PT1910398E - Derivados de estradiol substituídos em 17-alfa com actividade de cicatrização de feridas - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE ESTRADIOL SUBSTITUÍDOS EM 17-ALFA COM ACTIVIDADE DE CICATRIZAÇÃO DE FERIDAS"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção diz respeito a novos derivados de estradiol substituídos em 17a que possuem uma acção de cicatrização de feridas. Em particular, a invenção diz respeito a estradiol, ou a um seu 3-éter ou 3-éster, substituído na sua posição 17a com um grupo 5-hidroxi-pentilo, -penten-l-ilo pentin-l-ilo, possivelmente esterifiçado, o qual é útil para a preparação de produtos medicinais concebidos para promover a cicatrização de feridas.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A partir de G.S. Ashcroft et ai., 1997; Nat. Med. 3(11) 1209-15 (Ashcroft et ai. 1997) sabe-se que os estrogénios aceleram a cicatrização de feridas associadas a um aumento dos níveis de do factor-β de crescimento e transformação (TGF-β). G.S. Ashcroft et ai., Am. J. Patholo. 1999; 155, 1137-1146 (Ashcroft et al. 1999) também constataram que o processo de cicatrização de feridas se torna mais lento com a idade e que o tempo de cicatrização de feridas diminui após a aplicação de estrogénios tópicos. No documento WO-A-98/03180 encontram-se descritas as propriedades de cicatrização de feridas de etinilestradiol. A cicatrização de feridas compreende três passos sobrepostos: inflamação, formação de tecido e a modulação de tecido. Tal compreende um conjunto de eventos, nos quais 2 estão implicadas as citoquinas segregadas pelas plaquetas, macrófagos, neutrófilos, fibroblastos e células epidérmicas sobre as quais os estrogénios podem actuar para promover a cicatrização de feridas (Y.M. Bello et al. JAMA, 2000; 283, 716-718) . Em particular, foi observada uma redução significativa no factor-β de crescimento e transformação (TGF-β) em mulheres idosas em comparação com os níveis encontrados para as feridas de mulheres adolescentes.

Uma revisão sobre a acção de estrogénios sobre a pele, publicada por M.G. Shah et al. em Am. J. Clin. Dermatol. 2001; 2(3): 143-50, descreve a utilização tópica de 0,01% de estradiol e 0,3% de estriol.

As experiências em modelos animais bioquímicos e farmacológicos confirmaram que os estrogénios promovem a reparação de pele danificada. Em particular, concluiu-se que fibroblastos em cultura obtidos a partir da derme de mulheres idosas segregam uma quantidade de TGF-βχ inferior aos fibroblastos de mulheres adolescentes e que a adição de estrogénios às culturas de fibroblastos faz aumentar a quantidade de TGF-β produzida para níveis idênticos nos fibroblastos de mulheres adolescentes e idosas. G.J. Gendimenico et al., em Arch. Dermatol. Research; (2002) : 294(5), 231-6, demonstraram que o 17a-estradiol e o 17β-estradiol reparam a pele danificada pelo sol de murganhos sem pêlos. G.S. Ashcroft et al., em J. Clin. Investigation (2003) , 111, 1309-18 (Ashcroft et al. 2003a), publicaram os resultados de experiências de cicatrização de feridas in vivo em murganhos aos quais faltava o gene MIF (factor inibidor da migração de macrófagos), os quais demonstraram que a inflamação excessiva e que o fenótipo associado à 3 redução de estrogénio são invertidos na ausência de MIF e os resultados de experiência in vitro realizadas em paralelo demonstraram uma redução acentuada na produção de MIF mediada por estrogénios por meio de macrófagos de murino activados.

Por último, G.S. Ashcroft et al., em Am. J. Clin. Dermatol. (2003), 4(11), 737-43 (Ashcroft et al. 2003b), descrevem o papel potencial de estrogénios na cicatrização de feridas.

Todos estes dados sugerem que os estrogénios constituem um factor de controlo hormonal importante na produção e na secreção do factor de crescimento, TGF-β, pelos fibroblastos da derme. O estradiol (17p-estradiol) e o estriol, utilizados por via tópica, promovem a cicatrização de feridas (Ashcroft et al. 2003b).

No entanto, o estradiol possui actividade estrogénica sistémica, mesmo quando administrado à pele, pelo que o produto também é administrado por essa via utilizando sistemas transdérmicos terapêuticos (TTS). Foi recentemente publicado um estudo sobre a permeabilidade, a penetração e o metabolismo do estradiol administrado por via cutânea por A. Mahmud et al. em Skin Pharmacol. Physiol. (2005), 18(1). (Mahmud et al. 2005). O estriol é muito menos activo do que o estradiol, embora tenha que ser utilizado em concentrações 30 vezes superiores para que seja eficaz, conforme descrito por Shah et al. 2001.

Uma vez que existem impedimentos para a cicatrização de feridas em pessoas idosas, tais como os custos, a morbidade e a mortalidade, conforme descrito por Ashcroft et al. 2003b, é importante proporcionar novos agentes 4 estrogénicos que sejam capazes de acelerar o processo de cicatrização de feridas, os quais possam ser utilizados no caso de tal aceleração ser útil para fins terapêuticos, e que possuam uma potencial actividade sistémica reduzida.

TÉCNICA ANTERIOR

No documento US 3 265 718, o qual se considera aqui incorporado na sua totalidade por referência, encontram-se descritos esteróides aromáticos substituídos na posição 17a com um grupo 3-hidroxi-l-propinilo ou 3-hidroxi-l-propenilo, facultativamente esterifiçado. Para estes compostos é referida uma actividade de redução do colesterol, a qual predomina sobre a actividade estrogénica.

No documento US 3 303 205, o qual se considera aqui também incorporado na sua totalidade por referência, encontra-se descrito um processo para a introdução de um grupo hidroxialquilo que contém pelo menos três átomos de carbono lineares na posição 17a de um esteróide, para se obter derivados espiro na posição 17 do esteróide. Por tal motivo, o referido documento apenas descreve derivados 17a-(3-hidroxipropil)- e 17a-(4-hidroxibutil)-esteróide, incluindo o estradiol. R.P. Boivin et al. (J. Med. Chem. 2000, 43, 4465-78) descrevem 17a-(3-hidoxipropin-l-il)-estradiol e 17a-(3-bromopropin-l-il)-estradiol devido ao seu efeito inibidor sobre esteróide-sulfatase, a qual é elevada no caso do derivado 3-bromo e bastante reduzida no caso do derivado 3-hidroxi. EI Garrouj et al. (J. Med. Chem. 1993, 36, 2973-83) descrevem 17a-(4-hidroxibutin-l-il)-estradiol e 17a-(8- 5 hidroxioctin-l-il)-estradiol enquanto intermediários para a preparação de marcadores para o receptor de estrogénios, sendo estes marcadores os seus 4'- e 8'-bromoacetatos.

Os derivados de estradiol substituídos na posição 17a com um hidrocarboneto ω-hidroxilado que contém 5 átomos de carbono não se encontram descritos na literatura.

DESCRIÇÃO ABREVIADA DA INVENÇÃO

Concluiu-se agora que os derivados de estradiol substituídos na posição 17a com um hidrocarboneto ω-hidroxilado que contém 5 átomos de carbono e os seus ω-ésteres possuem uma actividade de cicatrização de feridas excelente. Em particular, observou-se que o 17a-(5-acetoxi-pentin-l-il)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1 apresentam um efeito significativo no processo de cicatrização de feridas.

Concluiu-se também que é possível observar o efeito de cicatrização de feridas em todos os parâmetros para a previsão de actividade de cicatrização de feridas, tais como a redução da área da ferida, a redução de macrófagos na área da ferida e a redução de todos os parâmetros de inflamação, em particular de MIF e de TGF-β.

Por último, concluiu-se que os derivados de estradiol substituídos na posição 17a com um hidrocarboneto ω-hidroxilado que contém 5 átomos de carbono e os seus ω-ésteres estão praticamente isentos de actividade estrogénica sistémica, ou então que tal actividade é tão reduzida que não apresenta um risco potencial de efeitos secundários estrogénicos ou de efeminização.

No texto seguinte, os derivados de estradiol substituídos na posição 17a com um hidrocarboneto co- 6 hidroxilado que contém 5 átomos de carbono e os ω-ésteres dos referidos derivados serão designados por "derivados de estradiol 17a-C5-hidroxicarbilo". 0 termo "alquilo inferior", designado por "Alq", designa um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada que possui entre 1 e 4 átomos de carbono e em particular designa metilo ("Me") ou etilo ("Et"). 0 termo "alcoxi inferior" designa um grupo AlqO e em particular MeO ou EtO, conforme definidos antes. 0 termo "alcanoílo inferior", designado por "Alq" ou "Aiq/", designa o radical acilo de um ácido monocarboxilico de cadeia linear ou ramificada que possui entre 1 e 5 átomos de carbono, tal como formilo, acetilo, propionilo, butanoilo, valeroilo, pivaloilo. 0 termo "acilo", designado por "Ac", designa um radical acilo de um ácido monocarboxilico insaturado que possui entre 3 e 5 átomos de carbono, um radical acilo de um ácido monocarboxilico saturado que possui entre 1 e 5 átomos de carbono, em que os referidos radicais acilo podem ser facultativamente substituídos com um grupo seleccionado entre carboxi, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, fenilo, tolilo, xililo, metoxifenilo, fluorofenilo, clorofenilo, bromofenilo, nitrofenilo, dimetoxifenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, piridilo, cicloalquilo(C3-C7) ou um radical acilo de um ácido haloalcanóico que possui entre 2 e 5 átomos de carbono.

DESCRIÇÃO MINUCIOSA

De acordo com um aspecto, a presente invenção diz respeito a novos derivados de estradiol substituídos na posição 17a com um hidrocarboneto ω-hidroxilado que contém 7

5 átomos de carbono, e aos seus ω-ésteres, de fórmula estrutural I 7

em que o símbolo Q representa hidrogénio ou metilo, o símbolo Q' representa hidrogénio, metilo ou alcoxi inferior, o símbolo R representa hidrogénio ou acilo, o símbolo R' representa hidrogénio, alcanoílo inferior ou então o símbolo R' representa um grupo alquilo inferior ou um grupo cicloalquilo (C5-C6) e o símbolo R" representa hidrogénio ou um grupo alcanoílo inferior, o símbolo Y representa um grupo etileno (-CH2-CH2-), um grupo etenileno (-CH=CH-) ou um grupo etinileno (-C=C-), em que as ligações duplas também podem estar presentes na posição 6, na posição 8 na posição 9(11) ou nas posições 6 e 8 do esteróide.

Os compostos de fórmula estrutural I, facultativamente Δ6, Δ8, Δ9(11> ou Δ6'8, nos quais o símbolo Y representa etinileno, podem ser preparados conforme descrito do documento US 3 265 718, utilizando n-pent-l-ino-5-ol

(doravante aqui designado como "5-pentinol") em vez do álcool propargílico, por meio do tratamento de um derivado 17-oxo de fórmula estrutural II

m

facultativamente Δ6, Δ8, Δ9(11) ou Δ6'8, em que ο símbolo R° representa hidrogénio, um grupo protector estável em condições alcalinas ou então o grupo R' a, com um derivado de um metal alcalino do derivado 5-pentinol de fórmula estrutural III CHsC-(CH2)2-CH2OR (III), em que o símbolo R possui as significações definidas antes, e subsequente hidrólise da mistura de reacção. A reacção entre o 17-oxoesteróide e o derivado de metal alcalino do composto III é efectuada à temperatura ambiente num solvente inerte anidro.

Tipicamente, o derivado do composto III, em que o símbolo R representa H ou um grupo protector estável em condições alcalinas, com um metal alcalino, de preferência lítio, sódio ou potássio, é preparado in situ a partir de 5-pentinol com um metal seleccionado ou um seu derivado, v.g.f com amónia ou com um hidrocarboneto, tal como amida de sódio, amida de potássio ou butil-litio, num solvente anidro.

Os compostos de partida de fórmula estrutural II, facultativamente Δ6, Δ8, Δ9(11> ou Δ6'8, encontram-se descritos no documento US 3 265 718 ou podem ser preparados de acordo com métodos do conhecimento dos especialistas na matéria. Em particular, a preparação de compostos de fórmula estrutural II, em que o símbolo R' representa um grupo protector P°, pode ser efectuada de acordo com um dos métodos descritos por T.W. Greene et al. em "Protecting groups in Organic Synthesis, 3a Edição, J. Wiley & Sons, 1999", páginas 249-276. Como grupos protectores preferidos refere-se 2-tetra-hidropiranilo e t-butildimetilsililo. 0 éter tetra-hidropiranilico de estrona encontra-se descrito 9 na obra J. Org. Chem. 1979, 44, 1438, e o éter t- butildimetilsilílico de estrona encontra-se descrito na obra J. Am. Chem. Soc. 1972, 94, 6190. Os éteres correspondentes de Δ6, Δ8, Δ9(11) estrona, de Δ6'8 estrona (equilenina) e os seus derivados são preparados de um modo análogo. O grupo protector estável em condições alcalinas, tal como 2-tetra-hidropiranilo ou um grupo de sililação, em particular um grupo Si(Alq)3, em que o símbolo Alq representa alquilo inferior, pode ser facilmente removido em meio ácido. Nos grupos Si(Alq)3, os três grupos alquilo podem ser iguais ou diferentes entre si e em particular podem ser três grupos metilo ou etilo ou um grupo t-butilo e dois grupos metilo (isto é, um grupo t-butildimetilsililo (i) ) ·

CHj

No caso de o esteróide 17-oxo de partida satisfazer a fórmula estrutural II, em que o símbolo R° representa hidrogénio ou um grupo protector estável em condições alcalinas, então a reacção proporciona um 17a-(5-hidroxipentin-l-il)-estra-1,3,5(10)-trieno-3,17β-όίο1 de fórmula estrutural IV

ou os correspondentes derivados Δ6, Δ8, Δ9(11) ou Δ6'8, sendo ambos intermediários para a preparação dos seus 3-ésteres e 10 17β-ésteres, em particular dos seus 5'-ésteres, e de princípios activos interessantes que possuem uma acção de cicatrização e uma acção sistémica fraca ou indetectável.

No caso de o esteróide 17-oxo de partida satisfazer a fórmula estrutural I, em que o símbolo R° representa o qrupo R' a, então a reacção proporciona um 17a-(5-hidroxipentin-l-il)-estra-1,3,5(10)-trieno-3,17β-άίο1 de fórmula estrutural V

em que o símbolo R'a possui as significações definidas antes, ou os correspondentes derivados Δ6, Δ8, Δ9(11> ou Δ6'8, sendo ambos intermediários para a preparação dos seus 17β-ésteres, em particular dos seus 5'-ésteres, e de princípios activos interessantes que possuem uma acção de cicatrização e uma acção sistémica fraca ou indetectável.

Os compostos resultantes de fórmula estrutural I, em que o símbolo Y representa etinileno, os símbolos R e R" representam hidrogénio e o símbolo R' representa um grupo diferente de alcanoílo inferior, podem ser submetidos a reacções de acilação e de desacilação, conforme descrito no documento US 3 265 718, para se obter os compostos correspondentes de fórmula estrutural I, em que pelo menos um dos grupos R, R' e R", tal como definidos antes, representa um grupo éster.

Assim, por exemplo, o grupo hidroxi principal e o grupo fenol de um 17a-(5-hidroxipentin-l-il)-1,3,5 (10)-estratrieno-3,17β^ίο1 de fórmula estrutural IV, ou de um 11 seu derivado Δ6, Δ8, Δ9(11) ou Δ6'8, são fácil e simultaneamente esterificados por meio de tratamento com um derivado reactivo de um ácido alcanóico inferior, tal como um cloreto ou um anidrido, facultativamente na presença de uma base orgânica terciária, tal como piridina, à temperatura ambiente ou sob refluxo, para se obter os correspondentes 3,5'-dialcanoatos inferiores. A esterificação selectiva do grupo 5'-hidroxi principal do composto de fórmula estrutural IV, ou de um seu derivado Δ6, Δ8, Δ9(11) ou Δ6'8, pode ser efectuada por aquecimento com um ácido livre, em particular com um ácido carboxilico alifático inferior.

No entanto, a preparação de monoésteres no grupo 5'hidroxi principal é preferencialmente efectuada por reacção de um composto de fórmula estrutural II, em que o simbolo R' representa um grupo protector P°, com um derivado de um metal alcalino protegido de 5-pentinol (III), seguindo-se o tratamento do produto intermediário resultante de fórmula estrutural (la)

em que os símbolos P°, Q e Q' possuem as significações definidas antes, facultativamente Δ6, Δ8, Δ9(11> ou Δ6'8, com um derivado reactivo de um ácido carboxilico de fórmula geral AcOH, em que o termo Ac possui as significações definidas antes, e, por último, removendo o grupo protector P° do produto resultante de fórmula estrutural Ib 12

em meio ácido, por exemplo, por tratamento com ácido p-tolueno-sulfónico, para se isolar o composto de fórmula estrutural Ic

em que os símbolos Q, Q' e Ac possuem as significações definidas antes.

Em particular, o grupo Ac inclui os grupos alcanoílo inferiores definidos antes e também os grupos cloroacetilo, bromoacetilo, cloropropionilo, bromopropionilo, benzoílo, 4-metoxibenzoílo, 3,4-dimetoxibenzoílo, fenil-acetilo, 3-fenilpropionilo, 3-ciclopropilpropionilo, 3-ciclopentilpropionilo, 3-carboxipropionilo, 3-metoxi-carbonilpropionilo, 3-etoxicarbonil-propionilo, cinamoílo, nicotinoílo, isonicotinoílo.

Os 5'-ésteres de fórmula estrutural Ic são princípios activos interessantes com actividade de cicatrização e com efeitos secundários estrogénicos sistémicos fracos ou indetectáveis. A esterificação do grupo hidroxi terciário (17β-0Η) é efectuada sob condições drásticas, por aquecimento prolongado da mistura que compreende o composto (IV) e o derivado funcional ácido R-OH, seguindo-se a reacção de 13 saponificação selectiva dos di-ésteres ou tri-ésteres resultantes para se obter apenas o 17-monoéster.

Os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo Y representa etinileno, podem ser preparados por hidrogenação parcial do grupo etinileno. A hidrogenação pode ser efectuada na presença de um catalisador, tal como paládio sobre carvão ou hidróxido de paládio sobre carbonato de estrôncio. No caso de a l hidrogenação ser efectuada com hidreto de alumínio-lítio , então obtém-se o derivado trans.

Os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo Y representa etileno, ou um seu derivado Δ6, Δ8, Δ9(11> ou Δ6'8 correspondente, podem ser preparados por reacção de um composto de fórmula estrutural II, em que o símbolo R° representa um grupo diferente de hidrogénio, ou um seu derivado Δ6, Δ8, Δ9(11> ou Δ6'8, com 5-trimetilsililoxi-n-pentil-lítio, de acordo com o método descrito no documento US 3 303 205, para a preparação de 17a-(3-hidroxi-n-propil)-estradiol e 17a-(3-hidroxi-n-butil)-estradiol. Tipicamente, faz-se reagir cloreto de 5-trimetilsililoxi-n-pentilo com lítio finamente dividido em tetra-hidrofurano e adiciona-se a mistura que contém 5-trimetilsililoxi-n-pentil-lítio com uma solução de 17-oxoesteróide num solvente normalmente utilizado para reacções de Grignard, por exemplo, tetra-hidrofurano, para se obter o derivado correspondente de 17a-(5-hidroxi-n-pentil)-estradiol.

Como compostos preferidos de acordo com a presente invenção refere-se os compostos de fórmula estrutural 1' 14

em que cada um dos símbolos Z e Z' representa hidrogénio ou alcanoílo inferior.

Os compostos de fórmula estrutural 1', em que o símbolo Z' representa hidrogénio e o símbolo Z representa hidrogénio ou alcanoílo inferior, são particularmente interessantes.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção diz respeito a um processo para a preparação dos compostos de fórmula estrutural I', o qual consiste em: (a) tratar a estrona protegida em 3 de fórmula estrutural II'

em que o símbolo P° representa um grupo protector estável em condições alcalinas, com um derivado de 5-pentinol com um metal alcalino de fórmula estrutural III', M-C=C- (CH2)2-OP' (III') em que o símbolo M representa um metal alcalino e o símbolo P' representa um grupo protector estável em condições alcalinas, (b) submeter o composto resultante de fórmula estrutural 15

definidas antes, a desprotecção total ou parcial e recuperação de um composto de fórmula estrutural I'a, I'b ou I'c

em que os símbolos P° e P' possuem as significações definidas antes, (c) facultativamente, tratar o composto resultante de fórmula estrutural I'a, I'b ou I'c com um derivado reactivo de um ácido alcanóico Alq-OH para se obter um composto de fórmula estrutural I'd, I'e ou I'f

definidas antes; (d) facultativamente, remover o grupo protector P° ou P' dos compostos de fórmulas estruturais l'e e I'f para se obter o composto de fórmula estrutural l'g ou I'h

16 em que o símbolo Alq possui as significações definidas antes e (e) facultativamente, tratar o composto resultante de fórmula estrutural I'g ou I'h, em que o símbolo Alq possui as significações definidas antes, com um derivado reactivo de um ácido alcanóico, Alq'-OH, para se obter um diéster assimétrico de fórmula estrutural l'i ou 1'j

em que os símbolos Alq e Alq' representam grupos alcanoílo inferiores diferentes entre si.

Os grupos protectores P° e P', tal como definidos antes, são estáveis em meios alcalinos e podem ser iguais ou diferentes entre si.

Os referidos grupos protectores estáveis em condições alcalinas, tais como os grupos 2-tetra-hidropiranilo ou sililo, em particular os grupos Si(Alq) 3, em que o símbolo Alq representa um alquilo inferior e em que os três grupos alquilo podem ser iguais ou diferentes, em particular três grupos metilo ou etilo ou um grupo t-butilo e dois grupos metilo, podem ser facilmente removidos com ácidos. A preparação de éter 3-tetra-hidropiranílico de 17-oxoesteróide II' (P° = 2-tetra-hidropiranilo) ou de éter 5-tetra-hidropiranílico de 5-pentinol para a preparação do derivado alcalino m' (P' = 2-tetra-hidropiranilo) pode ser efectuada por tratamento do composto II ou III com di-hidropirano, conforme descrito em J. Am. Chem. Soc. 1972, 94, 1438. 17 A preparação de derivados de sililo de 17-oxoesteróide II (P° = trialquilsililo) ou de 5-trialquilsililoxi-l- pentino ui" HOC- (CH2) 2-CH20-SiAlq3 (III") pode ser efectuada por tratamento de estrona ou de 5-pentinol com reagentes de sililação conhecidos, por exemplo, cloreto de trimetilsililo, cloreto de trietilsililo, hexametildissilazano ou cloreto de t-butildimetilsililo, conforme descrito por T.W. Greene et al. em "Protecting groups in Organic Synthesis", 3a Edição, J. Wiley & Sons, 1999, páginas 113-148. Nesse documento também se encontra descrita a remoção desses grupos de sililação.

No passo (a) do processo da presente invenção, o composto III' é normalmente preparado in situ. Tipicamente, faz-se reagir a estrona protegida em 3 e o 5-pentinol protegido num solvente adequado para reacções de Grignard, por exemplo, tetra-hidrofurano, a uma temperatura baixa, por exemplo, compreendida entre -70°C e -80°C, na presença de butil-litio dissolvido num solvente hidrocarbonado, tal como hexano ou ciclo-hexano.

Os compostos de fórmulas estruturais II' e III', em que os símbolos P° e P' são iguais, irão ser utilizados para a preparação de um composto de fórmula estrutural I', em que os símbolos Z e Z' representam hidrogénio, ao passo que os compostos de fórmulas estruturais II' e III', em que os grupos protectores P° e P' são diferentes e removíveis sob diferentes condições, irão ser utilizados para a preparação de um composto de fórmula estrutural I', em que um dos símbolos Z e Z' representa hidrogénio que irá ser substituído, por exemplo, esterif içado, e o outro 18 representa um grupo protector que é subsequentemente removido.

No caso de os grupos protectores P° e P' serem diferentes, então o grupo P° é preferencialmente tetra-hidropiranilo, o qual é facilmente removido com ácido p-tolueno-sulfónico, e o grupo P' é preferencialmente t-butildimetilsililo (TBDMS), o qual pode ser selectivamente removido na presença de um grupo tetra-hidropiranilo por tratamento com fluoreto de tetrabutil-amónio, em conformidade com o método descrito na obra J. Am Chem. Soc. 1972, 94, 6190.

Para a preparação dos compostos mais interessantes de fórmula estrutural I', em que o símbolo Z' representa hidrogénio e o símbolo Z representa hidrogénio ou alcanoilo inferior, o grupo P° é tetra-hidropiranilo e o grupo P' é TBDMS no composto de partida II'.

No final do passo (a) obtém-se um composto de fórmula estrutural I".

No passo (b), o composto de fórmula estrutural " é submetido a desprotecção total ou parcial.

No caso da desprotecção parcial, é necessário utilizar um composto de fórmula estrutural I", em que os substituintes P° e P' sejam grupos protectores estáveis em condições alcalinas, que sejam diferentes entre si e que sejam selectivamente removidos.

De preferência, o substituinte que irá ser removido em primeiro lugar é o grupo TBDMS, sendo o outro substituinte o grupo 2-tetra-hidropiranilo.

Em particular, faz-se reagir um composto de fórmula estrutural I", em que o grupo P° é tetra-hidropiranilo e o grupo P' é TBDMS, com fluoreto de tetrabutil-amónio. 19

Tipicamente, trata-se a frio uma solução em tetra-hidrofurano do referido composto com uma solução de fluoreto de tetrabutil-amónio e depois mantém-se em repouso a 20°C-30°C durante cerca de 2 horas, até ao consumo do material de partida. Após a desprotecção, obtém-se um composto de fórmula estrutural l'a.

No caso de um composto de fórmula estrutural I", em que o grupo P° é TBDMS e o grupo P' é tetra-hidropiranilo, faz-se reagir o referido composto com fluoreto de tetrabutil-amónio conforme ilustrado antes. Após a desprotecção, obtém um composto de fórmula estrutural I'b.

No caso da desprotecção total, é possível utilizar um composto de fórmula estrutural II", em que os substituintes P° e P' são grupos protectores estáveis em condições alcalinas idênticos, por exemplo, um grupo tetra-hidropiranilo ou um radical -Si(Alq)3. Quando se completar a desprotecção total, obtém-se um composto de fórmula estrutural I'c, que é o produto final de fórmula estrutural 1', em que os símbolos Z e Z' representam hidrogénio, sendo também um intermediário importante para a preparação de 3,5'diésteres simétricos.

No passo (c), trata-se o produto do passo (b) com um derivado reactivo do ácido Ac-OH. a expressão "derivado reactivo" designa um derivado activo do ácido Ac-OH, o qual pode estar comercialmente disponível, tal como anidrido acético, propiónico, butírico ou valérico, ou é um derivado activo que pode ser preparado em separado, tal como um cloreto de acilo ou um éster activo, ou preparado in situ por activação com reagentes adequados, tais como mercapto-benzotiazole, diciclo-hexilcarbodiimida, hidroxibenzotriazole 20 ou hexafluorofosfato de benzotriazole-l-iloxi-tris(dimetil-amino)-fosfónio (BOP). A reacção é efectuada de acordo com os métodos de esterificação convencionais. Tipicamente, trata-se o composto I'a, I'b ou I'c com um anidrido Alq-OR-Alq na presença de uma base terciária, tal como piridina, a uma temperatura compreendida entre 20°C e 4 0°C.

No final da esterificação do composto I'c, obtém-se e recupera-se o 3,5'-diéster simétrico de fórmula estrutural I'd, uma vez que é o produto final de fórmula estrutural I', em que os símbolos Z e Z' representam grupos alcanoílo inferiores idênticos.

Os compostos I'b e I'a proporcionam, respectivamente, 3-monoésteres protegidos em 5' de fórmula estrutural I'a e 5'-monoésteres protegidos em 3 de fórmula estrutural l'f, os quais são submetidos ao passo (d).

No passo (d), remove-se os grupos protectores dos 5'-monoésteres protegidos em 3 e dos 3-monoésteres protegidos em 5' conforme ilustrado antes, recuperando-se assim os compostos de fórmulas estruturais I'g e I'h. Os compostos I'g e I'h são produtos finais de fórmula estrutural 1'. em particular, o composto I'g é um produto de fórmula estrutural 1', em que o símbolo z representa um grupo alcanoílo inferior e o símbolo Z' representa hidrogénio, e o composto I'h é um produto de fórmula estrutural I', em que o símbolo Z representa hidrogénio e o símbolo Z' representa um grupo alcanoílo inferior, sendo ambos intermediários úteis para a preparação de 3,5'-diésteres assimétricos quando submetidos ao passo (e).

No passo (e), trata-se os compostos de fórmula estrutural I'g e I'h com um derivado reactivo de um ácido 21 alcanóide, Alq'-OH, que é diferente do ácido Alq-OH utilizado no passo (c). Quando se completa a esterificação, obtém-se os ésteres de fórmula estrutural l'i e I'j, os quais são produtos finais de fórmula estrutural 1', em que os símbolos Z e Z' representam diferentes qrupos alcanoílo inferior.

Determinou-se a actividade dos dois compostos da invenção, 17oí- (5-acetoxi) -pent-l-inil-1, 3, 5 (10) -estratrieno-3,17p-diol e 17a-(5-propanoíl-oxi)-pent-l-inil-1,3, 5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1, numa cultura de células e num modelo transgénico de animais, utilizando murganhos ERE-luc fêmeas adultos, os quais foram submetidos a uma ovariectomia ou a uma operação simulada, três semanas antes da experiência. Este modelo permite que a actividade anti-inflamatória actue sobre o receptor de estrogénio e sobre a actividade de cicatrização de feridas que se pretende avaliar.

Nas experiências de culturas de células, demonstrou-se que os dois compostos testados eram agonistas do receptor de estrogénio.

No modelo animal, foram utilizados 2 animais para cada grupo experimental no primeiro estudo. Os dois compostos estudados apresentaram comportaram-se como activadores do receptor de estrogénio e demonstraram uma actividade anti-inflamatória e uma actividade de cicatrização de feridas. Num segundo estudo, seleccionou-se o 17a-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1, 3, 5 (10)-estratrieno-3,17β-άίο1 para uma avaliação mais minuciosa, utilizando 5 animais por grupo experimental. Os resultados deste segundo estudo demonstraram que o 17a-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1 é um composto com actividade estrogénica que está activo no 22 processo de cicatrização de feridas, em que a referida actividade é qualitativamente diferente da apresentada pelo estradiol, embora a eficácia do efeito de cicatrização de feridas seja estatisticamente idêntico ao apresentado pela hormona natural.

Os estudos foram realizados nos grupos experimentais seguintes: - animais não submetidos a ovariectomia e não tratados (apenas no segundo estudo); animais não submetidos a ovariectomia tratados com o composto de ensaio (100 pL de uma solução 100 nM/soro fisiológico por via intradérmica in loco - apenas no segundo estudo); animais submetidos a ovariectomia de controlo (grânulos subcutâneos na ausência de estrogénios e injecção intradérmica de soro fisiológico); animais submetidos a ovariectomia tratados com estradiol (50 pg/kg por meio de grânulos implantados subcutaneamente, 24 horas antes da cirurgia); - animais submetidos a ovariectomia tratados com o composto de ensaio (100 pL de uma solução 100 nM/soro fisiológico por via intradérmica in loco).

Imediatamente antes da sua utilização, dissolveu-se cada um dos dois compostos de ensaio em etanol a 99% e preparou-se uma solução de reserva 10 mM. As diluições sucessivas foram realizadas com uma solução de soro fisiológico (0,9% de NaCl em água bidestilada).

Foram efectuadas incisões com 1 cm de comprimento em animais anestesiados para avaliar a actividade anti-inflamatória dos compostos de ensaio. As referidas incisões não foram tratadas com pontos, para se analisar o estado inflamatório e a cicatrização da ferida, decorridos 3 dias 23 após a cirurgia. Efectuou-se a contagem das células marcadas com os anticorpos específicos, utilizando o programa "imaging plus" na ferida e na porção de derme à sua volta. Os macrófagos foram marcados com Mac3. Os neutrófilos foram marcados com anti-Ly6g. No primeiro estudo, os dois compostos de ensaio apresentaram uma actividade quantitativamente semelhante em comparação com o estradiol.

Avaliou-se a actividade sobre o receptor de estrogénio por análise fotométrica com uma câmara CCD, decorridas 0, 24, 48 e 72 horas. Os animais foram então sacrificados e removeu-se o tecido à volta da ferida. Na ferida cutânea, a actividade dos dois compostos foi indistinguível da obtida por estradiol subcutâneo, confirmando assim a actividade agonística sobre os receptores de estrogénio encontrada nas células em cultura. O teste realizado com uma câmara CCD também demonstrou que, sob estas condições experimentais, o 17a-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1 não apresenta um efeito estrogénico detectável em áreas diferentes da área de administração (em particular, não apresenta uma actividade uterotrópica), ao passo que se verificou uma pequena actividade sistémica com 17a-(5-propanoiloxi)-pent-l-inil-1, 3,5(10)-estratrieno-3,17p-diol.

As secções histológicas foram preparadas a partir do tecido à volta da ferida para se avaliar a actividade de cicatrização de feridas. Para a preparação histológica, fixou-se o tecido em 10% de formalina (em solução tampão) e incorporou-se em cera de parafina. Manchou-se as secções com hematoxilina-eosina para se avaliar o estado da inflamação e a cicatrização de feridas. As secções também foram utilizadas para quantificar o estado de infiltração 24 de macrófagos decorridos 4 dias após a formação da ferida, utilizando anticorpos anti-Mac2, e para nova e para nova formação de manchas concebidas para a detecção do estado da cicatrização de feridas e para caracterizar as células presentes na área da ferida. Os dois compostos de acordo com a invenção demonstraram possuir uma actividade de cicatrização de feridas semelhante à de estradiol.

No segundo estudo, o qual avaliou a expressão de diversos marcadores de inflamação (MIF, CD74, TGF-β e IL-6), foi observado que o 17a-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1, 3, 5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1 apresentava um perfil de acção qualitativamente diferente do observado para o estradiol. A hormona natural demonstrou que limitava a expressão de todas as proteínas de inflamação estudadas, ao passo que o composto de acordo com a invenção inibia de forma significativa a expressão de MIF, CD74 e TGF-β, e não de IL-6. A diferença qualitativa entre o estradiol e o composto de acordo com a invenção foi confirmado por meio de uma avaliação comparativa entre os dois compostos sobre a expressão dos receptores α e β de estrogénio (ERa e ERP), ilustrado por AM Brzozowski et al. em "Molecular basis of agonism and antagonism in the estrogen receptor", Nature 1997, 389, 753-758 (Brzozowski 1997) . Ο 17p-estradiol e o 17a-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1 de acordo com a invenção possuem efeitos significativamente diferentes sobre a expressão dos receptores de estrogénio. Contra uma redução significativa no números de receptores α e um redução visível (embora não significativa) nos receptores β provocada pela ovariectomia, o tratamento com estradiol 25 aumenta o número de células que obtêm um resultado positivo no teste para ambos os receptores, ao passo que o 17a-(5-acetoxi)pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1 de acordo com a invenção não actua sobre o número de células que dão um resultado positivo para o receptor α e não reduz significativamente o número de células que expressam o receptor β.

Com base nas referidas conclusões das experiências, os compostos de acordo com a invenção são agentes de potenciais de nova geração para a cicatrização de feridas com uma actividade anti-inflamatória notória e com uma actividade estrogénica sistémica reduzida, ou inferior aos limites de detecção, e são particularmente úteis para o tratamento local de feridas.

Assim, de acordo com um seu outro aspecto, a presente invenção proporciona composições farmacêuticas que compreendem como um dos seus princípios activos uma quantidade farmacologicamente eficaz de um derivado de 17a-(5-hidroxi-Cs-hidrocarbil) -1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-ύίο1 de fórmula estrutural I anterior, em que os símbolos Q, Q', R, R' e Y possuem as significações definidas antes e em que as ligações duplas também podem estar presentes na posição 6, na posição 8, na posição 9(11) ou nas posições 6 e 8 do esteróide, misturado com um excipiente farmacêutico. Como princípios activos particularmente úteis para as composições de acordo com a invenção refere-se os compostos da fórmula estrutural 1' anterior, em que os símbolos Z e Z' representam hidrogénio ou um grupo alcanoílo inferior. Como constituintes activos preferidos refere-se os compostos de fórmula estrutural 1' , em que o símbolo Z' 26 representa hidrogénio e o simbolo Z representa um grupo alcanoilo inferior, em particular um grupo acetilo.

Nas composições farmacêuticas de acordo com a invenção concebidas para a administração por via oral, subcutânea, transdérmica ou tópica, os princípios activos, os quais são derivados de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17-β-άίο1, são preferencialmente administrados numa mistura com veículos ou excipientes farmacêuticos convencionais. A dose pode variar bastante, em função do tamanho e da gravidade da ferida do paciente. Tal dosagem compreende a administração de uma dose de um derivado de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-diol compreendida entre 0,1 mg e 50 mg, de um modo vantajoso entre 1 mg e 25 mg e de preferência entre 2,50 mg e 15 mg, uma a três vezes ao dia, por via subcutânea, oral, transdérmica ou tópica.

As composições farmacêuticas incluindo um derivado de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieni-3,17β-diol, tal como as composições ilustradas antes, são formuladas com os excipientes convencionais adequados para as diversas vias de administração. São particularmente vantajosas as formulações sob a forma de cremes, unguentos, unguentos gordos, geles, espumas, bálsamos, soluções ou suspensões adequadas para administração local. As composições para administração local, tais como soluções ou suspensões, cremes, unguentos ou unguentos gordos para a pele contêm o constituinte activo numa percentagem compreendida entre 0,001% e 10%, formulado numa mistura com os excipientes convencionais. Os excipientes para os cremes, unguentos e unguentos gordos podem ser água, álcoois alquílicos superiores, tais como álcool 27 estearílico, os seus ésteres, álcool de lã; alquileno-glicóis, tais como etileno-, propileno- ou hexileno-glicol; os seus monoésteres ou diésteres, tais como um seu palmitato ou estearato; glicerina; os seus mnoésteres ou diésteres, tais como o seu monoestearato ou diestearato; polioxialquilenos e os seus ésteres ou éteres; ceras, tais como cera branca; cera de parafina, parafina liquida ou parafina mole; isoparafina ou os seus derivados; lanolina, álcoois de lanolina e os seus ésteres, ésteres do ácido cinâmico; tripalmitato ou trioleato de sorbitano; monoestearato de polioxietileno-sorbitano; polissorbatos; polímeros de dimetilsiloxano. As loções ou soluções para a pele são constituídas por suspensões ou soluções aquosas que contêm álcoois, tais como etanol, isopropanol ou álcool benzílico; glicóis, tais como propileno-glicol, ou seus éteres ou ésteres; derivados de celulose, tais como hidroxipropil-celulose; e tampões, tais como tampão fosfato. Os constituintes podem incluir conservantes, tais como p-hidroxibenzoato de alquilo ou fenóis, tais como butil-hidroxianisol.

As composições de acordo com a invenção também podem conter pelo menos um outro constituinte activo seleccionado entre antibióticos, tais como neomicina, sulfato de neomicina, bacitracina e bacitracina-zinco; antifúngicos, tais como miconazole e econazole; antibacterianos, tais como cloro-hexidina e seus sais, em particular o gluconato, ou anti-sépticos, tais como sais de amónio quaternário. Em particular, as composições de acordo com a invenção pode incluir, de um modo vantajoso, pelo menos um outro constituinte activo seleccionado entre sulfato de neomicina, bacitracina-zinco e gluconato de cloro-hexidina. 28

Por último, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a cicatrização de feridas em mamíferos, o qual compreende a administração ao referido mamífero, que necessite de cicatrização de feridas, de uma quantidade eficaz de um derivado de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil) -1, 3,5(10) -estratrieni-3,17p-diol de fórmula estrutural I anterior, em que os símbolos Q, Q', R, R' e Y possuem as significações definidas antes e em que as ligações duplas também podem estar presentes na posição 6, na posição 8, na posição 9(11) ou nas posições 6 e 8 do esteróide, e em particular de um composto de fórmula estrutural I' anterior, em que os símbolos Z e Z' representam hidrogénio ou um grupo alcanoílo inferior e de preferência um composto de fórmula estrutural 1', em que o símbolo Z' representa hidrogénio e o símbolo Z representa um grupo alcanoílo inferior, de preferência acetilo. De preferência, o derivado de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17p-diol irá ser administrado localmente por aplicação de uma composição farmacêutica, conforme descrita antes, à ferida.

De acordo com a presente invenção, a administração do derivado de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17p-diol pode ser efectuada em simultâneo ou sequencialmente com pelo menos um outro constituinte activo seleccionado entre os descritos antes.

Os exemplos seguintes ilustram a invenção.

PREPARAÇÃO I 5-(t-Butildimetilsililoxi)-pent-l-ino

Prepara-se uma solução de 2,2 mL (0,024 mol) de 5-hidroxi-l-pentino comercial, 4,0 g (0,059 mol) de imidazol 29 e 4,01 g (0,026 mol) de cloreto de t-butildimetilsililo em 4 mL de dimetilformamida e depois mantém-se sob agitação à temperatura ambiente (20°C-30°C), até uma análise por TLC (éter dietilico/éter de petróleo a 3/7) indicar o desaparecimento do 5-hidroxi-l-pentino de partida e o aparecimento de uma mancha com um Rf superior. Normalmente, observa-se o desaparecimento do produto de partida decorridas cerca de 4 horas. Dilui-se a mistura de reacção com água, extrai-se a fase aquosa com éter etílico, lava-se as fases orgânicas combinadas com uma solução saturada de cloreto de sódio e seca-se sobre sulfato de sódio anidro. Após a evaporação do solvente e a destilação do produto impuro sob pressão reduzida, obtém-se 2,791 g (0,014 mol) de 5-(t-butildimetilsililoxi)-pent-l-ino, com um valor de destilação de 67°C a 23 mbar. Rendimento: 58%. 1H-NMR (CDC13) : δ 3,71 (t, 2H) , 2,29 (td, 2H) , 1,93 (t, 1H), 1,74 (q, 2H), 0,90 (s, 9H) , 0,05 (s, 6H) .

PREPARAÇÃO II 5-(t-Butildimetílsílíloxí)-pent-l-ino A uma mistura de 186 mL de dimetilformamida, 93,5 g de 5-hidroxi-l-pentino e 185,5 g de imidazol, à temperatura ambiente (20°C-30°C), adiciona-se, progressivamente e sob agitação, 185,5 g de cloreto de t-butildimetilsililo, mantendo a essa temperatura com um banho de arrefecimento. Arrefece-se a suspensão densa amarela pálida resultante até 2°C, mantendo sob agitação e monitorizando por TLC (eluente: éter dietilico/éter de petróleo a 3/7, revelador: ácido perclórico quente; Rf do produto de partida = 0,33, Rf do produto final = 0,95); dá-se a reacção por completa ao fim de duas horas. À mistura de reacção adiciona-se 30 lentamente 375 mL de água e 150 mL de tolueno e mantém-se sob agitação durante 10 minutos, controlando a temperatura com um banho de arrefecimento. Separa-se a fase orgânica, extrai-se a fase aquosa com 100 mL de tolueno, depois filtra-se sob pressão reduzida as fases orgânicas combinadas através de Celite, lavando a massa de filtração com 50 mL de tolueno. Concentra-se a solução sob pressão reduzida para se obter um resíduo oleoso amarelo pálido, o qual se submete a destilação a uma temperatura compreendida entre 23°C e 34°C e a uma pressão de cerca de 13 mbar e subsequentemente a 7,5 mbar a uma temperatura compreendida entre 35°C e 60°C. Deita-se fora as duas fracções resultantes. Mantém-se a destilação a 7,5 mbar e recolhe-se as fracções que destilam a uma temperatura superior a 60°C. Deita-se fora a primeira fracção, a qual destila a uma temperatura compreendida entre 60°C e 75°C (89 g), ao passo que a segunda, a qual destila a 75°C, é constituída por 101 g de 5-(t-butildimetilsililoxi)-pent-l-ino idêntico ao produto da preparação I.

PREPARAÇÃO III Éter 3-tetra-hidropiranílico de estrona A uma solução de 2,00 g (7,4 mmol) de estrona em 35 mL de diclorometano anidro, arrefecida até 0°C sob uma atmosfera de árgon e agitação magnética, adiciona-se 2,7 mL (0,03 mol) de di-hidropirano (3,4-di-hidro-2H-pirano) e 0,014 g (0,075 mmol) de ácido p-tolueno-sulfónico. Após 10 minutos sob estas condições, aquece-se a mistura até à temperatura ambiente (20°C-30°C) e mantém-se sob agitação, até a análise por TLC (éter etílico/hexano a 1/1) indicar o desaparecimento do produto de partida e uma mancha com um 31 valor de Rf superior. Normalmente, dá-se a reacção por completa decorrida cerca de 1 hora. Dilui-se então a mistura de reacção com diclorometano e lava-se com uma solução saturada de NaHC03. Extrai-se a fase aquosa com diclorometano, lava-se as fases orgânicas combinadas com uma solução saturada de cloreto de sódio e seca-se sobre sulfato de sódio anidro. Depois de se completar a evaporação do solvente sob pressão reduzida, deixa-se cristalizar o resíduo a partir de metanol para se obter 2,5 g (0,007 mol) do éter tetra-hidropiranílico de estrona.

Rendimento: 95%. 1H-NMR (CDC13) : δ 7,19 (d, 1H) , 6, 78-6, 90 (m, 2H) , 5,40 (t, 1H), 3, 85-4, 00 (m, 1H), 3, 55-3, 66 (m, 1H), 2,90 (t, 2H).

PREPARAÇÃO IV Éter 3-tetra-hidropiranílico de estrona

Adiciona-se, gota a gota, 48,2 mL de di-hidropirano a uma mistura de 36,23 g de estrona e 580 mL de diclorometano arrefecido até 2°C, sob uma atmosfera de azoto e sob agitação. Agita-se a mistura a esta temperatura durante 10 minutos, depois aquece-se até à temperatura ambiente (20°C-30°C) e agita-se novamente, monitorizando por tlc (eluente: éter dietílico/éter de petróleo a 1/1, revelador: ácido perclórico quente; Rf do produto de partida = 0,29, Rf do éter tetra-hidropiranílico de estrona resultante = 0,50). Decorridos 90 minutos, dá-se a reacção por completa e adicionou-se à mistura, sob agitação, 275 mL de diclorometano e 300 mL de uma solução saturada de NaHC03 (pH = 7,9). Mantém-se a mistura sob agitação durante 10 minutos, depois separa-se a fase orgânica e extrai-se a 32 fase aquosa com diclorometano. Lava-se as fases orgânicas combinadas com 150 mL de uma solução saturada de NaCl e concentra-se até à secura sob pressão reduzida. Coloca-se em suspensão o produto impuro (60,5 g) em 120 mL de metanol e remove-se por destilação 70 mL desta mistura sob pressão reduzida. Trata-se a mistura restante com 60 mL de metanol, mantém-se sob agitação a 40°C durante 10 minutos, depois arrefece-se até 0°C e mantém-se sob agitação durante 1 hora. Após filtração sob pressão reduzida, lava-se o sólido com 40 mL de metanol arrefecido até -10°C e seca-se sob pressão reduzida a 35°C. Obtém-se 45,5 g de éter 3-tetra-hidropiranílico de estrona com o aspecto de um sólido branco cristalino, que é idêntico ao produto da preparação III . EXEMPLO 1 3-Tetra-hidropiraniloxi-lΊα-(5-t-butildimetilsililoxi) -pent-1-inil-l, 3, 5 (10)-estratrieno-17β-οΐ (fórmula estrutural I', Z' = THP, Z = -SÍMe2tBu) A uma solução de 1,8 g (9,1 mmol) de 5-(t-butil-dimetilsililoxi)-pent-l-ino, preparada conforme descrito na preparação I, em 16 mL de tetra-hidrofurano anidro, sob uma atmosfera de árgon e agitação magnética, a -78°C, adiciona-se 2,7 mL de uma solução 2,0 M de n-butil-lítio (5,4 mmol) em ciclo-hexano. Decorridas 3 horas, adiciona-se à mistura uma solução de 0,50 g (1,4 mmol) de éter tetra-hidro-piranilico de estrona em 5 mL de tetra-hidrofurano anidro. Decorrida 1 hora, aquece-se a mistura até à temperatura ambiente (20°C-30°C) e mantém-se sob agitação até a análise por TLC (éter dietilico/éter de petróleo a 1/1) indicar o desaparecimento de éter tetra-hidropiranilico de estrona e 33 o aparecimento de uma nova mancha com um Rf superior. De um modo geral, dá-se a reacção por completa decorridas cerca de 3 horas. Neutraliza-se a mistura de reacção com ácido clorídrico 0,5 M, extrai-se a fase aquosa com éter etilico, lava-se a fase orgânica com uma solução saturada de cloreto de sódio e seca-se sobre sulfato de sódio anidro. Depois de se evaporar o solvente sob pressão reduzida, obtém-se 1,7 g de produto impuro e purifica-se por cromatografia através de gel de silica (proporção produto/silica de 1/100), utilizando como eluente éter etílico7hexano a 40/60, para se obter 0,60 g (1,1 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-t-butildimetilsililoxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17β-ο1. Rendimento: 79%. 1H-NMR (CDC13) : δ 7,21 (d, lH) , 6, 77-6, 90 (m, 2H) , 5,40 (t, 1H), 3, 85-4,00 (m, lH) , 3,71 (t, 2H) 3, 55-3, 66 (m, 1H), 2,84 (m, 2H), 0,89 (s, 9H) 0,86 (s, 3H) , 0,05 (s, 6H) . EXEMPLO 2 3-Tetrâ-hidropiraniloxi-l7a-(5-hidroxi)-pent-l-inil-1, 3, 5 (10) -estratrieno-17$-ol (fórmula estrutural I', Z' = THP, Z = H)

Arrefece-se até 0°C uma solução de 0,30 g (0,543 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-t-butildimetilsililoxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17p-ol (preparada conforme descrito no exemplo 1) em 5 mL de tetra-hidrofurano e adicionou-se, sob agitação, a 1,1 mL de uma solução a 1,0 M de fluoreto de tetrabutil-amónio (1,1 mmol) em tetra-hidrofurano. Depois de se agitar durante 10 minutos, aquece-se a mistura até à temperatura ambiente (20°C-30°C) e mantém-se sob agitação até a análise por TLC (éter dietilico/éter de petróleo a 70/30) indicar o 34 desaparecimento do produto de partida e o aparecimento de uma mancha com um Rf inferior. De um modo geral, dá-se a reacção por completa decorridas cerca de 2 horas. Dilui-se a mistura com 30 mL de acetato de etilo, lava-se a fase orgânica resultante com água, extrai-se a fase aquosa com acetato de etilo, lava-se as fases orgânicas combinadas com uma solução saturada de cloreto de sódio e seca-se sobre sulfato de sódio anidro. Depois de se evaporar o solvente sob pressão reduzida, purifica-se o resíduo (0,41 g de produto impuro) por cromatografia através de gel de sílica (proporção produto/sílica de 1/100), utilizando como eluente éter dietílico/hexano a 40/60, para se obter 0,184 g (0,42 mol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-hidroxi)-pent-l-inil-1, 3, 5(10)-estratrieno-17p-ol. Rendimento: 80%. ^-NMR (CDC13) : δ 7,20 (s, 1H), 6, 76-6, 88 (m, 2H) , 5,39 (t, 1H), 3, 82-4,00 (m, 1H) , 3,76 (t, 2H) , 3,54-3,66 (m, 1H), 2,80-2,90 (m, 2H), 0,85 (s, 3H). EXEMPLO 3 3-Tetra-hidropiraniloxi-l 7a-(5-acetoxi)-pent-l-inil- 1,3,5 (10) -estratrieno-17$-ol (fórmula estrutural I', Z' = THP, Z = CH3CO-)

Arrefece-se até 0°C uma solução de 0,05 g (0,114 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17p-(5-hidroxi)-pent-l-inil- 1,3,5(10)-estratrieno-17p-ol, preparada conforme descrito no exemplo 2, em 1 mL de piridina e adiciona-se 0,09 mL (0,95 mmol) de anidrido acético. Mantém-se a mistura sob agitação até a análise por TLC (éter etilico/éter de petróleo a 70/30) indicar o desaparecimento do produto de partida e o aparecimento de uma mancha com um Rf superior. Dilui-se a mistura de reacção com éter etílico e lava-se 35 com ácido clorídrico 0,5 M. Extrai-se a fase aquosa com éter etílico; lava-se as fases orgânicas combinadas com uma solução saturada de cloreto de sódio e seca-se sobre sulfato de sódio anidro. Depois de se evaporar o solvente sob pressão reduzida, obtém-se 0,16 g de produto impuro, o qual se purifica por cromatografia através de gel de sílica (proporção produto/sílica de 1/100), utilizando como eluente éter etílico/hexano a 30/70. Obtém-se 0,048 g (0,10 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1, 3, 5 (10) -estratrieno-17p-ol. Rendimento: 91%. 1H-NMR (CDC13) : δ 7,20 (S, 1H) , 6, 76-6, 88 (m, 2H) , 5.39 (t, 1H), 4,15 (t, 2H) , 3, 82-4,00 (m, 1H) , 3,50-3,62 (m, 1H), 2, 80-2, 90 (m, 2H) , 0,85 (s, 3H) . EXEMPLO 4 3-Tetra-hidropiraniloxi-lla-(5-propanoiloxi)-pent-l-inil-1,3, 5 (10) -estratrieno-17$-ol (fórmula estrutural I', Z' = THP, Z = CH3CH2CO-) .

Seguindo-se 0 procedimento descrito no exemplo 3, partindo de 0,080 g (0,18 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-hidroxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17β-οΐ (preparado conforme descrito no exemplo 2) em 2 mL de piridina e 0,15 mL (1,2 mmol) de anidrido propiónico, obtém-se 0,092 g do produto impuro, o qual proporciona 0,082 g (0,17 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-propanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17β-οΐ. Rendimento: 94%. 1H-NMR (CDCI3) : δ 7,20 (S, 1H) , 6, 76-6, 88 (m, 2H) , 5.39 (t, 1H), 4,15 (t, 2H) , 3, 82-4,00 (m, 1H) , 3,50-3,62 (m, 1H), 2,80-2, 90 (m, 2H) , 1,12 (t, 3H) , 0,85 (s, 3H) . 36 EXEMPLO 5 3-Tetra-hidropiraniloxi-l7α-(5-butanoIloxl)-pent-l-inil-1, 3, 5 (10)-estratrienO-17$-ol (fórmula estrutural I', Z’ = THP, Z = CH3(CH2)2C0-)

Arrefece-se até 0°C uma solução de 0,075 g (0,17 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-hidroxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17£-ol (preparada conforme descrito no exemplo 2) em 2 mL de piridina e adiciona-se 0,28 mL (0,17 mmol) de anidrido butirico. Mantém-se a mistura sob agitação até a análise por TLC (éter etilico/éter de petróleo a 70/30) indicar o desaparecimento do produto de partida e o aparecimento de uma mancha com um Rf superior (cerca de 24 horas). Dilui-se a mistura de reacção com éter etílico e lava-se com ácido clorídrico 0,5 M. extrai-se a fase aquosa com éter etílico, lava-se as fases orgânicas combinadas com uma solução saturada de cloreto de sódio e seca-se sobre sulfato de sódio anidro. Depois de se evaporar o solvente sob pressão reduzida, obtém-se 0,226 g de produto impuro, o qual após cromatografia através de gel de sílica (proporção produto/sílica de 1/100), utilizando como eluente éter etílico/hexano a 30/70, proporciona 0,083 g (0,163 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-butanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17p-ol. Rendimento: 94%. XH-NMR (CDC13) : δ 7,21 (d, 1H) , 6, 76-6, 88 (m, 2H) , 5, 36-5, 42 (m, 1H) , 4,18 (t, 2H) 3, 85-4,00 (m, 1H) , 3,52- 3,66 (m, 1H), 2,78-2,90 (m, 2H), 0,94 (t, 3H) 0,85 (s, 3H). EXEMPLO 6 3-Tetra-hidropiraniloxi-l7a-(5-pentanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5 (10)-estratrieno-17$-ol (fórmula estrutural I', Z' = THP, Z = CH3(CH2) 3CO~) 37

Arrefece-se até 0°C uma solução de 0,061 g (0,14 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-hidroxi)-pent-l-inil- 1,3,5(10)-estratrieno-17p-ol (preparada conforme descrito no exemplo 2 em 2 mL de piridina) e adiciona-se 0,27 mL (1,3 mmol) de anidrido valérico. Mantém-se a mistura sob agitação até a análise por TLC (éter etilico/éter de petróleo a 70/30) indicar o desaparecimento do produto de partida e o aparecimento de uma mancha com um Rf superior (cerca de 24 horas). Dilui-se a mistura de reacção com éter etílico e lava-se com ácido clorídrico 0,5 M. Extrai-se a fase aquosa com éter etílico; lava-se as fases aquosas combinadas com uma solução saturada de cloreto de sódio e seca-se sobre sulfato de sódio anidro. Depois de se evaporar o solvente sob pressão reduzida, obtém-se 0,26 g de produto impuro e purifica-se por cromatografia através de gel de sílica (proporção produto/sílica de 1/100), utilizando com eluente éter etílico/hexano a 30/70, para se obter 0,069 g (0,13 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-pentanoiloxi) -pent-l-inil-1, 3,5(10) -θείΜΡΓίβη-ΙΙβ-οΙ. Rendimento: 93%. 1H-NMR (CDC13) : δ 7,21 (d, 1H) , 6, 76-6, 88 (m, 2H) , 5, 36-5, 42 (m, 1H) , 4,18 (t, 2H), 3,85-4,00 (m, 1H), 3,52- 3,66 (m, 1H), 2,78-2,90 (m, 2H), 0,86 (s, 3H). EXEMPLO 7 17a - (5-Acetoxi) -pent-l-inil-1,3, 5 (10) -estratrieno-3,17$-diol (fórmula estrutural I', Z' = Η, Z = CH3CO~)

Prepara-se uma mistura de 0,0326 g (0,069 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17oí- (5-acetoxi) -pent-l-inil-1,3,5(10) — θεί^ίηύθηο-ΐΐβ-οΐ, preparado em conformidade com o descrito no exemplo 3, e de uma solução a 1,3 mM de ácido 38 p-tolueno-sulfónico em metanol e mantém-se sob agitação até a análise por TLC (éter etílico/éter de petróleo a 70/30) indicar o desaparecimento do produto de partida e o aparecimento de uma mancha com um Rf inferior (cerca de 2 horas). Neutraliza-se a mistura de reacção com uma solução saturada fria de NaHC03. extrai-se a fase aquosa com éter etilico, lava-se a fase orgânica com uma solução saturada de cloreto de sódio e seca-se sobre sulfato de sódio anidro. Depois de se evaporar o solvente sob pressão reduzida, obtém-se 0,043 g de produto impuro e purifica-se por cromatografia através de gel de silica (proporção produto/silica de 1/100), utilizando como eluente éter etilico/hexano a 35/65, para se obter 0,02 g (0,05 mmol) de 17a-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17 β— diol. Rendimento: 73%. 1H-NMR (CDC13) : δ 7,14 (d, 1H) , 6, 55-6, 74 (m, 2H) , 4,19 (t, 2H), 2,70-2,88 (m, 2H), 0,87 (s, 3H). EXEMPLO 8 17a- (5-Propanoiloxi)-pent-l-inil-1,3, 5(10)-estratrieno-3,17$-diol (fórmula estrutural I', Z'=H, Z = CH3CH2CO-) .

Seguindo o procedimento do exemplo 7, a partir de 0,080 g (0,16 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-propanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17p-ol, preparado tal como descrito no exemplo 4, e a partir de uma solução a 3,2 mM de ácido p-tolueno-sulfónico em metanol, obtém-se 0,075 g e purifica-se por cromatografia através de gel de silica (proporção produto/silica de 1/100), utilizando como eluente éter etilico/hexano a 30/70, para se obter 0,064 g (0,156 mmol) de 17a-(5-propanoiloxi)-pent-l-inil-1, 3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1. Rendimento: ~100%. 39 ^-NMR (CDC13) : δ 7,14 (d, 1H) , 6, 55-6, 74 (m, 2H) , 4,17 (t, 2H) , 2,70-2,91 (m, 2H) , 1,12 (t, 3H) , 0,85 (s, 3H) . EXEMPLO 9 17a-(5-Butanoiloxy)-pent-l-inil-1, 3, 5(10)-estratrieno-3,17β-ol (fórmula estrutural I', Z'=H, Z = CH3 (CH2) 2CO-).

Seguindo o procedimento do exemplo 7, a partir de 0,07 g (0,14 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-butanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17p-ol, preparado tal como descrito no exemplo 5, e a partir de uma solução a 1,95 mM de ácido p-tolueno-sulfónico em metanol, obtém-se 0,06 g de produto impuro e purifica-se por cromatografia através de gel de sílica (proporção produto/sílica de 1/100), utilizando como eluente éter etílico/hexano a 30/70), para se obter 0, 050 g (0,118 mmol) de 17a-(5-butanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17p-diol. Rendimento: 86%. 1H-NMR (CDCI3) : δ 7,16 (d, 1H), 6, 55-6, 66 (m, 2H), 5,14 (s, 1H), 4,19 (t, 2H) 2,75-2, 88 (m, 2H) , 0,94 (t, 3H) , 0,87 (s, 3H) . EXEMPLO 10 17a- (5-Pentanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17$-diol (fórmula estrutural I', Z'=H, Z = CH3 (CH2) 3CO-) .

Seguindo o procedimento do exemplo 7, a partir de 0,052 g (0,099 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-pentanoiloxi) -pent-l-inil-1, 3,5(10) -θεί^^ίθηο-ΐΐβ-οΐ, preparado tal como descrito no exemplo 6, e a partir de uma solução a 1,98 mM de ácido p-tolueno-sulfónico em metanol, obtém-se 0,045 g de produto impuro e purifica-se por 40 cromatografia através de gel de sílica (proporção produto/sílica de 1/100), utilizando como eluente éter etílico/hexano a 30/70, para se obter 0,039 g (0,089 mmol) de 17a-(5-pentanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1. Rendimento: 90%. 1H-NMR (CDC13) : δ 7,16 (d, 1H) , 6, 55-6, 66 (m, 2H) , 5,55 (s, 1H), 4,19 (t, 2H) 2,75-2,88, (m, 2H). EXEMPLO 11 17a- (5-Hidroxi)-pent-l-inil-1, 3, 5(10)-estratrieno-3,17β-diol (fórmula estrutural I', Z' = Z = H)

Prepara-se uma solução de 0,16 g (0,29 mmol) de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-t-butildimetilsililoxi)-pent-l-inil-1, 3,5 (10)-estratrieno-17β-οΐ, preparada tal como descrito no exemplo 1, em 8 mL de tetra-hidrofurano, adiciona-se, sob agitação, 4 mL de ácido clorídrico 0,5 M e mantém-se a mistura sob agitação à temperatura ambiente (20°C-30°C) até a análise por TLC (éter etílico/éter de petróleo a 7/3) indicar 0 desaparecimento do reagente e o aparecimento de uma mancha nova com Rf ~0,2. De um modo geral, dá-se a reacção por completa decorridas cerca de 2 horas. Neutraliza-se a mistura com uma solução saturada de NaHC03 e extrai-se a fase aquosa com acetato de etilo. Lava-se a fase orgânica com uma solução saturada de cloreto de sódio e seca-se sobre sulfato de sódio anidro. Depois de se evaporar o solvente sob pressão reduzida, purifica-se o resíduo (0,23 g de produto impuro) por cromatografia através de gel de sílica (proporção produto/sílica de 1/100), utilizando como eluente éter etílico/hexano a 40/60, para se obter 0,097 g (0,27 mmol) de 17a-(5-hidroxi)-pent-l-inil-1, 3, 5 (10) -estratrieno-3, 17β-άίο1 . Rendimento: 94%. 41 1H-NMR (CD3OD) : δ 7,06 (d, 1H) , 6, 43-6, 68 (m, 2H) , 3,66 (t, 2H), 2,68-2,82 (m, 2H), 0,83 (s, 3H). EXEMPLO 12 3-Acetoxi-l7a- (5-acetoxi)-pent-l-inil-1, 3,5(10)-estratrieno-17β-ο1 (fórmula estrutural I', Z = Z' = -COCH3) .

Prepara-se uma solução de 0,030 g (0,085 mmol) de 17a-(5-hidroxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17p-diol (preparada conforme descrita no exemplo 11), em 1 mL de piridina, arrefece-se até 0°C e adiciona-se a 0,090 mL (0,95 mmol) de anidrido acético. Mantém-se a mistura sob agitação até a análise por TLC (éter etilico/éter de petróleo a 80/20) indicar o desaparecimento do produto de partida e o aparecimento de uma mancha com um Rf superior. Dilui-se a mistura de reacção com éter etílico e lava-se com ácido clorídrico 0,5 M. Extrai-se a fase aquosa com éter etílico; lava-se as fases orgânicas combinadas com uma solução saturada de cloreto de sódio e seca-se sobre sulfato de sódio anidro. Obtém-se 0,035 g de produto, 0 qual se purifica por cromatografia através de gel de sílica (proporção produto/sílica de 1/100), utilizando como eluente acetato de etilo/hexano a 40/60, para se obter 0,032 g (0,073 mmol) de 3-acetoxi-17a-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1, 3,5 (10)-estratrieno-17p-ol. Rendimento: 86%. 1H-NMR (CDCI3) : δ 7,32 (d, 1H) , 6, 76-6, 93 (m, 2H) , 4,20 (t, 2H), 2,80-2,95 (m, 2H), 0,87 (s, 3H). 42 EXEMPLO 13 17α- (5-Acetoxí) -pent-l-inil-1,3, 5 (10) -estratrieno-3,17$-diol (a) 3-Tetra-hidropiraniloxi-l 7a- (5-t-butildimetilsililoxi)-pent-l-inil-1, 3,5(10) -estratrieno-1 7β-ο1

Prepara-se uma solução de 16,8 g de 5-(t-butildimetil-sililoxi)-pent-l-ino, preparada tal como descrito na preparação II, em 240 mL de tetra-hidrofurano anidro, sob uma atmosfera de azoto, arrefece-se até -40°C, e adiciona-se, gota a gota e sob agitação, 26 mL de butil-litio (4,1 g). Mantém-se a mistura sob agitação durante 60 a 90 minutos, depois adiciona-se, gota a gota, uma solução de 15 g de éter tetra-hidropiranilico de estrona (preparado conforme descrito na preparação IV) em 150 mL de tetra-hidrofurano anidro. Mantém-se a mistura sob agitação durante cerca de 30 minutos a -40°C, depois ajusta-se a temperatura até 30°C, mantém-se sob agitação durante 6 horas a essa temperatura, depois interrompe-se o aquecimento, mantém-se a temperatura sob agitação à temperatura ambiente (20°C-30°C) e monitoriza-se por TLC (eluente de éter etílico/éter de petróleo a 1/1, revelador: ácido perclórico quente; Rf do produto de partida = 0,50, Rf do produto final = 0,70). De um modo geral, dá-se a reacção por completa decorridas 12 a 16 horas. Neutraliza-se a mistura de reacção com ácido clorídrico 0,2 N até pH 7, depois extrai-se a fase aquosa com acetato de etilo (2 x 75 mL), filtra-se a fase orgânica combinada através de Celite, lavando a massa de filtragem com acetato de etilo, e depois concentra-se sob pressão reduzida até se obter um resíduo oleoso. Obtém-se 31,2 g de um óleo amarelo que compreende 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5—t— 43 butildimetilsililoxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17p- ol. (b) 3-Tetra-hidropiraniloxi-lla-(5-hidroxi)-pent-l-inil-1, 3, 5 (10) -estratrieno-1 7β-ο1

Prepara-se uma solução de 31,2 g do óleo que contém 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-t-butildimetilsililoxi)-pent-l-inil-1, 3,5(10)-estratrieno-17p-ol, obtido no passo (a), em 150 mL de tetra-hidrofurano, arrefece-se até 0°C e adiciona-se, gota a gota, 103 mL de uma solução a 1 M de fluoreto de tetrabutil-amónio em tetra-hidrofurano, ao longo de 10 minutos e sob agitação. Depois de se agitar durante 10 minutos a 0°C, aquece-se a mistura até à temperatura ambiente (20°C-30°C), mantém-se sob agitação e monitoriza-se por TLC (eluente: éter etilico/éter de petróleo a 7/3, revelador: ácido perclórico quente; Rf do produto de partida = 0,85, Rf do produto final = 0,17). Dá-se a reacção por completa decorridas 2 horas. Adicionou-se, sob agitação, 300 mL de acetato de etilo e 300 mL de água, depois separa-se a fase aquosa e lava-se a fase orgânica com 250 mL de água. Extrai-se as fases aquosas combinadas com acetato de etilo (2 x 75 mL) e concentra-se a fase orgânica sob pressão reduzida para se obter 31 g de um óleo amarelo. Purifica-se o produto impuro por cromatografia em coluna através de gel de silica, efectuando a eluição com o seguinte gradiente de eluição: hexano/acetato de etilo a 8/2, hexano/acetato de etilo a 7/3, hexano/acetato de etilo a 6/4. Evapora-se as fracções combinadas que continham o produto de reacção para se obter 14,12 g de 3-tetra-hidro-ρίΜηί1οχί-17β- (5-hidroxi) -pent-l-inil-1, 3,5(10) -estratrieno-17β-ο1 com o aspecto de um sólido branco. 44 (c) 3-Tetra-hidropiraniloxi-l7α- (5-acetoxi)-pent-l-inil-1, 3, 5 (10) -estratrieno-17β-οΐ

Adiciona-se, gota a gota e ao longo de 20 minutos, 25,4 mL (27,6 g) de anidrido acético a uma solução de 14,12 g de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-hidroxi)-pent-l-inil-1, 3, 5(10)-estratrieno-17p-ol, obtido no passo (b), em 282 mL de piridina. Mantém-se a mistura sob agitação durante 2 horas a 0°C-5°C, depois aumenta-se a temperatura até 16°C e interrompe-se a agitação. A análise por TLC (eluente: éter etilico/éter de petróleo a 7/3, revelador: ácido perclórico quente; Rf do produto de partida = 0,17, Rf do produto final = 0,60) mostra que a reacção está completa decorridas 12 a 16 horas. Adiciona-se à mistura de reacção 300 mL de acetato de etilo sob agitação vigorosa, depois separa-se as fases, lava-se a fase orgânica com HC1 0,5 N até pH 7 e extrai-se a fase aquosa com acetato de etilo (2 x 1000 mL). Combina-se as fases orgânicas, filtra-se através de Celite e concentra-se para se obter 37,4 g de um óleo que contém 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17p-ol, o qual se irá utilizar no passo subsequente. (d) 1 7a- (5-acetoxi) -pent-l-inil-1,3, 5 (10) -estratríeno-3,1 7β-diol

Prepara-se uma mistura que contém 37,4 g de 3-tetra-hidropiraniloxi-17β-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)— estratrieni-17p-ol, obtido no passo (c), e uma solução de 50 g de ácido p-tolueno-sulfónico em 831 mL ode metanol, adiciona-se 831 mL de água sob agitação vigorosa e mantém-se sob agitação monitorizando a reacção por TLC (eluente: 45 éter etílico/éter de petróleo a 7/3, revelador: ácido perclórico quente; Rf do produto de partida = 0,60, Rf do produto final = 0,34). Decorridas 5 horas, dá-se a reacção por completa. Adiciona-se, gota a gota, à solução de reacção 1000 mL de acetato de etilo, separa-se a fase orgânica e extrai-se a fase aquosa com acetato de etilo (2 x 500 mL) . Filtra-se as fracções orgânicas combinadas através de Celite e concentra-se sob uma pressão hipobárica até se obter um óleo. Depois de se purificar por cromatografia em coluna (diâmetro da coluna: 6 cm; altura: 30 cm) através de 250 g de silica, utilizando como eluente hexano/acetato de etilo a 6/4, obtém-se 8 g de 17a-(5-acetoxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17p-diol com o aspecto de um sólido branco cristalino idêntico ao produto do exemplo 7. EXEMPLO 14 17a-(5-Propanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17$-diol

Submete-se o 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-hidroxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17p-ol, obtido no passo (b) do exemplo 13, aos passos (c') e (d'). (c) 3-Tetra-hidropiraniloxi-l7a- (5-propanoiloxioxi)-pent-l-inil-1, 3,5(10) -estratrieno-1 7β-οΐ

Adiciona-se, gota a gota, 15 ml de anidrido propiónico a uma mistura de 8,1 g de 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-hidroxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17p-ol e 200 mL de piridina, arrefecida até 0°C-2°C. Mantém-se a mistura sob agitação durante 6 horas, depois interrompe-se a agitação, arrefece-se a mistura até -16°C e mantém-se em 46 repouso a esta temperatura, monitorizando por TLC (eluente: éter etilico/éter de petróleo a 7/3, revelador: ácido perclórico quente; Rf do produto de partida = 0,17, Rf do produto final = 0,68). Numa experiência, decorridas 14 horas a -16°C dá-se a reacção por completa. Adiciona-se, sob agitação, à mistura 200 mL de diclorometano e uma solução saturada de NaHC03 até se dar a separação de fases. Separa-se a fase orgânica e extrai-se a fase aquosa com diclorometano (2 x 100 mL) . Lava-se as fases orgânicas combinadas com 100 mL de uma solução saturada de NaCl, filtra-se através de Celite e concentra-se para se obter um óleo. Obtém-se 10,4 de um óleo que contém 3-tetra-hidropiraniloxi-17a-(5-propanoiloxi)-pent-l-inil-1, 3,5(10) — θ3ίη3^ίβηο-17β-ο1, o qual se irá submeter ao passo subsequente. (d') 17a- (5-Propanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5 (10)-estratrieno- 3,17$-diol

Prepara-se uma mistura de 10,4 g do óleo que contém 17a-(5-propanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-17p-ol do passo (c') e 650 mL de ácido p-tolueno-sulfónico 0,0175 M em metanol, mantém-se sob agitação à temperatura ambiente (20°C-30°C) durante 8 horas e depois arrefece-se a mistura até -16°C. Decorridas 12 a 16 horas a esta temperatura sem agitação, aquece-se a mistura até à temperatura ambiente (20°C-30°C), trata-se com mais 1,1 g de ácido p-tolueno-sulfónico e mantém-se a esta temperatura, monitorizando por TLC (eluente: éter etilico/éter de petróleo a 7/3, revelador: ácido perclórico quente; Rf do produto de partida = 0,60, Rf do produto final = 0,62). Decorridas 4 horas, dá-se a reacção por completa. Adiciona- 47 se à mistura de reacção 650 mL de diclorometano e 650 mL de água, depois separa-se a fase orgânica e extrai-se a fase aquosa com diclorometano (2 x 100 mL). Efectua-se a descoloração das fases orgânicas combinadas com carvão, filtra-se através de Celite e concentra-se sob pressão reduzida para se obter 9,5 g de um resíduo oleoso, o qual se purifica por cromatografia em coluna (diâmetro da coluna: 5 cm, altura: 30 cm) com 200 g de sílica (eluente: hexano/acetato de etilo a 6:4). Assim, recupera-se 5,6 g de 17a-(5-propanoiloxi)-pent-l-inil-1,3,5(10)-estratrieno-3,17 β— diol com o aspecto de um sólido branco cristalino. 48

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pelo requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o IEP não assume nenhuma responsabilidade.

Patentes de invenção citadas na descrição • WO 9803180 A [0002] • US 3265718 A [0013] [0027] [0030] [0034] • US 3303205 A [0014] [0043]

Literatura citada na descrição, para além das patentes de invenção • G.S. Ashcroft et al. Nat. Med., 1997, vol. 3 (11), 1209-15 [0002] • G.S. Ashcroft et al. Am. J. Patholo., 1999, vol. 155, 1137-1146 [0002] • Y.M. Bello et al. JAMA, 2000, vol. 283, 716-718 [0003] • M.G. Shah et al. Am. J. Clin. Dermatol., 2001, vol. 2(3), 143-50 [0004] • G.J. Gendimenico et al. Arch. Dermatol. Research, 2002, vol. 294 5), 231-6 [0006] • G.S. Ashcroft et al. J. Clin. Investigation, 2003, vol. 111, 1309-18 [0007] • G.S. Ashcroft et al. Am. j. Clin. Dermatol., 2003, vol. 4(11), 737-43 [0008] • A. Mahmud et al. Skin Pharmacol. Physiol., 2005, vol. 18(1) [0011] 49 • R.P. Boivin et al. J. Med. Chem., 2000, vol. 43, 4465-78 [0015] • El Garrouj et al. J. Med. Chem., 1993, vol. 36, 2973-83 [0016] • T.W. Greene et al. Protecting groups in Organic

Synthesis. J. Wiley & Sons, 1999, 249-276 [0030] • J. Org. Chem., 1979, vol. 44, 1438 [0030] • J. Am. Chem. Soc., 1972, vol. 94, 6190 [0030] • J. Am. Chem. Soc., 1972, vol. 94, 1438 [0049] • T.W. Greene et al. Protecting groups in Organic

Synthesis. J. Wiley & Sons, 1999, 113-148 [0050] • J. Am Chem. Soc., 1972, vol. 94, 6190 [0053] • AM Brzozowski et al. Molecular basis of agonism and antagonism in the estrogen receptor. Nature, 1997, vol. 389, 753-758 [0077]

Claims (19)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Derivado de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17p-diol de fórmula estrutural I

em que o símbolo Q representa hidrogénio ou metilo, o símbolo Q' representa hidrogénio, metilo ou alcoxi inferior, o símbolo R representa hidrogénio ou acilo, o símbolo R' representa hidrogénio, alcanoílo inferior ou um radical constituído por um grupo alquilo inferior ou um grupo cicloalquilo (C5-C6) e o símbolo R" representa hidrogénio ou um grupo alcanoílo inferior, o símbolo Y representa um grupo etileno (-CH2-CH2-), um grupo etenileno (-CH=CH-) ou um grupo etinileno {-C=C~), em que as ligações duplas também podem estar presentes na posição 6, na posição 8, na posição 9(11) ou nas posições 6 e 8 do esteróide, em que o termo "alquilo inferior" designa um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada que possui entre 1 e 4 átomos de carbono; o termo "alcoxi inferior" designa um grupo (alquilo inferior)-O, em que o "alquilo inferior" possui as significações definidas antes e o termo "alcanoílo inferior" designa o radical acilo de um ácido monocarboxílico de cadeia linear ou ramificada que possui entre 1 e 5 átomos de carbono.

2. Derivado de 17a-(5-hidroxi-Cs-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17p-diol de fórmula estrutural I de acordo 2 com a reivindicação 1, em que o símbolo Y representa etinileno.

3. Derivado de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil)-1,3,5 (10)-estratrieno-3,17β-άίο1 de acordo com a reivindicação 2, em que os símbolos R, R' e R" representam hidrogénio e em que as ligações duplas também podem estar presentes na posição 6, na posição 8, na posição 9(11) ou nas posições 6 e 8 do esteróide.

4. Derivado de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil)-1,3,5 (10)-estratrieno-3,17p-diol de acordo com a reivindicação 2, em que os símbolos R e R" representam hidrogénio, o símbolo R' representa um grupo alquilo inferior ou cicloalquilo (Cs-C6) e em que as ligações duplas também podem estar presentes na posição 6, na posição 8, na posição 9(11) ou nas posições 6 e 8 do esteróide.

5. Derivado de 17a-(5-hidroxi-Cs-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17p-diol de acordo com a reivindicação 2, em que os símbolos R' e R" representam hidrogénio e o símbolo R representa um grupo Ac seleccionado entre um grupo acilo monocarboxílico insaturado que possui entre 3 e 5 átomos de carbono, grupos acilo monocarboxílicos saturados que possuem entre 1 e 5 átomos de carbono, em que os referidos grupos acilo são facultativamente substituídos com carboxi, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, fenilo, tolilo, xililo, metoxifenilo, fluorofenilo, clorofenilo, bromofenilo, nitrofenilo, dimetoxifenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, piridilo, cicloalquilo com 3 a 7 átomos de carbono, grupos haloalcanoílo que possuem entre 2 e 5 átomos de carbono; e 3 em que as ligações duplas também podem estar presentes na posição 6, na posição 8, na posição 9(11) ou nas posições 6 e 8 do esteróide.

6. Derivado de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1 de fórmula estrutural I de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo Y representa etinileno e os símbolos Q, Q' e R" representam hidrogénio.

7. Derivado de 17a-(5-hidroxi-C5-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1 de fórmula estrutural 1' de acordo com a reivindicação 6,

em que os símbolos Z e Z' representam hidrogénio ou alcanoílo inferior.

8. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é: 17a-(5-hidroxipentin-l-il)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1.

9. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é: 17a-(5-acetoxipentin-l-il)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-άίο1.

10. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é: 17a-(5-propanoiloxilpent-l-il)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17 β— diol. 4

11. Processo para a preparação dos compostos de fórmula estrutural 1' de acordo com a reivindicação 7, o qual consiste em: (a) tratar a estrona protegida em 3 de fórmula estrutural II'

em que o simbolo P° representa um grupo protector estável em condições alcalinas, com um derivado de 5-pentinol com um metal alcalino de fórmula estrutural III', M-OC- (CH2)2-OP' (III') em que o simbolo M representa um metal alcalino e o grupo P' representa um grupo protector estável em condições alcalinas, (b) submeter o composto resultante de fórmula estrutural I"

antes, a desprotecção total ou parcial e recuperação de um composto de fórmula estrutural I'a, I'b ou I'c

5 em que os grupos P° e P' possuem as significações definidas antes, (c) facultativamente, tratar o composto resultante de fórmula estrutural I'a, I'b ou I'c com um derivado reactivo de um ácido alcanóico Alq-OH, em que Alq representa um alcanoílo inferior, para se obter um composto de fórmula estrutural I'd, l'e ou I'f

em que os grupos P°, P' e Alq possuem as significações definidas antes; (d) facultativamente, remover o grupo protector P° ou P' dos compostos de fórmulas estruturais l'e e l'f para se obter o composto de fórmula estrutural I'g ou I'h

em que o símbolo Alq possui as significações definidas antes e (e) facultativamente, tratar o composto resultante de fórmula estrutural I'g ou I'h, em que o símbolo Alq possui as significações definidas antes, com um derivado reactivo de um ácido alcanóico, Alq'-OH, para se obter um diéster assimétrico de fórmula estrutural I'i ou 1' j 6

em que os símbolos Alq e Alq' representam grupos alcanoílo inferiores diferentes e em que o termo "alcanoílo inferior" possui as significações definidas na reivindicação 1.

12. Processo de acordo com a reivindicação 11, em que os grupos protectores estáveis em condições alcalinas P° e P' são seleccionados entre Si(Alq)3 e 2-tetra-hidropiranilo.

13. Processo de acordo com a reivindicação 12, em que cada grupo protector P° e P' é um grupo 2-tetra-hidropiranilo ou t-butildimetilsililo.

14. Processo de acordo com a reivindicação 11, em que o grupo P° é 2-tetra-hidropiranilo e o grupo P' é t-butildimetilsililo .

15. Composição farmacêutica que contém, enquanto ingrediente activo, um derivado de 17a-(5-hidroxi-Cs-hidrocarbil)-1,3,5(10)-estratrieno-3,17p-diol de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 10, misturado com um excipiente farmacêutico.

16. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, em que o ingrediente activo é formulado com excipientes para administração por via tópica. 7

17. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 16 que contém pelo menos um outro ingrediente activo.

18. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 17, em que o referido outro ingrediente activo é um agente antibiótico, antifúngico, antibacteriano ou anti-séptico.

19. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 18, em que o referido outro ingrediente activo é seleccionado entre o conjunto constituído por sulfato de neomicina, bacitracina-zinco e gluconato de cloro-hexidina.