PT1954308E - Estabilizadores para vacinas liofilizadas - Google Patents
Estabilizadores para vacinas liofilizadas Download PDFInfo
- Publication number
- PT1954308E PT1954308E PT06814694T PT06814694T PT1954308E PT 1954308 E PT1954308 E PT 1954308E PT 06814694 T PT06814694 T PT 06814694T PT 06814694 T PT06814694 T PT 06814694T PT 1954308 E PT1954308 E PT 1954308E
- Authority
- PT
- Portugal
- Prior art keywords
- final concentration
- immunogenic
- reducing
- acid
- suspension
- Prior art date
Links
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 title claims abstract description 129
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title abstract description 87
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 317
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 208
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims abstract description 109
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims abstract description 59
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 112
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 103
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 83
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 66
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 65
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 65
- 101150002418 cpi-2 gene Proteins 0.000 claims description 63
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 58
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 58
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 58
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 54
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 claims description 52
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 claims description 40
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 claims description 37
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 37
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 37
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 36
- 241000701114 Canine adenovirus 2 Species 0.000 claims description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 34
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 34
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 22
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 20
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 19
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 18
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 18
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 18
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 18
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 15
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 claims description 15
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 claims description 15
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 claims description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 13
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 13
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims description 11
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 claims description 10
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 10
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 claims description 10
- 241000701945 Parvoviridae Species 0.000 claims description 10
- 241000711931 Rhabdoviridae Species 0.000 claims description 10
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 10
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 10
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 10
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 10
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 10
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 9
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 9
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 9
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 9
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 9
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 9
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 9
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 9
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 9
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 8
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 claims description 7
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 7
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 7
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 claims description 7
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 claims description 7
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 claims description 7
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 claims description 7
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 claims description 7
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 7
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 claims description 7
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 claims description 7
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 claims description 7
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 claims description 7
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 claims description 7
- 241000701157 Canine mastadenovirus A Species 0.000 claims description 6
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 claims description 6
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 claims description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 6
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 claims description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 claims description 6
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 5
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 5
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 5
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims description 5
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims description 5
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 4
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 124
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 99
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 95
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 82
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 59
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 56
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 56
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 56
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 37
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 35
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 35
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 35
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 33
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 33
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 33
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 32
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 32
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 31
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 30
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 30
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 22
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 21
- 241000894007 species Species 0.000 description 21
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 20
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 18
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 18
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 17
- -1 antibodies Proteins 0.000 description 16
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 16
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 16
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 16
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 15
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 15
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 14
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 14
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 14
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 13
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 13
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 12
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 12
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 11
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 11
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 10
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 10
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 10
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 9
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 9
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 9
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 9
- 241000287219 Serinus canaria Species 0.000 description 8
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 8
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 7
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 7
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 6
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 description 6
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 6
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 6
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 6
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 6
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 6
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 6
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 description 5
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 5
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 5
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 5
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 description 5
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 5
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 5
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 5
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 5
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 5
- 241000680578 Canid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 4
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 4
- 241000714201 Feline calicivirus Species 0.000 description 4
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 241000714165 Feline leukemia virus Species 0.000 description 4
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 4
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 4
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 4
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 4
- 241001673669 Porcine circovirus 2 Species 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 4
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 4
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 4
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 4
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 4
- 229940023064 escherichia coli Drugs 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 4
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 4
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 4
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 description 3
- 241000701083 Bovine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 3
- 241000711895 Bovine orthopneumovirus Species 0.000 description 3
- 241000710780 Bovine viral diarrhea virus 1 Species 0.000 description 3
- 241001353878 Canine parainfluenza virus Species 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 3
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 3
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 description 3
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- 241000701087 Felid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 3
- 241000711475 Feline infectious peritonitis virus Species 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 241001559187 Human rubulavirus 2 Species 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241001183012 Modified Vaccinia Ankara virus Species 0.000 description 3
- 241000204045 Mycoplasma hyopneumoniae Species 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 description 3
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 3
- 241000700638 Raccoonpox virus Species 0.000 description 3
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 3
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 3
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 3
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical class [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 3
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 3
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 3
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 3
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 3
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 3
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 3
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- 241000711506 Canine coronavirus Species 0.000 description 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 description 2
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 2
- 241000710945 Eastern equine encephalitis virus Species 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000230501 Equine herpesvirus sp. Species 0.000 description 2
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 2
- 241000701915 Feline panleukopenia virus Species 0.000 description 2
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 2
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 2
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 description 2
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- PRQROPMIIGLWRP-UHFFFAOYSA-N N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanin Chemical compound CSCCC(NC=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PRQROPMIIGLWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 2
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 description 2
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 2
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 2
- 108010017898 Shiga Toxins Proteins 0.000 description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 241000589886 Treponema Species 0.000 description 2
- 241000710959 Venezuelan equine encephalitis virus Species 0.000 description 2
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 2
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- 241000710951 Western equine encephalitis virus Species 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000004135 animal tissue culture Methods 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N avridine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CCCN(CCO)CCO)CCCCCCCCCCCCCCCCCC WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 2
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 2
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 2
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 description 2
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000001533 respiratory mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 2
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 2
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 2
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 2,3-di(tetradecoxy)propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCO)OCCCCCCCCCCCCCC WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-(prop-2-enoxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CO)COCC=C RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 206010000097 Abdominal tenderness Diseases 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 1
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 238000006677 Appel reaction Methods 0.000 description 1
- 241000712891 Arenavirus Species 0.000 description 1
- 241000244186 Ascaris Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- 208000031504 Asymptomatic Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000713840 Avian erythroblastosis virus Species 0.000 description 1
- 241000714230 Avian leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000713826 Avian leukosis virus Species 0.000 description 1
- 241001519465 Avian metapneumovirus Species 0.000 description 1
- 241001516406 Avian orthoreovirus Species 0.000 description 1
- 241001114034 Avian polyomavirus Species 0.000 description 1
- 241000714482 Avian spleen necrosis virus Species 0.000 description 1
- 241000701397 Avihepadnavirus Species 0.000 description 1
- 241000223836 Babesia Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 241001446316 Bohle iridovirus Species 0.000 description 1
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 description 1
- 241000238678 Boophilus Species 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000588851 Bordetella avium Species 0.000 description 1
- 241000588780 Bordetella parapertussis Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 1
- 241000711443 Bovine coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000714266 Bovine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- 241000712005 Bovine respirovirus 3 Species 0.000 description 1
- 241000702673 Bovine rotavirus Species 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000004813 Bronchopneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000244036 Brugia Species 0.000 description 1
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 1
- 241000144583 Candida dubliniensis Species 0.000 description 1
- 241000222128 Candida maltosa Species 0.000 description 1
- 241000222173 Candida parapsilosis Species 0.000 description 1
- 101900009576 Canine coronavirus Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 241000242722 Cestoda Species 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 241001647372 Chlamydia pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241001647378 Chlamydia psittaci Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 244000223760 Cinnamomum zeylanicum Species 0.000 description 1
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 1
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 1
- 241000224483 Coccidia Species 0.000 description 1
- 108010073254 Colicins Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000031973 Conjunctivitis infective Diseases 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 208000034657 Convalescence Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 1
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003844 DNA helicases Human genes 0.000 description 1
- 108090000133 DNA helicases Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000243990 Dirofilaria Species 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000223924 Eimeria Species 0.000 description 1
- 241000224431 Entamoeba Species 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 206010066919 Epidemic polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701081 Equid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701089 Equid alphaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 208000000832 Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710803 Equine arteritis virus Species 0.000 description 1
- 241000186811 Erysipelothrix Species 0.000 description 1
- 241000186810 Erysipelothrix rhusiopathiae Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000012029 Fehling's reagent Substances 0.000 description 1
- 241000701925 Feline parvovirus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 241000701063 Gallid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 241000606807 Glaesserella parasuis Species 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 1
- 241000590017 Helicobacter felis Species 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 101710133291 Hemagglutinin-neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101710094396 Hexon protein Proteins 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 241000606831 Histophilus somni Species 0.000 description 1
- 241000228404 Histoplasma capsulatum Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- 229920001479 Hydroxyethyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 108700002232 Immediate-Early Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 241000702626 Infectious bursal disease virus Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 239000007760 Iscove's Modified Dulbecco's Medium Substances 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 description 1
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 241000712902 Lassa mammarenavirus Species 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- 241001550390 Leptospira interrogans serovar Canicola Species 0.000 description 1
- 241001518154 Leptospira kirschneri serovar Grippotyphosa Species 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 241001115401 Marburgvirus Species 0.000 description 1
- 241000713821 Mason-Pfizer monkey virus Species 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 101100293261 Mus musculus Naa15 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000428199 Mustelinae Species 0.000 description 1
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 108010008211 N-Formylmethionine Leucyl-Phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150082943 NAT1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000710944 O'nyong-nyong virus Species 0.000 description 1
- 241000320412 Ogataea angusta Species 0.000 description 1
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 1
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000700732 Orthohepadnavirus Species 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 241000282373 Panthera pardus Species 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 206010034960 Photophobia Diseases 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 208000010362 Protozoan Infections Diseases 0.000 description 1
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000712909 Reticuloendotheliosis virus Species 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- 102000000505 Ribonucleotide Reductases Human genes 0.000 description 1
- 108010041388 Ribonucleotide Reductases Proteins 0.000 description 1
- 241000710942 Ross River virus Species 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 101150010882 S gene Proteins 0.000 description 1
- 241000592155 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Agona Species 0.000 description 1
- 241000581497 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Blockley Species 0.000 description 1
- 241001355131 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Hadar Species 0.000 description 1
- 241000607726 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Heidelberg Species 0.000 description 1
- 241000210647 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Montevideo Species 0.000 description 1
- 241001135257 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Senftenberg Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000242678 Schistosoma Species 0.000 description 1
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 1
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 1
- 241000287231 Serinus Species 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 1
- 241000194048 Streptococcus equi Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 241001312524 Streptococcus viridans Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 1
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 description 1
- 206010044314 Tracheobronchitis Diseases 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 241000869417 Trematodes Species 0.000 description 1
- 241000243774 Trichinella Species 0.000 description 1
- 241000223238 Trichophyton Species 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 241000202921 Ureaplasma urealyticum Species 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 101150093578 VP2 gene Proteins 0.000 description 1
- QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N Vinyl ether Chemical compound C=COC=C QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 1
- 108700022715 Viral Proteases Proteins 0.000 description 1
- 241000244002 Wuchereria Species 0.000 description 1
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 208000025087 Yersinia pseudotuberculosis infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 1
- 241000222126 [Candida] glabrata Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 229940086737 allyl sucrose Drugs 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002547 anomalous effect Effects 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229950010555 avridine Drugs 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 1
- 201000007032 bacterial conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 208000005881 bovine spongiform encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000032343 candida glabrata infection Diseases 0.000 description 1
- 229940055022 candida parapsilosis Drugs 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 230000002920 convulsive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 229960000913 crospovidone Drugs 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-DYCDLGHISA-N deuterium hydrogen oxide Chemical compound [2H]O XLYOFNOQVPJJNP-DYCDLGHISA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- IKALZAKZWHFNIC-JIZZDEOASA-L dipotassium;(2s)-2-aminobutanedioate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CC([O-])=O IKALZAKZWHFNIC-JIZZDEOASA-L 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- XMXOIHIZTOVVFB-JIZZDEOASA-L disodium;(2s)-2-aminobutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CC([O-])=O XMXOIHIZTOVVFB-JIZZDEOASA-L 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 230000000688 enterotoxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 229940052303 ethers for general anesthesia Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229960005191 ferric oxide Drugs 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 101150029683 gB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150002378 gC gene Proteins 0.000 description 1
- 101150036031 gD gene Proteins 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 229940049906 glutamate Drugs 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 230000001894 hemadsorption Effects 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 208000003906 hydrocephalus Diseases 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 201000009837 laryngotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002912 lymphogenic effect Effects 0.000 description 1
- 108010026228 mRNA guanylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000011929 mousse Nutrition 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002840 non-reducing disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 230000001314 paroxysmal effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 108010055837 phosphocarrier protein HPr Proteins 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 description 1
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 235000013809 polyvinylpolypyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000523 polyvinylpolypyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- BIRNWOIQDVFTSP-WWNCWODVSA-M potassium (2R,3R,4R,5R)-2,3,5,6-tetrahydroxy-4-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhexanoate Chemical compound [K+].OC[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O BIRNWOIQDVFTSP-WWNCWODVSA-M 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 108700004027 tat Genes Proteins 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 206010044008 tonsillitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 229960000834 vinyl ether Drugs 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008957 viral persistence Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 244000000057 wild-type pathogen Species 0.000 description 1
- 238000004804 winding Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
- A61K39/175—Canine distemper virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14311—Parvovirus, e.g. minute virus of mice
- C12N2750/14334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
- C12N2760/18434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18711—Rubulavirus, e.g. mumps virus, parainfluenza 2,4
- C12N2760/18734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
DESCRIÇÃO "ESTABILIZADORES PARA VACINAS LIOFILIZADAS"
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se genericamente aos campos da imunologia e da tecnologia de vacinas. Mais especificamente, a presente invenção refere-se a estabilizadores para composições de vacina e/ou imunogénicas atenuadas vivas liofilizadas que podem compreender, inter alia, paramixovirus canino. A invenção refere-se ainda a composições de vacina e/ou imunogénicas atenuadas vivas liofilizadas estabilizadas de, por exemplo, paramixovirus canino que podem conter estes estabilizadores. Outros aspectos da invenção são descritos ou são óbvios a partir da seguinte divulgação e estão dentro do âmbito da invenção.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
As composições imunogénicas e composições de vacina que compreendem ingredientes biológicos, tais como virus, bactérias, parasitas, fungos, proteínas, polipéptidos, glicoproteínas e, especialmente, organismos vivos atenuados, são nitidamente sensíveis às condições através das quais são preparadas, formuladas e armazenadas.
Tais ingredientes biológicos podem ser modificados e degradados por reacções químicas (e. g., hidrólise, desaminação, reacção de Maillard), muitas das quais são mediadas por água. A 1 água líquida permite movimentos moleculares e pode resultar em modificações de conformações proteicas em composições compreendendo ingredientes biológicos. Por limitação do acesso à água ou por remoção da água, é reduzido um factor importante de modificação e degradação. Os métodos anteriores, para conferir estabilidade a ingredientes biológicos, têm envolvido principalmente a congelação da água ou a remoção da água por liofilização. A liofilização, ou o processo de crio-secagem, é uma técnica habitualmente utilizada para remover água na preparação de produtos desidratados. Geralmente, a "liofilização" de uma composição aquosa envolve três passos. Primeiro, a composição aquosa é congelada sob condições de baixa temperatura. Segundo, a água congelada é removida por sublimação sob condições de pressão reduzida e baixa temperatura. Nesta fase, a composição contém habitualmente cerca de 15% de água. Terceiro, a água residual é adicionalmente removida por dessorção sob condições de pressão reduzida e temperaturas mais elevadas. No final do processo de liofilização, é produzido um produto liofilizado, também denominado "pastilha" ou "bolo". 0 produto liofilizado contém muito pouca água residual (desde cerca de 0,5% a cerca de 5% peso/peso) e material seco numa forma amorfa. Este estado é especificamente qualificado como "vítreo".
Contudo, é observada perda substancial de actividade imunogénica de ingredientes biológicos durante as fases de preparação, tais como antes e durante a liofilização, e também durante o armazenamento de composições imunogénicas e composições de vacina. A integridade dos ingredientes biológicos deve ser protegida para garantir que seja retida a eficiência da imunização de composições imunogénicas e composições de vacina. A actividade imunogénica de ingredientes biológicos é medida 2 pela capacidade para induzir e estimular uma resposta imunológica quando administrados a um hospedeiro ou indivíduo.
Para limitar a manipulação de indivíduos e o número de administrações, existe uma forte necessidade na técnica para proporcionar composições imunogénicas ou composições de vacina multivalentes. Por definição, uma composição imunogénica ou composição de vacina multivalente compreende mais do que um componente imunogénico activo originário de, ou derivado de, pelo menos, dois patogéneos diferentes. Os vírus de géneros diferentes podem variar em estabilidade durante o passo de liofilização e período de armazenamento subsequente, resultando numa perda de viabilidade ou infectividade. No caso de vírus, tal como paramixovírus caninos, os componentes imunogénicos activos geralmente administrados são vírus atenuados vivos. Para estimular eficientemente o sistema imune, os vírus atenuados vivos devem replicar no indivíduo imunizado. A perda de viabilidade ou infectividade pode ocorrer durante o processo de liofilização de composições imunogénicas ou composições de vacina multivalentes, durante o armazenamento das composições, ou antes da administração das composições após reconstituição. Assim, foram adicionados estabilizadores a tais composições liofilizadas. Contudo, para obter composições imunogénicas ou composições de vacina multivalentes que retêm a sua infectividade e/ou viabilidade, um estabilizador comum que seja capaz de preservar a viabilidade e infectividade de diferentes patogéneos atenuados vivos seria particularmente vantajoso. A estabilização de ingredientes biológicos na forma seca tem tipicamente envolvido a preservação de antitoxinas, antigénios e bactérias (Flosodort et al. (1935) J. Immunol. 29, 389). Contudo, uma limitação neste processo incluiu a desnaturação parcial de proteínas quando secas a partir de um estado aquoso a 3 temperaturas ambiente. A secagem a partir do estado congelado ajudou a reduzir a desnaturação e conduziu a uma melhor preservação, embora incompleta, de ingredientes biológicos, incluindo bactérias e vírus (Stamp et ai. (1947) J. Gen. Microbiol. 1, 251; Rightsel et ai. (1967) Cryobiology 3, 423; Rowe et ai. (1971) Cryobiology 8, 251).
Mais recentemente, foram adicionados açúcares, tais como sacarose, rafinose e trealose, em várias combinações como estabilizadores antes da liofilização de vírus. Um grande número de compostos foram testados pela sua capacidade para estabilizar diferentes vacinas contendo ingredientes biológicos atenuados vivos, em particular vírus. Tais compostos incluem SPGA (sacarose, fosfato, glutamato e albumina; Bovarnick et ai. (1950) J. Bacteriol. 59, 509-522; Patente U.S. N° 4000256), albumina de soro bovino ou humano, sais de metais alcalinos de ácido glutâmico, sais de alumínio, sacarose, gelatina, amido, lactose, sorbitol, Tris-EDTA, hidrolisado de caseína, lactobionato de sódio e potássio, e fosfato de metal alcalino monometálico ou dimetálico. Outros compostos incluem, por exemplo, amina SPG-NZ (e. g., Patente U.S. N° 3783098) e misturas de polivinilpirrolidona (PVP) (e. g., Patente U.S. N° 3915794).
As composições imunogénicas e de vacina tiveram um grande impacto na saúde pública pela redução da morbilidade e mortalidade de uma variedade de patogéneos virulentos. Contudo, os efeitos secundários não intencionais que surgiram dos aditivos em composições imunogénicas e composições de vacina continuam a colocar um potencial risco que pode ter mais importância do que quaisquer atributos protectores e terapêuticos de composições imunogénicas e composições de vacina. 4
Na forma frequentemente utilizada em vacinas nos Estados Unidos, a gelatina pode provocar reacções alérgicas sérias em cerca de 1 de um total de 2 milhões de doses. As reacções alérgicas que se pensavam anteriormente que resultavam da albumina (proteína do ovo) são mais provavelmente provocadas por gelatina na mesma vacina. No caso da albumina do soro humano, embora nunca tenha sido associada qualquer doença com a albumina do soro humano em vacinas, existe uma possibilidade de transmissão de um vírus através desta proteína que é derivada de sangue humano.
Os produtos derivados de bovinos, tais como a albumina bovina e a gelatina, transportam o risco de transmissão da CJD (doença de Creutzfeld-Jakob, também conhecida como a "doença das vacas loucas") através dos produtos sanguíneos e de tecido conjuntivo bovinos utilizados no fabrico da vacina. Contudo, não existem casos descritos em que a CJD foi transmitida através de produtos sanguíneos e de tecido conjuntivo, os priões que provocam a CJD não foram encontrados no sangue ou no tecido conjuntivo, e é proibida a utilização de produtos derivados de bovinos de vacas importadas de países onde existem casos conhecidos de doença da vacas loucas. Não obstante, face a estes riscos, foram feitos esforços para eliminar a utilização de tais produtos em composições imunogénicas que se observou induzirem efeitos imunes não desejados.
De Rizzo (De Rizzo et al. (1989) Bul. Pan. Am. Health Organ. 23(3), de 299-305) descreveu preparações liofilizadas de vírus de sarampo contendo soluções de sorbitol-gelatina ou ácido glutâmico-lactose. Estas preparações foram armazenadas a -20 °C e os seus títulos virais foram determinados durante um período de armazenamento de 21 meses. Os dados resultantes indicaram que 5 os vírus liofilizados sem estabilizador são estáveis quando armazenados a -20 °C durante um período de 21 meses. Além disso, é bem conhecido que os vírus de sarampo liofilizados são estáveis quando armazenados a -20 °C e podem reter a potência com virtualmente nenhuma perda durante muitos anos (Gray A., (1978) Dev. Biol. Stand. 41, 265-266). Contudo, estes resultados foram obtidos a -20 °C onde os virus de sarampo liofilizados são estáveis e não demonstram um efeito estabilizador adicional. Estes resultados apenas mostram que soluções de sorbitol-gelatina e ácido glutâmico-lactose não têm um efeito negativo na estabilidade dos vírus de sarampo que são armazenados na forma liofilizada a -20 °C.
Precausta (Precausta et al. (1980) J. Clin. Microbiol. 12(4), 483-489) examinou os efeitos de humidade residual e da atmosfera vedante no título de infectividade do vírus da esgana canina (CDV) e do vírus da bronquite infecciosa (IBV) após liofilização. Uma solução de lactose foi adicionada à preparação de CDV a uma concentração final de 75 mg/mL, enquanto que a vacina do IBV continha 40 mg de manitol por mL. Quando o título de CDV antes da liofilização foi comparado ao título após liofilização e após 12 meses de armazenamento a 6 °C, o título de CDV é diminuído desde 101'6 até IO2,0 de CCID5o/mL que reflecte uma redução muito significativa no título de CDV.
Estes estabilizadores compreendem frequentemente componentes que não são desejáveis para administração num indivíduo, devido a problemas de segurança e a efeitos secundários adversos. Consequentemente, existe uma necessidade para novos estabilizadores e métodos para preservação da viabilidade e infectividade de ingredientes biológicos na forma liofilizada, que são seguros e adequados para injecção a indivíduos e que têm um bom aspecto. 6
Está incluído na técnica anterior o documento EP872249 que divulga a estabilização de um vírus liofilizado (MoMLV) com, por exemplo, glucose, ácido ascórbico, ou glutamato de sódio e glucose; o documento W02005066333 divulga a estabilização de ALVAC (um vírus de varíola de canário) com composições que incluem ácido aspártico; e o documento W00077043 divulga vacinas baseadas em ADN contendo separadamente imunogénios contra CDV e cPi2 .
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção aborda a necessidade na técnica ao proporcionar, inter alia, novos estabilizadores para composições de vacina ou composições imunogénicas atenuadas vivas liofilizadas que podem compreender o vírus da esgana canina (CDV) e da parainf luenza canina de Tipo 2 (cPi2) atenuados vivos. Estes estabilizadores podem preservar a viabilidade e infectividade destes paramixovírus caninos, para além de outros vírus, patogéneos e componentes imunogénicos activos, especialmente durante o processo de liofilização e durante um longo período de armazenamento dos produtos liofilizados a temperaturas refrigeradas ou à temperatura ambiente, em particular, entre desde cerca de 4 °C até cerca de 25 °C.
Importa referir que os estabilizadores presentemente reivindicados para composições de vacina ou composições imunogénicas atenuadas vivas estabilizadas liofilizadas são seguros e adequados para injecção a indivíduos após reconstituição. Estas composições imunogénicas estabilizadas liofilizadas podem compreender pastilhas ou bolos de bom aspecto, i. e., que têm forma regular e cor uniforme. 7
Os estabilizadores da presente invenção estão vantajosamente livres de ingredientes de origem animal, em particular livres de albumina de soro de origem humana ou bovina, lactalbumina e gelatina. Nesta forma, são minimizados ou eliminados quaisquer potenciais riscos biológicos de, por exemplo, reacções alérgicas resultantes da alergia à gelatina ou albumina, tais como urticária e anafilaxia, e a transmissão de doenças de encefalite espongiforme, especialmente a doença de Creutzfeldt-Jakob (CJD) ou encefalite espongiforme bovina (BSE; também conhecida como a Doença das Vacas Loucas).
Desta forma, a presente invenção proporciona o seguinte: 1. Um estabilizador para uma composição imunogénica liofilizada de esgana canina (CDV) e parainfluenza canina de Tipo 2 (cPi2) atenuados vivos compreendendo, pelo menos, um monossacárido redutor e, pelo menos, um composto de ácido antioxidante, em que o, pelo menos um, composto de ácido antioxidante compreende ácido aspártico; e em que o, pelo menos um, monossacárido redutor compreende glucose, galactose, frutose, manose, sorbose ou as suas combinações; e em que o, pelo menos um, monossacárido redutor está a uma concentração desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p e o, pelo menos um, ácido antioxidante está a uma concentração desde cerca de 1,5% até cerca de 6% p/p; 2. 0 estabilizador de 1, compreendendo ainda (a) pelo menos, um agente de volume ou (b) pelo menos, um agente de volume em que o, pelo menos um, agente de volume compreende dextrano, maltodextrina, polivinilpirrolidona, hidroxietilamido ou as suas combinações ou 8 (c) pelo menos, um álcool de açúcar ou (d) pelo menos, um álcool de açúcar em que o álcool de açúcar compreende sorbitol, manitol, xilitol, maltitol ou as suas combinações ou (e) pelo menos, um oligossacárido não redutor ou (f) pelo menos, um oligossacárido não redutor em que o, pelo menos um, oligossacárido não redutor compreende trealose, sacarose, rafinose ou as suas combinações ou (g) pelo menos, um álcool de açúcar e, pelo menos, um oligossacárido não redutor ou (h) pelo menos, um álcool de açúcar e, pelo menos, um oligossacárido não redutor em que o, pelo menos um, álcool de açúcar compreende sorbitol, manitol, xilitol, maltitol ou as suas combinações, e em que o, pelo menos um, oligossacárido não redutor compreende trealose, sacarose, rafinose ou as suas combinações; 3. Uma solução ou suspensão imunogénica compreendendo paramixovirus atenuados vivos compreendendo CDV e cPi2, misturada com o estabilizador de 1 ou 2; 4. A solução ou suspensão imunogénica de 3, em que a solução ou suspensão imunogénica é uma solução ou suspensão imunogénica multivalente que compreende ainda, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovirus; 9 5. A solução ou suspensão imunogénica de 4, em que (a) o, pelo menos um, componente imunogénico activo é derivado de um patogéneo compreendendo Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxvirididae, Rhabdoviridae ou as suas combinações ou (b) o, pelo menos um, componente imunogénico activo compreende adenovirus canino de tipo vivo 2 (CAV2) atenuado vivo e parvovirus canino (CPV) atenuado vivo ou (c) o, pelo menos um, componente imunogénico activo compreende um vector virai compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos ou (d) o, pelo menos um, componente imunogénico activo compreende um vector plasmídico compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos; 6. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um de 3 a 5, em que o estabilizador compreende (a) pelo menos, um monossacárido redutor a uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v ou cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v ou cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v ou cerca de 2,5% até cerca de 3% p/v ou cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v ou (b) pelo menos, um composto de ácido antioxidante a uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v ou 10 de cerca de 0,2% p/v ou desde cerca de 0,5% até cerca de 7,5% p/v ou (c) pelo menos, um agente de volume a uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v ou (d) pelo menos, um álcool de açúcar a uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, pelo menos, um monossacárido redutor, com a condição de que a concentração final do, pelo menos um, monossacárido redutor e do, pelo menos um, álcool de açúcar ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v ou (e) pelo menos, um oligossacárido não redutor a uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, pelo menos, um monossacárido redutor, com a condição de que a concentração final do monossacárido redutor e do oligossacárido não redutor ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v ou (f) pelo menos, um álcool de açúcar a uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v, pelo menos, um oligossacárido não redutor a uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, pelo menos, um monossacárido redutor, com a condição de que a concentração final do monossacárido redutor, do álcool de açúcar e do oligossacárido não redutor ser igual ou inferior a cerca de 12,5% p/v; 7. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um de 3 a 5, em que o estabilizador compreende: 11 (a) (i) uma concentração final de cerca de 1% até cerca de 5% p/v de uma mistura de dois monossacáridos redutores, (ii) uma concentração final de cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante e (iii) uma concentração final de cerca de 0,5% até cerca de 7,5% p/v de, pelo menos, um agente de volume ou (b) (i) uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante e (iv) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 7,5% p/v de, pelo menos, um agente de volume, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v ou (c) (i) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 2,5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante e (iv) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um agente de volume, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 5% p/v ou (d) (i) uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca 12 de 5% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v ou (e) (i) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 3% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar e (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 5% p/v ou (f) (i) uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor e (iv) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i), (ii) e (iii) ser igual ou inferior a cerca de 12,5% p/v ou (g) (i) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 2,5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor e (iv) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 13 0,25% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i), (ii) e (iii) ser igual ou inferior a cerca de 10% p/v; 8. Uma composição imunogénica estabilizada liofilizada de CDV e cPi2 atenuados vivos compreendendo (i) uma concentração final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações; 9. A composição imunogénica de 8, em que a (ii) concentração final de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações, é desde cerca de 2% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações, e compreendendo ainda (iii) uma concentração final desde cerca de 15% até cerca de 70% p/p de, pelo menos, um agente de volume; 10. A composição imunogénica de 8, compreendendo ainda, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovirus; 11. A composição imunogénica de 10, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo (a) é derivado de um patogéneo compreendendo Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxviridae, Rhabdoviridae ou as suas combinações ou 14 (b) compreende adenovírus canino de tipo vivo 2 (CAV2) atenuado vivo e parvovirus canino (CPV) atenuado vivo ou (c) compreende um vector virai compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos ou (d) compreende um vector plasmidico compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos. 12. Uma composição imunogénica multivalente estabilizada liofilizada compreendendo CDV atenuado vivo, cPi2 atenuado vivo e, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovírus, e compreendendo: (i) uma concentração final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 2% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações, e (iii) uma concentração final desde cerca de 15% até cerca de 70% p/p de, pelo menos, um agente de volume; 13. A composição imunogénica multivalente de 12, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo (a) é derivado de um patogéneo compreendendo Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxviridae, Rhabdoviridae ou as suas combinações ou (b) compreende adenovírus canino de tipo vivo 2 (CAV2) atenuado vivo e parvovirus canino (CPV) atenuado vivo ou (c) compreende um vector virai compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos ou 15 (d) compreende um vector plasmídico compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos; 14. Um processo para liofilização de uma solução ou suspensão imunogénica de CDV e cPi2 atenuados vivos que compreende (a) colocar em contacto a solução ou suspensão imunogénica de CDV e cPi2 atenuados vivos com um estabilizador como definido na reivindicação 1 ou 2, formando assim uma solução ou suspensão imunogénica estabilizada; (b) arrefecer, à pressão atmosférica, a solução ou suspensão imunogénica estabilizada a uma temperatura inferior a cerca do valor Tg da suspensão imunogénica estabilizada; (c) secar a solução ou suspensão imunogénica estabilizada por sublimação de gelo a baixa pressão; e (d) remover a água residual em excesso com redução adicional da pressão e aumento da temperatura da solução ou suspensão imunogénica estabilizada; e 15. Um kit compreendendo um primeiro frasquinho contendo a composição imunogénica estabilizada liofilizada de CDV e cPi2 atenuados vivos como definida em qualquer um de 8 a 11 ou a composição imunogénica multivalente liofilizada como definida em 12 e um segundo frasquinho contendo um solvente. É também proporcionado pela presente invenção uma composição imunogénica multivalente estabilizada liofilizada compreendendo CDV atenuado vivo, cPi2 atenuado vivo e, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovírus produzido pelos processos da invenção e que pode compreender (i) uma concentração final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante 16 compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações.
Ainda noutro aspecto, a invenção proporciona um kit, que pode compreender um primeiro frasquinho contendo uma composição imunogénica estabilizada liofilizada da invenção e um segundo frasquinho contendo um solvente. 0 solvente pode ser seleccionado do grupo consistindo de água desmineralizada, água destilada, água-para-injecção, tampão (i. e., solução de tampão de fosfato) e adjuvante (i. e., emulsões de água-em-óleo, hidróxido de alumínio, carbómeros).
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A seguinte Descrição Detalhada, apresentada a título de exemplo, mas não pretendida para limitar a invenção a formas de realização específicas descritas, pode ser compreendida conjuntamente com as figuras anexas, aqui incorporadas por referência, em que: A Figura IA mostra fotografias de pastilhas liofilizadas que têm uma forma regular, um aspecto de merengue ou um aspecto esponjoso. A Figura 1B mostra fotografias de um aspecto colado, um aspecto bobinado e um aspecto separado.
A Figura 2 apresenta gráficos que mostram o efeito da percentagem de (A) oligossacáridos não redutores e (B) monossacáridos redutores no título de CDV, expresso em logio CCID50/mL, no final do passo de liofilização (a TO). A 17 concentração final dos oligossacáridos nao redutores e dos monossacáridos redutores é expressa como % de peso/volume. A Figura 3 apresenta gráficos que demonstram o efeito de um composto antioxidante no título de cPi2, expresso em
logio CCID50/mL (A) no final do passo de liofilização (a TO) e (B) após um periodo de armazenamento de 3 meses a +4 °C (T + 3 meses), em que a concentração final é expressa em % de peso/volume.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Nesta divulgação, "compreende", "compreendendo", "contendo" e "tendo", e semelhantes, podem ter os significados atribuídos aos mesmos na Lei de Patentes dos EUA e pode significar "inclui", "incluindo" e semelhantes; "consistindo essencialmente de" ou "consiste essencialmente" têm igualmente o significado atribuído na Lei de Patentes dos EUA e o termo é aberto, permitindo a presença de mais do que aquilo que é enumerado, desde que as características básicas ou novas daquilo que é enumerado não seja alterado pela presença de mais do que aquilo que é enumerado, mas exclui formas de realização da técnica anterior.
Um "indivíduo" no contexto da presente invenção pode ser um vertebrado, tais como um mamífero, pássaro, réptil, anfíbio ou peixe; mais vantajosamente, um humano, um animal domesticado ou de companhia; um animal produtor de alimentos ou produtor de rações; animais de criação, animais de caça, corrida e desportos tais como, mas não limitados a, bovinos, caninos, felinos, caprinos, ovinos, porcinos, equinos e aves de aviário. De um modo preferido, o vertebrado é um canino. 18
Como aqui utilizado, "recombinante" refere-se a um ácido nucleico sintetizado ou, caso contrário, manipulado in vitro (e. g., "ácido nucleico recombinante"), a métodos de utilização de ácidos nucleicos recombinantes para produzir produtos génicos em células, em indivíduos ou noutros sistemas biológicos, ou a um polipéptido ("proteína recombinante") codificado por um ácido nucleico recombinante. "Meios recombinantes" abrangem também a excisão e ligação de ácidos nucleicos que têm várias regiões codificantes, domínios ou sequências promotoras de diferentes fontes numa cassete de expressão ou vector para, e. g. , expressão indutível ou constitutiva de sequências codificantes de ácidos nucleicos.
Como aqui utilizado, a expressão "ligado operativamente" significa que os componentes descritos estão numa relação que lhes permite funcionar do modo pretendido. 0 termo "heterólogo", quando utilizado em referência a um ácido nucleico, indica que o ácido nucleico está numa célula, num vírus, num indivíduo ou numa bactéria onde não é normalmente encontrado na natureza; ou compreende duas ou mais subsequências de ácidos nucleicos que não são encontradas na mesma relação que se encontrado normalmente na natureza, ou está manipulado de forma recombinante de modo que o seu nível de expressão, ou relação física com outros ácidos nucleicos ou outras moléculas numa célula, indivíduo ou estrutura, não é normalmente encontrado na natureza. Por exemplo, um ácido nucleico heterólogo pode ser produzido de forma recombinante tendo duas ou mais sequências de genes não relacionados organizados de uma forma não encontrada na natureza; e. g. , um gene canino operativamente ligado a uma sequência promotora introduzida em, por exemplo, um vector de poxvírus ou adenovírus. Como um 19 exemplo, um ácido nucleico heterólogo de interesse pode codificar um produto génico imunogénico, em que o ácido nucleico heterólogo de interesse contido num vector é administrado terapêutica ou profilacticamente como uma composição imunogénica ou composição de vacina. As sequências heterólogas podem compreender várias combinações de promotores e sequências, cujos numerosos exemplos são aqui descritos em detalhe.
Como aqui utilizado, um "vector" é uma ferramenta que permite ou facilita a transferência de uma entidade de um ambiente para outro. A titulo de exemplo, alguns vectores utilizados em técnicas de ácidos nucleicos recombinantes permitem que entidades, tal como um segmento de ácido nucleico (tal como um segmento de ácido nucleico heterólogo, tal como um segmento de ADNc heterólogo), sejam transferidas para uma célula alvo. Também aqui utilizada é a expressão "vector de expressão". A presente invenção compreende vectores recombinantes que podem incluir, sem limitação, vectores virais, vectores bacterianos, vectores fúngicos, vectores protozoáricos, vectores plasmídicos, ou seus recombinantes.
Relativamente a ácidos nucleicos heterólogos para expressão num vector (e. g., codificando um epitopo de interesse e/ou um antigénio e/ou um imunogénio e/ou um produto terapêutico) e aos documentos que proporcionam tais ácidos nucleicos heterólogos, assim como relativamente à expressão de factores de transcrição e/ou tradução para aumentar a expressão de moléculas de ácido nucleico, e relativamente a expressões, tais como "epitopo de interesse", "terapêutico", "resposta imune", "resposta imunológica", "resposta imunoprotectora", "composição imunológica", "composição imunogénica" e "composição de vacina", ínter alia, é feita referência à Patente U.S. N° 5990091, concedida em 23 de Novembro de 1999 e aos documentos W098/00166 20 e WO99/60164, e os documentos aí citados e aos documentos do registo da prossecução dessa patente e dos pedidos PCT; todos os quais são aqui incorporados por referência. Assim, a Patente U.S. N° 5990091 e os documentos W098/00166 e WO99/60164 e documentos aí citados e documentos do processo de prossecução dessa patente e dos pedidos PCT, e outros documentos aqui citados ou, caso contrário, aqui incorporados por referência, podem ser consultados na prática desta invenção; e todas as moléculas de ácidos nucleicos heterólogos, promotores e vectores aí citados podem ser utilizados na prática desta invenção. Quanto a isto, é feito também menção às Patentes U.S. N° 6706693; 6716823; 6348450; Pedidos de Patente U.S. N° de Série 10/424409; 10/052323; 10/116963; 10/346021; e documento WO99/08713, publicado a 25 de Fevereiro de 1999, a partir do pedido PCT/US98/16 739.
Um "antigénio" é uma substância que é reconhecida pelo sistema imune e induz uma resposta imune. O antigénio pode compreender um organismo inteiro, morto, atenuado ou vivo; uma subunidade ou porção de um organismo; um vector recombinante contendo uma inserção com propriedades imunogénicas; um pedaço ou fragmento de ácido nucleico capaz de induzir uma resposta imune após apresentação a um animal hospedeiro; uma proteína, um polipéptido, um péptido, uma glicoproteína, um epitopo, um hapteno, um hidrato de carbono, um açúcar, ou quaisquer suas combinações. Alternativamente, o antigénio pode compreender uma toxina ou uma antitoxina. Um termo semelhante utilizado indiscriminadamente neste contexto é "imunogénio". Um "patogéneo" refere-se a um agente causador de doença especifico, tais como uma bactéria, fungo, protozoário, parasita ou vírus.
Como aqui utilizadas, as expressões "composição imunogénica", "composição imunológica" e "composição imunogénica 21 ou imunológica" abrangem qualquer composição que induza uma resposta imune contra o antigénio ou imunogénio de interesse expresso a partir de vectores; por exemplo, após administração num indivíduo, induz uma resposta imune contra o imunogénio ou antigénio alvo de interesse. As expressões "composição de vacina", "vacina" e "composição de vacina" abrangem qualquer composição que induza uma resposta imune protectora contra o antigénio de interesse, ou que protege eficazmente contra o antigénio; por exemplo, após administração ou injecção no indivíduo, induz uma resposta imune protectora contra o antigénio ou imunogénio alvo ou proporciona protecção eficaz contra o antigénio ou imunogénio expresso a partir de vectores.
Como aqui utilizado, o termo "multivalente" significa uma composição imunogénica ou composição de vacina contendo mais do que um antigénio, seja da mesma espécie, de espécies diferentes, ou uma composição imunogénica ou composição de vacina contendo uma combinação de antigénios de géneros diferentes.
Um "componente imunogénico activo" no contexto da presente invenção inclui patogéneos atenuados vivos, tais como virus atenuados vivos, bactérias atenuadas vivas, fungos ou parasitas. Quando o componente imunogénico activo faz parte de uma solução, suspensão ou composição imunogénica de CDV e cPi2 atenuados vivos multivalente da invenção, o componente imunogénico activo pode ser vantajosamente derivado de um patogéneo à excepção de um paramixovirus. Estão também abrangidos pela invenção imunogénios heterólogos recombinantes ou antigénios derivados ou originários de um ou mais patogéneos aqui descritos, que podem estar contidos e expressos em, inter alia, vectores virais, vectores bacterianos, vectores fúngicos e vectores plasmídicos. A invenção compreende também epitopos de imunogénios ou antigénios heterólogos derivados de um ou mais patogéneos, 22 imunomoduladores, tal como citocinas, agentes terapêuticos, toxinas, anticorpos, fragmentos de ligação a antigénio de um anticorpo, adjuvantes ou outras espécies, tais como ARN anti-sentido, ARN catalíticos, pequenos ARN interferentes, entre outros. A expressão "composição veterinária" significa qualquer composição compreendendo um vector para utilização veterinária que expressa uma proteína terapêutica como, por exemplo, eritropoetina (EPO) ou uma proteína imunomoduladora, tal como, por exemplo, interferão (IFN). De modo semelhante, a expressão "composição farmacêutica" significa qualquer composição compreendendo um vector para expressão de uma proteína terapêutica.
As composições e métodos da presente divulgação podem ser apropriadamente aplicadas na estabilização de imunomoduladores, tais como citocinas, agentes terapêuticos, toxinas, anticorpos, fragmentos de ligação a antigénio de um anticorpo, adjuvantes, ou outras espécies, tais como ARN anti-sentido, ARN catalíticos, pequenos ARN interferentes, entre outros. Após reconstituição, estes compostos podem ser utilizados para a prevenção de doenças como imunização profiláctica ou proporcionar alívio contra sintomas de doença como imunização terapêutica. A presente divulgação abrange um estabilizador para composições imunogénicas atenuadas vivas liofilizadas compreendendo, pelo menos, um monossacárido redutor e, pelo menos, um composto de ácido antioxidante. 0 estabilizador pode opcionalmente compreender, pelo menos, um oligossacárido não redutor e/ou, pelo menos, um agente de volume e/ou, pelo menos, um álcool de açúcar. Estes estabilizadores podem preservar ou reter a imunogenicidade, infectividade e viabilidade de 23 ingredientes biológicos incluindo, mas não limitado a, virus, bactérias, fungos, parasitas, proteínas, polipéptidos, entre outros. Os estabilizadores aqui descritos também têm um bom aspecto, i. e., uma forma e cor uniformes, e são seguros para administração num indivíduo
Um "monossacárido redutor" é um sacárido que é capaz de doar electrões e é assim capaz de reduzir outro composto durante reacções de oxidação-redução. Geralmente, um monossacárido redutor tem grupos aldeído ou cetona na sua estrutura. Estão disponíveis testes colorimétricos para identificar açúcares redutores, tal como o teste do reagente de Fehling que conduz a alteração de cor de azul escuro para vermelho, à medida que o reagente de ião de cobre é reduzido a cobre metálico na presença de um açúcar redutor. Na presente invenção, o monossacárido redutor compreende, de um modo preferido, glucose, galactose, frutose, manose, sorbose ou as suas combinações. Numa forma de realização da invenção, é proporcionada uma combinação de, pelo menos, dois monossacáridos redutores. Os monossacáridos redutores são importantes para a protecção de composições, especialmente de proteínas e patogéneos atenuados vivos, durante o processo de liofilização, particularmente durante o passo de sublimação (í. e., primeiro e segundo passos de exsicação), em que os monossacáridos redutores tomam o lugar da água sublimada e mantêm a coesão da estrutura biológica.
Opcionalmente, podem ser adicionados álcoois de açúcar e/ou oligossacáridos não redutores ao estabilizador de acordo com a presente invenção. As combinações de monossacáridos redutores e álcoois de açúcar, combinações de monossacáridos redutores e oligossacáridos não redutores e as combinações de monossacáridos redutores, álcoois de açúcar e oligossacáridos não redutores estão abrangidas pela presente divulgação. álcoois, mais
Os álcoois de açúcar são quimicamente . ___ precisamente polióis, derivados de moléculas de açúcar por redução do grupo aldeído do açúcar. No contexto da presente divulgação, os álcoois de açúcar são vantajosamente álcoois de monossacárido ou álcoois de dissacárido. 0 álcool de açúcar pode compreender sorbitol, manitol, xilitol ou maltitol. Os estabilizadores da divulgação podem também compreender uma mistura de, pelo menos, dois álcoois de açúcar. "Oligossacáridos não redutores" no contexto da divulgação são açúcares compreendendo desde duas até dez unidades sacarídicas e são incapazes de reduzir outro composto durante reacções de oxidação-redução. Na presente divulgação, o oligossacárido não redutor pode ser um dissacárido não redutor ou um trissacárido não redutor, compreendendo vantajosamente trealose, sacarose ou rafinose. Os estabilizadores podem compreender uma mistura de, pelo menos, dois oligossacáridos não redutores. 0 composto de ácido antioxidante é definido como um composto químico que reage e neutraliza oxidantes, radicais livres (i. e., moléculas com electrões desemparelhados) ou químicos que libertam radicais livres. No contexto da descrição, o composto antioxidante está na forma ácida. Por questões de clareza, são aqui referidos como "ácidos antioxidantes". Os ácidos antioxidantes podem compreender ácido ascórbico e/ou aminoácidos acídicos, tais como ácido aspártico e ácido glutâmico. 0 antioxidante é vantajosamente ácido aspártico. Os estabilizadores, de um modo preferido, não contêm sais de ácidos antioxidantes, e. g. , sais de metais alcalinos, tais como sais de sódio ou potássio, especialmente sal sódico de ácido aspártico, sal potássico de ácido aspártico, sal sódico de ácido 25 glutâmico, sal potássico de ácido glutâmico, sal sódico de ácido ascórbico e sal potássico de ácido ascórbico. Estão abrangidas na invenção combinações de mais do que um composto de ácido antioxidante. 0 agente de volume pode ser um polímero farmaceuticamente ou veterinariamente aceitável como, mas não limitado a, dextrano, maltodextrina, polivinilpirrolidona (PVP), crospovidona e hidroxietilamido. Outros derivados de amido incluem, mas não estão limitados a, celulose microcristalina, metilcelulose, carboximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxietilmetilcelulose e hidroxipropilmetilcelulose. Vantajosamente, o agente de volume pode ser dextrano ou PVP, de um modo preferido, dextrano. Estão também contempladas pela presente invenção combinações de, pelo menos, dois agentes de volume. 0 agente de volume aumenta o valor de Tg das composições imunogénicas e composições de vacina, permitindo a utilização de temperaturas mais altas durante a congelação. 0 "valor de Tg" é definido como a temperatura de transição vítrea que corresponde à temperatura abaixo da qual a composição congelada torna-se vítrea. 0 agente de volume é principalmente responsável pelo bom aspecto observado nas pastilhas e bolos liofilizados da presente invenção, especialmente por retenção da forma sólida das pastilhas sem criar pontes de hidrogénio.
Se for utilizado dextrano como um agente de volume, o seu peso molecular pode ser desde cerca de 5000 Da até cerca de 70000 Da, de um modo preferido, desde cerca de 10000 Da até cerca de 40000 Da. Se for utilizado PVP como um agente de volume, oseu peso molecular pode ser desde cerca de 8000 Da até cerca de 360000 Da, de um modo preferido, desde cerca de 10000 Da até cerca de 60000 Da. 26
Se for utilizada maltodextrina como um agente de volume, o seu valor equivalente de dextrose (DE, que é uma medida quantitativa do grau de hidrólise do polimero de amido) pode ser desde cerca de 3 até cerca de 20, de um modo preferido, desde cerca de 5 até cerca de 18, de um modo mais preferido desde cerca de 10 até cerca de 15. Se for utilizado hidroxietilamido como um agente de volume, o seu peso molecular pode ser desde cerca de 70000 Da até cerca de 450000 Da, de um modo preferido, desde cerca de 130000 Da até cerca de 200000 Da. O grau de substituição do hidroxietilamido é desde cerca de 0,4 até cerca de 0,7, de um modo preferido, desde cerca de 0,4 até cerca de 0,6. O grau de substituição é definido como o número de grupos hidroxietilo por unidade de glucose
Alguns componentes no estabilizador podem não ser solúveis. Contudo, está bem dentro das competências do especialista na técnica substituir componentes apropriadamente análogos (e. g., seleccionando um componente mais solúvel) e/ou adaptar os conteúdos ou quantidades do componente insolúvel presente no estabilizador para o objectivo de obter um estabilizador solúvel. A solubilidade de um componente pode ser facilmente verificada através de um teste de solubilidade visual. Um teste de solubilidade compreende os passos de adicionar todos os componentes do estabilizador a uma temperatura de cerca de 55 °C e de misturá-los durante cerca de 30 minutos. Após aproximadamente 24 horas à temperatura ambiente e sem qualquer agitação, o estabilizador pode ser visualmente verificado para o aparecimento de precipitados. Se o estabilizador estiver transparente ou límpido, então todos os componentes do estabilizador são solúveis. 27
As formas de realização específicas dos estabilizadores da presente invenção, nomeadamente F2, F2B, F6B, F33, F37, A, Η, K e U, são aqui descritas nos Exemplos.
Os estabilizadores da presente invenção podem ser armazenados a temperaturas desde cerca de 10 °C até cerca de 40 °C e, de um modo preferido, desde cerca de 15 °C até cerca de 25 °C. É também proporcionado pela invenção uma solução ou suspensão imunogénica estabilizada que compreende uma solução ou suspensão imunogénica compreendendo um vírus atenuado vivo, tal como, mas não limitado a, paramixovírus, misturado com um estabilizador de acordo com a invenção. O paramixovírus canino compreende, entre outros, o vírus da esgana canina (CDV) e o vírus da parainfluenza canina de Tipo 2 (cPi2), ambos na forma de vírus atenuados vivos.
Uma forma de realização vantajosa da presente invenção abrange paramixovírus atenuados vivos, em particular, paramixovírus caninos. O paramixovírus canino é um vírus da família Paramixoviridae que inclui o vírus da esgana canina (CDV) e o vírus da parainf luenza canina de Tipo 2 (cPi2) . Os paramixovírus caninos são responsáveis por uma vasta variedade de doenças em muitas espécies de carnívoros, em particular animais domésticos, tal como cães, ou animais não domésticos, tais como doninhas, leões, tigres e leopardos.
Nas soluções ou suspensões imunogénicas estabilizadas da presente invenção, a concentração final de monossacárido redutor é desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v, vantajosamente, desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v, mais vantajosamente, desde 28 cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v e, de um modo preferido, desde cerca de 2,5% até cerca de 3% p/v. "Concentração final" no contexto da invenção, significa a concentração de um composto na solução ou suspensão imunogénica estabilizada.
As soluções ou suspensões imunogénicas estabilizadas da invenção podem compreender uma concentração final de composto de ácido antioxidante desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v final, particularmente, desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v e, mais particularmente, cerca de 0,2% p/v.
Quando a solução ou suspensão imunogénica estabilizada compreende, pelo menos, um agente de volume, a concentração final do agente de volume é desde cerca de 0,5% até cerca de 7,5% p/v e, vantajosamente, desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v.
Quando a solução ou suspensão imunogénica estabilizada compreende, pelo menos, um monossacárido redutor e, pelo menos, um álcool de açúcar, a concentração final do monossacárido redutor é desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v, vantajosamente, desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v, mais vantajosamente, desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v e, de um modo preferido, desde cerca de 2,5% até cerca de 3% p/v, a concentração final do álcool de açúcar é desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, vantajosamente, desde cerca de 1,5% até cerca de 3% p/v, com a condição de que a concentração final da mistura de monossacárido redutor e álcool de açúcar ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v e, vantajosamente, até cerca de 5% p/v. 29
Quando a solução ou suspensão imunogénica estabilizada compreende, pelo menos, um monossacárido redutor e, pelo menos, um oligossacárido não redutor, a concentração final do monossacárido redutor é desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v, vantajosamente, desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v, mais vantajosamente, desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v e, de um modo preferido, desde cerca de 2,5% até cerca de 3% p/v, a concentração final do oligossacárido não redutor é desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, vantajosamente, desde cerca de 0,5% até cerca de 2,5% p/v, com a condição de que a concentração final da mistura de monossacárido redutor e oligossacárido não redutor ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v e, vantajosamente, até cerca de 5% p/v.
Quando a solução ou suspensão imunogénica estabilizada compreende, pelo menos, um monossacárido redutor e, pelo menos, um oligossacárido não redutor e, pelo menos, um álcool de açúcar, a concentração final do monossacárido redutor é desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v, vantajosamente, desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v, mais vantajosamente, desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v e, de um modo preferido, desde cerca de 2,5% até cerca de 3% p/v; a concentração final do oligossacárido não redutor é desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, vantajosamente, desde cerca de 0,5% até cerca de 2,5% p/v, a concentração final de álcool de açúcar é desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, vantajosamente, desde cerca de 1,5% até cerca de 3% p/v, com a condição de que a concentração final da mistura de monossacárido redutor, oligossacárido não redutor e álcool de açúcar ser igual ou inferior a cerca de 12,5% p/v, vantajosamente, cerca de 10% p/v e, mais vantajosamente, cerca de 7,5% p/v. 30
Nalgumas formas de realização, os estabilizadores F2, F2B, F6B, F33, F37, A, Η, K ou U são misturados com as soluções ou suspensões imunogénicas ou com as soluções ou suspensões imunogénicas multivalentes compreendendo virus atenuados vivos. De um modo preferido, um volume do estabilizador F2, F2B, F6B, F33, F37, A, Η, K ou U é misturado com um volume da solução ou suspensão imunogénica compreendendo virus atenuado vivo, ou com um volume da solução ou suspensão imunogénica multivalente compreendendo virus atenuado vivo. As suas concentrações finais na solução ou suspensão estabilizada são, de um modo preferido, cerca de metade da concentração inicial.
Uma composição imunogénica ou vacina atenuada viva tem as seguintes vantagens: pode ser administrada em doses baixas, particularmente se for auto-replicativa; mimetida bem a infecção natural/tipo-selvagem num indivíduo e proporciona ao indivíduo todos os possíveis antigénios imunológicos importantes ao mesmo tempo, i. e., numa única administração. E geralmente aceite que as composições imunogénicas ou composições de vacina baseadas em microrganismos atenuados vivos têm a capacidade para induzir um tipo altamente eficaz de resposta imune. Tais composições imunogénicas ou composições de vacina têm a vantagem de, uma vez imunizado o hospedeiro animal, a entrada do patogéneo no hospedeiro induzir uma evocação acelerada de uma imunidade anterior, humoral ou mediada por célula, que é capaz de controlar o crescimento adicional do organismo antes da infecção poder assumir clinicamente proporções significativas. As composições imunogénicas ou composições de vacina baseadas num patogéneo morto (vacina morta) são geralmente conhecidas na técnica como sendo incapazes ou menos prováveis de conseguir este tipo de resposta. Contudo, as composições imunogénicas ou composições de vacina que contêm 31 um patogéneo vivo, dependendo do nível de atenuação, têm o perigo do hospedeiro imunizado, após imunização, poder contrair a doença contra a qual é pretendida protecção. Deste modo, as composições imunogénicas ou composições de vacina que possuem os atributos imunizantes de um patogéneo vivo, mas que são incapazes de causar efeitos secundários indesejáveis após administração a um indivíduo, seriam altamente desejáveis.
Os patogéneos atenuados vivos podem ser produzidos por incorporação de uma vasta gama de mutações, incluindo alterações de um único nucleótido, mutações específicas de local, inserções, substituições, deleções ou rearranjos. Estas mutações podem afectar um pequeno segmento do genoma do patogéneo, e. g., 15 a 30 nucleótidos, ou um grande segmento do genoma do patogéneo, e. g. , 50 a 1000 nucleótidos, dependendo da natureza da mutação. Por exemplo, as mutações podem ser introduzidas a montante ou a jusante de uma região ou elemento regulador não codificante do patogéneo para eliminar ou diminuir a sua actividade, resultando assim num fenótipo atenuado.
As mutações de regiões reguladoras não codificantes do genoma do patogéneo, que podem resultar em regulação negativa da replicação de um gene do patogéneo e/ou em regulação negativa da transcrição de um gene do patogéneo, podem resultar na produção de patogéneos defeituosos em cada ciclo de replicação; i. e., patogéneos contendo menos do que o complemento total de regiões ou segmentos genómicos requeridos para um patogéneo totalmente infeccioso. Deste modo, o patogéneo alterado irá demonstrar caracteristicas atenuadas, um vez que o patogéneo irá originar mais patogéneos defeituosos do que patogéneos de tipo selvagem em cada ciclo de replicação. Contudo, uma vez que a quantidade de proteína, antigénio ou imunogénio sintetizado em cada ciclo é semelhante para o patogéneo de tipo selvagem e patogéneo 32 defeituoso, é provável que tais patogéneos atenuados sejam capazes de induzir uma boa resposta imune num indivíduo.
Nos casos em que o gene do patogéneo codifica uma proteína estrutural, e. g. , no caso de patogéneos tal como vírus, uma proteína da cápside, matriz, superfície ou envelope, o número de partículas produzidas durante a replicação será reduzido de modo que o patogéneo mutado demonstre características atenuadas; e. g. , um título que resulte em níveis subclínicos de infecção. Por exemplo, uma diminuição na expressão da cápside virai irá reduzir o número de nucleocápsides empacotadas durante a replicação, enquanto que uma diminuição na expressão da proteína do envelope pode reduzir o número e/ou a infectividade dos viriões da progenia. Alternativamente, uma diminuição na expressão das enzimas virais requeridas para a replicação, e. g. , a polimerase, replicase, helicase e semelhantes, deve diminuir o número de genomas da progenia produzidos durante a replicação. Uma vez que o número de partículas infecciosas produzidas durante a replicação é reduzido, os vírus alterados demonstram características atenuadas. Contudo, o número de partículas virais antigénicas produzidas serão geralmente suficientes para induzir uma vigorosa resposta imune num indivíduo.
Um modo alternativo para manipular patogéneos atenuados envolve a introdução de uma mutação, incluindo, mas não limitada a, uma inserção, deleção ou substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos e/ou epitopos em uma ou mais das proteínas do patogéneo. Isto pode ser prontamente realizado através da manipulação da mutação apropriada na sequência génica correspondente do patogéneo. Qualquer modificação que altere a actividade da proteína do patogéneo, de modo que a replicação 33 seja modificada ou reduzida, está abrangida pela presente invenção.
Por exemplo, no contexto de virus atenuados, as mutações que interferem mas não eliminam totalmente a ligação virai a receptores da célula hospedeira e subsequente infecção podem ser manipulados em antigénios de superfície virai ou em proteases virais envolvidas no processamento para produzir uma estirpe atenuada. Os antigénios de superfície virai ou os factores de virulência podem ser modificados para conterem inserções, substituições ou deleções de um ou mais aminoácidos ou epitopos que interferem ou reduzem a afinidade de ligação do antigénio virai para receptores da célula hospedeira. Esta abordagem oferece uma vantagem acrescida um vez que pode ser produzido um vírus quimérico, que expressa um epitopo estranho ou heterólogo, que também demonstra características atenuadas. Tais vírus são candidatos ideais para utilização como vacinas recombinantes vivas.
As mutações manipuladas em quaisquer das enzimas virais incluem, mas não estão limitadas a, inserções, deleções e substituições na sequência de aminoácidos do sítio activo da enzima. A título de exemplo, o sítio de ligação de uma enzima poderia ser alterado de modo que a sua afinidade de ligação para o seu substrato seja reduzida e, como resultado, a enzima seja menos especifica e/ou eficiente. Por exemplo, um alvo de escolha é o complexo de polimerase virai, uma vez que existem mutações sensíveis à temperatura em todas as proteínas de polimerase. Deste modo, as alterações introduzidas nas posições de aminoácidos associadas com tal sensibilidade à temperatura podem ser manipuladas no gene da polimerase virai de modo que seja produzida uma estirpe virai atenuada. 34 0 CDV é um vírus de ARN de cadeia simples com envelope de cerca de 100-300 nm de diâmetro e pertencente ao género Morbilivírus. O núcleo do virião do CDV contém um péptido de nucleoproteína (NP) que está intimamente associado ao ARN virai. Um segundo péptido do núcleo é uma fosfoproteína (P). O envelope do CDV contém três péptidos, proteína M (proteína da matriz) e duas glicoproteinas. As glicoproteínas são glicoproteinas de hemaglutinina (H) e uma glicoproteína de fusão (F) . A glicoproteína de fusão é degradada em subunidades mais pequenas, designadas Fi e F2. A proteína H é principalmente responsável pela adsorção virai a células alvo e a glicoproteína de fusão é responsável pela fusão célula-a-célula. Até à data, todos os isolados conhecidos de vírus da esgana contêm estes polipéptidos virais comuns. A via de infecção ao cão é através de gotas de aerossol infecciosas e a transmissão do vírus é facilitada pela tosse, espirros e confinamento íntimo num ambiente morno, húmido e fechado. Estudos sugerem que a infecção virai ocorre primeiro no epitélio respiratório do tracto oronasal superior com propagação subsequente ao parênquima pulmonar profundo (Gorham "Canine Distemper", (1960) Advance Veterinary Science, editado por Brandley and Jungher, 6: 288-315).
Os macrófagos e monócitos do tecido localizado no ou ao longo do epitélio respiratório nas amígdalas parecem ser o primeiro tipo de células a apanharem e replicarem o CDV. 0 vírus é então propagado na corrente sanguínea a tecidos linforreticulares distantes. Isto é realizado por viremia e ocorre em qualquer parte de dois a quatro dias após a infecção inicial. Entre oito e nove dias após a infecção, o vírus propaga-se para além dos tecidos linforreticulares, para envolver tecidos epiteliais e mesenquimais (Appel, (1969) Am. J. Vet Res. 30, 1167-1182). É nesta fase da infecção virai que as respostas imunes específicas de hospedeiro para antigénios 35 virais influenciam o resultado da doença. A forma fatal aguda da doença é caracterizada por propagação virai irrestrita a virtualmente todos os tecidos no corpo. 0 vírus pode ser encontrado em qualquer excreção e secreção no indivíduo infectado, e através da utilização de métodos de imunofluorescência ou técnicas de seguimento de antigénio, pode ser observada a presença do antigénio, virtualmente, em qualquer tipo de célula dentro do cão. Para a maioria destes animais, a causa mais provável da morte é complicação neurológica fatal fulminante e/ou encefalite.
Alguns cães infectados com CDV apresentam progressão clinicamente retardada da doença e pequenas respostas imunes convalescentes. Os sintomas clínicos, se presentes, são subtis no início da doença e são um reflexo da persistência virai dentro do sistema nervoso central (SNC). 0 desenvolvimento subsequente da doença no SNC é variável. A maioria dos cães infectados com CDV não apresentam essencialmente qualquer sintoma manifesto de doença clínica e são reconhecidos como cães convalescentes, clinicamente normais. Foi mostrado que cães activamente infectados que eventualmente recuperam da infecção do CDV apresentam anticorpos antivirais circulantes livres no, ou próximo do, sexto ou sétimo dia após a infecção (Krakowka, et al., (1975) J. Infect. Dis. 132. 384-392) . Os títulos sobem rapidamente até níveis elevados no início da convalescência.
Os cães afectados de forma aguda com CDV apresentam graus variáveis de depressão, anorexia e febre. A pele pode estar de forma variável desidratada, seca e áspera, e inelástica. Uma proporção destes animais apresenta fotofobia e evidências de corrimento ocular-nasal mucopurulento. A diarreia intermitente é um sinal clínico comum. Durante esta fase virémica aguda da doença, o vírus está espalhado em todas as secreções e 36 excreções. À medida que a doença progride, pode-se desenvolver pneumonia, frequentemente devida a invasores bacterianos secundários. Os cães nesta fase da doença estão moderada a gravemente linfopénicos, dependendo do grau ou da quantidade de infecção secundária. Embora os cães afectados de forma aguda possam apresentar qualquer combinação de sinais neurológicos, na sua apresentação mais comum, o cão apresenta convulsões de pequeno mal ou grande mal. Estes episódios convulsivos ocorrem ao longo do tempo e com frequência crescente. A segunda forma neurológica de esgana canina é aquela que ocorre com encefalite de cão velho (ODE) , ou ocorre após infecção sub-clinica e recuperação aparente. Os sinais do SNC podem ser extremamente variados em apresentação e podem ser equivocados como tumor cerebral, traumatismo craniano, meningite bacteriana, hidrocefalia e doença discai da coluna vertebral. Uma importante manifestação não neural da infecção do CDV em cães é a imunossuppressão associada a CDV (Krakowka, et ai., (1980) Am. J. Vet. Res. 41, 284-292). Muitos dos sinais da infecção pelo vírus da esgana canina são atribuíveis a processos infecciosos secundários coincidentes que ocorrem neste animal debilitado. A doença em cães também pode estar associada com patogéneos bacterianos, tais como espécies bacterianas pneumónicas incluindo, mas não limitadas a, Bordetella bronchiseptica, espécies de Pasteurella, espécies de Staphylococcus e Streptococcus. Estas bactérias são responsáveis pela conjuntivite purulenta, rinite e broncopneumonia observadas clinicamente em cães infectados com CDV. As infecções virais mistas, principalmente do tipo respiratório, são também comuns. Além da infecção de adenovírus II caninos, reovírus, vírus de parainfluenza canina e presumivelmente outros vírus, tal como o 37 vírus do herpes canino, podem estar todos envolvidos em infecções mistas duplas ou múltiplas. 0 cPi2 é um vírus de ARN que induz uma doença respiratória que é uma das doenças virais mais habitualmente encontradas no cão. Quando a combinação do vírus da parainfluenza, do adenovírus-2 canino e da bactéria Bordetella bronchiseptica ocorre conjuntamente, resulta em "tosse do canil". 0 cPi2 também provoca traqueobronquite que, nalguns animais, resulta em pneumonia exsudativa. Os sinais do tosse desenvolvem-se 7 a 9 dias após a exposição ao vírus. Os sinais clínicos sao suave e de curta duraçao, salvo se ocorrerem infecções secundárias. 0 cPi2 é um vírus esférico com envelope com um diâmetro médio de 150-200 nm, com uma nucleocápside helicoidal rodeada por uma bicamada lipídica coberta com pontas de glicoproteína. Cada partícula virai contém um genoma de ARN de cadeia simples de sentido negativo, não segmentado, com nucleoproteína (NP) e fosfoproteína (P) e proteínas grandes (L). A infecção por cPi2 é adquirida através de inalação de núcleos de gotículas respiratórias infectadas. O nariz e a nasofaringe são os principais locais de infecção. O vírus inicia a infecção, principalmente por ligação às células epiteliais ciliadas destas áreas através de proteínas de hemaglutinina-neuraminidase, que se combinam especificamente com receptores de ácido neuramínico nas células hospedeiras. Subsequentemente, os vírus entram na célula através de fusão com a membrana celular mediada por receptores F1 e F2. Os vírus multiplicam-se e invadem outras células intra e extracelularmente. A multiplicação do virus ocorre ao longo dos tecidos traqueobrônquicos, provocando produção aumentada de muco. 38 A laringotraqueíte é uma inflamação da laringe e da traqueia que, quando ocorre em cães, é conhecida geralmente como "tosse do canil". 0 principal sintoma é a tosse manifestada por uma "tosse" seca e curta ou por uma série dessas tosses. No seu estado mais grave, a tosse pode ser paroxismal e a infecção envolve a totalidade do tracto respiratório, produzindo frequentemente pneumonia. A tosse é também caracterizada como sendo profunda, persistente, não produtiva e geralmente acompanhada por corrimento nos olhos e nariz. A temperatura pode ser normal, embora seja geralmente elevada. 0 inicio da doença pode ser repentino e pode ocorrer sem sinais preliminares. Uma vez que a doença é muito contagiosa, os cães infectados devem ser isolados para prevenir infecção de populações inteiras. A doença produz importantes perdas económicas a proprietários de canis e, embora não sendo habitualmente fatal, pode enfraquecer os cães de modo a produzir efeitos sérios a partir de outras doenças. 0 vírus cPi2 vivo e outros vírus, tais como CDV, adenovírus canino de Tipo 2 (CAV2) e parvovírus canino (CPV) podem ser propagados em culturas de tecidos animais até que ambos os vírus se tenham tornado não patogénicos, i. e., os vírus tornam-se inactivos ou, caso contrário, atenuados. 0 vírus cPi2 é capaz de propagação numa vasta variedade de sistemas de cultura de tecido, tais como, por exemplo, embrião de pinto, embrião de pato, rim porcino, testículos porcinos, rim bovino embrionário, rim de felino, rim canino e rim de macaco; e também em linhas celulares estabelecidas, tais como, por exemplo, rim bovino de Madin Darby (MDBK), rim canino de Madin Darby (MDCK) e córnea de coelho do Serum Institute (SIRC).
Para a propagação de, por exemplo, o adenovírus canino de Tipo 2 (CAV2), são preferidas culturas de tecido de rim, 39 particularmente as derivadas de bovinos e caninos, uma vez que o CAV2 não replica favoravelmente noutros sistemas de cultura de tecidos animais como faz o virus cPi2. A atenuação de cada vírus pode ser realizada por passagens em série convencionais, incluindo técnicas de passagem por diluição terminal, em que pode ser utilizado um número suficiente de passagens numa cultura de tecidos susceptíveis, até o vírus se tornar não patogénico sem perda de imunogenicidade. Um imunogénio, composição imunogénica ou uma solução ou suspensão imunogénica preparada a partir daí podem estimular uma resposta imune em cães susceptíveis à doença, sem produzir os sintomas clínicos normalmente devidos ao agente virulento a qualquer nível significativo. A propagação pode ser conduzida no mesmo ou em diferentes tecidos, como aqueles acima descritos.
Os intervalos de tempo de passagem devem permitir suficientemente que o vírus se replique entre passagens, e as temperaturas de incubação são mantidas, de um modo preferido, desde cerca de 30 °C até cerca de 38 °C. O intervalo de tempo de passagem óptimo depende do sistema de cultura particular e da temperatura utilizada. Em qualquer caso, se ocorreu ou não suficiente replicação do vírus, pode ser prontamente determinado por técnicas convencionais, tal como a técnica de hemadsorção descrita em Shelokov, a. (1958) Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 97, 802; que é particularmente útil para o vírus cPi2, ou por observações citopáticas, tal como ao permitir que o virus cresça durante uma passagem particular antes do ponto onde pode ser observado um efeito citopático bruto, enquanto é mantida a incubação.
Um método vantajoso de propagação utiliza células de rim canino, particularmente linhas celulares MDCK contínuas. Por exemplo, para fins imunogénicos ou de vacina, podem ser feitas 40 cerca de, pelo menos, 15 e, de um modo preferido, desde cerca de 20 até cerca de 45 passagens dos vírus, desde o isolamento até culturas de tecido de rim de cão, em aproximadamente intervalos de três dias e a temperaturas de incubação de cerca de 30 até cerca de 38 °C. É preferido utilizar o material com mais passagens, uma vez que isto beneficiará a produção de respostas imunes favoráveis em indivíduos com a sua necessidade.
Na preparação de composições imunogénicas ou composições de vacina, o CDV virulento pode ser cultivado em culturas de células de mamíferos, em condições convencionais de cultivo de vírus. As células hospedeiras podem ser inoculadas com vírus no momento de plaqueamento das células, ou com uma mudança de meio contendo CDV quando a monocamada celular está 90-100% confluente. A multiplicidade da razão de infecção (MOI) pode ser desde cerca de 0,001 até cerca de 0,05, de um modo preferido, cerca de 0,01. Qualquer meio apropriado de cultivo de células de mamífero, tais como, mas não limitado a, Meio Essencial Mínimo de Eagle, Meio de Eagle modificada por Dulbecco, Meio de Dulbecco modificado por Iscove, meio F12 de HAM, meio F15, meio RPMI 1640, contendo soro animal, tais como soro fetal de vitela, soro de vitela, soro de cavalo, soro canino e semelhantes, desde cerca de 0% até cerca de 10%, suplementos, tais como L-glutamina e outros aminoácidos essenciais e não essenciais, Solução Salina Equilibrada de Hanks (HBSS), solução salina de Earle, piruvato de sódio, bicarbonato de sódio, insulina, transferrina, e agentes antibióticos e antimicóticos, tais como, mas não limitados a, gentamicina, penicilina, estreptomicina, polimixina B, anfotericina e Fungizone®, podem ser utilizados para produzir o(s) vírus. Estão também compreendidos pela presente invenção meios de cultura celular sem soro. 41
Os vírus de culturas celulares infectadas mantidas a uma gama de temperatura desde cerca de 35 °C até cerca de 40 °C, durante desde cerca de 2 até cerca de 7 dias após inoculação, pode ser recolhidos após este período de tempo. As culturas infectadas podem ser inoculadas com meio de cultura de células, que pode ser recolhido após um período adicional de incubação de 2 a 5 dias. Os fluidos virais são recolhidos em recipientes estéreis e podem ser clarificados por filtração. Os fluidos virais podem ser adicionalmente concentrados utilizando tecnologia de ultrafiltração convencional (e. g., sistemas
Pellicon da Millipore) com filtros que têm limites de exclusão de tamanho de partícula de 105 Daltons.
Outros vírus atenuados vivos que podem ser misturados com os estabilizadores da presente invenção incluem, sem limitação, vírus da raiva, vírus da influenza , vírus da parainfluenza, vírus da papeira, adenovírus, tais como adenovírus canino de Tipo 2 (CAV2), vírus sincicial respiratório, vírus de
Epstein-Barr, rinovírus, poxvírus, tais como vírus de vacínia, varíola suína, varíola de guaxinim, virus de varíola aviária, tais como varíola de aves de capoeira, varíola dos canários, varíola das rolas, varíola dos pombos, poliovírus, Coxsackievirus, ecovirus, coronavirus, virus da rubéola, virus Rubella, vírus varicella-zoster, vírus de herpes (humanos e animais), vírus de herpes simplex, parvovírus, tal como parvovirus canino (CPV), citomegalovírus, virus da hepatite, tal como vírus da hepatite contagiosa canina, papilomavírus humano, alfavírus, tal como vírus da floresta Semliki, vírus Sindbis, virus do rio Ross, virus da encefalite equina oriental, virus da encefalite equina ocidental, vírus da encefalite equina venezuelana, vírus O'nyong-nyong, flavivírus, tais como o vírus da febre de Dengue e o vírus do Nilo ocidental, Bunyavírus, arenavírus, rotavírus, hepadnavírus, tais como orto-hepadnavírus 42 e avi-hepadnavírus, filovírus, retrovírus, tais como retrovírus endógenos porcinos, HTLV-1, HTLV-2, FeLV, BLV, MLV, MMSV, virus de macacos Mason-Pfizer, lentivirus, tais como HIV-1, HIV-2, FIV, SIV, BIV, calicivírus felino, virus da panleucopenia felina, vírus da peritonite infecciosa felina, vírus da rinotraqueíte felina, vírus TGE (suíno) e vírus da febre aftosa.
As composições ou soluções ou suspensões imunogénicas que compreendem, por exemplo, paramixovírus caninos, são misturadas com os estabilizadores de acordo com a invenção para formar soluções ou suspensões imunogénicas estabilizadas. De um modo preferido, um volume da solução ou suspensão de paramixovírus canino é misturado com um volume do estabilizador.
Os estabilizadores da invenção também podem ser utilizados para estabilizar soluções ou suspensões imunogénicas multivalentes que podem compreender, por exemplo, uma solução ou suspensão imunogénica de paramixovírus canino e, pelo menos, um componente imunogénico activo originário ou derivado de um patogéneo à excepção de paramixovírus. 0 componente imunogénico activo, como aqui definido, pode compreender patogéneos atenuados vivos, tais vírus, bactérias, fungos ou parasitas atenuados vivos. Contudo, um componente imunogénico activo pode também compreender vírus mortos, imunogénios heterólogos recombinantes, antigénios, subunidade imunogénicas (e. g. , proteínas, polipéptidos, péptidos, epitopos, haptenos) ou epitopos de imunogénios ou antigénios derivados ou originários de um ou mais patogéneos aqui descritos, que podem ser expressos a partir de vectores virais, vectores bacterianos, vectores plasmídicos e semelhantes. 0 componente imunogénico activo de acordo com a presente invenção pode compreender um ou mais imunogénios seleccionados 43 de um patogéneo canino, incluindo, mas não limitado a, virus da raiva, adenovirus canino de Tipo 2 (CAV2), herpesvírus canino (CHV), parvovirus canino (CPV), coronavirus canino, Leptospira canícola, Leptospira icterohaemorragiae, Leptospira grippotyphosa, Borrelia burgdorferi, Bordetella bronchiseptica e semelhantes, incluindo as suas combinações. 0 componente imunogénico activo pode incluir os genes HA, F, NP do CDV, o gene da cápside de CPV, os genes spike, Μ, N de coronavirus canino, os genes HN e F de cPi2, genes de Leptospira, genes de Bordetella, genes de Borrelia e os genes gB, gC e gD do herpesvirus canino, entre outros. Estes componentes podem ser úteis como composições imunogénicas ou composições de vacina para proteger caninos contra a doença provocada por estes patogéneos. 0 adenovirus canino de Tipo 2 (CAV2) está generalizado e é altamente contagioso em cães. Produz sintomas que se assemelham a uma constipação. Geralmente os primeiros sinais da doença contagiosa são febre que geralmente desce em um a dois dias. Os cães afectados podem ter amigdalite, sensibilidade abdominal, figado inchado, vómitos e diarreia. A doença aguda é normalmente fatal. 0 CAV2 pode ser inactivado ou atenuado e combinado com o CDV (e/ou cPi2) para produzir uma vacina multivalente. Alternativamente, podem ser utilizados imunogénios ou antigénios de CAV2, ou epitopos de imunogénios de CAV2, tais como cápside, matriz ou proteínas hexon. 0 parvovirus canino (CPV) é um virus intestinal comum que pode causar vómitos, diarreia, gastroenterite, miocardite e hepatite em cães jovens. Verificou-se estar generalizado em cães. 0 CPV pode estar presente nas composições, suspensões ou soluções imunogénicas da invenção como inactivado, atenuado vivo, ou imunogénios ou antigénios de CPV, ou epitopos de 44 imunogénios de CPV, tais como os produtos génicos VP1, VP2 (cápside).
Duas infecções bacterianas comuns de cães também podem ser combinadas na sua forma atenuada nas composições, suspensões ou soluções imunogénicas estabilizadas da presente invenção; estas são Leptospira canicola e Leptospira ichterohaemorrhagiae. As infecções de Lepto são comuns em cães e especialmente em cães infectados por CDV, cPi2, ou combinações de vírus como frequentemente observadas em cães que sofrem de esgana ou tosse do canil e, assim, as suas inclusões nas composições, suspensões ou soluções imunogénicas estabilizadas da presente invenção são de utilidade significativa.
Outro componente imunogénico activo útil nas composições e métodos da presente invenção pode compreender um ou mais imunogénios seleccionados de patogéneos aviários, incluindo, mas não limitados a, Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, virus da bronquite infecciosa (IBV), vírus da doença de Newcastle (NDV), vírus da síndrome da queda de postura (EDS), vírus da bursite infecciosa (IBDV), vírus de peru, vírus da influenza aviária, vírus da doença de Marek, herpesvírus, tais como virus da laringotraqueíte infecciosa, vírus da bronquite infecciosa aviária, reovírus aviário, poxvírus incluindo, varíola aviária, varíola das aves de capoeira, varíola dos canários, varíola dos pombos, varíola das codornízes e varíola das rolas, poliomavírus aviário, pneumovírus aviário, vírus da rinotraqueíte aviária, vírus da reticuloendoteliose aviária, retrovirus aviário, vírus endógenos aviários, vírus da eritroblastose aviária, vírus da hepatite aviária, vírus da anemia aviária, vírus da enterite aviária, vírus de doença de Pacheco, vírus da leucemia aviária, parvovírus aviário, rotavírus aviário, vírus da leucose aviária, vírus do 45 vírus da aviária, aviário, fibrossarcoma musculoaponeurótico aviário, mieloblastose aviária, vírus associado a mieloblastose vírus da mielocitomatose aviária, vírus do sarcoma vírus da necrose do baço aviária e as suas combinações.
Relativamente a imunogénios específicos, os componentes imunogénicos activos também podem ser os genes HN e F do vírus da doença de Newcastle, os genes da poliproteína e VP2 do vírus da bursite infecciosa, os genes S e N do vírus da bronquite infecciosa e os genes gB e gD do vírus da doença de Marek. Estes componentes podem ser utilizados como composições imunogénicas ou composições de vacina para proteger aves de aviário contra a doença provocada por estes patogéneos.
Alternativamente, o componente imunogénico activo compreende um ou mais imunogénios de um patogéneo felino, tais como, mas não limitados a, herpesvírus felino (FHV), calicivírus felino (FCV), vírus da leucemia felina (FeLV), vírus da peritonite infecciosa felina, vírus da panleucopenia felina, vírus da imunodeficiência felina (FIV), vírus da raiva, e semelhantes e as suas combinações. 0 componente imunogénico activo pode também incluir os genes gB, gC e gD do herpesvírus felino, os genes env e gag/pro do FeLV, os genes env, gag/pol e tat do vírus FIV, o gene da cápside do calicivírus felino, o gene S modificado, o gene M e N do vírus da peritonite infecciosa felina e o gene VP2 do parvovírus felino. Estes componentes podem ser úteis como composições imunogénicas ou de vacina para proteger gatos contra a doença provocada por estes patogéneos. 0 componente imunogénico activo pode compreender um ou mais imunogénios de um patogéneo equino, tais como o herpesvírus 46 equino (tipo 1 ou tipo 4), virus da influenza equina, vírus da encefalomielite equina (EEV), tétano, vírus do Nilo Ocidental, e semelhantes ou as suas combinações. 0 componente imunogénico activo pode também incluir, os genes gB, gC, gD e Imediatamente-Precoce de herpesvírus equino de tipo 1, os genes gB, gC, gD e Imediatamente-Precoce de herpesvírus equino de tipo 4, os genes HA, NA, M e NP do vírus influenza equino, genes do vírus da encefalite equina Oriental, genes do vírus da encefalite equina Ocidental, genes do virus da encefalite equina Venezuelana, os genes prM-M-E do vírus do Nilo Ocidental e genes do vírus da arterite equina, mas não está limitado a estas sequências. Estes componentes podem ser úteis como composições imunogénicas ou composições de vacina para proteger cavalos contra a doença provocada por estes patogéneos. 0 componente imunogénico activo pode compreender um ou mais imunogénios de um patogéneo bovino, tais como o vírus da raiva, rotavírus bovino, vírus da parainfluenza bovina de tipo 3 (bCcPi2-3), coronavírus bovino, vírus da diarreia virai bovina (BVDV), vírus da febre aftosa (FMDV), vírus sincicial respiratório bovino (BRSV), vírus da rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR), Escherichia coli, Pasteurella multocida, Pasteurella haemolitica, e semelhantes e as suas combinações. 0 componente imunogénico activo pode também ser seleccionado dos genes gB, gC, gD e Imediatamente-Precoce de herpesvírus bovino de tipo 1, os genes F e G de BRSV, os genes da poliproteina, El, E2 de BVDV, os genes HN e F do virus PI3 ou genes de rotavírus. Estes componentes podem ser úteis como composições imunogénicas ou de vacina para proteger gado bovino contra a doença provocada por estes patogéneos. 47
Além disso, o componente imunogénico activo pode compreender um ou mais imunogénios de um patogéneo porcino, tais como, mas não limitados a, vírus da influenza suína (SIV), circovírus porcino de tipo 2 (PCV-2), vírus da sindrome respiratória reprodutiva porcina (PRRSV), vírus da pseudo-raiva (PRV), parvovirus porcino (PPV), vírus da peste porcina (HCV), FMDV, Mycoplasma hyopneumoniae, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica, Escherichia coli, e semelhantes e as suas combinações. 0 componente imunogénico activo pode também incluir os genes gB, gC, gD e Imediatamente-Precoce de PRV, os genes HA, NA, M e NP do vírus da influenza suína, poliproteína, Ei e E2 do vírus da peste suína, os genes 0RF1 e 0RF2 do vírus PCV2, os genes 0RF3, 0RF4, 0RF5, 0RF6 ou 0RF7 do vírus PRRSV ou genes de Mycoplasma hyopneumoniae. Estes componentes podem ser úteis como composições imunogénicas ou composições de vacina para proteger porcos contra a doença provocada por estes patogéneos. 0 componente imunogénico activo pode compreender sequências que codificam uma proteína expressa em patogéneos, tais como vírus de ADN ou ARN como HIV, HCV, HBV, HPV, EBV, HSV, CMV, HTLV, hantavirus, vírus Ébola, vírus Marburg, vírus da febre do Rift Valley, vírus Lassa e vírus da influenza, vírus da enteridite hemorrágica (HEV), vírus da rinotraqueíte infecciosa (IBRV), entre outros. Tais imunogénios podem ser vantajosamente utilizados como composições imunogénicas ou composições de vacina para proteger indivíduos, tal como humanos, contra a doença provocada por estes patogéneos. 0 componente imunogénico activo pode também ser, por exemplo, de qualquer uma das seguintes bactérias patogénicas e seus antigénios: espécies de Actinobacilus, tais como 48
Actinobacilus pleuropneumoniae, Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica, Bordetella avium, Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae, Chlamydía psittaci, espécies de klebsiella, tais como klebsiella pneumoniae, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium pseudotuberculosis, Mycobacterium pneumoniae, Streptococcus do grupo A, Streptococcus equi, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans, Neisseria gonorrhoeae, espécies de Erysipelothrix, Escherichia coli enterotoxigénica, Vibrio cholerae, Bacillus anthracis, Haemophilus influenzae, Haemophilus somnus, Haemophilus parasuis, espécies de Salmonella, Salmonella agona, Salmonella blockley, Salmonella enteriditis, Salmonella hadar, Salmonella heidelberg, Salmonella montevideo, Salmonella senftenberg, cholerasuis, espécies de Rickettisia, Helicobacter pylori, Helicobacter felis, espécies de Shigella, espécies de Listeria, Legionella pneumoniae, espécies de Pseudomonas, espécies de Borrelia, Borrelia burgdorferi, Neisseria meningitides, espécies de Clostridium, Clostridium difficile, Ureaplasma urealyticum, espécies de Staphylococcus, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Pasteurella pestis, espécies de Campylobacter, Campylobacter jejuni, espécies de Treponema, espécies de Leptospira, Corynebacterium diphtheria, Haemophilus ducreyí, Haemophilus influenza, espécies de Erlichhía, entre outras. 0 componente imunogénico activo também pode ser derivado de um fungo ou bolor, tais como Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatis, espécies de Penicilium, espécies de Fusarium, espécies de Candida, tais como Candida trichophyton, Candída parapsilosis, Candida glabrata, Candida dubliniensis e Candida albicans, espécies de Rhizopus, espécies de Cryptococcus, tais como Cryptococcus neoformans, Cryptococcus grubii, Cryptococcus 49 gattii, Paracoccidiodes brasiliensis, Histoplasma capsulatum, e outros fungos e bolores. 0 componente imunogénico activo pode também ser seleccionado de antigénios parasíticos derivados de espécies parasíticas, incluindo, mas é não limitadas a, espécies de Plasmodium, espécies de Trypanosome, espécies de Giardia, espécies de Boophilus, espécies de Babesia, espécies de Entamoeba, espécies de Eimeria, espécies de Leishmania, espécies de Schistosoma, espécies de Brugia, espécies de Fascida, espécies de Dirofilaria, espécies de Wuchereria, espécies de Onchocerea, espécies de Treponema, espécies de Toxoplasma, espécies de Cryptococcus, espécies de Coccidia, espécies de Histomoniasis, espécies de Hexamitiasis, espécies de Giardia, entre outras; nemátodos incluindo espécies de Ascaris, espécies de Trichinella, e semelhantes, helmintes, tais como tremátodos, ténias, entre outros; e outros organismos de tipo patogénicos. Os métodos para preparar imunogénios derivados de virus, bactérias, fungos, bolores, protozoários, nemátodos e helmintes são conhecidos na técnica.
Outros imunogénios úteis podem ser, por exemplo, factores de virulência antigénica excretados purificados, tais como toxinas, citotoxinas e semelhantes. Os antigénios de toxina que são desintoxicados por modificação (toxóides), podem ser administrados em combinação com um adjuvante, tal como hidróxido de alumínio e podem ser utilizados para estimular a formação de anticorpos neutralizadores de toxinas. Os exemplos de toxinas que podem ser utilizados como um imunogénio incluem endotoxinas e exotoxinas bacterianas, tal como lipopolisacáridos, enterotoxinas, incluindo enterotoxinas termo-instáveis (LT) , enterotoxinas termo-estáveis (ST), verotoxina (VT) e semelhantes. Os imunogénios de exotoxina bacteriana são 50 excretados no meio circundante e incluem, por exemplo, toxina da difteria (Corynebacterium diphtheriae) , toxina do tétano (Clostridium tetani), enterotoxinas excretadas por Staphylococcus aureus, toxinas botulinicas (Clostridium botulinum); e toxinas produzidas por algas, tal como neurotoxinas; e semelhantes. As endotoxinas termo-estáveis, libertadas por autolise da bactéria, incluem, por exemplo, as toxinas da cólera libertadas do Vibrio cholerae Gram-negativo, colicinas produzidas por bactérias intestinais, tal como E. coli (bacteriocina).
Os imunogénios derivados ou originários de virus, bactérias, fungos e semelhantes, podem ser produzidos por métodos de cultura in vitro utilizando meio de cultura ou linhas celulares hospedeiras apropriados e métodos convencionais bem conhecidos dos especialistas na técnica. Por exemplo, os PRRSV podem ser cultivados numa linha celular apropriada, tal como a linha celular MA-104 (ver Patentes U.S. N° 5587164; 5866401; 5840563; 6251404, entre outras) . De um modo semelhante, o PCV-2 pode ser cultivado utilizando a linha celular PK-15 (ver Patente U.S. N° 6391314); 0 SIV pode ser cultivado em ovos (Patente U.S. N° 6048537); e o Mycoplasma hyopneumoniae podem ser cultivado num meio de cultura apropriado (Patentes U.S. N° 5968525; 5338543; Ross R. F. et al., (1984) Am. J. Vet. Res. 45: 1899-1905). Vantajosamente, o CDV pode ser cultivado em células pulmonares de vison, tal como aquelas descritas na Patente U.S. N° 5178862. Outras técnicas para a preparação de imunogénios derivados de virus são conhecidas no campo técnico e descritas, por exemplo, em Ulmer et al., Science 259: 1745 (1993); Male et al., Advanced Immunology, páginas 14.1-14.15, J.B. Lippincott Co., Filadélfia, Pa. (1989). 51 São também úteis péptidos sintéticos imunogénicos que mimetizam sequências peptídicas antigénicas. Tais imunogénios podem ser sintetizados utilizando uma técnica de fase sólida, como descrita, por exemplo, em R. B. Merrifield, Science 85:2149-2154 (1963), purificados e, opcionalmente, acoplados a uma proteína veículo, tais como dipéptido de muramilo (MDP), albumina de soro bovino (BSA), hemocianina do caramujo (KLH), e semelhantes, utilizando um agente de acoplamento bifuncional, tal como glutaraldeído e semelhantes.
Os antigénios sintéticos estão também incluídos na definição, por exemplo, poliepitopos, epitopos flanqueadores e outros antigénios recombinantes ou derivados sinteticamente.
Ver, e. g. , Bergmann et al. (1993) Eur J. Immunol. 23,2777-2781; Bergmann et al. (1996) J. Immunol. 157, 3242-3249; Suhrbier, A. (1997) Immunol. Cell Biol. LO 402-408; Gardner et al. (1998) 12a Conferência Mundial de SIDA, Genebra, Suiça, 28 de Junho a 3 de Julho de 1998. Os fragmentos imunogénicos podem geralmente incluir, pelo menos, cerca de 3 aminoácidos, de um modo preferido, pelo menos, cerca de 5 aminoácidos, de um modo mais preferido, pelo menos, cerca de 10-15 aminoácidos e, de um modo muito preferido, 25 ou mais aminoácidos, da molécula. Não existe limite superior critico ao comprimento do fragmento, que pode compreender quase a totalidade da sequência proteica ou mesmo uma proteína de fusão compreendendo dois ou mais ou, pelo menos, um epitopo da proteína.
Desta forma, uma estrutura mínima de um ácido nucleico que expressa um epitopo pode compreender nucleótidos para codificar um epitopo, imunogénio ou antigénio de uma proteína ou poliproteína. Um ácido nucleico que codifica um fragmento da proteína ou poliproteína total, mais vantajosamente, compreende ou consiste essencialmente de, ou consiste de um mínimo de cerca 52 de 21 nucleótidos, vantajosamente, pelo menos, cerca de 42 nucleótidos e, de um modo preferido, pelo menos, cerca de 57, cerca de 87 ou cerca de 150 nucleótidos consecutivos ou contíguos da sequência que codifica a proteína ou poliproteina total. Os processos de determinação de epitopo, tais como, produção de bibliotecas de sobreposição de péptidos (Hemmer B. et al., (1998) Immunology Today 19(4), 163-168), Pepscan (Geysen et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81, 3998-4002;
Geysen et al., (1985) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 82, 178-182;
Van der Zee R. et al., (1989) Eur. J. Immunol. 19, 43-47; Geysen Η. M., (1990) Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health 21, 523-533; kit de síntese peptídica Multipin® da Chiron e algoritmos (De Groot A. et al., (1999) Nat. Biotechnol. 17, 533-561) e no Pedido PCT com o N° de série PCT/US2004/022605. Outros documentos citados e aqui incorporados podem também ser consultados para os métodos de determinação de epitopos de um imunogénio ou antigénio, assim como as moléculas de ácidos nucleicos que codificam tais epitopos.
Na presente divulgação, o componente imunogénico activo pode também compreender um agente terapêutico, uma citocina, uma toxina, um imunomodulador, uma proteína, um péptido, um anticorpo, um fragmento de ligação a antigénio de um anticorpo, um adjuvante ou qualquer outra molécula codificável por ADN e desejada para distribuição a um animal ou uma célula ou tecido animal.
Está também contemplado pela presente invenção a inclusão de espécies de ARN anti-sentido, catalítico ou ARN pequeno interferente nas composições imunogénicas e composições de vacina da presente invenção que podem ser dirigidas a qualquer molécula presente na célula receptora ou provável de estar presente na célula receptora. Estas incluem, mas não estão 53 limitadas a, espécies de ARN que codificam moléculas reguladoras celulares, tal como interleucina-6, agentes causadores de cancro, tal como papilomavírus humano, enzimas, ARN virai e ARN derivado de patogéneo, tal como ARN de HIV-1. Os ARN também podem ser dirigidos a sequências de ADN não transcritas, tais como regiões promotoras ou intensificadoras, ou a quaisquer outras moléculas presentes nas células receptoras, tais como, mas não limitadas a, enzimas envolvidas na síntese de ADN ou moléculas de tARN.
Além disso, as citocinas e os imunomoduladores podem ser co-expressos nas composições imunogénicas e composições de vacina da presente invenção. Os exemplos incluem, mas não estão limitados a, IL-2, IL-4, TNF-α, GM-CSF, IL-10, IL-12, IGF-1, IFN-oí, IFN-β e IFN-γ.
Podem ser introduzidos motivos de sequência específica, tal como o motivo RGD, na ansa H-I de um vector virai ou plasmídico para aumentar a sua infectividade. Foi demonstrado que esta sequência é essencial para a interacção de determinadas proteínas da matriz extracelular e de adesão com uma superfamília de receptores de superfície celular denominadas integrinas. A inserção do motivo RGD pode ser vantajosamente útil em indivíduos imunocomprometidos. Um vector recombinante pode ser construído por clonagem de antigénio ou imunogénio especifico ou os seus fragmentos, em quaisquer vectores, tal como aqueles aqui descritos. 0 vector recombinante pode ser utilizado para transduzir células de um vertebrado para a utilização como um agente imunizante (ver, por exemplo, Pedido de Patente U.S. N° de Série 10/424409, incorporado por referência). 54
De um modo preferido, os codões que codificam componentes imunogénicos activos, tais como antigénios, imunogénios e epitopos, são codões "optimizados", i. e., os codões são aqueles que aparecem frequentemente em, i. e., genes caninos altamente expressos, em vez daqueles codões que são frequentemente utilizados por, por exemplo, CDV ou cPi2. Tal utilização de codão proporciona expressão eficiente do componente imunogénico activo em células. Noutras formas de realização, por exemplo, quando o componente imunogénico activo é expresso em bactérias, leveduras ou outro sistema de expressão, o perfil de utilização de codão é alterado para representar a tendência do codão para genes altamente expressos no organismo em que o antigénio ou imunogénio está a ser expresso. Os perfis de utilização de codão são conhecidos na literatura para genes altamente expressos de muitas espécies (e. g., Nakamura et al., 1996; Wang et al, 1998; McEwan et ai. 1998).
Nalguns casos pode ser necessário modificar a sequência codificante de modo que possa ser ligada às sequências de controlo com a orientação apropriada; i. e., para manter a grelha de leitura apropriada. Pode também ser desejável produzir mutantes ou análogos dos componentes imunogénicos activos desejados. Os mutantes ou análogos podem ser preparados por deleção de uma porção de uma sequência que codifica uma proteína, por inserção de uma sequência e/ou por substituição de um ou mais nucleótidos de uma sequência. As técnicas para modificar sequências nucleotídicas, tal como mutagénese dirigida, são descritas em, e. g. , Sambrook et al. , supra; DNA Cloning, supra; Nucleic Acid Hibridization, supra.
Os imunogénios úteis como componentes imunogénicos activos na presente invenção podem estar contidos em vectores. Tais vectores incluem, mas não estão limitadas a, vectores de 55 expressão recombinante in vivo, tais como um vector de ácido nucleico ou um plasmídeo (Pedido EP N° 1001025; Chaudhuri P, (2001) Res. Vet Sei. 70, 255-6), vectores de virus, tais como, mas não limitados a, vectores de adenovirus, vectores de poxvirus, tais como, vectores de virus da varíola de aves de capoeira (Patentes U.S. N° de série 5174993; 5505941; e 5766599) e da variola dos canários (Patente U.S. N° de série 5756103), vectores retrovirais, vectores do vírus do herpes, vectores baseados em alfavírus, vectores fúngicos ou vectores bacterianos (Escherichia coli ou espécies de Salmonella). São aqui descritos exemplos específicos de vectores úteis na invenção. O vector pode ser um vector virai, vantajosamente, um vector da varíola aviária contendo, pelo menos, um componente imunogénico activo, ou um seu epitopo, ou um seu fragmento. Numa a forma de realização particularmente vantajosa, o vector da varíola aviária é um vector da varíola dos canários, vantajosamente, um vector atenuado da varíola dos canários, tal como ALVAC. Os vírus atenuados de varíola dos canários são descritos na Patente U.S. N° 5756103 (ALVAC) e no documento W001/05934. O vector da varíola aviária pode ser um vector da varíola das aves de capoeira, vantajosamente, um vector atenuado da varíola das aves de capoeira, tal como TROVAC. É feita aqui referência também à Patente U.S. N° 5766599 que se refere à estirpe atenuada da varíola das aves de capoeira TROVAC. Quanto a isto, é feita a referência ao virus da variola dos canários disponível a partir da ATCC sob o número de acesso VR-111. Estão também disponíveis numerosas estirpes de imunização do vírus da variola das aves de capoeira, e. g., a estirpe DIFTOSEC CT comercializada pela Merial e a vacina NOBILIS VARIOLE comercializada pela Intervet; e é feita também referência à Patente U.S. N° 5766599 que se refere à estirpe atenuada da varíola das aves de capoeira TROVAC. 56
Um vector virai também útil para distribuir componentes imunogénicos activos inclui um poxvírus, e. g. , um virus vacinia ou um virus vacinia atenuado (por exemplo, MVA, uma estirpe Ankara modificada obtida após mais de 570 passagens da estirpe da vacina Ankara em fibroblastos de embrião de galinha; ver Stickl e Hochstein-Mintzel, (1971) Munch. Med. Wschr. 113, 1149-1153; Sutter et ai. (1992) Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 89, 10847-10851; disponível como VR-1508 na ATCC; ou NYVAC, ver Patente U.S. N° 5494807, por exemplo, os Exemplos 1 a 6 da Patente U.S. N° 5494807 que discute a construção de NYVAC, assim como variações de NYVAC com mais ORF removidas do genoma da estirpe Copenhaga do virus vacinia, assim como a inserção de sequências codificantes de ácidos nucleicos heterólogos em locais deste recombinante e também a utilização de promotores condizentes; ver também documento WO96/40241) um virus da variola aviária ou um vírus atenuado da varíola aviária (e. g. , varíola dos canários, varíola das aves de capoeira, varíola das rolas, varíola bovina, varíola dos pombos, varíola das codornízes, ALVAC ou TROVAC; ver, e. g., Patentes U.S. N° 5505941, 5494807), varíola suína, varíola de guaxinim, varíola de canelo ou vírus da mixomatose.
Para informação sobre o método para produzir os seus recombinantes e como administrar os seus recombinantes, o especialista pode fazer referência aos documentos aqui citados e ao documento WO90/12882, e. g., a respeito do vírus vacinia é feita menção às Patentes U.S. N° 4769330, 4722848, 4603112, 5110587, 5494807 e 5762938 inter alia; a respeito da varíola das aves de capoeira, é feita menção às Patentes U.S. N° 5174993, 5505941 e US-5766599 inter alia; a respeito da varíola dos canários é feita menção à Patente U.S. N° 5756103 inter alia; a respeito da varíola suína é feita menção à Patente U.S. 57 Ν° 5382425 inter alia; e, a respeito da varíola de guaxinim, é feita menção ao documento WO00/03030, inter alia.
Quando o vector de expressão é um vírus vacinia, o local ou os locais de inserção para o ácido nucleico ou ácidos nucleicos que codificam os componentes imunogénicos activos, tais como imunogénios, antigénios, epitopos e semelhantes, a serem expressos, estão vantajosamente no gene da timidina cinase (TK) ou no local de inserção, o gene da hemaglutinina (HA) ou o local de inserção, a região que codifica o corpo de inclusão de tipo A (ATI); ver também os documentos aqui citados, especialmente aqueles que se referem ao vírus vacinia. No caso da varíola dos canários, o local ou locais de inserção são vantajosamente as ORF C3, C5 e/ou C6; ver também os documentos aqui citados, especialmente aqueles que se referem ao vírus da varíola dos canários. No exemplo da varíola das aves de capoeira, o local ou locais de inserção são vantajosamente ORF F7 e/ou F8; ver também os documentos aqui citados, especialmente aqueles que se referem ao vírus da varíola das aves de capoeira. 0 local ou locais de inserção para o vírus MVA são vantajosamente como em várias publicações, incluindo Carroll M. W. et ai. (1997) Vaccine 15(4), 387-394; Stittelaar K.J. et ai. (2000) J. Virol. , 2000, 74(9), 4236-4243; Sutter G. et ai. (1994) Vaccine 12(11), 1032-1040; e, a este respeito, é também assinalado que o genoma completo de MVA é descrito em Antoine G., (1998) Virology 244, 365-396, o qual permite ao especialista utilizar outros locais de inserção ou outros promotores.
Vantajosamente, o ácido nucleico a ser expresso pode ser introduzido sob o controlo de um promotor de poxvírus específico, e. g., o promotor de vacinia 7,5 kDa (Cochran et ai., (1985) J. Virology 54, 30-35), o promotor I3L de vacinia (Riviere et ai., (1992) J. Virology 66, 3424-3434), o promotor 58 HA de vacínia (Shida, (1986) Virology 150,451-457), o promotor 42K de vacínia (Cooper J.A. et al. , (1981) J. Virol. 37(1), 284-94), o promotor ATI de varíola de bovino (Funahashi et al. (1988) J. Gen. Virol. 69, 35-47), o promotor 11K de vacínia (Patente U.S. N° 5017487); o promotor H6 de vacínia (Taylor J. et al., (1988) Vaccine 6, 504-508; Guo P. et al. (1989) J.
Virol. 63, 4189-4198; Perkus M. et al. (1989) J. Virol. 63, 3829-3836) ou promotores sintéticos de vacínia ou poxvírus, inter alia.
Vantajosamente, para a imunização de mamíferos, o vector de expressão pode ser um vector de varíola dos canários ou um de varíola das aves de capoeira. Deste modo, pode haver expressão das proteínas heterólogas com replicação produtiva limitada ou nenhuma.
Outro vector virai útil para distribuir e expressar componentes imunogénicos activos é o adenovírus. O adenovírus é um vírus de ADN sem envelope. Os vectores derivados de adenovírus têm um número de caracteristicas que os tornam particularmente úteis para transferência génica. Um vector de adenovírus recombinante é um vector de adenovírus que contém uma ou mais sequências nucleotidicas heterólogas (e. g., duas, três, quatro, cinco ou mais sequências nucleotidicas heterólogos). Por exemplo, a biologia dos adenovírus está caracterizada em detalhe, o vírus é extremamente eficiente na introdução do seu ADN na célula hospedeira, o vírus pode infectar uma vasta variedade de células e tem uma vasta gama de hospedeiros, o vírus pode ser produzido em grandes quantidades com relativa facilidade e o vírus pode apresentar replicação defeituosa por deleções na região precoce 1 ("EI") do genoma virai. 59
Contrariamente a, por exemplo, retrovírus, o adenovírus não se integra no genoma da célula hospedeira, não é capaz de infectar células que não se dividem e não é capaz de transferir eficientemente genes recombinantes in vivo (Brody et al., 1994). Estas características tornam os adenovírus, candidatos atractivos para transferência génica in vivo de, por exemplo, um ácido nucleico heterólogo de interesse em células, tecidos ou indivíduos com a sua necessidade.
Os vectores de adenovírus contendo múltiplas deleções são preferidos para aumentar a capacidade de incorporação do vector e reduzir a probabilidade do recombinação para produzir adenovírus competentes para replicação (RCA). Nos casos em que o adenovírus contém múltiplas deleções, não é necessário que cada uma das deleções, se presentes sozinhas, resulte num adenovírus com replicação defeituosa. Desde que uma das deleções torne a replicação do adenovírus defeituosa, as deleções adicionais podem ser incluídas para outros fins, e. g., para aumentar a capacidade de incorporação do genoma de adenovírus para sequência nucleotídicas heterólogas. De um modo preferido, mais do que uma das deleções previne a expressão de uma proteína funcional e torna a replicação do adenovírus defeituosa. De um modo mais preferido, todos as deleções são deleções que tornam a replicação do adenovírus defeituosa.
Os adenovírus recombinantes podem incluir vectores de adenovírus com EI defeitoso ou removido, E3 defeitoso ou removido e/ou E4 defeitoso ou removido, ou incluir o vector de adenovírus "sem substância" em que todos os genes virais estão removidos. Os vectores de adenovírus podem compreender mutações em genes El, E3 ou E4, ou deleções nestes ou em todos os genes adenovirais. A mutação El aumenta a margem de segurança do vector porque os mutantes de adenovírus com El defeituoso são 60 referidos como sendo defeituosos em replicação em células não permissivas e são, no minimo, altamente atenuados. A mutação E3 aumenta a imunogenicidade do antigénio por disrupção do mecanismo pelo qual o adenovirus regula negativamente as moléculas do MHC de classe I. A mutação E4 reduz a imunogenicidade do vector de adenovirus por supressão da expressão do gene tardio, podendo assim permitir re-imunização repetida utilizando o mesmo vector. São contemplados vectores de adenovirus de qualquer serotipo ou serogrupo que são removidos ou mutados em El, E3, E4, EI e E3, e EI e E4.
Um vector de adenovirus "sem substância" é o último modelo na família dos vectores de adenovirus e é derivado de sequências de adenovirus humano. A sua replicação requer um vírus auxiliar e uma linha celular 293 humana especial que expressa Ela e Cre, uma condição que não existe no ambiente natural; o vector é privado de todos os genes virais, assim o vector enquanto um veículo da vacina é não imunogénico e pode ser inoculado múltiplas vezes para re-imunização. 0 vector de adenovirus "sem substância" também contém um espaço de 36 kb para acomodar ácido(s) nucleico(s) heterólogo(s) de interesse, permitindo assim co-distribuição de um grande número de antigénio ou imunogénios nas células. 0 vector pode ser qualquer vírus ou vector virai recombinante adequado, incluindo, sem limitação, um poxvírus (e. g. , vírus vacínia, vírus da varíola aviária, vírus da varíola dos canários, vírus da varíola das aves de capoeira, vírus da variola de guaxinim, vírus da variola suína, etc.), adenovirus (e. g., adenovirus canino), herpesvírus, baculovírus, retrovírus ou o vector pode ser um plasmídeo. Os documentos aqui citados, além de proporcionarem exemplos de vectores úteis na prática da invenção, também podem proporcionar fontes para 61 outros componentes imunogénicos activos a serem expressos por vector ou vectores nas, ou incluídos nas, composições, soluções ou suspensões imunogénicas estabilizadas da invenção.
Os elementos para a expressão dos componentes imunogénicos activos podem estar vantajosamente presentes num vector plasmídico. 0 termo plasmideo abrange qualquer unidade de transcrição de ADN compreendendo um ácido nucleico de acordo com a invenção e os elementos necessários para a sua expressão in vivo numa célula ou células do hospedeiro ou alvo desejado; e, quanto a isto, é assinalado que um plasmideo circular, super-enrolado ou não super-enrolado, assim como uma forma linear, são pretendidos estarem no âmbito da invenção.
De um modo mínimo, a expressão de um componente imunogénico activo, tal como um antigénio, um imunogénio e um epitopo, compreende um codão de iniciação (ATG), um codão de terminação e um promotor e, opcionalmente, também uma sequência de poliadenilação para determinados vectores, tais como vectores plasmídicos e determinados virais, e. g., vectores virais à excepção de poxvírus. Quando o ácido nucleico codifica um fragmento de poliproteína no vector, um ATG é colocado no terminal 5' da grelha da leitura e um codão de terminação é colocado no terminal 3' . Podem estar presentes outros elementos para o controlo da expressão, tais como sequências intensificadoras, sequências estabilizadoras e sequências sinal que permitem a expressão, modificação e secreção da proteína.
Uma "sequência codificante" de ácido nucleico ou uma "sequência nucleotídica codificante" de uma proteína particular é uma sequência de ADN que é transcrita e traduzida num polipéptido in vítro ou in vivo, quando colocada sob o controlo de elementos reguladores apropriados. Os limites da sequência 62 codificante são determinados por um codão de iniciação no terminal 5' e um codão de terminação de tradução no terminal 3'. Uma sequência codificante pode incluir, mas não está limitada a, sequências procarióticas, ADNc de ARNm eucariótico, sequências de ADN genómico de ADN eucariótico (e. g. , mamíferos) e mesmo sequências de ADN sintético. Uma sequência de terminação de transcrição estará geralmente localizada a 3' da sequência codificante.
Os "elementos de controlo" de ácidos nucleicos referem-se colectivamente como promotores, locais de splice do ARN, locais de ligação de ribossoma, sinais de poliadenilação (e. g. , sinais de poliadenilação derivados da hormona do crescimento bovina, sinal de poliadenilação de SV40), sequências de terminação da transcrição, domínios reguladores a montante, intensificadores, origens de replicação (que podem ser de origens bacterianas, e. g.r derivados de vectores bacterianos, tal como pBR322, ou de origens eucarióticas, e. g., sequências replicativas autónomas (ARS)), sinais de empacotamento, sequências líder que podem ou não estar contidas na sequência codificante de um componente imunogénico activo, tais como um imunogénio, antigénio ou epitopo. Se uma sequência sinal estiver incluída, esta pode ser a sequência homóloga nativa ou uma sequência heteróloga. As sequências líder podem ser removidas pelo hospedeiro no processamento pós-tradução. Ver, e. g., Patentes U.S. N° 4431739; 4425437; 4338397, e semelhantes, que colectivamente estabelecem a transcrição e tradução de uma sequência codificante numa célula hospedeira.
Todas estas sequências de controlo não necessitam de estar sempre presentes num vector recombinante, desde o gene desejado seja capaz de ser transcrito e traduzido. Um elemento de controlo, tal como um promotor, "dirige a transcrição" de uma 63 sequência codificante numa célula quando a ARN polimerase se liga ao promotor e transcreve a sequência codificante em ARNm. 0 ARNm resultante é traduzido subsequentemente no polipéptido codificado pela sequência codificante.
Uma variedade de elementos promotores/intensificadores podem ser utilizados dependendo do nivel e da expressão especifica de tecido desejados. 0 promotor pode ser constitutivo ou indutivel (e. g.r o promotor da metalotioneina, o promotor indutivel da tetraciclina e o promotor indutivel da ecdisona, entre outros), dependendo do perfil de expressão desejado. 0 promotor pode ser nativo ou heterólogo e pode ser uma sequência natural ou sintética. "Heterólogo" neste contexto descreve uma região de iniciação transcricional que não é encontrada no hospedeiro de tipo selvagem, no qual a região de iniciação transcripcional é introduzida. 0 promotor é escolhido de modo que funcione na(s) célula (s) ou tecido(s) alvo de interesse. Estão contemplados pela presente invenção promotores específicos do cérebro, específicos do fígado e específicos dos músculos (incluindo específicos do músculo esquelético, cardíaco, liso e/ou do diafragma). São também preferidos promotores de mamíferos e de aves de aviário, particularmente promotores caninos. 0 promotor pode ser vantajosamente um promotor "precoce". Um promotor "precoce" é conhecido na técnica e é definido como um promotor que conduz a expressão de um gene que é rapidamente e temporariamente expresso na ausência de síntese proteica de novo. 0 promotor pode também ser um promotor "forte" ou "fraco". Os termos "promotor forte" e "promotor fraco" são conhecidos na técnica e podem ser definidos pela frequência relativa da iniciaçao da transcrição (vezes por minuto) no promotor. Um promotor "forte" ou "fraco" também pode ser definido pela sua afinidade para a ARN polimerase. 64 0 gene heterólogo pode ser colocado sob o controlo de um promotor, local de ligação de ribossoma (para a expressão bacteriana) e, opcionalmente, de um intensificador ou operador, de modo que a sequência de ADN que codifica a proteína desejada seja transcrita em ARN num célula hospedeira ou indivíduo transformado por um vector contendo o componente imunogénico activo.
Os elementos de controlo e outras sequências reguladoras podem ser ligados à sequência codificante antes da inserção num vector, tal como os vectores de clonagem acima descritos. Alternativamente, a sequência codificante pode ser clonada directamente num vector de expressão que já contenha as sequências de controlo e um sítio de restrição apropriado.
De um modo mais preferido, os antigénios ou imunogénios estão operativamente associados com, por exemplo, um promotor imediatamente-precoce principal do citomegalovírus humano (CMV), um promotor do vírus 40 símio (SV40), um promotor de β-actina, um promotor de albumina, um promotor do Factor de Elongação 1-a (EFl-cO , um promotor ΡγΚ, um promotor MFG ou um promotor do vírus do sarcoma de Rous. Outras sequências de controlo da expressão incluem promotores derivados de genes da imunoglobina, adenovírus, vírus do papiloma bovino, vírus do herpes, etc. Qualquer promotor virai de mamífero pode ser também utilizado na prática da invenção, para além de qualquer promotor virai canino. De entre os promotores caninos de origem virai, os promotores de genes imediatamente-precoces do vírus do herpes canino infeccioso, promotores precoces (i. e., timidina cinase, ADN helicase, ribonucleótido redutase) ou tardios, podem ser utilizados nos métodos e vectores da presente invenção. Outros promotores incluem o promotor EI de adenovírus canino, assim 65 como o promotor do complexo de histocompatibilidade major I canino. Além disso, está bem dentro do alcance do especialista, seleccionar um promotor adequado que expresse o antigénio ou imunogénio de interesse em níveis suficientemente elevados para induzir ou obter uma resposta imunogénica ao antigénio ou imunogénio, sem experimentação supérflua.
Tem sido especulado que a condução de transcrição nucleotidica heteróloga com o promotor CMV pode resultar em regulação negativa da expressão em animais imunocompetentes (ver, e. g., Guo et al., 1996) . Desta forma, é preferido também associar operativamente as sequências de antigénio ou imunogénio com, por exemplo, um promotor CMV modificado que não resulte nesta regulação negativa da expressão do antigénio ou imunogénio.
Os vectores também podem compreender um poliligante ou um local de clonagem múltipla ("MCS"), que pode estar vantajosamente localizado a jusante de um promotor. 0 poliligante proporciona um local para inserção das moléculas de antigénio ou imunogénio que estão "em-grelha" com a sequência promotora, resultando em "ligação operativa" da sequência promotora ao antigénio ou imunogénio de interesse. Os locais de clonagem múltipla e os poliligantes são bem conhecidos dos especialistas na técnica.
Os vectores aqui descritos também podem compreender genes de resistência a antibióticos. Os exemplos de tais genes de resistência a antibióticos que podem ser incorporados nos vectores da invenção incluem, mas não estão limitados a, ampicilina, tetraciclina, neomicina, zeocina, canamicina, bleomicina, higromicina, cloranfenicol, entre outros. 66
Nas formas de realização onde existe mais do que um antigénio ou imunogénio, as sequências do antigénio ou imunogénio podem estar associadas operativamente com um único promotor a montante e uma ou mais sequências de local de entrada de ribossoma interno (IRES) a jusante (e. g., a sequência de IRES EMC do picornavírus) . Uma sequência de IRES permite a tradução multicistrónica de duas ou mais sequências codificantes a partir de uma única sequência de ARNm.
Podem ser utilizados vectores para transformar uma célula ou indivíduo hospedeiro apropriado. É conhecida na técnica uma variedade de linhas celulares de mamífero e incluem linhas celulares imortalizadas disponíveis a partir da American Type Culture Collection (ATCC) , tais como, mas não limitadas a, células de ovário de hamster Chinês (CHO) , células HeLa, células de rim de hamster bebé (BHK) , células de rim de macaco (COS) , células de carcinoma hepatocelular humano (e. g., Hep G2), células de rim de bovino Madin-Darby ("MDBK"), células de rim de canino Madin-Darby ("MDCK"), assim como outras. De modo semelhante, os hospedeiros bacterianos, tais como E. coli, Bacillus subtilis, Salmonella spp., Shigella spp. e Streptococcus spp., terão utilização na presente invenção. Os hospedeiros de levedura, úteis na presente invenção, incluem, inter alia, Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Candida maltosa, Hansenula polymorpha, Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces lactis, Pichia guillerimondii, Pichia pastoris, Schizosaccharomyces pombe e Yarrowia lipolytica. Os hospedeiros de insecto úteis na presente invenção incluem, mas não estão limitados a células de Spodoptera frugiperda.
Alternativamente, podem ser utilizados vectores para infectar uma célula em cultura de modo a expressar um produto génico desejado, e. g., para produzir uma proteína ou péptido de 67 interesse. De um modo preferido, a proteína ou péptido é excretado no meio e pode ser daí purificado utilizando técnicas de rotina conhecidas no campo técnico. As sequências de péptido sinal que direccionam a secreção extracelular directa de proteínas são conhecidas na técnica e as sequências nucleotídicas que as codificam pode ser ligadas operativamente à sequência nucleotidica que codifica o péptido ou proteína de interesse, através de técnicas de rotina conhecidas no campo técnico. Alternativamente, as células podem ser lisadas e a proteína recombinante expressa pode ser purificada a partir do lisado celular. De um modo preferido, a célula é uma célula de vertebrado, de um modo mais preferido, uma célula de mamífero.
Os métodos para preparar e/ou administrar um vector ou recombinantes ou plasmídeos para expressão de produtos génicos in vivo ou in vitro podem ser quaisquer métodos desejados, e. g. , um método que é igual ou análogo aos métodos divulgados em, ou divulgados em documentos citados em: Patentes U.S. N° 4603112; 4769330; 4394448; 4722848; 4745051; 4769331; 4945050; 5494807; 5514375; 5744140; 5744141; 5756103; 5762938; 5766599; 5990091; 5174993; 5505941; 5338683; 5494807; 5591639; 5589466; 5677178; 5591439; 5552143; 5580859; 6130066; 6004777; 6130066; 6497883; 6464984; 6451770; 6391314; 6387376; 6376473; 6368603; 6348196; 6306400; 6228846; 6221362; 6217883; 6207166; 6207165; 6159477; 6153199; 6090393; 6074649; 6045803; 6033670; 6485729; 6103526; 6224882; 6312682; 6348450 e 6312683; Pedido de
Patente U.S. N° de Série 920197 apresentado em 16 de Outubro de 1986; documentos W090/01543; W091/11525; W094/16716; W096/39491; WO98/33510; EP265785; EP0370573; Andreansky et al. (1996) Proc. Nat1. Acad. Sei. USA 93, 11313-11318; Ballay et al. (1993) EMBO J. 4, 3861-65; Felgner et al. (1994) J. Biol. Chem. 269, 2550-2561; Frolov et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 93, 11371-11377; Graham, F.L. (1990) Trends Biotechnol. 8, 85-87; 68
Grunhaus et al. (1992) Sem. Virol. 3, 237-52; Ju et al. (1998)
Diabetologia 41, 736-739; Kitson et al. (1991) J. Virol. 65,
3068-3075; McClements et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 93, 11414-11420; Moss, B. (1996) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 93, 11341-11348; Paoletti, E. (1996) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 93, 11349-11353; Pennock et al. (1984 ) Mol . Cell . Biol: 4, 399-406;
Richardson (Ed), (1995) Methods in Molecular Biology 39, "Baculovírus Expression Protocols", Humana Press Inc.; Smith et al. (1983) Mol. Cell. Biol. 3, 2156-2165; Robertson et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 93, 11334-11340; Robinson et al. (1997) Sem. Immunol. 9, 271; e Roizman, B. (1996) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 93, 11307-11312. A expressão no indivíduo de uma sequência heteróloga pode resultar numa resposta imune no indivíduo aos produtos de expressão do antigénio ou imunogénio. Assim, podem ser utilizados componentes imunogénicos activos numa composição imunogénica ou composição de vacina para proporcionar meios para induzir uma resposta imune, que pode, mas não necessita ser, protectora. As técnicas de biologia molecular utilizadas no contexto da invenção são descritas por Sambrook et al. (2001).
Ainda mais alternativamente ou adicionalmente, em composições imunogénicas ou de vacina, a sequência nucleotídica que codifica os antigénios ou imunogénios pode ter daí removida uma porção que codifica um domínio transmembranar. Contudo, ainda mais alternativamente ou adicionalmente, o vector ou composição imunogénica pode ainda conter e expressar numa célula hospedeira uma sequência nucleotídica que codifica uma sequência sinal tPA heteróloga, tal como um tPA de mamífero, e/ou um intrão estabilizante, tal como o intrão II do gene da β-globina de coelho. 69
Um vector pode ser administrado a um indivíduo numa quantidade para conseguir as quantidades definidas para composições do produto génico (e. g. , epitopo, antigénio, terapêutico e/ou anticorpo). As dosagens abaixo e acima daquelas aqui exemplificadas estão contempladas e para qualquer composição para ser administrada a um indivíduo, incluindo os seus componentes e para qualquer método de administração particular, é preferido determinar a toxicidade, tais como por determinação da dose infecciosa mediana da cultura celular (CCID50), a dose letal (LD) e LD50 num indivíduo adequado; e a dosagem da composição, concentração dos componentes aí presentes e o momento da administração da composição, que induz uma resposta adequada, tal como por titulações dos soros e sua análise, e. g., por ELISA e/ou análise de soro-neutralização. Tais determinações não requerem experimentação supérflua do conhecimento do especialista, desta divulgação e dos documentos aqui citados.
As composições imunogénicas e/ou composições de vacina multivalentes e/ou as soluções ou suspensões imunogénicas compreendendo CAV2 vivo atenuado, CDV vivo atenuado, cPi2 vivo atenuado e CPV vivo atenuado, e compreendendo um estabilizador de acordo com a presente invenção, foram testadas nos Exemplos aqui apresentados. Estas vacinas multivalentes mostraram boa estabilidade para CDV, cPi2, CAV2 e CPV. Isto demonstra que os estabilizadores da presente invenção são capazes de preservar a viabilidade e inf ectividade de CDV, cPi2, CAV2 e CPV. Isto também demonstra que os estabilizadores da presente invenção são capazes de preservar a viabilidade e infectividade de uma variedade de vírus à excepção dos paramixovírus caninos, especialmente parvovírus canino e adenovírus canino. Os estabilizadores de acordo com a presente invenção podem também 70 ser utilizados como uma composição imunogénica ou composição de vacina monovalente compreendendo CAV, CPV, CDV ou cPi2.
De um modo preferido, um volume da solução ou suspensão multivalente (i. e., paramixovirus canino e, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção dos paramixovirus) é misturada com um volume do estabilizador. É também proporcionado pela invenção um processo para produzir uma composição imunogénica ou composição de vacina atenuada viva estabilizada liofilizada compreendendo, por exemplo, paramixovirus caninos, que compreende o passo de liofilização de uma solução ou suspensão estabilizada formada por uma solução ou suspensão de paramixovirus canino atenuado vivo, misturada com um estabilizador de acordo com a invenção.
Outro aspecto da presente invenção é um processo para produzir uma composição imunogénica ou composição de vacina multivalente estabilizada liofilizada, que compreende o passo de liofilização de uma solução ou suspensão multivalente estabilizada compreendendo, por exemplo, uma solução ou suspensão de paramixovirus canino atenuado vivo e, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovirus, misturada com um estabilizador de acordo com a invenção. A "liofilização" envolve crio-secagem e refere-se ao processo pelo qual uma suspensão é congelada, após a qual a água é removida por sublimação a baixa pressão. Como aqui utilizado, o termo "sublimação" refere-se a uma alteração nas propriedades físicas de uma composição, em que a composição muda directamente de um estado sólido para um estado gasoso sem se tornar num 71 líquido. Como aqui utilizado, o "valor Tg" é definido como a temperatura de transição vítrea, que corresponde à temperatura abaixo da qual a composição congelada torna-se vítrea.
Um processo para liofilização de uma solução ou suspensão de acordo com a invenção pode compreender os passos de: (a) colocar em contacto a solução imunogénica ou suspensão imunogénica com um estabilizador da invenção, formando assim uma solução ou suspensão imunogénica estabilizada; (b) arrefecer, à pressão atmosférica, a solução ou suspensão imunogénica estabilizada a uma temperatura inferior a cerca do valor Tg da solução ou suspensão imunogénica estabilizada; (c) secar a solução ou suspensão imunogénica estabilizada (i. e., o primeiro passo de secagem ou sublimação) por sublimação de gelo a baixa pressão; e (d) remover a água residual em excesso (i. e., segundo passo de secagem ou dessorção) com redução adicional da pressão e aumento da temperatura da solução ou suspensão imunogénica estabilizada. 0 passo (b) de arrefecimento pode ocorrer a temperaturas inferiores a cerca de -40 °C (passo de congelação da água). A secagem da solução ou suspensão imunogénica estabilizada por sublimação de gelo a baixa pressão (c) pode ocorrer a, por exemplo, pressão inferior ou igual a cerca de 200 pbar, enquanto que uma redução adicional da pressão pode ocorrer a pressões inferiores ou iguais a cerca de 100 pbar. Finalmente, a temperatura da solução suspensão ou imunogénica estabilizada durante a remoção da água residual em excesso (d) ocorre a, por exemplo, temperaturas entre cerca de 20 °C e cerca de 30 °C. O processo de liofilização pode também ser realizado com uma solução ou suspensão imunogénica compreendendo paramixovírus canino atenuado vivo e, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de um paramixovírus, 72 em que é misturada com um estabilizador de acordo com a invenção para obter uma composição imunogénica ou de vacina multivalente estabilizada liofilizada. 0 conteúdo de humidade do material liofilizado pode variar desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/p, de um modo preferido, desde cerca de 0,5% até cerca de 3% p/p e, de um modo mais preferido, desde cerca de 1,0% até cerca de 2,6% p/p.
Vantajosamente, a solução ou suspensão imunogénica estabilizada compreendendo, pelo menos, um agente de volume tem um valor Tg elevado de entre cerca de -36 °C até cerca de -30 °C. Um valor Tg elevado permite temperaturas mais altas durante o passo de congelação da água do processo de congelação e/ou do processo de liofilização, diminuindo assim a exposição ao stress do virus atenuado vivo e do componente imunogénico activo, evitando perda substancial de actividade.
Cada passo, incluindo a congelação da água e a sua remoção durante a primeira e segunda secagem, submete os ingredientes biológicos, tal como patogéneos, nas soluções ou suspensões imunogénicas da invenção a choque mecânico, físico e bioquímico, que têm potenciais efeitos adversos na estrutura, aparência, estabilidade, imunogenicidade, infectividade e viabilidade dos patogéneos ou ingredientes biológicos.
Os estabilizadores da invenção permitem boa estabilidade de patogéneos atenuados vivos, como paramixovírus canino, e mantêm a infectividade, em particular, de CDV e cPi2 durante o processo de liofilização e durante o armazenamento. A estabilidade pode ser calculada através da diferença entre o título de infectividade antes do passo de liofilização e o título de infectividade após 12 meses de armazenamento da composição 73 imunogénica ou composição de vacina estabilizada liofilizada a 4 °C. A boa estabilidade pode vantajosamente compreender uma diferença de apenas 1,2 logio e, de um modo preferido, de apenas 1,0 logio. Os métodos para determinar o titulo de infectividade são bem conhecidos dos especialistas na técnica. Alguns métodos para determinar o titulo de infectividade são descritos nos Exemplos aqui apresentados. Igualmente, a estabilidade pode ser estimada por ajuste do titulo logio e dos pontos de tempo da titulação durante o período de armazenamento, utilizando cálculos e/ou algoritmos de regressão linear.
Além disso, os estabilizadores da invenção permitem pastilhas liofilizadas que têm um bom aspecto, ou seja, têm forma regular e cor uniforme. Uma forma irregular pode ser caracterizada pela presença de toda ou parte da pastilha colada ao fundo do recipiente e permanecendo imóvel após viragem e agitação (aspecto colado). Igualmente, uma pastilha que tem uma forma de uma bobine (aspecto bobinado) ou separação da pastilha em duas partes, no sentido do um plano horizontal (aspecto separado) ou uma pastilha que tem um aspecto de uma mousse com furos irregulares (aspecto esponjoso) ou uma pastilha que tem o aspecto de espuma no recipiente (aspecto de merengue) e têm forma irregular, não são aceites (Figuras IA e 1B).
As composições imunogénicas ou composições de vacina liofilizadas estabilizadas utilizando um estabilizador de acordo com a presente invenção e obtidas pelo processo de liofilização, acima descrito, estão abrangidas na presente invenção.
Na presente divulgação, as composições imunogénicas ou de vacina atenuadas vivas estabilizadas liofilizadas ou as composições imunogénicas ou composições de vacina multivalentes estabilizadas liofilizadas compreendem: (i) uma concentração 74 final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor e (ii) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante.
As composições imunogénicas ou de vacina atenuadas vivas estabilizadas liofilizadas ou as composições imunogénicas ou composições de vacina multivalentes estabilizadas liofilizadas podem compreender: (i) uma concentração final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante e (iii) uma concentração final desde cerca de 15% até cerca de 70% p/p de, pelo menos, um agente de volume.
As composições imunogénicas ou composições de vacina liofilizadas estabilizadas de acordo com a presente invenção podem ser armazenadas numa atmosfera seca a temperaturas de frigorifico e à temperatura ambiente, em particular a temperaturas desde cerca de 2 °C até cerca de 35 °C e, mais particularmente, desde cerca de 4 °C até cerca de 25 °C.
Um aspecto adicional da presente invenção proporciona um kit compreendendo um primeiro frasquinho contendo a composição imunogénica ou composição vacina atenuada viva estabilizada liofilizada ou a composição imunogénica ou composição de vacina multivalente estabilizada liofilizada da invenção e um segundo frasquinho contendo um solvente
Para a sua utilização e administração num indivíduo, a composição imunogénica ou composição de vacina estabilizada liofilizada pode ser reconstituída por re-hidratação com um solvente. O solvente é tipicamente água, tais como água 75 desmineralizada ou destilada, água-para-injecção, mas também pode compreender soluções ou tampões fisiológicos, tais como, por exemplo, solução tamponada com fosfato (PBS), ou adjuvantes incluindo, mas não limitados a, emulsões água-em-óleo, Corynebacterium parvum, Bacillus Calmette Guerin, hidróxido de alumínio, glucano, sulfato de dextrano, óxido de ferro, alginato de sódio, Bacto-Adjuvant, determinados polímeros sintéticos, tais como poliaminoácidos e co-polímeros de aminoácidos, saponina, "REGRESSIN" (Vetrepharm, Atenas, Ga.), "AVRIDINE" (N,N-dioctadecil-N',N'-bis(2-hidroxietil)-propanodiamina), óleo de parafina, dipéptido de muramilo e semelhantes. Outros exemplos específicos de adjuvantes e composições adjuvantes são aqui detalhados.
Os adjuvantes adequados incluem fMLP (N-formil-metionil-leucil-fenilalanina; Patente U.S. N° 6017537) e/ou polímero de ácido acrílico ou ácido metacrílico e/ou um copolímero de anidrido maleico e de derivados alcenilo. Os polímeros de ácido acrílico ou ácido metacrílico são reticulados, e. g., com éteres polialcenílicos de açúcares ou poliálcoois. Estes compostos são conhecidos sob o termo "carbómero" (Pharmeuropa, Vol. 8, N° 2, Junho de 1996) . Um especialista na técnica pode também fazer referência à Patente U.S. N° 2909462 (incorporada por referência), que discute tais polímeros acrílicos reticulados com um composto poli-hidroxilado contendo, pelo menos, 3 grupos hidroxilo; um composto poli-hidroxilado contém não mais do que 8 grupos hidroxilo; como outro exemplo, os átomos de hidrogénio de, pelo menos, 3 hidroxilos são substituídos com radicais alifáticos insaturados contendo, pelo menos, 2 átomos de carbono. Os radicais podem conter desde cerca de 2 até cerca de 4 átomos de carbono, e. g., vinilos, alilos e outros grupos etilenicamente insaturados. Os radicais insaturados podem eles próprios conter outros substituintes, tal como metilo. Os 76 produtos vendidos sob o nome Carbopol® (Noveon Inc., Ohio, EUA) são particularmente adequados para a utilização como adjuvantes. São reticulados com uma alil-sacarose ou alilpentaeritritol, aos quais é feita menção dos produtos Carbopol® 974P, 934P e 971P.
Relativamente aos copolímeros de anidrido maleico e de derivados alcenilo, é feita menção aos produtos EMA® (Monsanto), que são copolímeros do anidrido maleico e de etileno, que podem ser lineares ou reticulados, por exemplo, reticulados com éter divinilico. De igual modo, pode ser feita referência à Patente U.S. N° 6713068 e a Regelson, W. et al., 1960; (incorporadas por referência).
Os lípidos catiónicos contendo um sal de amónio quaternário são descritos na Patente U.S. N° 6713068, cujos conteúdos são incorporados por referência, podem também ser utilizados nos métodos e composições de presente invenção. Entre estes lípidos catiónicos, é dada preferência a DMRIE (N-(2-hidroxietil)-N,N-dimetil-2,3-bis(tetradeciloxi)-1-propano-amónio; documento WO96/34109), vantajosamente associado com um lípido neutro, vantajosamente DOPE (dioleoil-fosfatidiletanolamina; Behr J. P. et al., 1994), para formar DMRIE-DOPE. O conteúdo total de componentes em composições imunogénicas ou composições de vacina prontas-a-injectar reconstituídas da invenção pode ser utilizado para proporcionar uma injecção a uma concentração isotónica, e. g. , dentro da gama de cerca de 100-600 mOsm, geralmente dentro de cerca de 250-450 mOsm e, de um modo preferido, cerca de 330 mOsm.
As dosagens dos patogéneos atenuados vivos, especialmente CDV e cPi2, numa composição imunogénica ou composição da vacina estabilizada liofilizada ou em composições imunogénicas ou 77 composiçoes de vacina prontas-a-injectar reconstituídas, podem variar desde cerca de 10 ate cerca de 10 CCID50/dose. Para proteínas, polipéptidos ou glicoproteínas numa composição imunogénica ou composição de vacina multivalente estabilizada liofilizada ou nas composições imunogénicas ou composições de vacina prontas-a-injectar reconstituídas, pode variar num título equivalente antes da inactivação desde cerca de 105 até cerca de 109 CCID5o por dose, de um modo preferido, desde cerca de 106 até cerca de 108 CCID50 por dose.
As composições imunogénicas ou composições de vacina prontas-a-injectar reconstituídas podem ser administradas a um animal por injecção através da via parentérica ou mucósica, de um modo preferido, intramuscular e subcutânea. Contudo, a administração de tais composições imunogénicas ou composições de vacina prontas-a-injectar reconstituídas também pode compreender administração intranasal, epicutânea, tópica ou oral. O volume de uma dose para injecção pode variar desde cerca de 0,1 mL até cerca de 2,0 mL e, de um modo preferido, cerca de 1,0 mL. A invenção vais ser agora adicionalmente descrita através dos seguintes Exemplos não limitativos, apresentados a título ilustrativo de várias formas de realização da invenção e não pretendem, de qualquer forma, limitar a presente invenção.
EXEMPLOS
Exemplo 1: Preparaçao de estabilizadores
As composições e quantidades de componentes nos estabilizadores são mostradas na Tabela 1. 0 "dextrano" compreende dextrano-40000 que tem um peso molecular de 40000 Da. 78
Tabela 1: Composiçoes dos estabilizadores
Estabili zadores Monossacárido(s) redutor(es) ou mistura Ácido antioxidante Agente de volume Solvente F2 Glucose (5% p/v) Rafinose (5% p/v) Ácido aspártico (0,50% p/v) Dextrano (10% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v) F2B Glucose (3% p/v) Rafinose (3% p/v) ácido aspártico (0,20% p/v) Dextrano (6% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v) F6B Galactose (3% p/v) Mannitol (6% p/v) ácido aspártico (0,40% p/v) — Água para injecção (q.s. 100% v/v) F33 Glucose (5% p/v) Fructose (5% p/v) ácido aspártico (0,50% p/v) Dextrano (10% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v) F37 Glucose (5% p/v) Rafinose (5% p/v) Sorbitol (10% p/v) ácido aspártico (0,50% p/v) — Água para injecção (q.s. 100% v/v) A Glucose (1% p/v) Galactose (5% p/v) ácido aspártico (0,50% p/v) Dextrano (6% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v) H Glucose (5% p/v) Rafinose (5% p/v) ácido aspártico (0,50% p/v) Dextrano (6% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v) K Glucose (5% p/v) Sacarose (1% p/v) ácido aspártico (0,50% p/v) Dextrano (6% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v) U Glucose (1% p/v) Galactose (1% p/v) ácido aspártico (0,50% p/v) Dextrano (6% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v) 79
Para cada estabilizador, um litro de água destilada foi aquecido a uma temperatura de cerca de 55 °C sob agitação. Os compostos foram depois adicionados lentamente à água quente, enquanto permanecia sob agitação com uma barra magnética, para facilitar a sua dissolução. A agitação foi mantida durante cerca de 30 minutos após a última adição, resultando assim numa solução homogénea. A solução foi depois arrefecida até à temperatura ambiente. Após o arrefecimento da solução, o estabilizador foi esterilizado por filtração esterilizante através de um filtro que tem um limite de tamanho de poro de 0,22 pm (Optiscale Durapore) . As soluções estéreis dos estabilizadores F2, F2B, F6B, F33, F37, A, Η, K e U foram depois armazenadas à temperatura ambiente.
Exemplo 2: Processo de liofilizaçao
Cada um dos estabilizadores obtidos no Exemplo 1 foram utilizados para estabilizar uma suspensão virai. Quatro volumes do estabilizador foram adicionados à temperatura ambiente e sob agitação a 6 volumes de uma mistura de quatro virus caninos atenuados vivos. Os vírus caninos atenuados vivos foram o vírus da parainfluenza canina de tipo 2 (PI2), vírus da esgana canina (CDV), adenovírus canino de tipo 2 (CAV2) e parvovírus canino (CPV).
Os valores Tg destas suspensões estabilizadas foram medidos com um calorímetro diferencial de varrimento (Mettler Toledo; Viroflai, França) e são mostrados na Tabela 2. 80
Tabela 2: Valor Tg de suspensões estabilizadas
Estabilizador Valor Tg (°C) Estabilizador Valor Tg (°C) F2 1 GO O 00 A -36,2 F2B -33,0 H -34,9 F6B -46,8 K -36,2 F33 -34, 2 U -33,0 F37 42,9 — —
As suspensões estabilizadas formuladas com o estabilizador foram ainda liofilizadas. 0 ciclo de liofilização compreendeu 3 fases: (1) fase de congelação: as suspensões estabilizadas, reunidas em frascos pequenos, foram colocadas num liofilizador e arrefecidas por contacto com as prateleiras à pressão atmosférica até estarem completamente congeladas. A temperatura das prateleiras era inferior ou igual a cerca de -50 °C. (2) fase de sublimação (ou primeira secagem) : a pressão no liofilizador foi ajustada para uma pressão suficientemente baixa para obter sublimação do gelo (pressão inferior ou igual a 120 pbar) . A temperatura foi regulada de modo que não ocorreu descongelação durante a sublimação, a uma temperatura do produto que foi inferior ou igual a -22 °C) . 0 vapor resultante da sublimação foi congelado no condensador de gelo localizado antes das bombas de vácuo. (3) fase de dessorção (ou segunda secagem) : no final da sublimação, quando todo o gelo desapareceu do produto a ser liofilizado, o excesso de água residual livre e/ou ligada foi eliminado por redução adicional da pressão, novamente para 81 inferior ou igual a 30 pbar no liofilizador e por aumento da temperatura até cerca de 30 °C.
Após liofilização, o vácuo foi eliminado utilizando azoto estéril. Os frascos foram depois fechados e o liofilizador foi descarregado. O conteúdo de humidade de cada vacina liofilizada estabilizada foi medido e mostrado na Tabela 3.
Tabela 3: Conteúdo de humidade de vacinas liofilizadas estabilizadas
Estabilizador Conteúdo de humidade (%) Estabilizador Conteúdo de humidade (%) F2 1,32 A 2, 01 F2B 2,16 H 2,60 F6B 3,63 K 2,58 F33 2,03 U 1,08 F37 3,27 — —
Exemplo 3: Estudos de estabilidade após liofilizaçao
As pastilhas liofilizadas obtidas após a liofilização das suspensões estabilizadas, como descrito no Exemplo 2, foram observadas para distinguir entre pastilhas anómalas e aquelas que têm uma forma regular. As pastilhas liofilizadas contendo um estabilizador da presente invenção e compreendendo ainda um agente de volume (i. e., F2, F2B, F33, A, Η, K e U) têm um bom aspecto; tendo apenas 5 pastilhas com o estabilizador F2 um aspecto colado acima de 110 (4,5%). As vacinas estabilizadas liofilizadas foram depois armazenadas a +4 °C. 82 A determinação do título virai das vacinas liofilizadas foi realizada através do cálculo do título médio de três titulações repetidas na mesma vacina. As vacinas liofilizadas obtidas após liofilização, como descrita no Exemplo 2, foram re-hidratadas em 1 mL de água para injecção. Cada vacina foi subsequentemente diluída para obter diluições desde -6,8 logio até -3,8 logio.
Para a titulação de cPi2, cada diluição foi depositada 6 vezes numa placa de titulação numa quantidade do 50 pL por poço, com 50 pL de uma solução de anticorpos anti-hepatite e 150 pL de uma suspensão celular de células de rim canino Madin-Darby (células MDCK) a 100000 células/mL. As células MDCK foram cultivadas em meio de cultura F15 suplementado com soro fetal de vitela a 2%. Como controlo, 100 pL da diluição e 150 pL de células MDCK foram depositados no mesmo poço. Todas as placas de titulação foram mantidas a 37 °C durante 7 dias. Após a incubação, os sobrenadantes foram removidos de cada poço das placas de titulação e colocados em novas placas de titulação com poços cónicos. Foram adicionados eritrócitos de cobaio (Alsever sp.) a cada poço contendo o sobrenadante. A diluição da solução de eritrócitos foi a mesma em todos os poços. Após 3-4 horas a +4 °C, os resultados foram obtidos por colocação das placas sobre papel branco. Os ataques virais foram então detectados através da presença de um precipitado facilmente identificável.
Para a titulação de CDV, cada diluição foi depositada 6 vezes numa placa de titulação, numa quantidade de 50 pL por poço, com 50 pL de uma solução de anticorpos anti-cPi2 e 150 pL de uma suspensão celular de células VERO (células de rim de macaco) a 120000 células/mL. As célula Vero foram cultivadas em meio essencial mínimo de Eagle (meio de cultura MEM) 83 suplementado com soro fetal da vitela a 2%. Como um controlo, cem pL da diluição e 150 pL de células VERO foram depositados no mesmo poço. Todas as placas de titulação foram mantidas a 37 °C durante 7 dias. Após a incubação, as placas de titulação foram colocadas sob um microscópio. Os ataques virais foram detectados através da degradação das células VERO. Os titulos virais foram expressos em logio de 50% da dose infecciosa de cultura celular por mililitro (CCID50/mL) . A Tabela 4 mostra a diminuição dos titulos de cPi2 e CDV, expressos em logio CCID5o/mL, após o passo de liofilização e um período de armazenamento de 12 meses a 4 °C.
Tabela 4: Diminuição dos títulos de cPi2 e CDV após liofilização e armazenamento durante 12 meses a 4 °C.
Estabilizador Diminuição do titulo de cPi2 Diminuição do titulo de CDV F2 -0,36 1 o > CTi o F2B -0, 43 o x—1 1 F6B -0,93 -0,56 F33 -0, 81 LO x—1 o 1 F37 -1, 06 \—1 ΟΛ O 1 A -0,69 -0,69 H -0,51 -0,64 K -0, 73 O O X-1 l U -0,50 + 0,15 84
Os resultados mostram muito boa estabilidade de ambos os vírus CDV e cPi2 durante um longo período de armazenamento a 4 °C. Para algumas destas vacinas estabilizadas liofilizadas, as titulações de CAV2 e CPV foram realizadas em triplicado. Os resultados destas titulações são apresentados na Tabela 5 como uma diminuição do valor médio obtido a partir das três titulações, expresso em logio CCID5o/mL, imediatamente após o passo de liofilização e após um período de armazenamento de 3 meses (TO+3) a 4 °C.
Tabela 5: Diminuição dos títulos de CAV2 e CPV após liofilização e armazenamento durante 3 meses a 4 °C.
Estabilizador Diminuição do Diminuição do titulo de CAV2 titulo de CPV A -0,20 -0, 10 H -0,47 -0,20 K -0,36 + 0, 10
Foram estudados os efeitos de vários compostos do estabilizador na estabilidade de CDV e cPi2 durante e após o passo de liofilização. Em particular, foi verificado o efeito do oligossacárido não redutor na estabilidade de CDV. Os resultados foram apresentados por análise estatística na Figura 2A e na Tabela 6. 85
Tabela 6: Título médio e desvio padrão no final do passo de liofilização (em TO) de CDV estabilizado com um estabilizador compreendendo oligossacárido não redutor (n= 72).
Oligossacárido não redutor (%p/v concentração final) Contagem Titulo médio de CDV (logio CCID50/mL) Desvio Padrão 0 18 4, 78 0,20 0,5 27 4, 69 0,25 2,5 27 4, 76 0,34 A presença de oligossacárido não redutor no estabilizador não tem qualguer efeito no título de CDV (ANOVA valor-p = 0,5142).
Foi verificado o efeito do monossacárido redutor na estabilidade de CDV. Os resultados foram submetidos a análise estatística e são mostrados na Figura 2B e na Tabela 7.
Tabela 7: Título médio e desvio padrão no final do passo de liofilização (em TO) de CDV estabilizados com um estabilizador compreendendo um monossacárido redutor (n= 72).
Oligossacárido redutor (%p/v concentração final) Contagem Titulo médio de CDV (logio CCID50/inL) Desvio Padrão 0,5 30 4,58 0,27 1 6 4,61 0, 13 2,5 24 4,90 0,22 3 6 4,92 0,20 5 6 4, 82 0, 12 86
Como mostrado na Tabela 7 e na Figura 2B, a presença de monossacárido redutor no estabilizador tem um efeito positivo no titulo de CDV (ANOVA p = 0,0000).
Foi também estudado o efeito do composto antioxidante na estabilidade de cPi2. Os resultados foram submetidos à análise estatística nas Figuras 3A e 3B, e nas Tabelas 8 e 9.
Tabela 8: Título médio e desvio padrão de cPi2 estabilizado com um estabilizador com ou sem ácido aspártico (n= 15) , no final do passo de liofilização (em T0)
Acido do aspártico (%p/v concentração final) Contagem Titulo médio de cPi2 (logio CCID50/mL) Desvio Padrão 0 5 4,39 1, 04 0,1 5 5, 41 0,96 0,2 5 6,09 0, 13
Tabela 9: Título médio e desvio padrão de cPi2 estabilizado com um estabilizador com ou sem ácido aspártico (n= 15), após o passo de liofilização e um período de armazenamento de 3 meses a 4 °C (nos meses T0+3).
Acido do aspártico (%P/v concentração final) Contagem Título médio de cPi2 (logio CCIDso/mL) Desvio Padrão ~Õ 5 4, 27 0, 81 "õTi 5 4, 92 O O \—1 “072 5 5, 82 0,35 87
Verificou-se que a presença do composto antioxidante no estabilizador tem um efeito positivo no titulo de cPi2 (ANOVA p = 0,0000) durante o passo de liofilização e durante o período de armazenamento,
Exemplo 4; Estudos comparativos dos componentes do estabilizador O estabilizador F2 (Exemplo 1) foi utilizado como uma referência para medir o declínio em título das vacinas liofilizadas em comparação com outras formulações liofilizadas estabilizadas. Estas formulações foram obtidas por modificação de cada componente como mostrado na Tabela 10. O estabilizador F63 é idêntico a F2, mas falta o composto antioxidante. O estabilizador F62 é idêntico a F2, mas inclui fenilalanina em vez de ácido aspártico. O estabilizador F42 é idêntico a F2, mas inclui o sal monossódico de ácido aspártico em vez de ácido aspártico. O estabilizador F32 é idêntico a F2, mas inclui betaína em vez de um monossacárido redutor. 88
Tabela 10: Composiçoes das formulações
Estabili zador Mistura contendo monossacárido redutor ou variante Ácido antioxidante ou variante Agente de volume Solvente F63 Glucose (5% p/v) Rafinose (5% p/v) Dextrano (10% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v) F62 Glucose (5% p/v) Rafinose (5% p/v) Fenilalanina (0,50% p/v) Dextrano (10% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v) F42 Glucose (5% p/v) Rafinose (5% p/v) Sal monossódico de ácido aspártico (0,50% p/v) Dextrano (10% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v) F32 Betaína (5% p/v) Rafinose (5% p/v) Ácido aspártico (0,50% p/v) Dextrano (10% p/v) Água para injecção (q.s. 100% v/v)
Estas formulações foram utilizadas para estabilizar as vacinas do Exemplo 2 e foram liofilizadas de acordo com o processo aqui descrito. As vacinas liofilizadas foram re-hidratadas em 1 mL de água para injecção. A determinação do título de cPi2 e do título de CDV das vacinas foi realizada por cálculo do título médio de três titulações repetidas na mesma vacina, como feito no Exemplo 3. Os títulos foram medidos após o processo de liofilização para cada formulação. Estes títulos, expressos em logio CCID5o/mL, são apresentados na Tabela 11. 89
Tabela 11: Diminuição dos títulos durante o passo de liofilização de vacinas liofilizadas/re-hidratadas estabilizadas com várias formulações.
Estabilizador Titulo de cPi2 Título de CDV F63 -2,22 -0,46 F62 -2,42 -0,74 F32 -3,29 hO 00 \—1 1 F42 -1, 12 00 00 o 1 F42 após armazenamento de 12 meses a 4 °C -1,60 00 Oh \—1 1
Estes resultados mostram que a ausência de composto antioxidante conduz a uma perda significativa no título para cPi2. A inclusão do aminoácido fenilalanina, que carece de qualquer efeito antioxidante, resulta também numa perda no título para cPi2 e CDV. De modo semelhante, inclusão do sal monossódico do antioxidante ácido aspártico conduz a perda em titulo para ambos cPi2 e CDV. Estes resultados também demonstram que uma ausência de monossacárido redutor resulta numa elevada perda em título para cPi2, assim como para CDV.
Exemplo 5: Avaliação de segurança de vacinas estabilizadas em cães algumas das vacinas liofilizadas descritas no Exemplo 2 foram administradas a cães, após re-hidratação em água injectável estéril. As vacinas continham os estabilizadores A, Η, K e F2B descritos no Exemplo 1. 90
Quatro cães sem patogéneo específico (SPF) com idades de 3 a 5 meses e 4 cães convencionais com idades de 3 a 5 meses, foram alocados aleatoriamente em 4 grupos de dois animais, em que cada grupo tinha um cão SPF e um cão convencional. Para cada grupo, dois cães foram imunizados subcutaneamente no dia 0 com uma dose dupla (2 mL) da sua vacina estabilizada correspondente. No dia 14, os cães foram imunizados subcutaneamente com uma única dose (1 mL) da mesma vacina estabilizada.
Foram observadas as reacções locais imediatas e as reacções gerais imediatas, temperaturas rectais, reacções locais, reacções gerais e sintomas clínicos. Não foi observada qualquer reacção local ou geral após a administração. Deste modo, a segurança das vacinas estabilizadas parece ser elevada. A divulgação feita aqui será adicionalmente descrita pelos seguintes parágrafos numerados: 1. Um estabilizador para uma composição imunogénica liofilizada de paramixovírus canino de tipo 2 (PI2) e esgana canina (CDV) atenuados vivos compreendendo, pelo menos, um monossacárido redutor e, pelo menos, um composto de ácido antioxidante, em que o, pelo menos um, composto de ácido antioxidante compreende ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações. 2. 0 estabilizador do parágrafo 1, em que o, pelo menos um, monossacárido redutor compreende glucose, galactose, frutose, manose, sorbose ou as suas combinações. 3. 0 estabilizador do parágrafo 1 ou 2 compreendendo ainda, pelo menos, um agente de volume. 91 4. 0 estabilizador do parágrafo 3, em que o, pelo menos um, agente de volume compreende dextrano, maltodextrina, polivinilpirrolidona, hidroxietilamido ou as suas combinações. 5. 0 estabilizador de qualquer um dos parágrafos 1 a 4 compreendendo ainda, pelo menos, um álcool de açúcar. 6. 0 estabilizador do parágrafo 5, em que o, pelo menos um, álcool de açúcar compreende sorbitol, manitol, xilitol, maltitol ou as suas combinações. 7. 0 estabilizador de qualquer um dos parágrafos 1 a 6 compreendendo ainda, pelo menos, um oligossacárido não redutor. 8. 0 estabilizador do parágrafo 7, em que o, pelo menos um, oligossacárido não redutor compreende trealose, sacarose, rafinose ou as suas combinações. 9. 0 estabilizador de qualquer um dos parágrafos 1 a 8, compreendendo ainda, pelo menos, um álcool de açúcar e, pelo menos, um oligossacárido não redutor. 10. 0 estabilizador do parágrafo 9, em que o, pelo menos um, álcool de açúcar compreende sorbitol, manitol, xilitol, maltitol ou as suas combinações, e em que o, pelo menos um, oligossacárido não redutor compreende trealose, sacarose, rafinose ou as suas combinações. 11. Uma solução ou suspensão imunogénica compreendendo paramixovirus atenuado vivo compreendendo CDV e cPi2, 92 misturada com o estabilizador de qualquer um dos parágrafos 1 a 10. 12. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que a solução ou suspensão imunogénica é uma solução ou suspensão imunogénica multivalente que compreende ainda, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovirus. 13. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 12, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo é derivado de um patogéneo compreendendo Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxvirididae, Rhabdoviridae ou as suas combinações. 14. A solução ou suspensão imunogénica dos parágrafos 12 ou 13, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo compreende adenovirus canino de tipo 2 (CAV2) atenuado vivo e parvovirus canino (CPV) atenuado vivo. 15. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 12 a 14, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo compreende um vector virai compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos. 16. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 12 a 15, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo compreende um vector plasmídico compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos. 17. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 11 a 16, em que o estabilizador compreende, pelo 93 menos, um monossacárido redutor numa concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v. 18. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 11 a 16, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um monossacárido redutor numa concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v. 19. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 11 a 16, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um monossacárido redutor numa concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v. 20. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 11 a 16, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um monossacárido redutor numa concentração final desde cerca de 2,5% até cerca de 3% p/v. 21. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 11 a 20, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um composto de ácido antioxidante numa concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v. 22. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 11 a 20, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um composto de ácido antioxidante numa concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v. 23. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 11 a 20, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um composto de ácido antioxidante numa concentração final de cerca de 0,2% p/v. 94 24. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 11 a 23, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um agente de volume numa concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 7,5% p/v. 25. A solução ou suspensão imunogénica de qualquer um dos parágrafos 11 a 24, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um agente de volume numa concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v. 26. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um álcool de açúcar numa concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, pelo menos, um monossacárido redutor, com a condição de que a concentração final do, pelo menos um, monossacárido redutor e do, pelo menos um, álcool de açúcar ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v. 27. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um oligossacárido não redutor a uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, pelo menos, um monossacárido redutor, com a condição de que a concentração final do monossacárido redutor e do oligossacárido não redutor ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v. 28. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que o estabilizador compreende, pelo menos, um álcool de açúcar numa concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v, pelo menos, um oligossacárido não redutor numa concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, pelo menos, um monossacárido redutor, com a condição de que a concentração final do monossacárido redutor, do álcool 95 de açúcar e do oligossacárido nao redutor ser igual ou inferior a cerca de 12,5% p/v. 29. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que o estabilizador compreende: (i) uma concentração final cerca de 1% até cerca de 5% p/v de uma mistura de c monossacáridos redutores, (ii) uma concentração final cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante e (iii) uma concentração final de cerca de 0,5% até cerca de 7,5% p/v de, pelo menos, um agente de volume. 30. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que o estabilizador compreende: (i) uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante e (iv) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 7,5% p/v de, pelo menos, um agente de volume, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v. 31. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que o estabilizador compreende: (i) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 2,5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante e (iv) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um agente 96 de volume, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 5% p/v. 32. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que o estabilizador compreende: (i) uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v. 33. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que o estabilizador compreende: (i) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 3% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar e (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 5% p/v. 34. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que o estabilizador compreende: (i) uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor e (iv) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, 97 com a condição de que a concentração final de (i), (ii) e (iii) ser igual ou inferior a cerca de 12,5% p/v. 35. A solução ou suspensão imunogénica do parágrafo 11, em que o estabilizador compreende: (i) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 2,5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor e (iv) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i), (ii) e (iii) ser igual ou inferior a cerca de 10% p/v. 36 . Um processo para liofilização de uma solução ou suspensão imunogénica de CDV e cPi2 atenuados vivos de qualquer um dos parágrafos 11 a 35, compreendendo (a) colocar em contacto a solução ou suspensão com o estabilizador, formando assim uma solução ou suspensão imunogénica estabilizada; (b) arrefecer, à pressão atmosférica, a solução ou suspensão imunogénica estabilizada a uma temperatura inferior a cerca do valor Tg da solução ou suspensão imunogénica estabilizada; (c) secar a solução ou suspensão imunogénica estabilizada por sublimação de gelo a baixa pressão; e (d) remover a água residual em excesso com redução adicional da pressão e aumento da temperatura da solução ou suspensão imunogénica estabilizada. 37. 0 processo do parágrafo 36, em que a temperatura no passo (b) é menor do que cerca de -40 °C. 98 38. 0 processo do parágrafo 36 ou 37, em que a pressão no passo (c) é menor ou igual a cerca de 200 pbar. 39. O processo do parágrafo 36 ou 37, em que a pressão no passo (d) é menor ou igual a cerca de 100 pbar. 40. 0 processo de qualquer um dos parágrafos 36 a 39, em que a temperatura no passo (d) é entre cerca de 20 °C e cerca de 30 °C. 41. 0 processo de qualquer um dos parágrafos 36 a 40 compreendendo ainda, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovirus. 42. O processo do parágrafo 41, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo é derivado de um patogéneo compreendendo Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxviridae, Rhabdoviridae ou as suas combinações. 43. O processo do parágrafo 41 ou 42, em que o, pelo menos um, componente imunogénico compreende adenovirus canino de tipo 2 (CAV2) atenuado vivo e parvovirus canino (CPV) atenuado vivo. 44. O processo de qualquer um dos parágrafos 41 a 43, em que o, pelo menos um, componente imunogénico compreende um vector virai compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos. 45. 0 processo de qualquer um dos parágrafos 41 a 44, em que o, pelo menos um, componente imunogénico compreende um vector plasmidico compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos. 99 46. Uma composição imunogénica estabilizada liofilizada de CDV e cPi2 vivos atenuados produzida pelo processo de qualquer um dos parágrafos 36 a 45. 47. Uma composição imunogénica estabilizada liofilizada de CDV e cPi2 vivos atenuados compreendendo: (i) uma concentração final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações. 48. Uma composição imunogénica estabilizada liofilizada de CDV e cPi2 vivos atenuados compreendendo: (i) uma concentração final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 2% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações e (iii) uma concentração final desde cerca de 15% até cerca de 70% p/p de, pelo menos, um agente de volume. 49. Uma composição imunogénica multivalente estabilizada liofilizada compreendendo CDV atenuado vivo, cPi2 atenuado vivo e, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovirus, e compreendendo: (i) uma concentração final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações. 100 50. A composição imunogénica multivalente do parágrafo 49 ou 50, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo é derivado de um patogéneo compreendendo Adenoviridae,
Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxviridae, Rhabdoviridae ou as suas combinações. 51. A composição imunogénica multivalente do parágrafo 49, em que o, pelo menos um, componente imunogénico compreende adenovirus canino de tipo 2 (CAV2) atenuado vivo e parvovirus canino (CPV) atenuado vivo. 52. A composição imunogénica multivalente de qualquer um dos parágrafos 49 a 51, em que o, pelo menos um, componente imunogénico compreende um vector virai compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos. 53. A composição imunogénica multivalente de qualquer um dos parágrafos 41 a 52, em que o, pelo menos um, componente imunogénico compreende um vector plasmidico compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos. 54. Uma composição imunogénica multivalente estabilizada liofilizada compreendendo CDV atenuado vivo, cPi2 atenuado vivo e, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovírus, e compreendendo: (i) uma concentração final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 2% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações e (iii) uma concentração final desde cerca de 15% até cerca de 70% p/p de, pelo menos, um agente de volume. 101 55. A composição imunogénica multivalente do parágrafo 54, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo é derivado de um patogéneo compreendendo Adenoviridae,
Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxviridae, Rhabdoviridae ou as suas combinações. 56. A composição imunogénica multivalente do parágrafo 54 ou 55, em que o, pelo menos um, componente imunogénico compreende adenovirus canino de tipo 2 (CAV2) atenuado vivo e parvovirus canino (CPV) atenuado vivo. 57. A composição imunogénica multivalente de qualquer um dos parágrafos 54 a 56, em que o, pelo menos um, componente imunogénico compreende um vector virai compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos. 58. A composição imunogénica multivalente de qualquer um dos parágrafos 54 a 57, em que o, pelo menos um, componente imunogénico compreende um vector plasmidico compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos. 59. Um kit compreendendo um primeiro frasquinho contendo uma composição imunogénica estabilizada liofilizada de qualquer um dos parágrafos 46 a 58 e um segundo frasquinho contendo um solvente. 60. Kit do parágrafo 49, em que o solvente é seleccionado do grupo consistindo de água desmineralizada, água destilada, água-para-injecção, tampão e adjuvante.
Lisboa, 21 de Outubro de 2011 102
Claims (15)
- REIVINDICAÇÕES 1. Estabilizador para uma composição imunogénica liofilizada de esgana canina (CDV) e parainfluenza canina de Tipo 2 (cPi2) atenuados vivos compreendendo, pelo menos, um monossacárido redutor e, pelo menos, um composto de ácido antioxidante, em que o, pelo menos um, composto de ácido antioxidante compreende ácido aspártico; e em que o, pelo menos um, monossacárido redutor compreende glucose, galactose, frutose, manose, sorbose ou as suas combinações; e em que o, pelo menos um, monossacárido redutor está a uma concentração desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p e o, pelo menos um, ácido antioxidante está a uma concentração desde cerca de 1,5% até cerca de 6% p/p.
- 2. Estabilizador da reivindicação 1, compreendendo ainda (a) pelo menos, um agente de volume ou (b) pelo menos, um agente de volume em que o, pelo menos um, agente de volume compreende dextrano, maltodextrina, polivinilpirrolidona, hidroxietilamido ou as suas combinações ou (c) pelo menos, um álcool de açúcar ou (d) pelo menos, um álcool de açúcar em que o álcool de açúcar compreende sorbitol, manitol, xilitol, maltitol ou as suas combinações ou (e) pelo menos, um oligossacárido não redutor ou 1 (f) pelo menos, um oligossacárido não redutor em que o, pelo menos um, oligossacárido não redutor compreende trealose, sacarose, rafinose ou as suas combinações ou (g) pelo menos, um álcool de oligossacárido não redutor ou açúcar e, pelo menos, um (h) pelo menos, um álcool de açúcar e, pelo menos, um oligossacárido não redutor em que o, pelo menos um, álcool de açúcar compreende sorbitol, manitol, xilitol, maltitol ou as suas combinações, e em que o, pelo menos um, oligossacárido não redutor compreende trealose, sacarose, rafinose ou as suas combinações.
- 3. Solução ou suspensão imunogénica compreendendo paramixovírus atenuados vivos compreendendo CDV e cPi2, misturada com o estabilizador da reivindicação 1 ou 2.
- 4. Solução ou suspensão imunogénica da reivindicação 3, em que a solução ou suspensão imunogénica é uma solução ou suspensão imunogénica multivalente que compreende ainda, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovírus.
- 5. Solução ou suspensão imunogénica da reivindicação 4, em que (a) o, pelo menos um, componente imunogénico activo é derivado de um patogéneo compreendendo Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxvirididae, Rhabdoviridae ou as suas combinações ou 2 (b) o, pelo menos um, componente imunogénico activo compreende adenovírus canino de tipo vivo 2 (CAV2) atenuado vivo e parvovírus canino (CPV) atenuado vivo ou (c) o, pelo menos um, componente imunogénico activo compreende um vector virai compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos ou (d) o, pelo menos um, componente imunogénico activo compreende um vector plasmídico compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos.
- 6. Solução ou suspensão imunogénica de qualquer uma das reivindicações 3 a 5, em que o estabilizador compreende (a) pelo menos, um monossacárido redutor a uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v ou cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v ou cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v ou cerca de 2,5% até cerca de 3% p/v ou cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v ou (b) pelo menos, um composto de ácido antioxidante a uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v ou de cerca de 0,2% p/v ou desde cerca de 0,5% até cerca de 7,5% p/v ou (c) pelo menos, um agente de volume a uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v ou 3 (d) pelo menos, um álcool de açúcar a uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, pelo menos, um monossacárido redutor, com a condição de que a concentração final do, pelo menos um, monossacárido redutor e do, pelo menos um, álcool de açúcar ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v ou (e) pelo menos, um oligossacárido não redutor a uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, pelo menos, um monossacárido redutor, com a condição de que a concentração final do monossacárido redutor e do oligossacárido não redutor ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v ou (f) pelo menos, um álcool de açúcar a uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v, pelo menos, um oligossacárido não redutor a uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v e, pelo menos, um monossacárido redutor, com a condição de que a concentração final do monossacárido redutor, do álcool de açúcar e do oligossacárido não redutor ser igual ou inferior a cerca de 12,5% p/v.
- 7. Solução ou suspensão imunogénica de qualquer uma das reivindicações 3 a 5, em que o estabilizador compreende: (a) (i) uma concentração final de cerca de 1% até cerca de 5% p/v de uma mistura de dois monossacáridos redutores, (ii) uma concentração final de cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante e (iii) uma concentração final de cerca de 0,5% até cerca de 7,5% p/v de, pelo menos, um agente de volume ou 4 (b) (i) uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante e (iv) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 7,5% p/v de, pelo menos, um agente de volume, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v ou (c) (i) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 2,5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante e (iv) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um agente de volume, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 5% p/v ou (d) (i) uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 7,5% p/v ou 5 (e) (i) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 3% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar e (iii) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i) e (ii) ser igual ou inferior a cerca de 5% p/v ou (f) (i) uma concentração final desde cerca de 1% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor e (iv) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,3% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i), (ii) e (iii) ser igual ou inferior a cerca de 12,5% p/v ou (g) (i) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 4% p/v de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 5% p/v de, pelo menos, um álcool de açúcar, (iii) uma concentração final desde cerca de 0,5% até cerca de 2,5% p/v de, pelo menos, um oligossacárido não redutor e (iv) uma concentração final desde cerca de 0,1% até cerca de 0,25% p/v de, pelo menos, um ácido antioxidante, com a condição de que a concentração final de (i), (ii) e (iii) ser igual ou inferior a cerca de 10% p/v.
- 8. Composição imunogénica estabilizada liofilizada de CDV e cPi2 atenuados vivos compreendendo (i) uma concentração 6 final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 1,5% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações.
- 9. Composição imunogénica da reivindicação 8, em que a (ii) concentração final de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações, é desde cerca de 2% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações, e compreendendo ainda (iii) uma concentração final desde cerca de 15% até cerca de 70% p/p de, pelo menos, um agente de volume.
- 10. Composição imunogénica da reivindicação 8, compreendendo ainda, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovírus.
- 11. Composição imunogénica da reivindicação 10, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo (a) é derivado de um patogéneo compreendendo Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxviridae, Rhabdoviridae ou as suas combinações ou (b) compreende adenovirus canino de tipo vivo 2 (CAV2) atenuado vivo e parvovírus canino (CPV) atenuado vivo ou 7 (c) compreende um vector virai compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos ou (d) compreende um vector plasmídico compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos.
- 12. Composição imunogénica multivalente estabilizada liofilizada compreendendo CDV atenuado vivo, cPi2 atenuado vivo e, pelo menos, um componente imunogénico activo derivado de um patogéneo à excepção de paramixovirus, e compreendendo: (i) uma concentração final desde cerca de 20% até cerca de 50% p/p de, pelo menos, um monossacárido redutor, (ii) uma concentração final desde cerca de 2% até cerca de 6% p/p de, pelo menos, um ácido antioxidante compreendendo ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido ascórbico ou as suas combinações, e (iii) uma concentração final desde cerca de 15% até cerca de 70% p/p de, pelo menos, um agente de volume.
- 13. Composição imunogénica multivalente da reivindicação 12, em que o, pelo menos um, componente imunogénico activo (a) é derivado de um patogéneo compreendendo Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxviridae, Rhabdoviridae ou as suas combinações ou (b) compreende adenovirus canino de tipo vivo 2 (CAV2) atenuado vivo e parvovirus canino (CPV) atenuado vivo ou (c) compreende um vector virai compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos ou 8 (d) compreende um vector plasmídico compreendendo um ou mais imunogénios heterólogos.
- 14. Processo para liofilização de uma solução ou suspensão imunogénica de CDV e cPi2 atenuados vivos, que compreende (a) colocar em contacto a solução ou suspensão imunogénica de CDV e cPi2 atenuados vivos com um estabilizador como definido na reivindicação 1 ou 2, formando assim uma solução ou suspensão imunogénica estabilizada; (b) arrefecer, à pressão atmosférica, a solução ou suspensão imunogénica estabilizada a uma temperatura inferior a cerca do valor Tg da suspensão imunogénica estabilizada; (c) secar a solução ou suspensão imunogénica estabilizada por sublimação de gelo a baixa pressão; e (d) remover a água residual em excesso com redução adicional da pressão e aumento da temperatura da solução ou suspensão imunogénica estabilizada.
- 15. Kit compreendendo um primeiro frasquinho contendo a composição imunogénica estabilizada liofilizada de CDV e cPi2 atenuados vivos como definida em qualquer uma das reivindicações 8 a 11 ou a composição imunogénica multivalente liofilizada como definida na reivindicação 12, e um segundo frasquinho contendo um solvente. Lisboa, 21 de Outubro de 2011 9
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US71764005P | 2005-09-16 | 2005-09-16 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PT1954308E true PT1954308E (pt) | 2011-11-03 |
Family
ID=37808009
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PT06814694T PT1954308E (pt) | 2005-09-16 | 2006-09-15 | Estabilizadores para vacinas liofilizadas |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8784843B2 (pt) |
EP (1) | EP1954308B1 (pt) |
JP (1) | JP5275803B2 (pt) |
CN (1) | CN101312742B (pt) |
AT (1) | ATE523207T1 (pt) |
CY (1) | CY1112490T1 (pt) |
DK (1) | DK1954308T3 (pt) |
ES (1) | ES2373238T3 (pt) |
HR (1) | HRP20110803T1 (pt) |
ME (1) | ME01965B (pt) |
PL (1) | PL1954308T3 (pt) |
PT (1) | PT1954308E (pt) |
RS (1) | RS51996B (pt) |
SI (1) | SI1954308T1 (pt) |
WO (1) | WO2007035455A2 (pt) |
Families Citing this family (51)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8137677B2 (en) * | 2005-10-06 | 2012-03-20 | Allergan, Inc. | Non-protein stabilized clostridial toxin pharmaceutical compositions |
US8168206B1 (en) | 2005-10-06 | 2012-05-01 | Allergan, Inc. | Animal protein-free pharmaceutical compositions |
US8968721B2 (en) | 2005-12-28 | 2015-03-03 | Advanced Bionutrition Corporation | Delivery vehicle for probiotic bacteria comprising a dry matrix of polysaccharides, saccharides and polyols in a glass form and methods of making same |
DK1973406T3 (da) | 2005-12-28 | 2014-06-23 | Advanced Bionutrition Corp | Fremføringsmiddel til probiotiske bakerier omfattende en tør blanding af polysaccharider, saccharider, polyoler i glasform |
US7682619B2 (en) | 2006-04-06 | 2010-03-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Canine influenza virus |
WO2007132480A2 (en) * | 2006-05-12 | 2007-11-22 | Bharat Biotech International Limited | A composition useful as a vaccine |
JP5285617B2 (ja) | 2006-12-18 | 2013-09-11 | アドバンスド バイオニュートリション コーポレーション | 生きたプロバイオティクスを含む乾燥食物製品 |
CA2710186C (en) * | 2007-12-21 | 2015-11-03 | Pfizer Inc. | Heat treated bacterins, and emulsion vaccines prepared from such heat treated bacterins |
GB0823497D0 (en) | 2008-12-24 | 2009-01-28 | Isis Innovation | Immunogenic composition and use thereof |
EP2391713A1 (en) * | 2009-01-30 | 2011-12-07 | The Board Of Regents For Oklahoma State University | Immunogenic compositions, vaccines and diagnostics based on canine distemper viruses circulating in north american dogs |
CA2756883C (en) | 2009-03-27 | 2018-01-09 | Advanced Bionutrition Corp. | Microparticulated vaccines for the oral or nasal vaccination and boostering of animals including fish |
RU2567668C2 (ru) * | 2009-05-26 | 2015-11-10 | Эдванст Бионутришн Корпорейшн | Стабильная сухая порошкообразная композиция, содержащая биологически активные микроорганизмы и/или биоактивные материалы, и способ ее изготовления |
US9504750B2 (en) | 2010-01-28 | 2016-11-29 | Advanced Bionutrition Corporation | Stabilizing composition for biological materials |
NZ601017A (en) | 2010-01-28 | 2014-07-25 | Advanced Bionutrition Corp | Dry glassy composition comprising a bioactive material |
HUE026885T2 (en) * | 2010-03-31 | 2016-08-29 | Stabilitech Ltd | Stabilize virus fragments |
BR112012025047A2 (pt) | 2010-03-31 | 2016-06-21 | Stabilitech Ltd | formulações líquidas estabilizadas |
CN103126996A (zh) | 2010-04-15 | 2013-06-05 | 株式会社新日本科学 | 用于鼻内递送的方法和组合物 |
RS57588B1 (sr) | 2010-08-13 | 2018-11-30 | Advanced Bionutrition Corp | Supstanca za stabilizaciju bioloških materijala za suvo skladištenje |
NZ608143A (en) * | 2010-10-15 | 2015-02-27 | Bavarian Nordic As | Recombinant modified vaccinia virus ankara (mva) influenza vaccine |
US9045728B2 (en) * | 2010-12-02 | 2015-06-02 | Oncolytics Biotech Inc. | Liquid viral formulations |
WO2012075376A2 (en) * | 2010-12-02 | 2012-06-07 | Oncolytics Biotech Inc. | Lyophilized viral formulations |
CN102228687B (zh) * | 2011-06-24 | 2012-10-10 | 浙江普康生物技术股份有限公司 | 不含明胶、人血白蛋白保护剂的冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗及制备方法 |
LT2734230T (lt) * | 2011-07-20 | 2019-03-25 | Merial Limited | Rekombinantinė kačių leikemijos viruso vakcina, turinti optimizuotą kačių leukemijos viruso apvalkalo geną |
US10166188B2 (en) | 2011-08-12 | 2019-01-01 | Merial, Inc. | Method for vacuum-assisted preservation of biologics including vaccines |
GB201117233D0 (en) * | 2011-10-05 | 2011-11-16 | Stabilitech Ltd | Stabilisation of polypeptides |
EP2793939A1 (en) * | 2011-12-23 | 2014-10-29 | Novartis AG | Stable compositions for immunising against staphylococcus aureus |
CN102488894B (zh) * | 2011-12-31 | 2014-08-20 | 齐鲁动物保健品有限公司 | 一种狐狸脑炎活疫苗及其制备方法 |
US9314519B2 (en) * | 2012-08-21 | 2016-04-19 | Intervet Inc. | Liquid stable virus vaccines |
CN102854313A (zh) * | 2012-09-29 | 2013-01-02 | 黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所 | 马铃薯y病毒阳性对照品的制备方法 |
CN102920669A (zh) * | 2012-11-09 | 2013-02-13 | 湖北凤凰白云山药业有限公司 | 一种甘露醇冻干粉的制备方法 |
US9480739B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-11-01 | Intervet Inc. | Bovine virus vaccines that are liquid stable |
US9393298B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-07-19 | Intervet Inc. | Liquid stable bovine virus vaccines |
RU2720808C2 (ru) * | 2013-09-03 | 2020-05-13 | Джорджия Тек Рисёч Корпорейшн | Термостабильные препараты вакцин и микроиглы |
AR097762A1 (es) * | 2013-09-27 | 2016-04-13 | Intervet Int Bv | Formulaciones secas de vacunas que son estables a temperatura ambiente |
US10369213B2 (en) | 2013-10-16 | 2019-08-06 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Thermostable respiratory synctial virus (RSV) vaccine compositions |
WO2015057540A1 (en) | 2013-10-16 | 2015-04-23 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Method of microwave vacuum drying spherical-shaped pellets of biological materials |
AR099470A1 (es) | 2014-02-17 | 2016-07-27 | Intervet Int Bv | Vacunas de virus de aves de corral líquidas |
TWI670085B (zh) | 2014-02-19 | 2019-09-01 | 荷蘭商英特威國際公司 | 液體穩定之豬病毒疫苗 |
GB201406569D0 (en) | 2014-04-11 | 2014-05-28 | Stabilitech Ltd | Vaccine compositions |
FR3034418B1 (fr) * | 2015-04-03 | 2018-09-28 | Roquette Freres | Utilisation de combinaisons particulieres de carbohydrates pour stabiliser des proteines, et compositions proteiques contenant de telles combinaisons |
WO2017019273A1 (en) | 2015-07-29 | 2017-02-02 | Advanced Bionutrition Corporation | Stable dry probiotic compositions for special dietary uses |
US10617650B2 (en) | 2015-10-16 | 2020-04-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Process for preparing formulations for gastrointestinal-targeted therapies |
HRP20191966T4 (hr) | 2016-09-13 | 2022-09-16 | Allergan, Inc. | Stabilizirani neproteinski klostridijalni pripravci toksina |
NL2018155B1 (en) | 2017-01-11 | 2018-07-25 | Intervet Int Bv | Oral vaccine against ruminant respiratory disease |
GB201701239D0 (en) | 2017-01-25 | 2017-03-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novel formulation |
GB2562241B (en) | 2017-05-08 | 2022-04-06 | Stabilitech Biopharma Ltd | Vaccine compositions |
EP3801469A4 (en) * | 2018-06-07 | 2022-03-09 | Merck Sharp & Dohme Corp. | KIT OF CRITICAL REAGENTS IN THE FORM OF LYOSPHERES |
CN109652384B (zh) * | 2019-02-21 | 2021-10-26 | 昆明理工大学 | 一种体外培养戊型肝炎病毒的方法 |
CN111707512A (zh) * | 2020-06-15 | 2020-09-25 | 深圳市瑞赛生物技术有限公司 | 即用型维生素标准品及其制备方法、使用方法和贮存稳定剂 |
CN112057603B (zh) * | 2020-07-25 | 2023-07-14 | 艾美卫信生物药业(浙江)有限公司 | 一种白喉毒素无毒突变体crm197蛋白的冻干方法 |
CN115624630A (zh) * | 2022-12-19 | 2023-01-20 | 北京荷牧生物科技有限公司 | 冻干保护组合物及其应用和基于该组合物的核酸脂质纳米颗粒冻存方法 |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1108956A (en) * | 1964-05-26 | 1968-04-10 | Ciba Ltd | Process for the manufacture of bcg vaccines |
US3783098A (en) * | 1971-08-10 | 1974-01-01 | Cornell Res Foundation Inc | Highly potent,viable and stable cellfree virus preparations from cells infected with cell-associated viruses and method for obtaining the same |
JPS4840990A (pt) * | 1971-10-04 | 1973-06-15 | ||
FR2505657A1 (fr) * | 1981-05-13 | 1982-11-19 | Pasteur Institut | Perfectionnements apportes aux agents de stabilisation de virus vivants pour la preparation de vaccins, et vaccins stabilises contenant lesdits agents de stabilisation |
JPS6281327A (ja) * | 1985-10-04 | 1987-04-14 | Green Cross Corp:The | 人トロンビン製剤の加熱処理方法 |
JPH07121871B2 (ja) * | 1986-10-09 | 1995-12-25 | 国立予防衛生研究所長 | インフルエンザワクチン凍結乾燥製剤 |
US4888169A (en) * | 1986-10-14 | 1989-12-19 | Norden Laboratories, Inc. | Bordetella Bronchiseptica vaccine |
US5147756A (en) * | 1991-04-11 | 1992-09-15 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Stabilized, aqueous hydrazide solutions for photographic elements |
CA2075521C (en) * | 1992-05-05 | 1995-11-28 | Kuniaki Koyama | Stabilized live vaccine |
CA2158935A1 (en) * | 1993-10-12 | 1995-04-20 | Chiron Viagene, Inc. | Methods for preserving recombinant viruses |
JPH08176011A (ja) * | 1994-12-21 | 1996-07-09 | Dot:Kk | 無菌性骨壊死症候群治療剤 |
JP3193057B2 (ja) * | 1995-03-17 | 2001-07-30 | 久光製薬株式会社 | 遺伝子導入製剤 |
US5869306A (en) * | 1995-03-17 | 1999-02-09 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Gene transfer preparation |
JPH08333277A (ja) * | 1995-06-05 | 1996-12-17 | Hoechst Japan Ltd | ヒト血液凝固第xiii因子の安定化された水性液製剤 |
FR2750865B1 (fr) * | 1996-06-27 | 1998-12-04 | Rhone Merieux | Vaccin vivant recombinant a base d'herpesvirus canin, notamment contre la maladie de carre, la rage ou le virus parainfluenza de type 2 |
US6051238A (en) | 1996-12-20 | 2000-04-18 | Merck & Co., Inc. | Stabilizers for lyophilized mumps vaccines |
PL210451B1 (pl) * | 1999-06-10 | 2012-01-31 | Merial Sas | Szczepionka DNA przeciwko wirusowi nosówki psów (CDV) |
JP2002326924A (ja) * | 2001-05-07 | 2002-11-15 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 洗顔料 |
DK1701738T3 (en) | 2003-12-17 | 2015-03-30 | Wyeth Llc | Process for preparing storage-stable RSV compositions |
WO2005066333A1 (en) * | 2003-12-30 | 2005-07-21 | Aventis Pasteur, Inc. | Stabilizing compositions for recombinant viruses |
US20060141483A1 (en) | 2004-12-23 | 2006-06-29 | Calton Gary J | Stabilization of viral compositions |
-
2006
- 2006-09-15 PT PT06814694T patent/PT1954308E/pt unknown
- 2006-09-15 SI SI200631180T patent/SI1954308T1/sl unknown
- 2006-09-15 ES ES06814694T patent/ES2373238T3/es active Active
- 2006-09-15 RS RS20110471A patent/RS51996B/en unknown
- 2006-09-15 US US11/522,211 patent/US8784843B2/en active Active
- 2006-09-15 CN CN2006800430291A patent/CN101312742B/zh active Active
- 2006-09-15 AT AT06814694T patent/ATE523207T1/de active
- 2006-09-15 JP JP2008531340A patent/JP5275803B2/ja active Active
- 2006-09-15 PL PL06814694T patent/PL1954308T3/pl unknown
- 2006-09-15 ME MEP-2011-471A patent/ME01965B/me unknown
- 2006-09-15 DK DK06814694.3T patent/DK1954308T3/da active
- 2006-09-15 WO PCT/US2006/035944 patent/WO2007035455A2/en active Application Filing
- 2006-09-15 EP EP06814694A patent/EP1954308B1/en active Active
-
2011
- 2011-11-02 HR HR20110803T patent/HRP20110803T1/hr unknown
- 2011-12-02 CY CY20111101189T patent/CY1112490T1/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
PL1954308T3 (pl) | 2012-01-31 |
JP2009508866A (ja) | 2009-03-05 |
WO2007035455A2 (en) | 2007-03-29 |
JP5275803B2 (ja) | 2013-08-28 |
ES2373238T3 (es) | 2012-02-01 |
EP1954308B1 (en) | 2011-09-07 |
CY1112490T1 (el) | 2015-12-09 |
SI1954308T1 (sl) | 2011-12-30 |
HRP20110803T1 (hr) | 2011-11-30 |
DK1954308T3 (da) | 2011-10-24 |
CN101312742B (zh) | 2012-07-25 |
US20100260796A1 (en) | 2010-10-14 |
EP1954308A2 (en) | 2008-08-13 |
US8784843B2 (en) | 2014-07-22 |
WO2007035455A3 (en) | 2007-07-26 |
ATE523207T1 (de) | 2011-09-15 |
RS51996B (en) | 2012-04-30 |
CN101312742A (zh) | 2008-11-26 |
ME01965B (me) | 2012-04-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8784843B2 (en) | Stabilizers for freeze-dried vaccines | |
US10653627B2 (en) | Method for vacuum-assisted preservation of biologics including vaccines | |
JP6896802B2 (ja) | 室温安定であるワクチンの乾燥製剤 | |
RU2641970C2 (ru) | Жидкие стабильные вирусные вакцины | |
US8932604B2 (en) | Recombinant non-pathogenic marek's disease virus constructs encoding infectious laryngotracheitis virus and newcastle disease virus antigens |