PT1735274E - Inibidores não peptídicos de metaloproteinases da matriz - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "INIBIDORES NÃO PEPTÍDICOS DE METALOPROTEINASES DA MATRIZ"

ANTECEDENTES

As metaloproteinases da matriz ("MMP") são uma classe de enzimas endopeptidases dependentes de zinco envolvidas na degradação e reparação dos principais componentes da matriz extracelular e tecido conjuntivo. As MMP podem ser encontradas em vários tipos de células que residem ou estão associadas aos tecidos conjuntivos, tais como fibroblastos, monócitos, macrófagos, células endoteliais e, também, células tumorais invasivas ou metastáticas. As MMP são segregadas a partir de células como proenzimas latentes e são activadas por clivagem dependente de Zn da ptécnica N-terminal da proteína. Quando as MMP activas são estimuladas por factores de crescimento e citocinas no ambiente local dos tecidos, podem degradar componentes proteicos da matriz extracelular e tecido conjuntivo, tais como colagénio, proteoglicanos, fibronectina e laminina. Ver H. Birkedal-Hansen, Crit. Rev. Oral. Biol. Med., 1993, 4, 197-250.

Actualmente, sabe-se que há catorze MMP diferentes. Estas enzimas podem ser classificadas em várias categorias principais de acordo com as suas especificidades para os substratos. Por exemplo, a MMP-1, a MMP-8 e a MMP-13 são classificadas como colagenases. A MMP-3 e a MMP-11 são classificadas como estromalisinas. A MMP-2 e a MMP-9 são classificadas como colagenases de Tipo IV/gelatinases. 1

As MMP têm interesse significativo porque foram implicadas numa grande variedade de estados fisiológicos e patológicos. Alguns exemplos de patologias mediadas por MMP são o crescimento tumoral, osteoartrite, artrite reumatóide, artrite séptica, restenose, fibrose, osteopenias mediadas por MMP, doenças inflamatórias do sistema nervoso central, reprodução, morfogéneses de tecidos, angiogénese envelhecimento da pele, ulceração da córnea, cicatrização anormal de feridas, doença óssea, proteinúria, doença aneurismática da aorta, perda de cartilagem degenerativa após lesão traumática de articulações, doenças desmielinizantes do sistema nervoso, cirrose hepática, doença glomerular do rim, ruptura prematura de membranas fetais, doença inflamatória do intestino, doença periodontal, degeneração macular relacionada com a idade, retinopatia diabética, vitrorretinopatia proliferativa, retinopatia da prematuridade, inflamação ocular, ceratocone, sindrome de Sjõgren, miopia, tumores oculares, angiogénese/neovascularização ocular e rejeição de enxerto corneano. Ver M. Cockett et al., Biochem. Soc. Symp., 1998, 63, 295-313; D. Keiner et al., Can. Chemo. Pharm., 1999, 43, 42-51; D. Keiner, Câncer Metastasis Rev., 1990, 9, 289-303; J. MacDougall et al., Mol. Med. Today, 2000, 64, 149-156; J. MacDougall et al., Câncer Metastasis Rev., 1995, 14, 351-362; S. Curren et al. eur. J. Câncer, 2000, 36, 1621-1630.

Uma área particular de investigação que tem recebido muita atenção é o envolvimento das MMP com o cancro e com o crescimento e propagação de tumores. De facto, a propagação metastática do cancro através da degradação proteolítica da biomatriz hospedeira coloca um dos maiores desafios no tratamento do cancro. Foram acumuladas provas consideráveis que 2 indicam o envolvimento das MMP em geral e das gelatinases em particular, no crescimento e invasão tumoral local e na disseminação metastática de cancro a sítios disseminados. Por exemplo, sabe-se que o nível de expressão de MMP-2 e MMP-9 está aumentado em certos eventos de progressão tumoral. Estas enzimas degradam o colagénio de Tipo IV, o principal componente das membranas basais e desnaturam o colagénio (gelatina), levando a metástase tumoral. Além disso, sabe-se que a ruptura de membranas vasculares, constituídas sobretudo por colagénio de Tipo iv, por MMP-2 e MMP-9 desempenha um papel crítico na metástase tumoral.

Dado o envolvimento que as MMP têm numa tão grande variedade de estados fisiológicos e patológicos especialmente cancro e artrite, os inibidores sintéticos destas enzimas são considerados como alvos atraentes na investigação para descoberta de fármacos. Ver J. B. Summers et al., Ann. Rep. Med. Chem. , 1998, 33, 131-140; A. H. Davidson et al. , Chem. Ind., 1997, 258-261; J. C. Spurlino, Em "Structure-Based Drug Design,"

Veerapandian ed ., Mareei Dekker, Inc., N.Y., 1997, 171-189; R. P. Beckett et al., Drug Dlsc. Today, 1996, 1, 16-26. Essas actividades de investigação resultaram no desenvolvimento de vários inibidores de MMP peptidílicos de espectro largo e não peptidílicos parcialmente selectivos como potenciais agentes anticancerígenos e anti-artríticos. Ver P. D. Brown, Med. Oncology, 1997, 14, 1-10; P. D. Brown, APMIS, 1999, 107, 174- 180; P. D. Brown expert Opin. Invest. Drugs, 2000, 9, 2167-2177; J. Freskos et al., Biorg. Med. Chem. Lett., 1999, 9, 943-948; L. J. MacPherson et al., J. Med. Chem., 1997, 40, 2525-2532; M.

Cheng et al., J. Med. Chem., 2000, 43, 369-380. Contudo, os resultados actuais de ensaios pré-clínicos e clínicos de inibidores de MMP têm sido desanimadores, sobretudo devido a 3 fraca biodisponibilidade, fraca selectividade e efeitos secundários indesejados, tais como toxicidade para os tecidos e até a promoção de metástase hepática. Ver "MMP," Park W & Mecham R., AP, NY, 1998, pp. 1-14, 85-113, 115-149; M. Michaelides et al.r Curr. Pharma. Design, 1999, 5, 787-819; E. Heath et al., Drugs, 2000, 59, 1043-1055; L. Seymour, Câncer Treat. Rev., 1999, 25, 301-312; K. Woessner, Ann. NY Aca. Sei., 1999, 878, 388-403; J. Skiles et al., Ann. Rep. Med. Chem., 2000, 35, 167-176; M. Gowravaram et al., J. Med. Chem., 1995, 38, 2570-2581; M. Gowravaram et al., Biorg. Med. Chem . Lett ., 1995, 5 , 337-342; R. Greenwald et al., Curr. Opin. Ther . Patents, 1995, 4, 7-16; D. Levy et al., J. Med. Chem., 1998 , 41, 199-223; A. Kruger et al., Câncer Res., 2001, 61, 1272- 1275 . Portanto, à luz da complexidade clinica associada aos inibidores de mmp actuais, há actualmente necessidade de novos inibidores potentes que sejam direccionados mais selectivamente para MMP. O documento WO 00/44711 descreve ácidos de hidroxamidas de estrutura definida que são úteis no tratamento de estados patológicos mediados por TNF-α. Nenhum dos compostos utilizados em Dl tem uma estrutura como divulgado na presente patente. Além disso, os documentos WO 97/44315 e WO 00/63165 descrevem derivados de ácidos de bifenilsulfonamido e 4-Fenoxibenzenossulfonamido hidroxamidas que são úteis no tratamento de cancro e artrite que, contudo, têm uma estrutura diferente da dos compostos da presente patente.

SUMÁRIO

De acordo com os objectivos dos materiais, composiçoes e métodos divulgados, tal como aqui concretizados e genericamente 4 divulgados, num aspecto, a matéria divulgada refere-se a um composto que tem a seguinte fórmula I:

metoxilo; em que Y = 0, S ou CH2; íGHs&rs!

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Noutro aspecto, a matéria divulgada refere-se à utilização dos compostos aqui divulgados no fabrico de uma composição farmacêutica para modulação de uma metaloproteinase da matriz.

Noutro aspecto, a matéria divulgada refere-se a um método para utilização do composto da reivindicação 1, compreendendo: administração de uma quantidade eficaz para modulação da metástase tumoral de, pelo menos, um composto da reivindicação 1 a uma célula in vitro. 5

Ainda noutro aspecto, a matéria divulgada refere-se à utilização dos compostos aqui divulgados no fabrico de um medicamento para modulação da metástase tumoral.

Noutro aspecto, a matéria divulgada refere-se à utilização de um composto aqui divulgado no fabrico de um medicamento para tratamento do cancro.

Ainda noutro aspecto, a matéria divulgada refere-se à utilização de um composto aqui divulgado no fabrico de um medicamento para prevenção de cancro num indivíduo.

Noutro aspecto, a matéria divulgada refere-se à utilização de um composto aqui divulgado no fabrico de um medicamento para tratamento de artrite.

Ainda noutro aspecto, a matéria divulgada refere-se a moduladores selectivos de metaloproteinases da matriz e inibidores selectivos de metaloproteinases. Também são aqui divulgados moduladores de metástase cancerígena e doenças como artrite. Além disso, são divulgados processos para a produção e utilização desses compostos.

As vantagens adicionais serão apresentadas em ptécnica na descrição que se segue e em ptécnica serão evidentes com base na descrição, ou podem ser apreendidas pela prática dos aspectos divulgados adiante. As vantagens divulgadas a seguir serão realizadas e concretizadas por meio dos elementos e combinações especificamente assinalados nas reivindicações anexas. Entender-se-á que a descrição geral anterior e a descrição pormenorizada seguinte são apenas exemplificativas e explicativas e que não são restritivas. 6

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Os desenhos anexos, que são incorporados e constituem ptécnica desta descrição, ilustram vários aspectos divulgados adiante. A Figura IA é um gráfico que mostra a % de inibição de invasão tumoral para várias concentrações de composto 2c no bioensaio da invasão tumoral de Amgel. A Figura 1B é um zimógrafo de gelatina que mostra a inibição da actividade de mmp-2 e mmp-9 com o composto 2c.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA

Os materiais, compostos, composições, utilizações e métodos divulgados podem ser mais facilmente compreendidos por referência à seguinte descrição pormenorizada de aspectos específicos dos materiais e métodos e Exemplos ai incluídos e à Figura e à descrição anterior e seguinte.

Antes de os presentes materiais, compostos, composições, utilizações e/ou métodos serem divulgados e descritos entender-se-á que os aspectos divulgados adiante não estão limitados a métodos sintéticos específicos ou reagentes específicos, dado que estes, é claro, podem variar. Também se entenderá que a terminologia aqui utilizada é para efeitos da descrição de aspectos específicos apenas e não pretende ser limitativa. 7

Descreve-se materiais, compostos, composições, utilizações e componentes que podem ser utilizados para, podem ser utilizados em conjunção com, podem ser utilizados na preparação para, ou são produtos do método e composições divulgadas. Estes e outros materiais são aqui divulgados e entender-se-á que quando são divulgadas combinações, subconjuntos, interacções, grupos etc., destes materiais embora a referência específica a cada uma de várias combinações e permutações individuais e colectivas destes compostos possa não estar explicitamente divulgada, cada um deles está especificamente aqui contemplado e divulgado. Por exemplo, se um composto que tem uma dada fórmula for divulgado e discutido e foram discutidas várias modificações que podem ser feitas em vários dos grupos R da fórmula, toda e qualquer combinação e permutação do composto e as modificações nos grupos R que são possíveis estão especificamente contempladas salvo indicação específica em contrário. Assim, se for divulgada uma classe de substituintes A, B e C, bem como uma classe de substituintes D e e F e for divulgado um exemplo de uma molécula de combinação, A-D então mesmo se cada uma não estiver individualmente divulgada, cada uma delas está contemplada individualmente e colectivamente. Assim, neste exemplo, cada uma das combinações A-E, A-F, B-D, B-E, B-F, C-D, C-E e C-F está especif icamente contemplada e deve ser considerada divulgada a partir da descrição de A, B e C; D e e F; e a combinação exemplificativa A-D. Analogamente, qualquer subconjunto ou sua combinação também está especificamente contemplada e divulgada. Assim, por exemplo, o subgrupo de A-E, B-F e C-E estão especificamente contemplados e devem ser consideradas divulgadas a partir da descrição de A, B e C; D e e F; e da combinação exemplificativa A-D. Este conceito aplica-se a todos os aspectos desta descrição incluindo, mas não limitados 8 a passos de processo de preparação e utilização das composições divulgadas. Assim, se há uma variedade de passos adicionais que podem ser realizados entende-se que cada um destes passos adicionais pode ser realizado com qualquer forma de realização especifica ou combinações de formas de realização dos métodos divulgados e que cada uma dessas combinações está especificamente contemplada e deve ser considerada como divulgada.

Definições

Nesta descrição e nas reivindicações que se seguem, vai ser feita referência a vários termos que vão ser definidos para terem os seguintes significados:

Como utilizadas na descrição e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma" e "o", "a" incluem as formas plurais salvo se o contexto claramente determinar o contrário. Assim, por exemplo, a referência a "um composto" inclui misturas de compostos; a referência a "um substituinte arilo" inclui misturas de dois ou mais desses substituintes arilo e semelhantes. "Opcional" ou "opcionalmente" significa que o evento ou circunstância subsequentemente divulgado pode ou não ocorrer e que essa descrição inclui casos em que o evento ou circunstância ocorre e casos em que não ocorre. Por exemplo, a frase "grupo arilo opcionalmente substituído" significa que o grupo arilo pode estar, ou pode não estar, substituído e que a descrição inclui tanto os grupos arilo não substituídos como os grupos atilo em que há substituição. 9

As gamas podem ser aqui expressas como de "cerca de" um valor específico e/ou a "cerca de" outro valor específico. Quando uma dessas gamas é expressa, outro aspecto inclui desde um valor específico e/ou até ao outro valor específico. Analogamente, quando os valores são expressos como aproximações, por utilização do antecendente "cerca de" entender-se-á que o valor específico constitui outro aspecto. Entender-se-á ainda que os pontos finais de cada uma das gamas são significativos em relação ao outro ponto final e independentemente do outro ponto final.

As referências na descrição e reivindicações anexas a ptécnicas em peso, de um elemento ou componente específico numa composição ou artigo, denotam a relação em peso entre o elemento ou componente e quaisquer outros elementos ou componentes da composição ou artigo para o qual é expressa uma ptécnica em peso. Assim, num composto contendo 2 ptécnicas em peso de componente X e 5 ptécnicas em peso de componente Y, X e Y estão presentes numa proporção em peso de 2:5 e estão presentes nessa proporção independentemente de no composto estarem contidos componentes adicionais.

Uma percentagem em peso de um componente, salvo indicação específica em contrário, baseia-se no peso total da formulação ou composição em que o componente está incluído. 0 termo "actividade", como aqui utilizado, refere-se a uma actividade biológica. 0 termo "actividade farmacológica", como aqui utilizado, refere-se às propriedades físicas e/ou químicas inerentes de um composto, molécula, modulador ou inibidor. Estas propriedades incluem, mas não estão limitadas a eficácia, semi- 10 vida, solubilidade estabilidade, afinidade e outras propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas.

Os termos "peptídico" e "peptidilico", como aqui utilizados, respectivamente, referem-se a uma classe de compostos e unidades quimicas compostas por aminoácidos liqados quimicamente uns aos outros. Em geral, os aminoácidos estão ligados uns aos outros quimicamente através de ligações amida (CONH). "Peptídico" e "peptidilico" como aqui utilizados incluem, oligómeros de aminoácidos e péptidos pequenos e grandes, incluindo polipéptidos e proteínas. Os termos "não peptídico" e "não peptidilico" referem-se a uma classe de compostos que não são constituídos por aminoácidos ligados quimicamente uns aos outros através de uma ligação amida.

Como aqui utilizado, o termo "substituído" é contemplado como incluindo todos os substituintes permissíveis de compostos orgânicos. Num aspecto amplo, os substituintes permissíveis incluem substituintes acíclicos e cíclicos, ramificados e não ramificados, carbocíclicos e heterocíclicos e aromáticos e não aromáticos de compostos orgânicos. Substituintes ilustrativos incluem, por exemplo, os divulgados adiante. Os substituintes permissíveis podem ser um ou mais e iguais ou diferentes para compostos orgânicos apropriados. Para efeitos desta descrição, os heteroátomos, tais como azoto, podem ter substituintes hidrogénio e/ou quaisquer substituintes permissíveis de compostos orgânicos aqui divulgados que satisfaçam as valências dos heteroátomos. Esta descrição não pretende ser limitada por qualquer forma pelos substituintes permissíveis de compostos orgânicos. Além disso, os termos "substituição" ou "substituição com" incluem a condição implícita de que essa substituição está de acordo com a valência permitida do átomo substituído e o 11 substituinte e que a substituição resulta num composto estável e. g., um composto que não sofre transformação espontaneamente, tal como por rearranjo, ciclização eliminação etc. 0 termo "alquilo", como aqui utilizado, é um qrupo hidrocarboneto saturado ramificado ou não ramificado de 1 a 24 átomos de carbono, tal como metilo etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, decilo, tetradecilo, hexadecilo eicosilo, tetracosilo e semelhantes. 0 grupo alquilo também pode estar substituído ou não substituído. 0 grupo alquilo pode estar substituído com um ou mais grupos incluindo, mas não limitado a, alquilo, alquilo halogenado, alcoxilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, aldeído, amino, ácido carboxílico, éster, halogeneto, hidroxamato, hidroxilo, cetona, nitro, sililo, sulfo-oxo, sulfonilo, sulfona, sulfóxido ou tiol, como divulgado adiante. 0 termo "alquilo halogenado" refere-se especificamente a um grupo alquilo que está substituído com um mais de halogéneo e. g., flúor, cloro, bromo ou iodo. 0 termo "alcoxilo" como aqui utilizado é um grupo alquilo ligado através de uma só ligação éter terminal; isto é, um grupo "alcoxilo" pode ser definido como -0A em que A é alquilo como definido acima. 0 termo "alcenilo", como aqui utilizado, é um grupo hidrocarboneto de 2 a 24 átomos de carbono com uma fórmula estrutural que contem, pelo menos, uma ligação dupla carbono-carbono. Estruturas assimétricas, tais como (AB)C=C(CD) pretendem incluir ambos os isómeros E e Z. Isto pode ser inferido em fórmulas estruturais aqui apresentadas em que está 12 presente um alceno assimétrico, ou pode ser explicitamente indicado pelo símbolo de ligação C= =C. 0 termo "alcinilo", como aqui utilizado é um grupo hidrocarboneto de 2 a 24 átomos de carbono com uma fórmula estrutural contendo, pelo menos, uma ligação tripla carbono- carbono. 0 termo "arilo", como aqui utilizado, é qualquer grupo aromático à base de carbono incluindo, mas não limitado a, benzeno, naftaleno, fenilo, bifenilo, fenoxibenzeno etc. 0 termo "aromático" também inclui "heteroarilo", que é definido como um grupo aromático que tem, pelo menos, um heteroátomo incorporado no anel do grupo aromático. Exemplos de heteroátomos incluem, mas não estão limitados a azoto, oxigénio enxofre e fósforo. 0 grupo arilo pode estar substituído ou não substituído. 0 grupo arilo pode estar substituído com um ou mais grupos incluindo, mas não limitado a, alquilo, alquilo halogenado, alcoxilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, aldeído, amino, ácido carboxílico, éster, halogeneto, hidroxamato, hidroxilo, cetona, nitro, sililo, sulfo-oxo, sulfonilo, sulfona, sulfóxido, ou tiol como aqui divulgado. 0 termo "biarilo" é um tipo específico de grupo arilo e está incluído na definição de arilo. Biarilo refere-se a dois grupos arilo que estão ligados um ao outro através de uma estrutura em anel condensado, como no naftaleno ou estão ligados através de uma ou mais ligações carbono-carbono, como no bifenilo. 0 termo "cicloalquilo", como aqui utilizado, é um anel à base de carbono não aromático composto por, pelo menos, três átomos de carbono. Exemplos de grupos cicloalquilo incluem, mas não estão limitados a ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, 13 ciclo-hexilo etc. 0 "heterocicloalquilo" é um grupo cicloalquilo como definido acima em que pelo menos um dos átomos de carbono do anel está substituído com um heteroátomo tal como, mas não limitado a azoto, oxigénio enxofre, ou fósforo. 0 grupo cicloalquilo e o grupo heterocicloalquilo podem estar substituído ou não substituído. 0 grupo cicloalquilo e o grupo heterocicloalquilo podem estar substituídos com um ou mais grupos incluindo, mas não limitados a alquilo, alcoxilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, aldeído, amino, ácido carboxílico, éster, halogeneto, hidroxamato, hidroxilo, cetona, nitro, sililo, sulfo-oxo, sulfonilo, sulfona, sulfóxido, ou tiol tal como aqui divulgado. 0 termo "cicloalcenilo", como aqui utilizado, é um anel à base de carbono não aromático composto por, pelo menos, três átomos de carbono e contém, pelo menos, uma ligação dupla carbono-carbono, C=C. Exemplos de grupos cicloalcenilo incluem, mas não estão limitados a ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclopentadienilo, ciclo-hexenilo etc. 0 termo "heterocicloalcenilo" é um grupo cicloalcenilo como definido acima em que pelo menos um dos átomos de carbono do anel está substituído com um heteroátomo tal como, mas não limitado a azoto, oxigénio enxofre, ou fósforo. 0 grupo cicloalcenilo e o grupo heterocicloalcenilo podem estar substituídos ou não substituídos. 0 grupo cicloalcenilo e o grupo heterocicloalcenilo pode estar substituído com um ou mais grupos incluindo, mas não limitados a alquilo, alcoxilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, aldeído, amino, ácido carboxílico, éster, halogeneto, hidroxamato, hidroxilo, cetona, nitro, sililo, sulfo-oxo, sulfonilo, sulfona, sulfóxido, ou tiol como aqui divulgado. 14 0 termo "aldeído", como aqui utilizado, é representado pela fórmula -C(0)H.

Os termos "amina" ou "amino", como aqui utilizados, são representados pela fórmula NAA2A2 em que A, A1 e A2 podem ser, independentemente, hidrogénio, um grupo alquilo, alquilo halogenado, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, heterocicloalquilo, ou heterocicloalcenilo como divulgado acima. 0 termo "ácido carboxilico", como aqui utilizado, é representado pela fórmula -C(0)0H. 0 termo "éster", como aqui utilizado, é representado pela fórmula -0C(0)A ou -C(0)0A em que A pode ser um grupo alquilo, alquilo halogenado, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, heterocicloalquilo ou heterocicloalcenilo divulgado acima. 0 termo "éter", como aqui utilizado, é representado pela fórmula AOA1 em que A e A1 podem ser, independentemente, um grupo alquilo, alquilo halogenado, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, heterocicloalquilo ou heterocicloalcenilo divulgado acima. 0 termo "cetona", como aqui utilizado, é representado pela fórmula Α0(0)Α2 em que A e A1 podem ser, independentemente, um grupo alquilo, alquilo halogenado, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, heterocicloalquilo ou heterocicloalcenilo divulgado acima. 15 0 termo "halogeneto", como aqui utilizado, refere-se aos halogéneos flúor, cloro, bromo e iodo. 0 termo "hidroxamato", como aqui utilizado, é representado pela fórmula -C(0)NH0H. 0 termo "hidroxilo", como aqui utilizado, é representado pela fórmula -OH. 0 termo "nitro", como aqui utilizado, é representado pela fórmula -N02. 0 termo "sililo", como aqui utilizado, é representado pela fórmula -SiAA^A2 em que A, A1 e A2 podem ser, independentemente, hidrogénio, um grupo alquilo, alquilo halogenado, alcoxilo, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, heterocicloalquilo, ou heterocicloalcenilo divulgado acima. 0 termo "sulfo-oxo", como aqui utilizado, é representado pela fórmulas -S(0)A, -S(0)2A, -0S(0)2A ou -0S(0)20A em que A pode ser hidrogénio, um grupo alquilo, alquilo halogenado, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, heterocicloalquilo ou heterocicloalcenilo divulgado acima. 0 termo "sulfonilo" é aqui utilizado para referir o grupo sulfo-oxo representado pela fórmula -S(0)2A em que A pode ser hidrogénio, um grupo alquilo, alquilo halogenado, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, heterocicloalquilo ou heterocicloalcenilo divulgado acima. 16 0 termo "sulfonilamino" ou "sulfonamida", como aqui utilizado, é representado pela fórmula -S(0)2NH-. 0 termo "sulfona", como aqui utilizado, é representado pela fórmula AS(0)2A1 em que A e A1 pode ser, independentemente, um grupo alquilo, alquilo halogenado, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, heterocicloalquilo ou heterocicloalcenilo divulgado acima. 0 termo "sulfóxido", como aqui utilizado, é representado pela fórmula ASfCOA1 em que A e A1 podem ser, independentemente, um grupo alquilo, alquilo halogenado, alcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, heterocicloalquilo ou heterocicloalcenilo divulgado acima. 0 termo "tiol", como aqui utilizado, é representado pela fórmula -SH. "X", "Y", "R", "R1" e "R2", como aqui utilizados podem, independentemente, ser um ou mais dos grupos listados acima. Por exemplo, se R for um grupo alquilo de cadeia linear, um dos átomos de hidrogénio do grupo alquilo pode estar opcionalmente substituído com um grupo hidroxilo, um grupo alcoxi etc. Dependendo dos grupos que são seleccionados, um primeiro grupo pode ser incorporado num segundo grupo ou, alternativamente, o primeiro grupo pode estar pendente (i. e., ligado) do segundo grupo. Por exemplo, com a frase "um grupo alquilo compreendendo um grupo sulfonilo", o grupo sulfonilo pode estar incorporado na cadeia principal do grupo alquilo. Alternativamente, o grupo sulfonilo pode estar ligado à cadeia principal do grupo alquilo. A natureza do(s) grupo(s) que (é)são seleccionado(s) vai 17 determinar se o primeiro grupo está incorporado ou ligado ao segundo grupo.

Como aqui utilizado, por "indivíduo" significa-se uma entidade individual. Assim, o "indivíduo" pode incluir mamíferos (e. g., primata, humano etc.), animais domesticados (e. g., gatos, cães etc.), gado (e. g., vacas, cavalos, porcos, ovelhas, cabras etc.), animais de laboratório (e. g., murganho, coelho, rato, cobaio etc.) e aves. Num aspecto, "indivíduo" é um mamífero. Noutro aspecto, "indivíduo" é um ser humano. A referência aqui a "célula" pode incluir uma célula in vitro. Alternativamente, a referência a uma "célula" pode incluir uma célula in vivo, que pode ser encontrada num indivíduo. Uma "célula" pode ser uma célula de qualquer organismo incluindo, mas não limitado a uma bactéria, um eucariota ou um animal.

Pelo termo "quantidade eficaz" de um composto, como aqui referido significa-se uma quantidade não tóxica mas suficiente de um composto para proporcionar o resultado desejado e. g., modulação ou inibição. Como será realçado adiante, a quantidade exacta necessária vai variar de indivíduo para indivíduo, dependendo da espécie, idade e estado geral do indivíduo, da gravidade da doença que está a ser tratada, do composto específico utilizado, do seu modo de administração e semelhantes. Assim, não é possível especificar uma "quantidade eficaz" exacta. Contudo, uma quantidade eficaz apropriada pode ser determinada por uma pessoa com conhecimentos correntes da matéria utilizando só experimentação de rotina. Analogamente, pela frase "quantidade eficaz para modulação de uma MMP" significa uma quantidade não tóxica mas suficiente de um 18 composto para modular a actividade de, pelo menos, uma MMP. Além disso, pela frase "quantidade eficaz para inibição de uma MMP" significa uma quantidade não tóxica mas suficiente de um composto para inibir a actividade de, pelo menos, uma MMP. Mais uma vez, a quantidade exacta vai variar de indivíduo para indivíduo, dependendo da espécie, idade e estado geral do indivíduo, da gravidade da doença que está a ser tratada, do composto específico utilizado, do seu modo de administração e semelhantes. A frase "ambiente compreendendo a MMP" significa qualquer ambiente em que está presente uma ou mais MMP. Esses ambientes podem incluir, mas não estão limitados a indivíduos orgãos, tumores, células, géis, soluções ou MMP por si só.

Por "farmaceuticamente aceitável" significa-se um material que não é biologicamente ou de outro modo indesejável, i. e., o material pode ser administrado a um indivíduo conjuntamente com o composto seleccionado sem causar quaisquer efeitos biológicos indesejados ou interactuar de modo prejudicial com qualquer dos outros componentes da composição farmacêutica em que está contido.

Vai agora ser feita referência em pormenor a aspectos específicos dos materiais, compostos, composições, componentes e métodos divulgados exemplos dos quais estão ilustrados no desenho anexo.

Compostos

Num aspecto, são aqui divulgados compostos de Fórmula I: 19

em que X é CH2, CH2CH2 ou CH=CH; e em que R2 é Br; metoxilo;

em que Y = O, S ou CH2;

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Num aspecto, são aqui divulgadas composições compreendendo um composto representado pela Fórmula I.

Os rótulos a e β estão incluídos na Fórmula I, bem como noutras estruturas aqui utilizadas, como auxiliares para ajudar a identificar e distinguir as posições dos átomos de carbono 20 específicos para discussão posterior. A escolha destes marcadores é meramente arbitrária e não tem intenção de ser uma limitação.

Nos compostos representados pela Fórmula I os farmacóforos e. g. o substituinte que contém o grupo sulfonilo e o substituinte que contém o grupo hidroxamato estão ligados a átomos de carbono adjacentes, i. e., carbonos a e /3. Além disso, a estrutura com dois carbonos que tem os farmacóforos, i. e., os carbonos a e β está conformacionalmente constrangida pela substituição cíclica. Além disso, no farmacóforo que contém o grupo sulfonilo, o grupo sulfonilo está posicionado na posição y em relação ao grupo hidroxamato, i. e., há três átomos entre o grupo sulfonilo e o grupo hidroxamato.

Os compostos representados pela Fórmula I podem ser opticamente activos ou racémicos. A estereoquímica nos carbonos α e β pode variar e vai depender da relação espacial entre o substituinte que contém o grupo sulfonilo e o grupo hidroxamato um com o outro. Num aspecto, a estereoquímica no carbono a é S. Noutro aspecto, a estereoquímica no carbono β é R. Num aspecto, a estereoquimica no carbono a é S. Noutro aspecto, a estereoquimica no carbono β é R. Utilizando técnicas conhecidas na técnica, é possível variar a estereoquímica nos carbonos α e β.

Salvo afirmação em contrário, uma fórmula com ligações químicas ilustradas só como linhas a cheio e não como cunhas ou linhas a tracejado contempla cada isómero possível e. g., cada enantiómero e diastereómero e uma mistura de isómeros, tal como uma mistura racémica. 21

Também estão aqui divulgados os sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos representados pela Fórmula I. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são preparados por tratamento de hidroxamato e/ou da sulfonamida com uma quantidade apropriada de uma base farmaceuticamente aceitável. As bases farmaceuticamente aceitáveis representativas incluem hidróxido de amónio, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de litio, hidróxido de cálcio, hidróxido de magnésio, hidróxido ferroso, hidróxido de zinco, hidróxido de cobre, hidróxido de alumínio, hidróxido férrico, isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, lisina, arginina, histidina e semelhantes. Num aspecto, a reacção é realizada em água, só ou em combinação com um solvente orgânico inerte, miscível com água, a uma temperatura desde cerca de 0 °C a cerca de 100 °C, tal como a temperatura ambiente. A proporção molar de compostos representados pela Fórmula I a ser utilizada é escolhida para proporcionar a proporção desejada para quaisquer sais específicos. Para preparação, por exemplo, dos sais de amónio do hidroxamato, o hidroxamato pode ser tratado com, aproximadamente, um equivalente de base farmaceuticamente aceitável para dar um sal neutro.

Num aspecto, o grupo R na Fórmula I pode ser um grupo arilo substituído que é representado pela fórmula seguinte.

22 em que R2 é Br; metoxilo; ou CH2;

em que Y = O, S

Noutro aspecto, o grupo R da Fórmula I pode ser p-metoxifenilo, p-bifenilo, p-fenoxifenilo, p-(feniletinil)fenilo, p-(feniletenil)fenilo e sistemas tricíclicos lineares com três grupos arilo ou dois grupos arilo agarrados a um sistema central em anel de piperidinilo e os seus análogos heteroaromáticos. A seguir, é exemplos específicos Fórmula I. apresentada uma de compostos que lista não exaustiva de são representados pela

Ri

23 3;Rj = Bt bíK**«;metoxilo

Numa estrutura cíclica contendo, pelo menos, dois substituintes adjacentes, como é ilustrado na Fórmula I, pode haver dois centros quirais dependendo dos substituintes. Além disso, a orientação estereoquímica relativa dos dois substituintes pode ser cis ou trans. Assim, os compostos 1, 3, 5 e 7 representam isómeros cis enquanto que os compostos 2, 4, 6 e 8 representam isómeros trans. Cada uma das estruturas cis ou trans representa um racemato que consiste em dois enantiómeros com configurações absolutas opostas. Por exemplo, a cis-bifenilsulfonamida (lc) representa dois isómeros cis, um com uma configuração aS,/3R e o outro com uma configuração aR,/3S. Analogamente, a trans-bifenilsulfonamida (2c) representa dois isómeros trans, um com uma configuração aS,/3S e o outro com uma configuração aR,/3R. As estruturas destes compostos específicos, lc e 2c estão apresentadas a seguir. 24

Exemplos específicos adicionais incluem

/

composto 5-6d) e 25

Como aqui divulgado, os compostos representados pela Fórmula I são moduladores de MMP. Embora não querendo ficar comprometidos pela teoria, crê-se que uma vez que os compostos representados pela Fórmula I têm qrupos hidroxamato que se podem liqar a Zn, os compostos representados pela Fórmula I podem ser moduladores de todas as MMP dependentes de Zn, por exemplo, MMP-1, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-11 e MMP-13, ou uma sua mistura. A este respeito, pode dizer-se que os compostos representados pela Fórmula I são moduladores de MMP de espectro largo.

Noutro aspecto, os compostos representados pela Fórmula I são moduladores selectivos de MMP. Ainda noutro aspecto, os compostos representados pela Fórmula I são moduladores selectivos de MMP-2 e MMP-9. Ainda noutro aspecto, os compostos representados pela Fórmula I são capazes de modular a metástase tumoral e a invasão tumoral e também são agentes anti-artriticos .

Noutro aspecto, os compostos representados pela Fórmula I são inibidores potentes de MMP. Embora não querendo ficar comprometidos pela teoria, crê-se que uma vez que os compostos representados pela Fórmula I têm grupos hidroxamato que se ligam a Zn, os compostos representados pela Fórmula I podem ser inibidores de todas as MMP dependentes de Zn, por exemplo, MMP-1, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-11 e MMP-13, ou uma sua mistura. A 26 este respeito, pode dizer-se que os compostos representados pela Fórmula I são inibidores de MMP de espectro largo.

Num aspecto, os compostos representados pela Fórmula I são inibidores selectivos de MMP. Noutro aspecto, os compostos representados pela Fórmula I são inibidores selectivos de mmp-2 e MMP-9. Ainda noutro aspecto, os compostos representados pela Fórmula I são capazes de inibir a progressão tumoral, a metástase tumoral e a invasão tumoral e são, também, agentes anti-artríticos.

Processos Sintéticos

Os compostos e intermediários podem ser sintetizados utilizando técnicas genericamente conhecidas pelos especialistas na matéria. Os materiais de partida e reagentes utilizados na preparação destes compostos estão disponíveis de fornecedores comerciais, tais como Aldrich Chemical Co., (Milwaukee, Wis.), Acros Organics (Morris Plains, N.J.), Fisher Scientific (Pittsburgh, Pa.) ou Sigma (St. Louis, Mo.) ou são preparados por processos conhecidos pelos especialistas na matéria seguindo processos divulgados em obras de referência tais como Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1-17 (John Wiley and Sons, 1991); Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Volumes 1-5 e Suplementos (Elsevier Science Publishers, 1989); Organic Reactions, Volumes 1-40 (John Wiley and Sons, 1991); March's Advanced Organic Chemistry, (John Wiley and Sons, 4a Edição); e Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989). 27

Num aspecto, os compostos representados pela Fórmula I podem ser preparados por processos ilustrados nos Esquemas I e II. Estes esquemas são meramente ilustrativos de alguns processos pelos quais os compostos e intermediários aqui divulgados podem ser sintetizados e podem ser feitas várias modificações nestes esquemas e serão evidentes para um especialista na matéria que tenha revisto esta descrição.

Na discussão seguinte, os materiais de partida e os intermediários das reacções podem ser isolados e purificados, se desejado, utilizando técnicas convencionais, incluindo mas não limitadas a filtração, destilação, cristalização, cromatografia e semelhantes. Esses materiais podem ser caracterizados utilizando meios convencionais, incluindo constantes físicas e dados espectrais. Além disso, salvo especificação em contrário, as reacções aqui divulgadas podem ter lugar à pressão atmosférica numa gama de temperaturas desde cerca de -78 °C até cerca de 150 °C, desde cerca de 0 °C até cerca de 125 °C, ou cerca da temperatura ambiente e. g., cerca de 20 °C. 28

Esquema I:

0 Esquema I proporciona um resumo de uma via sintética para acesso aos compostos sulfonamidas representados pela Fórmula I em que Z = NH e. g., compostos 1, 2, 3 e 4 discutidos acima, partindo do material de partida aminoácido cíclico cis ou trans racémico (9) . 0 material de partida 9 está disponível comercialmente ou está acessível sinteticamente por processos conhecidos pelos especialistas na matéria. Por exemplo, os materiais de partida ácido cis-2-aminociclo-hexanocarboxílico (racémico) ou ácido trans-2-aminociclo-hexanocarboxílico (racémico), que conduzem aos compostos 1 e 2, respectivamente estão disponíveis de fornecedores comerciais, tais como Acros Organics (Morris Plains, N.J.). Analogamente, a utilização de análogos de ciclo-hexeno de 9 como materiais de partida proporciona os correspondentes compostos de ciclo-hexeno 3 e 4. Para chegar aos enantiómeros individuais dos compostos finais, podem ser utilizados como materiais de partida análogos de 9 29 aminoácidos cíclicos quirais enantiomericamente puros conhecidos. Também são conhecidos na técnica, processos sintéticos para a preparação de aminoácidos cíclicos enantiomericamente puros. Ver N. Harmat et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 1249-1254.

No Esquema I, faz-se reagir o material de partida 9 com um derivado funcional de ácido sulfónico, R-S02LG em que LG representa um grupo de saída adequado, tal como um cloreto, anidrido ou anidrido misto. Esta reacção pode decorrer em condições básicas adequadas para dar a sulfonamida. As bases adequadas para esta reacção são bem conhecidas e incluem, mas não estão limitadaos a carbonatos, bicarbonatos, hidróxidos, alcóxidos, hidretos e aminas, tais como trimetilamina, trietilamina, diisopropilamina, N-etil-diisopropilamina, piridina ou dimetilaminopiridina, incluindo uma sua mistura. Além disso, a reacção pode ser realizada na presença de um solvente orgânico, tal como dioxano, diclorometano, 1,2-dicloroetano, 1,1,1-tricloroetano, N,N-dimetilformamida (DMF), N,N-dimetilacetamida, dimetilsulfóxido (DMSO), acetonitrilo, acetato de etilo, éter, benzeno, tolueno ou xileno, incluindo uma sua mistura. Num aspecto, a reacção pode ser realizada com material de partida 9 e um cloreto de sulfonilo (R-S02C1), na presença de carbonato de sódio em solvente dioxano-água. A sulfonamida resultante é, subsequentemente, condensada com uma hidroxilamina protegida, H2N-OPG em que PG representa um grupo protector em condições adequadas de condensação de aminoácidos. Alternativamente, a função ácido da sulfonamida é activada, por exemplo, por conversão no cloreto de ácido ou anidrido misto e, depois, feita reagir com uma hidroxilamina protegida. As hidroxilaminas protegidas estão disponíveis 30 comercialmente ou podem ser preparadas por processos conhecidos na técnica. Tipicamente, as hidroxilaminas protegidas são preparadas por reacção de hidroxilamina com um grupo protector adequado. 0 grupo protector que é utilizado vai depender das condições reaccionais especificas, de outros substituintes que podem estar presentes, disponibilidade ou preferência.

As condições para condensação da hidroxilamina protegida e da sulfonamida são bem conhecidas na técnica e, tipicamente, envolvem fazer contactar a sulfonamida com a hidroxilamina protegida na presença de um ou mais agentes activantes. Vários agentes activantes que podem ser utilizados para a reacção de condensação incluem, mas não estão limitados a l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), diciclo-hexilcarbo-diimida (DCC), N,N'~diisopropil-carbodiimida (DIP), hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxi-tris-(dimetil-amino)fosfónio (BOP), hidroxibenzotriazole (HOBt) e 17-metilmorfolina (NMM), incluindo uma sua mistura. A reacção de condensação pode ser realizada em N-metilpirrolidona (NMP) ou em DMF. Num aspecto, a reacção de condensação pode envolVer o tratamento da sulfonamida com uma hidroxilamina protegida na presença de EDC, HOBt e NMM em DMF. Ver Y. Tamura et al., J. Med. Chern., 1998, 41, 640-649.

As condições para conversão da função ácido num derivado reactivo, tal como um cloreto de ácido, por exemplo utilizando cloreto de tionilo ou cloreto de oxalilo, ou num anidrido, por exemplo, por reacção ésteres clorofórmicos em condições apropriadas, seguida por reacção destes intermediários activados, com ou sem isolamento, com hidroxilamina ou com uma hidroxilamina protegida são conhecidas na técnica e podem ser aplicadas como um processo alternativo à condensação do ácido 31 J. Med. com uma hidroxilamina protegida. Ver Y. Tamura et al.,

Chem., 1998, 41, 640-649.; P. 0'Brien et al., J. Med. Chem., 2000, 43, 156-166; M. Gowravaram et al., J. Med. Chem., 1995, 38, 2570-2581. O passo final do Esquema I envolve a remoção do grupo protector PG em condições hidrolíticas para resultar em compostos representados pela Fórmula I em que Z = NH. As condições adequadas para a remoção do grupo protector são discutidas posteriormente.

O Esquema II apresenta o resumo de uma via sintética de acesso aos compostos sulfonas representados pela Fórmula I em que Z = CH2 e. g., os compostos 5, 6, 7 e 8 discutidos acima, partindo de eis- ou trans-lactona racémica (10). O Esquema II baseia-se na reacção de abertura do anel de lactonas com tióis (R-SH) na presença de catalisadores ácidos de Lewis. O material 32 de partida 10 está disponível comercialmente ou pode ser sintetizado por processos conhecidos na técnica. Para chegar aos enantiómeros individuais dos compostos finais, pode utilizar-se como materiais de partida análogos de 10 lactonas enantiomericamente puras, quirais, conhecidas. Os processos sintéticos para a preparação de lactonas enantiomericamente puras também são conhecidos na técnica. Ver D. Bailey et al., J. Org. Chem.r 1970, 35, 3574-3576 ; P. Kennewell et al., J. Chem.

Soc. Perkin. Trans. I, 1982, 2563-2570. A utilização de análogos de ciclo-hexano apropriados do material de partida 10 proporciona os correspondentes compostos 5 e 6 enquanto que a utilização de análogos de ciclo-hexeno apropriados do material de partida 10 dá os correspondentes compostos 7 e 8. O tiol R-SH está disponível comercialmente ou pode ser sintetizado por processos conhecidos na técnica.

Os ácidos de Lewis que são adequados para a reacção de abertura do anel da lactona 10 são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, os ácidos de Lewis adequados incluem, mas não estão limitados a A1C13, AlBr3, S03 e complexos de S03, BF3, BF3 eterato, ZnCl2, TiCl4, SbF5, SnCl4 e semelhantes, incluindo uma sua mistura. Os solventes adequados incluem, por exemplo, diclorometano, 1,2-dicloroetano, 1,1,1-tricloroetano, N,N-dimetilformamida (DMF), N,N-dimetilacetamida, sulfóxido de dimetilo (DMSO), acetonitrilo, acetato de etilo, éter, benzeno, tolueno ou xileno, incluindo uma sua mistura.

Depois de a lactona ser aberta, o enxofre é oxidado por processos conhecidos na técnica. São discutidos vários agentes oxidantes e condições em Hudlicky, Oxidations in Organic Chemistry, ACS Monograph 186, 1990. Os agentes de oxidação 33 adequados incluem, por exemplo, peróxido de hidrogénio, meta-periodato de sódio, oxone (peroxi monossulfato de potássio), ácido meta-cloroperoxibenzóico, ácido periódico e semelhantes, incluindo uma sua mistura. Os solventes adequados incluem, por exemplo, ácido acético (para meta-periodato de sódio) e, para outros perácidos, éteres tais como thf e dioxano e acetonitrilo, DMF e semelhantes, incluindo uma sua mistura. Para o oxone, os solventes adequados incluem, por exemplo, álcoois aquosos, tais como metanol etanol e propanol, incluindo uma sua mistura.

Finalmente, no Esquema II, uma hidroxilamina protegida (H2N-OPG) é condensada com a sulfona e o grupo protector PG é removido para resultar em compostos representados pela Fórmula I. A hidroxilamina protegida, como mencionado acima está disponível comercialmente ou pode ser preparada por processos sintéticos conhecidos na técnica. Além disso, as condições para a as reacções de condensação são análogas às condições de condensação discutidas acima no Esquema I. A frase "grupo protector", como aqui utilizada, significa uma unidade química que, temporariamente, modifica um grupo funcional potencialmente reactivo e protege o grupo funcional de transformações químicas indesejadas. A quimica dos grupos protectores é conhecida por um especialista na matéria. Ver T. Greene et ai., "Protective Groups in Organic Synthesis," 2a ed., Wiley, N.I., 1991.

Exemplos de grupos protectores adequados para utilização com a hidroxilamina protegida no Esquema I ou II incluem, mas não estão limitados a, terc-butilo, benzilo, tetra-hidropiranilo e éteres sililicos tais como trimetilsililo, terc- 34 butildimetilsililo e triisopropilsililo. As condições hidrolíticas e hidrogenolíticas para remoção de grupos protectores aqui utilizados, que expõem assim o grupo hidroxamato, são genericamente bem conhecidas e vão depender do grupo protector especifico utilizado. A desprotecção hidrolitica pode ser genericamente realizada por hidrólise em condições básicas ou na presença de um ácido adequado, tal como ácido clorídrico, ácido bromidrico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ou por contacto com uma resina ácida adequada, tal como AMBERLYST™ (Rohm Haas, Filadélfia, Pa.) ou DOWEX™ (Dow, Midland, Mich.). Os solventes adequados incluem, por exemplo, diclorometano, 1,2-dicloroetano, 1,1,1-tricloroetano, N, N-dimetilformamida (DMF), N, N-dimetilacetamida, sulfóxido de dimetilo (DMSO), acetonitrilo, acetato de etilo, éter, benzeno, tolueno ou xileno, incluindo uma sua mistura. A remoção hidrogenolitica de um grupo protector, tal como um grupo benzilo, pode ser realizada por hidrogenação na presença de um catalisador como paládio sobre carvão a uma temperatura e pressão apropriadas num solvente adequado.

Embora as vias sintéticas discutidas acima possam ser realizadas como sinteses paralelas múltiplas em fase em solução, que envolve a síntese de compostos em reactores individuais, podem ser realizados outros processos. Por exemplo, podem ser utilizadas as sinteses de base combinatória ou as sínteses em fase sólida e vão depender dos compostos específicos a ser sintetizados, da disponibilidade de reagentes, ou da preferência. 35

Utilidade e Administração

Os compostos representados pela Fórmula I têm muitas utilizações. Por exemplo, os compostos têm utilizações em áreas em que a modulação ou inibição de MMP é terapeuticamente ou profilacticamente vantajosa, tal como no tratamento ou prevenção de cancro e de artrite. Num aspecto os compostos representados pela Fórmula I são utilizados para tratar um indivíduo com cancro. Esse cancro inclui, mas não está limitado a carcinoma, melanoma, leucemia ou adenoma.

Como assinalado acima, as MMP são alvos adequados para agentes anticancerígenos porque é necessária a actividade colagenolítica de Tipo iv pelas células tumorais metastizantes para atravessarem as barreiras de tecido/membrana vascular. Além disso, a sobreprodução de MMP correlaciona-se clinicamente com o comportamento invasivo e metastático de vários tumores. Consequentemente, a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela Fórmula I para modular ou inibir MMP, tais como MMP-2 e/ou MMP-9, pode modular ou inibir eventos de progressão tumoral, como metástase tumoral, invasão tumoral e angiogénese.

Num aspecto, os compostos representados pela Fórmula I podem modular ou inibir selectivamente várias MMP. Recentemente, foi disponibilizada informação relativa à estrutura tridimensional do dominio catalítico de várias MMP e. g., MMP-1, -3, -7 e -8 e de complexos do dominio catalítico-inibidor, determinada por cristalografia de raios X e espectroscopia de RMN. Ver Y. Tamura et al., J. Med. Chem., 1998, 21, 640-649; R. Kiyama et al., J. Med. Chem., 1999, 42, 1723-1738; C. J. Burns et al., Angew. Chem. Int. Ed., 1998, 37, 2848-2850; L. E. 36

Burgess et al., Chem. Abst., 1998, 128, 127820; A. Pavlovsky et al., Protein Sei., 1999, 8, 1455-1462; B. Lovejoy et al., Science, 1994, 263, 375-377; T. Stams et al., Nature: Struct. Biol., 1994, 1, 119-123; W. Bode et al. eMBO J., 1994, 13, 1263; B. Stockman et al., Protein Sei., 1998, 7, 2118-2126; 2281-2286. Estes estudos indicam que a estrutura nuclear das mmp consiste em três hélices alfa e folhas beta de tipo cadeia e um ião zinco catalítico localizado no fundo da fenda catalítica, coordenado por três resíduos de histidina ("His"). Uma diferença, contudo entre as várias mmp, é na forma e no tamanho da bolsa SI', um domínio adicional de ligação do substrato encastrado no seio do domínio de ligação de Zn catalítico. Em contraste com os subsítios abertos Sl, S2' e S3', a bolsa SI' penetra no núcleo da enzima mmp. Esta bolsa Sl' é relativamente pouco profunda na MMP-1 e na MMP-7 e estreita na MMP-9 enquanto que na MMP-2, MMP-3 e MMP-8 é um canal muito mais fundo.

Embora não querendo ficar comprometido pela teoria, crê-se que esta conformação única dos domínios da actividade Sl' em MMP, tais como MMP-2 e MMP-9, contribui para a especificidade do composto divulgado. Os compostos representados pela Fórmula I, que incorporam restrição conformacional da posição α e β do grupo hidroxamato com um substituinte sulfonilo que se projecta da posição y exocíclica, pode ocular selectivamente a bolsa Sl' funda dos sítios activos da MMP-2 e da MMP-9. Além disso embora não querendo ficar comprometidos pela teoria, crê-se que a estrutura conformacionalmente restringida presente em compostos representados pela Fórmula I ajuda na projecção do substituinte sulfonilo na direcção da bolsa Sl' enquanto que se crê que a ausência de restrição conformacional conduz a inibidores que não têm potência devido a uma flexibilidade conformacional grandemente aumentada. 37

Num aspecto, é divulgada a utilização de compostos representados pela Fórmula I no fabrico de um medicamento para a modulação de uma MMP. A MMP pode ser qualquer MMP ou misturas de MMP. Num aspecto, a MMP é MMP-2, MMP-9 ou uma sua mistura.

Ainda noutro aspecto, é divulgada a utilização de, pelo menos, um composto representado pela Fórmula I no fabrico de um medicamento para a modulação de uma MMP. Ainda noutro aspecto, é divulgada a utilização de pelo menos um composto representado pela Fórmula I no fabrico de um medicamento para inibição de uma MMP. Novamente, a MMP pode ser qualquer MMP e. g. MMP-2, MMP-9, ou misturas de MMP. Num aspecto, é divulgada a utilização de um composto representado pela Fórmula I em que o composto é o composto lc, 2c ou uma sua mistura.

Descreve-se a utilização de compostos representados pela Fórmula I em que a utilização é realizada in vitro.

Num aspecto, descreve-se a utilização de um composto representado pela Fórmula I no fabrico de um medicamento para modulação de metástase tumoral num indivíduo ou numa célula. Noutro aspecto, descreve-se a utilização de um composto representado pela Fórmula I no fabrico de um medicamento para inibição da metástase tumoral num individuo ou numa célula. Ainda noutro aspecto, a célula é uma célula HT-1080.

Num aspecto, a quantidade eficaz para modulação é equivalente a uma quantidade eficaz para inibição. A modulação e/ou inibição da MMP pode ser medida por métodos conhecidos na técnica. Num aspecto, a modulação pode ser medida por qualquer alteração da invasão tumoral e a inibição pode ser medida pela 38 paragem da invasão tumoral. Noutro aspecto, a modulação pode ser medida por qualquer alteração da angiogénese tumoral e a inibição pode ser medida por paragem da angiogénese tumoral. A potência de inibição pode ser caracterizada por uma IC50 inferior a 3000 nM, inferior a 1500 nM, inferior a 1000 nM, inferior a 500 nM ou inferior a 200 nM.

Num aspecto, os compostos aqui divulgados podem ser administrados a um indivíduo necessitado de tratamento, tal como um individuo com cancro ou com artrite. O individuo necessitado de tratamento pode ser um ser humano ou um animal incluindo, mas não limitado a um roedor, cão, gato, cavalo, bovino, ovino, ou primata não ser humano e semelhantes, que necessita de alivio ou melhoria de uma patologia médica identificada.

Qualquer dos compostos representados pela Fórmula I pode ser administrado a um individuo como ptécnica de um cocktail, í. e., utilizado em combinação com outros agentes farmacêuticos. Por exemplo, os compostos representados pela Fórmula I podem ser ptécnica de um cocktail anticancerigeno, i. e., um ou mais dos compostos representados pela Fórmula I pode ser utilizado com um ou mais agentes anticancerigenos. A utilização de cocktails no tratamento do cancro constitui rotina. Num aspecto, um cocktail anticancerigeno envolve um veiculo de administração comum (e. g., pilula, comprimido, implante, solução injectável etc.) que pode conter quantidades eficazes de um ou mais compostos representados pela Fórmula I e ou mais fármacos anticancerigenos. Alternativamente, um cocktail anticancerigeno envolve a administração sequencial, simultânea ou programada de quantidades eficazes de um ou mais compostos representados pela Fórmula I e um ou mais fármacos anticancerigenos. Por exemplo, um ou mais compostos representados pela Fórmula I podem ser 39 administrados primeiro a um indivíduo e, depois, após algum período de tempo, é dado ao indivíduo um agente anticancerígeno. A ordem de administração pode ser determinada por um especialista na técnica dependendo de factores, tais como o tipo específico de fármaco anticancerígeno, o tipo e gravidade do cancro e semelhantes.

Os agentes anticancerígenos adequados que podem ser utilizados num cocktail anticancerígeno com os compostos representados pela Fórmula I incluem, mas não estão limitados a Acivicina; Aclarrubicina; Cloridrato De Acodazole; Acrqnine; Adozelesina; Aldesleucina; Altretamina; Ambomicina; Acetato De Ametantrona; Aminoglutetimida; Amsacrine; Anastrozole; Antramicina; Asparaginase; Asperlin; Azacitidina; Azetepa; Azotomicina; Batimastat; Benzodepa; Bicalutamida; Cloridrato De Bisantreno; Dimesilato De Bisnafide; Bizelesina; Sulfato De Bleomicina; Brequinar Sódico; Bropirimina; Bussulfan; Cactinomicina; Calusterona; Caracemida; Carbetimer; Carboplatina; Carmustina; Cloridrato De Carubicina; Carzelesina; Cedefingol; Clorambucil; Cirolemicina; Cisplatina; Cladribina; Mesilato De Crisnatol; Ciclofosfamida; Citarabina; Dacarbazina; Dactinomicina; Cloridrato De Daunorrubicina; Decitabina; Dexormaplatina; Dezaguanina; Mesilato De Dezaguanina; Diaziquona; Docetaxel; Doxorrubicina; Cloridrato De Doxorrubicina; Droloxifeno; Citrato De Droloxifeno; Propionato De Dromostanolona; Duazomicina; Edatrexato; Cloridrato De Eflomitina; Elsamitrucina; Enloplatina; Enpromato; Opipropidina; Cloridrato De Epirrubicina; Erbulozole; Cloridrsto De Esorrubicina; Estramustina; Estramustina, Fosfato Sódico; Etanidazole; Ácido Etiodado Com I 131; Etoposido; Fosfato De Etoposido; Etoprina; Cloridrsto De Fadrozole; Fazarabina; Fenretinide; Floxuridina; Fosfato De Fludarabina; Fluorouracilo; 40

Flurocitabina; Fosquidona; Fostriecina Sódica; Gemcitabina; Cloridrato De Gemcitabina; Ouro Au 198; Hidroxiureia; Cloridrato De Idarrubicina; Ifosfamida; Ilmofosina; Interferão Alfa-2a; Interferão Alfa-2b; Interferão Alfa-Nl; Interferão Alfa-N3; Interferão Beta-la; Interferão Gama-Ib; Iproplatina; Cloridrato De Irinotecano; Acetato De Lanreotide; Letrozole; Acetato De Leuprolide; Cloridrato De Liarozole; Lometrexol Sódico; Lomustina; Cloridrato De Losoxantrona; Masoprocol; Maitansine; Cloridrato De Mecloretamina; Acetato De Megestrol; Acetato De Melengestrol; Melfalan; Menogaril; Mercaptopurina; Metotrexato; Metotrexato Sódico; Metoprina; Meturedepa; Mitindomide; Mitocarcina; Mitocromina; Mitogilina; Mitomalcina; Mitomicina; Mitosper; Mitotano; Cloridrato De Mitoxantrona; Ácido Micofenólico; Nocodazole; Nogalamicina; Ormaplatina; Oxisuran; Paclitaxel; Pegaspargase; Peliomicina; Pentamustina; Sulfato De Peplomicina; Perfosfamida; Pipobroman; Piposulfan; Cloridrato De Piroxantrona; Plicamicina; Plomestano; Porfimer Sódico; Porfiromicina; Prednimustina; Cloridrato De Procarbazina; Puromicina; Cloridrato De Puromicina; Pirazofurina; Riboprina; Rogletimida; Safingol; Cloridrato De Safingol; Semustina; Simtrazeno; Esparfosato Sódico; Esparsomicina; Cloridrato De Espirogermânio; Espiromustina; Espiroplatina; Estreptonigrina; Estreptozocina; Cloreto de Estrôncio Sr 89; Sulofenur; Talisomicina; Taxano; Taxóide; Taxol; Tecogalan Sódico; Tegafur; Cloridrato De Teloxantrona; Temoporfina; Teniposido; Teroxirona; Testolactonae; Tiamiprina; Tioguanina; Tiotepa; Tiazofurina; Tirapazamina; Cloridrato de Topotecano; Citrato de Toremifeno; Acetato De Trestolona; Fosfato de Triciribina; Trimetrexato; Glucuronato de Trimetrexato; Triptorelina; Cloridrato De Tubulozole; Mostrada de Uracilo; Uredepa; Vapreotido; Verteporfina; Sulfato de Vinblastina; Sulfato de Vincristina; Vindesina; Sulfato De Vindesina; Sulfato de Vinepidina; Sulfato 41

De Vinglicinato; Sulfato De Vinleurosina; Tartarato De Vinorelbina; Sulfato De Vinrosidina; Sulfato de Vinzolidina; Vorozole; Zeniplatina; Zinostatina; e Cloridrsto de Zorrubicina.

Os moduladores ou inibidores de MMP podem proporcionar efeitos sinérgicos quando utilizados num cocktail. Por exemplo, sabe-se que a utilização de outros moduladores ou inibidores de MMP em combinação com agentes anticancerigenos produz efeitos sinérgicos, í. e., a quantidade de modulação ou inibição observada quando se utiliza uma associação de um modulador ou inibidor de MMP e agente anticancerigeno é maior do que a quantidade de modulação ou inibição observada quando qualquer deles é utilizado por si só. Ver M. Ohta et al., Japanese J. Câncer. Res., 2001, 92, 688; M. Maki et al., Clin. Exp. Metastasis, 2002, 19, 519. Consequentemente, a utilização de compostos representados pela Fórmula I pode proporcionar efeitos sinérgicos quando administrados como ptécnica de um cocktail anticancerigeno.

As dosagens ou quantidades dos compostos aqui divulgados são suficientemente grandes para produzir o efeito desejado no método pelo qual ocorre a administração. A dosagem não deve ser tão grande que cause efeitos secundários adversos, como reacções cruzadas indesejadas, reacções anafilácticas e semelhantes. Genericamente, a dosagem vai variar com a idade estado, seco e extensão da doença no indivíduo e pode ser determinada por um especialista na matéria. A dosagem pode ser ajustada pelo médico individual com base no estado clínico do indivíduo envolvido. A dose, o regime de doses e via de administração podem ser variados. 42 A eficácia de administração de uma dose especifica dos compostos ou composições de acordo com os métodos aqui divulgados pode ser determinada por avaliação dos aspectos específicos da história médica, sinais, sintomas e testes laboratoriais objectivos que são conhecidos por serem úteis na avaliação do estado de um indivíduo que necessita de atenção para o tratamento de cancro, artrite ou outras doenças e/ou patologias. Estes sinais, sintomas e testes laboratoriais objectivos vão variar, dependendo da doença ou patologia específica a ser tratada ou prevenida, como será conhecido por qualquer médico que trata esses doentes ou por um investigador que realize experimentação neste campo. Por exemplo, se, com base numa comparação com um grupo de controlo apropriado e/ou conhecimento da progressão normal da doença na população geral ou no indivíduo específico: 1) se demonstra que o estado físico de um indivíduo melhorou (e. g., um tumor sofreu regressão parcial ou completa), 2) se demonstra que a progressão da doença ou patologia está estabilizada ou foi reduzida, ou inúertida, ou 3) se a necessidade de outros medicamentos para tratamento da doença ou patologia é reduzida ou obviada então um regime de tratamento específico é considerado eficaz.

Qualquer dos compostos representados pela Fórmula I pode ser utilizado terapeuticamente em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável. Noutro aspecto, qualquer dos compostos representados pela Fórmula I pode ser utilizado prof ilacticamente, i. e., como um agente preventivo, com um veículo farmaceuticamente aceitável. Os compostos aqui divulgados podem ser convenientemente formulados em composições farmacêuticas constituídas por um ou mais dos compostos em associação com um veículo farmaceuticamente aceitável. Ver e. g., Remington's Pharmaceutical Sciences, última edição, por 43 E.W. Martin Mack Pub. Co. easton, Pa., que descreve veículos típicos e métodos convencionais de preparação de composições farmacêuticas que podem ser utilizados em conjunção com a preparação de formulações dos compostos aqui divulgados. Esses veículos farmacêuticos, muito tipicamente, são veículos correntes para administração de composições a seres humanos e não humanos, incluindo soluções, tais como água estéril, soro fisiológico e soluções tamponadas ao pH fisiológico. Outros compostos vão ser administrados de acordo com processos correntes utilizados pelos especialistas na matéria.

As composições farmacêuticas aqui divulgadas podem incluir, mas não estão limitadas a veículos espessantes, diluentes, tampões, conservantes, agentes tensoactivos e semelhantes para além da molécula de escolha. As composições farmacêuticas também podem incluir um ou mais ingredientes activos adicionais, tais como agentes antimicrobianos, agentes anti-inflamatórios, anestésicos e semelhantes.

Os compostos e composições farmacêuticas aqui divulgadas podem ser administradas ao indivíduo de vários modos dependendo se é desejado tratamento local ou sistémico e da área a ser tratada. Assim, por exemplo, um composto ou composição farmacêutica aqui divulgados podem ser administrados numa solução oftálmica e/ou pomada na superfície do olho. Além disso, um composto ou composição farmacêutica podem ser administrados a um indivíduo vaginalmente, rectalmente, intranasalmente, oralmente, por inalação, ou parentericamente, por exemplo, pelas vias intradérmica, subcutânea, intramuscular, intraperitoneal, intrarrectal, intra-arterial, intralinfática, intravenosa, intratecal e intratraqueana. A administração parentérica, se utilizada, é genericamente caracterizada por injecção. Os 44 injectáveis podem ser preparados em formas convencionais, como soluções líquidas ou suspensões, formas sólidas adequadas para solução ou suspensão em líquido antes da injecção, ou como emulsões. Uma abordagem revista mais recentemente para administração parentérica envolve a utilização de um sistema de libertação lenta ou controlada tal que é mantida uma dosagem constante. Ver e. g., a patente U.S. N° 3610795.

As preparações para administração parentérica incluem soluções, suspensões e emulsões aquosas ou não aquosas estéreis que também podem conter tampões, diluentes e outros aditivos adequados. Exemplos de solventes não aquosos são propilenoglicol, polietilenoglicol, óleos vegetais, tal como azeite e ésteres orgânicos injectáveis tais como oleato de etilo. Os veículos aquosos incluem água, soluções alcoólicas/aquosas emulsões ou suspensões, incluindo soro fisiológico e meios tamponados. Os veículos parentéricos incluem solução de cloreto de sódio, dextrose de Ringer, dextrose e cloreto de sódio, solução de Ringer com lactato, ou óleos fixos. Os veículos intravenosos incluem repositores de fluidos e nutrientes, repositores de electrólitos (tais como os à base de dextrose de Ringer) e semelhantes. Também podem estar presentes conservantes e outros aditivos, tais como antimicrobianos, anti-oxidantes, agentes quelantes e gases inertes e semelhantes.

As formulações para administração tópica podem incluir pomadas, loções, cremes, geles, gotas, supositórios, pulverizadores, líquidos e pós. Podem ser necessários ou desejáveis veículos farmacêuticos convencionais, bases aquosas em pó ou oleosas espessantes e semelhantes. 45

As composições para administração oral podem incluir pós ou granulados, suspensões ou soluções em água ou meios não aquosos, cápsulas, saquetas ou comprimidos. Podem ser desejáveis espessantes, aromatizantes, diluentes emulsionantes, auxiliares dispersantes ou aglutinantes.

EXEMPLOS

Os exemplos seguintes são apresentados de modo a proporcionar às pessoas com conhecimentos correntes da matéria uma descrição e revelação completa de como é que os compostos, composições, artigos, dispositivos e/ou métodos aqui divulgados e reivindicados são preparados e avaliados e pretendem ser puramente exemplificativos e não têm a intenção de limitar o âmbito do que a requerente considera como a sua invenção. Foram feitos esforços para assegurar exactidão relativamente a números (e. g., quantidades, temperatura etc.) mas devem ser tidos em conta alguns erros e desvios. Salvo indicação em contrário, as ptécnicas são ptécnicas em peso, a temperatura é em °C ou é a temperatura ambiente e a pressão é a atmosférica ou próxima dela. Há numerosas variações e combinações de condições reaccionais e. g., concentrações dos componentes, solventes desejados, misturas de solventes, temperaturas, pressões e outras gamas e condições reaccionais que podem ser utilizadas para optimizar a pureza do produto e rendimento obtido a partir do processo divulgado. Só é necessária experimentação razoável e de rotina para optimizar essas condições de processo. 46

Exemplo preparativo 1 Ácido (cis)-2-[[(4-bifenil)sulfonil]amino]ciclo-hexano-carboxílico: Uma solução com agitação de ácido cis-2-amino-l-ciclo-hexanocarboxilico (2,4 g, 16,76 mmol) e carbonato de sódio (3,553 g, 33,52 mmol) em dioxanorágua (168:84 mL) foi arrefecida num banho de água gelada e à solução fria adicionou-se cloreto de bifenil-4-sulfonilo (4,85 g, 19,15 mmol) numa porção. A mistura reaccional foi agitada no banho de arrefecimento durante 2 horas. Depois de se deixar que a mistura reaccional atingisse a temperatura ambiente, a mistura foi agitada durante mais 48 horas. A mistura foi então Vertida em ácido cítrico aquoso a 10% (500 mL) e a mistura foi agitada durante 2 horas. O sólido obtido foi recolhido por filtração. O sólido foi agitado com hidróxido de sódio aquoso 1 N e a solução foi filtrada para remoVer qualquer material insolúvel. O filtrado aquoso alcalino foi arrefecido e acidificado até pH 1 com ácido clorídrico aquoso concentrado. O sólido obtido foi recolhido por filtração, lavado com água e seco ao ar para dar o ácido desejado como um sólido incolor. O processo deu 3,78 g (63%) de ácido (cis)-2-[[(4-bifenil)sulfonil]amino]ciclo-hexanocarboxílico, que tinha um ponto de fusão de 188-190° C. A espectrometria de massa deu um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 360. A análise por RMN de protão em CDC13 resultou nos seguintes desvios químicos (δ) : 1,2-2,1 (m, 8H, metilenos do ciclo-hexilo), 2,70-2,85 (m, 1H, H em C-l), 3,40-3,55 (m, 1H, H em C-2), 5,95 (d, 1H, S02NH), 7,35-8,0 (m, 9H, H de bifenilo), 8,75 (s largo, 1H, CONH) e 10,45 (s largo, 1H, N-OH) em que s é um singuleto, d é um dupleto, m é um multipleto. 47

Exemplo 2 (cís)-N-Hidroxi-2-[[(4-bifenil)sulfonil]amino]ciclo-hexanocarboxamida (composto lc) : Uma solução do ácido obtido no Exemplo 1 (0,80 g, 2,23 mmol) em CH2CI2 (30 mL) foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cloreto de oxalilo (1,415 g, 11,15 mmol) seguido por uma gota de N, N-dimetilf ormamida como catalisador. A mistura reaccional foi então deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O material volátil da mistura reaccional foi, então, removido a pressão reduzida e o residuo foi seco em alto vácuo durante uma hora. O cloreto de ácido assim obtido foi dissolvido em tetra-hidrofurano anidro (10 mL), arrefecido a 0 °C e tratado gota a gota com O-(trimetilsilil)hidroxilamina (2,35 g, 22,3 mmol). A mistura foi deixada atingir a temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. A mistura reaccional foi concentrada a pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (200 mL) . A solução foi sucessivamente lavada com ácido clorídrico 1 N (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) . A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e o solvente foi removido a pressão reduzida. O sólido assim obtido foi recristalizado de acetato de etilo/hexano para dar 0,63 g (75%) do produto lc desejado. O produto lc tinha um ponto de fusão de 74-76 °C. A espectrometria de massa mostrou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 375. A análise por RMN de protão em DMSO-d& resultou nos seguintes desvios químicos (δ): 1,0-2,1 (m, 8H, metilenos de ciclo-hexilo), 2,30-2,40 (m, 1H, H de C-l), 3,20-3,35 (m, 1H, H de C-2), 7,35-8,00 (m, 10H, H de bifenilo e S02NH), 8,75 (s largo, 1H, CONH) e 10,45 (s largo, 1H, N-OH). 48

Exemplo Preparativo 3 Ácido (trans)-2-[[(4-bifenil)sulfonil]amino]ciclo-hexano-carboxílico: Este composto foi preparado a partir do ácido trans-2-amino-l-ciclo-hexanocarboxílico (1,0 g, 7,0 mmol) por sua reacção com carbonato de sódio (1,48 g, 14,0 mmol) e cloreto de bifenil-4-sulfonilo (2,02 g, 8,0 mmol) em dioxano:água (70:35 mL) do mesmo modo que o divulgado no Exemplo 1. O rendimento foi 1,48 g (59%), o ponto de fusão era 220-222 °C e a espectrometria de massa revelou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 360.

Exemplo 4 (trans)-N-Hidroxi-2-[[(4-bifenil)sulfonil]amino]-ciclo-hexanocarboxamida (composto 2c) : Fez-se reagir uma solução do ácido obtido no Exemplo 3 (0,56 g, 1,56 mmol) com cloreto de oxalilo (0,99 g, 7,8 mmol) seguido por O-(trimetilsilil)-hidroxilamina (1,64 g, 15,6 mmol) como divulgado no Exemplo 2 para dar 0,23 g (40%) de 2c. O ponto de fusão era 212-214 °C. A espectrometria de massa revelou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 375. A análise por RMN de protão em DMSO-cfc resultou nos seguintes desvios químicos (δ): 0,90-1,85 (m, 8H, metilenos de ciclo-hexilo), 1,90-2,05 (m, 1H, H de C-l), 3,25-3,45 (m, 1H, H de C-2), 7, 40-7, 90 (m, 10H, H de bifenilo e S02NH), 8,75 (s largo, 1H, CONH) e 10,24 (s largo, 1H, N-OH). 49

Exemplo Preparativo 5 Ácido (cis)-2-[(4-fenoxibenzenossulfonil)amino]-ciclo-hexanocarboxílico: Este composto foi preparado a partir do ácido cis-2-amino-l-ciclo-hexanocarboxílico (1,0 g, 7,0 mmol) por sua reacção com carbonato de sódio (1,48 g, 14,0 mmol) e cloreto de 4-fenoxibenzenossulfonilo (2,25 g, 8,38 mmol) em dioxano:água (40:20 mL) do mesmo modo que o divulgado no Exemplo 1. Isto deu 2,23 g (85%). O ponto de fusão era 116-118 °C. A espectrometria de massa revelou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 376. A análise por RMN de protão em CDC13 resultou nos seguintes desvios químicos (δ): 1,2-2,2 (m, 8H, metilenos de ciclo-hexilo), 2,75-2,85 (m, 1H, H de C—1), 3,62-3,50 (m, 1H, H de C-2), 5,92 (d, 1H, S02NH) e 6,99-7,86 (m, 9H, H de arilo).

Exemplo 6 {cis)-N-Hidroxi-2-[(4-fenoxibenzenossulfonil)amino]-ciclohexanocarboxamida (composto ld) : Fez-se reagir uma solução do ácido obtido no Exemplo 5 (0,56 g, 1,49 mmol) com cloreto de oxalilo (solução 2 M em CH2C12, 3,7 mL, 7,4 mmol) seguido por O-(trimetilsilil)hidroxilamina (1,56 g, 14,91 mmol) tal como divulgado no Exemplo 2 para se obter 0,275 g (48%) do produto desejado. O ponto de fusão era 66-68° C. A espectrometria de massa revelou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 391. A análise por RMN de protão em DMSO-d& resultou nos seguintes desvios químicos (δ): 1,06-1,94 (m, 8H, metilenos de ciclohexilo), 2,29-2,36 (m, 1H, H de C-l), 3,19-3,28 (m, 1H, H de C-2), 7,08-7,86 (m, 10H, H de bifenilo e S02NH), 8,8 (s largo, 1H, CONH) e 10,4 (s largo, 1H, N-OH). 50

Exemplo preparativo 7 Ácido (trans)-2- [(4-fenoxibenzenossulfonil)amino]-ciclo-hexanocarboxílico: Este composto foi preparado a partir de ácido trans-2-amino-l-ciclo-hexanocarboxilico (1,0 g, 7,0 mmol) por reacção com carbonato de sódio (1,48 g, 14,0 mmol) e cloreto de 4-fenoxibenzenossulfonilo (2,25 g, 8,38 mmol) em dioxano:água (40:20 mL) do mesmo modo que o divulgado no Exemplo 1. Este rendeu 1,275 g (48%). O ponto de fusão era 192-194° C. A espectrometria de massa revelou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 376.

Exemplo 8 (trans)-N-Hidroxi-2-[(4-fenoxibenzenossulfonil)amino]-ciclo-hexanocarboxamida (composto 2d) : Fez-se reagir uma solução do ácido obtido no Exemplo 7 (1,00 g, 2,66 mmol) com cloreto de oxalilo (solução 2 M em CH2C12, 6,65 mL, 13,3 mmol) seguido por O-(trimetilsilil)hidroxilamina (2,8 g, 26,64 mmol) tal como divulgado no Exemplo 2 para obter 0,48 g (46%) do produto desejado. O ponto de fusão era 182-184 °C. A espectrometria de massa revelou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 391. A análise por RMN de protão em CDC13 resultou nos seguintes desvios quimicos (δ): 0, 98-1, 96 (m, 8H, metilenos do ciclohexilo), 2,05-2,16 (m, 1H, H de C-l), 3,50-3, 67 (bossa larga, 1H, H de C-2), 6,15 (bossa larga, 1H, S02NH), 7,01-7,88 (m, 9H, H de arilo) e 8,98 (s largo, 1H, CONH). 51

Exemplo Preparativo 9 Ácido (cis)-2-[[(4-fenilazo)benzenossulfonil]amino]-ciclo.hexanocarboxílico: Este composto foi preparado a partir de ácido cis-2-amino-l-ciclo-hexanocarboxílico (1,0 g, 7,0 mmol) por reacção com carbonato de sódio (1,48 g, 14,0 mmol) e cloreto de 4-(fenilazo)benzenossulfonilo (2,35 g, 8,38 mmol) em dioxano:água (40:20 mL) do mesmo modo que o divulgado no Exemplo 1. Isto deu 0,915 g (33%). A espectrometria de massa revelou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 388. A análise por RMN de protão em CDC13 resultou nos seguintes desvios químicos (δ): 1,2-1,9 (m, 8H, metilenos de ciclo-hexilo), 1,98-2,14 (m, 1H, H de C—1), 3,45-3,60 (m, 1H, H de C-2), 5,9 (bossa larga, 1H, S02nh) e 7,50-8,05 (m, 9H, H de arilo).

Exemplo 10 (cís)-N-Hidroxi-2-[[(4-fenilazo)benzenossulfonil]amino]-ciclo-hexanocarboxamida (composto lg) : Fez-se reagir uma solução do ácido obtido no Exemplo 9 (0,915 g, 2,36 mmol) com cloreto de oxalilo (solução 2 M em CH2C12, 5,91 mL, 11,82 mmol) seguida por O-(trimetilsilil)hidroxilamina (2,48 g, 23,64 mmol) tal como divulgado no Exemplo 2 para obter 0,44 g (46%) do produto desejado. O ponto de fusão era 162-164°C. A espectrometria de massa revelou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 403. A análise por RMN de protão em CDCI3 resultou nos seguintes desvios químicos (δ): 0,71-2,05 (m, 8H, metilenos de ciclohexilo), 2,6-2,7 (m, 1H, H de C-l), 2,30-2,41 (m, 1H, H de C-2), 6,1-6,2 (bossa larga, S02NH), 7,5-8,1 (m, 10H, H de arilo) e 8,3-8,6 (bossa larga, 2H, CONH, N-OH). 52

Exemplo preparativo 11 Ácido (trans)-2-[[(4-fenilazo)benzenossulfonil]amino]-ciclo-hexanocarboxílico. Este composto foi preparado a partir de ácido trans-2-amino-l-ciclo-hexanocarboxílico (1,0 g, 7,0 mmol) por reacção com carbonato de sódio (1,48 g, 14,0 mmol) e cloreto de 4-(fenilazo)benzenossulfonilo (2,35 g, 8,38 mmol) em dioxano:água (40:20 mL) do mesmo modo que o divulgado no Exemplo 1. Isto deu 1,02 g (37%). O ponto de fusão era 246-248 °C. A espectrometria de massa revelou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 388. A análise por RMN de protão em CDC13 resultou nos seguintes desvios químicos (δ): 1,0-1,98 (m, 8H, metilenos de ciclo-hexilo), 2,05-2,14 (m, 1H, H de C-l), 3,35-3, 45 (m, 1H, H de C-2), 4,88-4,99 (bossa larga, 1H, S02NH) e 7,5-8,1 (m, 9H, H de arilo) .

Exemplo 12 (trans)-N-Hidroxi-2-[[(4-fenilazo)benzenossulfonil]-amino]ciclohexanocarboxamida (composto 2g) : Fez-se reagir uma solução do ácido obtido no Exemplo 11 (1,00 g, 2,58 mmol) com cloreto de oxalilo (solução 2 M em CH2C12, 6,45 mL, 12,9 mmol) seguido por O-(trimetilsilil)hidroxilamina (2,72 g, 25,84 mmol) tal como divulgado no Exemplo 2 para dar 0,35 g (33%) do produto desejado. O ponto de fusão era 194-196 °C. A espectrometria de massa revelou um pico do ião molecular (MH)+ a m/z 403. A análise por RMN de protão em CDC13 resultou nos seguintes desvios químicos (δ): 0,98-1,98 (m, 8H, metilenos de ciclohexilo), 2,10-2,22 (m, 1H, H de C-l), 3,60-3, 78 (m, 1H, H de C-2), 6,35 (d, 53 1Η, S02NH), 7,50-8,15 (m, 9H, H de arilo) e 8,9-9,0 (bossa larga, 2H, CONH, N-OH).

Exemplo 13

Ensaios de Inibição Enzimática: A cinética da inibição enzimática (IC50) dos compostos não peptidilicos lc e 2c foi determinada utilizando MMP-2, MMP-3 e MMP-9 purificadas utilizando ensaios correntes de degradação do substrato fluorométrico. rMMP-2 e -9 humanas foram purificadas em formas activas e as MMP-1, -3 e -13 purificadas foram obtidas de fontes comerciais (Chemicon; Temecula, Calif.) em forma zimogénica e foram activadas por tratamento com ΑΡΜΑ ou pcmb 1 mM (2 horas a 37 °C). Para os estudos cinéticos, utilizou-se um ensaio fluorimétrico corrente baseado na hidrólise de substrato sintético fluorogénico (1 μΜ de McaPLGLDpaAR). Para cada ensaio, a MMP alvo (1 μΜ) e concentrações crescentes de composto de teste foram incubadas a 25 °C durante 30-60 min e a velocidade de hidrólise do substrato foi medida por um fluorómetro Perkin-Elmer a regulações de excitação de 328 nm e uma emissão de 393 nm. Foram monitorizadas a concentração e a clivagem dependente do tempo. Os controlos incluíram tripsina (clivagem não específica) e colagenase bacteriana (clivagem total) e outras proteases de zinco (ACE endopeptidase). Os valores da IC50 (a concentração à qual 50% da actividade enzimática é inibida) foram determinadas pelo traçado de gráficos de % da actividade em função do log negativo da concentração de agente. Os valores da IC50 foram convertidos em valores de Ki utilizando a equação Ki=IC5o/(1+S/Km) . Os valores de Km (μΜ) foram calculados a partir dos valores de Ki de 3-5 experiências separadas. A cinética de inibição de várias MMP também foi determinada utilizando kits 54 ELISA de degradação de substrato de Chemicon (Temecula, Calif.). Ver C. Knight et al., FEBS Lett., 1992, 296, 263-266; L. Windsor et al., Biochem. Biophys. Acta 1977, 1334, 261-272.

Determinações da selectividade de inibidores de MMP: Utilizou-se ensaios de substrato marcado quantitativos e de biopéptido FITC (especificos da matriz) para examinar a inibição selectiva das actividades de MMP. A especificidade para o substrato de MMP-1, -2 e -9 foi avaliada por degradação de colagénio I e IV marcados. Tipicamente, a degradação da biomatriz dependente de MMP foi monitorizada na presença e ausência de compostos candidatos (0,5-500 pm) após incubações de 60-90 min. A potência e selectividade inibidoras também foram analisadas utilizando uma zimografia em gelatina ou colagénio seguida por análise densitométrica. Utilizou-se o ensaio de degradação de colagénio I ou IV marcado (zimografia) para as actividades de M-l, -2 e -9 e a sua inibição. Colagenase bacteriana e EDTA (10 mM) foram incluídas como controlos positivo e negativo. A técnica de película de zimografia in situ também foi utilizada para medir as actividades (gelatinolíticas) de MMP-2 e MMP-9 e a sua inibição por tratamento com fármaco em células alvo e amostras de tecidos. Para avaliação da actividade das MMP, foram utilizadas duas sublinhas celulares humanas de cancro HT-1080, que produzem em abundância diferentes niveis de MMP-2 e MMP-9. A sublinha HT-1080-B produz predominantemente MMP-9 (2 mg/L) enquanto que as células HT-1080-R são abundantes em MMP-2 (1 mg/L). Ambas as linhas celulares também segregam pequenas quantidades de outras MMP incluindo MMP-1 e MMP-3 (<1%) . Ver G. Siegal et al., Câncer Lett. 1993, 69, 123-132; L. Goodly et al., Tumor Biology 1994, 15, 326-336; M. Ikeda et al., Clin. Câncer. Res. 2000, 6, 3290-3296. 55

Os resultados apresentados na Tabela 1 demonstram que ambos os compostos sulfonamidas inibem selectivamente as actividades de MMP-2 e MMP-9 em relação a MMP-3 e endopeptidase. Estes perfis de inibição foram comparados com um inibidor potente de MMP de gama larga GM-6001, que está disponível de Chemicon (Temecula, Calif.). Os controlos negativos incluiram outras proteases e. g., tripsina ou amidopeptidase, cujas actividades não foram afectadas (até 0,1 mM).

Tabela 1: Potências de Inibição de Compostos Não Peptidilicos Contra Enzimas Seleccionadas.

Potências de Inibição, IC50 (nM) Composto MMP-2 MMP-9 MMP-3a Endopeptidase 2c 125 145 >3000 >20000 lc 150 175 >3000 >20000 GM-6001 2 2 80 não detectável

Utilizada minienzima.

Exemplo 14

Ensaios de Invasão Tumoral e Angiogénese: A cascata metastática em passos múltiplos envolve a degradação da matriz de tecidos mediada por MMP, angiogénese, migração/invasão de células tumorais e colonização subsequente em sitios distantes (M. Crocket et al., Biochem Soc. Symp., 1998, 63, 295-313; D.

Keiner et al., Metastasis Rev., 1990, 9, 289-303; J. MacDougall et al., Mol. Med. Today, 2000, 64, 149-56). Estes eventos funcionais foram sobretudo estudados utilizando sistemas de co- 56 cultura de biomatrizes, tais como géis de colagénio e MATRIGEL™ (disponíveis de Becton-Dickinson, Bedford, Mass.; Ver R. Auerbach et al., Pharm. Ther., 1991, 51, 1-11; H. Kleinman et al., Biochem., 1986, 25, 312-318). Contudo estes modelos apresentam complexidade composicional e limitações biológicas. Por exemplo, o tumor de murganho derivado de MATRIGEL™ contém factores mitogénicos importantes e factores de diferenciação bem como proteases que podem despoletar interacções célula-matriz indefinidas (S. Vulicevik et al. exp. Cell Res., 1992, 202, 1-8). Para ultrapassar estas dificuldades utilizou-se uma nova biomatriz humana, Amgel, que está isenta de colagenases e factores mitogénicos, para examinar o comportamento funcional de células alvo (G. Siegel et al., Câncer Lett., 1993, 69, 123- 132) .

Os pontos fortes do sistema Amgel são que imita uma barreira matricial fisiológica e o Amgel por si só não é angiogénico nem tumorigénico, mas apresenta bioactividade controlada tanto in vitro como in vivo. Além disso, o bioensaio de Amgel pode identificar moduladores individuais (agentes naturais e sintéticos) da invasão celular humana, motilidade e angiogénese. Além disso, a biomatriz Amgel contém colagénio I e IV humano, as pegadas in vivo de actividade de MMP-1 e actividades de MMP-2 e -9, respectivamente. Assim, os bioensaios em Amgel são úteis para identificação da selectividade de inibidores de MMP ao mesmo tempo que discriminam os seus efeitos em diferentes estádios da tumorigénese. Consequentemente, para validar se a inibição de MMP se traduziu num efeito biológico, utilizou-se modelos de invasão tumoral humana e angiogénese de Amgel. 57

Bioensaio de invasão por células tumorais humanas: Filtros revestidos com Amgel (8 pm) foram utilizados como barreiras da biomatriz de tecidos colocados entre câmaras de Lucite. Células marcadas (50000) foram cultivadas em filtros de Amgel reconstituídos (75 pg) e as câmaras inferiores foram cheias com meio contendo 5% de soro dialisado. Adicionou-se compostos de teste (0,5-100 pM) e incubou-se durante 72 horas. Os conteúdos da câmara inferior foram recolhidos para resolúer a radioactividade ligada às células e a livre. Ver G. Siegal et al., Câncer Lett. 1993, 69, 123-132; L. Goodly et al.r Tumor Biology 1994, 15, 326-336; M. Ikeda et al., Clin. Câncer. Res. 2000, 6, 3290-3296; R. Singh et al., In Vitro Cell Develop. Biol., 2002, 38, 11.

Bioensaio da angiogénese tumoral humana: A angiogénese foi induzida por co-cultura de células endoteliais humanas (HUVEC) com células tumorais ou factor angiogénico definido (FGF). Utilizou-se os meios das células tumorais (de culturas isentas de soro com 24 horas) para induzir uma resposta angiogénica biológica utilizando linhas celulares de glioma humano produzindo diferentes concentrações de VEGF ou por utilização de factores purificados, tal como FGF 20 pM. As células endoteliais foram cultivadas em filtros revestidos com Amgel e induzidas com um meio angiogénico +/- candidatos a inibidores de MMP. Aplicou-se concentrações de compostos de teste (0,5-500 pM) e tempos de incubação variáveis (1-7 dias) e a diferenciação de células endoteliais (germinação e formação de túbulos semelhantes a capilares) foi examinada por microscopia de luz e um sistema digital computorizado. A avaliação dos compostos lc e 2c em modelos de invasão tumoral humana e angiogénese de Amgel (72 horas de incubação a 58 50-100 μΜ) foi realizada utilizando duas sublinhas celulares de cancro humano HT-1080 (HT-1080-B e HT-1080-R). Os resultados destes ensaios com o composto 2c estão apresentados na Tabela 2 e Figura 1 (não estão apresentados os dados para o composto lc).

Tabela 2: Potências de Inibição do Composto 2C em Ensaios de Função Celular % de Inibição Linha celular Invasão tumoral Angiogénese tumoral HT-1080R 60 ± 5 40 ± 6 HT-1080B 50 ± 8 45 ± 4 HF Sem efeito Sem efeito A avaliação funcional dos compostos lc e 2c revelou uma redução acentuada (40-60%) da invasividade e angiogénese de linhas celulares HT-1080 humanas altamente tumorigénicas. Além disso, nem o composto lc nem o composto 2c teve qualquer efeito sobre células fibroblásticas humanas não tumorigénicas (HF). Além disso, observou-se que os compostos lc e 2c não tinham efeito sobre a proliferação celular e viabilidade celular nas concentrações testadas (dados não apresentados). A paragem da invasão tumoral pelos compostos lc e 2c era paralela aos seus perfis na inibição das actividades de MMP-2 e MMP-9, medida pelo grau de degradação de gelatina por meios celulares submetidos a electroforese. As potências de inibição dos compostos nas células HT-1080 mães que produzem MMP-2 e MMP-9 eram muito superiores (>70%) às suas potências de inibição em linhas celulares que produzem uma só forma de MMP. Estas 59 observações indicam que os compostos lc e 2c produzem efeitos sinérgicos através da inibição simultânea de MMP-2 e MMP-9.

Lisboa, 26 de Novembro de 2009 60

Claims (33)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto com a seguinte fórmula:

   em que X é CH2, CH2CH2 ou CH=CH; e

   em que R2 é Br; metoxilo; em que Y = 0, S ou CH2;

   f

   ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 1
2. 2. Composto da reivindicação 1 em que R2 é:
3. 3.
4. 4 .
5. 5. Composto da reivindicação 1 em que X é CH2CH2. Composto da reivindicação 1 em que X é CH=CH. Composto da reivindicação 1 em que o composto é
6. 6 . Composto da reivindicação 1 em que o composto é

   ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
7. 7. Composto da reivindicação 1 em que o composto é 2

   ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
8. 8. Composto da reivindicação 1 em que 0 composto é um modulador selectivo de uma MMP.
9. 9. Composto da reivindicação 1 em que 0 composto é um modulador da metástase tumoral.
10. 10. Composto da reivindicação 1 em que 0 composto é um modulador de MMP-2, MMP-9 ou uma sua mistura, in vitro.
11. 11. Composto da reivindicação 1 em que 0 composto é um inibidor selectivo de uma MMP.
12. 12. Composto da reivindicação 1 em que 0 composto é um inibidor da metástase tumoral.
13. 13. Composto da reivindicação 1 em que o composto é um inibidor de MMP-2, MMP-9 ou uma sua mistura, in vitro.
14. 14. Composição farmacêutica, compreendendo o composto da reivindicação 1 e um veiculo farmacêutico.
15. 15. Composto da reivindicação 14 em que o composto é o composto das reivindicações 5 ou 6. 3
16. 16. Composição da reivindicação 14, compreendendo ainda um agente anticancerigeno.
17. 17. Utilização de um composto da reivindicação 1, para o fabrico de um medicamento para modulação de uma MMP.
18. 18. Utilização da reivindicação 17 em que a MMP é MMP-2, MMP-9 ou uma sua mistura.
19. 19. Utilização da reivindicação 17 em que o composto é o composto da reivindicação 5.
20. 20. Utilização da reivindicação 17 em que o composto é o composto da reivindicação 6.
21. 21. Utilização da reivindicação 17 em que a modulação é caracterizada por uma IC50 inferior a 3000 nM.
22. 22. Utilização da reivindicação 17 em que a modulação é caracterizada por uma IC50 inferior a 200 nM.
23. 23. Método para utilização do composto da reivindicação 1, compreendendo: administração de uma quantidade eficaz para modulação de metástase tumoral de, pelo menos, um composto da reivindicação 1 a uma célula in vitro.
24. 24. Método da reivindicação 23 em que a quantidade eficaz para modulação é equivalente à quantidade eficaz para inibição. 4
25. 25. Método da reivindicação 23 em que a células é uma célula HT-1080.
26. 26. Método da reivindicação 25 em que a inibição é medida por paragem da invasão tumoral.
27. 27. Método da reivindicação 25 em que a inibição é medida por paragem da angiogénese tumoral.
28. 28. Utilização de um composto da reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para tratamento de um indivíduo com cancro.
29. 29. Utilização da reivindicação 28 em que o cancro é um carcinoma, melanoma, leucemia ou adenoma.
30. 30. Utilização de um composto da reivindicação 28 em que o composto da reivindicação 1 é ptécnica de um cocktail anticancerígeno.
31. 31. Utilização da reivindicação 28 em que o indivíduo é um ser humano.
32. 32. Utilização de um composto da reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para prevenção de cancro num indivíduo.
33. 33. Utilização de um composto da reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para o tratamento de um indivíduo com artrite. Lisboa, 26 de Novembro de 2009 5 Bioensaio em Amgel (72 h) A B o O □ i-h

    O 0 3 Ό O (/) O O O PO 0

    Zimografia em gelatina