona (94 mg, 47%) . Dissolver a base livre (0, 087 g, 0,229 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (0 ,012 g, 0,229 mmo 1) num volume mínimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (94 mg, 99%). MS (ES)j_ m/z = 381 [M+H] + .
Exemplo 137: Cloridrato de 1-[3-(4-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-4-(l-isopropil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina 161 ΡΕ2155717
Dissolver {4-[3-(4-fluoro-fenil)-piridin-2-il]-piperazin-l-il}-(l-isopropil-lH-pirazol-4-il)-metanona (0,280 g, 0,712 mmol) em tetra-hidrofurano (5 mL) . Adicionar borano-dimetilsulfureto (2 M em tetra-hidrofurano, 0,64 mL, 1,28 mmol), e refluir a mistura durante 18 h. Arrefecer a mistura até à temperatura ambiente e cuidadosamente adicionar uma pequena quantidade de metanol depois hidróxido de sódio 2 N (5 mL). Refluir a mistura ao longo de 2 h depois arrefecer e evaporar as camadas orgânicas. Adicionar água e extrair a mistura 3 vezes com acetato de etilo. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com amoníaco 2 M em metanol: DCM 6:94), para dar o sólido branco de base livre. Dissolver a base livre em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (0,127 g, 43%). MS (ES)j_ m/z = 380 [M+H] + .
Exemplo 138: Cloridrato de 1-(l-isopropil-lH-pirazol-4-il-metil)-4-[3-(4-trifluorometil-fenil)-piridin-2-il]-pipera-zina
HCI 162 ΡΕ2155717
Utilizar os métodos do Exemplo 137 começando com [3'-(4-trifluorometil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bi-pirazinil-4-il]-(l-isopropil-lH-pirazol-4-il)-metanona para obter o composto em epígrafe (52%) . MS (ES)j_ m/z = 430 [M+H]+.
Exemplo 139: Cloridrato de 4-(5-cloro-l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'- (4 — fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'] — bipirazina
C
N A uma solução alumino-hidreto de lítio 1 M em tetra-hidrofurano (1,97 mL, 1,97 mmol) sob azoto adicionar gota a gota uma solução de 3 ' - (4-fluoro-fenil)-3, 4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,255 g, 0,99 mmoles) em tetra-hidrofurano (5 mL) . Depois de agitar durante 30 min aquecer a solução até refluxo, depois adicionar gota a gota uma solução de éster de etilo de ácido 5-cloro-l-metil-lH-pirazole-4-carboxílico (223 mg, 1,18 mmol) em tetra-hidrofurano (2 mL) durante 45 min. Depois de 30 min arrefecer a reação até à temperatura ambiente e depois arrefecer até aos 0°C. Cautelosamente temperar com água (10 mL) , adicionar DCM (10 mL) e depois passar através de um separador de fases. Lavar a camada aquosa duas vezes com DCM (10 mL) e passar através do separador. Combinar os extratos orgânicos e concentrar depois purificar através de cromatografia 163 ΡΕ2155717 "flash" (coluna de gel de sílica, eluindo com metanol em cloreto de metileno a 0-15%). Purificar adicionalmente através de HPLC de fase reversa para obter a base livre. Dissolver a base livre (59 mg, 0,16 mmol) na quantidade mínima de acetonitrilo aquoso a 50%. Adicionar HC1 2 M aquoso (80 pL, 0,16 mmol) e liofilizar para dar o composto em epígrafe (52 mg, 12%) . MS (ES)j_ m/z = 387,1 [M+H] + .
Exemplo 140: 3'- (4-Cloro-fenil)-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol- 4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo
Adicionar ácido de 4-clorobenzenoborónico (64 mg, 0,41 mmol) a uma mistura de 3'-cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi-nilo (104 mg, 0,34 mmol), carbonato de potássio (113 mg, 0,82 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,002 g, 0,002 mmol) em N, N-dimetilacetamida (2 mL) e água (1 mL) . Purgar com azoto e aquecer de um dia para o outro a 110°C. Arrefecer até à temperatura ambiente adicionar água (10 mL) , extrair com DCM (3 x 20 mL) combinar e purificar usando HPLC de fase reversa de pH elevado para dar 3' — (4 — cloro-fenil)-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2 ' ] bipirazinilo (68 mg, 54,2%). MS (ES)j_ m/z = 383 [M+H]+. 164 ΡΕ2155717
Exemplo 141: 3'-(3-Cloro-4-fluorofenil)-4-(1-metil-lH-pi- razol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Adicionar ácido 3-cloro-4-fluorobenzenoborónico (71 mg, 0,41 mmol) a uma mistura de 3'-cloro-4-(1-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazini-lo (104 mg, 0,34 mmol), carbonato de potássio (113 mg, 0,82 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,002 g, 0,002 mmol) em N, N-dimetilacetamida (2 mL) e água (1 mL) . Purgar com azoto e aquecer de um dia para o outro a 110°C. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (10 mL) , extrair com DCM (3 x 20 mL) , combinar e purificar usando HPLC de fase reversa de pH elevado para dar o composto em epigrafe (76 mg, 57,7%) . MS (ES)j_ m/z = 387 [M+H]+.
Exemplo 142: 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(2,3-di- fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver 3'-cloro-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilme- 165 ΡΕ2155717 til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (160 mg, 0,55 mmol) em N,N-dimetilacetamida (4 mL) e água (2 mL) e purgar com azoto ao longo de 0,5 h. Adicionar carbonato de potássio (180 mg, 1,30 mmol) depois ácido 2,3-difluoro-benzenoborónico (100 mg, 0,66 mmol) e purgar com azoto ao longo de 0,5 h. Adicionar tetraquis(trifenilfosfina) -paládio(0) (0,01 g, 0,0086 mmol) e aquecer a 110°C ao longo de 3,25 h. Arrefecer até à temperatura ambiente e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 30:70), seguido de HPLC de fase reversa para dar o composto em epígrafe (52, 69 mg, 26%). MS (ES)j_ m/z = 371 [M+H]+.
Os compostos dos Exemplos 143-145 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 142 usando o ácido borónico apropriado. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 143 Vjy 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(2,5-difluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 26 371 144 Λ F 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 50 353 145 (γθΎ “iXX 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(2,4-difluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 53 371
Exemplo 146: 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3-tri- fluorometilfenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 166 ΡΕ2155717
Carregar um tubo de carrossel com ácido 3-tri-fluorometilbenzenoborónico (136 mg, 0,66 mmol), 3'-cloro-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (160 mg, 0,55 mmol) e N,N-dimetil-acetamida (1 mL) . Adicionar N,N-dimetilacetamida (3 mL) e carbonato de potássio (185 mg, 1,32 mmol) e purgar com azoto ao longo de cerca de 45 min. Adicionar água (2 mL, purgada com azoto ao longo de 1 h) depois tetraquis-(trifenilfosfina)paládio(0) (0,003 g, 0,0025 mmol) e purgar o recipiente de reação durante cerca de 30 min. Aquecer a 110°C de um dia para o outro. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água e extrair com DCM (3 x 30 mL) , e depois concentrar os extratos DCM combinados. Purificar usando cromatografia de gel de silica, seguida de HPLC de fase reversa, para dar o composto em epigrafe (128 mg, 58%) . MS (ES)j_ m/z = 403, 1 [M+H] + .
Compostos dos Exemplos 147-154 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 146 usando o ácido borónico apropriado e 3'-cloro-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo. 167 ΡΕ2155717 EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 147 roo> F 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3,4-difluorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 29 371 148 rcu> Xk 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3,5-difluorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 54 371 149 (Y 00 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(2-clorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 53 36 150 rro S 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3-clorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 47 369 151 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-clorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 25 369 152 rv° S F 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-cloro-3-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 54 387 153 ("Ο^Λ 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluoro-3-metilfenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 56 367 154 V 4-(l-Metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-cloro-3-metilfenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 50 383
Exemplo 155: 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3- trifluorometoxifenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razina
OCF. 168 ΡΕ2155717
Carregar um tubo de carrossel com ácido 3-(tri-fluorometoxi)benzenoborónico (140 mg, 0,68 mmol), 3'-cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2' ] bipirazinilo (173 mg, 0,56 mmol) e N,N-dimetilacetamida (1 mL) . Adicionar N,N-dimetilacetamida (3 mL) e carbonato de potássio (190 mg, 1,35 mmol) e purgar com azoto ao longo de cerca de 45 min. Adicionar água (2 mL, purgada com azoto ao longo de 1 h) , depois tetra-quis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,004 g, 0,0034 mmol), purgar a reação durante cerca de 30 min, e depois aquecer de um dia para o outro a 110°C. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água e extrair com DCM (3 x 30 mL) . Concentrar os extratos DCM combinados e purificar usando cromatograf ia de gel de silica seguida de HPLC de fase reversa para dar o composto em epígrafe (0,087 g, 30%). MS (ES)j_ m/z = 433, 1 [M+H] + .
Compostos dos Exemplos 156-162 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 155 usando o ácido borónico apropriado. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 156 ηρΛ F U^F 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(3-trifluorometilfenil)-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 44 417 157 jW, (XX,- ' μ Ti _'xXx_ 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(3,4-difluorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 38 385 ΡΕ2155717 169 (continuação) EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] + 158 rpA {'r -' N L" iÇT' F 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(3,5-difluorofenil)-3,4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 38 385 159 rpA (Y^ S 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(3-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 51 367 160 íYj S yxp F 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(2,3-difluorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 9 385 161 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(2,5-difluorofenil)-3,4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 9 385 162 cá " __ 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(2,4-difluorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 27 385
Exemplo 163: 4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3- cloro-4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razina
Adicionar ácido 2-cloro-4-fluorobenzenoborónico (71 mg, 0,41 mmol) a uma solução de 3'-cloro-4-(1,3-dime-til-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bi-pirazinilo (104 mg, 0,34 mmol) purgada com azoto em N,N-dimetilacetamida seca (2 mL) e água desoxigenada (1 mL) . 170 ΡΕ2155717
Adicionar carbonato de potássio (113 mg, 0,82 mmol) depois tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,002 g, 0,0017 mmol) e agitar a 110°C de um dia para o outro. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (10 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) . Concentrar os extratos DCM combinados e purificar através de HPLC de fase reversa para dar o composto em epígrafe (0,075 g, 20 %) . MS (ES)j_ m/z = 401 [M+H]+.
Os compostos dos Exemplos 164-167 podem ser preparados essencialmente como descritos no Exemplo 163, usando o ácido borónico apropriado. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] + 164 rTY> 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(4-fluoro-3-metilfenil)-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 18 381 165 •xc 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(4-cloro-3-metilfenil)-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 23 397 166 mG 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(2-clorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 11 383 167 mi 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-(3-clorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 41 383
Exemplo 168: 4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4- cloro-3-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razina 171 ΡΕ2155717
Adicionar ácido 4-cloro-3-fluorobenzenoborónico (125 mg, 0,72 mmol) a uma solução de 3'-cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (200 mg, 0,65 mmol) purgada com azoto em N, N-dimetilacetamida seca (4 mL) e água desoxigenada (2 mL) . Adicionar carbonato de potássio (215 mg, 1,72 mmol) depois tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,004 g, O, 0035 mmol) e agitar a 110°C ao longo de 6 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (10 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) . Concentrar os extratos DCM combinados e purificar por HPLC de fase reversa para dar o composto em epígrafe (0,036 g, 14%) . MS (ES)j_ m/z = 401 [M+H]+
Exemplo 169: 4-(1,3-Dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(2- fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Adicionar ácido 2-fluorobenzenoborónico (215 mg, 1,5 mmol) a um solução de 3'-cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 172 ΡΕ2155717
(200 mg, 0,65 mmol) purgada com azoto em N,N-dimetil-acetamida seca (4 mL) , água desoxigenada (2 mL) , carbonato de potássio (215 mg, 1,72 mmol), tetraquis(trifenil-fosfina)paládio(0) (0,004 g, 0,0035 mmol) e agitar a 110°C ao longo de 16 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (10 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) . Concentrar os extratos DCM combinados e purificar por HPLC de fase reversa para dar o composto em epígrafe (0,130 g, 54%). MS (ES)j_ m/z = 367 [M+H] + .
Exemplo 170: Cloridrato de 3'-(2,5-difluoro-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (153 mg, 0,50 mmol) em N,N-dimetilacetamida (2 mL, purgada com azoto) sob azoto. Adicionar carbonato de potássio (166 mg, 1,20 mmol) depois ácido 2,5-difluorobenzenoborónico (95 mg, 0,60 mmol) e purgar com azoto durante 10 min. Adicionar água desoxigenada (1 mL) e tetraquis(trifenilfosfina)-paládio(0) (0,003 g, 0,003 mmol) depois purgar com azoto durante 10 min. Aquecer a 115°C entre 24 e 42 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (5 mL) e extrair com DCM (4x5 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o 173 ΡΕ2155717 filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com aproximadamente amoníaco 2 M em metanol. Purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 10:90). Purificar adicionalmente através de HPLC de fase reversa de pH baixo, seguido de passagem através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® (lavar com metanol, eluir com amoníaco em metanol 7 M). Concentrar para proporcionar a base livre. Dissolver a base livre em acetonitrilo e adicionar solução de HC1 aquosa 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo (25 mg, 12%) . MS (ES)j_ m/z = 385 [M+H] + .
Exemplo 171: Cloridrato de 3'-(5-cloro-2-metil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (307 mg, 1,0 mmol) em N,N-dimetilacetamida (5 mL) . Adicionar carbonato de potássio (332 mg, 2,40 mmol), depois ácido 5-cloro-2-metilbenzenoborónico (204 mg, 1,20 mmol), tetraquis(tri-fenilfosfina)paládio(0) (0,012 g, 0,01 mmol), depois água (1 mL) e purgar com azoto durante 30 min. Aquecer a 110°C ao longo de 18 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (5 mL) e extrair com DCM (3x5 mL) . Passar 174 ΡΕ2155717 os extratos DCM combinados através de um IST Phase Sepa-rator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar (cromato-grafia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 10:90), para dar a base livre como um óleo amarelo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e adicionar solução aquosa HC1 2 M. Adicionar água e liofilizar, depois purificar através de cromatografia SCX-2® (lavar com metanol, eluir com amoníaco 4 M em metanol). Concentrar e purificar adicionalmente através de HPLC de fase reversa de pH elevado seguido de passagem através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® (lavar com metanol, eluir com amoníaco 2 M em metanol) para proporcionar a base livre. Dissolver os cristais da base livre em acetonitrilo e adicionar solução aquosa HC1 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó de cor creme (278 mg, 64%). MS (ES)j_ m/z = 397 [M+H] + .
Exemplo 172: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-3'-(4-metoxi-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bi-pirazina
Dissolver 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (614 mg, 2,0 mmol) em N,N-dimetilacetamida (20 mL). Adicionar carbonato de potássio (662 mg, 4,80 mmol), ácido 4-metoxiben-zenoborónico (334 mg, 2,40 mmol), tetraquis(trifenilfos- 175 ΡΕ2155717 fina)paládio (Ο) (0,023 g, 0,02 mmol), depois água (10 mL) e purgar com azoto durante 30 min. Aquecer a 110°C ao longo de 6 h, depois arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (10 mL) e extrair com DCM (3 x 10 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® (lavar com metanol, eluir com amoníaco 2 M em metanol). Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 10:90), para dar a base livre como um óleo amarelo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e adicionar solução de HC1 aquosa 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo escuro (754 mg, 92%) . MS (ES)j_ m/z = 379 [M+H] + .
Os compostos dos Exemplos 173-176 podem ser preparados essencialmente como descrito no Exemplo 172, usando o ácido borónico apropriado e 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi-nilo ou 3'-cloro-4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo.
176 ΡΕ2155717 (continuação) EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] + 174 HCI Ο Cloridrato de 1—{4—[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanona 97 391 175 HCI Λ _ / θ'Κ" ο Cloridrato de 1—{4— [4-(1,3,5-tri-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanona 89 405 176 Cloridrato de 4-(l,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'-(4-etoxifenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razina 43 393
Exemplo 177: Cloridrato de 4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3-(2-metilfenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2]bipira-zina
Adicionar uma solução de 3'-cloro-4-(1-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi-nilo (208 mg, 0,7 mmol) em N,N-dimetilacetamida seca, deso-xigenada (4 mL) a ácido 2-metilfenilborónico (116 mg, 0,85 mmol) e carbonato de potássio (236 mg, 1,7 mmol). Adicionar água desoxigenada (1,5 mL) e purgar a mistura adicionalmente com azoto durante 10 min. Adicionar tetraquis(trife-nilfosfina)paládio (82 mg, 0,07 mmol) e agitar a mistura a 177 ΡΕ2155717 110°C sob azoto ao longo de 16 h. Temperar a reação com água (50 mL) e extrair com DCM (3X) . Lavar os extratos orgânicos combinados com água, salmoura, separar o extrato orgânico através de uma frita hidrofóbica, e evaporar sob pressão reduzida para dar um óleo castanho (800 mg). Purificar através de cromatografia de gel de silica eluindo com gradiente de metanol a 2-8% em DCM para dar a base livre como um óleo de cor âmbar (168 mg) . Redissolver a base livre em IPA (3 mL) e éter dietilico (3 mL) e adicionar HC1 em éter dietilico (2 M, 0,33 mL) para precipitar um sólido amarelo. Secar o sólido a 60°C sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe como um sólido vítreo amarelo (60 mg, 22%). MS (ES)j_ m/z = 349 [M+H]+.
Os compostos dos Exemplos 178-183 podem ser preparados essencialmente como descrito no Exemplo 177, usando o ácido borónico apropriado e 3'-cloro-4-(1-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinilo ou 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] + 178 N\\ //N HCI -οοΛ Cloridrato de 4-(1-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3-m-tolil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2]bipirazina 38 349 179 < \l M HCI Cloridrato de 3(5-fluoro-2-metil-fenil)-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazina 25 367 ΡΕ2155717 178 (continuação) EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] + 180 V_«N HCI Cloridrato de 3(4-fluoro-2-metil-fenil)-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazina 42 367 181 N. ,N UÇ Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'-(4-fluoro-2-metilfenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazina 45 381 182 F F Νγ^Ν·^1 rN CIH Cloridrato de 4-(1,3-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'-(2-trifluoro-metoxi-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 46 433 183 |T> „ r-N. %Ji CIH > Cloridrato de 4-(1,3-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3'-(2-metoxi-fe-nil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 43 379
Exemplo 184: Fumarato de 3 ' - (2-cloro-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zina
Dissolver 3'-cloro-4-(l,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (153 mg, 0,50 mmol) em N,N-dimetilacetamida (2 mL, purgado com azoto) sob azoto. Adicionar carbonato de potássio (166 mg, 1,20 mmol) depois ácido 2-clorobenzenoborónico (94 mg, 0,60 179 ΡΕ2155717 mmol) e purgar com azoto durante 10 min. Adicionar água desoxigenada (1 mL) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,003 g, 0,003 mmol) depois purgar com azoto durante 10 min. Aquecer a 115°C ao longo de 20 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (5 mL) e extrair com DCM (4x5 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® (lavar com metanol, eluir com amoníaco 2 M em metanol). Purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 10:90), para dar a base livre como um óleo (140 mg). Dissolver o óleo em metanol e adicionar ácido fumárico (1,0 eq), concentrar e lavar o sólido com éter dietílico e DCM. Sonicar o material com éter dietílico (30 mL) e decantar o solvente e secar em forno de vácuo para dar o composto em epígrafe como um pó beje (185 mg, 74%) . MS (ES)j_ m/z = 383 [M+H] + .
Os compostos dos Exemplos 185-192 podem ser preparados essencialmente como descrito no Exemplo 184, usando o ácido borónico apropriado e 3'-cloro-4-(1,3-di-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']— bipirazina, 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina ou 3'-cloro-4-(1-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazina. 180 ΡΕ2155717 EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 185 ryJ S N οΑ^γ 1 o Fumarato de 4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-metoxifenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 79 365 186 roA ίγ0 S Fumarato de 4-(1,3-dimetil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3'-(4-metilfenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razina 80 363 187 λΧΙ'Χ; 0 Fumarato de 4-(1,5-dimetil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3'-(4-metilfenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razina 75 363 188 Fumarato de 3'-(2, 3-difluoro-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 64 385 189 'N VC 0X^ F o Fumarato de 4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(3,4,5-trifluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 77 389 190 C5a\ o Fumarato de 3-metil-4-[4-(1-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzonitrilo 76 374 191 kAa ju, n Fumarato de 4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-metilfenil)-3, 4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 69 349 192 ,νογ "V ογ T 0 lll N Fumarato de 3-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzonitrilo 55 374
Exemplo 193: Cloridrato de 4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3'-fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazina 181 ΡΕ2155717
Purgar com azoto uma mistura agitada de 3'-cloro-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (208 mg, 0,7 mmol), ácido fenilborónico (104 mg, 1,2 equiv) e carbonato de potássio (236 mg, 2,4 equiv) em N, N-dimetilacetamida (4 mL) e água (1,5 mL) . Adicionar tetraquis(trifenilfospina)paládio(0) (82 mg, 0,1 equiv) sob azoto e aquecer a 110°C ao longo de 4 h. Diluir com água (1,5 mL) e éter t-butil-metílico (3,5 mL) e depois extrair com DCM (3x) . Lavar os extratos combinados com água, secar e concentrar a solução para dar um óleo amarelo (450 mg) . Purificar através de cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol: DCM 2:98 a 8:92, para dar a base livre como uma goma transparente (144 mg). Dissolver a base livre em isopropanol (3 mL) e éter dietilico (3 mL) , tratar com HC1 (0,3 mL, 2 M em éter dietilico). Filtrar para dar o composto em epigrafe (62 mg, 26%) . MS (ES)j_ m/z = 335 [M+H] +.
Exemplo 194: Cloridrato de 4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazina
182 ΡΕ2155717
Preparar cloridrato de 4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-fenil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi-nilo essencialmente como descrito no Exemplo 196 usando 3'-cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (200 mg, 0,65 mmol) e ácido fenilborónico (96 mg, 1,2 equiv) a 110°C ao longo de 20 h (83 mg). MS (ES)j_m/z = 349 [M+H] + .
Exemplo 195: Cloridrato de 2-{4-[3'-(3-fluoro-fenil)-2,3, 5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-etanol
N. N
HCI (
Dissolver 2-[4-(3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil)-pirazol-l-il]-etanol (187 mg, 0,579 mmol) em tetra-hidrofurano (1,6 mL) e água (0,8 mL). Adicionar carbonato de potássio (176 mg, 1,27 mmol) depois ácido 3-fluorobenzenoborónico (113 mg, 0,811 mmol) e purgar com azoto durante 15 min. Adicionar tetrafluoroborato de tri-n-butilfosfina (6,7 mg, 0,0231 mmol) e tris(dibenzi-lidenoacetona)dipaládio(0) (10,5 mg, 0,0115 mmol) e submeter ao micro-ondas a 150°C durante 15 min. Arrefecer até à temperatura ambiente depois diluir com bicarbonato de 183 ΡΕ2155717 sódio aquoso saturado e extrair 6 vezes com acetato de etilo. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar através de cromatografia de gel de silica, (eluindo com 6:94 amoniaco 2 M em metanol:DCM), para dar a base livre como um óleo amarelo. Dissolver o óleo em metanol, adicionar cloreto de amónio, depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epigrafe como um sólido amarelo (0,177 g, 73%). MS (ES)j_ m/z = 383 [M+H] + .
Os compostos dos Exemplos 196-198 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 195 usando o ácido borónico apropriado e 2-[4-(3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil)-pirazol-l-il]-etanol. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 196 CCw KJ OH T HCI F*T“F F Cloridrato de 2-{4-[3'-(3-trifluo-rometil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-etanol 83 433 197 L hci Cloridrato de 2-[4-(3'-p-tolil-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazi-nil-4-ilmetil)-pirazol-l-il]-etanol 70 379 198 o X Cloridrato de 2-[4-(3'-fenil-2,3, 5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil)-pirazol-l-il]-etanol 71 365
Exemplo 199: Cloridrato de 1-(3-(3-(4-((1,3-dimetil-lH-pi-razol-4-il)metil)piperazin-l-il)pirazin-2-il)fenil)etanona 184 ΡΕ2155717
Carregar um tubo de micro-ondas com 3'-cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2 ' ]bipirazinilo (0,150 g, 0,490 mmoles) , 10% em mol de dicloreto de bis[(difenilfosfinil)metil]-amina-paládio(II) ligado a polimero (0,032 g, 0,049 mmoles), ácido 3-acetilfenilborónico (0,096 g, 0,588 mmoles), NaHC03 (0,182 g, 1,72 mmoles) e 3 mL de MeOH. Selar o tubo, aquecer em micro-ondas a 140°C ao longo de 30 min, depois arrefecer até à temperatura ambiente. Verter a mistura de reação numa coluna SCX pré-lavada com 10 mL de MeOH. Lavar com 10 mL de MeOH, e eluir com 20 mL de NH3 2 N em MeOH. A fração desejada é evaporada para dar um óleo castanho. Purificar adicionalmente através de cromatografia de fase reversa (CH3CN isocrático a 22%/NH4HC03 0,01 M em água, 80 mL/min, durante 8 min, numa coluna C18 Xterra, de 30 x 75 mm) para proporcionar a base livre como um sólido branco (0,115 g, rendimento de 60%, ES+ (m/z) 391 [M+H] ) . Dissolver a base livre em CH3CN (5 mL), adicionar HC1 1 N em água (0,294 mL, 0,294 mmoles). Depois 5 min, congelar a solução e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (126 mg, rendimento quantitativo, MS ES+(m/z) 391 [M+H] +) . 185 ΡΕ2155717
Exemplo 200: Ácido 2-[4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzoni-tril(E)-but-2-enodióico
Usando ácido 2-cianofenilborónico e 3'-cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo, preparar 2-[4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'—il]— benzamida utilizando o método descrito para a Preparação de cloridrato de 4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-o-tolil-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo. Note-se que a hidrólise parcial do grupo nitrilo ocorre sob as condições de reação de Suzuki. MS (ES)j_ m/z = 392 [M+H] + . Aquecer uma suspensão agitada de 2-[4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzamida (120 mg, 0,3 mmol) , trifenilfosfina (314 mg, 1,2 mmol), tetracloreto de carbono (92 mg, 0,6 mmol) em acetonitrilo seco (1 ml) até aos 60°C ao longo de 30 min. Temperar com metanol (1 ml) e aplicar ao cartuxo SCX-2® (10 g) . Lavar com metanol depois eluir com amoniaco 2 M em metanol para dar um óleo amarelo (167 mg). Purificar através de cromatografia de gel de silica eluindo com metanol a 3-8% em DCM para dar um óleo (59 mg) . Dissolver em etanol (1 ml) e adicionar uma solução de ácido fumárico quente (18 mg) em etanol (1 ml) . Depois deixar cristalizar 186 ΡΕ2155717 numa atmosfera de éter dietílico, filtrar os cristais brancos e secar in vacuo a 60 °C para dar o composto em epígrafe (62 mg, 43%) . MS (ES)j_ m/z = 374 [M+H]+.
Exemplo 201: Dicloridrato de 4-(3,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazina
Dissolver 4- (l-benzil-3,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2' ]bipirazinilo (1,69 g, 3,70 mmol) em etanol (25 mL) e adicionar paládio a 10% em carbono (0,325 g) e formato de amónio (2,334 g, 37,0 mmol). Refluir a mistura ao longo de 24 h. Separar o catalisador por filtração depois adicionar mais paládio em carbono (0,325 g) e refluir por mais 24 h. Separar o catalisador por filtração, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com amoníaco 2 M em metanol:DCM 9:91), para dar a base livre como um sólido branco (0,390 g, 29%). Dissolver a base livre em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Concentrar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. MS (ES)j_ m/z = 367 [M+H] + .
Exemplo 202: Dicloridrato de 4-(3,5-dimetil-l-piridin-3-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazina 187 ΡΕ2155717
2 HCI
Dissolver 4-(3,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'- (4 — fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazi-nilo (0,141 g, 0,385 mmol) e 3-iodopiridina (0,158 g, 0,769 mmol) num tubo selado com xilenos (1,5 mL) depois adicionar complexo de trifluorometanossulfonato de cobre(I)-benzeno (11 mg, 0,0192 mmol), 1,10-fenantrolina (69 mg, 0,385 mmol), 1,5-difenil-l,4-pentadien-3-ona (4,5 mg, 0,0192 mmol) e carbonato de césio (138 mg, 0,423 mmol). Aquecer até aos 110°C ao longo de 18 h depois arrefecer e diluir com cloreto de amónio aquoso saturado. Extrair a mistura com DCM 3 vezes, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com amoniaco 2 M em metanol: DCM 5:95), para dar a base livre como um sólido branco (0,130 g, 76%). Dissolver a base livre em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Concentrar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. MS (ES)j_ m/z = 444 [M+H] +.
Exemplo 203: Dicloridrato de 3'- (4-fluorofenil)-4-(1-isobu-til-3,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
2 HCI 188 ΡΕ2155717
Dissolver 4- (3,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmet.il) -3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H- [ 1,2']bipirazinilo (0,139, 0,379 mmol) em N,N-dimetil- formamida (5 mL) e adicionar hidreto de sódio (0,018 g, 0,455 mmol) . Agitar a mistura ao longo de 10 min a 25°C, depois arrefecer até aos 0°C. Adicionar o l-bromo-2-metilpropano (0,058 mL, 0,531 mmol) gota a gota depois aquecer a mistura até aos 25°C e agitar durante 18 h. Diluir a mistura com cloreto de amónio saturado e extrair 3 vezes com acetato de etilo. Lavar as camadas orgânicas combinadas com cloreto de sódio aquoso saturado seis vezes, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com amoníaco 2 M em metanol: DCM 6:94), para dar a base livre como um óleo incolor (0,043 g, 27%). Dissolver a base livre em metanol, adicionar cloreto de amónio, depois sonicar a mistura durante 10 min. Concentrar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. MS (ES)j_ m/z = 423 [M+H] + .
Exemplo 204: Dicloridrato de 4-[1-(4-fluorobenzil)-3,5-di-metil-lH-pirazol-4-ilmetil]-3'-(4 — fluorofenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazina
Preparar o composto em epígrafe essencialmente 189 ΡΕ2155717 como descrito no Exemplo 203 usando l-bromometil-4-fluo-robenzeno. MS (ES)j_ m/z = 475 [M+H] + .
Exemplo 205: Dicloridrato de 4-(l-ciclo-hexilmetil-3,5-di-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Preparar o composto em epígrafe essencialmente como descrito no Exemplo 204 usando bromometil-ciclo-hexano. MS (ES): m/z = 463 [M+H]+.
Exemplo 206: Dicloridrato de 4-(3,5-dimetil-l-tiazol-2-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazina
2HCI
Dissolver 4-(3,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazini-lo (0,106 g, 0,289 mmol) e 2-bromotiazole (0,052 mL, 0,578 mmol) num tubo selado com xilenos (3 mL) . Adicionar complexo de trifluorometanossulfonato de cobre(I)-benzeno (8 mg, 0,0114 mmol), 1,10-fenantrolina (52 mg, 0,289 mmol), 1,5-difenil-l,4-pentadien-3-ona (3,4 mg, 0,0114 mmol) e 190 ΡΕ2155717 carbonato de césio (104 mg, 0,318 mmol). Aquecer a mistura até aos 110°C ao longo de 44 h, arrefecer e diluir com cloreto de amónio saturado. Extrair a mistura com DCM 3 vezes, secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com amoniaco 2 M em metanol: DCM 5:95), para dar a base livre como um sólido branco (0,088 g, 68%). Dissolver a base livre em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Concentrar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. MS (ES)j_ m/z = 450 [M+H] +.
Exemplo 207: Dicloridrato de 4-[2-(3, 5-dietil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-il)-etil]-3'-(4 — fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazina
Combinar 2-[4-(2-bromoetil)-3,5-dietilpirazol-l-il]-piridina (0,15 g, 0,49 mmol), 3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,12 g, 0,46 mmol), iodeto de potássio (0,01 g, 0,05 mmol), carbonato de potássio (0,10 g, 0,74 mmol) e acetonitrilo (10 mL) e aquecer até refluxo ao longo de 18 h. Arrefecer a mistura de reação até à temperatura ambiente. Purificar usando cromatografia SCX seguida de cromatografia de gel de sílica, eluindo com hexanos:acetato de etilo 1:1 e 191 ΡΕ2155717 converter no sal dicloridrato com HC1 1 M em éter dietílico para dar o composto em epígrafe (0,07 g, 22%). LC-MSj_ m/z = 486,2 [M+H]\
Exemplo 208: Cloridrato de 4-[2-(3,5-dimetil-lH-pirazol-4-il)-etil]-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Ibipirazinilo
Dissolver dicloridrato de 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,200 g, 0,604 mmol) em acetonitrilo (12 mL). Adicionar carbonato de potássio (0,334 g, 2,415 mmol), iodeto de potássio (0,005 g, 0,030 mmol), e 4-(2-bromo-etil)-3,5-dimetil-lH-pirazole (0,135 g, 0,664 mmol). Aquecer a reação ao refluxo durante 14 h sob azoto. Arrefecer até à temperatura ambiente e filtrar sobre celite. Concentrar o filtrado in vacuo e purificar resíduo através de cromatografia "flash" eluindo com DCM:acetona 6:4 para proporcionar a base livre como uma mistura. Purificar através de cromatografia de fase reversa (43 g C-18, CH3CN:TFA aquoso a 1%, 5 a 95% ao longo de 20 min) para proporcionar a mistura. Purificar através de cromatografia "flash" eluindo com clorofórmio:metanol a 0-10% para proporcionar 4-[2-(3,5-dimetil-lH-pirazol-4-il)-etil]-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,150 mg). Dissolver a base livre (0,150 g, 192 ΡΕ2155717 0,394 mmol) em acetonitrilo (1 mL) e adicionar HC1 1 N aquoso (0,433 mL, 0,433 mmol). Agitar durante 1 h à temperatura ambiente. Remover as camadas orgânicas e liofilizar para proporcionar o composto em epígrafe (0,144 g, 77% de rendimento). MS (m/z) = 381 [M+H]+.
Exemplo 209: Cloridrato de 3 ' - (4-fluoro-fenil)-4-[3-(1-me-til-lH-pirazol-4-il)-propil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']— bipirazinilo
HCI
Dissolver dicloridrato de 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,200 g, 0,604 mmol) em acetonitrilo (10 mL). Adicionar carbonato de potássio (0,334 g, 2,415 mmol), iodeto de potássio (0,005 g, 0,030 mmol), e 4-(3-bromo-propil)-1-metil-lH-pirazole (0,184 g, 0,906 mmol). Aquecer a reação em refluxo ao longo de 14 h sob azoto. Arrefecer até à temperatura ambiente e partilhar entre água e acetato de etilo. Separar e extrair a camada aquosa com acetato de etilo. Combinar as porções orgânicas, secar sobre sulfato de sódio, filtrar, e concentrar in vácuo. Purificar o resíduo através de cromatografia "flash" eluindo com clorofórmio:metanol 19:1 para proporcionar 3'-(4-fluoro-fenil)-4-[3-(1-metil-lH-pi-razol-4-il)-propil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,194 g) . Dissolver em acetonitrilo (1 mL) e adicionar HCI 1 N aquoso (0,561 mL, 0,561 mmol). Agitar 193 ΡΕ2155717 durante 1 h à temperatura ambiente. Remover as camadas orgânicas e liofilizar para proporcionar o composto em epigrafe (0,189 g, 75% de rendimento). MS (m/z) = 381 [M+H]+.
Exemplo 210: 4-(l-Benzenossulfonil-3,5-dimetil-lH-pirazol- 4-ilmetil)-3'-(4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
A uma solução de 4-(3,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-3'- (4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bi-pirazinilo (0,160 g, 0,4 mmol, 1 eq) adicionar cloreto de benzenossulfonilo (56 pL, 0,4 mmol) seguido de piridina (1 mL). Aquecer até aos 120°C com agitação durante 4 h. Adicionar água e extrair 3 vezes com acetato de etilo (20 mL) , secar (sulfato de magnésio), concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:DCM 25:75 a 75:25). Liofilizar a partir de uma solução acetonitrilo a 50%/água para dar o composto em epigrafe como um sólido branco (138 mg, 68%). MS (ES)_^_ m/z = 507,1 [M+H] + .
Exemplo 211: 3'-(4-Fluorofenil)-4-(l-metanossulfonil-3,5- dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 194 ΡΕ2155717
A uma solução de 4-(3,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-3'- (4-fluorofenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bi-pirazinilo (0,250 g, 0,7 mmol, 1 eq) adicionar cloreto de metanossulfonilo (63 pL, 0,8 mmol) seguido de piridina (2 mL) . Agitar à temperatura ambiente ao longo de 3 h depois adicionar uma porção adicional de cloreto de metanos-sulfonilo (100 pL, 1,4 mmol, 2 eq) . Agitar durante 2 h à temperatura ambiente depois adicionar ainda uma porção adicional de cloreto de metanossulfonilo (63 pL, 0,8 mmol, 1,2 eq) e depois agitar à temperatura ambiente de um dia para o outro. Adicionar água (10 mL) e acetato de etilo (10 mL), separar e extrair a camada aquosa duas vezes com acetato de etilo (10 mL) , secar os extratos orgânicos combinados (sulfato de magnésio), concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com um gradiente de metanol:DCM 0:100 a 10:90), para dar o composto em epigrafe (207 mg, 66%). MS (ES)j_ m/z = 445, 1 [M+H] + .
Exemplo 212: Cloridrato de 3-{4-[3'-(4-fluoro-fenil)-2,3, 5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-propionitrilo
195 ΡΕ2155717
Combinar 3'- (4 — fluoro-fenil)-4-(lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,125 g, 0,369 mmol), 3-bromopropionitrilo (0,059 g, 0,443 mmol), e carbonato de potássio (0,076 g, 0,554 mmol) em acetonitrilo (2 mL). Aquecer num micro-ondas a 150°C ao longo de 20 min. Arrefecer até à temperatura ambiente e filtrar, lavar com acetonitrilo. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia de gel de silica (hexanos:acetato de etilo 50:50 depois hexanos:acetato de etilo 0:100, depois meta-nol:acetato de etilo 10:90) para dar a base livre (0,144 g, 100%). Dissolver a base livre (0,143 g, 0,365 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (0,019 g, 0,365 mmol) num volume minimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (156 mg, 100%). MS (ES)j_ m/z = 392 [M+H]+.
Exemplo 213: Cloridrato de {4-[3 ' - (4-fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-acetonitrilo
Preparar o composto em epígrafe essencialmente como descrito no Exemplo 212 usando bromoacetonitrilo (14%). MS (ES): m/z = 378 [M+H]+. 196 ΡΕ2155717
Exemplo 214: 5-{4-[3'- (4-Fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-ilmetil}-oxazolidin-2-ona
Combinar 3'- (4 — fluoro-fenil)-4-(lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,125 g, 0,369 mmol), 5-clorometil-2-oxazolidinona (0,060 g, 0,443 mmol), e carbonato de potássio (0,077 g, 0,554 mmol) em acetonitrilo (2 mL) . Aquecer no micro-ondas a 145°C ao longo de 25 min. Adicionar 5-clorometil-2-oxazolidinona (0,060 g, 0,443 mmol), e aquecer no micro-ondas a 145°C ao longo de 25 min. Arrefecer até à temperatura ambiente e filtrar, lavando com acetonitrilo. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia de gel de silica (metanol:acetato de etilo 0:100 depois metanol:acetato de etilo 10:90 depois metanol:acetato de etilo 20:80) para dar a base livre (0,045 g, 28%). Dissolver a base livre (0,043 g, 0,099 mmol) em metanol e adicionar uma solução de cloreto de amónio (0,005 g, 0,099 mmol) num volume minimo de metanol. Chocalhar durante 18 h à temperatura ambiente e concentrar para dar o composto em epígrafe (47 mg, 100%) . MS (ES)j_ m/z = 438 [M+H] + .
Exemplo 215: 2-{4-[3'-(4-Fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-5-metil-pirazol-l-il}-etanol 197 ΡΕ2155717
Combinar 3'- (4 — fluoro-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,500 g, 1,94 mmol) com éster de etilo de ácido (5-metil-pirazol-l-il)-acético (0,416 g, 2,48 mmol) em etanol (8 mL) . Adicionar ácido acético (801 pL, 14 mmol) e uma solução de formaldeido aquosa a 37% (401 pL) . Aquecer no micro-ondas a 120°C ao longo de 5 h. Adicionar ácido acético (801 pL, 14 mmol) e uma solução de formaldeido aquosa a 37% (401 pL). Aquecer no micro-ondas a 120°C ao longo de 3 h. Concentrar, adicionar acetato de etilo e solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada. Separar a camada orgânica. Extrair a camada aquosa duas vezes com acetato de etilo, secar (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0 depois metanol:acetato de etilo 10:90) para dar éster de etilo de ácido {4-[3'-(4-fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-5-metil-pirazol-l-il}-acético (139 mg, 16%). MS (ES)j_ m/z = 439 [M+H] + .
Dissolver este intermediário (0,134 g, 0,306 mmol) em THF (2,7 mL). Arrefecer até aos -42°C em banho de gelo acetonitrilo/seco. Tratar gota a gota com hidreto de di-isobutilaluminio 1 M em tolueno (1,22 mL, 1,22 mmol). Agitar a -42°C ao longo de 1 h, depois à temperatura ambiente ao longo de 2 h. Temperar com solução de tartarato 198 ΡΕ2155717 de sódio e potássio aquosa saturada. Adicionar acetato de etilo, e separar a camada orgânica. Extrair a camada aquosa 3 vezes com acetato de etilo. Lavar as camadas orgânicas combinadas com salmoura, secar (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 80:20 a 100:0 depois metanol:acetato de etilo 10:90 a 20:80) para dar o composto em epigrafe (37 mg, 31%) . MS (ES)j_ m/z = 397 [M+H]+.
Exemplo 216: 2-{4-[3'-(4-Fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-1-pirrolidin-l-il-etanona
Combinar 3' - (4-fluoro-fenil)-4-(lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,150 g, 0,443 mmol), 2-cloro-l-pirrolidin-l-il-etanona (0,092 g, 0,621 mmol), e carbonato de potássio (0,092 g, 0,665 mmol) em acetonitrilo (2 mL) . Aquecer no micro-ondas a 150°C ao longo de 25 min. Arrefecer até à temperatura ambiente e filtrar, lavando com acetonitrilo. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia de gel de silica (metanol:acetato de etilo 0:100 para metanol:acetato de etilo 20:80) para dar a base livre (127 mg, 64%). Dissolver a base livre (0,120 g, 0,268 mmol) em acetonitrilo (300 pL) e adicionar solução de HC1 1 N aquosa (322 pL, 0,322 mmol). 199 ΡΕ2155717
Chocalhar durante 0,5 h à temperatura ambiente. Secar por congelação para dar o composto em epígrafe (130 mg, 100%). MS (ES): m/z = 450 [M+H]+.
Exemplo 217: Dicloridrato de (2-{4-[3'-(4-fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-1-il}-etil)-metil-amina
2 HCI
Dissolver 3'-(4-fluoro-fenil)-4-(lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,450 g, 1,33 mmol) em acetonitrilo (3 mL) e adicionar hidróxido de sódio sólido (0,186 g, 4,65 mmol). Depois de 30 min adicionar cloridrato de (2-cloro-etil)-metil-amina (0,190 g, 1,46 mmol) e bissulfato de tetrabutilamónio (18 mg, 0,0531 mmol) depois refluir a mistura ao longo de 20 h. Arrefecer e filtrar a mistura depois evaporar. Purificar usando cromatografia de gel de sílica, eluindo com amoníaco 2 N em metanol:DCM 6:94 para dar um óleo amarelo. Dissolver o sólido em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (0,139 g, 23%). MS (ES)j_ m/z = 396 [M+H]+.
Exemplo 218: Cloridrato de N-(2-{4-[3'-(4-fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-1-il}-etil)-N-metil-metanossulfonamida ΡΕ2155717 200
ο
Dissolver (2-{4 - [3'- (4-fluoro-fenil)-2,3,5,6-te-tra-hidro-[l,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-etil)-metil-amina (0,124 g, 0,314 mmol) em DCM (3 mL) com trietilamina (66 pL, 0,470 mmol). Adicionar cloreto de metanossulfonilo (26 pL, 0,329 mmol) gota a gota em DCM (1 mL). Agitar a mistura ao longo de 20 h. Diluir com bicarbonato de sódio aquoso saturado depois extrair 3 vezes com DCM. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com amoníaco 2 M em metanol: DCM 4,5:95,5), para dar um óleo amarelo. Dissolver o óleo em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo (0,154 g, 97%) . MS (ES)j_ m/z = 474 [M+H] + .
Exemplo 219: Cloridrato de N-(2-{4-[3'-(4-Fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-1-il}-etil)-N-metil-metanossulfonamida
201 ΡΕ2155717
Preparar 2-{4-[3'-(4-Fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-etilamina utilizando os métodos do Exemplo 217 usando cloridrato de 2-cloro-etilamina (76%). MS (ES)j_ m/z= 382 [M+H] + . Depois, utilizando os métodos do Exemplo 218, converter o intermediário etilamina no composto em epígrafe (83%) . MS (ES)j_ m/z = 460 [M+H] +.
Exemplo 220: Cloridrato de 3'-(4 — fluoro-fenil)-4-[1-(2-me-tanossulfonil-etil)-lH-pirazol-4-ilmetil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Dissolver 3' - (4-fluoro-fenil)-4-(lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,192 g, 0,567 mmol) em acetonitrilo (2 mL). Adicionar l-bromo-2-metanossulfonil-etano (0,375 g, 1,99 mmol) e carbonato de potássio (0,118 g, 0,851 mmol) e submeter a mistura a micro-ondas ao longo de 15 min a 150°C. Diluir com bicarbonato de sódio aquoso saturado depois extrair 3 vezes com acetato de etilo. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com amoníaco 2 M em metanol:DCM 4,5:95,5), para dar a base livre como um óleo amarelo. Dissolver o óleo em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto 202 ΡΕ2155717 em epígrafe como um sólido amarelo (0,174 g, 64%) . MS (ES)j_ m/z = 445 [M+H]+.
Os compostos dos Exemplos 221-223 são preparados essencialmente como descrito para o Exemplo 223 usando o cloreto ou brometo apropriados e 3'- (4-fluoro-fenil)-4-(1H-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H]+ 221 ιΤΓ" ntClfc,h Cloridrato de 4-[1-(2-etanossulfo-nil-etil)-lH-pirazol-4-ilmetil]-3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina 2529768 60 459 222 Cloridrato de N-(2-{4-[3'-(4-fluoro-fenil) -2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-etil)-acetamida 34 424 223 HCI _ - Cloridrato de 3-{4-[3'-(4-fluoro-fenil) -2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bi-pirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-N,N-dimetil-propionamida 18 438
Exemplo 224: Cloridrato dimetilamida de ácido 4-[3'-(4-fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazole-l-carboxílico
o 203 ΡΕ2155717
Dissolver 3'-(4-fluoro-fenil)-4-(lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,200 g, 0,591 inmol) em DCM (1,6 mL) . Adicionar trietilamina (115 yL, 0,827 mmol) e arrefecer em banho de gelo/metanol. Adicionar cloreto de dimetilcarbamilo (65 yL, 0,709 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Adicionar cloreto de dimetilcarbamilo (130 yL, 1,42 mmol), trietilamina (115 yL, 0,827 mmol), e DCM (2 mL) e refluir ao longo de 18 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, concentrar, e purificar através de cromatografia de gel de silica (metanol:acetato de etilo 0:100 até metanol:acetato de etilo 10:90) para dar a base livre (166 mg, 69%). Dissolver a base livre (0,164 g, 0,401 mmol) em acetonitrilo (481 yL) e adicionar HC1 1 N aquoso (481 yL, 0,481 mmol). Chocalhar durante 0,5 h à temperatura ambiente. Secar por congelação para dar o composto em epígrafe (150 mg, 84%) . MS (ES)j_ m/z = 410 [M+H] +.
Exemplo 225: Cloridrato de (1R,2R)~2-(4-((4-(3-(4-fluo-rofenil)pirazin-2-il)piperazin-l-il)metil)-lH-pirazol-1-il)ciclopentanol
Dissolver 2-(4-((lH-pirazol-4-il)metil)piperazin-l-il) -3-fenilpirazina (100 mg, 0,30 mmol) em 1 mL de acetonitrilo num frasco pequeno de 7 mL. Adicionar cis-1,2-epoxiciclopentano (390 mg 4,58 mmol) seguido de carbonato 204 ΡΕ2155717 de césio (200 mg, 610 iranol). Adicionar uma barra de agitação, selar o frasco pequeno e aquecer e agitar a 90°C ao longo de 4 h. No final deste período arrefecer a mistura, adicionar cloreto de metileno e filtrar. Lavar o sólido com mais cloreto de metileno, combinar os filtrados e passar através um cartuxo SCX de 5 g, lavando bem com metanol. Eluir o produto com amoníaco 2 N/metanol e evaporar o solvente para produzir 116 mg (89%) da base livre. Converter a base livre no sal de HC1 e liofilizar para obter o composto em epígrafe. MS (ES)j_ m/z = 423 [M+H] + .
Os compostos dos Exemplos 226-234 são obtidos utilizando os métodos do Exemplo 225 e o epóxido apropriado :
Ex. Estrutura Nome Rendimento MS (ES) [M+H]+ 226 oro Cloridrato de (2S,3S)-3-(4-((4-(3-(4-fluorofenil)pirazin-2-il)piperazin-l-il)metil)-1H-pirazol-l-il)butan-2-ol 68 411 227 rft> Cloridrato de (R)-l-fluoro-3-(4- ((4- (3-fenilpirazin-2-il)piperazin-l-il)metil)-1H-pirazol-l-il)propan-2-ol 50 415 228 rrx> (;TX ^ Cloridrato de (2R, 3R)-3-(4-((4-(3-(4-fluorofenil)pirazin-2-il)piperazin-l-il)metil)-1H-pirazol-l-il)butan-2-ol 74 411 229 rro ( y Cloridrato de (R)-1-(4-((4-(3-(4-fluorofenil)pirazin-2-il)piperazin-l-il)metil)-1H-pirazol-l-il)pentan-2-ol 82 425 ΡΕ2155717 205 (continuação)
Ex. Estrutura Nome Rendimento MS (ES) [M+H] + 30 nrt> rV^ hW- H OH HCI Cloridrato de (S)—1—(4—((4—(3— (4-fluorofenil)pirazin-2-il)piperazin-l-il)metil)-1H-pirazol-l-il)butan-2-ol 89 411 231 γι':':, ><. N II 1 0H HCI Cloridrato de (R)—1—(4—((4—(3— (4-fluorofenil)pirazin-2-il)piperazin-l-il)metil)-1H-pirazol-l-il)butan-2-ol 86 411 232 rpC> Λ, ιΎ^ \_p-t hci 0H Cloridrato de (R)-4,4,4-tri-fluoro-1-(4-((4-(3-(4-fluoro-enil)pirazin-2-il)piperazin-l-il) metil) -lH-pirazol-1-il)butan-2-ol 95 465 233 rfo \ (Υ^ ν-Λ '\Xr« " Cloridrato de (R)—1—(4—((4—(3— (4-fluorofenil)pirazin-2-il)-piperazin-l-il)metil)-lH-pira-zol-l-il)-3-metilbutan-2-ol 72 425 234 rfX> Cd hci oh Cloridrato de 1-(4-((4-(3-(4-fluorofenil)pirazin-2-il)piperazin-l-il) metil) -lH-pirazol-1-il)-2-metilpropan-2-ol 96 411
Exemplo 235: Cloridrato de {4-[3'-(4-fluoro-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-1,5-dimetil-lH-pirazol-3-il}-metanol
F 206 ΡΕ2155717
Dissolver dicloridrato de 3'-(4-fluoro-fenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2.ff-[1,2']bipirazinilo (120 mg, 0,465 mmol) e (1,5-dimetil-lH-pirazol-3-il)metanol (64 mg, 0,511 mmol, 1,1 eq) em etanol (2 mL) num frasco pequeno de micro-ondas. Adicionar ácido acético (150 pL) seguido de adição de gota a gota de formaldeido (125 pL de 37% em peso em água) e tapar. Aquecer num forno micro-ondas a 120°C ao longo de 1 h. Arrefecer a mistura de reação e concentrar in vacuo. Partilhar o residuo entre acetato de etilo e solução de hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. Separar as camadas orgânicas e lavar com salmoura e secar (sulfato de sódio) e evaporar. Purificar através de cromatografia de gel de silica (acetona-hexano 1:1 a 2:1) para dar a base livre (25 mg, rendimento de 14%). Dissolver numa quantidade minima de acetonitrilo-água 1:1, adicionar HC1 1 M (171 pL, 0,171 mmol) e liofilizar para dar o composto em epígrafe (25 mg). MS (ES)j_ m/z = 397 [M+H] + .
Exemplo 236: Cloridrato de 3'-(4-fluoro-fenil)-4-(3-meto-ximetil-1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazina
Preparar o composto em epígrafe essencialmente como descrito para o Exemplo 235 usando éter (1,5-dimetil-lH-pirazol-3-il)metoximetílico e 3(4-fluoro-fenil)-3,4, 207 ΡΕ2155717 5, 6-tetra-hidro-2H- [ 1,2 ' ] bipirazinilo (14%). MS (ES)j_ m/z = 411 [M+H] +.
Preparação lm; Éster de tert-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5, 6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico
Carregar um balão de fundo redondo de 3 tubuladuras de 2 L com 2,3-dicloropirazina (78,7 g, 0,532 mol), éster de t-butilo de ácido piperazino-l-carboxílico (100 g, 0,537 mol), carbonato de potássio (88,2 g, 0,638 mol) seguido de N,N-dimetilacetamida (0,780 L), e aquecer a lama resultante a 110°C sob azoto com agitação vigorosa. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (0,390 L) e éter metil-t-butilico (0,390 L), e agitar a mistura ao longo de 60 min. Parar de agitar e separar a camadas. Lavar a camada orgânica com água (2 x 200 mL), secar sobre MgSCq, filtrar e concentrar para dar 145 g de éster de t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-car-boxílico como um xarope amarelo (91% de rendimento). 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ ppm- 8,10 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 3,59 (m, 4H), 3,40 (η, 4H), 1,48 (s, 9H)
Preparação 2m: 3'-Cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi razinilo
Adicionar HC1 4 M em 1,4-dioxano (10 mL) a éster t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bi-pirazinil-4-carboxílico (6,80 g, 22,76 mmol). Adicionar 1,4-dioxano (40 mL) e submeter a reação a ultra-sons depois 208 ΡΕ2155717 agitar à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 3 h. Adicionar mais HC1 em 1,4-dioxano (40 mL) e agitar durante 1 h. Adicionar clorofórmio (400 mL), lavar com hidróxido de sódio 2 N (200 mL), cloreto de sódio aq. saturado (100 mL) , secar (sulfato de magnésio) e concentrar para dar 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um óleo amarelo que é cristalizado em repouso para dar um sólido (4,0 g, 88%). MS (ES)j_ m/z = 199,1 [M+H]+.
Preparação 3m: Dicloridrato de 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hi-dro-2H-[1,2']bipirazinilo A éster t-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (3,00 g, 10,0 mmol, 1 eq) adicionar uma solução de ácido clorídrico 4 M em 1,4-dioxano (100 mL, 400 mmol, 40 eq) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 3 h. Filtrar o precipitado e lavar com éter dietilico. Secar o pó em forno de vácuo de um dia para o outro para dar dicloridrato de 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um pó amarelo pálido (2,11 g, 78%). MS (ES)j_ m/z = 199 [M+H] + .
Preparação 4m: 3'-Cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilme- til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Carregar um balão de fundo redondo de 3 tubuladuras de 2 L com 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinilo (39 g, 0,196 mol), 1,2-dicloroetano (780 mL) , seguido de 1,5-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeido (25,5 g, 209 ΡΕ2155717 0,206 mol) e agitar durante 15 min sob azoto com agitação vigorosa. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (45,77 g, 215 mmol) em três porções, 10 min separadamente. Adicionar metanol (100 mL) lentamente e agitar durante 20 min e depois concentrar numa espuma branca. Dissolver a espuma em cloreto de metileno e adicionar a um rolhão de silica de 1 kg. Eluir o produto com álcool isopropilico a 5-10%/DCM e concentrar as frações contendo o produto para dar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um óleo amarelo (37 g, 60%). MS (ES)j_ m/z = 307,0 [M+H]+.
Preparação 5m: Cloridrato de 3'-Cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi- nilo
Carregar um balão de fundo redondo de 3 tubuladuras de 2 L com metanol (95 mL) e arrefecer até aos 2°C e adicionar lentamente cloreto de acetilo (7,62 mL, 0,107 mol) gota a gota sob azoto. Num balão de 3 tubuladuras de 1 L separado, dissolver 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (36,5 g, 0,107 mol) em tolueno (365 mL) . Adicionar esta solução à solução metanólica de HC1 numa porção. Agitar vigorosamente ao longo de 1 h e concentrar até metade do volume e filtrar para dar cloridrato de 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um sólido branco (25,5 g, 87%). MS (ES): m/z = 307,0 [M+H]+. 210 ΡΕ2155717
Preparação 6 m: 3'-Cloro-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3, 4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Dissolver 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']-bipirazinilo (3,43 g, 17,3 mmol) em tetra-hidrofurano (100 mL) . Adicionar l-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (2,244 g, 20,38 mmol) em tetra-hidrofurano seco (5 mL), agitar durante 10 min à temperatura ambiente, adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,32 g, 20,4 mmol), submeter a reação a ultra-sons e agitar durante 6 h à temperatura ambiente. Adicionar hidrogenocarbonato de sódio aq. saturado (100 mL) depois hidróxido de sódio 2 N (10 mL) à mistura e extrair com DCM (2 x 200 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 8:92), para dar 3'-cloro-4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um sólido cristalino (5,21 g, 92%). MS (ES)j_ m/z = 293, 1 [M+H] + .
Preparação 7m: 3'-Cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-il- metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo A uma solução de 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (3 g, 15,1 mmol, 1 eq) e 1,3-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (2,0 g, 16,6 mmol, 1,1 eq) em 1,2-dicloroetano (75 mL) adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,8 g, 22,6 mmol, 1,5 eq) e agitar à temperatura 211 ΡΕ2155717 ambiente durante o fim de semana. Adicionar hidróxido de sódio 2 N (100 mL), separar a camadas, extrair a camada aq. duas vezes com DCM (75 mL) , secar (sulfato de magnésio) , filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 10:90). Combinar apenas as frações que contêm o componente principal e concentrar para dar 3'-cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um óleo amarelo viscoso (2,14 g, 46%). Combinar todas as outras frações que contêm componente principal mais impurezas, concentrar depois repetir o passo de croma-tografia para recuperar material adicional (1,6 g, 35%, rendimento total de 81%) . MS (ES)j_ m/z = 307,1 [M+H] + .
Preparação 8m: 3'-Cloro-4-(l,3,5-trimetil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo A uma suspensão de dicloridrato de 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (2,11 g, 7,77 mmol, 1 eq) em tetra-hidrofurano (20 mL) adicionar 1,3,5-trimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (1,61 g, 11,65 mmol, 1,5 eq) . Agitar durante 10 min e adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,20 g, 19,40 mmol, 2,5 eq) numa porção. Agitar à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 1 h, depois adicionar mais 1,3,5-trimetil-lH-pirazole-4-carbal-deído (0,50 g, 3,6 mmol, 0,47 eq) . Agitar durante 30 min, adicionar hidrogenocarbonato de sódio aq. saturado (100 mL) lentamente, e depois extrair com DCM (3 x 50 mL). Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator 212 ΡΕ2155717
Frit®, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 2:98 a 5:95), para dar 3'-cloro-4 - (1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil) -3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um pó branco (2,468 g, 98%). MS (ES)j_ m/z = 321 [M+H]+.
Preparação 9m: 3'-Cloro-4-(l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)- 3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Agitar em conjunto 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (1,6 g, 8,43 mmol) e 1-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (2,17 g, 12,6 mmol) em tetra-hidrofurano seco (10 mL) à temperatura ambiente ao longo de 15 min, sob azoto. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,68 g, 12,6 mmol) e agitar reação ao longo de 1 h. Temperar mistura de reação com bicarbonato de sódio aq. saturado (50 mL) , depois extrair com DCM (3 x 50 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95) e concentrar todas as frações contendo produto. Passar a mistura através de uma coluna CBA para reter o produto, lavar com metanol e depois eluir com amoníaco 2 M em metanol. Evaporar a solução de amoníaco em metanol e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 depois 5:95). Concentrar, lavar com éter dietílico e secar em forno de vácuo para dar 3'-cloro-4-(l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um pó castanho (2,25 g, 76%). MS (ES): m/z = 355 [M+H]+. 213 ΡΕ2155717
Preparação 10m: 3'-Cloro-4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo
Agitar em conjunto 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (1,6 g, 8,43 mmol) e 5-metil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (2,35 g, 12,6 mmol) em tetra-hidrofurano seco (10 mL) à temperatura ambiente ao longo de 15 min, sob azoto. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,68 g, 12,6 mmol) e agitar reação ao longo de 1 h. Temperar a mistura de reação com bicarbonato de sódio aq. saturado (50 mL) , depois extrair com DCM (3 x 50 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95) e concentrar todas as frações contendo produto. Passar a mistura através de uma coluna CBA para reter o produto, lavar com metanol e depois eluir com amoniaco 2 M em metanol. Recristalizar a partir de etanol quente e secar em forno de vácuo para dar 3'-cloro-4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo como cristais brancos (2,08 g, 65%). MS (ES)j_ m/z = 369 [M+H] + .
Preparação llm: 2-[4-(3'-Cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']-bipirazinil-4-ilmetil)-pirazol-l-il]-etanol A uma solução de 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,789 g, 4,01 mmol) e 1-(2-hidroxi-etil)-lH-pirazole-4-carbaldeido (0,562 g, 4,01 mmol) em 214 ΡΕ2155717 1,2-dicloroetano (35 mL) adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,28 g, 6,02 mmol) e ácido acético (0,382 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 20 h. Adicionar bicarbonato de sódio aq. saturado, separar as camadas, extrair a camada aq. duas vezes com DCM, secar (sulfato de sódio), filtrar e concentrar. Purificar usando cromato-grafia de gel de silica, eluindo com metanol (com amoniaco 2 N):DCM 6:94 para dar 2-[4-(3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil)-pirazol-l-il]-etanol como um óleo amarelo (1,16 g, 90%) . MS (ES)j_ m/z = 323 [M+H] + .
Preparação 12m: 3'-Cloro-4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinilo
Dissolver l-etil-5-metil-lH-pirazole-4-carbal-deído (2,92 g, 21,1 mmol) em 1,2-dicloroetano (184 mL) . Adicionar dicloridrato de 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (4,97 g, 18,3 mmol), trietilamina (5,9 mL, 42,3 mmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (6,72 g, 31,7 mmol) e ácido acético (1,98 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Adicionar bicarbonato de sódio aq. saturado e extrair quatro vezes com DCM. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar, e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0 depois metanol:acetato de etilo 10:90 a 20:80) para dar 3'-cloro-4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2'] bipirazinilo (5,2 g, 88%). MS (ES)j_ m/z = 321 [M+H] +. 215 ΡΕ2155717
Preparação 13m: 3'-Cloro-4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Dissolver dicloridrato de 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,500 g, 1,84 mmol) em 1,2-dicloroetano (19 mL). Adicionar 5-metil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,396 g, 2,13 mmol), trietilamina (594 pL, 4,26 mmol), triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,677 g, 3,20 mmol) e ácido acético (200 pL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Adicionar bicarbonato de sódio aq. saturado e extrair quatro vezes com DCM. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio), filtrar, concentrar, e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 0:100 a 100:0) para dar 3'-cloro-4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2 '] bipirazinilo (597 mg, 88%) MS (ES)j_ m/z = 369[M+H] + .
Preparação 14m: 3'-Cloro-4-(l-etil-3-metil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo
Combinar dicloridrato de 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (2,21 g, 8,18 mmol), l-etil-3-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (1,3 g, 9,40 mmol) e trietilamina (1,31 mL, 9,40 mmol) em dicloroetano (50 mL). Adicionar ácido acético glacial (0,85 mL) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,99 g, 14,1 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20 h. Diluir com 216 ΡΕ2155717 bicarbonato de sódio aq. saturado depois extrair três vezes usando DCM. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol (com amoniaco 2 M):DCM 4,5:95,5), para dar 3'-cloro-4-(l-etil-3-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3, 4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo como um óleo amarelo (1,702 g, 65%). MS (ES)j_m/z = 321 [M+H] + .
Preparação 15m: 3'-Cloro-4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinilo
Agitar em conjunto 3'-cloro-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (2,00 g, 10,07 mmol) e 5-metil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeido (2,25 g, 12,08 mmol) em tetra-hidrofurano seco (10 mL) à temperatura ambiente ao longo de 10 min, sob azoto. Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,20 g, 15,10 mmol) e agitar a reação ao longo de 1 h. Temperar a mistura de reação com bicarbonato de sódio aq. saturado (30 mL), depois extrair com DCM (3 x 20 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 5:95). Concentrar e secar em forno de vácuo para dar a base livre como um óleo castanho (3, 585 g, 96,5%). MS (ES)j_ m/z = 369 [M+H] + .
Preparação 16m: 3'-Cloro-4-(3,5-dimetil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Preparar 3'-cloro-4-(3,5-dimetil-l-fenil-lH-pi- 217 ΡΕ2155717 razol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo essencialmente como descrito para 3'-cloro-4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']-bipirazinilo (3,313 g, 86%). MS (ES)j_ m/z = 383 [M+H]+.
Preparação 17m; [2-Fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]-dioxaborolan-2-il)-fenil]-metanol
Agitar em conjunto bis(dibenzilidenoacetona)paládio (0) (336 mg, 0,585 mmol) e triciclo-hexilfosfina (383 mg, 1,37 mmol) em N,N-dimetilacetamida (30 mL) à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 20 min. Adicionar (4-bromo-2-fluoro-fenil)-metanol (4,00 <3r 19, 5 mmol), 4,4,5,5,4',4',5',5'-octametil-[2,2']bi[[l,3,2]dioxa-borolanilo] (5,20 g, 20,5 mmol) e acetato de potássio (2,87 g, 29,3 mmol) e agitar a 80°C ao longo de 18 h. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente, diluir com água (100 mL), depois extrair com acetato de etilo (2 x 50 mL) secar sobre sulfato de magnésio, filtrar e concentrar. Purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 0:100 a 20:80), para dar [2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-metanol como um sólido amarelo (4,079 g, 83%). MS (ES)j_ m/z = 275 [M+Na]+.
Preparação 18m: 2-Metil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]— dioxaborolan-2-il)-fenil]-propionitrilo
Dissolver [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxabo- 218 ΡΕ2155717 rolan-2-il)-fenil]-acetonitrilo (2,43 g, 10,0 mmol) em tetra-hidrofurano seco (50 mL) à temperatura ambiente. Adicionar hidreto de sódio (dispersão em óleo a 60% em peso, 1,6 g, 40,0 mmol), agitar a reação durante 90 min, depois adicionar iodeto de metilo (2,01 mL, 40,0 mmol). Agitar a reação ao longo de 1 h sob azoto. Temperar com água e reduzir o solvente in vacuo. Adicionar água (20 mL), extrair com DCM (5 x 20 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit® e concentrar. Adicionar água (20 mL) , filtrar e secar em forno de vácuo de um dia para o outro para dar 2-metil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxa-borolan-2-il)-fenil]-propionitrilo como cristais (340 mg, 12%) . GC-MSj_ m/z = 271 [M+] .
Preparação 19m: 5—[4—(4,4,5,5-Tetrametil-[1,3,2]dioxabo- rolan-2-il)-fenil]-oxazole
Adicionar 5-(4-bromofenil)-1,3-oxazole (21,78 mmol, 4,88 g) a 1,4-dioxano (80 mL) , depois adicionar 4,4,5,5,4',4',5',5'-octametil-[2,2']bi[[l,3,2]dioxaboro-lanilo] (26,14 mmol, 6,64 g) , acetato de potássio (65,34 mmol, 6,41 g) , 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (1,09 mmol, 603,74 mg), e cloreto de (1,1'-bis(difenilfosfi-no)ferroceno)paládio(II) (1,09 mmol, 889,34 mg). Refluir a 80°C ao longo de 24 h. Verter a reação em hidróxido de sódio 2 M (cerca de 50 mL) e acetato de etilo (cerca de 100 mL) , filtrar através de celite, separar as camadas orgânicas, secar sobre sulfato de magnésio, filtrar, e concentrar in vacuo para dar um sólido preto. Purificar 219 ΡΕ2155717 (cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo:hexano 0:100 a 20:80) para dar 5-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-oxazole como um sólido branco (1,90 g; 32% de rendimento). MS (ES)j_ m/z = 272 [M+H] +.
Preparação 20m: 2-[4-(1-Metoxi-etil)-fenil]-4,4,5,5-tetra- metil-[1,3,2]dioxaborolano l-Bromo-4-(1-metoxi-etil)-benzeno: Dissolver 1-(4-bromo-fenil)-etanol (0,79 mL, 6,62 mmol) em N,N-dimetilformamida seca (7 mL) à temperatura ambiente sob atmosfera de azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão em óleo a 60%, 397 mg, 9,93 mmol), agitar a reação ao longo de 30 min, depois adicionar iodeto de metilo (0,50 mL, 7,94 mmol) e agitar a reação durante 23 h adicionais sob azoto. Temperar com água (30 mL) , extrair com DCM (3 x 30 mL) , passar através de um IST Phase Separator Frit® e concentrar. Purificar usando cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 0:100 a 20:80 para dar l-bromo-4-(1-metoxi-etil)-benzeno como um óleo transparente (1,39 g, 98%). 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,47 (d, 2H) , 7,20 (d, 2H) , 4,25 (q, 1H) , 3,21 (s, 3H) , 1,40 (d, 3H). 2-[4-(1-metoxi-etil)-fenil]-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano: Agitar em conjunto l-bromo-4-(1-metoxi-etil)-benzeno (1,39 g, 6,46 mmol), 4,4,5,5,4',4', 5',5'-octametil-[2,2']bi[[1,3,2]dioxaborolanilo] (1,80 g, 220 ΡΕ2155717 7,11 mmol), acetato de potássio (1,90 g, 19,38 mmol), e acetato de paládio (87 mg, 0,39 mmol) em N,N-dimetilfor- mamida seca (25 mL) . Desgasificar a reação durante 20 min depois aquecer até aos 85°C ao longo de 40 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (100 mL) e extrair com DCM (3 x 50 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Purificar (croma-tografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 0:100 a 20:80) para dar um pó branco (400 mg, rendimento de 24%) . MS (ES)j_ 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,80 (d, 2H) , 7,31 (d, 2H) , 4,30 (q, 1H) , 3,22 (s, 3H) , 1,42 (d, 3H).
Preparação 21m: 2-[4- (2-metoxi-etil)-fenil]-4,4,5, 5-tetra- metil-[l,3,2]dioxaborolano 2-Bromo-4-(1-metoxi-etil)-benzeno: Dissolver 2-(4-bromo-fenil)-etanol (0,98 mL, 7,0 mmol) em N,N-dime-tilformamida seca (7 mL) à temperatura ambiente sob atmosfera de azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo, 420 mg, 10,5 mmol), agitar a reação ao longo de 1 h, depois adicionar iodeto de metilo (0,52 mL, 8,4 mmol) e agitar a reação durante umas 66 h adicionais sob azoto. Temperar com água (20 mL) , extrair com DCM (3 x 30 mL) , passar através de um IST Phase Separator Frit® e concentrar. Purificar usando cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 0:100 a 20:80 para dar 2-bromo-4-(1-metoxi-etil)-benzeno como um óleo claro (1,211 g, 80%). 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,4 221 ΡΕ2155717 (d, 2H) , 7,10 (d, 2H) , 3,6 (t, 2H) , 3,35 (s, 3H) , 2,8 (t, 2H) . 2-[4-(2-Metoxi-etil)-fenil]-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano: Agitar em conjunto 2-bromo-4-(2-metoxi-etil)-benzeno (1,21 g, 5,63 mmol), 4,4,5,5,4 ',4', 5',5'-octametil-[2,2']bi[[1,3,2]dioxaborolanilo] (1,57 g, 6,19 mmol), acetato de potássio (1,66 g, 16,89 mmol), e acetato de paládio (76 mg, 0,34 mmol) em N,N-dimetilforma-mida seca (25 mL) . Desgasificar a reação durante 20 min depois aquecer até aos 85°C ao longo de 40 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (100 mL) e DCM (20 mL) . Extrair com DCM (3 x 50 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frite®. Purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 0:100 a 20:80) para dar um óleo transparente (274 mg, 19% de rendimento) . 1H-NMR (400 MHz, CDC13) 7,74 (d, 2H) , 7,23 (d, 2H) , 3,59 (t, 2H) , 3,34 (s, 3H), 2,89 (t, 2H), 1,33 (s, 12H).
Preparação 22m: 2—[4—(4,4,5,5-Tetrametil-[1,3,2]dioxaboro- lan-2-il)-fenil]-acetamida 2-(4-Bromo-fenil)-acetamida: Adicionar cloreto de 2-(4-bromo-fenil)-acetilo (1,00 g, 4,28 mmol) para uma solução de amoniaco em dioxano (0,5 M, 15 mL) à temperatura ambiente. Agitar durante 30 min, depois temperar com água. Extrair com DCM (10 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit® e concentrar até aparecer precipitado. 222 ΡΕ2155717
Recolher o precipitado através de filtração, lavar o pó com DCM, depois dissolver em metanol, filtrar e concentrar para dar um pó branco (1,0 g, 109%) . 1H-NMR (300 MHz, MeOD) δ 7,48 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 3,50 (s, 2H). 2-[4-(4,4,5,5-Tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-acetamida: Agitar em conjunto bis(dibenzilideno-acetona)paládio(0) (74 mg, 0,13 mmol) e triciclo-hexilfos- fina (84 mg, 0,30 mmol) em dioxano (20 mL) à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 20 min. Adicionar 2-(4-bromo-fenil)-acetamida (4,28 mmol), 4,4,5, 5, 4 ', 4 ', 5 ', 5 ' -octametil-[2,2']bi[[1,3,2]dioxaborolanilo] (1,96 g, 4,71 mmol) e acetato de potássio (630 mg, 6,42 mmol) e agitar a 80°C ao longo de 17 h. Arrefecer reação até à temperatura ambiente, verter em salmoura (50 mL), e extrair em DCM (3 x 20 mL). Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 0:100 a 20:80 depois 50:50 a 100:0), para dar o produto como pó esbranquiçado (464 mg, 42%) . 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,80 (d, 2H) , 7,29 (d, 2H) , 5,48 (bs, 2H) , 3,61 (s, 2H) , 1,34 (s, 12H) .
Preparação 23m: 1-(2-Hidroxi-etil)-lH-pirazole-4-carbal- deído
Combinar lH-pirazole-4-carbaldeido (0,110 g, 1,14 mmol), 2-bromoetanol (0,172 g, 1,37 mmol), e carbonato de potássio (0,236 g, 1,71 mmol) em acetonitrilo (2 mL). 223 ΡΕ2155717
Aquecer no micro-ondas a 150°C ao longo de 20 min. Arrefecer até à temperatura ambiente e filtrar, lavando com acetonitrilo. Concentrar o filtrado para dar 1-(2-hidroxi-etil)-lH-pirazole-4-carbaldeido (0,155 g, 97%). GC-MSj_ m/z = 140 [M+].
Preparação 24m: Éster de tert-butilo de ácido 3' — (4 — hidroximetil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxilico
Dissolver éster de tert-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (1,29 g, 4,35 mmol) em tetra-hidrofurano (12 mL) e água (6 mL) . Adicionar carbonato de potássio (1,32 g, 9,56 mmol) depois ácido 4-hidroximetilobenzenoborónico (0,924 g, 6,08 mmol) e desgasificar com azoto ao longo de 15 min. Adicionar tetrafluoroborato de tri-n-butilfosfina (50 mg, 0,174 mmol) e tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (80 mg, 0,0869 mmol) e refluir ao longo de 20 h. Arrefecer até à temperatura ambiente depois diluir com bicarbonato de sódio aq. saturado e extrair 3 vezes com acetato de etilo. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol (com amoniaco 2 M):DCM 3:97), para dar um óleo amarelo.
Dissolver o óleo em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar éster de tert-butilo de ácido 3'-(4-hidroximetil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico como um semi-sólido amarelo (0,565 g, 35%). MS (ES)j_ m/z = 371 [M+H] +. 224 ΡΕ2155717
Preparação 25m: [4-(3,4,5,6-Tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi- nil-3'-il)-fenil]-metanol
Dissolver éster de tert-butilo de ácido 3' — (4 — hidroximetil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (0,560 g, 1,51 mmol) em DCM (10 mL) e adicionar ácido trifluoroacético (2 mL) e deixar a mistura a agitar à temperatura ambiente ao longo de seis h. Evaporar a solução depois diluir com DCM e lavar com bicarbonato de sódio saturado. Secar as camadas orgânicas sobre sulfato de sódio depois filtrar e evaporar. Cromatografar o residuo sobre gel de silica (eluindo com metanol (com amoniaco 2 M):DCM 8:92), para dar [4-(3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il)-fenil]-metanol como um sólido amarelo (340 mg, 83%) . MS (ES)j_ m/z = 271 [M+H] + .
Preparação 26m: Dicloridrato de [4-(3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il)-fenil]-metanol
Dissolver éster de tert-butilo de ácido 3' — (4 — hidroximetil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (2,76 g, 7,45 mmol) em DCM (25 mL) e adicionar ácido trifluoroacético (5 mL) e deixar a mistura a agitar à temperatura ambiente ao longo de seis h. Evaporar a solução depois diluir com DCM e lavar com bicarbonato de sódio saturado. Secar as camadas orgânicas sobre sulfato de sódio depois filtrar e evaporar. Cromatografar o residuo sobre gel de silica (eluindo com 225 ΡΕ2155717 metanol (com amoníaco 2 M):DCM 8:92), depois dissolver o sólido em metanol e adicionar cloreto de amónio depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar dicloridrato de [4-(3, 4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bi-pirazinil-3'-il)-fenil]-metanol como um sólido branco (1,303 g, 65%). MS (ES)j_m/z = 271 [M+H] + .
Preparação 27m: Dicloridrato de 3'-(4-metoximetil-fenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo Éster de tert-butilo de ácido 3(4-metoximetil-fenil) -2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico.
Dissolver Éster de tert-butilo de ácido 3'-cloro-2,3,5, 6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (1,00 g, 3,26 mmol) em N,N-dimetilacetamida (15 mL) . Adicionar carbonato de potássio (1,29 g, 9,36 mmol), ácido 4-meto-ximetilbenzenoborónico (649 mg, 3,90 mmol) e tetraquis(tri-fenilfosfina)paládio(0) (0,0225 g, 0,034 mmol), depois água (5 mL) e desgasificar com azoto ao longo de 30 min. Aquecer a 110°C ao longo de 18 h sob azoto. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (20 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL). Combinar os extratos DCM e passar através de um IST Phase Separator Frit® e concentrar. Purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 20:80), para dar Éster de tert-butilo de ácido 3'-(4-metoximetil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']-bipirazinil-4-carboxílico como um óleo amarelo (1,32 g, 105%). MS (ES): m/z = 385 [M+H]+. 226 ΡΕ2155717
Dicloridrato de 3'-(4-metoximetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Suspender Éster de tert-butilo de ácido 3'-(4-metoximetil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxílico (1,3 g, 3,26 mmol) em 1,4-dioxano (10 mL) . Adicionar HCl em dioxano (4 M, 10 mL) , agitar durante 2 h depois separar por filtração o sólido amarelo. Lavar com dioxano depois éter dietilico para dar dicloridrato de 3'-(4-metoximetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipira-zinilo como um sólido amarelo (935 mg, 80%) . MS (ES)j_ m/z = 285 [M+H] +.
Preparação 28m: 1-{4-[4-(1,5-Dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanona
Dissolver 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (921 mg, 3,0 mmol) em N,N-dimetilacetamida (6 mL) . Adicionar carbonato de potássio (996 mg, 7,2 mmol), ácido 4-acetil-benzenoborónico (590 mg, 3,6 mmol), tetraquis(trifenil-fosfina)paládio (0) (0,0174 g, 0,015 mmol), depois água (3 mL). Aquecer a 120°C ao longo de 17 h, depois arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (15 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® 227 ΡΕ2155717 lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 3,5 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 20:80), para dar 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanona como um pó amarelo (1,135 g, 97%). MS (ES)j_ m/z = 391 [M+H] + .
Preparação 29m: Ácido 3-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-feniloj-propiónico
Agitar em conjunto 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinilo (921 mg, 3,00 mmol), ácido [4-(2-etoxicarboniletil)-benzeno]borónico (994 mg, 3,6 mmol), carbonato de potássio (996 mg, 7,2 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,0174 g, 0,015 mmol) e água (3 mL) em N,N-dimetilaceta-mida (6 mL) à temperatura ambiente sob azoto. Desgasificar durante 10 min depois aquecer a 120°C ao longo de 20 h. Carregar sobre a coluna SCX-2, eluir com amoníaco 2 M em metanol e purificar usando cromatografia de gel de sílica (eluindo com metanol:DCM 15:85 a 30:70). Concentrar para dar ácido 3-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-propió-nico como um pó (1,01 g, 80%). MS (ES)j_ m/z = 421 [M+H] +
Preparação 30m: 4- [4- (1,5-Dimetil-lfí-pirazol-4-ilmetil) - 3,4,5, 6-tetra-hidro-2A-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenol 228 ΡΕ2155717
Agitar em conjunto 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nilo (920 mg, 3,00 mmol), ácido 4-(hidroxi)benzenoborónico (497 mg, 3,6 mmol), carbonato de potássio (996 mg, 7,2 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,018 g, 0,015 mmol) e água (6 mL) em N,N-dimetilacetamida (12 mL) a 120°C ao longo de 5 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (20 mL) , extrair com DCM (3 x 30 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Purificar usando cromatografia SCX, eluindo com amoníaco 2,5 M em metanol e purificar adicionalmente usando cromatografia de gel de sílica (eluindo com metanol:DCM 5:95 a 15:85). Concentrar e secar num forno de vácuo de um dia para o outro para dar 4-[4-(1,5-dimetil-lií-pirazol-4-ilmetil) -3,4,5, 6-tetra-hidro-2ií- [1,2' ]bipirazinil-3'-il] -fenol como um pó amarelo claro (936 mg, 86%) . MS (ES)j_ m/z = 365 [M+H].
Preparação 31m: Dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Dissolver [4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol (1,00 g, 2,64 mmol) em DCM (60 mL).
Adicionar cloreto de tionilo (6 mL) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 2 h. Concentrar in vacuo para dar dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazi- 229 ΡΕ2155717 nilo como um sólido amarelo (1,20 g, 100%) . MS (ES)j_ m/z = 397 [M+H]+
Preparação 32 m; 3-Etil-l-fenil-lH-pirazole-4-carbaldeído
Adicionar ácido acético (1,00 mL, 17,45 mmol) e fenil-hidrazina (1,98 mL, 20,00 mmol) a uma solução de 2-butanona (2,15 mL, 24,00 mmol) em etanol (90 mL) à temperatura ambiente. Agitar a reação durante 1 h, depois remover os solventes in vacuo para dar N-[1-metil-prop-(E)-ilideno] -N'-fenil-hidrazina como um óleo cor de laranja bruto (3,21 g, 99%). MS (ES)j_m/z = 163 [M+H] + . A uma solução de N,N-dimetilformamida (4,59 mL, 59,36 mmol) arrefecida com gelo e cloreto de fosforilo (5,52 mL, 59,36 mmol) adicionar uma solução de N-[l-metil-prop-(E)-ilideno]-N'-fenil-hidrazina (3,21 g, 19,79 mmol) em N,N-dimetilformamida (2 mL) gota a gota. Aquecer até à temperatura ambiente, depois aquecer até aos 75°C ao longo de 5 h. Arrefecer até à temperatura ambiente e verter numa solução de carbonato de potássio saturado arrefecida com gelo. Extrair com DCM (3 x 20 mL), passar através de um IST Phase Separator Frit® e concentrar. Purificar (cromato-grafia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 0:100 a 20:80), para dar o composto em epígrafe como um sólido castanho (600 mg, 15%). MS (ES)j_ m/z = 201 [M+H]+. 230 ΡΕ2155717
Preparação 33 m: Éster de tert-butilo de ácido 3' — [4 — (acetilamino-metil)-fenil]-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bi-pirazinil-4-carboxílico
Carregar um tubo de carrossel com carbonato de potássio (553 mg, 4 mmol) , 2333216 (500 mg, 1,67 mmol) , ácido (4-acetamidometilfenil)borónico (393 mg, 2,02 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (39 mg, 0,033 mmol) numa mistura de DMA (5 mL) e água (2,5 mL) . Purgar com azoto e deixar em agitação sob azoto a 120 °C de um dia para o outro. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente. Diluir com água (10 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) e descartar a camada aq. Concentrar até à secura. Purificar o material bruto através de cromatografia de sílica "flash" eluindo com (acetato de etilo:ciclo-hexano 20/80 a 100/00) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (650 mg, 94%) . 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,17 (d, 1H) , 8, 09 (d, 1H) , 7,89 (d, 2H), 7,36 (d, 2H) , 5,82 (bs, 1H) , 4,50 (d, 2H) , 3,41 (m, 4H) , 3,14 (m, 4H) , 2,02 (s, 3H) , 1,45 (t, 9H) .
Preparação 34m: N-[4-(3,4,5,6-Tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipira-zinil-3'-il)-benzil]-acetamida
Adicionar TFA (0,6 mL, 7,94 mmol) a uma solução de éster de tert-butilo de ácido 3'-[4-(acetilamino-metil)-fenil]-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-carboxilico (650 mg, 1,58 mmol) em DCM (6,5 mL) e manter em agitação durante 3 h. Concentrar o material até à secura. 231 ΡΕ2155717
Redissolver em DCM (10 mL) e adicionar TFA (1,2 mL) . Aquecer a mistura de reação a 40 °C ao longo de 3 h. Purificar a mistura através de cromatografia de permuta iónica SCX-2®, eluindo com NH3 2 M em MeOH para dar o composto em epígrafe como um óleo amarelo (454 mg, 92%) . 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,14 (d, 1H) , 8,08 (d, 1H) , 7, 90 (d, 2H) , 7, 36 (d, 2H) , 5,81 (bs, 1H) , 4,49 (d, 2H) , 3, 17 (m, 4H) , 2,88 (m, 4H) , 2,06 (s, 3H) .
Preparação 35m: {4-[4-(3-Metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilme- til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il] -fenil}-metanol
Carregar um tubo de carrossel com carbonato de potássio (545 mg, 3,94 mmol), (1-(2-cloro-piridin-3-il)-4- (3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-piperazina, (600 mg, 1,63 mmol), ácido (4-hidroximetil)fenilborónico (304 mg, 1,96 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (42 mg, 0,036 mmol) em DMA (6 mL) e água (3 mL). Purgar com azoto e deixar em agitação sob azoto a 120°C de um dia para o outro. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente. Diluir com água (10 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) e descartar a camada aq. Concentrar até à secura. Purificar o material bruto através de cromatografia de sílica "flash" eluindo com (metanol:DCM 2/98 a 12/88) para dar o composto em epígrafe (474 mg, 66 %) . 1H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,09 (d, OO \—1 , 05 (d, 1H), 7,85 (d, 2H) , 7,75 (s, 1H) , 7,60 (d 2H) ( , 7,38 (m, 4H) , 7,20 (t, 1H), 4, 69 (S, 2H) , 3,39 (s 2H) , , 3,19 (m, 4H) , 2,44 (m, 4H), 2, 30 (s, 3H) 232 ΡΕ2155717
Preparação 36m: 3'-(4-Clorometil-fenil)-4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinilo
Adicionar cloreto de tionilo (0,4 mL, 5,49 mmol) a uma solução de {4-[4-(3-Metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol (474 mg, 1,08 mmol) em DCM (20 mL) . Manter agitação durante 3 h. Concentrar até à secura para dar o composto em epígrafe como um material amarelo (545 mg) MS (ES)j_ m/z = 459/460/461 [M+H] + .
Exemplo lm: Cloridrato de {4-[4-(l-etil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'— i1] — fenil}-metanol
OH
Combinar dicloridrato de [4-(3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il)-fenil]-metanol (0,177 g, 0,516 mmol), l-etil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,064 g, 0,516 mmol) e trietilamina (0,144 mL, 1,03 mmol) em dicloroetano (4 mL). Adicionar ácido acético glacial (42 pL) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,153 g, 0,722 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20 h. Diluir com bicarbonato de sódio aq. saturado depois extrair três vezes 233 ΡΕ2155717 usando DCM. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol (com amoníaco 2 M) :DCM 4,5:95,5), para dar um sólido branco. Dissolver o sólido em metanol e adicionar cloreto de amónio (1 equivalente) depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (0,178 g, 83%) . MS (ES)j_ m/z = 379
Exemplo 2m: Cloridrato de {4-[4-(l-metil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol
Combinar [4-(3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razinil-3'-il)-fenil]-metanol (0,175 g, 0,647 mmol) e 1-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,071 g, 0,647 mmol) em dicloroetano (6 mL) . Adicionar ácido acético glacial (60 yL) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,206 g, 0,971 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20 h. Diluir com bicarbonato de sódio aq. saturado depois extrair três vezes usando DCM. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol (com amoníaco 2 M) : DCM 4,5:95,5), para dar a base livre como um óleo amarelo. Dissolver este óleo em metanol e adicionar cloreto de 234 ΡΕ2155717 amónio (1 equivalente) depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epigrafe como um sólido branco (0,224 g, 86%). MS (ES)j_ m/z = 365 [M+H]
Exemplo 3m: Cloridrato de {4-[4-(l-etil-3-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol
Combinar [4-(3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipi-razinil-3'-il)-fenil]-metanol (0,140 g, 0,518 mmol) e 1-etil-3-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (0,072 g, 0,518 mmol) em dicloroetano (5 mL). Adicionar ácido acético glacial (48 yL) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,165 g, 0,777 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20 h. Diluir com bicarbonato de sódio aq. saturado depois extrair três vezes usando DCM. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol (com amoniaco 2 M) : DCM 4,5:95,5), para dar a base livre como um sólido amarelo. Dissolver este sólido em metanol e adicionar cloreto de amónio (1 equivalente) depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epigrafe como um sólido branco (0,193 g, 87%) . MS (ES)j_ m/z = 393 235 ΡΕ2155717
Exemplo 4m: Cloridrato de {4-[4-(l-benzil-3,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-fenil}-metanol
Combinar dicloridrato de [4-(3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinil-3'-il)-fenil]-metanol (0,210 g, 0,612 mmol), l-benzil-3,5-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído
(0,131 g, 0,612 mmol) e trietilamina (0,171 mL, 1,22 mmol) em dicloroetano (5 mL). Adicionar ácido acético glacial (50 pL) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,181 g, 0,856 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 3 dias. Diluir com bicarbonato de sódio aq. saturado depois extrair três vezes usando DCM. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol (com amoníaco 2 M) : DCM 4,5:95,5), para dar um óleo amarelo. Dissolver o óleo em metanol e adicionar cloreto de amónio (1 equivalente) depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo (0,241 g, 78%) . MS (ES)j_ m/z = 469
Exemplo 5m: Cloridrato de 3'-(4-metoximetil-fenil)-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 236 ΡΕ2155717
Agitar dicloridrato de 3'-(4-metoximetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (312 mg, 0,87 mmol) em tetra-hidrofurano seco (10 mL) , e adicionar 1,3-dimetil-lH-pirazole-4-carbaldeído (138 mg, 0,87 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 15 min, e depois adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (171 mg, 1,04 mmol). Agitar a reação durante 17 h à temperatura ambiente, depois a 50°C ao longo de 20 h sob azoto. Verter a mistura de reação em bicarbonato de sódio aq. saturado (20 mL), extrair com DCM (3 x 20 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar usando cromatografia de gel de silica (eluindo com metanol:DCM 2:98 a 5:95). Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar, depois base livre usando um cartuxo de permuta iónica SCX-2®. Purificar adicionalmente através de HLPC de fase reversa do pH baixo. Formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 3 M em metanol e concentrar. Dissolver o sólido em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo brilhante (80 mg, 22%). MS (ES): m/z = 393 [M+H]+. 237 ΡΕ2155717
Exemplo 6m: Cloridrato de N-{4-[4-(1,3,5-trimetil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-metanossulfonamida
Agitar em conjunto ácido 4-sulfonamidometilbenze-noborónico (291 mg, 1,27 mmol), 3'-cloro-4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipi-razinilo (339 mg, 1,06 mmol), carbonato de potássio (354 mg, 2,54 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (56 mg, 5 ymol) em N, N-dimetilacetamida seca (4 mL) e água (2 mL) à temperatura ambiente. Aquecer até aos 120°C ao longo de 17 h sob azoto. Arrefecer até à temperatura ambiente, purificar usando cromatografia SCX e purificar adicionalmente usando cromatografia de gel de silica eluindo com (metanol:DCM 5:95 a 20:80). Dissolver em acetonitrilo, e adicionar HC1 aq. 2 M e água depois liofilizar para dar o composto em epigrafe como um pó amarelo (413 mg, 77%) . MS (ES)j_ m/z = 470 [M+H] .
Compostos dos exemplos 7-9 são preparados essencialmente como descrito para o Exemplo 6 usando o ácido borónico apropriado. 238 ΡΕ2155717 EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] 7m rrri Cloridrato de 3'-(4-metoximetil-fe-nil)-4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 83 407 8m rW„ HN^O Cloridrato de N-{4-[4-(1,3,5-tri-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilj-acetamida 99 434 9m HCI .-γΌ Λν; Cloridrato de {4-[4-(1,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-acetonitrilo 64 402
Exemplo lOm; Cloridrato de {4-[4-(1,3,5-trimetil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol
Agitar em conjunto ácido 4-(hidroximetil)ben-zenoborónico (182 mg, 1,2 mmol), 3'-cloro-4-(1,3,5-tri- metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']— bipirazinilo (321 mg, 1,0 mmol), carbonato de potássio (332 mg, 2,4 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (58 mg, 5 pmol) em N,N-dimetilacetamida seca (4 mL) e água (2 mL) à temperatura ambiente. Aquecer a 120°C ao longo de 6 h sob azoto. Arrefecer até à temperatura ambiente, purificar usando cromatografia SCX e purificar adicionalmente usando 239 ΡΕ2155717 cromatografia de gel de sílica eluindo com (metanol:DCM 5:95 a 20:80). Dissolver em acetonitrilo, e adicionar HC1 aq. 2 M e água depois liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó cor de pêssego (405 mg, 94%) . MS (ES)j_ m/z = 393 [M+H].
Exemplo llm: Cloridrato de {2-fluoro-4-[4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-fenil}-metanol
Agitar em conjunto 3'-cloro-4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinilo (184 mg, 0,50 mmol), [2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetra-metil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-metanol (151 mg, 0,60 mmol), carbonato de potássio (166 mg, 1,20 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (0, 006 g, 0,003 mmol) e água (1 mL), em N,N-dimetilacetamida (2 mL) à temperatura ambiente sob azoto, depois aquecer a 120°C ao longo de 3 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (20 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol: DCM 5:95 a 15:85) . Secar num forno de vácuo de um dia para o outro, depois dissolver o pó amarelo em acetonitrilo. Adicionar HC1 aq. 2 M e água depois 240 ΡΕ2155717 liofilizar para dar o composto em epígrafe como pó amarelo claro (203 mg, 82%) . MS (ES)j_ m/z = 459 [M+H] .
Compostos dos exemplos 12-15 são preparados essencialmente como no Exemplo 11 usando o cloreto e ácido ou éster borónico apropriados. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] 12m 1 II n N m J UL / MCI ] HV ΰ Cloridrato de N-{4-[4-(1-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-acetamida 55 468 13m OH Cloridrato de {4-[4-(1-fenil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol 73 427 14m Ò F OH Cloridrato de {2-fluoro-4-[4-(1-fe-nil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol 73 445 15m i3 o-. Cloridrato de 3'-(4-metoximetil-fe-nil)-4-(l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 32 441
Exemplo 16m: Cloridrato de {4-[4-(l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenilj-acetonitrilo
241 ΡΕ2155717
Agitar em conjunto 3'-cloro-4-(1-fenil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (177 mg, 0,50 mmol), ácido 4-(cianometil)benzenoborónico (97 mg, 0,60 mmol), carbonato de potássio (166 mg, 1,20 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,006 g, 0,003 mmol) e água (1 mL), em N,N-dimetilacetamida (2 mL) à temperatura ambiente sob azoto, depois aquecer a 120°C ao longo de 3 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (20 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 15:85). Secar num forno de vácuo de um dia para o outro, depois purificar adicionalmente através de HPLC de fase reversa de pH baixo. Formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 2 M em metanol e concentrar. Dissolver o sólido em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epigrafe como um sólido amarelo brilhante (136 mg, 58%) . MS (ES)j_ m/z = 436 [M+H] + .
Exemplo 17m: Cloridrato de 2-{4-[3'-(4-metoximetil-fenil)-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-1-il}-etanol
242 ΡΕ2155717
Dissolver 2-[4 — (3'-cloro-2,3,5,6-tetra-hidro- [1,2']bipirazinil-4-ilmetil)-pirazol-l-il]-etanol (0,201 g, 0, 623 mmol) em tetra-hidrofurano (1,7 mL) e água (0,9 mL) . Adicionar carbonato de potássio (189 mg, 1,37 mmol) depois ácido 4-metoximetilbenzenoborónico (145 mg, 0,872 mmol) e desgasificar com azoto ao longo de 15 min. Adicionar tetrafluoroborato de tri-n-butilfosfina (7,2 mg, 0,0249 mmol) e tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (11,4 mg, 0,0124 mmol) e submeter a micro-ondas a 150°C durante 15 min. Arrefecer até à temperatura ambiente depois diluir com bicarbonato de sódio aq. saturado e extrair 6 vezes com acetato de etilo. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol (com amoniaco 2 M):DCM 6:94), para dar um óleo amarelo. Dissolver o óleo em metanol e adicionar cloreto de amónio (1 equivalente) depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epigrafe como um sólido amarelo (0,191 g, 75%). MS (ES)j_ m/z = 409 [M+H] +.
Exemplo 18m: Cloridrato de N-{4-[4-(l-etil-3-metil-lH- pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-benzi1}-acetamida
243 ΡΕ2155717
Dissolver 3'-cloro-4-(l-etil-3-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinilo (0,204 g, 0,636 mmol) em tetra-hidrofurano (1,75 mL) e água (0,9 mL). Adicionar carbonato de potássio (0,193 g, 1,40 mmol) depois ácido 4-acetamidometilbenzenoborónico (0,172 g, 0, 890 mmol) e desgasificar com azoto ao longo de 15 min. Adicionar tetrafluoroborato de tri-n-butilfosfina (7,4 mg, 0,0254 mmol) e tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (12 mg, 0,0127 mmol) e refluir ao longo de 20 h. Arrefecer até à temperatura ambiente depois diluir com bicarbonato de sódio aq. saturado e extrair 3 vezes com acetato de etilo. Secar (sulfato de sódio), filtrar, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol (com amoníaco 2 M):DCM 4,5:95,5), para dar um sólido amarelo. Dissolver o sólido em metanol e adicionar cloreto de amónio (1 equivalente) depois sonicar a mistura durante 10 min. Evaporar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo (0,172 g, 51%). MS (ES)j_ m/z [M+H] = 434
Exemplos 19-21 são preparados essencialmente como descrito para o Exemplo 18 usando o ácido borónico correspondente e 3'-cloro-4-(l-etil-3-metil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo.
Ex Estrutura Composto Rendimento MS(ES) (%) [M+H] 19m Cloridrato de 4-(l-etil-3-metil-lH- 23 407 CU u, pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-metoxi- metil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H- [1,2']bipirazinilo 244 ΡΕ2155717 (continuação)
Ex Estrutura Composto Rendimento (%) MS(ES) [M+H] 20m Cloridrato de {4-[4-(l-etil-3-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-acetonitrilo 40 402 21m “LCTti o''o Cloridrato de N-{4-[4-(l-etil-3-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3, 4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-rnetanossulfonamida 78 470
Exemplo 22m: Cloridrato de {4-[4-(l-etil-5-metil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol
Combinar 3'-cloro-4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinilo (0,300 g, 0,935 mmol), carbonato de potássio (0,310 g, 2,24 mmol), ácido 4-(hidroximetil) fenilborónico (0,170 g, 1,12 inmol), e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,011 g, 0,009 mmol) em N,N-dimetilacetamida (1,9 mL) . Adicionar água (940 pL) , e submeter a reação a refluxo durante 6 h.
Continuar a aquecer a 70°C ao longo de 18 h. Adicionar ácido 4-(hidroximetil)fenilborónico (0,085 g, 0,56 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,011 g, 245 ΡΕ2155717 0,009 iranol) e aquecer a 115°C ao longo de 6 h. Continuar a agitar à temperatura ambiente ao longo de 72 h. Adicionar DCM e lavar com água. Extrair a camada de água três vezes com DCM. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio) e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0 depois metanol: acetato de etilo 10:90 a 20:80), para dar a base livre do composto em epígrafe (306 mg, 83%) . Dissolver a base livre (0,262 g, 0,667 iranol) em acetonitrilo (801 pL) e adicionar solução de HC1 1 N aq. (801 pL, 0,801 iranol). Chocalhar durante 15 min à temperatura ambiente. Secar por congelação para dar o composto em epígrafe (288 mg, 100%). MS (ES)j_ m/z = 393 [M+H] + .
Exemplo 23m: Cloridrato de N-{4-[4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-benzi1}-acetamida
Combinar, 3'-cloro-4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,300 g, 0,935 mmol), carbonato de potássio (0,310 g, 2,24 iranol), ácido (4-acetamidometilfenil)borónico (0,216 g, 1,12 mmol), e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,011 g, 0,009 mmol) em N,N-dimetilacetamida (1,9 mL). Adicionar água (940 246 ΡΕ2155717 pL) , e submeter a reação a refluxo durante 6 h. Adicionar DCM e lavar com água. Extrair a camada de água três vezes com DCM. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio) e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0 depois metanol: acetato de etilo 10:90 a 20:80), para dar a base livre do composto em epígrafe (384 mg, 95%) . Dissolver a base livre (0,381 g, 0,880 mmol) em acetonitrilo (1,06 mL) e adicionar solução de HC1 N 1 aq. (1,06 mL, 1,06 mmol). Chocalhar durante 15 min à temperatura ambiente. Secar por congelação para dar o composto em epígrafe (416 mg, 100%). MS (ES)j_ m/z = 434 [M+H] + .
Exemplo 24m: Cloridrato de 4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-metoximetilfenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H- [1,2'Ibipirazinilo
Combinar 3'-cloro-4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,300 g, 0,935 mmol), carbonato de potássio (0,310 g, 2,24 mmol), ácido 4-metoximetilfenilborónico (0,186 g, 1,12 mmol), e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,011 g, 0,009 mmol) em N,N-dimetilacetamida (1,9 mL). Adicionar água (940 pL) , e submeter a reação a refluxo durante 6 h. Adicionar DCM e lavar com água. Extrair a camada de água três vezes com 247 ΡΕ2155717 DCM. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio) e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0 depois metanol:acetato de etilo 10:90 a 20:80), para dar a base livre do composto em epígrafe (256 mg, 67%) . Dissolver a base livre (0,254 g, 0,624 mmol) em acetonitrilo (748 pL) e adicionar solução de HC1 1 N aq. (748 pL, 0,748 mmol) . Chocalhar durante 15 min à temperatura ambiente. Secar por congelação para dar o composto em epígrafe (273 mg, 99%) . MS (ES)j_ m/z = 407 [M+H] + .
Exemplo 25m: Cloridrato de {4-[4-(l-etil-5-metil-lH- pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-fenil}-acetonitrilo
Combinar 3'-cloro-4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinilo (0,300 g, 0,935 mmol), carbonato de potássio (0,310 g, 2,24 mmol), ácido (4-cianometilfenil)borónico (0,180 g, 1,12 mmol), e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(O) (0,011 g, 0,009 mmol) em N,N-dimetilacetamida (1,9 mL). Adicionar água (940 pL) , e submeter a reação a refluxo durante 6 h. Continuar a aquecer a 70°C ao longo de 18 h. Adicionar DCM e lavar com água. Extrair a camada de água três vezes com DCM. Secar as 248 ΡΕ2155717 camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio) e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0 depois metanol:acetato de etilo 10:90 a 20:80), para dar a base livre do composto em epigrafe (196 mg, 52%). Dissolver a base livre (0,194 g, 0,482 mmol) em acetonitrilo (579 pL) e adicionar solução de HC1 N 1 aq. (579 pL, 0,579 mmol). Chocalhar durante 15 min à temperatura ambiente. Secar por congelação para dar o composto em epigrafe (201 mg, 95%) . MS (ES)_^_ m/z = 402 [M+H]+.
Exemplo 26m: Cloridrato de N-{4-[4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi-nil-3'-il]-benzi1}-metanossulfonamida
Combinar 3'-cloro-4-(l-etil-5-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinilo (0,300 g, 0,935 mmol), carbonato de potássio (0,310 g, 2,24 mmol), ácido (4-metanossulfonilaminometilfenil)borónico (0,257 g, 1,12 mmol), e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,011 g, 0,009 mmol) em N,N-dimetilacetamida (1,9 mL). Adicionar água (940 pL) , e submeter a reação a refluxo durante 6 h Continuar a aquecer a 70°C ao longo de 18 h. Adicionar ácido (4-metanossulfonilaminometilfenil)borónico (0,129 g, 249 ΡΕ2155717 0,56 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,011 g, 0, 009 mmol) e aquecer até aos 115°C ao longo de 6 h. Continuar a a agitar à temperatura ambiente ao longo de 72 h. Adicionar DCM e lavar com água. Extrair a camada de água três vezes com DCM. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio) e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0 depois metanol:acetato de etilo 10:90 a 20:80), para dar a base livre do composto em epígrafe (371 mg, 85%). Dissolver a base livre (0,367 g, 0,781 mmol) em acetonitrilo (938 yL) e adicionar solução de HC1 N 1 aq. (938 pL, 0, 938 mmol) . Chocalhar durante 15 min à temperatura ambiente. Secar por congelação para dar o composto em epígrafe (397 mg, 100%). MS (ES)j_ m/z = 470 [M+H] + .
Exemplo 27m: Cloridrato de {4-[4-(5-metil-l-fenil-lH- pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-fenil}-metanol
OH
Combinar 3'-cloro-4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinilo (0,290 g, 0,786 mmol), carbonato de potássio (0,261 g, 1,89 mmol), ácido 4-(hidroximetil)fenilborónico (0,143 g, 0,943 mmol), e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,009 g, 0,008 250 ΡΕ2155717 iranol) em N,N-dimetilacetamida (1,6 mL). Adicionar água (790 pL) , e Sujeitar a reação o refluxo ao longo de 18 h. Adicionar ácido 4-(hidroximetil)fenilborónico (0,072 g, 0,471 inmol) e tetraquis (trifenilfosfina)paládio (0) (0,009 g, 0,008 mmol) e aquecer até aos 110°C ao longo de 3,5 h. Adicionar DCM e lavar com água. Extrair a camada de água três vezes com DCM. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio) e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0 depois metanol:acetato de etilo 10:90), para dar a base livre do composto em epígrafe (198 mg, 57%) . Dissolver a base livre (0,195 g, 0,443 mmol) em acetonitrilo (531 pL) e adicionar solução de HC1 N 1 aq. (531 pL, 0,531 mmol). Chocalhar durante 15 min à temperatura ambiente. Secar por congelação para dar o composto em epígrafe (208 mg, 98%) . MS (ES)j_ m/z = 441 [M+H] + .
Exemplo 28m: Cloridrato de N-{4-[4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-benzi1}-acetamida
Combinar 3'-cloro-4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,290 g, 0,786 mmol), carbonato de potássio (0,261 g, 1,89 mmol), 251 ΡΕ2155717 ácido (4-acetamidometilfenil)borónico (0,182 g, 0,943 iranol) , e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,009 g, 0,008 mmol) em N,N-dimetilacetamida (1,6 mL) . Adicionar água (790 pL) , e sujeitar a reação a refluxo ao longo de 18 h. Adicionar DCM e lavar com água. Extrair a camada de água três vezes com DCM. Secar as camadas orgânicas combinadas (sulfato de magnésio) e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com acetato de etilo:hexanos 50:50 a 100:0 depois metanol:acetato de etilo 10:90 a 20:80), para dar a base livre do composto em epígrafe (365 mg, 96%). Dissolver a base livre (0,363 g, 0,754 mmol) em acetonitrilo (904 pL) e adicionar solução de HC1 N 1 aq. (904 pL, 0, 904 mmol) . Chocalhar durante 15 min à temperatura ambiente. Secar por congelação para dar o composto em epígrafe (392 mg, 100%). MS (ES)j_ m/z = 482 [M+H] + .
Exemplo 29m: Ácido 4-(l-metil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-metoximetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil(E)-but-2-enodióico
Dissolver 3'-cloro-4-(l-metil-lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (146 mg, 0,50 mmol) em N,N-dimetilacetamida (desgasifiçada com azoto ao longo de 0,5 h) (2 mL) . Adicionar carbonato de potássio 252 ΡΕ2155717 (166 mg, 1,20 mmol) depois ácido 4-metoximetilbenzenoboró-nico (100 mg, 0,60 mmol) e desgasificar com azoto ao longo de 15 min. Adicionar água desoxigenada (1 mL) e tetraquis-(trifenilfosfina)paládio(0) (0,003 g, 0,003 mmol) e desga sificar com azoto durante 10 min. Aquecer a 115°C ao longo de 20 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (5 mL) e extrair com DCM (4x5 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol. Purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol: DCM 0:100 a 10:90), para dar a base livre como um óleo amarelo (183 mg, rendimento de 94%) . Dissolver o óleo em metanol, adicionar ácido fumárico (1 eq) , concentrar e lavar o sólido com éter dietílico, e depois liofilizar, para dar o composto em epígrafe como um pó beje (50 mg, 20%) . MS (ES)j_ m/z = 379 [M+H] + .
Exemplo 30m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-[4-(tiofen-2-ilmetoximetil)-fenil]-3, 4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo
Dissolver 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo (307 mg, 1,0 mmol) em N,N-dimetilacetamida (5 mL) . Adicionar 253 ΡΕ2155717 carbonato de potássio (332 mg, 2,40 mmol) depois ácido 4-[(-2-tienilmetoxi)metil]benzenoborónico (298 mg, 1,20 mmol), tetraquis (trifenilfosfina)paládio(0) (0,012 g, 0,01 mmol) . Adicionar água (1 mL) e desgasificar com azoto ao longo de 30 min, depois aquecer a 110°C ao longo de 18 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (5 mL) e extrair com DCM (3x5 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 10:90), para dar a base livre como um óleo amarelo. Dissolver o óleo em acetonitri-lo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 2 M aq.. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe (258 mg, 50%). MS (ES)_^_ m/z = 475 [M+H] + .
Exemplo 31m: Cloridrato de N-{4-[4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-metanossulfonamida
II o
Agitar 3'-cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-il- metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (307 mg, 1,00 mmol), carbonato de potássio (332 mg, 2,40 mmol), ácido (4-metanossulfonilaminofenil)borónico (275 mg, 1,20 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,058 g, 0,05 mmol) em N,N-dimetilacetamida (2 mL). Adicionar água (1 mL) 254 ΡΕ2155717 e aquecer a 120 °C ao longo de 17 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (10 mL) e extrair com DCM (3 x 10 mL). Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 3 M em metanol.
Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 1:99 a 10:90), para dar a base livre como um óleo claro. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 2 M aq. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó castanho/amarelo (378 mg, 77%). MS (ES)j_ m/z = 456 [M+H] + .
Exemplo 32m: Cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il] -benzil}-acetamida
Agitar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (153 mg, 0,50 mmol), carbonato de potássio (166 mg, 1,20 mmol), ácido (4-acetamidometilbenzeno)borónico (116 mg, 0,60 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,006 g, 0,005 mmol) em N,N-dimetilacetamida (2 mL). Adicionar água (1 mL) 255 ΡΕ2155717 e aquecer a 120 °C ao longo de 17 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (5 mL) e extrair com DCM (3x5 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 2,5 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol: DCM 5:95 a 20:80), para dar a base livre como um óleo transparente. Dissolver o óleo em aceto-nitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq. 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-acetamida como um pó castanho claro (73 mg, 16%) . MS (ES)j_ m/z = 420 [M+H]+.
Exemplo 33m: Cloridrato de 3-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-propan-l-ol
Agitar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-il- metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (153 mg, 0,50 mmol), carbonato de potássio (166 mg, 1,20 mmol), ácido [4-(3-hidroxipropil)fenil]borónico (108 mg, 0,60 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,006 g, 0,005 mmol) em N,N-dimetilacetamida (2 mL) . Adicionar água 256 ΡΕ2155717 (1 mL) e aquecer a 120°C ao longo de 20 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (10 mL) e extrair com DCM (3 x 10 mL). Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol. Purificar adicionalmente através de HPLC de fase reversa de pH elevado, e concentrar para dar a base livre como um sólido. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo (147 mg, 66%) . MS (ES)j_ m/z = 407 [M+H] + .
Exemplo 34m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-oxazol-2-il-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Agitar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (153 mg, 0,50 mmol) , carbonato de potássio (166 mg, 1,20 mmol) , 2- (4-ácido borónico-fenil)-oxazole (113 mg, 0,60 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,006 g, 0,005 mmol) em N,N-dimetilacetamida (1 mL) . Adicionar água (0,5 mL) , Desgasificar durante 5 min, e depois aquecer a 120°C ao longo de 17 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, 257 ΡΕ2155717 adicionar água (5 mL) e extrair com DCM (3x5 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®.
Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol. Purificar adicionalmente através de HPLC de fase reversa de pH baixo. Formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol e concentrar. Dissolver o sólido branco em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como sólido amarelo (0,060 g, 27%). MS (ES) j_ m/z = 416 [M+H] + .
Exemplo 35m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Dissolver 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (267 mg, 0,87 mmol) em N,N-dimetilacetamida (4 mL). Adicionar carbonato de potássio (289 mg, 2,09 mmol), 2-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano (274 mg, 258 ΡΕ2155717 1,05 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,0050 g, 0,0044 mmol), depois água (2 mL) e desgasificar com azoto durante 10 min. Aquecer a 120°C ao longo de 20 h, depois purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol. Eluir com amoniaco 2 M em metanol e concentrar. Purificar adicionalmente HPLC de fase reversa de pH elevado, para dar a base livre como um óleo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epigrafe como um pó amarelo (285 mg, 74%). MS (ES)j_ m/z = 407 [M+H] + .
Exemplo 36m: Cloridrato de N-(2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH- pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-fenil}-etil)-metanossulfonamida
Dissolver 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (307 mg, 1,0 mmol) em N,N-dimetilacetamida (4 mL) . Adicionar carbonato de potássio (331 mg, 2,4 mmol), ácido 4-sulfonilamino-etilbenzenoborónico (292 mg, 1,2 mmol), tetraquis(trifenil-fosfina)paládio(0) (0,0050 g, 0,0058 mmol), depois água (2 mL) e desgasificar com azoto durante 10 min. Aquecer a 120°C ao longo de 20 h, depois purificar através de croma- 259 ΡΕ2155717 tografia SCX-2® lavando com metanol. Eluir com amoníaco 2 M em metanol e concentrar. Recristalizar a partir de DMSO:me-tanol (1:1), filtrar e lavar com éter dietilico, para dar um pó esbranquiçado. Dissolver o pó em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo (365 mg, 71%) . MS (ES)j_ m/z = 470 [M+H] +.
Exemplo 37m: Cloridrato de 2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-2-metil-propionitrilo
Dissolver 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (307 mg, 1,0 mmol) em N,N-dimetilacetamida (4 mL) . Adicionar carbonato de potássio (332 mg, 2,4 mmol), 2-metil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil] -propionitrilo (300 mg, 1,2 mmol), tetraquis(trifenilfosfi-na)paládio(0) (0,0050 g, 0,0058 mmol), depois água (2 mL) e desgasificar com azoto durante 10 min. Aquecer a 120°C ao longo de 20 h, depois purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol. Eluir com amoníaco 2 M em metanol e concentrar. Purificar através de HPLC de fase 260 ΡΕ2155717 reversa do pH baixo, depois formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol e concentrar. Dissolver a base livre em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo claro (158 mg, 35%) . MS (ES)j_ m/z = 416 [M+H]+.
Exemplo 38m: Cloridrato de 2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-acetamida
Dissolver 3'-cloro-4-(l,5-dimetil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (307 mg, 1,0 mmol) em N,N-dimetilacetamida (4 mL). Adicionar carbonato de potássio (332 mg, 2,4 mmol), 2 — [4 — (4,4,5,5 — tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-acetamida (313 mg, 1,2 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,0050 g, 0,0058 mmol), depois água (2 mL) e desgasificar com azoto ao longo de 5 min. Aquecer a 120°C ao longo de 20 h, depois purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol. Eluir com amoníaco 2 M em metanol e concentrar. Purificar usando cromatografia de gel de sílica (eluindo com metanol: DCM 5:95 a 20:80) para dar um óleo. Dissolver a base livre em acetonitrilo e converter no sal 261 ΡΕ2155717 cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epigrafe como um pó amarelo claro (0,165 g, 37%). MS (ES)j_ m/z = 406 [M+H] + .
Exemplo 39m: Cloridrato de 3'-(4-tert-butoximetil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Dissolver 3'-cloro-4-(l,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (307 mg, 1,0 mmol) em N,N-dimetilacetamida (5 mL) . Adicionar carbonato de potássio (332 mg, 2,40 mmol) depois ácido 4-tert-butoximetilbenzenoborónico de (250 mg, 1,20 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,012 g, 0,01 mmol), depois água (1 mL) e desgasificar com azoto ao longo de 30 min. Aquecer a 110°C ao longo de 18 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (5 mL) e extrair com DCM (3x5 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol: DCM 0:100 a 10:90), para dar a base livre como um óleo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar, depois purificar através de croma-tografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com 262 ΡΕ2155717 amoníaco 2 M em metanol e concentrar. Purificar adicionalmente através de HPLC de fase reversa do pH baixo. Formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol e concentrar. Dissolver o sólido em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo (274 mg, 58%). MS (ES)j_m/z = 435 [M+H] +
Exemplo 40m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-oxazol-5-il-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Agitar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (153 mg, 0,50 mmol) , carbonato de potássio (166 mg, 1,20 mmol) , 5-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-oxazole (163 mg, 0,60 mmol) e tetraquis(trifenilfosfi-na)paládio(0) (0,006 g, 0,005 mmol) em N,N-dimetilacetamida (2 mL). Adicionar água (1 mL), Desgasificar durante 5 min, e depois aquecer a 120°C ao longo de 17 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (5 mL) e extrair com DCM (3x5 mL) . Passar os extratos DCM combinados através 263 ΡΕ2155717 de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 2,5 M em metanol. Recristalizar a partir de DMSO:metanol (50:50, 2,4 mL) , filtrar e lavar com éter dietilico. Recolher o precipitado a partir do filtrado, depois combinar os sólidos para dar a base livre 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-oxazol-5-il-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nilo como um sólido amarelo (147 mg, 71%). Dissolver a base livre (82 mg, 0,20 mmol) em acetonitrilo, adicionar HC1 aq. 2 M depois água. Liofilizar para dar o composto em epigrafe como pó amarelo (65 mg, 72%) . MS (ES)j_ m/z = 416 [M+H] .
Preparar compostos dos Exemplos 41 e 42 essencialmente como descrito para o Exemplo 40, aquecendo as reações entre 1 e 3 dias. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] 41m ,Yo Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-metoxi-metil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 98 393 42m Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-hidro-ximetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 90 379
Exemplo 43m: Cloridrato de {4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'— i1] — fenil}-acetonitrilo 264 ΡΕ2155717
Agitar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (921 mg, 3,00 mmol), carbonato de potássio (996 mg, 7,20 mmol), ácido (4-cianometilbenzeno)borónico (579 mg, 3,60 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,017 g, 0,015 mmol) em N,N-dimetilacetamida (6 mL) . Adicionar água (3 mL) , Desgasificar durante 5 min, e depois aquecer a 120°C ao longo de 24 h. Purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 20:80), para dar a base livre como um sólido amarelo (1,24 g, 100%). MS (ES)j_ m/z = 388 [M+H] + . Preparar o sal de HC1 como no Exemplo 41 para dar o composto em epígrafe (93%). MS (ES)j_ m/z = 388 [M+H].
Exemplo 44m: Cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-metanossulfonamida
Agitar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-il- 265 ΡΕ2155717 metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (921 mg, 3,00 mmol), carbonato de potássio (996 mg, 7,20 mmol), ácido (4-metanossulfonilaminometilbenzeno)borónico (825 mg, 3,60 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,017 g, 0,015 mmol) em N,N-dimetilacetamida (6 mL) . Adicionar água (3 mL) e aquecer a 120°C ao longo de 17 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (15 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL). Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 3,5 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 20:80), para dar a base livre como um pó amarelo (1,349 g, 99%). MS (ES)j_ m/z = 456 [M+H] + . Preparar o sal de HC1 como no Exemplo 41 para dar o composto em epigrafe (98%) . MS (ES)j_ m/z = 456 [M+H] .
Exemplo 45m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-[4-(1-metoxi-etil)-fenil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo isómero 1
Exemplo 46m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-[4-(1-metoxi-etil)-fenil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo isómero 2
266 ΡΕ2155717
Agitar 3'-cloro-4-(l,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (390 mg, 1,27 mmol), 2-[4-(1-metoxi-etil)-fenil]-4,4,5,5-tetrametil-[ 1,3,2]dioxaborolano racémico (400 mg, 1,53 mmol), carbonato de potássio (421 mg, 3,05 mmol) e tetraquis(trife-nilfosfina)paládio(0) (7 mg, 6 ymol) e água (2 mL), em N,N- dimetilacetamida (4 mL) à temperatura ambiente sob azoto. Desgasificar durante 10 min depois agitar a 120°C ao longo de 20 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 2 M em metanol. Purificar outra vez através de HPLC de fase reversa de pH baixo, e formar o racemato de base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 2 M em metanol. Separar isómeros através de SFC, usando uma coluna AD-H, eluindo com um gradiente de etanol a 10% (com isopropilamina a 0,2%) a 3 mL/min, para dar a base livre do isómero 1 como um óleo (176 mg, 34%), e a base livre de isómero 2 como um óleo (178 mg, 34%) . Isómero 1-[a] 2oD-31,8o (c = 0,5 g/100 mL) em metanol. Tempo de retenção do Isómero 1 = 10,44 min. Isómero 2-[a] 2o°+37,3o (c=0,5 g/100 mL) em metanol. Tempo de retenção do isómero 2 = 11,47 min. Dissolver cada das bases livres em aceto-nitrilo e converter nos sais cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar cada um separadamente para dar cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-[4-(1-metoxi-etil)-fenil]-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo isómero 1 como um pó 267 ΡΕ2155717 esbranquiçado (219 mg, 102%) . MS (ES)j_ m/z = 407 [M+H]+ e cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-[4-(1-metoxi-etil)-fenil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinilo isómero 2 como um pó esbranquiçado (194 mg, 114%) . MS (ES)j_ m/z = 407 [M+H] + .
Exemplo 47m: Sal cloridrato N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH- pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-fenil}-acetamida
Dissolver sal cloridrato de 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (0,5 g, 1,63 mmol) em N,N-dimetilaceta-mida (5 mL) e água (2 mL) . Adicionar ácido 4-acetamidofe-nilborónico (1,2 eq., 0,35 g, 1,96 mmol). Adicionar tetra-quis (trifenilfosfina)paládio(0) (0,01 eq., 0,019 g, 0,016 mmol). Adicionar carbonato de potássio (3,6 eq., 0,54 g, 3,9 mmol) . Aquecer a 90°C ao longo de 10 h. Purificar através de cromatografia de fase normal com amoníaco 7 N a 6% metanol/acetato de etilo para dar N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipira-zinil-3 '-il ]-fenil}-acetamida (0,25 g, 38%). MS(ES)j_ m/z = 406,2 [M+H]. Dissolver esta base livre (0,25 g, 0,6 mmol) em acetonitrilo (1 mL) e água (4 mL). Adicionar HCl 1 N aq. 268 ΡΕ2155717 (1 eq., 0,60 mmol, 0,60 mL). Congelar a solução até aos -78°C num banho de gelo-seco/acetona. Colocar a solução no liofilizador durante 48 h para dar o sal do composto em epígrafe (0,26 g, 99%). MS(ES)j_m/z = 406, 2 [M+H] .
Exemplo 48m: Cloridrato de éster de metilo de ácido {4 — [4 — (1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-carbâmico
H
Agitar em conjunto 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazi-nilo (307 mg, 1,00 mmol), ácido 4-(metoxicarbonilamino)ben-zenoborónico (234 mg, 1,2 mmol), carbonato de potássio (332 mg, 2,4 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,006 g, 0,005 mmol) e água (2 mL) , em N, N-dimetilacetamida (4 mL) à temperatura ambiente sob azoto, depois aquecer a 120°C ao longo de 5 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, purificar usando cromatografia SCX e purificar adicionalmente usando cromatografia de gel de sílica eluindo com (metanol:DCM 5:95 a 15:85). Dissolver em acetonitrilo, e adicionar HC1 aq. 2 M e água depois liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo claro (253 mg, 55%) . MS (ES)j_ m/z = 422 [M+H] . 269 ΡΕ2155717
Exemplo 49m: Cloridrato de 4-(3-(4-((1,3-dimetil-lH-piraz-ol-4-il)metil)piperazin-l-il)pirazin-2-il)benzoato de meti-lo
Carregar um tubo de micro-ondas com 3'-cloro-4-(1,3-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (0,150 g, 0,490 mmoles), com dicloreto de bis[(difenilfosfanil)metil]-amina-paládio(II) ligado a polímero (0,061 g, 0, 049 mmoles, 0,1 eq) , ácido 4-(metoxicarbonil)fenilborónico (0,176 g, 0,98 mmoles, 2 eq), carbonato de sódio (0,192 g, 1,8 mmoles, 3,7 eq) e 3 mL de etanol. Selar a reação e aquecer sob condições de micro-ondas a 140°C durante 30 min. Arrefecer a reação e aplicar o material bruto a uma coluna SCX pré-lavada com 10 mL metanol. Lavar o material com 10 mL de metanol, e libertar o produto com 20 mL de uma solução amoniaco 2 N/metanol. Purificar o óleo castanho bruto através de cromatografia de fase reversa (acetonitrilo isocrático a 28%/bicarbonato de amónio 0,01 M em água, 80 ml/min, durante 8 min, numa coluna C18 Xterra de 30 x 75 mm) para proporcionar 4-(3-(4-((1,3-dimetil-lH-pirazol-4-il)metil)piperazin-l-il)pirazin-2-il)benzoato de metilo como um sólido branco (0,051 g, 26% de rendimento, ES+(m/z) 407 [M+H]). Converter os materiais purificados no sal cloridrato por agitação de uma solução da base livre (0,045 g, 0,294 mmoles) em acetonitrilo (5 270 ΡΕ2155717 mL) à temperatura ambiente e adicionar HC1 1 N em água (0,294 ml, 0,294 mmoles) para dar uma solução amarela. Depois de 5 min, congelar a solução e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (0,056 g, rendimento de 100%, ES+(m/z) 407 [M+H]).
Exemplo 50m: Dicloridrato de 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamina
Agitar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (921 mg, 3,00 irtmol) , carbonato de potássio (996 mg, 7,20 mmol) , ácido 4-benziloborónico (Éster de tert-butilo de ácido carbâmico) (940 mg, 3,60 mmol) e tetraquis(trifenilfosfi-na)paládio(0) (0,017 g, 0,015 mmol) em N,N-dimetilacetamida (6 mL) . Adicionar água (3 mL), Desgasificar durante 5 min, e depois aquecer a 120°C ao longo de 20 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (10 mL) e extrair com DCM (3 x 10 mL). Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 15:85), para dar éster de tert-butilo de ácido N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6- 271 ΡΕ2155717 tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-carbâmico como um óleo (1,3 g, 91%) . MS (ES)j_ m/z = 478 [M+H] + .
Dissolver o óleo já referido (316 mg, 0,66 mmol) em DCM (10 mL), depois adicionar ácido trifluoroacético (1 mL). Agitar a reação ao longo de 3 h à temperatura ambiente e depois remover solventes in vacuo. Formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 3,5 M em metanol e concentrar para dar 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamina como um sólido esbranquiçado (230 mg, 92%). MS (ES)j_ m/z = 378 [M+H] + . Gerar o sal di-HCl como no Exemplo 40 para dar o composto em epígrafe (100%). MS (ES)j_ m/z = 378 [M+H] +.
Exemplo 51m: Cloridrato de 2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanol
Agitar em conjunto bis(dibenzilidenoacetona)paládio (0) (69 mg, 0,12 mmol) e triciclo-hexilfosfina (79 mg, 0,28 mmol) em N,N-dimetilacetamida (8 mL) à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 20 min. Adicionar 2-(4-bro-mo-fenil)-etanol (0,56 mL, 4,00 mmol), 4,4,5,5,4 ' , 4 ' , 5 ' , 5 ' - octametil-[2,2']bi[[1,3,2]dioxaborolanilo] (1,04 g, 4,10 272 ΡΕ2155717 mmol) e acetato de potássio (589 mg, 6,00 mmol) e agitar a 80°C ao longo de 16 h. Arrefecer a reação à temperatura ambiente, adicionar 3 '-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (614 mg, 2,00 mmol) e carbonato de potássio (663 mg, 4,80 mmol), depois água (4 mL) e agitar a 120°C ao longo de 20 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (20 mL), depois extrair com DCM (3 x 10 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 2,5 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol: DCM 5:95 a 15:85), para dar a base livre como um sólido castanho. Dissolver o sólido em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo claro (601 mg, 70%). MS (ES)j_ m/z = 393 [M+H]+.
Exemplo 52m: Cloridrato de N-(2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3'-il]-fenil}-2-oxo-etil)-acetamida
Preparar o composto em epígrafe usando métodos 273 ΡΕ2155717 similares aos do Exemplo 51 usando N-[2-(4-bromo-fenil)-2-oxo-etil]-acetamida (0,286 g, 59% de rendimento). MS (ES)j_ m/z = 448 [M+H] + .
Exemplo 53m: Cloridrato de 2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenilo}-N-metil-acetamida
HCI
Agitar em conjunto bis(dibenzilidenoacetona)paládio (0) (29 mg, 0,105 mmol) e triciclo-hexilfosfina (29 mg, 0,045 mmol) em N,N-dimetilacetamida (3 mL) à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 20 min. Adicionar 2-(4-bromo-fenil)-N-metil-acetamida (342 mg, 1,50 mmol), 4,4,5,5,4',4',5',5'-octametil-[2,2']bi[[1,3,2]dioxa-borolanilo] (394 mg, 1,55 mmol) e acetato de potássio (221 mg, 2,25 mmol) e agitar a 80°C ao longo de 4 h. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente, adicionar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (307 mg, 1,00 mmol) e carbonato de potássio (332 mg, 2,40 mmol), depois água (1,5 mL) e agitar a 120 °C ao longo de 18 h. Arrefecer até à temperatura ambiente e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 2 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 20:80), para dar a 274 ΡΕ2155717 base livre como um óleo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq. 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo (370 mg, 81%) . MS (ES)j_ m/z = 420 [M+H] +.
Exemplo 54m: Clordrato de {4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-2-fluoro-fenil}-metanol
Agitar em conjunto bis(dibenzilidenoacetona)paládio (0) (35 mg, 0,06 mmol) e triciclo-hexilfosfina (39 mg, 0,06 mmol) em N,N-dimetilacetamida (4 mL) à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 20 min. Adicionar (4-bromo-2-fluoro-fenil)-metanol (410 mg, 2,00 mmol), depois 4,4,5,5,4',4',5',5'-octametil-[2,2']bi[[1,3,2]dioxaboro-lanilo] (521 mg, 2,05 mmol) e acetato de potássio (294 mg, 3,00 mmol) e agitar a 80°C ao longo de 16 h. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente, adicionar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (307 mg, 1,00 mmol), carbonato de potássio (332 mg, 2,40 mmol) e água (2 mL) , depois agitar a 120°C ao longo de 4 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (10 mL) , depois extrair com DCM (3 x 20 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. 275 ΡΕ2155717
Concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol: DCM 5:95), para dar a base livre como um pó castanho claro. Dissolver um pó em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo claro (367 mg, 84%) . MS (ES)j_ m/z = 397 [M+H]+.
Exemplo 55m: Cloridrato de 2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenilo}-N,N-dimetil-acetamida
O composto em epígrafe é preparado usando métodos similares ao Exemplo 54, usando 2-(4-bromo-fenil)-N,N-dimetil-acetamida (0,404 g, rendimento de 86%). MS (ES)j_ m/z = 434 [M+H]+.
Exemplo 56m: Cloridrato de 3-{ 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-propionitrilo
276 ΡΕ2155717
Agitar em conjunto bis(dibenzilidenoacetona)paládio (0) (69 mg, 0,12 mmol) e triciclo-hexilfosfina (79 mg, 0,28 mmol) em N,N-dimetilacetamida (8 mL) à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 20 min. Adicionar 3- (4-bro-mo-fenil)-propionitrilo (840 mg, 4,00 mmol), 4,4,5,5,4 ' ,4', 5',5'-octametil-[2,2']bi[[1,3,2]dioxaborolanilo] (1,04 g, 4,10 mmol) e acetato de potássio (589 mg, 6,00 mmol) e agitar a 80°C ao longo de 16 h. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente, adicionar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nilo (614 mg, 2,00 mmol) e carbonato de potássio (663 mg, 4,80 mmol), depois água (4 mL) e agitar a 120°C ao longo de 20 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, adicionar água (20 mL) , depois extrair com DCM (3 x 10 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2,5 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol: DCM 5:95 a 15:85), concentrar e secar na forno de vácuo para dar a base livre como um óleo amarelo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HCl aq 2 M. Adicionar água e liofilizar. Formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 3 M em metanol e concentrar. Purificar adicionalmente através de HPLC de fase reversa de pH elevado, e concentrar e secar em forno de vácuo para dar a base livre como um óleo amarelo. Dissolver o óleo em 277 ΡΕ2155717 acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó beje (425 mg, 50%) . MS (ES) : m/z = 402 [M+H]\
Exemplo 57m: Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-propionitrilo Isómero
Agitar em conjunto bis(dibenzilidenoacetona)paládio (0) (35 mg, 0,06 mmol) e triciclo-hexilfosfina (39 mg, 0,06 mmol) em N,N-dimetilacetamida (4 mL) à temperatura ambiente sob azoto ao longo de 20 min. Adicionar 2-(4-bromo-fenil)-propionitrilo racémico (420 mg, 2,00 mmol), depois 4,4,5,5,4',4',5',5'-octametil-[2,2']bi[[1,3,2]dio-xaborolanilo] (521 mg, 2,05 mmol) e acetato de potássio (294 mg, 3,00 mmol) e agitar a 80°C ao longo de 16 h. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente, adicionar 3'-cloro-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (307 mg, 1,00 mmol), carbonato de potássio (332 mg, 2,40 mmol), tetraquis(trife-nilfosfina)paládio (0) (0,0050 g, 0,0056 mmol) e água (2
mL), depois agitar a 120°C ao longo de 8 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M 278 ΡΕ2155717 em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 20:80), para dar 2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-propionitrilo racemato da base livre como um pó (433 mg, 107%) . MS (ES) j_ m/z = 402 [M+H]+.
Cromatograf ia quiralj_ Separar isómeros através de SFC, usando uma coluna AD-H, eluindo com um gradiente de etanol a 30% (com isopropilamina a 0,2%) a 5 mL/min, para dar Isómero 1 2-{4-[4-(l,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}- propionitrilo como um sólido (171 mg, 39%). MS (ES)j_ m/z = 402 [M+H]+. Rotação Ótica [oí]2od +6° (c = 0,22 g/100 mL) em DCM. Tempo de retenção na coluna quiral = 1,47 min. Preparar o sal de HC1 como no Exemplo 40 para dar cloridrato de 2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)- 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-propionitrilo Isómero 1 (97%) . MS (ES)j_ m/z = 402 [M+H] .
Exemplo 58m: Cloridrato de 2-{4-[4-{1,5-dimeti]-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-propionitrilo Isómero 2
Preparar o racemato da base livre e conduzir 279 ΡΕ2155717 cromatografia quiral como no Exemplo 41 para obter 2—{4— [4 — (1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-propionitrilo Isómero 2 como um sólido (177 mg, 40%). MS (ES)j_ m/z = 393 [M+H] + . Rotação Ótica [α]2ο° -6o (c = 0,22 g/100 mL) em DCM. Tempo de retenção na coluna quiral = 1,79 min.
Preparar o sal de HCl como no Exemplo 41 para dar
Cloridrato de 2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-propionitrilo Isómero 2 (90%) . MS (ES)j_ m/z = 402 [M+H] .
Exemplo 59m: Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanol racémico
OH
Dissolver 1—[4—[4—(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-il-metil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanona (825 mg, 2,11 mmol) em metanol (30 mL) , depois adicionar boro-hidreto de sódio (120 mg, 3,17 mmol). Agitar a reação à temperatura ambiente ao longo de 60 min e depois remover algum solvente in vacuo. Temperar a reação com bicarbonato de sódio aq. saturado (10 mL) , adicionar água (50 mL) e extrair com DCM (3 x 50 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator 280 ΡΕ2155717
Frit® e concentrar. Purificar através de cromatografia de gel de silica, (eluindo com metanol:DCM 0:100 a 30:70), para dar a base livre como um óleo (393 mg, 47%) . MS (ES)_^ m/z = 393 [M+H]+.
Preparar o sal de HC1 como no Exemplo 40 para dar cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanol racémico (100%) . MS (ES)j_ m/z = 393 [M+H] .
Exemplo 60m: Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanol Isómero 1
Separar isómeros de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanol racémico através de SFC, usando coluna OJ-H, eluindo com um gradiente de metanol a 10% (com 0,2% isopropilamina) a 5 mL/min, para dar isómero 1 como um sólido (181 mg, 22%). MS (ES)j_ m/z = 393 [M+H] + . Rotação Ótica [a] 20° -0,214° (c = 1,0 g/100 mL) em DCM. Tempo de retenção na coluna quiral = 2,01 min. Preparar o sal de HC1 como no Exemplo 40 para dar cloridrato de 1—{4 — [4 — (1,5 — dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanol Isómero 1 (100%). MS (ES): m/z = 393 [M+H]. 281 ΡΕ2155717
Exemplo 61m: Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanol Isómero 2
Separar isómeros de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pi-razol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanol racémico através de SFC, usando coluna OJ-H, eluindo com um gradiente de metanol a 10% (com isopropilamina a 0,2%) a 5 mL/min, para dar Isómero 2 como um sólido (197 mg, 24%) . MS (ES)j_ m/z = 393 [M+H] + . Rotação Ótica [α]2ο° +0,210° (c = 1,0 g/100 mL) em DCM. Tempo de retenção na coluna quiral = 2,87 min. Preparar o sal de HC1 como no Exemplo 40 para dar o cloridrato de 1—{4 — [4 — (1,5 — dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-etanol Isómero 2 (100%). MS (ES)j_ m/z = 393 [M+H] .
Exemplo 62m: Cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-2-metoxi-acetamida
282 ΡΕ2155717
Dissolver 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamina (0,2 g, 0,53 inmol) em cloreto de metileno (5 mL) . Adicionar cloreto de metoxi-acetilo (1 eq., 0, 058 g, 0,53 mmol). Adicionar morfolina ligada a polimero (1,1 eq., 0,234 g, 0,58 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 3 h. Purificar através de SCX seguida de cromatografia de fase reversa para dar base livre N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinil-3-il]-benzil}-2-metoxi-acetamida, (0,051 g, 21%). MS (ES) m/z = 450,3 [M+H] .
Dissolver esta base livre (0,051 mg, 0,114 mmol) em acetonitrilo (1 mL) e água (4 mL). Adicionar HC1 1 N aq. (1 eq., 0,114 mmol, 0,114 mL). Congelar a solução até aos -78°C num banho de gelo-seco/acetona. Colocar a solução no liofilizador durante 48 h para dar o composto em epígrafe (0,058 g, 100%). MS(ES)j_m/z = 450,3 [M+H].
Preparar Exemplos 63-72 usando o mesmo método do Exemplo 62. Os rendimentos relatados dizem respeito aos dois passos de acilação/formação de sal de HC1.
Ex Estrutura Composto o. o Rendimento MS (ES) [M+H] 63m fNyCO-i]N HC, O Cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-3-metoxi-propionamida 31 464,3 ΡΕ2155717 283 (continuação)
Ex Estrutura Composto o "o Rendimento MS (ES) [M+H] 64m CçY “Xt, Ma HN^O Y Cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-3-metil-butiramida 49 462,3 65m ^XX, HCI HN^O Y Cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3, 4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-2-metil-butiramida 67 462,3 66m ^COQ1 hci HN^O Cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-propionamida 31 434,2 67m pxp Pa ” HNL^O Cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-butiramida 56 448,3 68m oYX{ PP Jj-N HCI HNvJL^ O ' Cloridrato de 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamida de ácido 3-metil-3H-imidazole-4-carboxílico 3 486,3 69m HCI I Cloridrato de 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamida de ácido pentanóico 44 462,3 70m cYP HCI HfÍ^O^ Cloridrato de éster de etilo de ácido [4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-carbâmico 43 450,3 284 ΡΕ2155717 (continuação)
Ex Estrutura Composto o, "S Rendimento MS (ES) [M+H] 71m Ύ Cloridrato de 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamida de ácido ciclopropa-nocarboxílico 11 446,3 72m HCI Ύ Cloridrato de éster de 2-fluoro-etilo de ácido {4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-carbâmico 42 468,3
Exemplo 73m; Cloridrato de 4-[4-(1,5-dimeti]-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamida de ácido tetra-hidro-furano-3-carboxílico racé-mico
Dissolver ácido tetra-hidro-furano-3-carboxílico racémico (0,067 g, 0,58 mmol) em cloreto de metileno (5 mL) . Adicionar hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi-tripirrolidinofosfónio (PyBOP) (0,453 g, 0,87 mmol). Adicionar 1-hidroxibenzotriazole (0,118 g, 0,87 mmol). Adicionar 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamina (0,24 g, 0,63 iranol) dissolver em cloreto de metileno (5 mL). Agitar à ta durante 5 min. Adicionar di-isopropiletilamina (0,113 g, 285 ΡΕ2155717 0,87 mmol) . Agitar à ta durante 4 h. Purificar através de cromatografia de fase normal (amoniaco 7 N em metanol a 4%/acetato de etilo) para dar 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamida de ácido tetra-hidro-furano-3-carboxílico racémica (0,107 g, 39%). MS(ES)j_ m/z = 476, 3 [M+H] . Dissolver este racemato (0,107 g, 0,23 mmol) em acetonitrilo (1 mL) e água (4 mL). Adicionar HCl 1 N aq. (1 eq., 0,23 mmol, 0,23 mL) . Congelar a solução até aos -78°C num banho de gelo-seco/acetona. Colocar a solução no liofilizador durante 48 h para dar o composto em epigrafe (0,110 g, 94%) . MS (ES) m/z = 476, 3 [M+H] .
Exemplo 74m: Cloridrato de 3-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-!,1-dimetil-urea
Dissolver 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamina (200 mg, 0,53 mmol) em DCM (5 mL) . Adicionar trietilamina (0,15 mL, 1,06 mmol) depois cloreto de dimetil-carbamoilo (0,04 mL, 0,53 mmol) e agitar a reação à temperatura ambiente ao longo de 3 h. Temperar a reação com água (10 mL) , e remover a camada orgânica usando um IST 286 ΡΕ2155717
Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar (cromato-grafia de gel de silica, eluindo com metanol: DCM 5:95 a 20:80). Combinar frações para dar a base livre como um óleo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M, adicionar água e liofilizar. Formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol. Concentrar depois dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo (178 mg, 63%) . MS (ES)j_ m/z = 449 [M+H]+
Exemplo 75m: Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-3-metil-ureia
Dissolver 4- [4- (1,5-dimetil-lií-pirazol-4-ilme-til) - 3, 4,5, 6-tetra-hidro-2fí- [1,2 ' ]bipirazinil-3'-il] -benzilamina (200 mg, 0,53 mmol) em DCM (5 mL) à temperatura ambiente sob azoto. Adicionar carbonildi-imidazole (94 mg, 0,58 mmol) e agitar durante 20 h. Adicionar uma solução de metilamina em tetra-hidrofurano (2 M, 2 mL, 4,0 mmol) e agitar a reação ao longo de 2 h à temperatura ambiente. Temperar a reação com água (10 mL) depois extrair com DCM 287 ΡΕ2155717 (2 χ 10 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 20:80), concentrar e secar em forno de vácuo durante o fim de semana para dar a base livre como um óleo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo claro (66 mg, 28%) . MS (ES)j_ m/z = 435 [M+H] .
Exemplo 76m: Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-3-etil-ureia
o
Dissolver 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilme- til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamina (0,35 g, 0,93 mmol) em tetra-hidrofurano (6 mL). Adicionar isocianato-etano (1 eq., 0,06 g, 0,84 mmol). Adicionar 4-(dimetilamino)piridina (0,05 eq., 0,005 g, 0,043 mmol) . Aquecer a 50°C ao longo de 17 h. Purificar através de cromatografia de fase normal com eluente amoníaco 7 N em metanol a 4%/acetato de etilo para dar 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-3-etil-ureia (0,252 g, 62%) . MS (ES) : m/z = 449, 3 [M+H] . Dissolver (0,252 g, 0,56 mmol) em acetonitrilo (1 mL) e água (4 mL) . ΡΕ2155717
Adicionar HC1 1 N aq. (1 eq., 0,56 mmol, 0,56 mL). Congelar a solução até aos -78°C num banho de gelo-seco/acetona. Colocar a solução no liofilizador durante 48 h para dar o composto em epígrafe (0,250 g, 97% de rendimento) . MS (ES)j_ m/z = 449,3 [M+H].
Exemplo 77m: Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-3-propil-ureia
O composto em epígrafe é obtido usando essencialmente os mesmos métodos como para o Exemplo 76 usando isocianato-propano (rendimento de 19%). MS(ES)j_ m/z = 463,3 [M+H].
Exemplo 78m: Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-3-metil-tioureia
Dissolver 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilme- 289 ΡΕ2155717 til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamina (115 mg, 0,30 mmol) em DCM (5 mL) , sob azoto, depois adicionar isotiocianato de metilo (22 mg, 0,30 mmol). Agitar a reação durante 22,5 h à temperatura ambiente. Adicionar outra porção de isotiocianato de metilo (10 mg, 0,13 mmol) e agitar durante 3 h. Temperar a reação com água (10 mL) , extrair com DCM (2x5 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, depois concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 20:80), para dar a base livre como um óleo amarelo claro. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó branco (92 mg, 63%) . MS (ES)j_ m/z = 451 [M+H] + .
Exemplo 7 9m: Cloridrato de éster de metilo de ácido {4 — [4 — (1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-carbâmico
o
Dissolver 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamina (200 mg, 0,53 mmol) em DCM (5 mL) . Adicionar trietilamina (0,15 mL, 1,06 mmol) depois cloroformato de 290 ΡΕ2155717 metilo (0,04 mL, 0,53 mmol) e agitar à temperatura ambiente ao longo de 1 h. Temperar a reação com água (10 mL) , e remover a camada orgânica usando um IST Phase Separator Frit®. Concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 20:80), para dar a base livre como um óleo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epigrafe como um pó esbranquiçado (213 mg, 84%). MS (ES)j_ m/z = 436 [M+H]+.
Exemplo 80mj_ Cloridrato de éster de 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nil-3'-il]-benzilo de ácido dimetil-carbâmico
o
Agitar {4—[4—(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol (200 mg, 0,53 mmol) em N,N-dimetilformamida seca (5 mL) sob azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo, 32 mg, 0,79 mmol), agitar durante 30 min, e depois adicionar cloreto de dimetil-carbamoilo (0,04 mL, 0,58 mmol) . Agitar a reação ao longo de 3 h à temperatura ambiente. Adicionar água (20 mL), depois hidrogenocarbonato de sódio aq. saturado (5 mL) , extrair com DCM (3 x 20 mL) . 291 ΡΕ2155717
Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 15:85), para dar a base livre como um óleo transparente. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo (79 mg, 30%) . MS (ES)j_ m/z = 450 [M+H] + .
Exemplo 81m: Cloridrato de éster de 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi-nil-3'-il]-benzilo do ácido metil-carbâmico
Dissolver {4— [4— (1,5-dimetil-lff-pirazol-4-ilme-til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol (200 mg, 0,53 mmol) em DCM (5 mL) à temperatura ambiente sob azoto. Adicionar carbonildi-imidazole (94 mg, 0,58 mmol) e agitar durante 20 h.
Adicionar uma solução de metilamina em tetra-hidrofurano (2 M, 2 mL, 4,0 mmol) e agitar a reação ao longo de 2 h à temperatura ambiente. Temperar a reação com água (10 mL) depois extrair com DCM (2 x 10 mL) , passar através de um IST Phase Separator Frit® e concentrar. Purificar através 292 ΡΕ2155717 de HPLC de fase reversa do pH baixo, e formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 3 M em metanol. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo (28 mg, 12%) . MS (ES)j_ m/z = 436 [M+H] +
Exemplo 82m: Cloridrato de 3-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il] -fenil}-N-metil-propionamida
Agitar ácido 3-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil) - 3,4,5,6-tetra-hidro-2fí-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-propiónico (420 mg, 1,0 mmol) em cloreto de tionilo (3 mL) à temperatura ambiente ao longo de 2 h. Concentrar in vacuo depois agitar em tetra-hidrofurano (5 mL) à temperatura ambiente. Adicionar a solução de metilamina em tetra-hidrofurano (2 M, 10 mL) e agitar durante 1 h. Temperar a reação com metanol, depois reduzir solventes in vacuo. Adicionar água (10 mL), extrair em DCM (3 x 20 mL) e passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar o filtrado e purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 293 ΡΕ2155717 0:100 a 15:85), para dar o produto como um óleo amarelo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal clori-drato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo escuro (210 mg, 45%) . MS (ES)j_ m/z = 434 [M+H] .
Exemplo 83m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-pirazol-l-ilmetil-fenil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[l,2'Jbipirazinilo
Adicionar hidreto de sódio (0,172 g de suspensão a 60% em peso em óleo mineral; 2,59 mmol) a uma solução de pirazole (0,183 g; 2,69 mmol) em DMF (5 mL) . Arrefecer a mistura até aos 5°C, agitar durante 30 min, remover o banho de arrefecimento, aquecer até à temperatura ambiente e agitar durante 30 min. Adicionar dicloridrato de 3'— (4 — clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3, 4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,253 g; 0,540 mmol) em 6 mL de DMF e agitar durante 20 h à temperatura ambiente. Temperar com uma solução de ácido acético aq. a 10% (9 mL) , adicionar metanol (volume minimo para alcançar uma solução homogénea) e adicionar a uma coluna SCX de 5 gm (Varian; pré-enxaguada com MeOH). Eluir o produto bruto com amoniaco 2 M em metanol (18 mL) e concentrar. Purificar através de cromatografia de gel de sílica eluindo com 294 ΡΕ2155717 metanol a 0-10%/diclorometano para dar 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-pirazol-l-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,140 g; 61%). MS (ES+) m/zj_ 429 (M+H) + . Purificar através de HPLC de fase reversa de pH elevado, e concentrar para dar a base livre pura. Dissolver a base livre em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 Μ 1 eq. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó esbranquiçado (126 mg). MS (ES)j_ m/z = 429 [M+H]+.
Exemplo 84m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-imidazol-l-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Agitar imidazole (116 mg, 1,84 mmol) em N,N-dimetilformamida seca (7 mL) sob azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão a 60% em peso em óleo, 74 mg, 1,85 mmol) e agitar durante 30 min à temperatura ambiente, adicionar dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (200 mg, 0,43 mmol) à temperatura ambiente e agitar à temperatura ambiente ao longo de 18 h. Temperar a reação com água (20 mL), extrair com DCM (3 x 20 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST 295 ΡΕ2155717
Phase Separator Frit®, concentrar e purificar (cromato-grafia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 15:85), para dar a base livre como um óleo transparente. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó de cor creme (119 mg, 65%) . MS (ES)j_ m/z = 429 [M+H] + .
Exemplo 85m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)— 3' — [4 —(2-metil-imidazol-l-ilmetil)-fenil]-3, 4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazinilo
Agitar 2-metil-imidazole (164 mg, 2,00 mmol) em N,N-dimetilformamida seca (5 mL) sob azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão a 60% em peso em óleo, 77 mg, 2,00 mmol), depois agitar durante 1 h à temperatura ambiente. Adicionar dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (233 mg, 0,50 mmol) à temperatura ambiente, seguido de iodeto de sódio (75 mg, 0,50 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20 h. Temperar a reação com água (20 mL) , extrair com DCM (3 x 10 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar através de HPLC de fase reversa de pH elevado, e concentrar para dar a base 296 ΡΕ2155717 livre. Dissolver a base livre em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando 1 eq solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epigrafe como um pó castanho claro (124 mg, 52%) . MS (ES)j_ m/z = 443 [M+H]+.
Exemplo 86m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-(1,2,4]triazol-l-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
Agitar 1,2,4-triazole (138 mg, 2,00 mmol) em N,N-dimetilformamida seca (5 mL) sob azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão a 60% em peso em óleo, 77 mg, 2,00 mmol), depois agitar durante 1 h à temperatura ambiente. Adicionar dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (233 mg, 0,50 mmol) à temperatura ambiente, seguido de iodeto de sódio (75 mg, 0,50 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20 h. Temperar a reação com água (20 mL) , extrair com DCM (3 x 10 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 15:85), para dar a base livre como um óleo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando 297 ΡΕ2155717 solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó branco (118 mg, 53%). MS (ES) m/z = 430 [M+H] + .
Preparar Exemplos 87-88 essencialmente como descrito para o Exemplo 86 usando o heterociclo apropriado e dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinilo. Rendimentos obtidos são para a transformação em dois passos desde o cloreto de benzilo até ao sal de HC1 final. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] 87m HCI Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3'-(4-[l,2,3]triazol-l-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 23 430 88m I HCI W 0 Cloridrato de 1—{4— [4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-imidazolidin-2-ona 21 447 m η oQm· Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-Exemplo 8 9nn_ /1 ·π 4,5, 6-tetra-hidro-2H- [1,2 ' ] bipirazinil-3 '-il] - 4-ilmetrl) J' , i ioeridin-2-ona benzil} -pipeJ--^
298 ΡΕ2155717
Adicionar hidreto de sódio (0,175 g de suspensão a 60% em peso em óleo mineral; 2,62 mmol) a uma solução de piperidin-2-ona (0,270 g; 2,73 mmol) em DMF (5 mL). Arrefecer a mistura até aos 5°C, agitar durante 30 min, remover o banho de arrefecimento, aquecer até à temperatura ambiente e agitar durante 30 min. Adicionar dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilme-til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (0,253 g; 0,540 mmol) em 6 mL de DMF e agitar durante 20 h à temperatura ambiente. Temperar com uma solução de ácido acético aq. a 10% (9 mL) , adicionar metanol (volume minimo para alcançar a solução homogénea) e adicionar a uma coluna SCX de 5 gm (Varian; pré-enxaguada com MeOH). Eluir o produto bruto com amoníaco 2 M em metanol (18 mL) e concentrar. Purificar através de cromatografia de gel de sílica eluindo com metanol a 0-10%/DCM para dar 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi-nil-3'-il]-benzil}-piperidin-2-ona (0,180 g; 73%). MS (ES+) m/z: 460 (M+H)+. Purificar através de HPLC de fase reversa de pH elevado, e concentrar para dar a base livre. Dissolver a base livre em acetonitrilo e converter no sal clori-drato adicionando 1 eq. de solução de HC1 aq. 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó castanho (164 mg, 66%). MS (ES)j_ m/z = 460 [M+H] + .
Exemplo 90m: Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-pirrolidin-2-ona 299 ΡΕ2155717
Agitar pirrolidinona (0,14 mL, 1,85 mmol) em N,N-dimetilformamida seca (5 mL) sob azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão a 60% em peso em óleo, 74 mg, 1,85 mmol), depois mais N,N-dimetilformamida seca (5 mL), agitar durante 30 min à temperatura ambiente, depois a 40 °C ao longo de 30 min. Adicionar dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (200 mg, 0,46 mmol) à temperatura ambiente, seguido de iodeto de sódio (69 mg, 0,46 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 90 min. Temperar a reação com água (15 mL), extrair com DCM (3 x 10 mL). Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 3,5 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol: DCM 5:95 a 20:80), para dar a base livre como um óleo amarelo claro. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó cor-de-rosa (142 mg, 64%) . MS (ES)j_ m/z = 446 [M+H] +. 300 ΡΕ2155717
Exemplo 91m: Cloridrato de 3-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-oxazolidin-2-ona
Agitar oxazolidin-2-ona (160 mg, 1,85 mmol) em N,N-dimetilformamida seca (7 mL) sob azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão a 60% em peso em óleo, 74 mg, 1,85 mmol) e agitar durante 30 min à temperatura ambiente. Adicionar dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (200 mg, 0,46 mmol) à temperatura ambiente, seguido de iodeto de sódio (69 mg, 0,46 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 17 h. Temperar a reação com água (20 mL) , extrair com DCM (3 x 15 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar através de croma-tografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 3,5 M em metanol. Purificar adicionalmente (croma-tografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 15:85), para dar a base livre como um sólido amarelo claro. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó cor-de-rosa (142 mg, 64%). MS (ES)j_ m/z = 448 [M+H] + . 301 ΡΕ2155717
Preparar Exemplos 92-93 essencialmente como descrito no Exemplo 91 usando o heterociclo apropriado e dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazi-nilo. Rendimentos mostrados são para a transformação em dois passos desde o cloreto de benzilo até ao sal de HC1. EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] 92m KC' J r° Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pira-zol-4-ilmetil)-3'-[4-(1,l-dioxo-ΐλ6-[1,2]tiazinan-2-ilmetil)-fenil]-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo 60 496 93m cx n y-N 1 Cloridrato de 3—{4—[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3’—il]-benzil}-tiazolidina-2,4-diona 25 478
Exemplo 94m: Cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-N-metil-acetamida
Dissolver N-metil-acetamida (187 mg, 2,55 mmol) em N,N-dimetilformamida seca (5 mL) à temperatura ambiente sob azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo, 102 mg, 2,55 mmol), agitar durante 1 h, depois adicionar dicloridrato de 3'-(4-clorometilfenil)-4-(1,5- 302 ΡΕ2155717 dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil) -3, 4,5, 6-tetra-hidro-2fí-[1,2' ] bipirazinilo (300 mg, 0,64 mmol) e iodeto de sódio (96 mg, 0,64 mmol). Agitar a reação a 50°C ao longo de 20 h, depois temperar com água (10 mL) . Extrair com DCM (4 x 10 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Purificar usando cromatografia SCX-2, eluindo com amoníaco 3 M em metanol e purificar adicionalmente usando cromatograf ia de gel de sílica (eluindo com 5:95 metanol:DCM). Dissolver o óleo transparente em acetonitrilo, e adicionar HC1 aq. 2 M e água depois liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo claro (87 mg, 29%) . MS (ES)j_ m/z = 434 [M+H].
Exemplo 95m: Cloridrato de 2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benziloxi}-N-metil-acetamida
H
Dissolver {4—[4—(1,5-dimetil-lfí-pirazol-4-ilme-til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2,]bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol (189 mg, 0,50 mmol) em N,N-dimetilformamida seca (3 mL) à temperatura ambiente sob azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão a 60% em peso em óleo, 24 mg, 0,60 mmol), agitar reação ao longo de 1 h, depois adicionar 2-cloro-IV-metil-acetamida (56 mg, 0,53 mmol) e agitar a reação ao longo de 20 h. Temperar a reação com água (50 303 ΡΕ2155717 mL), depois extrair com DCM (3 x 20 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Purificar (cromatografia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 20:80), concentrar para dar a base livre como um óleo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó castanho (90 mg, 40%) . MS (ES)j_ m/z = 450 [M+H] .
Exemplo 96m: Cloridrato de 2-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il] -fenoxi}-acetamida
Dissolver 4- [4- (1,5-dimetil-lfí-pirazol-4-ilme-til)-3,4,5,6-tetra-hidro-2fí-[l,2']bipirazinil-3'-il] -fenol (182 mg, 0,50 mmol) em N, N-dimetilformamida seca (3 mL) à temperatura ambiente sob azoto. Adicionar hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo, 24 mg, 0,60 mmol), agitar reação durante 1 h, depois adicionar cloroacetamida (49 mg, 0,53 mmol) e agitar a reação ao longo de 20 h. Temperar a reação com água (50 mL) , extrair com DCM (3 x 10 mL) e passar através de um IST Phase Separator Frit®. Purificar (cromatograf ia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 5:95 a 20:80), concentrar para dar a base livre como um óleo. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal clori- 304 ΡΕ2155717 drato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo brilhante (164 mg, 72%). MS (ES): m/z = 422 [M+H].
Exemplo 97m: Cloridrato de N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'—il]— benzil}-N-metil-metanossulfonamida
Dissolver N-{4-[4-(l,5-dimetil-lH-pirazol-4- ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzil}-metanossulfonamida (200 mg, 0,44 mmol) em DCM seco (5 mL) sob azoto. Adicionar trifenilfosfina (173 mg, 0,66 mmol) e agitar durante 20 min à temperatura ambiente. Adicionar metanol (0,02 mL, 0,53 mmol) e azodicarboxilato de dietilo (0,09 mL, 0,53 mmol) e agitar durante 2 h. Adicionar água (10 mL), extrair com DCM (3 x 10 mL), passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit® e concentrar. Purificar (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 15:85), para dar a base livre como um óleo transparente. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo (120 mg, 53%). MS (ES)j_ m/z = 470 [M+H] + . 305 ΡΕ2155717
Exemplo 98m: Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'—il]— benzi1}-pirrolidino-2,5-diona
Dissolver succinimida (99 mg, 1,0 mmol) em DCM seco (5 mL) sob azoto. Adicionar trifenilfosfina (408 mg, 1,5 mmol) e agitar durante 20 min à temperatura ambiente. Adicionar {4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-metanol (378 mg, 1,0 mmol) e azodicarboxilato de dietilo (0,19 mL, 1,1 mmol) e agitar durante 20 h. Adicionar água (10 mL), extrair com DCM (2x5 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 2 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 5:95), para dar uma base livre como um óleo amarelo claro. Purificar outra vez através de HPLC de fase reversa de pH baixo, e formar a base livre passando através de um cartuxo de permuta iónica SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoníaco 3,5 M em metanol. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 ag 2 M. Adicionar 306 ΡΕ2155717 água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo (127 mg, 26%). MS (ES)j_ m/z = 460 [M+H] + .
Exemplo 99m: Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-metanossulfonilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2'Jbipirazinilo
Agitar metanossulfinato de sódio (188 mg, 1,84 mmol) em N,N-dimetilformamida seca (5 mL) sob azoto. Adicionar dicloridrato de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinilo (200 mg, 0,46 mmol) à temperatura ambiente, seguido de iodeto de sódio (69 mg, 0,46 mmol). Agitar à temperatura ambiente ao longo de 20 h. Temperar a reação com água (10 mL) , extrair com DCM (3 x 10 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar através de cromatografia SCX-2® lavando com metanol depois eluindo com amoniaco 3,5 M em metanol. Purificar adicionalmente (cromatografia de gel de sílica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 15:85), para dar a base livre como um óleo transparente. Dissolver o óleo em acetonitrilo e converter no sal cloridrato adicionando solução de HC1 aq 2 M. Adicionar água e liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó branco (36 mg, 17%) . MS (ES)j_ m/z = 441 [M+H] + . 307 ΡΕ2155717
Exemplo 100m: Cloridrato de N-{4-[4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nil-3'-il]-benzi1}-acetamida
Carregar um tubo de carrossel com carbonato de potássio (185 mg, 1,34 mmol), 3'-cloro-4-(3-metil-l-fenil- lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipira-zinilo, (200 mg, 0,54 mmol), ácido (4-acetamidometilfenil)-borónico (127 mg, 0,65 mmol) e tetraguis(trifenilfosfina)-paládio (13 mg, 0,011 mmol) em DMA (2 mL). Purgar com azoto e deixar em agitação sob azoto a 120°C de um dia para o outro. Arrefecer a reação até à temperatura ambiente. Diluir com água (10 mL) e extrair com DCM (3 x 10 mL) e descartar a camada aq. Concentrar até à secura. Purificar o material bruto através de cromatografia de sílica "flash" eluindo com (metanol:DCM 2/98 a 5/95) depois através de HPLC preparativa para dar a base livre (101 mg). Preparar o sal cloridrato adicionando HCl e liofilizar a solução para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo pálido (86 mg, 30 %) . MS (ES)j_m/z = 482 [M+H] + .
Exemplo lOlm: Cloridrato de N-{4-[4-(3, 5-dimetil-l-piridin-2-il-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-acetamida 308 ΡΕ2155717
Adicionar triacetoxiboro-hidreto de sódio (231 mg, 1,04 mmol) a uma solução de N-[4-(3,4,5,6-tetra-hidro-2H- [1,2']bipirazinil-3'-il)-benzil]-acetamida (215 mg, 0,69 mmol) e 3,5-dimetil-l-piridin-2-il-lH-pirazole-4-carbo-xaldeído (208 mg, 1,03 mmol) em THF (3,5 mL) . Manter a agitação durante 3 h e temperar adicionando NaHCCb (5 mL) . Extrair com DCM (3 x 10 mL) e descartar a filtração da fase aq. através de um IST Phase Separator Frit®. Concentrar até à secura e purificar através de HPLC preparativa depois purificar através de cromatografia de permuta iónica SCX-2®, eluindo com NH3 2 M em MeOH para dar a base livre. Preparar o sal cloridrato adicionando HC1 e liofilizar a solução para dar o composto em epígrafe (200 mg, 54 %). MS (ES)j_ m/z = 497 [M+H] + .
Exemplo 102m: Cloridrato de 4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)—3' — (4—[1,2,3]triazol-2-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo
309 ΡΕ2155717
Adicionar hidreto de sódio (173 mg, 4,33 mmol) a uma solução de 1H-1,2,3-triazole (308 mg, 4,33 mmol) em DMF (3 mL). Manter a agitação sob azoto ao longo de 1 h depois adicionar iodeto de sódio (162 mg, 1,08 mmol) e uma solução de 3'-(4-clorometil-fenil)-4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo (495 mg, 1,08 mmol) em DMF (8 mL) . Manter a agitação sob azoto ao longo de 20 h. Temperar adicionando água (10 mL), lavar com DCM (3 x 10 mL) e descartar a fase aq. Concentrar até à secura para dar uma mistura de 4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)—3'—(4—[1,2,3]triazol-l-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo e 4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)—3'—(4—[1,2,3]triazol-2-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo. Purificar primeiro através de HPLC preparativa depois através de cromatografia de permuta iónica SCX-2®, eluindo com NH3 2 M em MeOH para dar 4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'—(4—[1,2,3]triazol-2-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H- [1,2' ] bipirazinilo (98 mg). MS (ES)j_ m/z = 492 [M+H]+ 2 min.
Preparar o sal cloridrato adicionando HC1 e liofilizar a solução para dar o composto em epígrafe (98 mg, 18%, MS (ES)j_m/z = 492 [M+H]+).
Exemplo 103m: Cloridrato de {4-[4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipirazi-nil-3'-il]-fenil}-acetonitrilo 310 ΡΕ2155717
Agitar em conjunto 3'-cloro-4-(5-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipira-zinilo (177 mg, 0,480 mmol), ácido 4-(cianometil)benzeno-borónico (93 mg, 0,576 mmol), carbonato de potássio (159 mg, 1,15 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,003 g, 0,003 mmol) e água (1 mL) , em N,N-dimetilace-tamida (2 mL) à temperatura ambiente sob azoto, depois aquecer a 120°C ao longo de 4 h. Arrefecer até à temperatura ambiente, diluir com água (5 mL) e extrair com DCM (3 x 20 mL) . Passar os extratos DCM combinados através de um IST Phase Separator Frit®, concentrar e purificar (cromato-grafia de gel de silica, eluindo com metanol:DCM 0:100 a 5:95) . Secar num forno de vácuo de um dia para o outro, depois dissolver o óleo amarelo em acetonitrilo. Adicionar HC1 aq. 2 M e água depois liofilizar para dar o composto em epígrafe como um pó amarelo escuro (168 mg, 72%) . MS (ES) m/z = 450,2 [M+H].
Compostos dos exemplos 104-107 são preparados essencialmente como no Exemplo 103 usando o cloreto e ácido borónico apropriados. 311 ΡΕ2155717 EX Estrutura Composto Rendimento (%) MS (ES) [M+H] 104m rrvi O) HCI lll N Cloridrato de {4- [4-(3,5-dimetil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3, 4, 5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-acetonitrilo 62 464,2 105m nrxi 7¾¾ HY o Cloridrato de N-{4-[4-(3,5-dimetil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4, 5,6-tetra-hidro-2H-[1,2'Jbipira-zinil-3'-il]-benzil}-acetamida 69 496 106m rrti ò Ha II N Cloridrato de {4-[4-(3-metil-l-fe-nil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}-acetonitrilo 52 450 107m rrti _E_CU_ Cloridrato de [2-fluoro-4-[4-(3-me-til-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3 '-il]-fenil}-metanol 59 459
Exemplo 108m; {4-[4-(1,5-Dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)- 3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-fenil}- metanol
0 composto em epígrafe é preparado usando métodos essencialmente como descrito para N-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazi-nil-3'-il]-benzil}-metanossulfonamida usando ácido 4-hidro-ximetilborónico. (0,380 g, 100%) . MS (ES)j_ m/z = 379 [M+H]+. 312 ΡΕ2155717
Os antagonistas do recetor 5-HT7 da presente invenção são relativamente seletivos para o recetor 5-HT7. Os compostos da presente invenção são particularmente relativamente seletivos para o recetor 5-HT7 em comparação com outros subtipos de recetores 5-HT e especificamente com os recetores 5-HTiA, 5-HTiB e 5-HTiD. Esta seletividade é demostrada nos seguintes ensaios de ligação a recetor e ensaios de atividade antagonista do recetor.
Preparação de Membranas:
Membranas para ensaios de afinidade e actividade antagonista são preparadas essencialmente como se segue. Células AV-12, que expressam de forma estável o recetor 5-HT7, são cultivadas como uma mono-camada em balões de 5xT-150 em DMEM/F12 (3:1) 5% de FBS, HEPES 20 mM, 400 mg/mL de geneticina, 50 mg/mL de tobramicina. Depois de cresceci-mento até aos 90% de confluência o meio é removido e reposto com meio Hybritech contendo soro de cavalo a 2%, 100 mg/mL de sulfato de dextrano, 1 mg/mL de nucelina, 1 mg/mL de transferrina humana (parcialmente saturada com ferro), 50 mg/mL de tobramicina, HEPES 20 mM, 100 mg/mL de geneticina, plurónico F68 a 0,04%. As células são cultivadas de um dia para o outro para condicionar o meio. Na manhã seguinte o meio condicionado (~150 mL do total) é removido e colocado de parte num contentor estéril. As células são tripsinizadas e recolhidas no meio condicionado. O meio de suspensão recente é adicionado para 313 ΡΕ2155717 levar o volume total até 500 mL e até uma densidade celular de 5 x 105 células/mL. O volume da cultura em suspensão é repetidamente aumentado ao longo das 3 semanas seguintes até ao volume e densidade desejados até à colheita (densidade celular atingida de aprox. 3,5-4,0 x 106 células por mL). Células são colhidas por centrifugação a 1500 g a 4°C ao longo de 30 min. O sobrenadante é decantado e os peletes celulares são ressuspensos em solução salina arrefecida com gelo tamponada com fosfato (PBS). A suspensão celular é dividida em partes aliquotas em tubos de centrifugação de 50 mL e centrifugada a 1500 g a 4°C ao longo de 15 min. O sobrenadante é removido, e os peletes são pesados, e depois congelados em gelo seco.
Para preparar membranas, os peletes acima referidos são ressuspensos em tampão Tris arrefecido com gelo (Tris HC1 20 mM, pH 7,4 a 23°C, EDTA 5 mM) e homogeneizados com um moinho de tecidos Wheaton. O lisado é subsequentemente centrifugado a 200 x g durante 5 min a 4°C afim de peletizar fragmentos grandes os quais são descartados. O sobrenadante é recolhido e centrifugado a 40000 x g durante 60 min a 4°C. O pelete resultante é ressuspenso num tampão final contendo Tris HC1 50 mM e EDTA 0,5 mM, pH 7,4. Preparações de membrana são repentinamente congeladas em gelo seco e armazenadas a -80°C. Concentrações de proteina são determinadas pelo método de Bradford. Anal. Biochem., 72:248-254, 1976.
Para ensaios funcionais de cAMP, as referidas 314 ΡΕ2155717 células que expressam 5-HT7 são cultivadas em balões de 150 cm2 e processadas essencialmente como se segue. O meio é aspirado dos balões e as células são lavadas com 1 mL de PBS. As células são tripsinizadas e ressuspensas em meio completo. A amostra da célula é contada e o remanescente é centrifugado como referido anteriormente durante 3 min. O pelete celular resultante é ressuspenso em PBS a uma concentração de 1 x 106 células per mL e usado diretamente no ensaio cAMP como descrito.
Afinidade do recetor 5-HT7: Ensaio de ligação radioligando: A ligação a [3H] 5-HT é realizada usando modificações das condições do ensaio reportadas por Kahl et al.(J. Biomo. I. Screen, 2: 33-40 (1997), essencialmente como se segue. Ensaios de ligação a radioligando são conduzidos em placas de microtitulação de 96 cavidades, num volume total de 125 μΐ contendo o seguinte tampão de reação: Tris 50 mM, MgCl2 10 mM, EDTA 0,2 mM, pargilina 10 mM, ascorbato a 0,1%, pH 7,4 à temperatura ambiente. A ligação de competição é conduzida usando onze concentrações de compostos de teste variando entre 0,1 a 10 000 nM, na presença de 1 nM [3H]5-HT. 5-HT não marcado (10 μΜ) é usado para definir a ligação não especifica. A reação de ligação é iniciada através da adição de 0,15 pg de homogenato de membranas (2,5 pg/μΐ) e 0,5 mg de fluoromicroesferas de ensaio de proximidade de cintilação. As reações são incubadas à temperatura ambiente ao longo de 3 h e depois contadas num contador de cintilações Trilux Microbeta™ para 315 ΡΕ2155717 detetar radioligando ligado a recetor-limite. Os dados de ligação são analisados por análise de ajustamento de 4 parâmetros de assistida por computador (ID Business Solutions Ltd, Guildford, Surrey, UK). Os valores de IC5o são convertidos em valores Ki usando a equação Cheng-Prusoff. Biochem. Pharmacol., 22: 3099-3108 (1973).
As afinidades de ligação dos compostos da presente invenção podem ser determinadas essencialmente como já descrito anteriormente e são geralmente consideradas como tendo excelente afinidade para o recetor 5-HT7. Valores de K± são geralmente < 500 nM. Compostos preferidos têm K±' s ^ 50 nM. Compostos mais preferidos são aqueles com Ki' s ^ 20 nM. Compostos exemplificados são testados essencialmente como descrito e considera-se terem Ki's ^ 200 nM. O composto do Exemplo 142 é testado essencialmente como descrito e considera-se ter um K± de cerca de 44 nM.
Afinidade para outros subtipos de receptor de serotonina bem como para recetores adrenérgicos alfa 1 & 2 podem prontamente ser determinados por modificação do ensaio de ligação a receptor de radioligando descrito anteriormente usando membranas derivadas de células que expressam de forma estável o subtipo de receptor desejado incluindo os subtipos 5-HTia, 5-HTib, e 5-HT id, bem como os subtipos de recetores 5-HT2A, 5-HT2b, 5-HT2c, 5-HT4, 5-HTs, e 5-HT6. A relação de seletividades Kí-x/Kí-5Ht7 , onde Ki-X é 0 K± para 0 recetor a ser comparado, é indicativa da 316 ΡΕ2155717 afinidade relativa de um composto para o recetor 5-HT7. As afinidades de ligação de compostos da presente invenção podem ser determinadas nestes tipos de recetores adicionais e mostraram ter relações de seletividade geralmente ^ 2,0 contra outros recetores serotonérgicos. Os compostos preferidos têm relações de seletividade ã 10. Geralmente, as relações de seletividade contra os recetores andro-nérgicos mostrou ser > 20-100. Os compostos exemplificados são testados e mostraram ter relações de seletividade contra outros recetores serotonérgicos de ^ 2 e contra recetores andronergécos de ^ 2. O composto do Exemplo 142 é testado essencialmente como descrito e mostrou ter o perfil de seletividade que se segue:
Receptor Ki (nM) 5-HT1A 1250 5-HT1b >3580 5-HT1d >2400 5-HT2a >7470 5-HT2b >3160 5-HT2c >8200 5-HT4 >6310 5-HTs >7020 5-HT6 >1790 5-HT7 44 alfa 1 adrenérgico >1440 alfa 1 adrenérgico 933 317 ΡΕ2155717
Ensaio antagonista funcional: Medição de formação de cAMP: 0 recetor 5-HT7 é acoplado funcionalmente a uma proteína G como medido pela capacidade da serotonina e fármacos serotonérgicos de estimmular a produção de cAMP em células CHO transfectadas com o recetor 5-HT7. (Ruat, et ai., Proceedings of the National Academy of Sciences (USA), 90:8547-8551, 1993.) Em conformidade, a actividade do recetor funcional pode ser medida pela medição da atividade da adenilato-ciclase usando um estojo ("kit") de ensaio fluorescente resolvido por tempo, homogéneo, baseado em células, disponível comercialmente, como por exemplo o estojo ("kit") produzido por Cisbio-US, Inc. (Bedford, MA). Essencialmente, e usando o protocolo e reagentes proporcionados pelo fabricante, aproximadamente 20 000 células humanas AV-12 que expressam o recetor 5-HT7 (como descrito anteriormente) são usadas com concentrações de dose do composto de teste na gama descrita para o ensaio de ligação. As curvas de resposta a dose EC-90 para 5-HT são medidas em paralelo para demonstrar antagonismo competitivo. Uma curva padrão de cAMP é também executada em cada experimentação. Depois das placas de ensaio serem lidos num instrumento de Envision™ (Perkin-Elmer, Wellesley MA) , os dados são normalizados para a curva padrão e convertidos em percentagem de inibição para análise de dados como descrito anteriormente para os resultados do ensaio de ligação a recetor. A Kb (nM) é calculada como uma medida da potência antagonista do composto. 318 ΡΕ2155717
Os compostos da presente invenção pode ser testados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram ser geralmente antagonistas do receptor 5-HT7. Os compostos preferidos são antagonistas totais do recetor 5-HT7. Outros compostos preferidos são aqueles que têm percentagem de inibição > 75%. Ainda outros compostos preferidos são aqueles que têm Kb < 50 nM. O composto do Exemplo 74 é testado essencialmente como descrito e mostrou ser um antagonista total mostrando uma Kb de cerca de 44 nM (inibição = cerca de 96%).
Modelo Animal do Extravasamento de Proteína de Plasma Durai (PPE) . O modelo do extravasamento de proteína de plasma durai é um modelo estabelecido para a enxaqueca. A capacidade de um composto de teste de reduzir extravasamento de proteínas de plasma na dura sob condições de ensaio é considerada indicativa da capacidade do composto para reduzir ou prevenir a inflamação durai considerada como sendo sintomática da enxaqueca, (ver Johnson, K.W., et ai., Neuroreport, 8 (1997) 2237-2240.) [0641] Para compostos de ensaio no que respeita à sua capacidade de reduzir ou prevenir extravasamento de proteína de plasma durai, ratazanas macho Harlan Sprague-Dawley (250-350 g) são anestesiados com pentobarbital sódico (65 mg/kg, i.p.) e colocados numa grade estereotáxica (David Kopf Instruments) com a barra incisora 319 ΡΕ2155717 ajustada em -2,5 mm. A seguir a uma incisão na linha média sagital do couro cabeludo, 2 pares de orifícios bilaterais são perfurados através do crânio (3,2 mm posteriormente, 1,8 e 3,8 mm lateralmente, todas as coordenadas referenciadas a bregma). Pares de elétrodos de estimulação de aço inoxidável, isolados excepto nas pontas (Rhodes Medicai Systems, Inc.), são descidos através de buracos em ambos os hemisférios até uma profundidade de 9,2 mm. 0 composto de teste é administrado por via intravenosa (i.v.) na veia femoral num volume de dosagem de 1 mL/kg. Aproximadamente 8 min após a injeção, são dadas aos animais doses de isotiocianato de Fluoresceína-albumina de soro bovino (FITC-BSA) (20 mg/kg, i.v.). O FITC-BSA funciona como um marcador para o extravasamento de proteína. Dez min após injeção do composto de teste, o gânglio trigeminal esquerdo é estimulado eletricamente durante 5 min com uma intensidade de corrente de 1,0 mA (5 Hz, pulso de 5 mseg a cada 200 mseg) com um Model S48 Grass Instrument Stimulator com unidade de isolamento fotoelé-trico PSIU6 (Grass-Telefactor).
Em alternativa, as ratazanaz em jejum de um dia para o outro são dadas doses oralmente com composto de teste através de sonda num volume de 2 mL/kg. Aproximadamente 50 min após dosagem, os animais são anestesiados e colocados na grade estereotáxica como descrito anteriormente. Aos animais são dadas doses com FITC-BSA (20 mg/kg, i.v.) aos 58 min após dosagem p.o. 320 ΡΕ2155717
Sessenta min após dosagem de composto, os animais são estimulados eletricamente como descrito anteriormente.
Cinco min depois do fim da estimulação, os animais são mortos por exsanguinação com 40 mL de solução salina. O topo do crânio é removido e as amostras da membrana durai são removidas de ambos os hemisférios, enxaguadas com água, e espalhadas horizontalmente em lâminas microscópicas. Um vez perfurados, os tecidos são lamelados com uma solução de glicerol/água a 70%. A quantidade de FITC-BSA para cada amostra é quantificada com um microscópico fluorescente (Zeiss) equipado com uma monocromador de rede, um espectrofotó-metro, e uma plataforma acionada por computador. Medições de florescência são tomadas em 25 pontos numa grade de 5 x 5 em passos de 500 ym em cada amostra durai com um comprimento de onda de excitação de aproximadamente 490 nm e intensidade de emissão medida aproximadamente 535 nm. São determinados a média e o desvio padrão das 25 medições. O extravasamento induzido pela estimulação elétrica do gânglio trigeminal é um efeito ipsilateral (i.e. ocorre apenas no lado da dura em que o gânglio trigeminal foi estimulado) . Isto permite o uso da outra (não estimulada) metade da dura como um controlo. É calculada a relação entre a quantidade de extravasamento na dura do lado estimulado, e a quantidade de extravasamento no lado não estimulado. Os animais de controlo a quem foi dada 321 ΡΕ2155717 apenas dose de solução salina, produziram um relação de aproximadamente 2,0. Em contraste, um composto que previna efetivamente o extravasamento na dura do lado estimulado iria produzir uma relação de aproximadamente 1,0.
Os compostos da presente invenção podem ser ensaiados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram tipicamente reduzir significativamente o extravasamento na dura. Os compostos preferidos são aqueles que efetivamente previnem extravasamento. O composto do Exemplo 127 é ensaiado essencialmente como descrito e mostrou ter uma relação de cerca de 1,16.
Modelo de Formalina de Dor Persistente O "Modelo de Formalina" de dor persistente, particularmente para dor inflamatória e neuropática, é bem conhecido e pode ser usado para composto de teste para bloqueamento da dor e/ou atividade análgésica. (Ver Shibata M. et ai., Pain (1989) 38: 347-352; e Tjolsen A. et ai., Pain (1992) 51:5-17.)
Ratazanas macho Sprague Dawley (Harlan Labs, Indianapolis, IN) pesando entre 200-250 g são mantidas a uma temperatura (21-23°C) e luz (12 h de lus/12 h de escuridão) constantes, com acesso livre a comida e água durante os 7 dias anteriores aos testes. Todos os testes são conduzidos durante o ciclo de luz depois de jejum de um dia para o outro e com a temperatura ambiente do teste mantida a uma temperatura constante (21-23°C). 322 ΡΕ2155717 A medição de comportamento relacionado com a dor que se segue à injeção de formalina na superfície dorsal ou plantar da pata traseira normalmente envolve marcação manual do tempo despendido a lamber ou encolher a pata injetada (Shibata M. et al. supra). A marcação pode também ser automatizada com base no método de Jett e Michelson (Jett M.F. e Michelson S. (1996), "The formalin test in rat: validation of an automated system." Pain 64:19-25), usando câmaras de alarme comercialmente disponíveis (Model SR-Lab, San Diego Instruments, San Diego, CA) que detetam movimentos dos ratos através de um acelerómetro.
Aos animais são administrados quer veiculo quer composto de teste e individualmente colocados em cilindros fixos. Em dados momentos específicos, os ratos são removidos dos cilindros e é-lhes administrada formalina (50 pL de uma solução em solução salina a 5%) por via subcutânea na superfície plantar da pata direita traseira e imediatamente colocados de volta nos cilindros. Os cilindros são depois colocados nas células de carga do sistema de deteção e a resposta é continuamente monitorizada o longo de 60 min em intervalos de 1 segundo (i.e. periodos de recolha). Como descrito previamente por Jett e Michelson, os movimentos induzidos por formalina, "eventos", detetados pelo sistema incluem lamber e encolher a pata afetada. O número de eventos [o número de intervalos de 1 segundo com >20 unidades de carga (movimentos de linha de base)] são totalizados em intervalos de 5 minutos. 323 ΡΕ2155717 A administração de formalina resulta em eventos que ocorrem em 2 fases, uma primeira fase de eventos de 0-5 min depois da administração de formalina (correspondendo à primeira fase do teste de formalina segundo o método do manual) e uma fase mais tardia durante o periodo dos 10-40-minutos subsequentes (correspondente para à fase tardia do teste de formalina segundo o método do manual).
Dados são avaliados por análises de variância de uma via (ANOVA) e os contrastes apropriados analisados pelo teste 't' de Dunnett por comparação dos 2 lados usando programa de análise estatística JMP (v5.1.1 SAS Institute Inc., Cary, NC). As diferenças são consideradas significativas se o valor p for menos do que 0,05. Os dados são apresentados como médias com erros padrão das médias (±SEM).
Compostos da presente invenção podem ser ensaiados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram geralmente reduzir significativamente o número de eventos comparados com o veículo sozinho. O composto do Exemplo 19 é testado essencialmente como descrito e mostru ser ativo em ambas as fases precoce e tardia.
Modelo de Ligação de Nervo L5/L6 de mecanismos de dor persistente: O modelo de ligação de nervo L5/L6 (modelo Chung) é um modelo bem estabelecido para a dor persistente, 324 ΡΕ2155717 especificamente dor neuropática. É realizada cirurgia em ratazanas macho Sprague Dawley (Harlan, Indianapolis, IN), pesando 150-200 g na altura da cirurgia como previamente descrito (Kim and Chung, 1992). Resumidamente, ferimentos neuropáticos são produzidos ligando apertadamente os nervos espinais L5 e L6 esquerdos sob anestesia de gás com uma mistura de isoflurano (3% para indução e 2% para manutenção) e O2. No seguimento da cirurgia, o desenvolvimento da dor neuropática é avaliado diariamente por medição da sensibilidade mecânica da pata ferida por filamentos de von Frey com forças de flexão crescentes (0,5-15 g) como descrito por (Chaplan et al., 1994). Animais são mostraram ser neuropáticos quando exibiram alodinia mecânica, i.e. resposta de comportamento de encolher a pata à aplicação de uma força de flexão de menos de 2 g durante 2 dias. É administrado i.p. fármaco de teste ou veiculo e o limiar mecânico do encolher da pata é medido 0,5, 1, 2, 3, 4 e 6 h depois de dosagem. A medição do limiar mecânico do encolher da pata é também realizada antes da cirurgia (controlo pré-operativo) . Os dados são expressos como a força limiar de flexão necessária para suscitar uma resposta (g) como média ± S.E.M. (erro padrão da média).
Compostos da presente invenção podem ser ensaiados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram geralmente aumentar significativamente a força limiar necessária para suscitar uma resposta comparada com o veiculo sozinho. O composto do Exemplo 186 é testado essencialmente como descrito e mostrou ser ativo. 325 ΡΕ2155717
Modelo de elevação de cGMP induzido por stresse de eletrochoque do pé para ansiedade 0 modelo de elevação de cGMP induzido por stresse de eletrochoque do pé para ansiedade é um modelo de ansiedade estabelecido, em que o stresse a partir de um eletrochoque inevitável no pé induz uma elevação em niveis de cGMP do cerebelo, elevação essa que é reduzida ou bloqueada por pré-administração de compostos ansioliticos (Sethy and Oien (1991), Pharmacology Biochemistry & Behavior, vol. 39, pg. 379-382). Resumidamente, ratinhos macho CF-1 adultos (25-30 g Harlan, Indianapolis, IN) são alojados sob um ciclo de 12 h de luz/escuridão num ambiente de temperatura e humidade controlodas. Os ratinhos são habituados ao ambiente pelos menos durante 3 dias e todos os estudos são realizados entre 9:00 AM e 12:00 AM para reduzir os efeitos das flutuações diurnas. Aos ratinhos de teste é dada uma única injecção intraperitoneal de composto de teste ou controlo (veiculo é stock de DMSO a 3%, emulfor a 20%, ácido lático 10%) e são sacrificados aproximadamente 30 min depois da dosagem, usando um feixe de radiação de micro-ondas (sistema de fixação de micro-ondas modelo GA5013; Gerling Applied Engineering, Modesto, CA) focado no crânio durante 0,5 seg num ajustamento para potência elevada. Este método preserva conteúdo de cGMP do tecido. Depois de sujeitos a micro-ondas, uma pequeno bocado (10-20 mg) de córtex do cerebelo é rapidamente removido do crânio. O tecido é pesado e depois homogeneizado em 2 mL de ácido 326 ΡΕ2155717 perclórico a 1,0%. O homogenato de tecido é mantido no gelo durante 30 min seguido de 5 min num banho de água em ebulição. O homogenato é depois centrifugado a 11 700 g durante 20 min. 1 mL de sobrenadante é depois acetilado com 40 μΐ de trietilamina e 20 μΐ de anidrido acético, sujeito a vórtice, centrifugado a 13 000 g durante 20 min a O O Amostras de cerebelo de ratinho são acetiladas são armazenadas a 4°C aguardando análises de cGMP por radioimunoensaio com o estojo ( "kit") de teste de radioimunoensaio cGMP 125I Flash Plate (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Boston, MA) em amostras duplicadas de cada animal de acordo com as instruções do fabricante.
Para grupos de ratinhos stressados, 30 min após injeção, os ratinhos são submetidos a um choque no pé 1,0 mA durante 10 seg numa gaiola Habitest Operant equipada com um chão de choque modular (Habitest Modular Test System, Coulbourn Instruments, Allentown, PA). Ratinhos são depois sacrificados e amostras de córtex do cerebelo são processadas como descrito.
Para cada animal, os niveis de cGMP são normalizados para peso de tecido húmido e usados para calcular médias de grupo e S.E.M. (tipicamente 4-6 ratinhos por grupo). Todos os dados são analisados na escala log para corrigir problemas com heterogeneidade da variância. Análises estatísticas são realizadas usando ANOVA seguida de método Dunnet para comparar cada grupo de tratamento com o grupo de veículo. O composto do Exemplo 189 é testado 327 ΡΕ2155717 essencialmente como descrito anteriormente, usando os ansioliticos conhecidos clordiazepóxido (Librium®, e alprazolam (Xanax®), bem como o conhecido antagonista de 5-HT7 SB-269970, como compostos de comparação, e mostraram reduzir significativamente a elevação de cGMP por indução de stresse.
Composto Veículo/ stresse 1 mg/kg (ip, 30 min)/ stresse 3 mg/kg (ip, 30 min)/ stresse 10 mg/kg (ip, 30 min) /stresse 30 mg/kg (ip, 30 min) stress3 60 mg/kg (ip, 30 min) /stresse Ex. 186 239* (22,5) 278 (33,9) 264 (25,6) 234 (34,4) 117* (25,1) SB-269970 240# (22,5) 270 (33,0) 225 (29,0) 171* (20,4) Clordiazepóxido 187* (14,4) 129 (17,5) 106* (16,5) 71* (5,3) Alprazolam 187* (14,4) 60* (9,9) Todos os dados normalizados para os grupos de animais tratados ccm veículos que nãc receberam stress de choque no pé (reportados como percentagem) . Dados reportados ccmc valores médios (s.e.m.). # p<0,01 vs. veículo/grupo sem stress; * p<0,05 vs. veículo/grupo ccm stress
Embora seja possível administrar compostos desta invenção diretamente sem qualquer formulação, os compostos são normalmente administrados sob a forma de composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como um ingrediente ativo e pelo menos um veiculo, diluente e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Estas composições podem ser administradas por uma variedade de vias incluindo 328 ΡΕ2155717 oral, intranasal, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, e pulmonar. Tais composições farmacêuticas e processos de preparação são bem conhecidos na técnica. Ver, e.g., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (A. Gennaro, et al., eds., 19th ed., Mack Publishing Co., 1995) .
As composições são preferencialmente formuladas numa forma de dosagem unitária, cada dosagem contendo desde cerca de 0,1 a cerca de 200 mg, mais usualmente cerca de 1,0 até cerca de 30 mg, do ingrediente ativo. O termo "forma de dosagem unitária" diz respeito a unidades fisicamente distintas adeguadas como dosagens unitárias para sujeitos humanos e outros mamíferos, contendo cada unidade uma quantidade pré-determinada de material ativo calculado para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com pelo menos um veículo, diluente e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável, adequado.
Os compostos são geralmente eficazes numa larga gama de dosagem. Por exemplo, dosagens diárias vão normalmente estar dentro da gama de cerca de 0,01 a cerca de 30 mg/kg, como por exemplo dentro da gama de cerca de 0,1 até cerca de 15 mg/kg/dia, em dose única ou dividida. Contudo, será entendido que a quantidade do composto realmente administrado vai ser determinada por um médico, à luz das circunstâncias relevantes, incluindo a condição a ser tratada, a via de administração escolhida, o composto ou compostos realmente administrados, a idade, peso, e 329 ΡΕ2155717 resposta do paciente individual, e a gravidade dos sintomas do paciente, e portanto não se pretende que as gamas de dosagem referidos anteriormente sejam de nenhum modo limitativas do âmbito da invenção. Em alguns casos níveis de dosagem abaixo do referido limite inferior podem ser adequados, enquanto que noutros casos doses ainda maiores podem ser usadas. 0 tipo de formulação empregue para a administração dos compostos da presente invenção pode ser ditada pelo composto particular a ser empregue, pelo tipo de perfil farmacocinético desejado a partir da via de administração selecionada, e pelo estado do paciente.
Lisboa, 6 de dezembro de 2012

Claims (16)

  1. ΡΕ2155717 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto da fórmula:
    onde: A e B são cada um independentemente -C(H)= ou -N=, desde que pelo menos um de A e B é -N=; n é 1, 2, ou 3; m é 0, 1, 2, ou 3; R1 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidrogénio, ii) (Cq-Ce)alquilo opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, ou em alternativa, opcionalmente substituído com hidroxi e 1 a 3 substituintes fluoro, iii) (C3-C7)cicloalquil-(C0-C2)alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, iv) (C1-C2)alquil-O-(Ci-C2) alquil-, v) Ph1- (C0-C2) alquil-, vi) Ar1- (C0-C2) al-quil-, vii) (C1-C2) alquil-S (O) 2-(C0-C3) alquil-, viii) Ph1-S (O) 2~ r ix) Ar1-S(0)2_, x) (C1-C2) alquil-NH-(C1-C2) alquil-, xi) ( (Ci-C2) alquil) 2-N-(Ci-C2) alquil-, xii) (Cq-C2) alquil-NH-C (O) - (Co-C2) alquil-, xiii) ( (Ci-C2) alquil) 2-N-C (O) - (Co-C2) alquil-, xiv) pirrolidin-l-il-C (O) - (C0-C2) alquil-, xv) (Cq-C2) alquil-C (O)-NH-(C1-C2) alquil-, xvi) (C1-C2) alquil)-C (O)-N (C1-C2 alquil) - (C1-C2) alquil-, xvii) (C1-C2) alquil-S (Ο) 2-ΝΗ- 2 ΡΕ2155717 (C1-C2)alquil-, e xviii) 2-oxo-oxazolidin-5-il-; R2 é selecionado a partir do grupo constituído por i) hidrogénio, ii) halo, iii) hidroxi, iv) (C1-C4) alquil-opcionalmente substituído com hidroxi, ciano, ou 1 a 5 substituintes fluoro, e v) (Ci-C2) alquil-O-(Co-C2) alquil-; R3 é selecionado a partir do grupo constituído por hidrogénio, halo, e (C1-C4)alquil-; Cada R4 é independentemente selecionado a partir do grupo constituído por i) halogénio, ii) (Ci-C2)alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, iii) (C1-C2)alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, iv) ciclo-propil-(C0-Ci) alquil-O-, v) ciano, vi) (C1-C2) alquil-S (0) 2-/· e vii) (C1-C4) alquil-C (0)-, ou em alternativa, m é 1 ou 2, um substituinte R4 é selecionado a partir do grupo constituído por viii) (Ci-C4)alquilo substituído adicionalmente com um substituinte selecionado a partir do grupo constituído por (hidroxi, (C1-C4) alcoxi, ciano, e amino) , ix) (Ci-C2) alquil-O-C (0)-, x) (Ci-C2) alquil-S (0) 2- (Ci-C2) alquil-, xi) (C1-C4) alquil-C (0) -N (R6) -, xii) (C1-C4) alquil-C (0) -N (R6) -metil-, xiii) ciclopropil-C (0)-NH-metil-, xiv) (Ci-C2) alquil-S (0) 2_N (R6) -(Ci-C2) alquil-, xv) (Ci-C2) alquil-O- (Co_C2) alquil-C (0) -N (R6) -opcionalmente substituído adicionalmente com um grupo fluoro, xvi) (Ci-C2) alquil-O-(C0-C2) alquil-C (0)-N (R6)-metil-opcionalmente substituído adicionalmente com um grupo fluoro, xvii) (R6) (R7)N-C (0) - (C!-C2) alquil-, xviii) (Cx-C2) alquil-C (0)-NH-metil-C (0)-, xix) (R6) (R7) N-C (0) -N (H) -metil-, xx) (R6) (R7)N-C (S)-N (H)-metil-, xxi) (Rs) (R7) N-C (0) - 3 ΡΕ2155717 O-metil-, xxii) (R6) (R7) N-C (0) metoxi-, e xxiii) (R6) (R7)N-C(0)metoximetil-, e se presente, o segundo substituinte R4 é fluoro ou cloro; R6 é hidrogénio ou metilo; R7 é hidrogénio ou (C1-C3)alquilo; Ph1 é fenilo opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo constituído por halo, (Ci~ C2)alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro, e (Ci-C2)alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 3 substituintes fluoro; Ar1 é uma porção heteroarilo selecionada a partir de piri-dilo, pirimidilo, imidazolilo, pirrolilo, tienilo, pirazo-lilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, e isotiazolilo, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído adicionalmente com 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de metilo e etilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  2. 2. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 onde cada R4 é independentemente selecionado a partir do grupo constituído por i) halogénio, ii) (C1-C2) alquilo opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, iii) (C1-C2) alcoxi opcionalmente substituído adicionalmente com 1 a 5 substituintes fluoro, iv) ciclopropil-(C0-C1) alquil-0-, v) ciano, vi) (Ci-C2) alquil-S(0)2-/ e vii) (C1-C4) alquil-C (0)-, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  3. 3. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 ou 2 em que A e B são cada um -N=. 4 ΡΕ2155717
  4. 4. Um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 3 em que n é 1.
  5. 5. Um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 4 em que m é 1 ou 2.
  6. 6. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 da Fórmula
    em que R1 é selecionado a partir de i) hidrogénio, ii) (Οχ-C3)alquil- opcionalmente mono-substituído com hidroxi, iii) fenilo, iv) benzilo, e v) piridilo; R2 é selecionado a partir de hidrogénio e (C1-C3)alquil-; R3 é selecionado a partir de hidrogénio e (C1-C3)alquil-; R4 é selecionado a partir do grupo constituído por i) (C4-C4)alquilo adicionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo constituído por hidroxi, (C4-C4)alcoxi, ciano, e amino, ii) (C1-C2) alquil-O-C(0)-, iii) (C1-C2) alquil-S (0) 2“ (C1-C2) alquil-, iv) (Ci-C4) alquil-C (0) -N(R6)-, v) (Ci-C4) alquil-C (0) -N (R6) -metil-, vi) ciclopropil-C (0)-NH-metil-, vii) (Cx-C2) alquil-S (0) 2-N (R6) - (Cx-C2) alquil-, viii) (Ci-C2) alquil-0- (C0-C2) alquil-C (0) -N (R6) - opcionalmente substituído adicionalmente com um grupo fluoro, 5 ΡΕ2155717 ix) (Ci-C2) alquil-O-(C0-C2) alquil-C (0)-N (R6)-metil- opcionalmente substituído adicionalmente com um grupo fluoro, x) (R6) (R7)N-C (0) - (C1-C2) alquil-, xi) (C1-C2) alquil-C (0)-NH-metil-C (0) xii) (R6) (R7) N-C (0)-N (H)-metil-, xiii) (R6) (R7)N-C (S)-N (H)-metil-, xiv) (R6) (R7) N-C (0) -0-metil-, xv) (R6) (R7) N-C (0) metoxi-, e xvi) (R6) (R7) N-C (0) metoxime-til-; R5 é fluoro ou cloro; R6 é hidrogénio ou metilo; R7 é hidrogénio ou (C1-C3) alquilo; p é 0 ou 1;e ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  7. 7. Um composto de acordo com a Reivindicação 6 em que R1 é metilo, etilo, ou fenilo; R2 é hidrogénio ou metilo; R3 é hidrogénio ou metilo; p é 0; e R4 é selecionado a partir do grupo constituído por hidroximetilo, hidroxietilo, metoximetilo, cianometilo, metil-C(0)-N (H)-metil-, e metil-S (0)2-N(H)-metil-.
  8. 8. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 que é 2-[4-(3'-Fenil-2,3,5,6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil)-pirazol-l-il]-etanol ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  9. 9. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 que é N-{4-[4-(1,5-Dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5, 6-tetra-hidro-2H-[l,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-acetamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 6 ΡΕ2155717
  10. 10. Um composto selecionado a partir de: Cloridrato de N-(2-{4-[3'-(4-fluoro-fenil)-2,3,5, 6-tetra-hidro-[1,2']bipirazinil-4-ilmetil]-pirazol-l-il}-etil)-N-metil-metanossulfonamida; Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-[4-(tiofen-2-ilmetoximetil)-fenil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo; Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-oxazol-2-il-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo; Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4-oxazol-5-il-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo; Cloridrato de 3-metil-3H-imidazole-4-carboxilico 4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamidade ácido; Cloridrato de tetra-hidro-furano-3-carboxilico 4-[4-(1,5- dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[ 1,2']bipirazinil-3'-il]-benzilamida de ácido; Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4- pirazol-l-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo; Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4- imidazol-l-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo; Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-[4- (2-metil-imidazol-l-ilmetil)-fenil]-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo; 7 ΡΕ2155717 Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4 [1,2,4]triazol-l-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo; Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-(4 [1,2,3]triazol-l-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2' ]bipirazinilo; Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil) 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-imidazolidin-2-ona; Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil) 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-piperidin-2-ona; Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil) 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-pirrolidin-2-ona; Cloridrato de 3-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil) 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-oxazolidin-2-ona; Cloridrato de 4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3'-[4 (1,l-dioxo-ΐλβ-[1,2]tiazinan-2-ilmetil)-fenil]-3, 4,5, 6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo; Cloridrato de 3-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil) 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-tiazolidino-2,4-diona; Cloridrato de 1-{4-[4-(1,5-dimetil-lH-pirazol-4-ilmetil) 3.4.5.6- tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinil-3'-il]-benzi1}-pirrolidino-2,5-diona; e Cloridrato de 4-(3-metil-l-fenil-lH-pirazol-4-ilmetil)-3' (4-[1,2,3]triazol-2-ilmetil-fenil)-3,4,5,6-tetra-hidro-2H-[1,2']bipirazinilo. ΡΕ2155717
  11. 11. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 como um inqrediente ativo em associação com um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
  12. 12. Um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 para utilização em terapia.
  13. 13. Um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 para o tratamento e/ou tratamento profilático de enxaqueca em humanos.
  14. 14. Um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 para o tratamento de dor persistente em mamíferos.
  15. 15. Um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 para o tratamento de ansiedade em mamíferos.
  16. 16. O composto de acordo com a Reivindicação 14 ou Reivindicação 15, onde o mamífero é um humano. Lisboa, 6 de dezembro de 2012 1 ΡΕ2155717 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição » 'W© 2004867703 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição « LEOPOLDO, M, Ssfstoffcí7;ji rseepfors (S-HTi7)Ps) and BmA1 isgarsxís. Carc. M&é, Çftsm,, 2004* voL 11, 623-8S1 * T. W, SREE8EP. O, SÍ. 'WUTS, FrofscPvs Groíjps in Gjgaíác SynS&este. Jota WÃ*y and Sons, IS99 * P, STAHL et sL Hardboofe o? PharmaM&iOca! Saíis: P?op«iise% SsleeSofi &-~d Um VCHAífôSfey-VCH, 2092 * BERÔE, &Η; BISi&EY, L,D,HfONKHCHÍSE, D.C< J, Pitam, Saí, 1977, vsL 6S* 1 * AííSÍ, BSoetom., 1976, vgí, 72,24S-2S4 * KAHL si al JL Skmní Ssasen, 1997, voL 2, 33-40 CHEWS-FiRUSOFF. Bkxtem, PtmmasoL 1S73, yd. 22, 3089-3183 * RUAT sá at PrOCsee&i§$ ef 9so Metkmal Acsásmy h? Ssssíjsss (USA}, 1893, voí, 30, 3547-SS51 ♦ JOHKSOÍÍ, Olf. <t si. Neurorspoft, 1897. vai. 6, 2237-224« * mmAlA M, et aL Pm% 1989, wbL -38* 347-352 ♦ TJOLSEU A. st st, pum 8®, vai £1* 5-1? • JSTT SLF.; SÍCHELSCSá 5, Th» ferroaFm tastte rafe vaSdsBon «fsn sutenateá sysisrrs, Psfe 1906. voL 64.19-25 - SCTff; 003. PbasmassQfagy Bmeti&msÉy· & Se-ftasàsir, 1991, vsi. 39, 370-362 * Rem&igters:; TI® Stísocs and Psacifcs ©f Piisimsoy. I&k*. PsbSsfcins Cg» 1S9S
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