PT1853254E - Moduladores de citoquina utilizando glicéridos cíclicos de ácidos gordos poliinsaturados essenciais - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "MODULADORES DE CITOQUINA UTILIZANDO GLICÉRIDOS CÍCLICOS DE ÁCIDOS GORDOS POLIINSATURADOS ESSENCIAIS" A presente invenção diz respeito à utilização de compostos de fórmula estrutural (I) para a preparação de um medicamento para o tratamento de doenças e distúrbios, nos quais as citoquinas se encontram num estado de desequilíbrio ou que sejam capazes de efectuar a modulação para proporcionar benefícios terapêuticos. Em particular, a invenção proporciona a utilização de compostos de fórmula estrutural (I) para a preparação de um medicamento para o tratamento de pacientes que necessitem de terapia para distúrbios, nos quais as citoquinas TGF-βΙ, TNF-α, il- 1β, IL4, IL5, IL6, IL8, IL10, IL13 e γ-IFN estejam desreguladas ou sejam capazes de efectuar a modulação para proporcionar benefícios terapêuticos.

Como doenças particulares passíveis de tratamento refere-se distúrbios, tais como anomalias do sistema imune, por exemplo, lúpus eritematoso sistémico (SLE), alergia, asma, doença de Crohn e artrite reumatóide, mas, particularmente, esclerose múltipla, e também doenças neurodegenerativas, tais como sequelas de AVC, traumatismo craniana, hemorragias e as anomalias crónicas das doenças de Alzheimer e Parkinson. Como outros distúrbios que podem ser pré-tratados profiláctica ou terapeuticamente refere-se as anomalias da doença cardíaca coronária (CHD) de crianças prematuras e sepsia.

Os pedidos de patente de invenção WO 2004/100943 e WO 2005/01863, que aguardam aprovação, da requerente, aqui 2 incorporados por referência, dizem respeito à utilização de óleos sintéticos, vegetais e de fungos para o tratamento de doenças neurodegenerativas e em particular de esclerose múltipla, AVC, lesões cerebrais, doença de Alzheimer e doença de Parkinson. No documento WO 2004/100943 encontram-se descritos óleos, os quais são caracterizados por possuírem percentagens elevadas do ácido gordo essencial ácido γ-linolénico (GLA) na posição sn-2 dos seus lípidos, tipicamente superiores a 40% do total de ácidos gordos em sn-2 do óleo. O documento WO 2005/018632 diz respeito a lipidos estruturados que possuem um resíduo de ácido gordo em sn-2 seleccionado entre ácido γ-linolénico (GLA), ácido di-homo-y-linolénico (DHGLA) e ácido araquinódico (AA).

Foi já descrito na literatura que os ácidos gordos essenciais (AGE) do padrão de insaturação n-3 e n-6 possuem efeitos benéficos para diversos distúrbios fisiológicos humanos, incluindo doenças auto-imunes (WO 02/02105) . Harbige (1998) Proc. Nut. Soc. 57, 555-562 descreve um suplemento de dieta com ácidos n-3 e n-6 em estados de doenças auto-imunes, tendo notado evidências particulares de benefícios de óleos ricos em ácidos γ-linolénico (GLA) e/ou linoleico (LA).

As citoquinas estão envolvidas na patogénese de MS, tendo diversos estudos demonstrado um aumento em citoquinas inflamatórias mielinotóxicas (TNF-a, IL-Ιβ e IFN-γ) que coincide com a fase de recaída da doença. Pelo contrário, os níveis da citoquina anti-inflamatória e imunossupressora, factor βΐ de crescimento de transformação (TGF-βΙ) aparentam sofrer uma redução durante a fase de recaída e um aumento quando o paciente entra em remissão. Assim, o 3 equilíbrio entre o TGF-βΙ biologicamente activo e o TNF-a, IL-Ιβ e lFN-γ pró-inflamatórios parece estar desregulado durante a recaída-remissão de MS.

Durante a fase de recuperação natural de EAE, as células T que segregam TGF-βΙ inibem as células efectoras de eae, o TGF-βΙ é expresso no SNC e, na protecção induzida por tolerância oral em EAE, o TGF-β e PGE2 são expressos no cérebro (Karpus e Swanborg (1991); Khoury et al (1992)). Harbige (1998) concluiu que os efeitos de ácido γ-linolénico de dieta sobre o EAE são mediados por meio de mecanismos do tipo Th3 que envolvem o TGF-β e, possivelmente, por meio da actividade anti-oxidante de superóxido de dismutase. 0 óleo de borragem (tipicamente, 20% a 23% de ácido γ-linolénico e 34% a 40% de ácido linoleico para um teor de 100% em ácido gordo) e o óleo fúngico de Mucor javanicus (ver a figura 1) tem demonstrado ser eficazes em modelos animais de EAE utilizados para identificar candidatos de MS, embora nunca tenham demonstrado ser significativamente eficazes na doença humana. Níveis elevados de óleos ricos em linoleico que contêm níveis reduzidos de ácido γ-linolénico (EPO: ácido linoleico:ácido γ-linolénico a 7:1) suprimiram parcialmente a incidência e a gravidade de EAE em ratos (Mertin e Stackpoole, 1978), ao passo que o estudo Bates Naudicelle referido antes provocou um agravamento dos pacientes. Apesar da utilização de óleo de borragem e de outros óleos que contêm GLA/LA, tais como o óleo de onagra por pacientes que padecem de esclerose múltipla ao longo dos últimos cerca de 30 anos, a maior parte dos pacientes não consegue recuperar da doença, não apresentando 4 melhorias significativas, mantendo-se a progressão da doença subjacente até à morte.

Foi já sugerida a utilização, inter alia, de óleo de borragem rico em ácido γ-linolénico e ácido linoleico como um meio para proporcionar a imuno-supressão em esclerose múltipla (US 4 058 594). A dose sugerida é de 2,4 gramas de óleo por dia, não sendo fornecidas quaisquer evidências reais de eficácia. Tal dose é bastante inferior à dose pequena de 5 g/dia, a qual demonstrou ser ineficaz in vivo em seres humanos, no estudo do documento WO 2004/100943. Há outros tratamentos imunosupressores mais dramáticos, incluindo os supressores e moduladores de células T, tais como ciclofosfamida, que também demonstraram ser eficazes em modelos de EAE, mas que quando utilizados para a doença de esclerose múltipla em seres humanos se verifica uma melhoria nos sintomas, embora a doença subjacente se mantenha em progressão. As células T produzem realmente citoquinas benéficas, tais como o TGF-βΙ, bem como outras prejudiciais para os seres humanos. David Baker do Institute of Neurology, UK, resumiu a disparidade entre o que é eficaz para a EAE e para a MS num documento intitulado "Everything stops EAE, nothing stops MS", a 10 de Maio de 2004 na reunião 'UK MS Frontiers' da 'UK MS Society'.

No estudo do documento W02004/100943 os presentes inventores Harbige e Leach e com o co-inventor Sharief, determinaram surpreendentemente que no que diz respeito a um tratamento com uma 'dose elevada' com óleos de triglicéridos que contêm niveis elevados de ácido γ-linolénico sn-2 (em que > 40% de resíduos em sn-2 são de ácido γ-linolénico) com um teor de ácidos gordos adequado, 5 são obtidos níveis importantes de melhoria praticamente para todos os sintomas de MS, ultrapassando claramente os obtidos pelo tratamento convencional com ouro. Este sucesso é particularmente surpreendente uma vez que a utilização anterior de outras preparações que continham ácido y-linolénico não obtiveram sucessos, tais como o estudo de Naudicelle.

No estudo do documento WO 2004/100943 foi demonstrado que ao longo de um período de 18 meses, os pacientes aos quais era administrada uma dose elevada (15 g/dia) de óleo de borragem com ácido γ-linolénico com elevado sn-2 apresentaram melhorias significativas (p<0,001) e notórias nos resultados de EDSS, uma taxa reduzida de recaída, alívio sintomático de espasticidade muscular sintomas sensoriais dolorosos e melhorias em determinações objectivas das funções cognitivas. As doses pequenas de 5 g/dia deste óleo de borragem não apresentaram efeitos.

Os pacientes aos quais é administrada a dose mais elevada deste óleo de borragem mantiveram os seus níveis de produção de células mononucleares no sangue periférico (PBMC) de TGF-βΙ durante o período do ensaio, as suas citoquinas TNF-α e IL-Ιβ foram significativa e notoriamente reduzidas (< 7 0 %)e mantiveram ou aumentaram as pbmc da membrana dos ácidos gordos omega-6 de cadeia longa, ácido di-homo-y-linolénico (DHLA) e ácido araquidónico (AA), ao contrário dos pacientes aos quais é administrado o placebo, que apresentaram um perda destes ácidos gordos no decurso do periodo do ensaio.

Assim, embora fosse esperado que a imuno-supressão reduzisse o aumento de lesões activas e neurodegeneração, o tratamento com óleo com GLA elevada em sn-2 foi dirigido, 6 aparentemente, à manutenção e/ou ao aumento de componentes lípidos importantes da membrana que são de outro modo perdidos especificamente na MS, sendo consistentes com um defeito metabólico, o qual não é eficazmente tratado de outro modo pelas terapias normalmente utilizadas. 0 facto de uma dose reduzida (5 g/dia) não apresentar qualquer efeito sobre tal, reforça tal conclusão.

Os inventores da presente invenção propõem-se agora demonstrar, à luz dos resultados obtidos com óleo de borragem com elevado teor de ácido γ-linolénico sn-2, que é efectivamente a presença de um resíduo de ácido sn-2-γ-linolénico, ácido di-homo-y-linolénico ou ácido araquidónico num monoglicérido, em particular num monoglicérido sn-2, ou um seu precursor metabólico, que confere eficácia ao tratamento de uma desregulação de citoquinas. Uma vez que os próprios glicéridos possuem cerca de três vezes o peso, e assim a dose, dos equivalentes monoglicéridos, determinou-se que é possível administrar ácidos gordos essenciais do tipo n-3, n-6 e n-9, em particular do tipo n-6, como precursores ou análogos metabólicos de monoglicéridos sn-2 e obter, mesmo assim, alterações benéficas nas citoquinas. Em particular, crê-se que estes compostos sejam mais estáveis do que os monoglicéridos menos densos.

Foi já descrito que o 2-araquidonilo-glicerol possui uma actividade na diminuição de doenças induzidas por TNF-a e por espécies com oxigénio reactivo (veja-se WO 01/97793); no entanto, os correspondentes compostos γ-linolenoílo e palmitoílo são referidos como sendo inactivos. Foi já descrito um lípido estruturado com sn-2-araquidonilo como 7 sendo activo na 'hipofunção cerebral', tal como em deficiências cognitivas médias (veja-se ep 1419768).

As vantagens da utilização de doses de monoglicéridos em vez de triglicéridos podem compensar, em parte, pelo possível aumento de instabilidade de determinadas formas quando comparadas com o grupo acilo saturado em sn-1, sn-3, no triglicérido EFA sn-2, exemplificado no documento PCT/GB2004/003524. Tal instabilidade pode ser provocada, v.g., por transesterificação e oxidação. Este problema pode ser resolvido por meio da produção do monoglicérido numa forma mais estável, v.g., um sólido ou semi-sólido em vez de um óleo líquido.

Os inventores da presente invenção proporcionaram agora compostos, novos e conhecidos, que podem ser precursores metabólicos do monoglicérido, conforme a seguir reivindicado, que são metabolizados para se obter essa forma in vivo ou são directamente activos, mas que resistem à transesterificação e outras degradações durante o armazenamento. Estudos preliminares efectuados pelos inventores, demonstraram que os compostos seleccionados para utilização de acordo com a presente invenção são mais resistentes à degradação por meio de algumas lipases de mamíferos do que os triglicéridos anteriormente utilizados com base em borragem, onagra e lípidos estruturados, e mais resistentes a rearranjos do que os monoglicéridos.

Em particular, estes compostos são gliceróis cíclicos que suportam ácidos gordos essenciais, em particular ácidos gordos n-3, n-6 e n-9 e em particular n-6, numa posição equivalente à posição sn-2 do glicerol. Os inventores determinaram que estes compostos são capazes de regular as citoquinas de um modo favorável à saúde o paciente, com base nos seus estudos clínicos anteriores com óleo de borragem e com trabalhos com lípidos estruturados in vivo e in vitro.

Os gliceróis cíclicos são conhecidos como uma classe, v.g., ver Chem Abstracts n° 65:8747b, e têm sido utilizados como intermediários para a síntese de monoacilglicéridos, v.g., ver Chemical & Pharmaceutical Bulletin (2000), 48(7) 903-907. Recentemente, no docmento US2005/0020679 é proposto que todos os membros desta classe que suportem um grupo acilo gordo polinsaturado, em particular um grupo araquidonilo, possuam utilidade como inibidores do transporte de anadamida, sendo farmacologicamente utilizáveis para o tratamento de dor, dor periférica, glaucoma, epilepsia, náuseas, inactividade provocada por SIDA, cancro, neurodegeneração, esclerose múltipla, doença de Parkinson, coreia de Huntington e doença de Alzheimer, aumento do apetite, redução da fertilidade, síndrome de Tourette e outros distúrbios das funções motoras, para neuroprotecção, vasodilatação periférica e supressão de memória.

Este documento e o seu antecessor W099/64389 (que diz respeito a analgesia) não proporcionaram quaisquer ensinamentos sobre os compostos particulares da presente invenção e referem que uma quantidade terapeuticamente eficaz de glicerol cíclico está compreendida entre 10 mg/dia e 1000 mg/dia. Os estudos dos inventores da presente invenção sobre os efeitos relativos em animais e em células permitiu-lhes concluir que tal dose seria ineficaz para as indicações sobre a regulação de citoquinas, aqui apresentada. Prevê-se que a dose eficaz em seres humanos seja superior a 1000 mg/dia e em particular esteja 9 compreendida entre 1 g e 10 g por dia. Mais preferencialmente, está compreendida entre 2 g/dia e 6 g/dia e ainda mais preferencialmente entre 2 g/dia e 4 g/dia.

Na ausência da regulação de citoquinas proporcionada por tais dosagens, não é possível alcançar o tratamento de doenças, tais como doenças desmielinizantes, esclerose múltipla, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, coreia de Huntington, traumas e apoplexia com vista à interrupção da destruição de tecidos por células imunes e por citoquinas. O mero aumento dos níveis de anandamida natural por meio do bloqueamento da reabsorção não pode proporcionar o alívio, no caso de a anandamida natural não estar presente numa quantidade eficaz, v.g., em células T e à volta de lesões do SNC.

De acordo com um primeiro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de fórmula estrutural I

P rL“0_ em que os símbolos R1 e R2, considerados em conjunto, formam um grupo -(CH2)n-CR4R5-(CH2)m- em que os símbolos nem são seleccionados independentemente entre os números inteiros 0, 1 ou 2, e os símbolos R4 e R5 são seleccionados independentemente entre H, alquilo (Ci-Cis) , alcoxi (Ci-Cis) , hidroxialquilo (Ci— Ci8), alcenilo (C2-C18) e arilo (C6-C18) ou aralquilo, e o símbolo R3 representa um grupo γ-linolenoílo ou γ-di-homolinolenoílo, 10 para o tratamento da desregulação de citoquinas ou para a modulação de distúrbios associados a citoquinas.

De preferência, os símbolos R1 e R2 são seleccionados entre H ou um grupo -CR4R5, em que os símbolos R4 e R5 são seleccionados independentemente entre H e alquilo(Ci-C6) . De um modo mais vantajoso, os símbolos R1 e R2 formam um grupo —CH2— ou -CH2CH3-. São particularmente preferidos os compostos aciloxi-1,3-dioxanos gordos essenciais em 5, mais preferencialmente os compostos aciloxi-1,3-dioxanos gordos n-3 ou n-β e ainda mais preferencialmente 5-y-linolenoiloxi-, 5-di-homo-y-linolenoiloxi- e 5-araquinoiloxi-l,3-dioxanos. São ainda mais preferidos os compostos 5-y-linolerioloxi- e 5-di-homo-y-linolenoiloxi-l, 3-dioxanos. São particularmente tratáveis as anomalias provocadas pela desregulação de citoquinas do sistema imune, por exemplo, doenças tais como lúpus eritematoso sistémico (SLE) . Alergia, asma, doença de Crohn e artrite reumatóide, e particularmente esclerose múltipla, bem como doenças neurodegenerativas, tais como sequelas de apoplexia, lesões cerebrais, hemorragias e as anomalias crónicas da doença de Alzheimer e da doença de Parkinson. Como outros distúrbios que é possível pré-tratar profiláctica ou terapeuticamente refere-se as anomalias da doença cardíaca coronária (CHD) de crianças prematuras e sepsia.

Como doenças neurodegenerativas tratadas de um modo particularmente vantajoso refere-se as doenças que envolvem a desmielinação. O método da presente invenção é especificamente dirigido para a interrupção da neurodegeneração subjacente e do restauro das funções neuronais. Em particular, o método normaliza 11 preferencialmente a composição da membrana neuronal e restaura as proporções entre TGF-βΙ/ΤΝΕα de PBMC saudáveis, estimuladas ou libertadas espontaneamente, ou as proporções de TGF-βΙ com outras citoquinas libertadas por PBMC. De um modo ainda mais vantajoso, o método interrompe a neurodegeneração em esclerose múltipla de todos os tipos e em particular a redução de recaidas de MS progressiva crónica e progressiva primária, e restaura, em parte ou completamente, a função neuronal, tal como determinada, v.g.r análise de IRM ou TAC ou pelos resultados de EDSS. Este método também pode ser utilizado para o tratamento de uma deficiência cerebral após apoplexia, lesão cerebral e hemorragia intracraniana, caso exista desmielinação ou lesões neuronais. Constitui uma outra aplicação o tratamento de outras doenças com desmielinação crónica, tais como na doença de Alzheimer e na doença de Parkinson.

De preferência, o composto da presente invenção é administrado durante um tempo e numa dose suficientes para manter ou para aumentar os niveis de TGF-βΙ do paciente para niveis terapêuticos. A expressão "niveis terapêuticos" pretende designar niveis pelo menos consistentes com os dos sujeitos saudáveis. De preferência, a dose é tal que produza uma proporção entre TGF-pl/TNF-a libertada espontaneamente a partir de células mononuclares de sangue periférico (PBMC), isoladas a partir do sangue de um paciente, após 18 meses de administração de doses diárias, compreendida entre 0,4 e 3,0, pelo menos de 0,5, mais preferencialmente pelo menos de 0,75 e ainda mais preferencialmente pelo menos de 1. De preferência, a dose é tal que produza uma proporção entre TGF^l/IL-^ no sangue de um paciente, após 18 meses de administração de doses 12 diárias, pelo menos de 0,5, mais preferencialmente pelo menos de 0,75 e ainda mais preferencialmente pelo menos de 1. De preferência, os níveis referidos são produzidos decorridos 12 meses e mais preferencialmente decorridos 6 meses. A presente invenção proporciona ainda o composto de fórmula estrutural I para o tratamento de um paciente que necessite de re-mielinação numa doença desmielinizante. A quantidade de composto administrada diariamente irá estar compreendida entre 0,5 e 30 gramas, por via oral, mais preferencialmente entre 0,75 e 20 gramas, ainda mais preferencialmente entre 1 e 18 gramas e tipicamente entre 2 e 5 gramas. Esta dose poderá ser administrada sob a forma de uma dose individual ou em duas ou mais doses que totalizem em conjunto esta quantidade por dia.

No caso de o radical em sn-2 ser um resíduo ácido γ-linolénico, então a dose poderá ser mais próxima do limite superior deste intervalo, embora esteja preferencialmente compreendida entre 1 e 10 gramas/dia e mais preferencialmente entre 2 e 6 gramas/dia. No caso do radical em sn-2 ser um resíduo ácido di-homo-y-linolénico, então a dose pode ser inferior, ao passo que no caso do radical em sn-2 ser um resíduo ácido araquidónico, então a eficácia é superior, embora seja preciso cuidado na administração da dose devido à possibilidade de ocorrem efeitos secundários indesejados para níveis mais elevados e à natureza pró-inflamatória deste pufa.

De acordo com um segundo aspecto, a presente invenção proporciona um novo composto de fórmula estrutural I em que os símbolos R1 e R2, considerados em conjunto, formam um grupo (CH2)n-CR4R5-(CH2)m- em que os símbolos nem representam números inteiros seleccionados independentemente entre 0, 1 ou 2, e os símbolos R4 e R5 são seleccionados independentemente entre H, alquilo (Ci-Ci8) , alcoxi (Ci-Ci8), hidroxialquilo (Ci-Cis), alcenilo (C2-Ci8) e arilo (C6-Ci8) ou aralquilo, e o símbolo R3 representa um grupo γ-linolenoílo ou γ-di-homolinolenoílo.

De preferência, os símbolos R1 e R2 formam um grupo -CR4R5, em que os símbolos R4 e R5 são seleccionados independentemente entre H e alquilo (Ci—Ce) . De um modo mais vantajoso, os símbolos R1 e R2 formam um grupo -CH2- ou -ch2ch3-.

Assim, são preferidos os compostos de fórmula estrutural II

0 em que os símbolos R1 e R2 são seleccionados independentemente entre hidrogénio e alquilo(Ci-C6) . São particularmente preferidos os compostos 5-aciloxi-1,3-dioxanos, mais preferencialmente acil-1,3-dioxanos gordos n-3 ou aciloxi-1,3-dioxanos gordos n-6 e mais preferencialmente 5-y-linolenoiloxi e 5-di-homo-y-linolenoiloxi. 14

De acordo com um terceiro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a síntese de um composto de fórmula estrutural II, o qual compreende a reacção de um 5-hidroxi-1,3-dioxano com ácido γ-linolénico, ácido γ-di-homo-linolénico ou com os seus halogenetos ácidos.

De acordo com um quarto aspecto, a presente invenção proporciona composições utilizáveis no método da presente invenção, as quais compreendem os compostos de fórmula estrutural I em conjunto com um veículo, revestimento, cápsula, diluente e/ou conservante farmacêutica e nutricionalmente aceitável. Os compostos utilizáveis na presente invenção podem ser administrados com quaisquer veículos convencionais conhecidos na especialidade de farmácia . De um modo mais conveniente, são administrados sob a forma de óleos puros ou como uma mistura com alimentos, sob a forma de cápsulas que contêm esses óleos, ou então sob formas revestidas entericamente. Há outras formas que são do conhecimento dos especialistas na matéria, ou pode ser consultadas na obra Remington Pharmaceutical Sciences, 19a Edição. 0 termo "conservante" designa um anti-oxidante ou um inibidor de transesterificação. É particularmente preferível que a composição não contenham vitamina E ou então que os níveis de vitamina E sejam apenas de 0,05 mg/g ou inferiores, v.g., entre 0,005 e 0,05 mg/g.

De acordo com um quinto aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica para a regulação do sistema imune, em particular por meio da modulação das citoquinas TGF-βΙ, TNF-α, IL4, IL5, IL6, IL8, IL10, IL13 e/ou γ-IFN, a qual compreende um composto de fórmula 15 estrutural I, conforme definido no método de tratamento de acordo com a invenção. São particularmente preferidos medicamentos para a interrupção e inversão da neurodegeneração na esclerose múltipla de todos os tipos, mas em particular a redução de recaídas de esclerose múltipla progressiva primária e progressiva crónica, e restauro, em parte ou completamente, da função de integridade neuronal, tal como determinada, v.g., por meio de análise de IRM ou TAC ou pelos resultados de EDSS. Tal como referido antes, também é possível tratar outras doenças que respondam a TGF-βΙ- Em particular, é possível tratar a desmielinação.

Será evidente para os especialistas na matéria que é possível combinar outros agentes benéficos com os compostos utilizáveis na presente invenção ou que façam parte, de qualquer outro modo, do regime de tratamento. Estes poderão ser bloqueadores dos canais de iões, v.g., bloqueadores dos canais de sódio, interferões (α, β, γ), supressores de células T, esteróides ou outros agentes paliativos. Será também evidente que no caso de as respostas imune e inflamatória estarem a ser moduladas, então tais combinações terão de ser cuidadosamente preparadas, devido à natureza complexas destes sistemas. No entanto, devido ao potencial para uma resposta retardada dos presentes compostos, poderá ser benéfica a utilização de agentes com uma acção mais rápida nos primeiros meses de tratamento até se normalizarem os níveis de citoquina, desde que o tratamento suplementar não impeça este processo de normalização. A síntese dos compostos e das composições utilizáveis na presente invenção encontra-se descrita infra, bem como a 16 síntese de exemplos de comparação. Apesar dos exemplos apresentarem compostos em que o símbolo R3 representa γ-linolenoílo, os compostos de di-homo-y-linolenoílo e araquidonoílo e os análoqos n-3 e n9 destes compostos são facilmente sintetizados por meio de materiais de partida análogos. A presente invenção irá agora ser descrita a título exemplificativo por referência aos seguintes quadros, exemplos e figuras não limitativos. Com base nestes, serão evidentes para os especialistas na matéria outras variantes que pertençam ao âmbito da invenção.

QUADROS

FIGURAS

Figura 1: mostra a produção espontânea de citoquina em células mononucleares de sangue periférico em placebo e com ácido γ-linolénico sn-2 elevado, óleo de ensaio do documento WO 2004/100943 para o tratamento de pacientes com MS humana durante 18 meses. A coluna da esquerda representa o placebo e a da direita os pacientes tratados.

Figura 2: mostra o efeito do placebo e da dose reduzida (5 g/dia) de óleo de borragem GLA sn2 elevado num paciente com MS humana nos resultados EDSS, em comparação com os da dose elevada (15 g/dia), apresentado como um histograma com os meses de tratamento no eixo dos xx.

Figura 3: mostra o efeito do placebo, da dose reduzida e da dose elevada de óleo de borragem GLA sn-2 elevado na taxa média de recaída (%) em pacientes com MS humana, sob a forma de um histograma com os meses no eixo do xx. 17

Figura 4: mostra a síntese de glicerol-formal de 2-GLA (também designado por: 5-y-linolenoiloxi-l,3-dioxano e 5-(1, 3-dioxanil)-metil-y-linolenato).

EXEMPLOS

Antecedentes

Ensaio com óleo de borragem de sn-2 elevado (WO 2004/100943) isolamento e cultura de pbmc

Diluiu-se sangue total heparinizado com um volume idêntico da solução de sal em equilíbrio de Hank (Sigma, UK) e colocou-se em camadas o sangue diluído resultante em 'Lymphoprep' (Nycomed, Oslo, Noruega). Após a centrifugação por densidades a 800g durante 30 minutos, removeu-se as PBMC da interface e diluiu-se com solução de Hank. Lavou-se então as células duas vezes por centrifugação durante 10 minutos a 250g. Colocou-se novamente em suspensão o granulado final resultante em meio de cultura, constituído por meio RPMI-1640 (Sigma, UK) com um suplemento de L-glutamina 2 mM, penicilina 100U, estreptomicina 100 pg (Sigma, UK) e plasma autólogo a 10%. Adicionou-se 2 x 106 PBMC por mL, viabilidade >95%, conforme determinado por exclusão do azul de tripano, a tubos de cultura de tecidos (Bibby Sterilin Ltd, Stone, UK) e manteve-se a incubar durante 24 horas a 37°C com 5% de C02. Determinou-se a concentração de antigénio, a densidade de células e o tempo de cultura em experiências cinéticas anteriores para se determinar a produção máxima de citoquina (dados não apresentados). Também foram preparadas preparações 18 convencionais de citospina para as contagens diferenciais subsequentes. Após a incubação, removeu-se as células a partir da cultura por centrifugação a 250g durante 10 minutos, removeu-se então os sobrenadantes resultantes, separou-se em aliquotas e armazenou-se a -70°C.

Preparação das amostras de plasma

Centrifugou-se 10 mL de sangue heparinizado a 250g durante 10 minutos. Removeu-se então a camada de plasma resultante, separou-se em aliquotas e armazenou-se a -70°C.

Detecção de citoquinas pró-inflamatórias

Detectou-se a presença de TNF-a, IL-Ιβ e IFN-yem sobrenadantes da cultura de células utilizando pares de anticorpos, comercialmente disponíveis, que permitem a detecção de citoquina num ensaio ELISA (R&D systems Ltd, Abingdon, UK). A sensibilidade do ensaio ELISA para o TNF-a e IFN-γ foram de 15,6-1000 pg/mL e 3,9-250 pg/mL para IL-1β.

Detecção de TGF-βΙ biologicamente activo

Detectou-se o TGF-βΙ biologicamente activo em sobrenadantes da cultura de células e no plasma utilizando o sistema ELISA Emax, disponível comercialmente, com uma sensibilidade de 15,6-1000 pg/mL (Promega, Southampton, UK) .

Análise estatística

Comparou-se as diferenças na produção de citoquinas utilizando as análises do teste de t-Student e o teste U de 19

Mann-Whitney, sendo consideradas significativas no caso de os valores de p serem inferiores a 0,05. RESULTADOS Ver a figura 1

Procedimento experimental

Os dados dos espectros de 13C NMR de protão desacoplado com NOE suprimido foram recolhidos a 21°C com uma sonda de banda larga de 5 mm num espectrómetro Joel 500 MHz, a funcionar a 125, 728 MHz. O desacoplamento de Waltz foi o modo de desacoplamento seleccionado e foi fechado apenas durante os 14,98 segundos de tempo de aquisição. O atraso de relaxamento foi definido a 30 segundos e o ângulo de pulso foi de 90°. O intervalo espectral utilizado foi cerca de 35 p.p.m. (desde 173,5 até 172,6 p.p.m.) com um valor inicial de 170 p.p.m.. Os espectros tinham como referência interna CDC13 a 77,0 p.p.m.. Tipicamente, o número aproximado de pesquisas para um sinal-ruído adequado está compreendido entre 300 e 1200 pesquisas, dependendo da concentração e da pureza da amostra. O tempo de aquisição total para os ensaios está compreendido entre 2 e 8 horas, v.q., 1272 pesquisas; dados 65,536. Quando possível, foram utilizadas concentrações até 20% para reduzir o tempo de aquisição. Os desvios químicos apresentados variam com a concentração da solução. 20 Síntese dos compostos utilizáveis na presente invenção EXEMPLO 1 la) Preparação de 2-octa-6Z,9Z,12Z-trienoato de 1,3-0-benzilideno-glicerol. (Intermediário e composto conhecido utilizável na invenção, em que o símbolo R4 representa H e o símbolo R5 representa benzilo).

Adicionou-se cloreto de oxaloilo (7,8 mL, 11,3 g, 0,089 mol, 0,95 equivalente), ao longo de 2 a 3 minutos, a uma solução agitada de ácido γ-linolénico (GLA95, 16,7 g, 0,060 mol, 0,64 equivalente, Scotia) em diclorometano (100 mL), sob uma atmosfera de N2. Agitou-se a mistura de um dia para o outro à temperatura ambiente e depois concentrou-se sob uma pressão hipobárica até se obter um óleo brônzeo. Adicionou-se, ao longo de cerca de 10 minutos, este cloreto de γ-linolenoilo impuro a uma solução agitada de 1,3-0-benzilideno-glicerol (13,0 g, 0,094 mol, 1 equivalente), piridina anidra (30 mL, 29,3 g, 0,37 mol, 4 equivalentes) e diclorometano (DCM, 120 mL), a 5°C, e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas. Filtrou-se a mistura de reacção e depois lavou-se o filtrado com DCM. Lavou-se então o filtrado combinado e as águas-mãe com água (2 x 20 mL), secou-se o extracto de DCM sobre MgS04 e concentrou-se sob uma pressão hipobárica para se obter o produto impuro com o aspecto de um óleo brônzeo (pureza >90%, por HPLC) . Purificou-se o óleo por cromatografia em coluna através de gel de sílica (300 g) . Efectuou-se a eluição com DCM para se obter o produto com o aspecto de um óleo amarelo (19,2 g (73%), pureza de 96,3%, por HPLC). 21 EXEMPLO 2 2-GLA-glicerol-formal (também designado por: 5-γ- linolenoiloxi-1,3-dioxano e 5-(1,3-dioxanil)-metil-Ύ^ linolenato)

Para o propósito deste exemplo, a síntese deste éster foi efectuada por meio de acilação da mistura de glicerol-formal, disponível comercialmente, utilizando cloreto de γ-linolenoílo. Utilizando este método, dá-se a formação de uma mistura de dois produtos, os quais foram separados por cromatografia em coluna. Efectua-se a eluição do produto secundário indesejado a partir da coluna em primeiro lugar; a subsequente eluição proporciona o acetal-éster desejado. É um óleo amarelo à temperatura ambiente e parece apresentar propriedades de estabilidade idênticas ao GLA, estável ao ar à temperatura ambiente durante períodos curtos (dias), sendo melhor armazenado durante períodos longos num local arrefecido sob uma atmosfera de azoto.

Ensaio

Adicionou-se cloreto de oxalilo (2,6 ml, 3,78 g, 30 mmol, 1,5 equiv.) a uma solução de ácido γ-linolénico (GLA, 5,56 g, 20 mmol, 1,0 equiv.) em diclorometano (DCM, 40 mL). Agitou-se a solução resultante, sob uma atmosfera de N2, à temperatura ambiente de um dia para o outro e depois concentrou-se sob uma pressão hipobárica. Adicionou-se, gota a gota e ao longo de 10 minutos, o cloreto de γ-linolenoílo oleoso residual a uma solução agitada de glicerol-formal (2,50 g, 24 mmol, 1,2 equiv.) em DCM (40 mL), que continha piridina (10 mL, 9,78 g, 0,12 mol, 6 22 equiv.), a 5°C. Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 2 horas, removeu-se por filtração o cloridrato de piridina precipitado e lavou-se o filtrado com água (2x). Após secagem sobre MgS04, removeu-se o solvente sob uma pressão hipobárica para se obter um óleo brônzeo claro (6,5 g) . Submeteu-se este material a cromatografia através de sílica (60 g). Efectuou-se a eluição com hexano-éter (a 94:6) para se obter 5,2 g de um óleo constituído por dois componentes (TLC, HPLC). Separou-se estes componentes numa segunda coluna de sílica (60 g) . Efectuou-se a eluição com hexano-éter (a 98:2 e depois a 95:5) para se obter 4-(γ-linolenoiloximetil)-1,3-dioxolano com o aspecto de um óleo amarelo (1,2 g, 98% por HPLC). δΗ (500 MHz, CDC13) 0,89 (3H, t, J= 7,0 Hz, CH3) , 1,24-1,45 (8H, m complexo, 4 x CH2), 1,65 (2H, p, J = 7,5 Hz5 CH2-C- CO), 2,08 (4H, m, 2 x CH2C=C) , 2,35 (2H3 1, J = 7,5 Hz, CH2CO), 2,80 (4H, t, J = 6,0 Hz, 2 x C=CCH2C=C) , 3,67 (1H, m, OCHAHB) , 3,97 (1H, m, OCHAHB) , 4,14 (2H5 m, OCHAHB) , 4,26 (1H, p, J= 3,5 Hz, CHO), 4,89 e 5,02 (2H, 2 x s, 0CH20) , 5,36 (6H, m, 3 x CH=CH) . 5C (126,8 MHz, CDC13) 14,09 (CH3) , 22, 60, 24,51, 25, 65, 26, 85, 27,23, 29, 16, 29, 34, 31, 53, 33, 97, 63, 93 (CH20) , 66, 72 (CH20) , 73, 31 (CHO), 95,44

(OCO), [127,60, 128,04, 128,32, 128,41, 129,50, 130,41, C olefinico], 173,26 (carbonilo).

Nova eluição proporcionou 5-(γ-linolenoiloxi)-1,3-dioxano com o aspecto de um óleo amarelo (1,6 g, 97,8%, por HPLC). δΗ (500 MHz, CDC13) 0,89 (3H, t, J= 7,0 Hz, CH3) , 1,24-1, 46 (8H, m complexo, 4 x CH2), 1,67 (2H, p, J = 7,5

Hz, CH2-C-CO) , 2,05 (4H, m, 2 x CH2C=C) , 2,40 (2H, t, J = 7,5 Hz, CH2CO) , 2,81 (4H, t, J = 6,0 Hz, 2 x C=CCH2C=C) , 3,91 (2H, m, OCH2), 3,99 (2H, m, OCH2) , 4,73 (1H, p, j= 3,5 23

Hz, CHO) , 4,80 (1H, d, J = 6,0 Hz, OCHaHbO) , 4,93 (1H, d, J = 6,0 Hz, OCHaHbO) , 5,37 (6H, m, 3 x CH=CH) . õc (126,8 MHz, CDC13) 14,08 (CH3), 22,59, 24, 53, 25, 65, 26, 86, 27,22, 29, 06, 29, 34, 31,52, 34,12, 65,54 (CHO), 68,55 (CH20), 93, 66 (OCO), [127,60, 128,05, 128,32, 128,42, 129,51, 130,42, C olefínico], 173,12 (carbonilo) . Foram obtidas alguns fracções que continham os dois compostos durante a cromatografia, podendo ser recicladas caso seja necessário obter mais material. O esquema de reacção para esta síntese é apresentado nas figuras seguintes. EXEMPLO 3

Produção de composições enriquecidas em monoqlicérido a partir de lípido estruturado com GCC sintético. Composto modelo para metabolito de compostos da invenção. 1. MG 2-GLA (monoglicérido de ácido γ-linolénico) a partir de GCG (glicerol-1,3-didecanoato-2-y-linolenoato)

Adicionou-se resina acrílica de lipase proveniente de Candida antarctica (Sigma, Novozyme, 0,1 g) a uma solução de CGC (0,25 g) em etanol (0,75 mL) . Agitou-se a mistura a 35°C-40°C e monitorizou-se por HPLC. Decorridas 3 horas, removeu-se a resina por filtração e lavou-se com etanol. Concentrou-se o filtrado e as águas-mãe de lavagem sob uma pressão hipobárica. A análise por HPLC do óleo residual indicou a formação de dois produtos principais. Separou-se estes produtos por cromatografia através de sílica-ácido bórico. Efectuou-se a eluição com diclorometano (DCM) para se obter um óleo (fracção A, 160 mg) . Efectuou-se nova eluição com DCM-MeOH (a 9:1) para se obter um óleo (fracção 24 Β, 80 mg) . A comparação por HPLC com materiais autênticos indicou que a fracção B era o produto desejado, isto é, MG 2-GLA (também presente isómero 1 com um rearranjo de 8%) . Concluiu-se (por comparação por HPLC e NMR) que o componente principal (>90%) da fracção era decanoato de etilo. Concluiu-se (por comparação por HPLC e NMR) que o componente secundário era γ-linolenoato de etilo. È esperada a formação destes ésteres sob as condições de reacção a partir dos ácidos correspondentes (C e GLA) e de etanol. ESTUDOS BIOLÓGICOS EXEMPLO 4

Efectuou-se a solubilização de monoglicérido sn-2 utilizando álcool etílico ou DMSO para o processamento in vivo sobre células mononucleares de sangue periférico (PBMC) humano. A tendência para precipitar a pH ácido pode ter sido a causa da regurgitação de material sólido de alguns animais, após alimentação por sonda esofágica, o que sugere que pode ser preferível uma formulação revestida entericamente. Alimentou-se murganhos da estirpe SJL com GLA sn-2 do exemplo 1 em três dosagens (50, 125 e 250 pL) durante sete dias, recorrendo a uma sonda esofágica. Os murganhos aos quais foi administrada as doses elevadas foram mais propensos a regurgitação. Decorridos os sete dias, os animais foram sacrificados e o cérebro, o fígado e o baço foram removidos - o fígado e o cérebro foram congelados a -70°C-, as células mononucleares foram isoladas a partir dos baços por separação com crivos e centrifugação por densidade em 'Lymphoprep' (Sigma Chemical 25

Co) e foram desenvolvidas em cultura 37°C numa atmosfera com 5% de CO2 num tubo de cultura, com uma densidade de células de 1 x IO6 células/mL em meio RPMI 1640 em 5% de soro fetal de vitelo (FCS) . Manteve-se as células em cultura na presença ou na ausência de 1 pg/mL ou 25 pg/mL de concanavalina A (Con A), aproximadamente durante 20 horas, removeu-se os sobrenadantes e armazenou-se a -70°C até serem necessários. Determinou-se o TGF-βΙ de murganho nos sobrenadantes utilizando um ensaio ELISA (Promega, Madison WI), comercialmente disponível. QUADRO 1

Produção (pg/mL) de TGF-βΙ estimulada (Con A) e não estimulada a partir de PBMC do baço em resposta a alimentação com monoglicérido sn-2-Y-linolenoíl-glicerol do exemplo 3 Con A (pg/mL) 0 1 25 Monoglicérido 50 pg 377 409 480 Controlo 209 228 393 Alteração (%) 80 79 42

Estes resultados mostram que o metabolito do composto de γ-linolenoílo de fórmula estrutural do exemplo 2 é activo no aumento de citoquina TGF-βΙ de um modo idêntico ao óleo de borragem do ensaio. Tal é consistente com a modulação de todas as citoquinas previamente apresentadas, moduladas deste modo. 26 EXEMPLO 5

Actividade in vivo de monoglicérido de formal (composto do exemplo 2) A murganhos da estirpe C57/BL foram administradas por via oral doses com MG formal 2 GLA em duas doses com 50 e 150 uL, ao longo de oito dias. O composto foi fornecido em 8 tubos separados, os quais foram armazenados a 4°C antes da sua administração e aquecidos até 25°C antes da sua utilização. Após os oito dias, os animais foram sacrificados e o cérebro, o fígado e o baço foram removidos. Congelou-se o fígado e o cérebro a -70°C e isolou-se as células mononucleares a partir dos baços por separação com crivos e centrifugação por densidades sobre 'Lymphoprep' (Sigma Chemical Co) e manteve-se em cultura a 37°C numa atmosfera com 5% de CO2, em tubos de cultura com 5 mL, com uma densidade de células de 2 x 106 células/mL em meio de RPMI 1640 em 5% de soro fetal de vitelo (FCS) . Manteve-se as células em cultura na presença ou na ausência de 1 pg/mL ou 25 pg/mL de concanavalina A (Con A), aproximadamente durante 20 horas, removeu-se os sobrenadantes e armazenou-se a -70°C até serem necessários. Determinou-se 0 TGF-βΙ de murganho nos sobrenadantes utilizando um sistema ELISA (Promega, Madison WI), comercialmente disponível.

Resultados A concanavalina A não estimulou significativamente a produção de TGF-βΙ neste estudo. Assim, os dados foram combinados para a análise estatística (n = 9/grupo). Os 27 dados foram analisados utilizando o programa 'Graphpad instat' . QUADRO 2

Produção de TGFP de células mononucleares de baço (pq/mL) Controlo 77,9 ± 4,1 GLA 2-MG-F 50 uL 90,9 ± 5,2 P = 0,0702 GLA 2-MG-F 150 uL 158,6 ± 7,5 P < 0,0001 r 103% [Os dados foram analisados utilizando o teste t desemparelhado; os dados são apresentados em média ± EPM]

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Chem. Abstr., 115:278299 Molecular Species of Enzymically-synthesized Polyunsaturated Fatty acid-rich Triglycerides. J.-W. Liu, S. DeMichele, M. Bergana, E.. Bobik, Jr., C. Hastilow, Lu-Te Chuang, P. Mukerji e J.-S. Huang., J. Am. 36

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REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pelo requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o IEP não assume nenhuma responsabilidade.

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Hastilow; Lu-Te Chuang; P. Mukerji; J.-S. Huang. j. Am. Oil

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Claims (5)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula estrutural I R1—0- O"“R R“Q em que os símbolos R1 e R2, considerados em conjunto, formam um grupo -(CH2)n-CR1R2-(CH2)m- em que os símbolos nem são números inteiros seleccionados independentemente a partir de 0, 1 ou 2; os símbolos R1 e R2 são seleccionados independentemente entre H, alquilo (Ci-Cie), alcoxi (Ci-Ci8), hidroxialquilo (Ci— Ci8), alcenilo (C2-Ci8) e arilo (C6-Ci8) ou aralquilo, e o símbolo R3 representa um grupo γ-linolenoílo ou γ-di- homolinolenoílo, para o tratamento da desregulação de citoquinas ou para a modulação de distúrbios associados a citoquinas.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou com a reivindicação 2, em que os símbolos R1 e R2 formam um grupo -CR1R2, em que os símbolos R1 e R2 são seleccionados independentemente entre H e alquilo(C8—C6) . 1 reivindicação 2, em que os símbolos R1 e R2 formam um grupo 2 -CH2- ou -ch2ch2-. 3 Composto de acordo com a reivindicação 1 ou com a 2

3 6 9 12 15 18 3/3 FIGURA 4 2-y-iinolenoíl-glicerol-formal (2 GLA MGF) 38-}

Glicerol formai GLA-O ) USAMOftant

4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de o composto satisfazer a fórmula estrutural 2rWc / O

G“R3 em que os símbolos R1 e R2 são seleccionados independentemente entre hidrogénio e alquilo (Ci-Cê) .

5. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o composto de fórmula estrutural I é seleccionado entre 5-γ-linolenoiloxi-1,3-dioxanos e 5-di-homo-y-linolenoiloxi-l,3-dioxanos.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que as citoquinas moduladas são uma ou várias citoquinas seleccionados entre TGF-βΙ, TNF-a, IL-Ιβ, IL4, IL5, IL6, IL8, IL10, IL13 e γ-IFN.

7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o tratamento é para as anomalias do sistema imune.

8. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento é para uma patologia seleccionada entre o conjunto constituído por lúpus eritematoso sistémico (SLE), alergia, asma, doença de Crohn e artrite reumatóide, esclerose múltipla, doenças neurodegenerativas, sequelas de AVC, traumatismo craniano, hemorragias e anomalias crónicas da doença de Alzheimer e da doença de Parkinson, anomalias 3 da doença cardíaca coronária (CHD) de crianças prematuras e sepsia.

9. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento é para doenças neurodegenerativas.

10. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento é para a interrupção ou para a reversão da neurodegeneração em esclerose múltipla.

11. Composto de acordo com a reivindicação 10, em que a doença neurodegenerativa implica a desmielinação.

12. Composto de acordo com a reivindicação 10, em que o tratamento interrompe especificamente a neurodegeneração subjacente e restaura a função neuronal.

13. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento é para a normalização da composição da membrana neuronal no que diz respeito ao teor nos lípidos de ácido γ-linolénico, ácido di-homo-y-linolénico e ácido araquidónico.

14. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento é para restaurar para valores saudáveis as proporções entre TGF-βΙ/ΤΝΕα, conforme determinada a partir da libertação espontânea da libertação de células mononucleares de sangue periférico.

15. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento é para a esclerose múltipla recidiva-remitente, 4 esclerose múltipla progressiva primária e esclerose múltipla progressiva crónica.

16. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento é para uma deficiência cerebral após AVC, lesão cerebral e hemorragia intracraniana, doença de Alzheimer ou doença de Parkinson, em que ocorre desmielinação ou lesão neuronal.

17. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento consiste na administração do composto durante um período e numa dose suficientes para manter ou elevar ou níveis de TGF-βΙ do paciente para níveis terapêuticos.

18. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento consiste na administração do composto durante um período e numa dose suficientes para manter ou elevar os níveis de TGF-βΙ do paciente para uma proporção entre TGF-βΙ/TNF-a libertada espontaneamente pelas células mononucleares de sangue periférico, isoladas a partir do sangue do paciente, após 18 meses da administração diária da dose, compreendida entre 0,4 e 3,0.

19. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento consiste na administração do composto numa dose que produza uma proporção entre ΤΰΡ-βΙ/ΙΙ-Ιβ em PBMC, isoladas a partir de sangue de um paciente, após 18 meses da administração diária da dose, pelo menos de 0,75.

20. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento consiste na administração do composto numa 5 quantidade compreendida entre 0,5 e 30 gramas, tipicamente entre 3 e 5 gramas, por dia.

21. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, em que o tratamento consiste na administração do composto numa dose compreendida entre 1 e 10 gramas/dia.

22. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento consiste na administração do composto numa dose compreendida entre 2 e 10 gramas/dia.

23. Composto de fórmula estrutural I R1—0™~ *0~~R R2““0“ em que os símbolos R1 e R2, considerados em conjunto, formam um grupo -(CH2)n-CR4R5-(CH2)m- em que os símbolos nem são números inteiros seleccionados independentemente a partir de 0, 1 ou 2, e os símbolos R4 e R5 são seleccionados independentemente entre H, alquilo (C2—Ci8) , alcoxi (C2—Ci8) , hidroxialquilo (C2-Ci8), alcenilo (C2-Ci8) e arilo (C6—Ci8) ou aralquilo, e o símbolo R3 representa um grupo γ-linolenoílo ou γ-di-homolinolenoílo.

24. Composto de acordo com a reivindicação 23, em que os símbolos R1 e R2 formam um grupo -CR4R5, em que os símbolos R4 e R5 são seleccionados independentemente entre H e alquilo (C2—C6) . 6

25. Composto de acordo com a reivindicação 23 ou com a reivindicação 24, em que os símbolos R1 e R2 formam um grupo -CH2- ou -CH2CH2-.

26. Composto de acordo com a reivindicação 23, o qual é um 5-aciloxi-2,3-dioxano.

27. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 26, o qual é um 5-y-linoleniloxi-l,3-dioxano ou um 5-di-homo-y-linoleniloxi-l,3-dioxano.

28. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 27 para utilização terapêutica.

29. Composição que compreende um composto de fórmula estrutural I de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 28, em conjunto com um veículo, revestimento, cápsula, diluente e/ou conservante farmacêutica e nutricionalmente aceitável.

30. Composição de acordo com a reivindicação 29, que compreende um conservante que é um anti-oxidante ou um inibidor de transesterificação.

31. Composição de acordo com a reivindicação 30 que compreende 0,05 mg/g ou menos de vitamina E. 1/3 FIG. 1 Produção de citoquinas em células mononucleares de sangue periférico em placebo e em óleo tratado em pacientes com esclerose múltipla ao fim de 18 meses Mi ρ<α.οε TÊB1 TNFa ?<o.325

QPlacêbo β§ Tratado 2/3 FIGURA 2 E FIGURA 3 Taxa média de recaída (%) Resultados EDSS médios

Π Placebo Dose reduzida S Dose elevada 9 12 IS 18

5 0^0 i 5-y~ linolenoiloxi-l,3-(tLoxajio í&vivo

GLA MjLAMG