PT1621198E - Derivados de carboestirilo substituídos como agonistas do subtipo 1a de receptores 5-ht - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE CARBOESTIRILO SUBSTITUÍDOS COMO AGONISTAS DO SUBTIPO IA DE RECEPTORES 5-HT"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se à utilização de compostos de carboestirilo específicos para a produção de um medicamento para o tratamento de distúrbios específicos do sistema nervoso central associadas ao subtipo de receptores 5-HT1A.

TÉCNICA RELACIONADA A Patente U.S. N°. 5006528; a Patente Europeia N°. 367141 e a Patente Japonesa Kokai (aberta) 7-304740 (1995) contêm a mesma fórmula química estrutural que os derivados de carboestirilo da presente invenção, e as suas propriedades farmacológicas tornam estes fármacos benéficos para tratamento da esquizofrenia.

Os compostos de carboestirilo, bem como os descritos na Patente Japonesa Kokai (aberta) 9-301867 (1997) são úteis para tratamento da ansiedade.

Os derivados de carboestirilo descritos na Patente Europeia N°. 226441 têm o género dos derivados de carboestirilo da presente invenção, e são úteis para o tratamento de hipoxia. 1

Para além dos referidos acima, os derivados de carboestirilo descritos na Patente U.S. N°. 4734416; Patente

Canadiana N° 1117110; Patente Britânica N°. 2017701; Patentes

Alemã Nos. 2911108, 1912105 e 2953723; Patentes Japonesas Kokai (abertas) N° 54130587 (1979), 55-127371 (1980) e 62-149664 (1987) têm o género dos derivados de carboestirilo na presente invenção, e têm actividades anti-histamínicas e actividades de controlo nervoso central.

Está descrito que o aripiprazole (7 — {4 — [4— (2,3— diclorofenil)-1-piperazinil]butoxi}-3,4-di-hidrocarboestirilo, também conhecido como OPC-14597, BMS-337039 e OPS-31) se liga com elevada afinidade a receptores D2 de dopamina e com afinidade moderada a receptores D3 de dopamina e a receptores 5-HT7 (Masashi Sasa et al., CNS Drug Reviews, Vol. 3, N°. 1, pp. 24-33).

Além disso, está descrito que o aripiprazole possui actividade agonista de autorreceptores dopaminérgicos pré-sinápticos, actividade antagonista de receptores D2 pós-sinápticos e actividade agonista parcial de receptores D2 (T. Kikuchi, K. Tottori, Y. Uwahodo, T. Hirose, T. Miwa, Y. Oshiro e S. Morita: J. Pharmacol. Exp. Ther., Vol. 274, pp. 329, (1995); T. Inoue, M. Domae, K. Yamada e T. Furukawa: J. Pharmacol. Exp. Ther., Vol. 277, pp. 137, (1996)).

Contudo, nunca foi descrito que os compostos da presente invenção têm actividade agonista para o subtipo de receptores 5-HTiA.

Foi descrito que as intervenções terapêuticas utilizando ligandos dos receptores 5-HTiA podem constituir tratamentos 2 farmacológicos úteis para o abuso de álcool (Mark Kleven et al., European Journal of Pharmacology, Vol. 281, (1995) pp. 219-228).

Também está descrito que fármacos agonistas de 5-ΗΤχΑ podem ser úteis para o tratamento e/ou profilaxia de distúrbios associados à degeneração neuronal resultante de eventos isquémicos em mamíferos (Patente U.S. N°. 5162375).

Também está descrito que a hipersensibilidade de receptores 5-HTiA pode ser a base biológica da frequência acrescida de ataques de enxaqueca em estados de stress e ansiedade (Massimo Leone et al., Neuro Report, Vol. 9, pp. 2605-2608 (1998)).

Foi descrito recentemente que o monocloridrato de 1,1-dióxido de (-)-(R)-2-[4-[[(3,4-di-hidro-2H-l-benzopiran-2-il)metil]amino]-butil]-1,2-benzisotiazol-3(2H)-ona (BAY-3702), um agonista de receptores 5-HTiA, tem efeitos neuroprotectores, de tipo ansiolítico e antidepressivo em modelos animais (Jean De Vry et al., European Journal of Pharmacology, Vol. 357, (1998), pp. 1-8).

Também está descrito que os agonistas dos receptores 5-HT1A parecem ser agentes antieméticos de largo espectro (Mary C. Wolff et al., European Journal of Pharmacology, Vol. 340, (1997), pp. 217-220; AB Alfieri et al., British Journal of Câncer, (1995), Vol. 72, pp. 1013-1015; Mary C. Wolff et al., Pharmacology Biochemistry and Behavior, 1995, Vol. 52, N°. 3, pp. 571-575; James B. Lucot, European Journal of Pharmacology, 1997, Vol. 253, pp. 53-60). A serotonina desempenha um papel em vários distúrbios neurológicos e psiquiátricos, incluindo a doença de Alzheimer, depressão, naúsea e vómitos, distúrbios alimentares e enxaqueca. (Ver Rasmussen et al., "Chapter 1. Recent Progress in Serotonin 3 5HTia Receptor Modulators", em Annual Reports in Medicinal Chemistry, Vol. 30, Secção I, pp. 1-9, 1995, Academic Press, Inc.). O documento WO 00/16777 divulga que um agonista dos receptores 5-HT1A, buspirona, é eficaz no tratamento de uma variedade de sintomas associados a ADHD, e que a utilização da associação de um agonista de receptores D2 e um agonista de 5-HTia proporciona tratamentos eficazes para ADHD e doença de Parkinson.

Os agonistas de 5-HT1A são eficazes no tratamento de deficiência cognitiva na doença de Alzheimer, doença de Parkinson ou demência senil. O documento US 5824680 divulga que um agonista de 5-H1iA, ipsapirona, é eficaz no tratamento da doença de Alzheimer ao melhorar a memória. O documento US 4687772 descreve que um agonista parcial de 5-HTiA, buspirona, é útil para melhorar a memória recente em doentes que necessitam de tratamento. O documento WO 93/04681 divulga que a utilização de agonistas parciais de 5-HTiA foram utilizados para o tratamento ou prevenção de distúrbios cognitivos associados a doença de Alzheimer, doença de Parkinson ou demência senil.

Os agonistas de 5-HTiA também são eficazes no tratamento da depressão. O documento US 4771053 descreve que um agonista parcial de receptores 5-HTiA, gepirona, é útil no alivio de determinados distúrbios depressivos primários, tais como depressão grave, depressão endógena, depressão major com melancolia e depressão atipica. O documento WO 01/52855 descreve que a utilização da combinação do agonista parcial de receptores 5-HTiA gepirona com um antidepressivo pode tratar eficazmente a depressão. O agonista parcial de receptores 5-5-HT1a buspirona alivia distúrbios motores tais como parkinsonismo induzido por 4 neurolépticos e sintomas extrapiramidais. Estas observações estão descritas no documento US 4438119. Além disso os agonistas de 5-HTia invertem a catalepsia induzida por neurolépticos em roedores, que imita as perturbações do movimento observadas na doença de Parkinson (Mark J. Millan, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2000, Vol. 295, p 853-861). Assim, o aripiprazole pode ser utilizado na gestão da psicose em doentes geriátricos, doença de Alzheimer, doença de Parkinson ou demência senil, uma vez que possui actividades agonistas parciais potentes em receptores D2 e 5-ΗΤχΑ. Além disso, estes doentes podem não sentir sintomas extrapiramidais devido a esta propriedade do aripiprazole.

Anteriormente a esquizofrenia era entendida como sendo causada por hiperactividade no sistema dopaminérgico cerebral. Por este motivo, foram desenvolvidos alguns fármacos com forte actividade bloqueadora de receptores dopaminérgicos. Estes fármacos antipsicóticos típicos são eficazes nos tratamentos dos sintomas positivos da esquizofrenia, que incluem alucinações, ilusões e semelhantes. Durante a última década, foi desenvolvida uma variedade de fármacos antipsicóticos atípicos, que incluem clozapina, risperidona, olanzapina, quetiapina. Estes fármacos têm menos efeitos secundários extrapiramidais, e têm outras actividades para além das suas actividades bloqueadores dos receptores DA. Em contraste com fármacos antipsicóticos típicos, tais como clorpromazina, haloperidol, etc., está descrito que os fármacos antipsicóticos atípicos são mais eficazes contra os sintomas negativos e as deficiências cognitivas associados à esquizofrenia do que os fármacos antipsicóticos típicos, e os fármacos antipsicóticos atípicos também têm menos efeitos secundários extrapiramidais (S. Miyamoto, G. E. Duncan, R. B. Mailman e J. A. Lieberman: Current Opinion in CPNS Investigational Drugs, Vol. 2, pp. 25, (2000)). Contudo, mesmo 5 apesar de os fármacos antipsicóticos atípicos proporcionarem uma farmacoterapia adequada para a esquizofrenia, certos doentes são resistentes às terapias antipsicóticas destes fármacos. Estes doentes podem ou não responder ou tornar-se refractários (í. e. podem sentir-se mais ansiosos, deprimidos ou com disfunção cognitiva) em resposta a terapia antipsicótica. Estes doentes resistentes a tratamento levantam um problema de como é que um médico pode ministrar uma terapia adequada.

Actualmente, vários doentes esquizofrénicos resistentes a tratamento ou refractários a tratamento apresentam sintomas que não respondem adequadamente a uma variedade de classes eficazes conhecidas e doses de fármacos antipsicóticos típicos ou atípicos. Além disso, estes doentes também podem ser esquizofrénicos inveterados ou esquizofrénicos crónicos que são frequentemente repetidamente admitidos nos hospitais e têm depois alta (R. R. Conely e R. W. Buchanan: Schizophr. Buli., Vol. 23, pp. 663, (1997)).

Os sintomas de doentes correspondentes a esquizofrénicos resistentes ao tratamento e refractários ao tratamento envolvem não só os sintomas positivos, mas também os sintomas negativos e distúrbios emocionais, bem como défices cognitivos (i. e., disfunção cognitiva ou perturbações cognitivas) (K. Akiyama e S. Watanabe: Jpn. J. Clin. Psychopharmacol., Vol. 3, pp. 423, (2000)). O défice cognitivo existe separadamente dos sintomas psíquicos num indivíduo esquizofrénico. Assim, o tratamento médico é por isso muito importante, dado que o défice cognitivo pode perturbar o comportamento socialmente adaptável destes indivíduos (C. Hagger, P. Buckley, J. T. Kenny, L. Friedman, D. Ubogy e Η. Y. Meltzer: Biol. Psychiatry, Vol. 34, pp. 702, 6 (1993); T. Sharma e D. Mockler: J. Clin. Psychopharmacol., Vol. 18, (Suppl. 1), pp. 128, (1998)).

Presentemente, a clozapina é um fármaco antipsicótico que é eficaz contra a esquizofrenia resistente ao tratamento. A clozapina (comercializada com o nome de Clozaril) foi aprovada em 1990 pela FDA para o tratamento e gestão de esquizofrénicos gravemente doentes que não responderam adequadamente à terapia antipsicótica corrente (M. W. Jann: Pharmacotherapy, Vol. 11, pp. 179, (1991)). A clozapina foi descrita como sendo eficaz contra défices cognitivos em esquizofrénicos resistentes ao tratamento (C. Hagger, P. Buckley, J. T. Kenny, L. Friedman, D. Ubogy e Η. Y. Meltzer: Biol. Psychiatry, Vol. 34, pp. 702, (1993); Μ. A. Lee, P. A. Thompson e Η. Y. Meltzer: J. Clin. Psychiatry, Vol. 55 (Suppl. B) , pp. 82, (1994); D. E. M. Fujii, I. Ahmed, M. Jokumsen e J. M. Compton: J. Neuropsychiatry Clin. Neurosci., Vol. 9, pp. 240, (1997)). Por exemplo, está descrito que a clozapina melhora défices cognitivos na atenção, tempo de resposta, discurso fluente, etc., em esquizofrénicos resistentes ao tratamento (Μ. A. Lee, P. A. Thompson e Η. Y. Meltzer: J. Clin. Psychiatry, Vol. 55 (Suppl. B) , pp. 82, (1994)). Também foi descrito que a clozapina proporciona melhoramentos efectivos em défices cognitivos numa escala de avaliação objectiva de Wechsler Adult Intelligence Scale - Revised Full Scale (D. E. M. Fujii, I. Ahmed, M. Jokumsen e J. M. Compton: J. Neuropsychiatry Clin. Neurosci., Vol. 9, pp. 240, (1997)).

Demonstrou-se que o receptor 5-HTiA desempenha um papel na eficácia terapêutica da clozapina contra esquizofrenia resistente ao tratamento e défices cognitivos. Esta relação foi evidenciada por uma experiência de ligação utilizando receptores 5-HTia humanos (S. L. Mason e G. P. Reynolds: Eur. J. Pharmacol., Vol. 221, pp. 397, (1992)). Além disso, de acordo com a evolução 7 da farmacologia molecular, é claramente compreendido que actividade agonista de receptores 5-HT1A ou a actividade agonista parcial de receptores 5-HTiA desempenha um papel importante na esquizofrenia resistente ao tratamento e défices cognitivos (A. Newman-Tancredi, C. Chaput, L. Verriele e M. J. Millan: Neuropharmacology, Vol. 35, pp. 119, (1996)). Além disso, foi descrito que o número de receptores 5-HTiA está aumentado no córtex pré-frontal de esquizofrénicos crónicos que foram classificados como resistentes ao tratamento. Esta observação foi explicada por um processo compensatório através do qual a manifestação de sintomas graves de esquizofrenia crónica é um resultado da função neuronal prejudicada mediada por receptores 5-HTiA hipofuncionais (T. Hashimoto, N. Kitamura, Y. Kajimoto, Y. Shirai, 0. Shirakawa, T. Mita, N. Nishino e C. Tanaka: Psychopharmacology, Vol. 112, pp. S35, (1993)).

Consequentemente, espera-se um abaixamento da transmissão neuronal mediada através de receptores 5-5-ΗΤχΑ em

esquizofrénicos resistentes a tratamento. Assim, a eficácia clinica da clozapina pode estar relacionada com a sua eficácia agonista parcial nos receptores 5-HT1A (A. Newman-Tancredi, C. Chaput, L. Verriele e M. J. Millan: Neuropharmacology, Vol. 35, pp. 119, (1996)). A actividade agonista nos receptores 5-HTiA pode estar relacionada com os efeitos clínicos da clozapina, e esta hipótese é apoiada por um estudo por tomografia de emissão de positróes em primatas que demonstrou que a clozapina interactua com receptores 5-HTiA no cérebro numa dose terapeuticamente eficaz (Y. H. Chou, C. Halldin e L. Farde: Int. J. Neuropsychopharmacol., Vol. 4 (Supl. 3), pp. S130, (2000)).

Além disso, a tandospirona que é conhecida como um agonista selectivo dos receptores 5-ΗΤχΑ, melhorou défices cognitivos em doentes esquizofrénicos crónicos (T. Sumiyoshi, M. Matsui, I. Yamashita, S. Nohara, T. Uehara, M. Kurachi e Η. Y. Meltzer: J. Clin. Pharmacol., Vol. 20, pp. 386, (2000)). Enquanto que, em ensaios em animais, todos os relatórios não sugeriram sempre que a actividade agonista de receptores 5-HTia pode estar relacionada com o défice cognitivo, contudo, a 8-OH-DPAT (8-hidroxi-2-(di-n-propilamino)tetralina), que é conhecida como um agonista selectivo de receptores 5-HTiA, melhora os défices de aprendizagem e memória induzidos por escopolamina conhecida como um antagonista de receptores muscarinicos, sugerindo uma relação entre a actividade agonista dos receptores 5-HTiA e melhoramentos de défices cognitivos (M. Carli, P. Bonalumi, R. Samanin: Eur. J. Neurosci., Vol. 10, pp. 221, (1998); A. Meneses e E. Hong: Neurobiol. Learn. Mem., Vol. 71, pp. 207, (1999)). Fármacos antipsicóticos atipicos, tais como risperidona e olanzapina, foram comercializados depois da clozapina, e está descrito que estes fármacos melhoram a esquizofrenia resistente ao tratamento ou défices cognitivos em esquizofrénicos resistentes ao tratamento (M. F. Green, B. D. Marshall, Jr., W. C. Wirshing, D. Ames, S. R. Marder, S. McGurck, R. S. Kern e J. Mintz: Am. J. Psychiatry, Vol. 154, pp. 799, (1997); G. Bondolifi, H. Dufour, M. Patris, J. P. May, U. Billeter, C. B. Eap e P. Baumann, em representação do Grupo de Estudo da risperidona: Am. J. Psychiatry, Vol. 155, pp. 499,(1998); A. Breier, S. H. Hamilton: Biol. Psychiatry, Vol. 45, pp. 403, (1999)).

Em contraste com relatórios de que a clozapina era moderadamente eficaz contra esquizofrenia resistente ao tratamento, a risperidona e a olanzapina não foram consistentemente superiores a fármacos antipsicóticos típicos nas suas eficácias contra esquizofrenia resistente ao tratamento. Assim, a risperidona e a olanzapina ligam-se com menos afinidade a receptores 5-HTiA humanos (S. Miyamoto, G. E. Duncan, R. B. Mailman e J. A. Lieberman: Current Opinion in CPNS 9

Investigational Drugs, Vol. 2, pp. 25, (2000)), e como tal estes fármacos não podem claramente ter actividades através de receptores 5-HT1A humanos a doses clinicamente eficazes.

Portanto, presentemente, entende-se que a clozapina é eficaz contra esquizofrenia resistente ao tratamento (D. W. Bradford, Μ. H. Chakos, B. B. Sheitman, J. A. Lieberman: Psychiatry Annals, Vol. 28, pp. 618, (1998); A. Inagaki: Jpn. J. Clin. Psychopharmacol., Vol. 3, pp. 787, (2000)).

Tal como explicado acima, a actividade agonista de receptores 5-HTiA é importante para melhoramento da esquizofrenia resistente ao tratamento ou do défice cognitivo provocado pela esquizofrenia resistente ao tratamento. A clozapina é eficaz contra a esquizofrenia resistente ao tratamento, contudo, a sua utilização é limitada devido ao seu efeito secundário grave de provocar agranulocitose que requer que os doentes façam análises periódicas ao sangue. Nestas circunstâncias, é altamente desejado o desenvolvimento de um fármaco antipsicótico seguro com actividade agonista total ou parcial potente nos receptores 5-HT1A. O composto de carboestirilo na presente invenção liga-se com elevada afinidade e apresenta actividade agonista parcial potente nos receptores 5-HTiA e tem uma actividade intrínseca mais elevada (cerca de 68%) em comparação com a de clozapina. Assim, o composto na presente invenção tem uma actividade agonista nos receptores 5-HTiA que é mais potente do que a actividade agonista da clozapina. Deste modo, o presente composto de carboestirilo pode representar um fármaco mais potente e altamente seguro para curar défices cognitivos causados por esquizofrenia resistente ao tratamento, défices cognitivos causados por esquizofrenia inveterada e défices cognitivos causados por esquizofrenia crónica, em comparação com 10 outros tratamentos fármaco-terapêuticos actualmente disponíveis. Isto é, o composto na presente invenção pode demonstrar ser uma terapia farmacológica potente e mais segura para défices cognitivos causados por esquizofrenia resistente ao tratamento, défices cognitivos causados por esquizofrenia inveterada ou défices cognitivos causados por esquizofrenia crónica, que não respondem aos fármacos antipsicóticos actualmente disponíveis seleccionados de clorpromazina, haloperidol, sulpiride, flufenazina, perfenazina, tioridazina, pimozide, zotepina, risperidona, olanzapina, quetiapina e amisulpride.

Em particular, o composto de carboestirilo na presente invenção pode constituir uma terapia à base de fármaco potente e altamente segura contra défices cognitivos causados por esquizofrenia resistente ao tratamento, défices cognitivos causados por esquizofrenia inveterada ou défices cognitivos causados por esquizofrenia crónica, que não respondem a de 1 a 3 fármacos antispicóticos típicos seleccionados do grupo consistindo em clorpromazina, haloperidol e perfenazina, e um fármaco antipsicótico atípico seleccionado do grupo consistindo em risperidona, olanzapina, quetiapina e amisulpride.

Além disso, o composto na presente invenção pode constituir uma terapia à base de fármaco potente e altamente segura contra défices cognitivos causados por esquizofrenia resistente ao tratamento, défice cognitivo causado por esquizofrenia inveterada ou défice cognitivo causado por esquizofrenia crónica, que não respondem a 2 fármacos antipsicóticos típicos seleccionados do grupo consistindo em clorpromazina, haloperidol e perfenazina, e um fármaco antipsicótico atípico seleccionado do grupo consistindo em risperidona, olanzapina, quetiapina e amisulpride. 11

Além disso, o composto na presente invenção pode constituir uma terapia à base de fármaco potente e altamente segura contra défices cognitivos causados por esquizofrenia resistente ao tratamento, défices cognitivos causados por esquizofrenia inveterada ou défices cognitivos causados por esquizofrenia crónica, que não respondem a de 1 a 2 fármacos antipsicóticos típicos seleccionados do grupo consistindo em clorpromazina e haloperidol, e um fármaco antipsicótico atípico seleccionado do grupo consistindo em risperidona, olanzapina, quetiapina e amisulpride.

Além disso, o composto na presente invenção pode constituir uma terapia à base de fármaco potente e altamente segura contra défices cognitivos causados por esquizofrenia resistente ao tratamento, défice cognitivo causados por esquizofrenia inveterada ou défice cognitivo causado por esquizofrenia crónica, que não respondem a 2 fármacos antipsicóticos típicos seleccionados do grupo consistindo em clorpromazina e haloperidol, e um fármaco antipsicótico atípico seleccionado do grupo consistindo em risperidona, olanzapina, quetiapina e amisulpride.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

De acordo com a presente invenção é proporcionada a utilização de um composto da fórmula (1) de acordo com a reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para tratamento de um doente que sofre de um distúrbio do sistema nervoso central associado ao subtipo de receptores 5-ΗΤχΑ de acordo com a reivindicação 1.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO 12

Como o composto agonista do subtipo de receptores 5-HTiA para utilização de acordo com a presente invenção, são utilizados derivados de carboestirilo representados pela fórmula (1) seguinte:

em que a ligação carbono-carbono entre as posições 3 e 4 do esqueleto de carboestirilo é uma ligação simples ou dupla.

Os compostos com a fórmula geral (1) apresentada acima são compostos conhecidos, que estão divulgados em publicações tais como a patente US N° 5006528 ou que podem ser prontamente preparados pelos processos descritos na publicação acima. O derivado de carboestirilo representado pela fórmula (1) na presente invenção pode ser facilmente convertido no seu sal de adição de ácido por reacção com um ácido farmaceuticamente aceitável. Exemplos desse ácido incluem ácidos inorgânicos, tais como ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico e ácido bromidrico; ácidos orgânicos, tais como ácido oxálico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico e ácido benzóico. O solvente dos solvatos é um solvente utilizado convencionalmente na recristalização. Exemplos de solvatos 13 incluem hemi-hidratos, hidratos e alcoolatos, tais como etanolatos, metanolatos e isopropanolatos.

Os compostos desejados, preparados pelas reacções referidas acima, podem ser facilmente isolados e purificados por processos de separação correntes, tais como extracção com solventes, diluição, recristalização, cromatografia em coluna e cromatografia em camada fina preparativa. 0 agonista parcial e potente de receptores 5-HTiA na presente invenção é útil para distúrbios do sistema nervoso central associados ao subtipo de receptores 5-HTiA seleccionados de défices cognitivos causados por esquizofrenia resistente ao tratamento, por esquizofrenia inveterada ou por esquizofrenia crónica.

Os compostos da presente invenção podem ser adequadamente preparados em formulações farmaceuticamente aceitáveis (ver Patente US N°. 5006528, Patente Europeia N°. 367141 e Patente

Japonesa Kokai (aberta) 7-304740 (1995), e Pedido de Patente

Japonesa N°. 2000-194976). A dosagem destas preparações farmacêuticas pode ser seleccionada apropriadamente dependendo do modo de administração, da idade e sexo e outros factores do doente, da gravidade da doença e outros factores. Em geral, contudo, a dose diária do composto activo está, de um modo preferido, dentro da gama de 0,0001 a 50 mg por quilograma de peso corporal. É desejável que o composto do ingrediente activo esteja contido em cada forma de dosagem unitária numa quantidade de 0,001 a 1000 mg, particularmente 0,01 a 100 mg, mais particularmente 0,1 a 50 mg, ainda mais particularmente 1 mg a 20 mg. 14

Ensaios farmacológicos

1. MATERIAIS E MÉTODOS 1.1 Composto de Teste 7—{4— [4— (2,3-Diclorofenil)-1-piperazinil]butoxi}-3,4-di-hidrocarboestirilo (aripiprazole) foi utilizado como o composto de teste. 1.2 Compostos de Referência

Serotonina (5-HT) e WAY-100635 (N-[2-[4-(2-metoxifenil)-1-piperazinil]etil]-N-(2-piridimil)ciclo-hexanocarboxamida, um antagonista dos receptores 5-HT1A, produzido por RBI (Natick, MA) foram utilizados como compostos de referência. 1.3 Veiculo

Sulfóxido de dimetilo (DMSO) produzido por Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO) foi utilizado como veiculo. 1.4 Preparação dos Compostos de Teste e de Referência 0 composto de teste foi dissolvido em sulfóxido de dimetilo (DMSO) a 100% para dar soluções mãe 100 μΜ (a concentração final de DMSO em todos os tubos contendo composto de teste era 1%, v/v) . Todos os outros compostos de referência foram preparados pelo mesmo método utilizando água bidestilada em vez de DMSO. 15 35

1.5 Processo Experimental do Ensaio de Ligação de [ SJGTPyS

Os compostos de teste e referência foram estudados em triplicado a 10 concentrações diferentes (0,01, 0,1, 1, 5, 10, 50, 100, 1000, 10000 e 50000 nM) quanto aos seus efeitos sobre a 35 ligação de [ SJGTPyS a membranas de células CHO de h5-HTiA. As reacções foram realizadas em tubos de ensaio de vidro de 5 mL contendo 8 pL de fármaco de teste/referência misturados com 7 92 pL de tampão (25 mM de Tris HC1, 50 mM de NaCl, 5 mM de

MgCl2, 0,1 mM de EGTA, pH = 7,4) contendo GDP (1 pM) , [^SjGTPyS (0,1 nM) e membranas de células CHO de h5-HT1A (10 pg proteína/reacção; NEN Life Science Products, Boston, MA; número de catálogo CRM035, número de lote 501-60024, GenBank # X13556). As reacções decorreram durante 60 min à temperatura ambiente e foram terminadas por filtração rápida através de papel de filtro Whatman GFP/B, utilizando um colector Brandel e 4 lavagens com 3 35 mL de tampão gelado. A radioactividade de S ligada ao papel de filtro foi medida utilizando contagem de cintilações liquidas (1272 Clinigamma, LKB/Wallach).

1.6 Processo Experimental para Determinar a Afinidade de Ligação do composto de Teste (aripiprazole) ao Receptor h5-HTiA O composto de teste foi estudado em triplicado a 10 concentrações diferentes (0,01, 0, 1, 1, 10, 50, 100, 500, 1000, 5000 e 10000 nM) para determinar o seu deslocamento da 3 ligação de [ H] 8-OH-DPAT (1 nM; NEN Life Sciences; número de catálogo; NET 929, lote número 3406035, Actividade Especifica = 124,9 Ci/mmol) a receptores h5-HT1A em membranas de células CHO (15-20 pg de proteína; NEN Life Science Products, número de catálogo CRM035, número de lote 501-60024). As membranas (396 16 3 yL) foram incubadas em tubos de vidro de 5 mL contendo [ H]8-0H-DPAT (396 yL), composto de teste ou veiculo (8 yL) e tampão A (50 mM de Tris.HCl, 10 mM de MgS04, 0,5 mM de EDTA, 0,1% (p/v) de ácido ascórbico, pH = 7,4). Todos os ensaios decorreram durante 60 min à temperatura ambiente e foram terminados por filtração rápida através de papel de filtro Whatman GFP/B (pré-embebido em tampão B; 50 mM de Tris.HCl, pH = 7,4), utilizando um colector Brandel e 4 lavagens com 1 mL de tampão B gelado. A ligação não especifica foi determinada na presença de 10 yM de (+)8-OH-DPAT. 1.7 Parâmetros Determinados

A serotonina (5-HT) é um agonista total do receptor 5-HTiA 35 que estimula aumentos da ligação basal de [ SJGTPyS a receptores h5-HTiA em membranas de células CHO recombinantes. O composto de teste foi estudado a 10 concentrações para determinar os seus 35 efeitos sobre a ligação basal de [ SJGTPyS em relação a produzida por 10 yM de 5-HT. A potência relativa (EC50, intervalo de confiança de 95%) e actividade agonista intrínseca (% de Emax para 10 yM de 5-HT) foram calculadas para cada composto por análise de regressão não linear computorizada de dados completos de concentração-efeito. A afinidade de ligação do composto de teste ao receptor h5-HTiA foi determinada pela sua aptidão para 3 impedir a ligação de [ H] 8-OH-DPAT as membranas de células CHO que exprimem este receptor. A análise por regressão não linear dos dados de ligação de competição foi utilizada para calcular uma constante de inibição (IC50, intervalo de confiança de 95%) , que é a concentração de composto de teste que ocupa metade dos 3 sítios de h5-HT1A especificamente ligados por [ H]8-OH-DPAT. A afinidade dos receptores h5-HT1A para o composto de teste (Ki, 17 intervalo de confiança de 95%) foi calculada pela equação, Ki = (IC50)/(1 + ([ [3H] 8-OHDPAT] /Kd), em que Kd para [3H] 8-OH-DPAT em h5-HT]_A = 0,69 nM (NEN Life Sciences). Todas as estimativas de afinidade de ligação do fármaco, potência e eficácia intrínseca no receptores h5-HTiA foram calculadas utilizando o GraphPad Prism versão 3.00 para Windows (GraphPad Software, San Diego, CA) .

2. RESULTADOS O composto de teste e 5-HT produziram aumentos dependentes 35 da concentração acima da ligação basal de [ SJGTPyS. 1% de DMSO testado só não teve efeito sobre a ligação basal ou induzida por fármaco de [^SJGTPyS. O composto de teste (EC50 = 2,12 nM), 5-HT (EC50 = 3 , 67 nM), , 35 estimularam de forma potente a ligação basal de [ SJGTPyS. As estimativas de potência e eficácia agonista intrínseca foram derivadas por análise de regressão não linear com coeficiente de 2 correlação (r ) >0,98 em cada caso (Tabela 1) . O composto de teste exerceu eficácias agonistas parciais na gama de 65-70%. WAY-100635 não produziu alteração significativa (teste t de 35

Student desemparelhado) na ligação basal de [ SJGTPyS a todas as concentrações testadas (Tabela 1) . Contudo o WAY-100635 inibiu completamente os efeitos de 5-HT e composto de teste sobre a 35 ligação de [ SJGTPyS a receptores h5-HTiA em membranas de células CHO (Tabela 2). As Tabelas 1 e 2 estão apresentadas adiante. O composto de teste demonstrou ligação com afinidade elevada a receptores h5-HT1A em membranas de células CHO (IC50 = 4,03 nM, intervalo de confiança de 95% = 2,67 a 6,08 nM; Ki = 1,65 nM, intervalo de confiança de 95% = 1,09 a 2,48 nM). 18

Tabela 1 Potência (EC50) e Eficácia Agonista Intrínseca (Emax) de composto de Teste e Fármacos de Referência num Ensaio 35 de Ligação de [ SJGTPyS a h5-HT1A de Membranas de Células CHO. Fármaco EC50, nM (Intervalo de Confiança de 95%) E max (% + MEP) Adequação da Adaptação 2 (r ) Composto de Teste 2,12 (0,87 a 5,16) 68,13 ± 3,16 0,986 5-HT 3, 67 (1,56 a 8,63) 98,35 ± 4,47 0, 986 WAY-100635 — - —

Tabela 2 Potência Inibidora (IC50) de WAY-100635 versus. 1 μΜ de Concentração de 5-HT e Composto de Teste num Ensaio de Ligação de [ SJGTPyS a h5-HTiA de Membranas de células CHO 19

Combinação de Fármacos Potência de Inibição de WAY-100635, IC50, nM (Intervalo de Confiança de 95%) Adequação da Adaptação 2 (r ) 5-HT + WAY-100635 217,1 0,988 (127,4 a 369,7) Composto de Teste 392,2 0,989 + WAY-100635 (224,1 a 686,2)

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Claims (7)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um composto de carboestirilo da fórmula (1):

   em que a linha a tracejado representa uma ligação simples ou dupla, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, para a produção de um medicamento para o tratamento de distúrbios do sistema nervoso central associados ao subtipo de receptores 5-HTiA, seleccionados de défice cognitivo causado por esquizofrenia resistente ao tratamento, défice cognitivo causado por esquizofrenia inveterada ou défice cognitivo causado por esquizofrenia crónica.
2. 2. Utilização da reivindicação 1, em que o distúrbio não responde a fármacos antipsicóticos seleccionados de clorpromazina, haloperidol, sulpiride, flufenazina, perfenazina, tioridazina, pimozide, zotepina, risperidona, olanzapina, quetiapina e amisulpride.
3. 3. Utilização da reivindicação 2, em que o distúrbio não responde a (i) 1-3 fármacos antipsicóticos típicos seleccionados de clorpromazina, haloperidol e perfenazina, e 1 (ii) um fármaco antipsicótico atípico seleccionado de risperidona, olanzapina, quetiapina e amisulpride.
4. 4. Utilização da reivindicação 3, em que o distúrbio não responde a dois dos fármacos antipsicóticos típicos.
5. 5. Utilização da reivindicação 3, em que o distúrbio não responde a clorpromazina e/ou haloperidol.
6. 6. Utilização da reivindicação 5, em que o distúrbio não responde a clorpromazina e haloperidol.
7. 7. Utilização de qualquer das reivindicações 1 - 6, em que o composto de carboestirilo é 7-{4-[4-(2,3-diclorofenil)-1-piperazinil]butoxi}-3,4-di-hidro-carboestirilo. Lisboa, 29 de Maio de 2007 2