PT1616575E - Método para tratar inflamação - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "MÉTODO PARA TRATAR INFLAMAÇÃO" A inflamação é normalmente uma resposta localizada, protetora ao trauma ou invasão microbiana que destrói, dilui, ou bloqueia o agente injurioso e o tecido lesado. É caracterizada na forma aguda pelos sinais clássicos de dor, calor, vermelhidão, inchaço, e perda de função. Microscopicamente, envolve uma série complexa de acontecimentos, incluindo a dilatação das arteriolas, capilares, e vénulas, com aumento da permeabilidade e fluxo sanguineo, exsudação de fluidos, incluindo proteinas plasmáticas, e migração de leucócitos para a área de inflamação.

As doenças caracterizadas por inflamação são causas significativas de morbidez e mortalidade em humanos. Normalmente, a inflamação ocorre como uma resposta defensiva à invasão do hospedeiro por material estranho, particularmente microbiano. As respostas ao trauma mecânico, toxinas, e neoplasia também podem resultar em reações inflamatórias. A acumulação e subsequente ativação de leucócitos são acontecimentos centrais na patogénese da maioria das formas de inflamação. As deficiências de inflamação comprometem o hospedeiro. Inflamação excessiva causada pelo reconhecimento anormal do tecido do hospedeiro como estranho ou prolongamento do processo inflamatório podem conduzir a doenças inflamatórias tão diversas como diabetes, arteriosclerose, cataratas, lesão de reperfusão, e cancro, a síndromes pós-infeciosos tais como na meningite infeciosa, febre reumática, e a doenças reumáticas tais como lúpus eritematoso sistémico e artrite reumatóide. A centralidade da resposta inflamatória nestes processos variados de doença torna a sua regulação um elemento 2 fundamental no controlo da prevenção ou cura da doença humana.

Uma citocina importante no processo inflamatório é a interleucina-8 (IL-8) . A IL-8 é uma quemocina. Foi identificada como um agonista para neutrófilos com base em dois efeitos, quimiotaxia e a libertação de enzimas granulares. A IL-8 liga-se a dois recetores nos neutrófilos. Os recetores da IL-8 também são encontrados em monócitos, basófilos, e eosinófilos. Em fibroblastos humanos, foi observado que o citomegalovirus induz a expressão dos recetores da IL-8 e replica mais rapidamente quando as células são expostas à IL-8. A IL-8 é um quimioatraente potente para neutrófilos; e as fases iniciais da doença periodontal são caracterizadas pelo influxo de neutrófilos. A IL-8 é um indutor potente de angiogénese em várias condições inflamatórias crónicas dependentes da angiogénese, incluindo artrite reumatóide, psoriase, e fibrose pulmonar idiopática. Além disso, a IL-8 é uma fonte importante de atividade angiogénica no cancro do pulmão humano. Igualmente, a expressão da IL-8 está correlacionada com a atividade metastática experimental de algumas linhas de células de melanoma. Assim, um método eficaz para tratar doenças inflamatórias seria administrar um agente que inibiria a IL-8. 0 documento WO 99/27103 descreve um polipeptídeo de mamifero tipo citocina chamado ZcytolO (IL-20), polinucleotideos que codificam o mesmo, anticorpos que se ligam especificamente ao polipeptídeo, e usos do mesmo para promover a cura de feridas e para estimular a proliferação das plaquetas. 0 documento WO 99/03982 descreve uma proteína da IL-20, moléculas de ácido nucleico correspondentes, métodos de diagnóstico para detetar disfunções relacionadas com o sistema imune, e métodos terapêuticos para tratar as ditas 3 disfunções. 0 polipeptídeo revelado no documento WO 99/03982 é 100% idêntico a IL-17.

As Figuras 1-8 são representações esquemáticas de um número representativo de formas de realização do recetor solúvel da IL-20. A presente invenção providencia a utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para o fabrico de um medicamento para o tratamento de dermatite atópica; uma doença inflamatória intestinal selecionada de colite ulcerativa e doença de Crohn; e artrite reumatóide. A presente invenção providencia a utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para o fabrico de um medicamento para o tratamento da doença inflamatória da pele dermatite de contacto; uma lesão pulmonar inflamatória selecionada das síndromes respiratórias do adulto, fibrose cística, pneumonia, pneumonia bacteriana, e fibrose pulmonar idiopática; uma doença inflamatória selecionada do choque séptico e falência múltipla de orgãos, e uma doença selecionada do cancro do pulmão humano e melanoma humano, em que a dita doença é causada pela regulação positiva da IL-8 induzida pela IL-20.

Demonstrou-se que a IL-20 regula positivamente a IL-8. Doenças inflamatórias nas quais a IL-8 desempenha um papel significativo, e para as quais uma diminuição na IL-8 seria benéfica são síndrome respiratória no adulto (ARD), choque séptico, falência múltipla de orgãos, lesão pulmonar inflamatória tal como asma ou bronquite, pneumonia bacteriana, psoríase e doença inflamatória intestinal tal como colite ulcerativa e doença de Crohn, eczema, dermatite atópica e dermatite de contacto. Assim, os antagonistas da IL-20 podem ser utilizados para tratar estas doenças. 4

Definições

Antes de expor a invenção em detalhe, pode ser útil para o entendimento da mesma definir os termos seguintes. 0 termos "terminal amino" e "terminal carboxilo" são utilizados aqui para denotar posições dentro dos polipeptideos. Onde o contexto o permite, estes termos são utilizados com referência a uma sequência ou porção de um polipeptideo particular para denotar proximidade ou posição relativa. Por exemplo, uma dada sequência posicionada no terminal carboxilo para uma sequência de referência dentro de um polipeptideo está localizada próxima do terminal carboxilo da sequência de referência, mas não está necessariamente no terminal carboxilo do polipeptideo completo. 0 termo "par complemento/anti-complemento" denota frações não idênticas para formar um par não covalentemente associado, estável nas condições apropriadas. Por exemplo, biotina e avidina (ou streptavidina) são membros prototípicos de um par complemento/anti-complemento. Outros pares complemento/anti-complemento exemplares incluem pares recetor/ligando, pares anticorpo/antígeno (ou hapteno ou epítopo), pares de polinucleotídeo senso/antissenso, e afins. Onde a dissociação subsequente do par complemento/anti-complemento é desejável, o par complemento/anti-complemento tem preferencialmente uma afinidade de ligação de <109 M_1. 0 termo "complementos de uma molécula de polinucleotídeo" é uma molécula de polinucleotídeo que tem uma sequência base complementar e orientação reversa quando comparada com a sequência de referência. Por exemplo, a

sequência 5' ATGCACG-GG 3' é complementar a 5' CCCGTGCAT 3' . 0 termo "contig" denota um polinucleotídeo que tem um troço contíguo de sequência idêntica ou complementar a um outro polinucleotídeo. Sequências contíguas dizem-se 5 "sobrepostas" a um dado troço da sequência de polinucleotídeo seja na sua totalidade ou ao longo de um troço parcial do polinucleotideo. Por exemplo, contigs representativos da sequência do polinucleotideo 5'-ATGGCITAGCTT-3' são 5'-TAGCTTgagtct-3' e 3'-gtcgacTACCGA-5' . 0 termo "sequência de nucleotideo degenerada" denota uma sequência de nucleotideos que inclui um ou mais codões degenerados (quando comparado com uma molécula de polinucleotideo de referência que codifica um polipeptideo). Os codões degenerados contêm diferentes tripletos de nucleotideos, mas codificam o mesmo resíduo de aminoácido (isto é, tripletos GAU e GAC cada codificam Asp) . 0 termo "vetor de expressão" é utilizado para denotar uma molécula de ADN, linear ou circular, que compreende um segmento que codifica um polipeptideo de interesse operativamente ligado a segmentos adicionais que providenciam a sua transcrição. Tais segmentos adicionais incluem sequências promotoras e terminadoras, e também podem incluir uma ou mais origens de replicação, um ou mais marcadores selecionáveis, um potenciador, um sinal de poliadenilação, etc. Vetores de expressão são geralmente derivados de plasmídeo ou ADN virai, ou podem conter elementos de ambos. 0 termo "isolado", quando aplicado a um polinucleotideo, denota que o polinucleotideo foi removido do seu meio genético natural e está, portanto, livre de outras sequências codificantes indesejadas ou extrínsecas, e está numa forma adequada para utilização dentro de sistemas de produção de proteína de engenharia genética. Tais moléculas isoladas são aquelas que são separadas do seu ambiente natural e incluem ADNc e clones genómicos. As moléculas de ADN isoladas da presente invenção estão livres de outros genes com os quais estão normalmente associadas, 6 mas podem incluir regiões não traduzidas 5' e 3' que ocorrem naturalmente, tais como promotores e terminadores. A identificação de regiões associadas será evidente a alguém com habilitação comum na arte (ver por exemplo, Dynan e Tijan, Nature 316:774-78 (1985).

Um polipeptídeo ou proteína "isolado" é um polipeptídeo ou proteína que é encontrado numa condição diferente do seu ambiente nativo, tal como separado do sangue e tecido animal. Numa forma preferida, o polipeptídeo isolado é substancialmente livre de outros polipeptídeos, particularmente outros polipeptídeos de origem animal: é preferido providenciar os polipeptídeos numa forma altamente purificada, isto é superior a 95% de pureza, mais preferencialmente superior a 99% de pureza. Quando utilizado neste contexto, o termo "isolado" não exclui a presença do mesmo polipeptídeo em formas físicas alternativas, tais como dímeros ou formas derivadas ou em alternativa glicosiladas. 0 termo "operativamente ligado", quando se refere a segmentos de ADN, indica que os segmentos estão arranjados de maneira que funcionam em conjunto para cumprir os seus fins pretendidos, por exemplo, a transcrição inicia-se no promotor e prossegue ao longo do segmento codificador em direção ao terminador.

Um "polinucleotídeo" é um polímero de cadeia simples ou dupla de bases de desoxirribonucleotídeo ou ribonucleotídeo lidos a partir da extremidade 5' para a 3'. Polinucleotídeos incluem ARN e ADN, e podem ser isolados a partir de fontes naturais, sintetizados in vitro, ou preparados a partir de uma combinação de moléculas naturais e sintéticas. Os tamanhos dos polinucleotídeos são expressos em pares de bases (abreviados "bp"), nucleotídeos ("nt"), ou quilobases ("kb"). Onde o contexto o permite, os últimos dois termos podem descrever polinucleotídeos que são de cadeia simples ou de cadeia dupla. Quando o termo é 7 aplicado a moléculas de cadeia dupla é utilizado para denotar o comprimento global e será entendido como sendo equivalente ao termo "pares de base". Será reconhecido por aqueles habilitados na arte que as duas cadeias de um polinucleotideo de cadeia dupla podem diferir ligeiramente em comprimento e que as extremidades do mesmo podem ser escalonadas como resultado da clivagem enzimática; assim, todos os nucleotídeos dentro de uma molécula de polinucleotídeo de cadeia dupla podem não estar emparelhados. Tais extremidades não emparelhadas não excederão, em geral, os 20 nucleotídeos de comprimento.

Um "polipeptídeo" é um polímero de resíduos de aminoácido juntos por ligações peptídicas, sejam produzidos naturalmente ou sinteticamente. Polipeptídeos com menos de cerca de 10 resíduos de aminoácido são normalmente referidos como "péptidos". O termo "promotor" é utilizado aqui pelo seu significado reconhecido na arte de denotar uma porção de um gene que contém sequências de ADN que providenciam a ligação da ARN polimerase e iniciação da transcrição. As sequências promotoras são normalmente, mas não sempre, encontradas nas regiões não codificantes 5' dos genes.

Uma "proteína" é uma macromolécula compreendendo uma ou mais cadeias de polipeptídeo. Uma proteína também pode compreender componentes não peptídicos, tais como grupos carbohidratos. Os carbohidratos e outros substituintes não peptídicos podem ser adicionados a uma proteína pela célula na qual a proteína é produzida, e variarão com o tipo de célula. As proteínas são definidas aqui em termos das suas estruturas principais de aminoácido; substituintes tais como grupos carbohidratos não são geralmente especificados, mas podem, ainda assim, estar presentes. O termo "recetor" denota uma proteína associada à célula que se liga a uma molécula bioativa (isto é, um ligando) e medeia o efeito do ligando na célula. Recetores ligados à membrana são caracterizados por uma estrutura multi-domínio que compreende um domínio de ligação ao ligando extracelular e um domínio efetor intracelular que está tipicamente envolvido na transdução do sinal. A ligação do ligando ao recetor resulta numa alteração conformacional no recetor que causa uma interação entre o domínio efetor e outra (s) molécula(s) na célula. Esta interação, por sua vez, conduz a uma alteração no metobolismo da célula. Acontecimentos metabólicos que estão ligados às interações recetor-ligando incluem transcrição génica, fosforilação, desfosforilação, aumentos na produção de AMP cíclica, mobilização de cálcio celular, mobilização de lípidos de membrana, adesão celular, hidrólise de lípidos inositol e hidrólise de fosfolípidos. Em geral, os recetores podem estar ligados à membrana, citosólicos ou nucleares, monoméricos (por exemplo, recetor de hormona estimuladora da tiróide, recetor beta-adrenérgico) ou multimérico (por exemplo, recetor PDGF, recetor da hormona de crescimento, recetor da IL-3, recetor GM-CSF, recetor G-CSF, recetor da eritropoietina e recetor da IL-6). 0 termo "sequência sinal secretora" denota uma sequência de ADN que codifica um polipeptídeo (um "péptido secretor") que, como um componente de um polipeptídeo maior, dirige o polipeptídeo maior através de uma via secretora de uma célula na qual é sintetizado. 0 polipeptídeo maior é normalmente partido para remover o péptido secretor durante o trânsito através da via secretora.

Pesos moleculares e comprimentos de polímeros determinados por métodos analíticos imprecisos (por exemplo, eletroforese em gel) serão entendidos como sendo valores aproximados. Quando tal valor é expresso como "cerca de" X ou "aproximadamente" X, o valor indicado de X será entendido como sendo exato a 10%. 9

Introdução A presente invenção refere-se, assim, à utilização de um antagonista da IL-20 para o fabrico de um medicamento para o tratamento de doenças inflamatórias especificas nas quais a IL-20 desempenha um papel quer na iniciação ou disseminação ou manutenção. 0 antagonista é um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4. A IL-20 é definida e métodos para a produzir e anticorpos da IL-20 estão contidos no pedido de Patente Internacional N.° PCT/US98/25228, publicação N.° WO 99/27103, publicada a 25 de Novembro de 1998, e o pedido de Patente U.S. N.° 09/313, 458 arquivado em 17 de Maio de 1999. O polinucleotideo e polipeptídeo da IL-20 humana estão representados pelas SEQ. ID N.°s 1 - 4, e a IL-20 de ratinho pelas SEQ. ID N.°s 5-9. O recetor da IL-20 foi descoberto e é um heterodímero compreendido do polipeptídeo designado 'IL-20RA' (formalmente designado Zcytor7) e um polipeptídeo designado 'IL-2 0RB' . O polipeptídeo IL-20RA, ácido nucleico que o codifica, anticorpos da IL-20RA, e métodos para os produzir são revelados na Patente U.S. N.° 5 945 511 emitida em 31 de Agosto de 1999. As SEQ. ID N.°s 10 - 12 são os polinucleotídeos e polipeptídeos da IL-20RA. O domínio extracelular da IL-20RA humana é compreendido de um polipeptídeo selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 12, 55, 63 e 65, a subunidade do recetor de comprimento inteiro sendo compreendida da SEQ. ID N.° 11. O domínio extracelular da IL-20RA de ratinho é a SEQ. ID N.° 38, SEQ. ID N.° 37 sendo a IL-20RA de ratinho inteira. O domínio extracelular da IL-20RB (SEQ. ID N.°s 13-14, e uma variante das SEQ. ID N.°s 18 e 19) é compreendido de um polipeptídeo selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 15, 59, 61, 67, 68 e 69. Preferencialmente, o 10 domínio extracelular do polipeptídeo da IL-20RA e o domínio extracelular do polipeptídeo da IL-20KB estão covalentemente ligados. Num aspeto um polipeptídeo da subunidade extracelular tem uma região constante de uma cadeia pesada de uma imunoglobulina fundida com o seu terminal carboxi e a outra subunidade extracelular tem uma cadeia leve constante de uma imunoglobulina (Ig) fundida com o seu terminal carboxi de tal maneira que os dois polipeptídeos se juntam para formar um recetor solúvel e uma ligação dissulfido é formada entre as cadeias da Ig pesada e leve. Noutro aspeto, um ligante péptido poderia ser fundido com dois terminais carboxi dos polipeptídeos para formar um recetor solúvel covalentemente ligado.

As SEQ. ID N.°s 22 e 23 são construções do domínio extracelular da IL-20RA fundidas com uma região constante da imunoglobulina gamma 1 humana mutada produzida de acordo com o procedimento exposto no exemplo 5. A SEQ. ID N.° 62 é a sequência madura prevista sem a sequência sinal. As SEQ. ID N.°s 20 e 21 são construções do domínio extracelular da IL-20RB fundidas com a região constante da cadeia leve da imunoglobulina kappa humana de tipo selvagem produzidas de acordo com o procedimento do exemplo 5. A SEQ. ID N.° 60 é a sequência madura prevista sem a sequência sinal. A Figura 1 representa o heterotetrâmero produzido pelo exemplo 5.

As SEQ. ID N.°s 52 e 53 são construções do domínio extracelular da IL-20RA fundidas com uma região constante imunoglobulina gamma 1 humana mutada produzida de acordo com o procedimento exposto no exemplo 12. A SEQ. ID N.°54 é a sequência madura prevista sem a sequência sinal. As SEQ. ID N.°s 56 e 57 são construções do domínio extracelular da IL-20RB fundidas com a região constante da cadeia leve da imunoglobulina kappa humana de tipo selvagem produzida de acordo com o procedimento do exemplo 12. A SEQ. ID N.° 58 é a sequência madura prevista sem a sequência sinal. O heterotetrâmero resultante é quase idêntico ao produzido 11 pelo exemplo 5, sendo a diferença primária a ausência de um ligante polipeptídeo entre os domínios extracelulares e o início das regiões constantes da Ig, 22 na Figura 1. Nas partes que se seguem, o termo "domínio extracelular de um recetor" significa o domínio extracelular do recetor ou uma porção do domínio extracelular que é necessária para ligar ao seu ligando, sendo neste caso o ligando a IL-20.

Podem-se unir os domínios extracelulares da IL-20RA e IL-20RB num número de maneiras tal que o recetor solúvel resultante pode ligar-se à IL-20. As Figuras 1-8 ilustram um número representativo de modalidades da presente invenção. Aos elementos comuns de cada um dos desenhos é-lhes atribuído o mesmo número. A Figura 1 representa a modalidade da presente invenção produzida de acordo com o exemplo 5 a seguir. A construção do recetor solúvel, designada 10, é compreendida de duas cadeias de polipeptídeo com local de ligação à IL-20 designadas 12 e 14. Cada local de ligação é compreendido do domínio extracelular da IL-20RA, designado 16, e do domínio extracelular da IL-20RB designado 18. O domínio extracelular, 16, da IL-20RA está ligado ao domínio da constante da pesada da um (CHI) , 20, da região constante da cadeia pesada da imunoglobulina gamma 1 humana através do ligante 22, que é a SEQ. ID N.° 72. O domínio CHI, 20, é depois ligado ao domínio CH2, 24, através de uma região de dobradiça 23. O domínio CH2, 24, é ligado ao domínio CH3, 26, através da região de dobradiça 25.

Comparando a construção da Figura 1 com a SEQ. ID N.° 22, o domínio extracelular, 16, da IL-20RA estende-se dos resíduos de aminoácido 36, uma valina, até e incluindo o resíduo do aminoácido 249, uma glutamina da SEQ. ID N.° 22. O ligante polipeptídeo, 22, estende-se do resíduo de aminoácido 250, uma glicina até e incluindo o resíduo do aminoácido 264, uma serina, da SEQ. ID N.° 22. O domínio CHI, 22 da Figura 1, estende-se do resíduo de aminoácido 12 265, uma alanina, até e incluindo o resíduo de aminoácido 362, uma valina, da SEQ. ID N.° 22. A região de dobradiça 23 da Figura 1 estende-se do resíduo de aminoácido 363, um ácido glutâmico até e incluindo resíduo de aminoácido 377, uma prolina, da SEQ. ID N.° 22. As cadeias 12 e 14 são ligadas por ligação dissulfido através das ligações dissulfido 28 e 30. As ligações dissulfido são formadas entre as cadeias pesadas pelos resíduos de cisterna nas posições 373 e 376 da SEQ. ID N.° 22 de cada uma das duas cadeias pesadas. O domínio extracelular, 18, da IL-20RB está ligado à região constante da cadeia leve (CL) da kappa humana, 34 da Figura 1 através do ligante polipeptídeo 32, gue é o polipeptídeo da SEQ. ID N.° 72. O domínio extracelular, 18, da IL-20RB estende-se do resíduo de aminoácido 30, uma valina, até e incluindo o resíduo de aminoácido 230, uma alanina, da SEQ. ID N.° 20. O ligante polipeptídeo, 32, estende-se do resíduo de aminoácido 231, uma glicina, até e incluindo o resíduo de aminoácido 245, uma serina, da SEQ. ID N.° 20. A região constante leve kappa, 34, estende-se do resíduo de aminoácido 246, uma arginina, até e incluindo o resíduo final de aminoácido 352, uma cisteína, da SEQ. ID N.° 20. A cisteína na posição 352 da SEQ. ID N.° 20 forma uma ligação dissulfido, 36 na Figura 1, com a cisteína na posição 367 da SEQ. ID N.° 22. A cadeia leve da constante 34 é, assim, ligada à região de dobradiça, 23, por ligação dissulfido, 36. Desta forma, o domínio extracelular, 16, da IL-20RA é ligado ao domínio extracelular, 18, da IL-20RB para formar um recetor solúvel.

Se os resíduos de cisteína nas posições 373 e 376 a SEQ. ID N.° 22 fossem alterados para resíduos de aminoácido diferentes, os dois polipeptídeos de ligação da IL-20, 12 e 14, não seriam ligados por ligações dissulfido e formariam uma construção mostrada na Figura 2, tendo uma região de dobradiça, 27. 13 A Figura 3 mostra um recetor solúvel 38 muito simples da presente invenção em que o domínio extracelular, 16, da IL-20RA está ligado ao domínio extracelular, 18, da IL-20RB através de um ligante polipeptídeo, 40. O ligante polipeptídeo estende-se do terminal amino do domínio extracelular, 16, da IL-20RA e está ligado ao terminal carboxilo do domínio extracelular, 18, da IL-20RB. O ligante polipeptídeo deveria ter entre 100-240 aminoácidos de comprimento, preferencialmente cerca de 170 resíduos de aminoácido de comprimento. Um ligante adequado seria compreendido de resíduos de glicina e serina. Um ligante possível seria de unidades múltiplas da SEQ. ID N.° 72, preferencialmente cerca de 12. A Figura 4 mostra uma modalidade que tem o domínio extracelular, 16, da IL-20RA ligado ao domínio extracelular, 18, da IL-20RB através de um ligante 40, como na Figura 3. Enquanto o domínio extracelular, 16, da IL-20RA está ligado ao domínio CHI, 20, como na Figura 1 através do ligante polipeptídeo 42, que deveria ter cerca de 30 resíduos de aminoácido de comprimento. Um ligante ideal seria compreendido de glicina e serina como na SEQ. ID N.° 72, e a seguência de dobradiça, 23 da Figura 1. A Figura 5 mostra outra modalidade possível. Nesta modalidade, um ligante polipeptídeo 44 de cerca de 15 resíduos de aminoácido, por exemplo SEQ. ID N.° 72, liga o terminal carboxilo do domínio extracelular, 18, da IL-20RB com o terminal amino do domínio extracelular, 16, da IL-20RA. Um ligante polipeptídeo 46 de cerca de 30 resíduos de aminoácido estende-se do terminal carboxi do domínio extracelular, 16, da IL-20RA até ao domínio CH2. O terminal carboxilo do ligante 46 seria preferencialmente compreendido da região de dobradiça que se estende do resíduo de aminoácido 363, um ácido glutâmico, até e incluindo o resíduo de aminoácido 377, uma prolina, da SEQ. ID N.° 22. Ainda assim, o ligante polipeptídeo 46 teria 14 idealmente pelo menos um resíduo de cisteína no seu terminal carboxilo para que uma ligação dissulfido se pudesse formar. 0 recetor solúvel da IL-20 da Figura 6 é idêntico àquele da Figura 1 com exceção do domínio CH3, 26 da Figura 1, não está presente na modalidade da Figura 6. A região CH3 começa no resíduo de aminoácido 488, uma glicina, e estende-se até ao último resíduo 594 da SEQ. ID N.° 22. A Figura 7 mostra uma construção do recetor solúvel da IL-20 que é idêntica à construção da Figura 1 exceto que ambos os domínios CH2, e CH3 estão ausentes. Os domínios CH2 e CH3 correm do resíduo de aminoácido 378, uma alanina, até à extremidade da sequência do polipeptídeo da SEQ. ID N.° 22. A Figura 8 mostra uma construção em que ambas IL-20RA, 16, e IL-20RB têm um ligante polipeptídeo, 48, fundidas com os seus terminais carboxilo respetivos. Cada ligante polipeptídeo tem dois resíduos de cisteína de tal maneira que quando eles são expressos as cisteínas formam duas ligações dissulfido, 50 e 52. Neste caso o ligante polipeptídeo é compreendido da região de dobradiça, 23 na Figura 1. A região de dobradiça é compreendida de resíduos de aminoácido 363, uma glutamina, até e incluindo resíduo de aminoácido 377 da SEQ. ID N.° 22.

Um método para produzir um recetor solúvel compreendido de domínios extracelulares da IL-20RA e IL-20RB compreende (a) introduzir numa célula hospedeira uma primeira sequência de ADN compreendida de um promotor transcricional operativamente ligado a uma primeira sequência sinal secretora seguida descendente pelo, e em quadro de leitura próprio, ADN que codifica a porção extracelular da IL-20RA e o ADN que codifica uma região constante da cadeia leve da imunoglobulina; (b) introduzir na célula hospedeira uma segunda construção de ADN compreendida de um promotor transcricional operativamente 15 ligado a uma segunda seguência sinal secretora seguido descendente por, e em guadro de leitura próprio, uma seguência de ADN gue codifica a porção extracelular da IL-2 0RB e uma seguência de ADN gue codifica um domínio da região constante da cadeia pesada da imunoglobulina selecionado do grupo que consiste em CH1, CH2, CH3 e CH4; (c) crescer a célula hospedeira num meio de crescimento apropriado em condições fisiológicas que permitam a secreção de uma proteína de fusão compreendida do domínio extracelular da IL-20RA e IL-20RB; e (d) isolar o polipeptídeo da célula hospedeira. Numa modalidade, a segunda sequência de ADN ainda codifica uma região de dobradiça da cadeia pesada da imunoglobulina e que a região de dobradiça é junta com o domínio da região constante da cadeia pesada. Numa outra modalidade, a segunda sequência de ADN codifica ainda uma região variável da imunoglobulina junta ascendente de, e em quadro de leitura próprio, com a região constante da cadeia pesada da imunoglobulina.

Numa modalidade alternativa, um método é providenciado para produzir um recetor solúvel compreendido dos domínios extracelulares da IL-20RA e IL-20RB compreendendo (a) introduzir numa célula hospedeira uma primeira sequência de ADN compreendida de um promotor transcricional operativamente ligado a uma primeira sequência sinal secretora seguida descendente pelo, e em quadro de leitura próprio, ADN que codifica a porção extracelular da IL-20RB e o ADN que codifica uma região constante da cadeia leve da imunoglobulina; (b) introduzir na célula hospedeira uma segunda construção de ADN compreendida de um promotor transcricional operativamente ligado a um segundo sinal secretor seguido descendente por, e em quadro de leitura próprio, uma sequência de ADN que codifica a porção extracelular da IL-20RA e uma sequência de ADN que codifica um domínio da região constante da cadeia pesada da imunoglobulina selecionado do grupo que consiste em CH1, 16

Ch2, Ch3 e Ch4; (c) crescer a célula hospedeira num meio de crescimento apropriado em condições fisiológicas que permitem a secreção de uma proteina de fusão heterodimérica dimerizada compreendida do domínio extracelular da IL-20RA e IL-20RB; e (d) isolar o polipeptídeo dimerizado da célula hospedeira. Numa modalidade, a segunda sequência de ADN codifica ainda uma região de dobradiça da cadeia pesada da imunoglobulina em que a região de dobradiça é junta com o domínio da região constante da cadeia pesada. Numa outra modalidade, a segunda sequência de ADN codifica ainda uma região variável da imunoglobulina junta ascendente, e em quadro de leitura próprio, com a região constante da cadeia pesada da imunoglobulina (Ver Patente U.S. N.° 5 843 725).

Como utilizado aqui, o termo "anticorpos" inclui anticorpos policlonais, anticorpos policlonais purificados por afinidade, anticorpos monoclonais, e fragmentos de ligação ao antígeno, tais como F(ab')2 e fragmentos proteolíticos Fab. Anticorpos ou fragmentos intactos fabricados por engenharia genética, tais como anticorpos quiméricos, fragmentos Fv, anticorpos de cadeia simples e afins, bem como péptidos e polipeptídeos de ligação ao antígeno sintéticos, também são incluídos. Anticorpos não humanos podem ser humanizados por enxerto de CDR não humanas em estruturas e regiões constantes humanas, ou por incorporação dos domínios variáveis não humanos inteiros (opcionalmente "encobrindo-os" com uma superfície tipo humana por substituição dos resíduos expostos, em que o resultado é um anticorpo "folhado") . Em algumas ocasiões, anticorpos humanizados podem reter resíduos não humanos dentro dos domínios estrutura da região variável humana para potenciar as características de ligação adequadas. Através dos anticorpos humanizantes, a meia-vida biológica pode ser aumentada, e o potencial para reações imunes adversas na administração a humanos é reduzido. A afinidade de ligação de um anticorpo pode ser prontamente determinada 17 por alguém com habilitação comum na arte, por exemplo, por análise Scatchard. Pode ser utilizada uma variedade de ensaios conhecidos daqueles habilitados na arte para detetar anticorpos que se ligam a proteína ou péptido. Ensaios exemplares estão descritos em detalhe em Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow e Lane (Editores) (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988). Exemplos representativos de tais ensaios incluem: imunoeletroforese coincidente, radioimunoensaio, radioimunoprecipitação, ensaio imunossorbente ligado a enzima (ELISA), ensaio dot blot ou Western blot, ensaio de inibição ou competição, e ensaio sandwich.

Foi demonstrado que a IL-20 regula positivamente a IL-8. Doenças inflamatórias nas quais a IL-8 desempenha um papel significativo, e para as quais uma diminuição na IL-8 será benéfica são, síndrome respiratória no adulto (ARD) , choque séptico, falência múltipla de orgãos, lesão pulmonar inflamatória tal como asma ou bronquite, pneumonia bacteriana, psoríase e doença inflamatória intestinal tal como colite ulcerativa e doença de Crohn, eczema, dermatite atópica e dermatite de contacto. Assim, antagonistas da IL-20 podem ser utilizados para tratar estas doenças.

Biologia da IL-20, seu recetor e seu papel na psoríase

Dois recetores de citocina de classe II orfãos, ambos os quais são expressos na pele, foram identificados como subunidades do recetor da IL-20. Ambas subunidades do recetor da IL-20 são necessárias para ligação do ligando, distinguindo o seu papel do das subunidades dos outros quatro recetores de citocina de classe II conhecidos. A IL-20RA e IL-20RB também são co-expressas num número de tecidos humanos além da pele, incluindo ovário, glândula adrenal, testiculo, glândula salivar, músculo, pulmão, rim, coração e num menor grau, intestino delgado o que sugere tecidos alvo adicionais para a ação da IL-20. Além disso, detetou-se ARNm da IL-2 0RA mas não ARNm da IL-2 0RB em 18 vários tecidos humanos incluindo estômago, tiróide, pâncreas, útero, cérebro e próstata o que sugere que a IL-20RA pode fazer parceria com outras subunidades do recetor de classe II. Concluímos que o recetor heterodimérico da IL-20 é estruturalmente semelhante a outros recetores de citocina de classe II e é expresso na pele onde temos atividade demonstrada do ligando da IL-20.

Duas linhas de evidência indicam que a IL-20 e o seu recetor estão envolvidos na psoríase. Esta doença multigénica da pele é caracterizada por um aumento da proliferação de queratinócito, diferenciação alterada de queratinócito, e infiltração de células imunes na pele. A primeira linha de evidência para um papel da IL-20 na psoríase é que a hiperqueratose observada e epiderme espessada nos ratinhos transgénicos que se assemelham às anormalidades psoriáticas humanas. Números diminuídos de tonofilamentos, que se pensa estarem relacionados com queratinização defeituosa, são uma característica notável da psoríase humana. Inclusões intramitocondriais foram encontradas em ambas condições da pele hiperplásticas quer induzidas quimicamente e ocorrendo naturalmente encontradas em ratinhos. A causa das inclusões e os seus efeitos na função mitocondrial, se alguns, são desconhecidos. Concluímos que ratinhos transgénicos IL-20 exibem muitas das características observadas na psoríase humana.

Uma segunda linha de evidência que implica o recetor da IL-20 na psoríase é que ambos ARNm da IL-20RA e da IL-20RB são marcadamente regulados para cima na pele psoriática humana comparada com a pele normal. Ambas subunidades do recetor da IL-20 são expressas em queratinócitos por toda a epiderme e também são expressas num subconjunto de células endoteliais e imunes. Propõe-se que a expressão aumentada de um recetor da IL-20 ativado pode alterar as interações entre células endoteliais, 19 células imunes e queratinócitos, conduzindo à desregulação da proliferação e diferenciação do queratinócito.

Uma etapa crucial no entendimento da função de uma citocina nova é a identificação e caracterização do seu recetor cognato. Foi utilizada com sucesso uma abordagem baseada na estrutura para isolar uma nova interleucina que, em última análise, conduz ao isolamento do seu recetor. A IL-20 estimula a transdução do sinal na linha de células HaCaT do queratinócito humano, suportando uma ação direta deste novo ligando na pele. Além disso, as proteínas IL-Ιβ, EGF e TNF-α, reconhecidamente ativas nos queratinócitos e envolvidas com sinais proliferativos e pró-inflamatórios na pele, potenciam a resposta à IL-20. Em ambas as células HaCaT e BHK que expressam o recetor da IL-20, a IL-20 assinala através de STAT3.

Utilização do antagonista à IL-20 para tratar psoríase

Como indicado na discussão anterior e nos exemplos a seguir, a IL-20 está envolvida na patologia da psoríase. A psoríase pode ser tratada administrando antagonistas à IL-20. Os antagonistas à IL-20 tanto podem ser um recetor solúvel que se liga à IL-20 ou anticorpos, anticorpos de cadeia simples ou fragmentos de anticorpos que se ligam tanto a IL-20 ou ao recetor da IL-20. Os antagonistas prevenirão, assim, a ativação do recetor da IL-20. A psoríase é uma das doenças dermatológicas mais comuns, afetando até 1 a 2% da população mundial. É uma disfunção inflamatória crónica da pele caracterizada por pápulas eritematosas, fortemente demarcadas e placas arredondadas, cobertas por escama micácea prateada. As lesões da psoríase na pele são variavelmente pruríticas. Áreas traumatizadas desenvolvem frequentemente lesões de psoríase. Além disso, outros fatores externos podem exacerbar a psoríase incluindo infeções, stress, e medicações, por exemplo lítio, beta bloqueadores, e anti-malária. 20 A variedade mais comum de psoríase é chamada tipo placa. Os pacientes com psoriase tipo placa terão placas estáveis de crescimento lento, que permanecem basicamente inalteradas durante longos períodos de tempo. As áreas mais comuns de ocorrência da psoríase em placas são os cotovelos, joelhos , fenda glútea, e o escalpo. 0 envolvimento tende a ser simétrico. A psoríase inversa afeta as regiões intertriginosas incluindo a axila, virilha, região submamária, e umbigo , e também tende a afetar o escalpo, palmas, e plantas dos pés. As lesões individuais são placas fortemente marcadas mas podem ser húmidas devido à sua localização. A psoríase tipo placa geralmente desenvolve-se devagar e segue um curso indolente. Raramente remite de forma espontânea. A psoríase eruptiva (psoríase gutata) é mais comum em crianças e jovens adultos. Desenvolve-se de forma aguda em indivíduos sem psoríase ou naqueles com psoríase em placas crónica. Os pacientes apresentam muitas pápulas pequenas eritematosas, escamosas, frequentemente após infeção do trato respiratório superior com estreptococos beta-hemolíticos. Os pacientes com psoríase também podem desenvolver lesões pustulares. Estas podem estar localizadas nas palmas das mãos e plantas dos pés ou podem estar generalizadas e associadas com febre, mal-estar, diarreia, e artralgias.

Cerca de metade de todos os pacientes com psoríase têm envolvimento das unhas, aparecendo como crateras ponteadas, espessamento das unhas ou hiperqueratose subungueal. Cerca de 5 a 10% dos pacientes com psoríase têm associadas queixas nas articulações, e estas são mais frequentemente encontradas em pacientes com envolvimento das unhas. Apesar de alguns terem ocorrência coincidente de artrite reumatóide clássica, muitos têm doenças de articulações que caem dentro de um de cinco tipos associados com a psoríase: (1) doença limitada a uma única ou a umas poucas pequenas 21 articulações (70% dos casos); (2) uma doença tipo artrite reumatóide seronegativa; (3) envolvimento das articulações interfalangeais distais; (4) artrite destrutiva severa com o desenvolvimento de "artrite mutilans"; e (5) doença limitada à espinha dorsal. A psoriase pode ser tratada administrando antagonistas à IL-20. Os antagonistas preferidos são ou um recetor solúvel da IL-20 ou anticorpos, fragmentos de anticorpo ou anticorpos de cadeia simples que se ligam ou ao recetor da IL-20 ou à IL-20. Os antagonistas à IL-20 podem ser administrados sozinhos ou em combinação com outras terapêuticas estabelecidas tais como lubrificantes, queratoliticos, corticosteróides tópicos, derivados tópicos da vitamina D, antralina, antimetabolitos sistémicos tais como metotrexato, terapêutica de luz ultravioleta com psoraleno (PUVA), etretinato, isotretinoina, ciclosporina, e o derivado tópico da vitamina D3 calcipotriol. Os antagonistas, em particular o recetor solúvel ou os anticorpos que se ligam à IL-20 ou o recetor da IL20, podem ser administrados ao indivíduo por via subcutânea, intravenosa, ou transdérmica utilizando um creme ou penso transdérmico que contém o antagonista à IL-20. Se administrado por via subcutânea, o antagonista pode ser injetado em uma ou mais placas psoriáticas. Se administrado por via transdérmica, os antagonistas podem ser administrados diretamente nas placas utilizando um creme que contém o antagonista à IL-20.

Utilização de antagonistas à IL-20 para tratar condições inflamatórias do pulmão.

Antagonistas à IL-20 podem ser administrados a uma pessoa que tem asma, bronquite ou fibrose cística ou outra lesão pulmonar inflamatória para tratar a doença. Os antagonistas podem ser administrados por qualquer método adequado incluindo por via intravenosa, subcutânea, lavagem 22 bronquial, e a utilização de inalador que contém um antagonista à IL-20.

Administração de antagonistas à IL-20

As quantidades de antagonistas à IL-20 necessárias para terapêutica eficaz dependerão de muitos fatores diferentes, incluindo meios de administração, local alvo, estado fisiológico do paciente, e outras medicações administradas. Assim, as dosagens do tratamento deveriam ser tituladas para otimizar a segurança e eficácia. Tipicamente, as dosagens utilizadas in vitro podem providenciar um guia útil nas quantidades úteis para a administração in vivo destes reagentes. Os testes em animais das doses eficazes para tratamento de disfunções particulares providenciarão indicação preditiva adicional da dosagem para humanos. Métodos para administração incluem oral, intravenosa, peritoneal, intramuscular, transdérmica ou administração no pulmão ou traqueia sob a forma de vaporizador através de um nebulizador ou atomizador. Veículos farmaceuticamente aceitáveis incluirão água, solução salina, tampões para nomear apenas alguns. Esperar-se-ia que os intervalos de dosagem oscilassem normalmente entre lpg a 1000 pg por quilograma de peso corporal por dia. Uma dosagem para um adulto médio do recetor solúvel da IL-20 seria cerca de 25 mg providenciadas duas vezes por semana com uma injeção subcutânea. Uma dosagem de um

anticorpo que se liga à IL-20 seria cerca de 2 5 mg administradas duas vezes por semana. Uma mistura de anticorpos que se ligam às subunidades IL-20RA e IL-20 RB seria cerca de 25 mg providenciadas duas vezes por semana para um adulto. As injeções poderiam ser dadas no local das lesões psoriáticas para o tratamento da psoríase. Para administração subcutânea ou intravenosa do antagonista à IL-20, o anticorpo ou recetor solúvel podem estar numa solução salina tamponada com fosfato. Igualmente, nas doenças de pele tal como a psoríase, o antagonista à IL-20 23 pode ser administrado através de uma pomada ou penso transdérmico. As doses podem ser mais altas ou mais baixas como podem ser determinadas por um médico com habilitação comum na arte. Para uma discussão completa das formulações de fármacos e intervalos de dosagem ver o Pharmaceutical Sciences, de Remington, 18a Edição, (Mack Publishing Co., Easton, Penn., 1996), e The Pharmacological Bases of

Therapeutics, de Goodman e Gilman, 9a Edição (Pergamon Press 1996). A invenção é ainda ilustrada pelos exemplos não limitantes seguintes.

Exemplo 1

Regulação positiva da IL-8 pela IL-20 Métodos:

Queratinócitos epidérmicos humanos normais de neonatos (NHEK) (da Clonetics) na passagem 2 foram colocados em placas e crescidos para confluência em placas de cultura de tecido de 12 poços. KGM (meio de cresimento de queratinócito) foi comprado da Clonetics. Quando as células atingiram confluência, foram lavadas com meio KGM menos fatores de crescimento = KBM (meio basal de queratinócito). As células passaram à fome privadas de soro em KBM durante 72 horas antes da adição de compostos teste. Trombina a 1 LU./mL e tripsina a 25 nM foram utilizadas como controlos positivos. Um mL de meio/poço foi adicionado. 0 KBM apenas foi utilizado como o controlo negativo. A IL-20 foi reparada em meio KBM e adicionada em concentrações variadas, desde 2,5 pg/ml até 618 ng/mL numa primeira experiência e desde 2,5 pg/mL até 3 ng/mL numa segunda experiência.

As células foram incubadas a 37° C, a 5% de C02 durante 48 horas. Os sobrenadantes foram removidos e congelados a -80° C durante vários dias antes dos testes para determinar os níveis de IL-8 e GM-CSF. O kit de imunoensaio da IL-8 humana # D8050 (RandD Systems, Inc.) e 24 o kit imunoensaio da GM-CSF humana # HSGMO (RandD Systems, Inc.) foram utilizados para determinar a produção de citocina seguindo as instruções do fabricante.

Resultados

Os resultados indicaram que as expressões da IL-8 e GM-CSF foram induzidas pela IL-20.

Exemplo 2

Clonagem de IL-20RB

Clonagem da região codificante da IL-20RB

Os iniciadores da PCR foram desenhados com base na sequência do pedido de patente internacional N.° PCT/US99/03735 (publicação N.° WO 99/46379) arquivada em 8 de Março de 1999. A SEQ. ID N.° 16 contém o codão ATG (Meti) com um local de restrição EcoRI. A SEQ. ID N.° 17 contém o codão de terminação (TAG) com um local de restrição Xhol. A amplificação por PCR foi realizada utilizando um ADN da bilbioteca de ADNc de queratinócito humano (HaCaT) como um molde e as SEQ. ID N.°16 e SEQ. ID N.° 17 como iniciadores. A reação de PCR foi realizada como se segue: incubação a 94°C durante 1 minuto seguido por 30 ciclos de 94°C durante 30 segundos e 68°C durante 2 minutos, após 68°C adicionais durante 4 minutos, a reação foi armazenada a 4°C. Os produtos da PCR foram corridos em gel de agarose a 1%, e uma banda de ADN com 1 kb foi observada. Os produtos da PCR foram cortados do gel e o ADN foi purificado utilizando um kit de extração QIAquick Gel (Qiagen). O ADN purificado foi digerido com EcoRI e Xhol, e clonado num vetor pZP que foi chamado pZP7N. Um plasmídeo de pZP é um vetor de expressão de mamífero que contém uma cassete de expressão que tem o promotor de metalotioneina-I de ratinho, péptido líder tPA humano, locais de restrição múltiplos para inserção de sequências codificantes, uma etiqueta Glu-Glu, e um terminador da hormona de crescimento humana. O plasmídeo também tem uma origem de replicação da E. coli, uma unidade de expressão de marcador selecionável 25 de mamífero com um promotor de SV4 0, um potenciador e uma origem de replicação, bem como um gene DHFR, e o terminador SV40. Vários clones de IL-20RB-pZP7N foram seguenciados. Todos eles contêm três mutações não conservadoras comparadas com a sequência da IL-20RB em PCT/US99/03735: (sequência IL-20RB-pZP7N) , 146 Pro (CCC) - Thr (ACC), 148 His (CAT) - Asp (GAT), e 171 Thr (ACG) - Arg (AGG).

Para verificar as três substituições no clone de IL-20RB-pZP7N, a amplificação por PCR foi realizada utilizando três fontes diferentes de ADNc - ADNc de maratona de pele fetal, ADN de biblioteca de ADNc HaCaT, e ADN de biblioteca de ADNc do músculo liso da próstata - como moldes. Os produtos da PCR foram purificados e sequenciados em gel. A sequência de cada um dos três produtos da PCR foi consistente com aquela do clone IL-20RB-pZP7N. IL-20RB é SEQ. ID N.° 13 e 14, e o domínio extracelular maduro é SEQ. ID N.0 15.

Exemplo 3

Ligação da IL-20 ao heterodímero IL-20RB/IL-20RA

Um ensaio de ligação baseado na célula foi utilizado para verificar a ligação da IL-20 ao heterodímero IL-2 ORAIL-2 ORB.

Vetores de expressão que contêm recetores da citocina de classe II orfãos e conhecidos (incluindo IL-20RA e IL-20RB) foram transfetados transientemente nas células COS em várias combinações, que foram depois ensaiadas para testar a sua capacidade para se ligarem à proteína da IL-20 rotulada com biotina. Os resultados mostram que o heterodímero IL-2ORB-IL-2ORA é um recetor para a IL-20. 0 procedimento utilizado é descrito a seguir. A transfeção da célula COS foi realizada numa placa de cultura de tecido com 12 poços como se segue: 0,5 pg de ADN foi misturado com meio contendo 5 μΐ de lipofectamina em 92 μΐ de meio de Eagle modificado por Dulbecco livre de soro (DMEM) (55 mg de piruvato de sódio, 146 mg de L-glutamina, 26 5 mg de transferina, 2,5 mg de insulina, 1 pg de selénio e 5 mg de fetuína em 500 ml de DMEM), incubado à temperatura ambiente durante 30 minutos e depois adicionado a 400 μΐ de meio DMEM livre de soro. Esta mistura de 500 μΐ foi depois adicionada a l,5xl05 células COS/poço e incubada durante 5 horas a 37°C. 500 μΐ de meio DMEM com soro fetal bovino a 20% (FBS) foi adicionado e incubado durante a noite. O ensaio, uma modificação da "armadilha de secreção" (Davis, S., et al., Cell 87: 1161-1169 (1996), foi realizado como se segue: as células foram enxaguadas com PBS/1% de albumina de soro bovino (BSA) e bloqueadas durante 1 hora com TNB (0,1 M de Tris-HCl, 0,15 M de NaCl e 0,5% de reagente blogueador (Kit NEN Renaissance TSA-Direct Cat# NEL701) em água) . Isto foi seguido por uma incubação de uma hora com 3 pg/ml de proteína da IL-20 biotinilada em TNB. As células foram lavadas com PBS/1% de BSA e incubadas durante outra hora com streptavidina-HRP diluída a 1:300 (kit NEN) em TNB. Após outra lavagem, as células foram fixadas durante 15 minutos com 1,8% de formaldeído em solução salina tamponada com fosfato (PBS). As células foram depois lavadas com TNT (0,1 M de Tris-HCL, 0,15 M de NaCl, e 0,05% de Tween-20 em água). Sinais de ligação positivos foram detetados após uma incubação de cinco minutos com reagente de fluoresceína tiramina diluído a 1:50 em tampão de diluição (kit NEN). As células foram lavadas com TNT, preservadas com meio de montagem Vectashield (Laboratórios Vector) diluído a 1:5 em TNT, e visualizadas utilizando um filtro FITC num microscópio de fluorescência invertido.

Exemplo 4

Regulação positiva de citocinas inflamatórias pela IL-20 Tratamento celular A linha de células de queratinócito humano, HaCaT foi crescida a 37 °C durante vários dias após a confluência em frascos de cultura de tecido T-75. Nesta fase, o meio de 27

crescimento normal (DMEM + 10% FBS) foi removido e substituído com meio livre de soro. As células foram depois incubadas durante dois dias a 37°C. DMEM foi depois removido e quatro frascos de células por tratamento foram tratados com uma de cada das seguintes condições durante quatro horas a 37°C: IL-1 alfa recombinante humana (rh) a 5 ng/mL, rh IL-1 alfa a 20 ng/mL, rh IL-1 alfa a 5 ng/mL + IL-20 a 1 pg/mL, IL-20 a 1 pg/mL, ou rh IL-10 a 10 ng/mL. Isolamento de ARN

Após o tratamento com citocina, o meio foi removido e as células foram lisadas utilizando uma solução de guanidio tiocianato. O ARN total foi isolado do lisado celular por um giro durante a noite num gradiente de cloreto de césio. No dia seguinte, a bola de ARN foi ressuspendida numa solução de TE/SDS e o etanol precipitado. O ARN foi depois quantificado utilizando um espectrofotómetro, seguido por um tratamento de DNase como por Secção V.B. do Manual de Usuário da coleção de ADNc do Atlas de Clontech ™ (versão PT3140-1/PR9X390, publicada em 11/5/99). A qualidade das amostras de ARN foi verificada por cálculos de pureza baseados em leituras spec, e por visualização em gel de agarose. A contaminação genómica das amostras de ARN foi excluída por análise de PCR do gene da beta-actina. Síntese de sonda

Os protocolos da Clontech para enriquecimento com poliAi, síntese e hibridização de sonda para os bancos de dados Atlas ™ foram seguidos (ver anterior, mais Manual de Usuário do Sistema de Rotulagem de ARN total puro do Atlas ™, PT3231-1/PR96157, publicado em 6/22/99). Resumidamente, o ARN poliA+ foi isolado de 50 mg de ARN total utilizando pérolas magnéticas revestidas com streptavidina (por Clontech, Paolo Alto, CA) e um separador de partículas magnéticas. O ARN poliA+ foi depois rotulado com alfa 32 P-dATP através de RT-PCR. Os iniciadores CDS da Clontech específicos para os genes 268 na coleção citocina/recetor 28 humano do Atlas ™ (Cat. #7744-1) foram utilizados na reação. A sonda rotulada foi isolada utilizando cromatografia em coluna e contada em fluido de cintilação. Hibridização com membrana de coleção

As coleções do Atlas ™ foram pré-hibridizadas com ExpressHyb da Clontech mais 100 mg/mL de ADN de esperma de salmão desnaturado termicamente durante pelo menos trinta minutos a 68°C com agitação continua. As membranas foram depois hibridizadas com l,9xl01 2 3 4 5 6 7 de CPM/mL (um total de l,14xl08 de CPM) durante a noite a 68°C com agitação continua. No dia seguinte, as membranas foram lavadas durante trinta minutos x 4 em 2X SSC, 1% de SDS a 68°C, mais durante trinta minutos x 1 em 0,1X SSC, 0,5% de SDS a 68°C, seguido por uma lavagem final à temperatura ambiente durante cinco minutos em 2X SSC. As membranas da coleção foram depois colocadas em bolsas de plástico Kodak seladas e expostas a um ecrã de imagem de fósforo durante a noite à temperatura ambiente. No dia seguinte, os ecrãs de fósforo foram digitalizados num visualizador de fósforo e analizados utilizando o software Atlaslmage ™ 1.0 da

Clontech.

Resultados 1

Genes regulados para cima pela IL-20 2

Fator de necrose tumoral (TNF) foi regulado para cima 1,9-2,4 vezes pela IL-20. 3

Fatores de crescimento placentário 1 e 2 (PLGF) foram regulados para cima 1,9-2,0 vezes pela IL-20. 4

Recetor do fator de coagulação II foi regulado para cima 2,0-2,5 vezes pela IL-20. 5

Recetor da calcitonina foi regulado para cima 2,2-2,3 vezes pela IL-20. 6

Proteína TSG-6 de ligação ao hialuronato induzível por TNF foi regulada para cima 2,1-2,2 vezes pela IL-20. 7

Precursor do recetor-1 do fator de crescimento 8 endotelial vascular (VEGF) , recetor da quinase da proteína 29 tirosina (FLT-1) (SFLT) foi regulado para cima 2,1-2,7 vezes pela IL-20. 7. MRP-8 (proteina de ligação do cálcio em macrófagos relacionados com MIF) foi regulada para cima 2,9-4,1 vezes pela IL-20. 8. MRP-14 (proteina de ligação do cálcio em macrófagos relacionados com MIF) foi regulada para cima 3,0-3,8 vezes pela IL-20. 9. A relaxina H2 foi regulada para cima 3,14 vezes pela IL- 20. 10. O recetor III do fator de crescimento transformador beta (TGFP) com 300 kDa foi regulado para cima 2,4-3,6 vezes pela IL-20.

Genes que mostram sinergia com tratamento IL-20 + IL-1 1. Proteina 2a morfogénica da medula foi regulada para cima 1,8 vezes com tratamento pela IL-20 sozinha, 2,5 vezes com tratamento pela IL-1 sozinha, e 8,2 vezes com tratamento por ambas IL-20 e IL-1. 2. MRP-8 foi regulada para cima 2,9 vezes com tratamento pela IL-20 sozinha, 10,7 vezes com tratamento pela IL-1 sozinha e 18,0 vezes com tratamento por ambas IL-20 e IL-1. 3. Proteina de diferenciação da eritróide (EDF) foi regulada para cima 1,9 vezes com tratamento pela IL-20 sozinha, 9,7 vezes com tratamento pela IL-1 sozinha e 19,0 vezes com tratamento por ambas IL-20 e IL-1. 4. MRP-14 (proteina de ligação do cálcio em macrófagos relacionados com MIF) foi regulado para cima 3,0 vezes com tratamento pela IL-20 sozinha, 12,2 vezes com tratamento pela IL-1 sozinha e 20,3 vezes com tratamento por ambas IL-20 e IL-1. 5. Fator de crescimento tipo EGF de ligação à heparina foi regulado para cima 2,0 vezes com tratamento pela IL-20 sozinha, 14 vezes com tratamento pela IL-1 sozinha e 25,0 vezes com tratamento por ambas IL-20 e IL-1. 30 6. Proteína tipo beta-tromboglobulina foi regulada para cima 1,5 vezes com tratamento pela IL-20 sozinha, 15 vezes com tratamento pela IL-1 sozinha e 27 vezes com tratamento por ambas IL-20 e IL-1. 7. Fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) foi regulado para cima 1,7 vezes com tratamento pela IL-20 sozinha, 25 vezes com tratamento pela IL-1 sozinha e 48 vezes com tratamento por ambas IL-20 e IL-1. 8. Fator ativador e quimiotático de monócito MCAF foi regulado para cima 1,3 vezes com tratamento pela IL-20 sozinha, 32 vezes com tratamento pela IL-1 sozinha e 56 vezes com tratamento por ambas IL-20 e IL-1.

Exemplo 5

Heterotetrâmero de fusão IL-20RA/RB recetor-Ig O vetor de expressão pEZE3 foi utilizado para expressar a proteína de fusão recombinante IL-20 recetor-Ig. 0 plasmídeo pEZE3 é derivado da pDC312. A pDC312 foi obtida a partir da licença da Immunex Corporation. Os plasmídeos pDC312 e pEZE3 contêm um segmento EASE como descrito no documento WO 97/25420. A presença do segmento EASE num vetor de expressão pode melhorar a expressão de proteínas recombinantes duas a oito vezes em grupos de células estáveis. O plasmídeo pEZE3 é um vetor de expressão tricistrónico que pode ser utilizado para expressar até três proteínas diferentes em células de mamífero, preferencialmente células de ovário de hamster chinês (CHO). A unidade de expressão da pEZE3 contém o potenciador/promotor do citomegalovírus (CMV), a sequência líder tripartida do adenovírus, um local de clonagem múltiplo para inserção da região codificante para a primeira proteína recombinante, o local de entrada do ribossoma interno do poliovírus tipo 2, um segundo local de clonagem múltiplo para inserção da região codificante para a segunda proteína recombinante, um local de entrada do 31 ribossoma interno do vírus da encefalomiocardite, um segmento codificante para a dihidrofolato redutase de ratinho, e o terminador de transcrição SV40. Além disso, a pEZE3 contém uma origem de replicação da E. coli e o gene da beta lactamase bacteriana. A proteína de fusão recetor-Ig da IL-20 é um heterotetrâmero ligado por ligações dissulfido que consiste em duas cadeias do domínio extracelular da IL-20RB humana fundida com a região constante da cadeia leve da imunoglobulina kappa humana de tipo selvagem e duas cadeias do domínio extracelular da proteína da IL-20RA humana fundida com uma região constante da imunoglobulina gamma 1 humana mutada. A região constante da imunoglobulina gamma 1 humana contém substituições de aminoácido para reduzir a ligação de FcyRI e fixação do complemento Clq. A construção de fusão do domínio extracelular da IL-20RB humana e da região constante da cadeia leve da imunoglobulina kappa humana foi gerada por PCR de sobreposição. 0 segmento codificante da IL-20RB consiste nos aminoácidos 1 a 230. O molde utilizado para a amplificação por PCR do segmento da IL-20R foi gerado da construção de expressão da região constante da cadeia leve da IL-20RB da kappa humana como descrito anteriormente no exemplo 12. Os iniciadores oligonucleotídeo com SEQ. ID N.° 24 e SEQ. ID N.° 25 foram utilizados para amplificar o segmento da IL-20RB. Foi utilizada a região constante inteira da cadeia leve da imunoglobulina kappa humana de tipo selvagem. O molde utilizado para a amplificação por PCR do segmento da região constante da cadeia leve da imunoglobulina kappa humana de tipo selvagem foi gerado a partir da construção de expressão da região constante da cadeia leve da IL-20RB da kappa humana como descrito no exemplo 12. Os iniciadores oligonucleotídeo com SEQ. ID N.° 26 e SEQ. ID N.° 27 foram utilizados para amplificar a região constante da cadeia leve da imunoglobulina kappa 32 humana de tipo selvagem. Os dois domínios codificantes de proteína foram ligados por PCR de sobreposição utilizando os oligonucleotídeos com SEQ. ID N.° 24 e SEQ. ID N.° 27. Um ligante péptido (Gly4Ser)3 (SEQ. ID N.° 72) foi inserido entre os dois domínios de proteína. 0 ligante péptido (Gly4Ser)3 foi codificado nos iniciadores da PCR com SEQ. ID N.°26 e SEQ. ID N.°25. A construção de fusão domínio extracelular IL-2ORB/região constante da cadeia leve da kappa resultante é mostrada pelas SEQ. ID N.°s 20 e 21. O polipeptídeo maduro previsto, menos a sequência sinal, é a SEQ. ID N.° 60. A porção do domínio extracelular da IL-20RB que foi realmente atualizada foi compreendida da sequência do aminoácido da SEQ. ID N.° 61. A sequenciação N-terminal resultou numa sequência de aminoácido prevista. A construção de fusão entre domínio extracelular da IL-20RA humana e a região constante da cadeia pesada da imunoglobulina gamma 1 humana foi gerada por PCR de sobreposição de quatro fragmentos de ADN separados, cada gerado por reações separadas de amplificação por PCR. O primeiro fragmento continha uma sequência sinal otimizada tPA (ativador plasminogénico de tecido). A sequência sinal tPA foi amplificada utilizando iniciadores oligonucleotídeo com SEQ. ID N.° 28 e SEQ. ID N.° 29 utilizando um vetor de expressão gerado previamente em casa como molde. O segundo fragmento continha a região codificante do domínio extracelular da IL-20RA que consiste nos aminoácidos 30 a 243 da SEQ. ID N.° 11. Os iniciadores oligonucleotídeo com SEQ. ID N.° 30 e SEQ. ID N.°31 foram utilizados para amplificar este segmento da IL-20RA utilizando um clone gerado previamente da IL-20RA como o molde. A região constante da cadeia pesada da gamma 1 humana foi gerada a partir de 2 segmentos. O primeiro segmento contendo o domínio CH1 foi amplificado utilizando iniciadores oligonucleotídeo com SEQ. ID N.° 32 e SEQ. ID N.° 33 utilizando um clone da região constante da cadeia 33 pesada da gamma 1 humana de tipo selvagem como o molde. 0 segundo segmento contendo a dobradiça remanescente, domínios CH2, e CH3 da região constante da cadeia pesada da imunoglobulina gamma 1 humana foi gerada por amplificação por PCR utilizando iniciadores oligonucleotídeo com SEQ. ID N.° 34 e SEQ. ID N.° 35. 0 molde utilizado para esta amplificação por PCR era de uma construção Fc da gamma 1 humana previamente gerada gue continha codões para substituições de aminoácido para reduzir a ligação de FcyRI e a fixação do complemento Clg como descrito no exemplo 12.

Os guatro domínios codificantes de proteína foram ligados por PCR de sobreposição utilizando oligonucleotídeos com SEQ. ID N.° 28 e SEQ. ID N.° 35. Um ligante péptido (Gly4Ser)3 foi inserido entre os domínios da proteína IL-20RA e CHI. 0 ligante péptido (Gly4Ser)3 foi codificado nos iniciadores de PCR com SEQ. ID N.° 32 e SEQ. ID N.° 31. A proteína de fusão domínio extracelular da IL-20RA/região constante da cadeia pesada da imunoglobulina gamma 1 do domínio humano e a seguência de ADN são mostradas nas SEQ. ID N.°s 22 e 23. A sequência do polipeptídeo maduro previsto, menos a sequência sinal, é a SEQ. ID N.° 62. A porção do domínio extracelular da IL-20RA que foi realmente utilizada foi compreendida da SEQ. ID N.° 63. 0 segmento codificante de fusão da região constante da cadeia leve da imunoglobulina kappa humana e o domínio extracelular da IL-20RB foi clonado na segunda MCS enquanto o segmento codificante de fusão da região constante da cadeia pesada da imunoglobulina gamma 1 humana e o domínio extracelular da IL-20RA humana foi clonado na primeira MCS do pEZE3. 0 plasmídeo foi utilizado para transfetar as células CHO. As células foram selecionadas em meio sem hipoxantina ou timidina e o transgene foi amplificado utilizando metotrexato. A presença da proteína foi ensaiada por Western blotting utilizando região constante da cadeia 34 pesada da gamma 1 anti humana e anticorpos da cadeia leve da kappa anti humana. A sequenciação do N-terminal revelou que a lider tPA otimizada não estava completamente fraccionada. A massa observada indicou que o primeiro resíduo da sequência do polipeptídeo era ácido piroglutâmico, e a sequência N-terminal aparenta ser piroEEIHAELRRFRRVPCVSGG (SEQ. ID N.° 64), sendo a porção sublinhada remanescentes da líder tPA.

Exemplo 6

Fenótipo transgénico da IL-20

Ambas IL-20 humana e de ratinho foram sobre-expressas em ratinhos transgénicos utilizando uma variedade de promotores. 0 promotor da albumina de ratinho especifico do fígado, dirigindo a expressão da IL-20 humana, foi utilizado inicialmente na tentativa de alcançar níveis circulantes de proteína. Estudos subsequentes foram conduzidos utilizando o promotor da queratina 14 (K14), que dirige primariamente a expressão para a epiderme e outros epitélios escamosos estratificados; o promotor da metalotioneina-1 de ratinho, que fornece um padrão de expressão ampla; e o promotor EPLCK, que impulsiona a expressão em células da linhagem linfóide. Foram obtidos resultados semelhantes em todos os quatro casos, possivelmente porque todos estes promotores originam níveis circulantes da IL-20.

Em todos os casos, as crias transgénicas que expressaram o transgene da IL-20 foram mais pequenas do que os seus companheiros de ninhada não transgénicos, tinham um aspeto brilhante com pele enrugada, esticada e morreram dentro dos primeiros poucos dias após o nascimento. As crias tinham leite nos seus estômagos indicando que eram capazes de mamar. Estes ratinhos tinham as extremidades, região da cauda, narinas e boca inchadas, e tinham dificuldade em mover-se. Além disso, os ratinhos estavam frágeis, careciam de tecido adiposo visível e tinham 35 desenvolvimento retardado de orelhas e dedos. Níveis baixos de expressão no fígado (inferiores a 100 moléculas de ARNm/poço) foram suficientes para ambas letalidade neonatal e anormalidades da pele. Os ratinhos transgénicos sem um fenótipo visível ou não expressaram o transgene, ou não o expressaram em níveis detetáveis, ou foram mosaicos. A análise histológica da pele dos ratinhos transgénicos da IL-20 mostrou uma epiderme espessada, hiperqueratose e um estrato córneo compacto quando comparado com os companheiros de ninhada não transgénicos. Foram observadas ocasionalmente crostas serocelulares (cascas). Análise por microscopia eletrónica (EM) da pele dos ratinhos transgénicos mostraram inclusões lipoides intramitocondriais, grânulos queratohialinos pintalgados, e relativamente poucos tonofilamentos semelhantes àqueles observados na pele psoriática humana e em modelos de doença de pele de ratinho. Além disso, muito dos ratinhos transgénicos tinham linfócitos tímicos apoptóticos. Não foram detetadas nenhumas outras anormalidades por análise histopatológica. Estes resultados histológicos e de EM suportam e estendem as alterações de pele grosseiras observadas.

Exemplo 7

Especificidade e afinidade da IL-20 para o seu recetor

A especificidade e afinidade da IL-20 para o seu recetor foram determinadas utilizando células BHK estavelmente transfetadas com subunidades do recetor IL20RA, IL-20RB ou ambas. Ensaios de ligação utilizando ligando radio-rotulado demonstraram que a IL-20 se liga a transfetantes da BHK expressando ambas IL-20RA e IL-20RB mas não a células não transfetadas nem a transfetantes expressando nenhuma das subunidades do recetor sozinhas. A ligação de IL-20 125I-rotulada foi eliminada na presença de um excesso de 100 vezes a IL-20 não rotulada mas não com um excesso de 100 vezes da citocina não relacionada, IL-21. A 36 afinidade de ligação (kD) da IL-20 ao recetor heterodimérico IL-2ORA/IL2ORB foi determinada para ser aproximadamente 1,5 nM.

Exemplo 8

Ativação do recetor da IL-20

Para determinar se a ligação da IL-20 conduz à ativação do recetor, a linha de células pré-B BaF3 dependente de fator foi cotransfetada com IL-20RA e IL-20RB e tratada com IL-20 em várias concentrações. A IL-20 estimulou a proliferação de uma maneira dependente da dose e forneceu um sinal detetável a 1,1 pM, com uma metade da resposta máxima a 3,4 pM. Notou-se que a concentração da IL-20 para a resposta proliferativa metade da máxima nas células BaF3 é 1000X inferior àquela para a afinidade de ligação metade da máxima nas células BHK. Explicações possíveis para esta grande diferença incluem a utilização de linhas de células diferentes, diferentes níveis de expressão de recetor e diferentes rendimentos de ensaios. A IL-20 também estimulou a transdução do sinal na linha de células HaCaT de queratinócito humano biologicamente relevante, que expressa naturalmente a IL-20RA e IL-20RB. Assim, a IL-20 liga-se e ativa o recetor heterodimérico IL-2ORA/IL-2ORB a concentrações esperadas para a citocina. Exemplo 9

Análise da expressão da IL-20RA e IL-20RB A análise RT-PCR foi realizada numa variedade de tecidos humanos para determinar o padrão de expressão da IL-20RA e IL-20RB. Ambas subunidades do recetor são mais altamente expressas na pele e testículos. 0 resultado significativo é que a IL-20RA e IL-20RB são ambas expressas na pele, onde foi demonstrado que medeiam a resposta induzida pela IL-20. Ambas IL20RA e IL-20RB são também expressas em monócitos, pulmão, ovário, músculo, testículo, glândula adrenal, coração, glândula salivar e placenta. A IL-20RA também o é no cérebro, rim, fígado, cólon, 37 intestino delgado, estômago, tiroide, pâncreas, útero e próstata enquanto a IL-20RB não o é.

Exemplo 10 ARNm da IL-20RA e IL-20RB são regulados para cima na psorlase A hibridização in situ foi utilizada para determinar s a expressão do recetor da IL-20 é alterada na psorlase. Amostras de pele de quatro pacientes com psorlase e três pacientes não afetados foram testadas com sondas específicas para o ARNm das duas subunidades do recetor. As quatro amostras de pele psoriática tinham altos níveis de ARNm da IL-20RA e IL-20RB nos queratinócitos ao passo que as amostras de pele normais não tinham níveis detetáveis de nenhum dos ARNm das subunidades do recetor. Sinais positivos na pele psoriática também foram observados em células imunes mononucleares e em células endoteliais num subconjunto de vasos. Por esse motivo, ambas IL20RA e IL-20RB são expressas em queratinócitos, células imunes e células endoteliais, os tipos de células principais que se pensam interagir na psorlase.

Exemplo 11

Clonagem da IL-20RA de ratinho

Uma sonda de hibridização entre espécies foi gerada que continha o fragmento de ADNc de comprimento inteiro que codifica a IL-20RA humana. Um Southern blot de ADN genómico de ratinho e Northern blots de ARN de ratinho foram realizados para demonstrar que o ADNc da IL-20RA humana poderia hibridizar especificamente com sequências de ratinho. Os resultados do Northern blot indicaram que o ARN da IL-20RA de ratinho estava presente em embrião de ratinho ao dia 15 e 17 bem como no coração, cérebro, pulmão, fígado, rim, testículos, baço, timo, fígado, estômago, e intestino delgado. A sonda de hibridização de ADN de comprimento inteiro da IL-20RA humana foi utilizada para classificar uma 38 biblioteca genómica de ratinho. A biblioteca, que foi obtida a partir da Clontech (Paio Alto, CA) , foi gerada a partir de uma digestão parcial Mbol do ADN genómico de ratinho e clonada no local BamHI do bacteriofago Lambda EMBL3 SP6/T7. 0 bacteriofago positivo foi purificado em placa e o ADN do bacteriofago foi preparado utilizando o Sistema de Purificação do ADN Wizard Lambda Preps, da Promega. Dois fragmentos de enzima de restrição genómicos, um fragmento com 5,7 kb de EcoRI e um fragmento com 8,0 kb de Saci, foram gerados a partir do bacteriofago positivo e subclonados em pBluescript. A análise da sequência de ADN revelou a presença de 3 exões do ortólogo de ratinho para a IL-20RA humana.

Os iniciadores de PCR da 5' UTR, SEQ. ID N.° 40, e 3' UTR, SEQ. ID N.° 41, foram desenhados para gerar uma sequência da IL-20RA de ratinho de comprimento inteiro por amplificação por PCR. ADNc de embrião de ratinho ao 15° dia mais 17° dia foi utilizado como o molde para a amplificação por PCR. Os produtos da PCR foram subclonados e sequenciados para confirmação. As sequências de ratinho são SEQ. ID N.°s 36 e 37. O domínio extracelular maduro é compreendido da SEQ. ID N.° 38.

Exemplo 12

Construção de um heterotetrêmero recetor da IL-20

Foi construído um vetor que expressa um heterodímero hIL-20RA/hIL-20B secretado. Nesta construção, o domínio extracelular do hIL-20RA foi fundido com a cadeia pesada da IgG gamma 1 (IgGYl), enquanto a porção extracelular da IL20RB foi fundida com a cadeia leve da kappa humana (cadeia leve da κ humana).

Construção dos vetores de fusão da IgG gamma 1 e cadeia leve da κ humana A cadeia pesada da IgCy! foi clonada no vetor de expressão de mamífero Zem229R (depósito ATCC N.° 69447) de tal maneira que qualquer porção extracelular de um recetor 39 que tem um local 5' EcoRI e 3' Nhel pode ser clonado em, resultando numa fusão domínio extracelular N-terminal-IgGYl-C-terminal. 0 fragmento IgGYl utilizado nesta construção foi feito utilizando PCR para isolar a sequência IgGYl a partir de uma biblioteca de ADNc de fígado fetal humano da Clontech como molde. Uma reação PCR utilizando oligos com SEQ. ID N.° 42 e SEQ. ID N.° 43 foi corrida como se segue: 40 ciclos de 94° durante 60 segundos, 53°C durante 60 segundos, e 12° durante 120 segundos; e 72°C durante 7 minutos. Os produtos da PCR foram separados por electroforese em gel de agarose e purificados utilizando um kit de extração em gel QiaQuick™ (Qiagen Inc., Valência, CA) . O fragmento de ADN isolado, com 990 bp, foi digerido com MluI e EcoRI (Boerhinger-Mannheim), extraído com kit de extração em gel QiaQuick™ e ligado com os oligos com SEQ. ID N.° 44 e SEQ. ID N.° 45, que compreendem um ligante MluI/EcoRI, em Zem229R previamente digerido com MluI e EcoRI utilizando ténicas de biologia molecular padrão reveladas aqui. Este vetor de clonagem genérico foi designado Vetor#76 hlgGgammal com Chi #786 Zem229R (Vetor #7 6) . A sequência do polinucleotídeo do domínio extracelular da hIL-20RA fundido com a cadeia pesada da IgG gamma 1 é mostrada na SEQ. ID N.° 52 e a sequência de polipeptídeo correspondente mostrada na SEQ. ID N.° 53, o polipeptídeo maduro, menos a sequência sinal sendo compreendido da SEQ. ID N.° 54. A porção do domínio extracelular da IL-20RA utilizada foi compreendida da SEQ. ID N.0 55. A cadeia leve da κ humana foi clonada no vetor de expressão de mamífero Zem228R (depósito ATCC N.° 69446) de tal maneira que qualquer porção extracelular de um recetor tendo um local 5' EcoRI e um local 3' Kpnl pode ser clonado em, resultando numa fusão do N-terminal do domínio extracelular-C-terminal da cadeia leve da κ humana. O fragmento da cadeia leve da κ humana utilizado nesta 40 construção foi feito utilizando PCR para isolar a sequência da cadeia leve da κ humana a partir da mesma biblioteca de ADNc de figado fetal da Clontech utilizada anteriormente. Uma reação PCR foi corrida utilizando os oligos com SEQ. ID N.° 46 e SEQ. ID N.° 47. Os produtos da PCR foram separados por electroforese de gel de agarose e purificados utilizando um kit de extração em gel QiaQuick™ (Qiagen). O fragmento de ADN isolado, com 315 bp, foi digerido com MluI e EcoRI (Boerhinger-Mannheim), extraído com o kit de extração em gel QiaQuick™ e ligado com o ligante MluI/EcoRI descrito anteriormente, no Zem228R previamente digerido com MluI e EcoRI utilizando técnicas de biologia molecular padrão reveladas aqui. Este vetor de clonagem genérico foi designado Vetor #77 hxleve #774 Zem228R (Vetor #77) . A sequência do polinucleotídeo da porção extracelular da IL-20RB fundida com a cadeia leve da kappa humana é mostrada na SEQ. ID N.° 56 e a sequência de polipeptídeo

correspondente mostrada na SEQ. ID N.° 57, o polipeptídeo maduro, menos a sequência sinal, é compreendido da SEQ. ID N.° 58. A porção do domínio extracelular da IL20RB realmente utilizada foi compreendida da SEQ. ID N.° 59. Inserção dos domínios extracelulares hIL-20RA e IL-20RB nas construções de vetor de fusão

Utilizando os vetores de construção anteriores, foi feita uma construção tendo a IL-20RA humana fundida com IgGYl. Esta construção foi feita utilizando PCR para obter recetor da IL-20RA humana a partir do Vetor #102 hIL-20RA /IgG com oligos com SEQ. ID N.° 48 e SEQ. ID N.° 49 nas condições descritas como se segue: 30 ciclos de 94°C durante 60 segundos, 57°C durante 60 segundos, e 72°C durante 120 segundos; e 72°C durante 7 minutos. 0 produto da PCR resultante foi digerido com EcoRI e Nhel, purificado em gel, como descrito aqui, e ligado num Vector #76 (em cima) com EcoRI de Nhel previamente digerido e de banda purificada. O vetor resultante foi sequenciado para 41 confirmar que a fusão IL-20Ra humana/IgG gamma 1 (hIL-20RA /Ch 1 IgG) foi correta. 0 vetor hIL-20RA /Chi IgG gamma 1 #1825 Zem229R foi designado vetor #195. A sequência IL-20RA/Chl IgGYl assim obtida é representada pelas SEQ. ID N.°s 52 e 53. A sequenciação do N-terminal indicou a presença da sequência do polipeptídeo maduro previsto de SEQ. ID N.0 54 .

Uma construção separada tendo IL-20RB fundida com leve κ também foi construída. A construção IL-2ORB/cadeia leve da κ humana foi realizada como anteriormente por PCR a partir de DR1/7N-4 com oligos com SEQ. ID N.° 50 e SEQ. ID N.° 51, digerindo a banda resultante com EcoRI e Kpnl e depois ligando este produto num Vec#77 com EcoRI e Kpnl previamente digeridas e de banda purificada (em cima). O vetor resultante foi sequenciado para confirmar que a fusão IL-2ORB/cadeia leve da κ humana (IL-20RB/leve κ) foi correta. Esta construção IL-20RB/leve κ é mostrada pelas SEQ. ID N.°s 56 e 57. A sequenciação do N-terminal dos polipeptídeos resultantes indicou a presença da sequência de aminoácido maduro prevista compreendida da SEQ. ID N.° 58. A SEQ. ID N.° 59 é a porção madura do domínio extracelular da IL-20RB utilizada.

Co-expressão dos recetores da IL-20RA humana e IL-20RB humana

Aproximadamente 16 pg de cada um dos vetores #194 e #195, anteriores, foram co-transfetados em células BHK-570 (ATCC N.° CRL-10314) utilizando o reagente Lipofectamine™ (Gibco/BRL) , de acordo com as instruções do fabricante. As células transfetadas foram selecionadas durante 10 dias em DMEM + 5% de FBS (Gibco/BRL) contendo 1 μΜ de metotrexato (MTX) (Sigma, St. Louis, MO) e 0,5 mg/ml de G418 (Gibco/BRL) durante 10 dias. O grupo resultante de transfetantes foi selecionado de novo em 10 μΜ de MTX e 0,5 mg/ml de G418 durante 10 dias. 42 0 grupo resultante de células selecionadas duplamente foi utilizado para gerar proteína. Três fábricas (Nunc, Dinamarca) deste grupo foram utilizadas para gerar 8 L de meio condicionado livre de soro. Este meio condicionado foi passado por um 1 ml de coluna de proteína-A e eluído em frações de (10) 750 microlitros. Observou-se que 4 destas frações que tinham a concentração mais elevada foram agrupadas e dializadas (10 kD MW limite) contra PBS. Finalmente, o material dializado foi analizado por BCA (Pierce) e observou-se que tinha uma concentração de 317 pg/ml. Um total de 951 pg foi obtido a partir desta purificação de 8 L.

Exemplo 13

Ligação da IL-20 ativa STAT3 na linha de células de queratinócito HaCaT A IL-20 liga linhas de células transfetadas com ambas subunidades do seu recetor. Contudo, estas linhas de células sobre-expressam o recetor da IL-20 em relação ao seu nível normal e a sua relevância para o papel fisiológico da IL-20 é pouco claro. A linha de células de queratinócito HaCaT humana, que expressa IL-20RA e IL-20RB endógenas foi utilizada para examinar a transdução de sinal pela IL-20 num tipo de célula biologicamente relevante. As células HaCaT foram infetadas com adenovírus recombinante contendo uma construção repórter para permitir a deteção de sinalização intracelular. A construção consiste no gene da luciferase do pirilampo dirigido pelas sequências promotoras/potenciadoras compreendidas do elemento de resposta do soro (SRE) e transdutores de sinal e ativadores dos elementos de transdução (STATS). Este sistema de ensaio deteta interações ligando-recetor produtivas e indica possíveis componentes de transdução de sinal descendentes envolvidos na ativação do recetor. O tratamento com a IL-20 sozinha resultou num aumento dependente da dose na atividade da luciferase com uma metade da resposta máxima 43 que ocorria a aproximadamente 2,3 nM. Ensaios repórter luciferase subsequentes utilizando vetores de adenovirus contendo apenas o elemento SRE ou apenas os elementos STAT produziram ativação do repórter detável apenas através das STAT.

Para determinar se outras citocinas atuam em conjunto com a IL-20, as células HaCaT foram tratadas com a IL-20 sozinha ou em combinação com uma única dose sub-máxima de EGF, IL-Ιβ, ou TNFa. Na presença de cada uma destas três proteínas, o tratamento com IL-20 resultou num aumento dependente da dose na atividade da luciferase. A IL-20 em combinação com a IL-Ιβ resulta numa metade da resposta máxima de aproximadamente 0,5 nM, cerca de cinco vezes inferior do que com a IL-20 sozinha. ALém disso, a ativação do gene repórter é detetável a 0,1 nM da IL-20, uma dose que é pelo menos dez vezes inferior do que a dose necessária com a IL-20 sozinha.

As células BHK transfetadas com as subunidades do recetor IL-20RA, IL-20RB ou ambas, foram utilizadas para determinar se o emparelhamento do recetor foi necessário para a estimulação pela IL-20 da STAT-luciferase. Como foi o caso com os ensaios de ligação, apenas as células transfetadas com ambas subunidades do recetor responderam à IL-20 e fizeram-no com uma metade da resposta máxima de 5,7 pM. Notou-se que a concentração da IL20 para a metade da resposta máxima nas células BHK é 400 vezes inferior à metade da resposta máxima nas células HaCaT. É provável que uma concentração inferior da IL-20 seja necessária para metade da resposta máxima nas células BHK, quando comparado com as células HaCaT, devido a níveis mais elevados do recetor nos transfetantes BHK do recetor da IL-20.

Um ensaio de translocação nuclear foi utilizado para identificar proteínas STAT envolvidas na ação da IL-20. Ambas células HaCaT, com recetores da IL-20 endógenos, e células BHK transfetadas com IL-20RA e IL-20RB, foram 44 tratados com proteína da IL-20 e a translocação de fatores de transcrição STAT3 e STAT1 do citoplasma para o núcleo foi testada por imunofluorescência.

Nas células HaCaT não estimuladas, a coloração pelos STAT3 foi predominantemente no citosol. 0 tratamento das células HaCaT com IL-20 resultou numa acumulação distinta dos STAT3 no núcleo. A translocação nuclear dos STAT3 em resposta a concentrações crescentes da IL-20 ocorreu com a metade da concentração máxima da IL-20 de 7 nM. Contrastando com a translocação dos STAT3, as células HaCaT tratadas com IL-20 não mostraram qualquer acumulação nuclear detetável de STAT1.

As células BHK transfetadas com IL-20RA e IL-20RB foram utilizadas para confirmar que o recetor da IL-20 foi necessário para a estimulação pela IL-20 da translocação nuclear dos STAT3. Nas células BHK que careciam do recetor da IL-20, os STAT3 permaneceram citosólicos após o tratamento com IL-20. Por oposição, nas células BHK transfetadas com recetor da IL-20, os STAT3 translocaram-se para o núcleo em resposta à IL-20. De novo, STAT1 permaneceram citosólicos independentemente do tratamento por IL-20 ou da expressão do recetor da IL-20. Concluímos que o recetor da IL-20 é necessário para a ativação dos STAT3 mediada pela IL-20. 45 LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> ZymoGenetics. Inc. <120> Método para tratar a inflamação

<130> 99-108PC <150> 09/47 0.898 <151> 23-12-1999 <150> 60/21 3,341 <151> 22-06-2000 <160> 72

<170> FastSEQ para Windows Versão 3.0 <210> 1 <211> 176 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1

Met Lys Ala Ser Ser Leu Ala Phe Ser Leu Leu Ser Ala Ala Phe Tyr 1 5 10 15 Leu Leu Trp Thr Pro Ser Thr Gly Leu Lys Thr Leu Asn * Leu Gly Ser 20 25 30 Cys Vai Ile Ala Thr Asn Leu Gin Glu Ile Arg Asn Gly Phe Ser Asp 35 40 45 Ile Arg Gly Ser Vai Gin Ala Lys Asp Gly Asn Ile Asp Ile Arg Ile 50 55 60 Leu Arg Arg Thr Glu Ser Leu Gin Asp Thr Lys Pro Ala Asn Arg Cys 65 70 75 80 Cys Leu Leu Arg His Leu Leu Arg Leu Tyr Leu Asp Arg Vai Phe Lys 85 90 95 Asn Tyr Gin Thr Pro Asp His Tyr Thr Leu Arg Lys Ile Ser Ser Leu 100 105 110 Ala Asn Ser Phe Leu Thr Ile Lys Lys Asp Leu Arg Leu Cys His Ala 115 120 125 His Met Thr Cys His Cys Gly Glu Glu Ala Met Lys Lys Tyr Ser Gin 130 135 140

Ile Leu Ser His Phe Glu Lys Leu Glu Pro Gin Ala Ala Vai Vai Lys 145 150 155 160

Ala Leu Gly Glu Leu Asp Ile Leu Leu Gin Trp Met Glu Glu Thr Glu 165 170 175 4 6 <210> 2

<211> 152 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2

Leu Lys Thr Leu Asn Leu Gly Ser Cys Vai Ile Ala Thr Asn Leu Gin 1 5 10 15 Glu Ile Arg Asn Gly Phe Ser Asp ile Arg Gly Ser Vai Gin Ala Lys 20 25 30 Asp Gly Asn Ile ASp Ile Arg Ile Leu Arg Arg Thr Glu Ser Leu Gin 35 40 45 Asp Thr Lys Pro Ala Asn Arg Cys Cys Leu Leu Arg His Leu Leu Arg 50 55 60 Leu Tyr Leu Asp Arg Vai Phe Lys Asn Tyr Gin Thr Pro Asp His Tyr 65 70 75 80 Thr Leu Arg Lys Ile Ser Ser Leu Ala Asn Ser Phe Leu Thr Ile Lys 85 90 95 Lys Asp Leu Arg Leu Cys His Ala H1s Met Thr Cys His Cys Gly Glu 100 105 110 Glu Ala Met Lys Lys Tyr Ser Gin Ile Leu Ser His Phe GlU Lys Leu 115 120 125 Glu Pro Gin Ala Ala Vai Vai Lys Ala Leu Gly Glu Leu Asp Ile Leu 130 135 140 Leu Gin Trp Met Glu Glu Thr Glu 145 150

<210> 3 <211> 151 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3

Met Lys Ala Ser Ser Leu Ala Phe Ser Leu Leu Ser Ala Ala Phe Tyr 1 5 10 15

Leu Leu Trp Thr Pro Ser Thr Gly Leu Lys Thr Leu Asn Leu Gly Ser 20 25 30 47

Cys Vai Ile Ala Thr Asn Leu Gin Glu lie Arg Asn Gly Phe Ser Asp 35 40 45 lie Arg Gly Ser Vai Gin Ala Lys Asp Gly Asn Ile Asp Ile Arg Ile 50 55 60 Leu Arg Arg Thr Glu Ser Leu Gin Asp Thr Lys Pro Ala Asn Arg Cys 6S 70 75 80 Cys Leu Leu Arg His Leu Leu Arg Leu Tyr Leu Asp Arg Vai Phe Lys 85 90 95 Asn Tyr Gin Thr Pro Asp His Tyr Thr Leu Arg Lys Ile Ser Ser Leu 100 105 110 Ala Asn Ser Phe Leu Thr Ile Lys Lys Asp Leu Arg Leu Cys Leu Glu 115 120 125 Pro Gin Ala Ala Vai Vai Lys Ala Leu Gly Glu Leu Asp Ile Leu Leu 130 135 140 61 n Trp Met Glu Glu Thr Glu 145 150

<210> 4 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4

Leu Lys Thr Leu Asn Leu Gly Ser Cys Vai Ile Ala Thr Asn Leu Gin 1 5 10 15 Glu Ile Arg Asn Gly Phe Ser Asp Ile Arg Gly Ser Vai Gin Ala Lys 20 25 30 Asp Gly Asn Ile Asp Ile Arg Ile Leu Arg Arg Thr Glu Ser Leu Gin 35 40 45 Asp Thr Lys Pro Ala Asn Arg Cys Cys Leu Leu Arg His Leu Leu Arg 50 55 60 Leu Tyr Leu Asp Arg Vai Phe Lys Asn Tyr Gin Thr Pro Asp His Tyr 65 70 75 80 Thr Leu Arg Lys Ile Ser Ser Leu Ala Asn Ser Phe Leu Thr Ile Lys 85 90 95 Lys Asp Leu Arg Leu Cys Leu Glu Pro Gin Ala Ala Vai Vai Lys Ala 100 105 110 Leu Gly Glu Leu Asp Ile Leu Leu Gin Trp Met Glu Glu Thr Glu 115 120 125

<210> 5 <211> 176 <212> PRT <213> Mus musculis 48 <4Ο0> 5

Met Lys Gly Phe Gly Leu Ala Phe Gly Leu Phe Ser Ala Val Gly Phe 1 5 10 15 Leu Leu Trp Thr Pro Leu Thr Gly Leu Lys Thr Leu His Leu Gly Ser 20 25 30 Cys Val Ile Thr Ala Asn Leu Gin Ala Ile Gin Lys Glu Phe Ser Glu 35 40 45 Ile Arg Asp Ser Val Gin Ala Glu Asp Thr Asn 11 e Asp Ile Arg Ile 50 55 60 Leu Arg Thr Thr Glu Ser Leu Lys Asp Ile Lys Ser Leu Asp Arg Cys 65 70 75 80 Cys Phe Leu Arg His Leu Val Arg Phe Tyr Leu Asp Arg Val Phe Lys 85 90 * 95 Vai Tyr Gin Thr Pro Asp His HiS Thr Leu Arg Lys Ile Ser Ser Leu 100 105 110 Ala Asn Ser Phe Leu Ile Ile Lys Lys Asp Leu Ser Val Cys His Ser 115 120 125 His Met Ala Cys His Cys Gly Glu Glu Ala Met Glu Lys Tyr Asn Gin 130 135 140 Ile Leu Ser His Phe Ile Glu Leu Glu Leu Gin Ala Ala Val Val Lys 145 150 155 160 Ala Leu Gly Glu Leu Gly Ile Leu Leu Arg Trp Met Glu Glu Met Leu 165 170 175 <210: > 6 <211: > 152 <212: > PRT <213: > Mus muscul: Ls <400: > 6 Leu Lys Thr Leu His Leu Gly Ser Cys Val Ile Thr Ala Asn Leu Gin 1 5 . , 10 15 Ala Ile Gin Lys Glu Phe Ser Glu Ile Arg Asp Ser Val Gin Ala Glu 20 25 30 Asp Thr Asn Ile Asp Ile Arg Ile Leu Arg Thr Thr Glu Ser Leu Lys 35 40 45 Asp Ile Lys Ser Leu Asp Arg Cys Cys Phe Leu Arg His Leu Val Arg 50 55 60 Phe Tyr Leu Asp Arg Val Phe Lys Val Tyr Gin Thr Pro Asp His His 65 70 75 80 49

Th r Leu Arg Lys Ile Ser Ser Leu 85 Lys Asp Leu Ser Vai Cys His Ser 100 61u Ala Met Glu Lys Tyr Asn Gin 115 120 Glu Leu Gin Ala Ala Vai Vai Lys 130 135 Leu Arg Trp Met Glu Glu Met Leu 145 150

<210> 7 <211> 144 <212> PRT <213> Mus musculis < 4 Ο Ο > 7

Ala Asn Ser Phe Leu Ile Ile Lys 90 95 His Met Ala Cys His Cys Gly Glu 105 110 Ile Leu Ser His Phe Ile Glu Leu 125 Ala Leu Gly Glu Leu Gly Ile Leu 140

Cys Vai Ile Thr Ala Asn Leu Gin 1 5 Ile Arg Asp Ser Vai Gin Ala Glu 20 Leu Arg Thr Thr Glu Ser Leu Lys 35 40 Cys Phe Leu Arg His Leu Vai Arg 50 55 Vai Tyr Gin Thr Pro Asp His His 65 70 Ala Asn Ser Phe Leu lie Ile Lys 85 His Met Ala Cys His Cys Gly Glu 100 Ile Leu Ser His Phe Ile Glu Leu 115 120 Ala Leu Gly Glu Leu Gly Ile Leu 130 135

<210> 8 <211> 154 <212> PRT

Ala Ile Gin Lys Glu Phe Ser Glu 10 15 Asp Thr Asn Ile Asp Ile Arg lie 25 30 Asp Ile Lys Ser Leu Asp Arg Cys 45 Phe Tyr Leu Asp Arg Vai Phe lys 60 Thr Leu Arg Lys Ile Ser Ser Leu 75 80 Lys Asp Leu Ser Vai Cys His Ser 90 95 Glu Ala Met Glu Lys Tyr Asn Gin 105 110 Glu Leu Gin Ala Ala Vai Vai Lys 125 Leu Arg Trp Met Glu Glu Met Leu 140 <213> Mus musculis <400> 8 50

Met Lys Gly Phe Gly Leu Ala Phe Gly Leu Phe Ser Ala Vai Gly Phe 1 5 10 15 Leu Leu Trp Thr Pro Leu Thr Gly Leu Lys Thr Leu His Leu Gly Ser 20 25 30 Cys Vai Ile Thr Ala Asn Leu Gin Ala Ile Gin Lys Glu Phe Ser Glu 35 40 45 lie Arg Asp Ser Vai Ser Leu Asp Arg Cys Cys Phe Leu Arg His Leu 50 55 60 Vai Arg Phe Tyr Leu Asp Arg Vai Phe Lys Vai Tyr Gin Thr Pro Asp 65 70 75 80 His His Thr Leu Arg Lys Ile Ser Ser Leu Ala Asn Ser Phe Leu Ile 85 90 95 Ile Lys Lys Asp Leu Ser Vai Cys His Ser His Met Ala Cys His Cys 100 105 110 Gly Glu Glu Ala Met Glu i Lys ; Tyr Asn i Gin Ile * Leu Ser His Phe Ile 115 120 125 Glu Leu Glu Leu Gin Ala i Ala i Vai Vai Lys Ala t Leu ! Gly Glu i Leu i Gly 130 135 140 Ile Leu Leu Arg Trp Met ; Glu i Glu ! Met : Leu 145 150 <210> 9 <211> 130 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 9 Leu Lys Thr Leu His Leu Gly Ser Cys Vai Ile Thr Ala Asn Leu Gin 1 5 10 15 Ala Ile Gin Lys Glu Phe Ser Glu Ile Arg Asp Ser Vai Ser Leu Asp 20 25 30 Arg Cys Cys Phe Leu Arg His Leu Vai Arg Phe Tyr Leu Asp Arg Vai 35 40 45 Phe Lys Vai Tyr Gin Thr Pro ASp His His Thr Leu Arg Lys Ile Ser 50 55 60 Ser Leu Ala Asn Ser Phe Leu Ile Ile Lys Lys Asp Leu Ser Vai Cys 65 70 75 80 His Ser His Met Ala Cys His Cys Gly Glu Glu Ala Met Glu Lys Tyr 85 90 95 Asn Gin Ile Leu Ser His Phe Ile Glu Leu Glu Leu Gin Ala Ala Vai 100 105 110 Vai Lys Ala Leu Gly Glu Leu Gly Ile Leu Leu Arg Trp Met Glu Glu 115 120 125 51

Met Leu 130 <210> 10 <2ll> 3516 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0> <221> CDS <222> (237) . . . (1895) <4 0 0> 10 tccagctggg tagccggggg agcgcgcgtg ggggctccgc gagtcgctcg cccttggttt 60 ctggggaagc ctgggggacg cggctgtggc ggaggcgccc tgggactcag gtcgcctgga 120 gcgtggcacg cagagcccca ggcgcggagc tgaggccgcg cggccgcgct tggccccagc 180 gggcgtggga ctgagcagtc tgctgccccc cgacatgtga cccagccccg ccgccc atg 239

Met 1 cgg gct ccc ggc cgc ccg gcc ctg cgg ccg ctg ccg ctg ccg ccg ctg 287 Arg Ala Pro Gly Arg Pro Ala Leu Arg Pro Leu Pro Leu Pro Pro Leu 5 10 15 ctg ctg ttg ctc ctg gcg gcg cct tgg gga cgg gca gtt ccc tgt gtc 335 Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Pro Trp Gly Arg Ala Val Pro Cys Val 20 25 30 tct ggt ggt ttg cct aaa CCt gca aac ate acc ttc tta tcc ate aac 383 Ser 61 y Gly Leu Pro Lys Pro Ala Asn Ile Thr Phe Leu Ser Ile Asn 35 40 45 atg aag aat gtc cta caa tgg act cca cca gag ggt ctt caa gga gtt 431 Met Lys Asn Vai Leu Gin Trp Thr Pro Pro Glu Gly Leu Gin Gly Val 50 55 60 65 aaa gtt act tac act gtg cag tat ttc ata tat ggg caa aag aaa tgg 479 Lys Val Thr Tyr Thr Val Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly Gin Lys Lys Trp 70 75 80 ctg aat aaa tca gaa tgc aga aat ate aat aga acc tac tgt gat ctt 527 Leu Asn Lys Ser Glu Cys Arg Asn Ile Asn Arg Thr Tyr Cys Asp Leu 85 90 95 52 tct gct gaa act tct gac tac gaa cac cag tat tat gcc aaa gtt aag 575 Ser Ala Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr Ala Lys Val Lys 100 105 110 gcc att tgg gga aca aag tgt tcc aaa tgg gct gaa agt gga cgg ttc 623 Ala lie Trp Gly Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu Ser Gly Arg Phe 115 120 125 tat cct ttt tta gaa aca caa att ggc cca cca gag gtg gea ctg act 671 Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin Ile Gly Pro Pro Glu Val Ala Leu Thr 130 135 140 145 aca gat gag aag tcc att tct gtt gtc ctg aca gct cca gag aag tgg 719 Thr Asp Glu Lys Ser Ile Ser Val Val Leu Thr Ala Pro Glu Lys Trp 150 155 160 aag aga aat cca gaa gac ctt cct gtt tcc atg caa caa ata tac tcc 767 Lys Arg Asn Pro Glu Asp Leu Pro Val Ser Met Gin Gin Ile Tyr Ser 165 170 175 aat ctg aag tat aac gtg tct gtg ttg aat act aaa tca aac aga acg 815 Asn Leu Lys Tyr Asn Val Ser val Leu Asn Thr Lys Ser Asn Arg Thr 180 185 190 tgg tcc cag tgt gtg acc aac cac acg ctg gtg ctc acc tgg ctg gag 863 Trp Ser Gin Cys Vai Thr Asn His Thr Leu Val Leu Thr Trp Leu Glu 195 200 205 ccg aac act ctt tac tgc gta cac gtg gag tcc ttc gtc cca 999 ccc 911 Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Val His Val Glu Ser Phe Val Pro Gly Pro 210 215 220 225 cct cgc cgt gct cag cct tct gag aag cag tgt gcc agg act ttg aaa 959 Pro Arg Arg Ala Gin Pro Ser Glu Lys Gin Cys Ala Arg Thr Leu Lys 230 235 240 gat caa tca tca gag ttc aag gct aaa ate ate ttc tgg tat gtt ttg 1007 Asp Gin Ser Ser Glu Phe Lys Ala Lys Ile Ile Phe Trp Tyr Val Leu 245 250 255 ccc ata tct att acc gtg ttt ctt ttt tct gtg atg ggc tat tcc ate 1055 53

Pro Ile Ser Ile Thr Vai Phe Leu Phe Ser Vai Met Gly Tyr Ser Ile 260 265 270 tac cga tat ate cac gtt ggc aaa gag aaa cac cca gea aat ttg att 1103 Tyr Arg Tyr Ile His Vai Gly Lys Glu Lys His Pro Ala Asn Leu Ile 275 2Θ0 285 ttg att tat gga aat gaa ttt gac aaa aga ttc ttt gtg cct gct gaa 1151 Leu Ile Tyr Gly Asn Glu Phe Asp Lys Arg Phe Phe Vai Pro Ala Glu 290 295 300 305 aaa ate gtg att aac ttt ate acc ctc aat ate teg gat gat tet aaa 1199 Lys Ile Vai Ile Asn Phe Ile Thr Leu Asn Ile Ser Asp Asp Ser Lys 310 315 320 att tet cat cag gat atg agt tta ctg gga aaa age agt gat gta tcc 1247 Ile Ser His Gin Asp Met Ser Leu Leu Gly Lys Ser Ser Asp Vai Ser 325 330 335 age Ctt aat gat cct cag ccc age ggg aac ctg m ccc cct cag gag 1295 Ser Leu Asn Asp Pro Λ1- Ulíl Pro Ser Gly Asn Leu Arg Pro Pro 61n Glu 340 345 350 gaa gag gag gtg aaa cat tta ggg tat gct teg cat ttg atg gaa att 1343 Glu Glu Glu Vai Lys His Leu Gly Tyr Ala Ser His Leu Met Glu Ile 355 360 365 ttt tgt gac tet gaa gaa aac acg gaa ggt act tet ttc acc cag caa 1391 Phe Cy$ Asp Ser Glu Glu Asn Thr Glu Gly Thr Ser Phe Thr Gin Gin 370 375 3B0 385 gag tcc ctc age aga aca ata ccc ccg gat aaa aca gtc att gaa tat 1439 Glu Ser Leu Ser Arg Thr Ile Pro Pro Asp Lys Thr Vai Ile Glu Tyr 390 395 400 gaa tat gat gtc aga ÔCC act gac att tgt gcg ggg cct gaa gag cag 1487 Glu Tyr Asp Vai Arg Thr Thr Asp Ile Cys Ala Gly Pro Glu Glu Gin 405 410 415 gag ctc agt ttg cag gag gag gtg tcc aca caa gga aca tta ttg gag 1535 Glu Leu Ser Leu Gin Glu Glu Vai Ser Thr Gin Gly Thr Leu Leu Glu 420 425 430 54 tcg cag gca gcg ttg gca gtc ttg ggc ccg caa acg tta cag tac tca 1583 Ser Gin Ala Ala Leu Ala Vai Leu Gly Pro Gin Thr Leu Gin Tyr Ser 435 440 445 tac acc cct cag CtC caa gac tta gac ccc ctg gcg cag 9ag cac aca 1631 Tyr Thr Pro Gin Leu Gin Asp Leu Asp Pro Leu Ala Gin Glu His Thr 450 455 460 465 gac tcg gag gag 999 ccg 9^9 gaa gag cca tcg acg acc ctg gtc gac 1679 Asp Ser Glu Glu Gly Pro Glu Glu Glu Pro Ser Thr Thr Leu vai Asp 470 475 480 tgg gat ccc caa act ggc agg ctg tgt att cct tcg ctg tcc age ttc 1727 Trp Asp Pro Gin Thr Gly Arg Leu Cys lie Pro Ser Leu Ser Ser Phe 485 490 495 gac cag gat tca gag ggc tgc gag cct tct gag ggg gat ggg ctc gga 1775 Asp Gin Asp Ser Glu Gly Cys Glu Pro Ser Glu Gly Asp Gly Leu Gly 500 505 510 gag gag ggt ctt cta tct aga ctc tat gag gag ccg gct cca gac agg 1823 Glu Glu Gly Leu Leu Ser Arg Leu Tyr Glu Glu Pro Ala Pro Asp Arg 515 520 525 cca cca gga gaa aat gaa acc tat ctc atg caa ttc atg gag gaa tgg 1871 Pro Pro Gly Glu Asn Glu Thr Tyr Leu Met Gin Phe Met Glu Glu Trp 530 535 540 545 999 tta tat gtg cag atg gaa aac tgatgccaac ; acttcctttt gccttttgtt 1925 Gly Leu Tyr Vai Gin Met Glu Asn 550 tcctgtgcaa acaagtgagt cacccctttg atcccagcca taaagtacct gggatgaaag 1985 aagttttttc cagtttgtca gtgtctgtga gaattactta tttcttttct ctattctcat 2045 agcacgtgtg tgattggttc atgcatgtag gtctcttaac aatgatggtg ggcctctgga 2105 gtccaggggc tggccggttg ttctatgcag agaaagcagt caataaatgt ttgccagact 2165 gggtgcagaa tttattcagg tgggtgtact ctggcctctt ggttcattat tttcaaacaa 2225 gcacacttgt acaattattt tctgggtact tcccatatgc acatagcact gtaaaaaata 2285 tttcccaaag atcactcatt ttataaatac cactttttca gaattgggtt tattgcgagc 2345 aggaggagat acttaaaaca tgcacatata ccaggttggt ggtaagttgg tcacatgtga 2405 aaacctcaac tatttaatca tcatgattca tattttgagt gaatacatca ggcacagacc 2465 ttcatgatat cacacactct tggctacttt aagaggccat ctttaatact ttatgagtag 2525 ttctggagtg taaacataaa cgagtattct tttgtagtca gaaaagtgtc ctctcaataa 2585 55 tttagtaggg gcttattgtc tctcaaaact aacctaaaag aaaatgacac attttataat 2645 agaatattac atttatttct ggaagtgtgt tttcaaaaag atatttacat agtctgtaaa 2705 ctagaaagtg ttaggtaaag ctctaggtta ctgtgttact attataatat taaacattcg 2765 aataggcagt cgttcaaaga ctctttggaa tatctatgaa tgaatatect ctattcttat 2825 aatattaaaa cccataagta aatataggac atacaagaga aatgagttaa atgactatgt 2Θ85 aagggagagt ttattaaaat ttgatgaaat ttactgtagg aactaaacta tgccataaaa 2945 caatagcttt ctagttcatt tccagtaact gttcccatct cctttaccac ttgttaagaa 3005 aattaaattc ttcagtcacg ctgctttaaa atgggacaaa atctattaag ttgaaccata 3065 tataattgtg gatatttggc tgtttttaat ctgacaagca gtaacttcat atggtttgcc 3125 ttaatatata tttgttttag tcatgaactc ataatccatt gatgctcttt catgagaaga 3185 gatatgaccc atatttcctt attgatatta ttggtacagg cagacaaccc tggtaggaga 3245 gatggattct ggggtcatga cctttcgtga ttatccgcaa atgcaaacag tttcagatct 3305 aatggtttaa tttagggagt aattatatta atcagagtgt tctgttattc tcaatcttta 3365 tagaaacgat tctgctggtt ttgaagaaca gatgtattac actaactgta aaagtagttc 3425 aagagtgaga aagaataaat tgttattaag agcaaaagaa aaataaagtg attgatgata 3485 aaaaaaaaaa aaaaaaagcg gccgcctcga g 3516

<210> 11 <211> 553 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 11

Met Arg Ala Pra Gly Arg Pro Ala Leu Arg Pro Leu Pro Leu Pro Pro 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Pro Trp Gly Arg Ala Vai Pro Cys 20 25 30 Vai Ser Gly Gly Leu Pro Lys Pro Ala Asn Ile Thr Phe Leu Ser Ile 35 40 45 Asn Met Lys Asn Vai Leu Gin Trp Thr Pro Pro Glu Gly Leu Gin Gly 50 55 60 Vai Lys Vai Thr Tyr Thr Vai Gin Tyr Phe lie Tyr Gly Gin Lys Lys 65 70 75 80 Trp Leu Asn Lys Ser Glu Cys Arg Asn Ile Asn Arg Thr Tyr Cys Asp 85 90 95 Leu Ser Ala Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr Ala Lys Vai 100 105 110 Lys A7a Ile Trp Gly Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu Ser Gly Arg 115 120 125 Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin lie Gly Pro Pro Glu Vai Ala Leu 130 135 140 Thr Thr Asp Glu Lys Ser Ile Ser Vai Vai Leu Thr Ala Pro Glu Lys 145 150 155 160 56

Trp Lys Arg Asn Pro Glu Asp Leu Pro Vai Ser Met Gin Gin Ile Tyr 165 170 175 Ser Asn Leu Lys Tyr Asn Vai Ser Vai Leu Asn Thr Lys Ser Asn Arg 180 185 190 Thr Trp Ser Gin Cys Vai Thr Asn His Thr Leu Vai Leu Thr Trp Leu 195 200 205 Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Vai His Vai Glu Ser Phe Vai Pro Gly 210 215 220 Pro Pro Arg Arg Ala Gin Pro Ser Glu Lys Gin Cys Ala Arg Thr Leu 225 230 235 240 Lys Asp Gin Ser Ser Glu Phe Lys Ala Lys ile Ile Phe Trp Tyr Vai 245 250 255 Leu Pro Ile Ser Ile Thr Vai Phe Leu Phe Ser Vai Met Gly Tyr Ser 260 265 270 Ile Tyr Arg Tyr Ile His Vai Gly Lys Glu Lys His Pro Ala Asn Leu 275 280 285 - Ile Leu Ile Tyr Gly Asn Glu Phe Asp Lys Arg Phe Phe Vai Pro Ala 290 295 300 Glu Lys Ile Vai Ile Asn Phe Ile Thr Leu Asn Ile Ser Asp Asp Ser 305 310 315 320 Lys Ile Ser His Gin Asp Met Ser Leu Leu Gly Lys Ser Ser Asp Vai 325 330 335 Ser Ser Leu Asn Asp Pro Gin Pro Ser Gly Asn Leu Arg Pro Pro Gin 340 345 350 Glu Glu Glu Glu Vai Lys His Leu Gly Tyr Ala Ser His Leu Met Glu 355 360 365 Ile Phe Cys Asp Ser Glu Glu Asn Thr Glu Gly Thr Ser Phe Thr Gin 370 375 380 Gin Glu Ser Leu Ser Arg Thr Ile Pro Pro Asp Lys Thr Vai Ile Glu 385 390 395 400 Tyr Glu Tyr Asp Vai Arg Thr Thr Asp Ile Cys Ala Gly Pro Glu Glu 405 410 415 Gin Glu Leu Ser Leu Gin Glu Glu Vai Ser Thr Gin Gly Thr Leu Leu 420 425 430 Glu Ser Gin Ala Ala Leu Ala Vai Leu Gly Pro Gin Thr Leu Gin Tyr 435 440 445 Ser Tyr Thr Pro Gin Leu Gin Asp Leu Asp Pro Leu Ala Gin Glu His 450 455 460 Thr Asp Ser Glu Glu Gly Pro Glu Glu Glu Pro Ser Thr Thr Leu Vai 465 470 475 480 Asp Trp Asp Pro Gin Thr Gly Arg Leu Cys Ile Pro Ser Leu Ser Ser 485 490 495 57

Phe Asp Gin Asp Ser Glu Gly Cys Glu Pro Ser Glu Gly Asp Gly Leu 500 505 510 Gly Glu Glu Gly Leu Leu Ser Arg Leu Tyr Glu Glu Pro Ala Pro Asp 515 520 525 Arg Pro Pro Gly Glu Asn Glu Thr Tyr Leu Met Gin Phe Met Glu Glu 530 535 540 Trp Gly Leu Tyr Val Gin Met Glu Asn 545 550 <2iO> : L2 <2ii> : 221 <212> PRT <213> Homo sapj Íens <4oo> : L2 Vai Pro Cys Val Ser Gly Gly Leu Pro Lys Pro Ala Asn Ile Thr Phe 1 5 10 15 Leu Ser Ile Asn Met Lys Asn Val Leu Gin Trp Thr Pro Pro Glu Gly 20 25 30 Leu Gin Gly Val Lys Val Thr Tyr Thr Val Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly 35 40 45 Gin Lys Lys Trp Leu Asn Lys Ser Glu Cys Arg Asn Ile Asn Arg Thr 50 55 60 Tyr Cys Asp Leu Ser Ala Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr 65 70 75 80 Ala Lys Vai Lys Ala Ile Trp Gly Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu 85 90 95 Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin Ile Gly Pro Pro Glu 100 105 110 Vai Ala Leu Thr Thr Asp Glu Lys Ser Ile Ser Val Val Leu Thr Ala 115 120 125 Pro Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro Glu Asp Leu Pro Val Ser Met Gin 130 135 140 Gin Ile Tyr Ser Asn Leu Lys Tyr Asn Val Ser Val Leu Asn Thr Lys 145 150 155 160 Ser Asn Arg Thr Trp Ser Gin Cys Val Thr Asn His Thr Leu Val Leu 165 170 175 Thr Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Val His Val Glu Ser Phe 180 185 190 Vai Pro Gly Pro Pro Arg Arg Ala Gin Pro Ser Glu Lys Gin Cys Ala 195 200 205 Arg Thr Leu Lys Asp Gin Ser Ser Glu Phe Lys Ala Lys 210 215 220 58

<210 > 13 <211> 971 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> 59

<221> CDS <222> (18) ... (950) <400> 13 50 gaattcgagt ctaccaa atg cag act ttc aca atg gtt cta gaa gaa ate Met Gin Thr Phe Thr Met Vai Leu Glu Glu IIe 1 5 10 tgg aca agt ctt ttc atg tgg ttt ttc tac gea ttg att cca tgt ttg Trp Thr Ser Leu Phe Met Trp Phe Phe Tyr Ala Leu Ile Pro Cys Leu 15 20 25 ctc aca gat gaa gtg gee att ctg cct gee cct cag aac ctc tet gta Leu Thr Asp Glu Vai Ala Ile Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Val 30 35 40 ctc tea acc aac atg aag cat ctc ttg atg tgg age cca gtg ate gcg Leu Ser Thr Asn Met Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro Val Ile Ala 45 50 55 cct gga gaa aca gtg tac tat tet gtc gaa tac cag ggg gag tac gag Pro Gly Glu Thr Val Tyr Tyr Ser Val Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu 60 65 70 ♦ 75 age ctg tac acg age cac ate tgg ate ccc age age tgg tgc tea etc Ser Leu Tyr Thr Ser His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu 80 85 90 act gaa ggt cct dag tgt gat gtc act gat gac ate acg gee act 9tg Thr Glu Gly Pro Glu Cys Asp vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Val 95 100 105 cca tac aac ctt cgt gtc agg gee aca ttg gge tea cag acc tea gee Pro Tyr Asn Leu Arg Val Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala 110 115 120 98 146 194 242 290 338 386 60 tgg age ate ctg aag cat ccc ttt aat aga aac tea acc ate ctt acc 434 Trp Ser Ile Leu Lys His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr 125 130 135 cga cct 9gg atg gag ate acc aaa gat ggc ttc cac ctg gtt att gag 482 Arg Pro Gly Met Glu Ile Thr Lys Asp Gly Phe His Leu Val Ile Glu 140 145 150 155 ctg gag gac ctg ggg ccc cag ttt gag ttc ctt gtg gcc tac tgg agg 530 Leu Glu Asp Leu Gly Pro Gin Phe Glu Phe Leu Val Ala Tyr Trp Arg 160 165 170 agg gag cct 99t gcc gag gaa cat gtc aaa atg gtg agg agt ggg ggt 578 Arg Glu Pro Gly Ala Glu Glu His Val Lys Met Val Arg Ser Gly Gly 175 180 185 att cca gtg cac cta gaa acc atg gag cca ggg gct gea tac tgt gtg 626 Ile Pro Vai H1s Leu Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Val 190 195 200 aag gcc cag aca ttc gtg aag gcc att ggg agg tac age gcc ttc age 674 Lys Ala Gin Thr Phe Val Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser 205 210 215 cag aca gaa tgt gtg gag gtg caa gga gag gcc att ccc ctg gta ctg 722 Gin Thr Glu Cys Vai Glu Val Gin Gly Glu Ala Ile Pro Leu Val Leu 220 225 230 235 gcc ctg ttt gcc ttt gtt ggc ttc atg ctg ate ctt gtg gtc gtg cca 770 Ala Leu Phe Ala Phe Vai Gly Phe Met Leu Ile Leu Val Val Val Pro 240 245 250 ctg ttc gtc tgg aaa atg 99c cgg ctg ctc cag tac tcc tgt tgc ccc 818 Leu Phe Vai Trp Lys Met Gly Arg Leu Leu Gin Tyr Ser Cys Cys Pro 255 260 265 gtg gtg gtc ctc cca gac acc ttg aaa ata acc aat tea ccc cag aag 866 Vai Vai Vai Leu Pro Asp Thr Leu Lys Ile Thr Asn Ser Pro Gin Lys 270 275 280 tta ate age tgc aga agg gag gag gtg gat gcc tgt gcc acg gct gtg 914 Leu Ile Ser Cys Arg Arg Glu Glu Val Asp Ala Cys Ala Thr Ala Val 285 290 295 61 atg tct cct gag gaa ctc ctc agg gcc tgg ate tea taggtttgcg 960

Het Ser Pro Glu Glu Leu Leu Arg Ala Trp Ile Ser 300 305 310 gaaggctcga g 971

<210> 14 <211> 311 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 14 62

Met Gin Thr Phe Thr Met Vai Leu Glu Glu Ile Trp Thr Ser Leu Phe 1 5 10 15 Met Trp Phe Phe Tyr Ala Leu Ile Pro Cys Leu Leu Thr Asp Glu Vai 20 25 30 Ala Ile Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Vai Leu Ser Thr Asn Met 35 40 45 Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro Vai Ile Ala Pro Gly Glu Thr Vai 50 55 60 Tyr Tyr Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu Tyr Thr Ser 65 70 75 80 His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu Gly Pro GlU 85 90 95 Cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Vai Pro Tyr Asn Leu Arg 100 105 110 Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser Ile Leu Lys 115 120 125 His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro Gly Met Glu 130 135 140 Ile Thr Lys Asp Gly Phe His leu Vai Ile Glu Leu Glu Asp Leu Gly 145 150 155 160 Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Arg Arg Glu Pro Gly Ala 165 170 175 Glu Glu His Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro Vai His Leu 180 185 190 Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Vai Lys Ala Gin Thr Phe 195 200 205 Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr Glu Cys Vai 210 215 220 Glu Vai Gin Gly Glu Ala Ile Pro Leu Vai Leu Ala Leu Phe Ala Phe 225 230 235 240 Vai Gly Phe Met Leu Ile Leu Vai Vai Vai Pro Leu Phe Vai Trp Lys 245 250 255 Met Gly Arg Leu Leu Gin Tyr Ser Cys Cys Pro vai Vai Vai Leu Pro 260 265 270 Asp Thr Leu lys Ile Thr Asn Ser Pro Gin Lys Leu Ile Ser Cys Arg 275 280 285 Arg Glu Glu Vai Àsp Ala Cys Ala Thr Ala Vai Met Ser Pro Glu Glu 290 295 300 Leu Leu Arg Ala Trp Ile Ser 305 310 <210 > 15 63

<211> 203 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 15

Asp 61u Vai Ala Ile Leu Pro 1 5

Thr Asn Met Lys His Leu Leu 20

Glu Thr Vai Tyr Tyr Ser Val 35 Tyr Thr Ser His Ile Trp Ile 50 55 Gly Pro Glu Cys Asp Val Thr 65 70 Asn Leu Arg Vai Arg Ala Thr 85 Ile Leu Lys His Pro Phe Asn 100 Gly Met Glu Ile Thr Lys Asp 115 Asp Leu Gly Pro Gin Phe Glu 130 135 Pro Gly Ala Glu Glu His Val 145 150 Vai H1s Leu Glu Thr Met Glu 165 Gin Thr Phe Vai Cys Ala Ile 180 Glu Cys Vai Glu Val Gin Gly 195

<210> 16 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 16 gogaattcga gtctaccaaa tgcagacttt cac <210> 17

Pro Gin Asn Leu Ser Vai Leu Ser 10 15 Trp Ser Pro Vai Ile Ala Pro Gly 25 30

Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu 45

Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu 60

Asp Ile Thr Ala Thr Vai Pro Tyr 75 80

Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser 90 95

Asn Ser Thr IIe Leu Thr Arg Pro 105 110

Phe Hts Leu Vai Ile Glu Leu Glu 125

Leu Vai Ala Tyr Trp Arg Arg Glu 140

Met Vai Arg Ser Gly Gly IIe Pro 155 160

Gly Ala Ala Tyr Cys Vai Lys Ala 170 175

Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr 185 190

Ala Ile Pro

<211> 32 <212> ADN <213> Homo sapiens 33 64 <4 Ο Ο > 17 cgctcgagcc ttccgcaaac ctatgagatc ca 32

<210> 18 <211> 1379 <212> ADN <213> Homo sapiens <220>

<221> CDS <222> (132)...(1034) <400> 18 tcgacccacg cgtccgcgct gcgactcaga cctcagctcc aacatatgca ttctgaagaa 60 agatggctga gátggacaga atgctttatt ttggaaagaa acaatgttct aggtcaaact 120 gagtctacca a atg cag act ttc aca atg gtt cta gaa gaa ate tgg aca 170

Met Gin Thr Phe Thr Met Vai Leu Glu Glu Ile Trp Thr 1 5 10 agt ctt ttc atg tgg ttt ttc tac gea ttg att cca tgt ttg ctc aca 218

Ser Leu Phe Met Trp Phe Phe Tyr Ala Leu Ile Pro Çys Leu Leu Thr 15 20 25 gat gaa gtg gee att ctg cet gee cct cag aac ctc tet gta ctc tea 266

Asp Glu Vai Ala Ile Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Vai Leu Ser 30 35 40 45 acc aac atg aag cat ctc ttg atg tgg age cca gtg ate gcg cct gga 314 65

Thr Asn Met Lys H1s Leu Leu Met Trp Ser Pro Val Ile Ala Pro Gly 50 55 60 gaa aca gtg tac tat tet gtc gaa tac cag 999 gag tac gag age ctg 362 Glu Thr Vai Tyr Tyr Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu 65 70 75 ta c acg age cac ate tgg ate ccc age age tgg tgc tea etc act gaa 410 Tyr Thr Ser His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr G1u 80 85 90 ggt cct gag tgt gat gtc act gat gac ate acg gee act gtg cca tac 458 Gly Pro Glu Cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Val Pro Tyr 95 100 105 aac Ctt cgt gtc agg gee aca ttg ggc tea cag acc tea gee tgg age 506 Asn Leu Arg Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser 110 115 120 125 ate ctg aag cat ccc ttt aat aga aac tea acc ate ctt acc cga cct 554 Ile Leu Lys His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro 130 135 140 ggg atg gag ate ccc aaa cat ggc ttc cac ctg gtt att gag ctg gag 602 Gly Met Glu lie Pro Lys His Gly Phe His Leu Val Ile Glu Leu Glu 145 150 155 gac ctg 999 ccc cag ttt gag ttc ctt gtg gee tac tgg acg agg gag 650 Asp Leu Gly Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Thr Arg Glu 160 165 170 cct ggt gee gag gaa cat gtc aaa atg gtg agg agt ggg ggt att cca 698 Pro Gly Ala Glu Glu His Vai Lys Met Val Arg Ser Gly Gly Ile Pro 175 180 185 gtg cac cta gaa acc atg gag cca ggg gct gea tac tgt gtg aag gee 746 Vai Hls Leu Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Val Lys Ala 190 195 200 205 cag aca ttc gtg aag gee att ggg agg tac age gee ttc age cag aca 794 Gin Thr Phe Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr 210 215 220 66 gaa tgt gtg gag gtg caa gga ga9 gcc att ccc ctg gta ctg gcc ctg 842 Glu Cys Vai Glu Val Gin Gly Glu Ala Ile Pro Leu Val Leu Ala Leu 225 230 235 ttt gcc ttt gtt ggc ttc atg ctg ate ctt gtg gtc gtg cca ctg ttc 890 Phe Ala Phe Vai Gly Phe Met Leu Ile Leu val Val Val Pro Leu Phe 240 245 250 gtc tgg aaa atg ggc cgg ctg ctc cag tac tcc tgt tgc ccc gtg gtg 938 Vai Trp Lys Met Gly Arg Leu Leu Gin Tyr Ser Cys Cys Pro Val Val 255 260 265 gtc ctc cca gac acc ttg aaa ata acc aat tea ccc cag gtt aat cag 986 Vai Leu Pro Asp Thr Leu Lys Ile Thr Asn Ser Pro Gin Val Asn Gin 270 275 280 285 ctg cag aag 99a gga ggt gga tgc ctg tgc cac ggc tgt gat gtc tcc 1034 Leu Gin Lys Gly Gly Gly Gly Cys Leu Cys His Gly Cys Asp Val Ser 290 295 300

<210> 19 <211> 301 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19

Met Gin Thr Phe Thr Met Val Leu Glu Glu Ile Trp Thr Ser Leu Phe 1 5 10 15 Met Trp Phe Phe Tyr Ala Leu Ile Pro Cys Leu Leu Thr Asp Glu Val 20 25 30 Ala Ile Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Val Leu Ser Thr Asn Met 35 40 45 Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro Vãl Ile Ala Pro Gly Glu Thr Val 50 55 60 Tyr Tyr Ser Val Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu Tyr Thr Ser 65 70 75 80 1094 1154 1214 1274 1334 1382 tgaggaactc ctcagggcct gagaacctgg tctgcatgac ccacggacaa gggatgagag atcagaggca gggtggtttg tctagacttt gggcttccac ttcggtccca agttttctca ggatctcata tcaggtttgc atggaaacca tgaggggaca aagtaggaag agcctgttgt tctaacagaa caactgactg ttgcttggct gagcaaccct tctgtaatgg gggatcccta ggaagggccc aggtgaagcc agttgtgttt ctgttttccg ctacaagtct agaagcaacc aggctatggg ggttgtgacc gggaaaagtg acttcatccc caaaactg 67

His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu Gly Pro Glu 85 90 95 Cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Vai Pro Tyr Asn Leu Arg 100 105 110 Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser Ile Leu Lys 115 120 125 His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr lie Leu Thr Arg Pro Gly Met Glu 130 135 140 Ile Pro Lys His Gly Phe His Leu Vai Ile Glu Leu Glu Asp Leu Gly 145 150 155 160 Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Thr Arg Glu Pro Gly Ala 165 170 175 Glu Glu His Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly lie Pro Vai His Leu 180 185 190 Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Vai Lys Ala Gin Thr Phe 195 200 206 Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr Glu Cys Vai 210 215 220 Glu Vai Gin Gly Glu Ala Ile Pro Leu Vai Leu Ala Leu Phe Ala Phe 225 230 235 240 Vai Gly Phe Met Leu Ile Leu vai vai Vai Pro Leu Phe Vai Trp Lys 245 250 255 Met Gly Arg Leu Leu Gin Tyr Ser Cys Cys Pro Vai Vai Vai Leu Pro 260 265 270 Asp Thr Leu Lys Ile Thr Asn Ser Pro Gin Vai Asn Gin Leu Gin Lys 275 280 285 Gly Gly Gly Gly Cys Leu Cys His Gly Cys Asp Vai Ser 290 295 300

<210> 20 <211> 1081 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0> <221> CDS <222> (9) ... (1067) <400> 20 ggccggcc atg cag act ttc aca atg gtt cta gaa gaa ate tgg aca agt Met Gin Thr Phe Thr Het Vai Leu Glu Glu He Trp Thr Ser 1 5 10 50 68 ctt ttc atg tgg ttt ttc tac gea ttg att cca tgt ttg ctc aca gat 98 Leu Phe Met Trp Phe Phe Tyr Ala Leu Ile Pro Cys Leu Leu Thr Asp 15 20 25 30 gaa gtg gee att ctg cct gee cct cag aac ctc tet gta ctc tea acc 146 Glu Vai Ala Ile Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Val Leu Ser Thr 35 40 45 aac atg aag cat ctc ttg atg tgg age cca gtg ate gcg cct gga gaa 194 Asn Met Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro Val Ile Ala Pro Gly Glu 50 55 60 aca gtg tac tat tet gtc gaa tac cag ggg gag tac gag age ctg tac 242 Thr Vai Tyr Tyr Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu Tyr 65 70 75 acg age cac ate tgg ate ccc age age tgg tgc tea ctc act gaa ggt 290 Thr Ser His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu Gly 80 85 90 cct gag tgt gat gtc act gat gac ate acg gee act gtg cca tac aac 338 Pro Glu Cys Asp Vai Thr* • PI· Asp Am Tlfl λ «c Thr Ala TIlA 114« 11,1 να i Pro Tyr Asn 95 100 105 110 ctt cgt gtc agg gee aca ttg ggc tea cag acc tea gee tgg age ate 386 Leu Arg Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser Ile 115 120 125 ctg aag cat ccc ttt aat aga aac tea acc ate ctt acc cga cct 999 434 leu Lys His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr lie Leu Thr Arg Pro Gly 130 135 140 atg 939 ate ccc aaa cat ggc ttc cac ctg gtt att gag ctg gag gac 482 Met Glu Ile Pro Lys His Gly Phe His Leu Val Ile Glu Leu Glu Asp 145 150 155 ctg ggg ccc cag ttt gag ttc ctt gtg gee tac tgg acg agg gag cct 530 Leu Gly Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Thr Arg Glu Pro 160 165 170 99t gee gag gaa cat gtc aaa atg gtg 399 agt 999 ggt att cca gtg 578 Gly Ala Glu Glu His Vai Lys Met Val Arg Ser Gly Gly Ile Pro val 175 180 1B5 190 69 cac cta gaa acc atg gag cca ggg gct gea tac tgt gtg aag gee cag 626 His Leu Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Val Lys Ala Gin 195 200 205 aca ttc gtg aag gee att ggg agg tac age gee ttc age cag aca gaa 674 Thr Phe Uai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr Glu 210 215 220 tgt 9tg gag gtg caa gga gag gee gga ggt ggt ggc agt gga ggc ggc 722 Cys Vai Glu Val Gin Gly Glu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 225 230 235 ggt age gga 99C ggt ggc agt cga act gtg gct gea cca tet gtc ttc 770 61 y Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 240 245 250 ate ttc ccg cca tet gat gag cag ttg aaa tet gga act gee tet gtt 818 Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val 255 260 265 270 gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag gee aaa gta cag tgg 866 vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp 275 280 285 aag gtg gat aac gee etc caa teg ggt aac tcc cag gag agt gtc aca 914 Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr 290 295 300 gag cag gac age aag gac age acc tac age etc age age acc ctg acg 962 Glu 61n Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 305 310 315 ctg age aaa gea gac tac gag aaa cac aaa gtc tac gee tgc gaa gtc 1010 Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val 320 325 330 acc cat cag ggc ctg age teg ccc gtc aca aag age ttc aac agg gga 1058 Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly 335 340 345 350 939 tgt taa tctagaggcg egee 1081 Glu Cys * <210> 21 70

<211> 352 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21

Met Gin Thr Phe Thr Met Vai Leu Glu Glu Ile Trp Thr Ser Leu Phe 1 5 10 15 Het Trp Phe Phe Tyr Ala Leu Ile Pro Cys Leu Leu Thr Asp Glu Vai 20 25 30 Ala Ile Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Vai Leu Ser Thr Asn Met 35 40 45 Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro Vai Ile Ala Pro Gly Glu Thr Vai 50 55 60 Tyr Tyr Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu Tyr Thr Ser 65 70 75 80 His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu Gly Pro Glu 85 90 95 Cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Vai Pro Tyr Asn Leu Arg 100 105 110 Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser Ile Leu Lys 115 120 125 His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro Gly Met Glu 130 135 140 lie Pro Lys His Gly Phe His Leu Vai Ile Glu Leu Glu Asp Leu Gly 145 150 155 160 Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Thr Arg Glu Pro Gly Ala 165 170 175 61 u Glu His Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro Vai His Leu 180 185 190 61 u Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Vai Lys Ala Gin Thr Phe 195 200 205 Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr Glu Cys Vai 210 215 220 61 u Vai Gin Gly Glu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 225 230 235 240 Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile Phe 245 250 255 Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys 260 265 270 Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Cys Vai Gin Trp Lys Vai 275 280 285 71

Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin 290 295 300 Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser 305 310 315 320 Lys Ala Asp Tyr Glu lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His 325 330 335 Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 340 345 350 <210> 22 <2ll> 1801 <212> adn <213> Homo <22 0> <221> CDS <222> (8) . <400> 22

Otcgacc atg gat gea atg aag aga 999 ctc tgc tgt gtg ctg ctg ctg 49 Met Asp Ala Het Lys Arg Gly Leu Cys Cys Vai Leu Leu Leu 1 5 10 tgt ggc gcc gtc ttc gtt teg ctc age cag gaa ate cat gcc gag ttg 97 Cys Gly Ala Vai Phe Vai Ser Leu Ser Gin Glu lie His Ala Glu Leu 15 20 25 30 aga cgc ttc cgt aga gtt ccc tgt gtc tet ggt 99t ttg cct aaa cct 145 Arg Arg Phe Arg Arg Vai Pro Cys Vai Sér Gly Gly Leu Pro Lys Pro 35 40 45 gea aac ate acc ttc tta tec ate aac atg aag aat gtc cta caa tgg 193 Ala Asn lie Thr Phe Leu Ser lie Asn Met Lys Asn Vai Leu Gin Trp 50 55 60 act cca cca gag ggt ctt caa 99a gtt aaa gtt act tac act gtg cag 241 Thr Pro Pro Glu Gly Leu Gin Gly Vai Lys Vai Thr Tyr Thr Vai Gin 65 70 75 tat ttc ata tat 999 caa aag aaa tgg ctg aat aaa tea gaa tgc aga 289 Tyr Phe 11 e Tyr Gly Gin Lys Lys Trp Leu Asn lys Ser Glu Cys Arg 80 85 90 72 aat ate aat aga acc tac tgt gat ctt tet gct gaa act tet gac tac 337 Asn Ile Asn Arg Thr Tyr Cys Asp Leu Ser Ala Glu Thr Ser Asp Tyr 95 100 105 110 gaa cac cag tat tat gee aaa gtt aag gee att tgg gga aca aag tgt 385 Glu His Gin Tyr Tyr Ala Lys Val Lys Ala Ile Trp Gly Thr Lys Cys 115 120 125 tcc aaa tgg gct gaa agt gga cgg ttc tat cct ttt tta gaa aca caa 433 Ser Lys Trp Ala Glu Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin 130 135 140 att ggc cca cca gag gtg gea ctg act aca gat gag aag tcc att tet 481 lie Gly Pro Pro Glu Val Ala Leu Thr Thr Asp Glu Lys Ser lie Ser 145 150 155 gtt gtc ctg aca gct cca gag aag tgg aag aga aat cca gaa gac ctt 529 Vai Vai Leu Thr Ala Pro Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro Glu Asp Leu 160 165 170 cct gtt tcc atg caa caa ata tac tcc aat ctg aag tat aac gtg tet 577 Pro Vai Ser Met Gin Gin Ile Tyr Ser Asn Leu Lys Tyr Asn Val Ser 175 180 185 190 gtg ttg aat act aaa tea aac aga acg tgg tcc cag tgt gtg acc aac 625 Vai Leu Asn Thr Lys Ser Asn Arg Thr Trp Ser Gin Cys Val Thr Asn 195 200 205 cac acg ctg gtg ctc acc tgg ctg gag ccg aac act ctt tac tgc gta 673 His Thr Leu Val Leu Thr Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Val 210 215 220 cac gtg gag tcc ttc gtc cca ggg ccc cct ege cgt gct cag cct tet 721 His Val Glu Ser Phe Val Pro Gly Pro Pro Arg Arg Ala Gin Pro Ser 225 230 235 gag aag cag tgt gee agg açt ttg aaa gat caa ggt gga ggc ggt tea 769 Glu Lys Gin Cys Ala Arg Thr Leu Lys Asp Gin Gly Gly Gly Gly Ser 240 245 250 99C gga ggt ggc tet ggc ggt ggc 99a teg gee tcc acc aag ggc cca 817 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 255 260 265 270 73 tcg gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag age acc tet ggg ggc aca soa Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 275 280 285 gcg gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccg gtg acg 913 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 290 295 300 gtg tcg tgg aac tea ggc gcc ctg acc age ggc gtg cac acc ttc ccg 961 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 305 310 315 gct gtc cta cag tcc tea gga ctc tac tcc ctc age age gtg gtg acc 1009 Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 320 325 330 gtg ccc tcc age age ttg ggc acc cag acc tac ate tgc aac gtg aat 1057 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 335 340 345 350 cac aag ccc age aac acc aag gtg gac aag aaa gtt gag ccc aaa tet 1105 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 355 360 365 tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa gcc gag 1153 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu 370 375 380 ggg gca ccg tea gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc 1201 Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 385 390 395 atg ate tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg age 1249 Met 11e Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 400 405 410 cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag 1297 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr vai Asp Gly Val Glu 415 420 425 430 gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac age acg 1345 74

Vai HiS Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr 435 440 445 tac cgt gtg gtc age gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac t99 ctg aat 1393 Tyr Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 450 455 460 ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gee ctc cca tcc tcc 1441 Gly lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser 465 470 475 - ate gag aaa acc ate tcc aaa gee aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag 1469 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 480 485 490 gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc 1537 Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai 495 500 505 510 age ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc age gac ate gee gtg 1585 Ser Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai 515 520 525 gag tgg gag age aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct 1633 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 530 535 540 ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac age aag ctc acc 1681 Pro Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 545 550 555 gtg gac aag age agg tgg cag cag 999 aac gtc ttc tea tgc tcc gtg 1729 Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Val 560 565 570 atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag age ctc tcc ctg 1777 Met Hi s Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 575 580 585 590 tct ccg ggt aaa taatctagat ct 1801

Ser Pro Gly Lys

<210> 23 <211> 594 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 23 75

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Vai Leu Leu Leu Cys Gly 1 5 10 15 Ala Vai Phe Vai Ser Leu Ser Gin Glu Ile HiS Ala Glu Leu Arg Arg 20 25 30 Phe Arg Arg Vai Pro Cys Vai Ser Gly Gly Leu Pro Lys Pro Ala Asn 35 40 45 iie Thr Phe Leu Ser lie Asn Met Lys Asn Vai Leu Gin Trp Thr Pro 50 55 60 Pro Glu Gly Leu Gin Gly Vai Lys Vai Thr Tyr Thr Vai Gin Tyr Phe 65 70 75 80 He Tyr Gly Gin Lys Lys Trp Leu Asn Lys Ser Glu Cys Arg Asn Ile 85 90 95 Asn Arg Thr Tyr Cys Asp Leu Ser Ala Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His 100 105 110 Gin Tyr Tyr Ala Lys Vai Lys Ala Ile Trp Gly Thr Lys Cys Ser Lys 115 120 125 Trp Ala Glu Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin Ile Gly 130 135 140 Pro Pro Glu Vai Ala Leu Thr Thr Asp Glu Lys Ser Ile Ser Vai Vai 145 150 155 160 Leu Thr Ala Pro Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro Glu Asp Leu Pro Vai 165 170 175 Ser Met Gin Gin lie Tyr Ser Asn Leu Lys Tyr Asn Vai Ser Vai Leu 180 185 190 Asn Thr Lys Ser Asn Arg Thr Trp Ser Gin Cys Vai Thr Asn His Thr 195 200 205 Leu Vai Leu Thr Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Vai His Vai 210 215 220 Glu Ser Phe Vai Pro Gly Pro Pro Arg Arg Ala Gin Pro Ser Glu Lys 225 230 235 240 Gin Cys Ala Arg Thr Leu Lys Asp Gin Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 245 250 255 Vai Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 260 265 270 Ala Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 275 280 285 Ser Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai 290 295 300 76

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai 305 310 315 320 Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro 325 330 335 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr Ile Cys Asn Vai Asn H1s Lys 340 345 350 Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp 355 360 365 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala 370 375 380 Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 11 e 385 390 395 400 Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu 405 410 415 Asp Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His 420 425 430 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 435 440 445 Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu H1s Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 450 455 460 Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu 465 470 475 480 Lys Thr Ile Ser Lys Ala lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr 485 490 495 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu 500 505 510 Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai Glu Trp 515 520 525 Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai 530 535 540 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp 545 550 555 560 Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His 565 570 575 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 580 585 590

Gly Lys

<210> 24 <211> 29 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 24

77ggccggccat gcagactttc acaatggtt 29 <210> 25 <211> 52 <212> ADN <213> homo sapiens <400> 25

tccgctaccg ccgcctccac tgccaccacc tccggcctct ccttgcacct cc <210> 26 <211> 53 <212> ADN 52 <213> Homo sapiens <400> 26 gtggaggcgg cggtagcgga ggcggtggca gtcgaactgt ggctgcacca tct 53 <210> 27 <211> 38 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 27 ggcgcgcctc tagattaaca ctctcccctg ttgaagct 38 <210> 28 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 28gtcgaccatg gatgcaatga agagagggd <210> 29 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 29 cacagggaac tctacggaag cgtctcaact 30 <210> 30 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens 30 78 <4Ο0> 30 cttccgtaga gttccctgtg tctctggtgg ttt 33

<210> 31 <211> 53 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 31 gccagagccacctccgcctgaaccgcctccaccttgatctttcaaagtcctgg 53

<210> 3 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 32 caggcggagg tggotctggo ggtggcggat cggcotccac oaagggcooa t 51

<210> 33 <211> 20 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 33 ctgggcacgg tgggcatgtg 20

<210> 34 <211> 20 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 34 cacatgccca ccgtgcccag 20

<210> 35 <211> 31 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 35 agatctagat tatttacccg gagacaggga g 31

<210> 36 <211> 1806 <212> ADN <213> Mus musculus 79 <22 0>

<221> CDS <222> (38)...(1675) <4Ο0> 36 80 cgccgcgttc ccgagatgtg acccgaactg acagcec atg cac act ccc ggg acc 55

Met H1s Thr Pro Gly Thr 1 5 ccg gcg ccg ggc cac ccg gac ccg ccg cca ctg ttg ctg ctc acg ctg 103 Pro Ala Pro Gly His Pro Asp Pro Pro Pro Leu Leu Leu Leu Thr Leu 10 15 20 ctt ctg ctg ctg gcc gct tcg gga ege gea gtt cct tgt gtc ttc tgt 151 Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ser Gly Arg Ala Vai Pro Cys Vai Phe Cys 25 30 35 ggt ttg cct aaa cct aca aat ate acc ttc tta tcc ate aac atg aag 199 Gly Leu Pro Lys Pro Thr Asn Ile Thr Phe Leu Ser Ile Asn Met Lys 40 45 50 aat gtc ctg cat tgg aat cca cca gag agt cta cac gga gtt gaa 9tc 247 Asn Vai Leu H1s Trp Asn Pro Pro 61 u Ser Leu His Gly Vai Glu Vai 55 60 65 70 aca tac act gtg ca a tat ttc ata tat ggg cag aag aaa tgg ctg aat 295 Thr Tyr Thr Vai Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly Gin Lys Lys Trp Leu Asn 75 80 85 gcc tct aaa tgc ggg agt ate aac agg acc tac tgt gac ctt tct gtt 343 Ala Ser Lys Cys 90 Gly Ser lie Asn Arg 95 Thr Tyr Cys Asp Leu 100 Ser Vai 81 gag acc tca gac tat gaa cac cag ttc tat gcc aaa gtg aag gcc att 391 Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Phe Tyr Ala Lys Val Lys Ala Ile 105 110 115 tgg gaa gcc agg tgc tcc gaa tgg gcc gag acg gaa ege ttc tat cct 439 Trp Glu Ala Arg Cys Ser Glu Trp Ala Glu Thr Glu Arg Phe Tyr Pro 120 125 130 ttc ttg gaa act caa gtc age cca cca gag att gcc ctg aca act' ggc 487 Phe Leu Glu Thr Gin Val Ser Pro Pro Glu Ile Ala Leu Thr Thr Gly 135 140 145 150 gag aag tcc ate tct att gcc ctg aca gca cca gag aag tgg aaa aga 535 GlU Lys Ser Ile Ser Ile Ala Leu Thr Ala Pro Glu Lys Trp Lys Arg 155 160 165 aat cca caa gac cac act gtt tct atg caa cag ata tac ccc aat ttg 583 Asn Pro Gin Asp His Thr Val Ser Met Gin Gin Ile Tyr Pro Asn Leu 170 175 180 aag tac aat gtg tct gtg tat aac act aag teg aga aga acg tgg tcc 631 Lys Tyr Asn val Ser Val Tyr Asn Thr Lys Ser Arg Arg Thr Trp Ser 185 1?0 195 cag tgt gtc acc aac age aca ctg gtc ctc age tgg ctg gag ccc aac 679 Gin Cys Vai Thr Asn Ser Thr Leu Val Leu Ser Trp Leu Glu Pro Asn 200 205 210 act ctg tat tgt gtc cac gtg gag tcc ctt gtc cca ggg ccc cct ege 727 Thr Leu Tyr Cys Val His Val Glu Ser Leu Val Pro Gly Pro Pro Arg 215 220 225 230 ctc ccg atg cct tct cag aag cag tgc ate agt act ttg gaa gtt caa 775 Leu Pro Met Pro Ser Gin Lys Gin Cys Ile Ser Thr Leu Glu Val Gin 235 240 245 aca tca gca tgg aag gct aaa gtc ate ttc tgg tat gtc ttc ctc aca 823 Thr Ser Ala Trp Lys Ala Lys Val Ile Phe Trp Tyr Val Phe Leu Thr 250 255 260 tct gtt ate gtg ttt ctt ttc tcc gca att 99C tac ttg gtt tac cgt 871 Ser Vai lie val Phe Leu Phe Ser Ala Ile Gly Tyr Leu Val Tyr Arg 265 270 275 82 tac ate cat gtt ggc aag gaa aaa cac cca gea aat ttg gta ctg att 919 Tyr ne Hls Vai Gly Lys Glu Lys His Pro Ala Asn Leu Vai Leu Ile 280 285 290 tat aga aat gaa att ggc aca aga gtc ttt gaa cct act gaa aca ate 967 Tyr Arg Asn Glu Ile Gly Thr Arg Vai Phe Glu Pro Thr Glu Thr lie 295 300 305 310 aca ctt aat ttt ate acc ttc agt atg ttg gat gat act aaa att tet 1015 Thr Leu Asn Phe Ile Thr Phe Ser Het Leu Asp Asp Thr Lys Ile Ser 315 320 325 cca aag gat atg aat tta ctg gac aaa age agt gat gac ate agt gtt 1063 Pro Lys Asp Met Asn Leu Leu Asp Lys Ser Ser Asp Asp Ile Ser Vai 330 335 340 aat gac cct gag cac aat gag gee tgg gag ccg cac tgg gag gag gtg 1111 Asn Asp Pro Glu His Asn Glu Ala Trp Glu Pro His Trp Glu Glu Vai 345 350 355 QàQ ggg caa cat tta gga tgc tet teg cat ttg atg gac gct gtc tgt 1159 Glu Gly Gin His Leu Gly Cys Ser Ser His Leu Met Asp Ala Vai Cys 360 365 370 ggt gct gag caa aga gac gga gac acc tcc cta acc cag cat 999 tgg 1207 Gly Ala Glu Gin Arg Asp Gly Asp Thr Ser Leu Thr Gin His Gly Trp 375 380 385 390 ctt aac age acc ate ccc aca gga gag aca gac act gag cct caa tac 1255 Leu Asn Ser Títr Ile Pro Thr Gly Glu Thr Asp Thr Glu Pro Gin Tyr 395 400 405 aaa gtc cta agt gac ttc tac ggg gag ggt gaa ate caa ctg tcc tgt 1303 Lys Vai Leu Ser Asp Phe Tyr Gly Glu Gly Glu Ile Gin Leu Ser Cys 410 415 420 gag ccg gaa gag gcg gee aga aca gag aaa ata tet gag cca ctg gtg 1351 Glu Pro Glu Glu Ala Ala Arg Thr Glu Lys Ile Ser Glu Pro Leu Vai 425 430 435 act te a gea aac ttg gac cca cag ctt gaa gac cta cat cac ctg ggt 1399 83

Thr Ser Ala Asn Leu Asp Pro Gin Leu Glu Asp Leu His His Leu Gly 440 445 450 cag gag cat act gtc tcc gag gat ggg cca gag gaa gag aca tet ata 1447 Gin Glu His Thr Vai Ser Glu Asp Gly Pro Glu Glu Glu Thr Ser Ile 455 460 465 470 aca gta gtg gat tgg gac cct caa act ggc agg ctg tgt ate cct tcc 1495 Thr Vai Vai Asp Trp Asp Pro 61 n Thr Gly Arg Leu Cys Ile Pro Ser 475 480 485 tta cct ate ttt ggc cgt gat cct gag aac tat ggt èet tat gag aga 1543 Leu Pro Ile Phe Gly Arg Asp Pro Glu Asn Tyr Gly His Tyr Glu Arg 490 495 500 gac cag ctc tta gag ggt ggc ctt ttg tet aga ctc tat gag aac cag 1591 Asp Gin Leu Leu Glu Gly Gly Leu Leu Ser Arg Leu Tyr Glu Asn Gin 505 510 515 gca cct gac aag cca gag aaa gaa aat gaa aac tgt ctc aca cgg ttt 1639 Ala Pro Asp Lys Pro Glu Lys Glu Asn Glu Asn Cys Leu Thr Arg Phe 520 525 530 atg 939 gaa tgg ggg tta cat gta caa atg gaa age tagtgccagg 1685 Met Glu Glu Trp Gly Leu His Vai Gin Met Glu Ser 535 540 545 ctttctgttg actgccaaca aatgaaggaa ccatcccagg gggtgaacag tgttcaggtt 1745 atcagtgtca gcaatgagac tgttctctct gttcatgaac tttgtcagcc ctgcctcatc 1805 c 1806

<210> 37 <211> 546 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 37

Met His Thr Pro Gly Thr Pro Ala Pro Gly His Pro Asp Pro Pro Pro 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ser Gly Arg Ala • 20 25 30 Vai Pro Cys Vai Phe Cys Gly Leu Pro Lys Pro Thr Asn lie Thr Phe 35 40 45 84

Leu Ser Ile Asn Met Lys Asn Vai Leu His Trp Asn Pro Pro Glu Ser 50 55 60 Leu His Gly Vai Glu Vai Thr Tyr Thr Vai Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly 65 70 75 80 Gin Lys Lys Trp Leu Asn Ala Ser Lys Cys Gly Ser Ile Asn Arg Thr 85 90 95 Tyr Cys Asp Leu Ser Vai Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Phe Tyr 1Q0 105 110 Ala Lys Vai Lys Ala Ile Trp Glu Ala Arg Cys Ser Glu Trp Ala Glu 115 120 125 Thr Glu Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin Vai Ser Pro Pro Glu 130 135 140 Ile Ala Leu Thr Thr Gly Glu Lys Ser Ile Ser Ile Ala Leu Thr Ala 145 150 155 160 Pro Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro Gin Asp His Thr Vai Ser Met Gin 165 170 175 Gin Ile Tyr Pro Asn Leu Lys Tyr Asn Vai Ser Vai Tyr Asn Thr Lys 180 185 190 Ser Arg Arg Thr Trp Ser Gin Cys Vai Thr Asn Ser Thr Leu Vai Leu 195 200 205 Ser Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Vai His Vai Glu Ser Leu 210 215 220 Vai Pro Gly Pro Pro Arg Leu Pro Met Pro Ser Gin Lys Gin Cys Ile 225 230 235 240 Ser Thr Leu Glu Vai Gin Thr Ser Ala Trp Lys Ala Lys Vai Ile Phe 245 250 255 Trp Tyr Vai Phe Leu Thr Ser Vai Ile Vai Phe Leu Phe Ser Ala Ile 260 265 270 Gly Tyr Leu Vai Tyr Arg Tyr Ile His Vai Gly Lys Glu Lys His Pro 275 280 285 Ala Asn Leu Vai Leu Ile Tyr Arg Asn Glu Ile Gly Thr Arg Vai Phe 290 295 300 Glu Pro Thr Glu Thr Ile Thr Leu Asn Phe Ile Thr Phe Ser Met Leu 305 310 315 320 Asp Asp Thr Lys Ile Ser Pro Lys Asp Met Asn Leu Leu Asp Lys Ser 325 330 335 Ser Asp Asp Ile Ser Vai Asn Asp Pro Glu His Asn Glu Ala Trp Glu 340 345 350 Pro His Trp Glu Glu Vai Glu Gly Gin His Leu Gly Cys Ser Ser His 355 360 365 Leu Met Asp Ala Vai Cys Gly Ala Glu Gin Arg Asp Gly Asp Thr Ser 370 375 380 85

Leu Thr Gin His Gly Trp Leu Asn Ser Thr Ile Pro Thr .Gly Glu Thr 385 390 395 400 Asp Thr Glu Pro Gin Tyr Lys Vai Leu Ser Asp Phe Tyr Gly Glu Gly 405 410 415 Glu Ile Gin Leu Ser Cys Glu Pro Glu Glu Ala Ala Arg Thr Glu Lys 420 425 430 Ile Ser Glu Pro Leu Val Thr Ser Ala Asn Leu Asp Pro Gin Leu Glu 435 440 445 Asp Leu His His Leu Gly Gin Glu His Thr Val Ser Glu Asp Gly Pro 450 455 460 Glu Glu Glu Thr Ser Ile Thr Vai Vai Asp Trp Asp Pro Gin Thr Gly 465 470 475 480 Arg Leu Cys Ile Pro Ser Leu Pro Ile Phe Gly Arg Asp Pro Glu Asn 485 490 495 Tyr Gly His Tyr Glu Arg Asp Gin Leu Leu Glu Gly Gly Leu Leu Ser 500 505 510 Arg Leu Tyr Glu Asn Gin Ala Pro Asp Lys Pro Glu Lys Glu Asn Glu 515 520 525 Asn Cys Leu Thr Arg Phe Met Glu Glu Trp Gly Leu His Val Gin Met 530 535 540 Glu Ser 545

<210> 38 <211> 217 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 38

Val Pro Cys Val Phe Cys Gly Leu Pro Lys Pro Thr Asn Ile Thr Phe 1 5 10 15 Leu Ser Ile Asn Met Lys Asn Val Leu His Trp Asn Pro Pro Glu Ser 20 25 30 Leu His Gly Val Glu Val Thr Tyr Thr Val Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly 35 40 45 Gin Lys Lys Trp Leu Asn Ala Ser Lys Cys Gly Ser Ile Asn Arg Thr 50 55 60 Tyr Cys Asp Leu Ser Val Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Phe Tyr 65 70 75 80 Ala Lys Val Lys Ala lie Trp Glu Ala Arg Cys Ser Glu Trp Ala Glu 85 90 95 Thr Glu Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin Val Ser Pro Pro Glu 100 105 110 86

Ile Ala Leu Thr Thr Gly Glu Lys Ser Ile Ser Ile Ala Leu Thr Ala 115 120 125 Ργο Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro Gin Asp His Thr Vai Ser Met Gin 130 135 140 Gin Ile Tyr Pro Asn Leu lys Tyr Asn Vai Ser Vai Tyr Asn Thr Lys 145 150 155 160 Ser Arg Arg Thr Trp Ser Gin Cys Vai Thr Asn Ser Thr Leu Vai Leu 155 170 175 Ser Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Vai His Vai Glu Ser Leu 180 185 190 Vai Pro Gly Pro Pro Arg Leu Pro Met Pro Ser Gin Lys Gin Cys Ile 195 200 205 Ser Thr Leu Glu Vai Gin Thr Ser Ala 210 215

<210> 39 <211> 514 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 39 87

Vai Pro Cys Vai Phe Cys Gly Leu Pro Lys Pro Thr Asn Ile Thr Phe 1 5 10 15 Leu Ser Ile Asn Met Lys Asn Vai Leu His Trp Asn Pro Pro Glu Ser 20 25 30 Leu His Gly Vai Glu Vai Thr Tyr Thr Vai Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly 35 40 45 61 n Lys Lys Trp Leu Asn Ala Ser Lys Cys Gly Ser Ile Asn Arg Thr 50 55 60 Tyr Cys Asp Leu Ser Vai Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Phe Tyr 65 70 75 80 Ala Lys Vai Lys Ala Ile Trp Glu Ala Arg Cys Ser Glu Trp Ala Glu 85 90 95 Thr Glu Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin Vai Ser Pro Pro Glu 100 105 110 11 e Ala Leu Thr Thr Gly Glu Lys Ser Ile Ser Ile Ala Leu Thr Ala 115 12Ò 125 Pro Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro Gin Asp His Thr Vai Ser Met Gin 130 135 140 Gin Ile Tyr Pro Asn Leu Lys Tyr Asn Vai Ser Vai Tyr Asn Thr Lys 145 150 155 160 Ser Arg Arg Thr Trp Ser Gin Cys Vai Thr Asn Ser Thr Leu Vai Leu 165 170 175 88

Ser Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Vai His Vai Glu Ser Leu 180 185 190 Vai Pro Gly Pro Pro Arg Leu Pro Met Pro Ser Gin Lys Gin Cys Ile 195 200 205 Ser Thr Leu Glu Vai Gin Thr Ser Ala Trp Lys Ala Lys Vai ile Phe 210 215 220 Trp Tyr Vai Phe Leu Thr Ser Vai Ile Vai Phe Leu Phe Ser Ala Ile 225 230 235 240 Gly Tyr Leu Vai Tyr Arg Tyr Ile His Vai Gly Lys Glu Lys His Pro 245 250 255 Ala Asn Leu Vai Leu Ile Tyr Arg Asn Glu 11 e Gly Thr Arg Vai Phe 260 265 270 Glu Pro Thr Glu Thr Ile Thr Leu Asn Phe Ile Thr Phe Ser Met Leu 275 280 285 Asp Asp Thr Lys Ile Ser Pro Lys Asp Met Asn Leu Leu Asp Lys Ser 290 295 300 Ser Asp Asp Ile Ser Vai Asn Asp Pro Glu His Asn Glu Ala Trp Glu 305 310 315 320 Pro H1s Trp Glu Glu Vai Glu Gly Gin His Leu Gly Cys Ser Ser His 325 330 335 Leu Met Asp Ala Vai Cys Gly Ala Glu Gin Arg Asp Gly Asp Thr Ser 340 345 350 Leu Thr Gin His Gly Trp Leu Asn Ser Thr Ile Pro Thr Gly Glu Thr 355 360 365 Asp Thr Glu Pro Gin Tyr Lys Vai Leu Ser Asp Phe Tyr Gly Glu Gly 370 375 380 Glu Ile Gin Leu Ser Cys 61 u Pro Glu Glu Ala Ala Arg Thr Glu Lys 385 390 395 400 íle Ser Glu Pro Leu Vai Thr Ser Ala Asn Leu Asp Pro Gin Leu Glu 405 410 415 Asp Leu His His Leu Gly Gin Glu His Thr Vai Ser Glu Asp Gly Pro 420 425 430 Glu Glu Glu Thr Ser lie Thr Vai Vai Asp Trp Asp Pro Gin Thr Gly 435 440 445 Arg Leu Cys Ile Pro Ser Leu Pro Ile Phe Gly Arg Asp Pro Glu Asn 450 455 460 Tyr Gly His Tyr Glu Arg Asp Gin Leu Leu Glu Gly Gly Leu Leu Ser 465 470 475 480 Arg Leu Tyr Glu Asn Gin Ala Pro Asp Lys Pro Glu Lys Glu Asn Glu 485 490 495 Asn Cys Leu Thr Arg Phe Met Glu Glu Trp Gly Leu His Vai Gin Met 500 505 510

Glu Ser 18 89

<210> 40 <211> 18 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 40 cgcogcgttc ccgagatg

<210> 41 <211> 24 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 41 24 ggatgaggca gggctgacaa agtt

<210> 42 <211> 36 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 42 36 acttgtggaa ttcgctagca ccaagggccc atcggt

<210> 43 <211> 32 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 43 32 gcctagaacg cgttcattta cccggagaca gg

<210> 44 <211> 8 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 44 aattgaga 8

<210> 45 <211> 8 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 45 90 cgcgtctc 8

<210> 46 <211> 37 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 4 6 gtcacttgaa ttcggtaccg cctctgttgt gtgcctg 37

<210> 47 <211> 32 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 47 gacctgaacg cgtctaacac tctcccctgt tg 32

<210> 48 <211> 38 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 48 38 tcagtcggaa ttcgcagaag ccatgcgggc tcccggcc

<210> 49 <211> 35 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 49 ctgtgacgct agcctctgat gattgatctt tcaaa 35

<210> 50 <211> 43 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 50 gatgtctgaa ttcgcagaag ccatgcagac tttcacaatg gtt

<210> 51 <211> 86 <212> ADN <213> Homo sapiens 43 91 <4 Ο Ο > 51 60 86 aagacggtac cagatttcaa ctgctcatca gatggcggga agatgaagac agatggtgca gccacagtgg cctctccttg cacctc

<210> 52 <211> 1720 <212> ADN <213> Homo sapiens <220>

<221> CDS <222> (1)...(1713) <400> 52 atg cgg gct ccc ggc ege ccg gee ctg cgg ccg ctg ctg ctg ttg ctc Met Arg Ala Pro Gly Arg Pro Ala Leu Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 ctg gcg 9cg cct tgg 99a cgg gca gtt ccc tgt gtc tet ggt ggt ttg Leu Ala Ala Pro Trp Gly Arg Ala Vai Pro Cys Vai Ser Gly Gly Leu 20 25 30 cct aaa cct gca aac ate acc ttc tta tcc ate aac atg aag aat gtc Pro Lys Pro Ala Asn Ile Thr Phe Leu Ser Ile Asn Met Lys Asn Vai 35 40 45 cta ca a tgg act cca cca gag 99t ctt caa 99a gtt aaa gtt act tac Leu Gin Trp Thr Pro Pro Glu Gly Leu Gin Gly Vai lys Vai Thr Tyr 50 55 60 act gtg cag tat ttc ata tat 999 caa aag aaa tgg ctg aat aaa tea Ttir Vai Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly Gin Lys Lys Trp Leu Asn Lys Ser 65 70 75 80 gaa tgc aga aat ate aat aga acc tac tgt gat ctt tet gct gaa act 48 96 144 192 240 288 92

Glu Cys Arg Asn Ile Asn Arg Thr Tyr 85 tct gac tac gaa cac cag tat tat gcc Ser Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr Ala 100 105 aca aag tgt tcc aaa tgg gct gaa agt Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu Ser 115 120 gaa aca caa att ggc cca cca gag gtg Glu Thr Gin Ile Gly Pro Pro Glu Val 130 135 tcc att tct gtt gtc ctg aca gct cca Ser Ile Ser Val Val Leu Thr Ala Pro 145 150 gaa gac ctt cct gtt tcc atg caa caa Glu Asp Leu Pro Val Ser Met Gin Gin 165 aac gtg tct gtg ttg aat act aaa tca Asn Vai Ser Val Leu Asn Thr Lys Ser 180 185 9tg acc aac cac acg ctg gtg ctc acc Vai Thr Asn His Thr Leu Val Leu Thr 195 200 tac tgc gta cac gtg gag tcc ttc gtc Tyr Cys Vai His Val Glu Ser Phe Val 210 215 cag cct tct gag aag cag tgt gcc agg Gin Pro Ser Glu Lys Gin Cys Ala Arg 225 230 9ag gct age acc aag ggc cca teg gtc Glu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 245

Cys Asp Leu Ser Ala Glu Thr 90 95 aaa gtt aag gcc att tgg gga 336 Lys Vai Lys Ala IIe Trp Gly 110 gga cgg ttc tat cct ttt tta 384 Gly Arg Phe Tyr Pro Phe Leu 125 gca ctg act aca gat gag aag 432 Ala Leu Thr Thr Asp Glu Lys 140 gag aag tgg aag aga aat cca 480 Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro 155 160 ata tac tcc aat ctg aag tat 528 Ile Tyr Ser Asn Leu Lys Tyr 170 175 aac aga acg tgg tcc cag tgt 576 Asn Arg Thr Trp Ser Gin Cys 190 tgg ctg gag ccg aac act ctt 624 Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu 205 cca ggg ccc cct cgc cgt gct 672 Pro Gly Pro Pro Arg Arg Ala 220 act ttg aaa gat caa tca tca 720 Thr Leu Lys Asp Gin Ser Ser 235 240 ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 250 255 768 93 aag age acc tet 999 ggc aca gcg gee ctg 99C tgc ctg gtc aag gac 816 Lys Ser "Rir Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 260 265 270 tac ttc ccc gaa ccg gtg acg gtg teg tgg aac tea ggc gee ctg acc 864 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 275 280 285 age ggc 9tg cac acc ttc ccg gct gtc cta cag tcc tea gga etc tac 912 Ser 61 y Vai His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 290 295 300 tcc etc age age gtg gtg acc gtg ccc tcc age age ttg ggc acc cag 960 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin 305 310 • 315 320 acc tac ate tgc aac 9tg aat cac aag ccc age aac acc aag gtg gac 1008 Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 325 330 335 aag aaa gtt gag ccc aaa tet tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccg 1056 Lys Lys Vai 61 u Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 340 345 350 tgc cca gea cct gaa etc ctg ggg gga ccg tea gtc ttc etc ttc ccc 1104 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 355 360 365 cca aaa ccc aag gac acc etc atg ate tcc cgg acc cct gag gtc aca 1152 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 370 375 380 tgc gtg gtg gtg gac gtg age cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac 1200 Cys Vai Vai Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 61U Val Lys Phe Asn 385 390 395 400 tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gee aag aca aag ccg C99 1248 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr lys Pro Arg 405 410 415 gag gag cag tac aac age acg tac cgt gtg gtc age gtc etc acc gtc 1296 Glu 61 u Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 420 425 430 94 ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc 1344 Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 435 440 445 aac aaa gcc ctc cca gcc ccc ate gag aaa acc ate tcc aaa gcc aaa 1392 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro ile Glu Lys TTtr Ile Ser Lys Ala Lys 450 455 460 ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat 1440 Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 465 470 475 480 gag ctg acc aag aac cag gtc age ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc 1488 Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 485 490 495 tat ccc age gac ate gcc gtg gag tgg gag age aat ggg cag ccg gag 1536 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu 500 505 510 aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc 1584 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 515 520 525 ttc ctc tac age aag ctc acc gtg gac aag age agg tgg cag cag ggg 1632 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly 530 535 540 aac gtc ttc tea tgc tcc gtg atg cat gag gct Ctg cac aac cac tac 1680 Asn.Vai Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 545 550 555 560 acg cag aag age ctc tcc ctg tet ccg ggt aaa tgacgcg 1720 Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 565 570 <210> 53

<211> 571 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 95 95 Met Arg Ala Pro Gly Arg Pro Ala 1 5 Leu Ala Ala Pro Trp Gly Arg Ala 20 Pro Uys Pro Ala Asn Ile Thr Phe 35 40 Leu Gin Trp Thr Pro Pro Glu Gly 50 55 Thr Vai Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly 65 70 Glu Cys Arg Asn ile Asn Arg Thr 85 Ser Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr 100 Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu 115 120 Glu Thr Gin Ile Gly Pro Pro Glu 130 135 Ser Ile Ser Vai Vai Leu Thr Ala 145 150 Glu Asp Leu Pro Vai Ser Met Gin 165 Asn Vai Ser Vai Leu Asn Thr Lys 180 Vai Thr Asn His Thr Leu Vai Leu 195 - 200 Tyr Cys Vai His Vai Glu Ser Phe 210 215 Gin Pro Ser Glu Lys Gin Cys Ala 225 230 Glu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 245 Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 260 Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai 275 280 Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 290 295 Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 305 310 Thr Tyr Ile Cys Asn Vai Asn His

Leu Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu 10 15

Vai Pro Cys Vai Ser Gly Gly Leu 25 30

Leu Ser Ile Asn Met Lys Asn Vai 45

Leu Gin Gly Vai Lys Vai Thr Tyr 60

Gin Lys Lys Trp Leu Asn Lys Ser 75 80

Tyr Cys Asp Leu Ser Ala Glu Thr 90 95

Ala Uys Vai Lys Ala Ile Trp Gly 105 110

Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Phe Leu 125

Vai Ala Leu Thr Thr Asp Glu Lys 140

Pro Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro 155 160

Gin Ile Tyr Ser Asn Leu Lys Tyr 170 175

Ser Asn Arg Thr Trp Ser Gin Cys 185 190

Thr Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu 205

Vai Pro Gly Pro Pro Arg Arg Ala 220

Arg Thr Leu Lys Asp Gin Ser Ser 235 240

Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 250 255

Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp 265 270

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 285

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 300

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin 315 320

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp 330 335 325 96 340 345 350 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro 355 360 365 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr 370 375 380 Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp Pro Glu Vai Lys Phe Asn 385 390 395 400 Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His Asn Ala lys Thr Lys Pro Arg 405 410 415 Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai 420 • 425 430 Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser 435 440 445 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 450 455 460 Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 465 470 475 480 Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe 485 490 495 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu 500 505 510 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 515 520 525 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly 530 535 540 Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 545 550 555 560 Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 565 570

<210> 54 <211> 547 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54

Vai Pro Cys Vai Ser Gly Gly Leu Pro Lys Pro Ala Asn Ile Thr Phe 1 5 10 15 Leu Ser Ile Asn Met Lys Asn Vai Leu Gin Trp Thr Pro Pro Glu Gly 20 25 30 Leu Gin Gly Vai Lys Vai Thr Tyr Thr Vai Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly 35 40 45 97

Gin Lys Lys Trp Leu Asn Lys Ser Glu Cys Arg Asn Ile Asn Arg Thr 50 55 60 Tyr Cys Asp Leu Ser Ala Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr 65 70 75 80 Ala Lys Vai Lys Ala Ile Trp Gly Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu 85 90 95 Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin Ile Gly Pro Pro Glu 100 105 110 Vai Ala Leu Thr Thr Asp Glu Lys Ser Ile Ser Vai Vai Leu Thr Ala 115 120 125 Pro Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro Glu Asp Leu Pro Vai Ser Met Gin 130 135 140 Gin Ile Tyr Ser Asn Leu Lys Tyr Asn Vai Ser Vai Leu Asn Thr Lys 145 150 155 160 Ser Asn Arg Thr Trp Ser Gin Cys Vai Thr Asn His Thr Leu Vai Leu 165 170 175 Thr Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Vai His Vai Glu Ser Phe 180 185 190 Vai Pro Gly Pro Pro Arg Arg Ala Gin Pro Ser Glu Lys Gin Cys Ala 195 200 205 Arg Thr Leu Lys Asp Gin Ser Ser Glu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 210 215 220 Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 225 230 235 240 Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai 245 250 255 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 260 265 270 VaT Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 275 280 285 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr Ile Cys Asn Vai Asn His 290 295 300 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys 305 310 315 320 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 325 330 335 61 y Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 340 345 350 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His 355 360 365 Glu Asp Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai 370 375 380 98

HiS Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr 385 390 395 400 Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly * 405 410 415 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 420 425 430 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai 435 440 445 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser 450 455 460 Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Alá Vai Glu 465 470 475 480 Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 485 490 495 Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai 500 505 510 Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met 515 520 525 His Glu A1a Leu His Asn His Tyr Thr Gin lys Ser Leu Ser Leu Ser 530 535 540

Pro G1 y lys 545

<210> 55 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55

Vai Pro Cys Vai Ser Gly Gly Leu Pro Lys Pro Ala Asn Ile Thr Phe 1 5 10 15 Leu Ser Ile Asn Met Lys Asn Vai Leu Gin Trp Thr Pro Pro Glu Gly 20 25 30 Leu Gin Gly Vai Lys Vai Thr Tyr Thr Vai Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly 35 40 45 Gin Lys Lys Trp Leu Asn Lys Ser Glu Cys Arg Asn Ile Asn Arg Thr 50 55 60 Tyr Cys Asp Leu Ser Ala Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr 65 70 75 80 Ala Lys Vai Lys Ala Ile Trp Gly Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu 85 90 95 Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin Ile Gly Pro Pro Glu 100 105 110

99 Vai Ala Leu Thr Thr Asp Glu Lys Ser Ile Ser Vai VaT Leu Thr Ala 115 120 125 Ργο Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro Glu Asp Leu Pro Vai Ser Met Gin 130 135 140 Gin lie Tyr Ser Asn Leu Lys Tyr Asn Vai Ser Vai Leu Asn Thr Lys 145 150 155 160 Ser Asn Arg Thr Trp Ser Gin Cys Vai Thr Asn HiS Thr Leu Vai Leu 165 170 175 Thr Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Vai His Vai Glu Ser Phe 180 185 190 Vai Pro Gly Pro Pro Arg Arg Ala Gin Pro Ser Glu Lys Gin Cys Ala 195 200 205 Arg Thr Leu l^s Asp Gin Ser Ser Glu 210 215 <210> 56 <211> 1011 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0> <221> CDS <222> (1) ... (1008) <400> 56 atg cag act ttc aca atg gtt cta gaa gaa ate tgg aca agt ctt ttc Met Gin Thr Phe Thr Met Val Leu Glu Glu Ile Trp Thr Ser Leu Phe 1 5 10 15 atg tg9 ttt ttc tac gca ttg att cca tgt ttg ctc aca gat gaa gtg Met Trp Phe Phe Tyr Ala Leu Ile Pro Cys Leu Leu Thr Asp Glu Val 20 25 30 gcc att ctg cct gcc cct cag aac ctc tct gta ctc tea acc aac atg Ala Ile Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Val Leu Ser Thr Asn Met 35 40 45 aag cat ctc ttg atg tgg age cca gtg ate gcg cct gga gaa aca gtg Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro val Ile Ala Pro Gly Glu Thr Val 50 55 60 tac tat tct gtc gaa tac cag ggg gag tac gag age ctg tac acg age 40 96 144 192 240 100

Tyr Tyr Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu Tyr Thr Ser 65 70 75 80 cac ate tgg ate ccc age age tgg tgc tea etc act gaa ggt cct gag 288 His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu Gly Pro Glu 85 - 90 95 tgt gat gtc act gat gac ate acg gee act gtg cca tac aac ctt cgt 336 Cys Asp Vai TTir Asp Asp Ile Thr Ala Thr Val Pro Tyr Asn Leu Arg 100 105 110 gtc agg gee aca ttg ggc tea cag acc tea gee tgg age ate ctg aag 384 Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser ile Leu Lys 115 120 125 cat ccc ttt aat aga aac tea acc ate ctt acc cga cct ggg atg gag 432 His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro Gly Met Glu 130 135 140 ate acc aaa gat ggc ttc cac ctg gtt att gag ctg gag gac ctg ggg 480 Ile Thr Lys Asp Gly Phe His Leu Vai lie Glu Leu Glu Asp Leu Gly 145 150 155 160 ccc cag ttt gag ttc ctt gtg gee tac tgg agg agg gag cct ggt gee 528 Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Arg Arg Glu Pro Gly Ala 165 170 175 gag gaa cat gtc aaa atg gtg agg agt ggg ggt att cca gtg cac cta 576 Glu Glu His Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro Val His Leu 180 185 190 gaa acc atg gag cca ggg gct gea tac tgt gtg aag gee cag aca ttc 624 Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys val Lys Ala Gin Thr Phe 195 200 206 gtg aag gee att ggg agg tac age gee ttc age cag aca gaa tgt gtg 672 Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr Glu Cys Val 210 215 220 gag gtg caa gga gag gee act gtg gct gea cca tet gtc ttc ate ttc 720 Glu Vai Gin Gly Glu Ala Thr Vai Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe 225 230 235 240 101 ccg cca tet gat gag cag ttg aaa tet ggt acc gee tet gtt gtg tgc 768 Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys 245 250 255 ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag gee aaa gta cag tgg aag gtg 816 Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Val 260 265 270 gat aac gee etc caa teg ggt aac tcc cag gag agt gtc aca gag cag 864 Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin 275 280 285 gac age aag gac age acc tac age etc age age acc ctg acg ctg age 912 Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser 290 295 300 aaa gea gac tac gag aaa cac aaa gtc tac gee tgc gaa gtc acc cat 960 Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His 305 310 315 320 cag ggc ctg age teg ccc gtc aca aag age ttc aac agg gga gag tgt 1008 Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 325 330 335 tag 1011

<210> 57 <211> 336 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 M6t Gin Thr Phe Thr Met Val Leu Glu Glu Ile Trp Thr Ser Leu Phe 1 5 10 15 Met Trp Phe Phe Tyr Ala Leu Ile Pro Cys Leu Leu Thr Asp Glu Val 20 25 30 Ala lie Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Val Leu Ser Thr Asn Met 35 40 45 Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro Val Ile Ala Pro Gly Glu Thr val 50 55 60 Tyr Tyr Ser Val Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu Tyr Thr Ser 65 70 75 80 102 HÍS Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu Gly Pro Glu 85 90 95 Cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Vai Pro Tyr Asn Leu Arg 100 105 110 Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser Ile Leu Lys 115 120 125 His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro Gly Met Glu 130 135 140 Ile Ttir Lys Asp Gly Phe His Leu Vai Ile Glu Leu Glu Asp Leu Gly 145 150 155 160 Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Arg Arg Glu Pro Gly Ala 165 170 175 Glu Glu His Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro Vai His Leu 180 165 190 Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Vai Lys Ala Gin Thr Phe 195 200 205 Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr Glu Cys Vai 210 215 220 Glu Vai Gin Gly Glu Ala Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile Phe 225 230 235 240 Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys 245 250 255 Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai 260 265 270 Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin 275 28D 285 Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser 290 295 ♦ 300 Lys Ala Asp Tyr Glu Lys H1s Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His 305 310 315 320 Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 325 330 335

<210> 58 <211> 307 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58

Asp Glu Vai Ala IIe Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Vai Leu Ser 1 5 10 15

Thr Asn Met Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro Vai IIe Ala Pro Gly 20 25 30 103

Glu Thr Vai Tyr Tyr Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu 35 40 45 Tyr Thr Ser His Ile Trp ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu 50 55 60 Gly Pro Glu Cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Val Pro Tyr 65 70 75 80 Asn Leu Arg Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser 85 90 95 Ile Leu Lys His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro 100 105 110 Gly Met Glu Ile Thr Lys Asp Gly Phe His Leu Val Ile Glu Leu Glu 115 120 125 Asp Leu Gly Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Arg Arg Glu 130 135 140 Pro Gly Ala Glu Glu His Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro 145 150 155 160 Vai His Leu Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Val Lys Ala 165 170 175 Gin Thr Phe Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr 180 185 190 Glu Cys Vai Glu Vai Gin Gly Glu Ala Thr Vai Ala Ala Pro Ser Val 195 200 205 Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 210 215 220 Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 61 n 225 230 235 240 Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val 245 250 255 Ihr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 260 265 270 Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 275 280 285 Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg 290 295 300

Gly Glu Cys 305

<210> 59 <211> 201 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 104

Asp Glu Vai Ala Ile Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Vai Leu Ser 1 5 10 15 Thr Asn Met Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro Vai Ile Ala Pro Gly 20 25 30 Glu Thr Vai Tyr Tyr Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu 35 40 45 Tyr Thr Ser His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu 50 55 60 Gly Pro Glu Cys Asp Vai Thr Asp ASp Ile Thr Ala Thr Vai Pro Tyr 65 70 75 80 Asn Leu Arg Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser 85 90 95 Ile Leu Lys His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro 100 105 110 Gly Met Glu Ile Thr Lys Asp Gly Phe His Leu Vai Ile Glu Leu Glu 115 120 125 Asp Leu Gly Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Arg Arg Glu 130 135 140 Pro Gly Ala Glu Glu His Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro 145 150 155 160 Vai His Leu Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Vai Lys Ala 165 170 175 Gin Thr Phe Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser 61 n Thr 180 185 190 Glu Cys Vai Glu Vai Gin Gly Glu Ala 195 200 <210> 60 <211> 323

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60

Asp Glu Vai Ala Ile Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Vai Leu Ser 1 5 10 15

Thr Asn Met Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro Vai Ile Ala Pro Gly 20 25 30

Glu Thr Vai Tyr Tyr Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu 35 40 45

Tyr Thr Ser His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu 50 55 60

Gly Pro Glu Cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Vai Pro Tyr 65 70 75 80 105

Asn Leu Arg Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser 85 90 95 Ile Leu Lys His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro 100 105 110 Gly Met Glu Ile Pro Lys His Gly Phe His Leu Vai Ile Glu Leu GTu 115 120 125 Asp Leu Gly Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Thr Arg GTu 130 135 140 Pro Gly Ala Glu Glu His Vai lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro 145 150 155 160 Vai His Leu Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Vai Lys Ala 165 170 175 Gin Thr Phe Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr 180 185 190 Glu Cys Vai Glu Vai Gin Gly Glu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 195 200 205 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai 210 215 220 Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 225 230 235 240 Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin 245 250 255 Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai 260 265 270 Thr Glu Gin Asp Ser lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 275 280 285 Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu 290 295 300 Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg 305 310 315 320 Gly Glu Cys <210> 61

<211> 201 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61

Asp Glu Vai Ala IIe Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Vai Leu Ser 15 10 15

Thr Asn Met Lys Hi$ Leu Leu Met Trp Ser Pro Vai Ile Ala Pro Gly 20 25 30 106

Glu Thr Vai Tyr Tyr Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu 35 40 45 Tyr Tlir Ser His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu 50 55 60 Gly Pro Glu cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Vai Pro Tyr 65 70 75 80 Asn Leu Arg Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser 85 90 95 Ile Leu Lys His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro 100 105 110 Gly Met Glu Ile Pro Lys His Gly Phe His Leu Vai Ile Glu Leu Glu 115 120 125 Asp Leu Gly Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Thr Arg Glu 130 135 140 Pro Gly Ala Glu Glu His Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro 145 150 155 160 Vai His Leu Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Vai Lys Ala 165 170 175 Gin Thr Phe Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr 180 185 190 Glu Cys Vai Glu Vai Gin Gly Glu Ala 195 200 <210> 62 <211> 559 <212> PRT <213> Homo sapien LS <4 0 0> 62 Vai Pro Cys Vai Ser Gly Gly Leu Pro Lys Pro Ala Asn Ile Thr Phe 1 5 10 15 Leu Ser Ile Asn Met Lys Asn Vai Leu Gin Trp Thr Pro Pro Glu i Gly 20 25 30 Leu Gin Gly Vai Lys Vai Thr Tyr Thr Vai Gin Tyr Phe Ile Tyr ' Gly 35 40 45 Gin Lys Lys Trp Leu Asn Lys Ser Glu Cys Arg Asn Ile Asn Arg i Thr 50 55 60 Tyr Cys Asp Leu Ser Ala Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr 65 70 75 80 Ala Lys Vai Lys Ala Ile Trp Gly Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu 85 90 95 Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin Ile Gly Pro Pro i Glu 100 105 110 107

Vai Ala Leu Thr Thr Asp Glu Lys Ser Ile Ser Vai Vai Leu Thr Ala 115 120 125 Pro Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro Glu Asp Leu Pro Vai Ser Met Gin 130 135 140 Gin Ile Tyr Ser Asn Leu Lys Tyr Asn Vai Ser Vai Leu Asn Thr Lys 145 150 155 160 Ser Asn Arg Thr Trp Ser Gin Cys Vai Thr Asn His Thr Leu Vai Leu 165 170 175 Thr Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Vai His Vai Glu Ser Phe 180 185 190 Vai Pro Gly Pro Pro Arg Arg Ala Gin Pro Ser Glu Lys Gin Cys Ala 195 200 205 Arg Thr Leu Lys Asp Gin Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 210 215 220 Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe Pro Leu 225 230 235 240 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 245 250 255 Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp Asn Ser 260 265 270 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser 275 280 285 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser Ser Ser 290 295 300 Leu Gly Thr Gin Thr Tyr Ile Cys Asn Vai Asn His Lys Pro Ser Asn 305 310 315 320 Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 325 330 335 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Vai 340 345 350 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 355 360 365 Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp Pro Glu 370 375 380 Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His Asn Ala Lys 385 390 395 400 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Vai Vai Ser 405 410 415 Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 420 425 430 Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 435 440 445 108

Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro 450 455 460 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu TTir Cys Leu 465 470 475 480 Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn 485 490 495 Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu Asp Ser 500 505 510 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg 515 520 525 Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Het His Glu Ala Leu 530 535 540 His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 545 550 555 <210> 63

<211> 214 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 109

Vai Pro Cys Vai Ser Gly Gly Leu Pro Lys Pro Ala Asn Ile Thr Phe 1 5 10 15 Leu Ser Ile Asn Met Lys Asn Val Leu Gin Trp Thr Pro Pro Glu Gly 20 25 30 Leu Gin Gly Vai Lys Val Thr Tyr Thr Val Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly 35 40 45 Gin Lys Lys Trp Leu Asn Lys Ser Glu Cys Arg Asn Ile Asn Arg Thr 50 55 60 Tyr Cys Asp Leu Ser Ala Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr 65 70 75 80 Ala Lys Vai Lys Ala Ile Trp Gly Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu 85 90 95 Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gin Ile Gly Pro Pro Glu 100 105 110 Vai Ala Leu Thr Thr Asp Glu Lys Ser Ile Ser Val Val Leu Thr Ala 115 120 125 Pro Glu lys Trp Lys Arg Asn Pro Glu Asp Leu Pro Val Ser Met Gin 130 135 140 Gin Ile Tyr Ser Asn Leu Lys Tyr Asn Val Ser Val Leu Asn Thr Lys 145 150 155 160 Ser Asn Arg Thr Trp Ser Gin Cys Val Thr Asn H1s Thr Leu Val Leu 165 170 175

Thr Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Val His Val Glu Ser Phe 180 185 190 Val Pro Gly Pro Pro Arg Arg Ala Gin Pro Ser Glu Lys Gin Cys Ala 195 200 205 Arg Thr Leu Lys Asp Gin 210

<210> 64 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64

Glu Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg Phe Arg Arg Vai Pro Cys Vai 15 10 15

Ser Gly Gly <210> 65 110 <2ιι> : >07 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> < 55 Leu Pro Lys Pro Ala Asn Ile Thr Phe Leu Ser Ile Asn Met lys Asn 1 5 10 15 Vai Leu Gin Trp Thr Pro Pro Glu Gly Leu Gin Gly Vai Lys Vai Thr 20 25 30 Tyr Thr Vai Gin Tyr Phe Ile Tyr Gly Gin Lys lys Trp Leu Asn Lys 35 40 45 Ser Glu Cys Arg Asn Ile Asn Arg Thr Tyr Cys Asp Leu Ser Ala Glu 50 55 60 Thr Ser Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr Ala Lys Vai Lys Ala Ile Trp 65 70 75 80 Gly Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Phe 85 90 95 Leu Glu Thr Gin Ile Gly Pro Pro Glu Vai Ala Leu Thr Thr Asp Glu 100 105 110 Lys Ser Ile Ser Vai Vai Leu Thr Ala Pro Glu lys Trp Lys Arg Asn 115 120 125 Pro Glu Asp Leu Pro Vai Ser Met Gin Gin Ile Tyr Ser Asn Leu Lys 130 135 140 Tyr Asn Vai Ser Vai Leu Asn Thr Lys Ser Asn Arg Thr Trp Ser Gin 145 150 155 160

Cys Vai Thr Asn His Thr Leu Vai Leu Thr Trp Leu Glu Pro Asn Thr 165 170 175 Leu Tyr Cys Vai His Vai Glu Ser Phe Vai Pro Gly Pro Pro Arg Arg 180 185 190 Ala Gin Pro Ser Glu lys Gin Cys Ala Arg Thr Leu lys Asp Gin 195 200 205 <2 10> 66 <2 11> 150 <2 12> PRT <2 13> Homo sap; Lens <4 00> 66 111

Cys Arg Asn Ile Asn Arg Thr Tyr Cys Asp Leu Ser Ala Glu Thr Ser 1 5 10 15 Asp Tyr Glu His Gin Tyr Tyr Ala Lys Vai Lys Ala Ile Trp Gly Thr 20 25 30 Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Phe Leu Glu 35 40 45 Thr Gin He Gly Pro Pro Glu Vai Ala Leu Thr Thr Asp Glu Lys Ser 50 55 60 Ile Ser Vai Vai Leu Thr Ala Pro Glu Lys Trp Lys Arg Asn Pro Glu 65 70 75 80 Asp Leu Pro Vai Ser Met Gin Gin lie Tyr Ser Asn Leu Lys Tyr Asn 85 90 95 Vai Ser Vai Leu Asn Thr Lys Ser Asn Arg Thr Trp Ser Gin Cys Vai 100 105 110 Thr Asn His Thr Leu Vai Leu Thr Trp Leu Glu Pro Asn Thr Leu Tyr 115 120 125 Cys Vai His Vai Glu Ser Phe Vai Pro Gly Pro Pro Arg Arg Ala Gin 130 135 140 Pro Ser Glu Lys Gin Cys 145 150

<210> 67 <211> 196 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67

Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Vai Leu Ser Thr Asn Met Lys His 15 10 15 112

Leu Leu Met Trp Ser Pro Vai Ile Ala Pro Gly Glu Thr Vai Tyr Tyr 20 25 30 Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu Tyr Thr Ser His Ile 35 40 45 Trp lie Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu Gly Pro Glu Cys Asp 50 55 60 Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Vai Pro Tyr Asn Leu Arg Vai Arg 65 70 75 80 Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser Ile Leu Lys His Pro 85 90 95 Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro Gly Met Glu Ile Thr 100 105 110 Lys Asp Gly Phe His Leu Vai Ile Glu Leu Glu Asp Leu Gly Pro Gin 115 120 125 Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Arg Arg Glu Pro Gly Ala Glu Glu 130 135 140 Hi$ Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro Vai His Leu Glu Thr 145 150 155 160 Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Vai Lys Ala Gin Thr Phe Vai Lys 165 170 175 Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr Glu Cys Vai Glu Vai 180 186 190 Gin Gly Glu Ala 19S

<210> 68 <211> 203 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68

Asp Glu Vai Ala Ile Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Vai Leu Ser 1 5 10 15 Thr Asn Met Lys His Leu Leu Met Trp Ser Pro Vai Ile Ala Pro Gly 20 25 30 Glu Thr Vai Tyr Tyr Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu 35 40 45 Tyr Thr Ser His Ile Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu 50 55 60 Gly Pro Glu Cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Vai Pro Tyr 65 70 75 80 Asn Leu Arg Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser 85 90 95 113

Ile Leu Lys His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr Ile Leu Thr Arg Pro 100 105 110 Gly Met Glu Ile Pro lys His Gly Phe His Leu Vai Ile Glu Leu Glu 115 120 125 Asp Leu Gly Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Thr Arg Glu 130 135 140 Pro Gly Ala Glu Glu His Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro 145 150 155 160 Vai His Leu Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Vai Lys Ala 165 170 175 Gin Thr Phe Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr 180 185 190 Glu Cys Vai Glu Vai Gin Gly Glu Ala Ile Pro 195 200

<210> 69 <211> 196 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0 > 69

Leu Pro Ala Pro Gin Asn Leu Ser Val Leu Ser Thr Asn Met Lys His 1 5 10 15 Leu Leu Met Trp Ser Pro Vai Ile Ala Pro Gly Glu Thr Val Tyr Tyr 20 25 30 Ser Vai Glu Tyr Gin Gly Glu Tyr Glu Ser Leu Tyr Thr Ser His Ile 35 40 45 Trp Ile Pro Ser Ser Trp Cys Ser Leu Thr Glu Gly Pro Glu Cys Asp 50 55 60 Vai Thr Asp Asp Ile Thr Ala Thr Val Pro Tyr Asn Leu Arg Val Arg 65 70 75 80 Ala Thr Leu Gly Ser Gin Thr Ser Ala Trp Ser Ile Leu Lys His Pro 85 90 95 Phe Asn Arg Asn Ser Thr ne Leu Thr Arg Pro Gly Met Glu Ile Pro 100 105 110 Lys His Gly Phe His Leu Val Ile Glu Leu Glu Asp Leu Gly Pro Gin 115 120 125 Phe Glu Phe Leu Vai Ala Tyr Trp Thr Arg Glu Pro Gly Ala Glu Glu 130 135 140 His Vai Lys Met Vai Arg Ser Gly Gly Ile Pro Val His Leu Glu Thr 145 150 155 160 Met Glu Pro Gly Ala Ala Tyr Cys Val Lys Ala Gin Thr Phe Val Lys 165 170 175 114

Ala Ile Gly Arg Tyr Ser Ala Phe Ser Gin Thr Glu Cys Vai Glu Vai 180 185 190

Gin Gly Glu Ala 195

<210> 70 <211> 135 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70

Cys Ser Leu Thr Glu Gly Pro Glu Cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr 15 10 15

Ala Thr Vai Pro Tyr Asn Leu Arg Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin 20 25 30

Thr Ser Ala Trp Ser Ile Leu Lys His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr 35 40 45 11 e Leu Thr Arg Pro Gly Met Glu Ile Thr Lys Asp Gly Phe His Leu 50 55 60

Vai Ile Glu Leu Glu Asp Leu Gly Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala 65 70 75 80

Tyr Trp Arg Arg Glu Pro Gly Ala Glu Glu His Vai Lys Met Vai Arg 85 90 95

Ser Gly Gly Ile Pro Vai His Leu Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala 100 105 110

Tyr Cys Vai Lys Ala Gin Thr Phe Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser 115 120 125

Ala Phe Ser Gin Thr Glu Cys 130 135

<210> 71 <211> 135 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71

Cys Ser Leu Thr Glu Gly Pro Glu Cys Asp Vai Thr Asp Asp Ile Thr 15 10 15

Ala Thr Vai Pro Tyr Asn Leu Arg Vai Arg Ala Thr Leu Gly Ser Gin 20 25 30

Thr Ser Ala Trp Ser Ile Leu Lys His Pro Phe Asn Arg Asn Ser Thr 35 40 45 115

Ile Leu Thr Arg Pro Gly Met Glu lie Pro Lys His Gly Phe His Leu 50 55 60 Vai Ile Glu Leu Glu Asp Leu Gly Pro Gin Phe Glu Phe Leu Vai Ala 65 70 75 80 Tyr Trp Thr Arg Glu Pro Gly Ala Glu Glu H1s Vai Lys Met Vai Arg 85 90 95 Ser Gly Gly Ile Pro Vai His Leu Glu Thr Met Glu Pro Gly Ala Ala 100 105 110 Tyr Cys Vai Lys Ala Gin Thr Phe Vai Lys Ala Ile Gly Arg Tyr Ser 115 120 125 Ala Phe Ser Gin Thr Glu Cys 130 135

<210> 72 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 116

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • WO 9927103 A [0004] [0028] • WO 9903982 A [0005] • US 9825228 W [0028] • US 31345899 A [0028] • US 5945511 A [0029] • US 5843725 A [0045] • US 9903735 W [0065] • WO 9946379 A [0065] • WO 9725420 A [0077] • WO 09470898 A [0108] • WO 60213341 A [0108]

Literatura não relacionada com patentes, citada na descrição • Dynan ; Tijan. Nature, 1985, vol. 316, 774-78 [0017] • Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988 [0046] • Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Co, 1996 [0059] • Goodman and Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics. Pergamon Press, 1996 [0059] • Davis, S. et al. Cell, 1996, vol. 87, 1161-1169 [0070]

Claims (28)

1 REIVINDICAÇÕES 1. A utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para o fabrico de um medicamento para o tratamento da dermatite atópica.

2. A utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença inflamatória intestinal selecionada da colite ulcerativa e doença de Crohn.

3. A utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para o fabrico de um medicamento para o tratamento da artrite reumatóide.

4. A utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para o fabrico de um medicamento para o tratamento da doença inflamatória da pele dermatite de contacto, em que a dita doença inflamatória da pele é causada pela regulação positiva da IL-8 induzida pela IL-20.

5. A utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma lesão pulmonar inflamatória selecionada da síndrome respiratória no adulto, pneumonia bacteriana, e fibrose pulmonar idiopática em que a dita lesão pulmonar inflamatória é causada pela regulação positiva da IL-8 induzida pela IL-20. 2

6. A utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença inflamatória selecionada de choque séptico e falência múltipla de orgãos, em que a dita doença inflamatória é causada pela regulação positiva da IL-8 induzida pela IL-20.

7. A utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença selecionada do cancro do pulmão humano e melanoma humano, em que a dita doença é causada pela regulação positiva da IL-8 induzida pela IL-20.

8. A utilização de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, em combinação com outro agente terapêutico selecionado de lubrificantes, queratolíticos, corticosteróides tópicos, derivados tópicos da vitamina D, antralina, antimetabolitos sistémicos, terapêutica de luz ultravioleta com psoraleno (PUVA), etretinato, isotretinoina, ciclosporina, e o derivado tópico da vitamina D calcipotriol.

9. A utilização de acordo com a reivindicação 8, em que o dito antimetabolito sistémico é metotrexato.

10. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para utilização no tratamento de dermatite atópica.

11. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um 3 polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para utilização no tratamento de uma doença inflamatória intestinal selecionada da colite ulcerativa e doença de Crohn.

12. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para utilização no tratamento da artrite reumatóide.

13. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para utilização no tratamento da doença inflamatória da pele dermatite de contacto, em que a dita doença inflamatória da pele é causada pela regulação positiva da IL-8 induzida pela IL-20.

14. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para utilização no tratamento de uma lesão pulmonar inflamatória selecionada da sindrome respiratória no adulto, pneumonia bacteriana, e fibrose pulmonar idiopática em que a dita lesão pulmonar inflamatória é causada pela regulação positiva da IL-8 induzida pela IL-20.

15. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N.°s 1, 2, 3 e 4 para utilização no tratamento de uma doença inflamatória selecionada de choque séptico e falência múltipla de orgãos, em que a dita doença inflamatória é causada pela regulação positiva da IL-8 induzida pela IL-20.

16. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga a um 4 polipeptídeo da IL-20 selecionado do grupo que consiste nas SEQ. ID N. °s 1, 2, 3 e 4 para utilização no tratamento de uma doença selecionada de cancro do pulmão humano e melanoma humano, em que a dita doença é causada pela regulação positiva da IL-8 induzida pela IL-20.

17. Um anticorpo para utilização de acordo com qualquer das reivindicações 10-16, em que o dito anticorpo é um anticorpo policlonal ou monoclonal.

18. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo para utilização de acordo com qualquer das reivindicações 10-16, em que o dito anticorpo ou fragmento de anticorpo é fabricado por engenharia genética.

19. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo para utilização de acordo com qualquer das reivindicações 10-16, em que o dito anticorpo ou fragmento de anticorpo é um fragmento F(ab')2 ou Fab.

20. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo para utilização de acordo com a reivindicação 18, em que o dito anticorpo ou fragmento de anticorpo é humanizado; em que o dito anticorpo ou fragmento de anticorpo humanizado tem regiões determinantes de complementaridade não humanas (CDR) enxertadas em regiões framework e regiões constantes humanas.

21. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo para utilização de acordo com a reivindicação 18, em que o dito anticorpo ou fragmento de anticorpo é um anticorpo quimérico, fragmento Fv ou anticorpo de cadeia simples.

22. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo para utilização de acordo com a reivindicação 20 ou 21, em que os domínios 5 variáveis são de origem não humana.

23. Uma utilização de acordo com qualquer das reivindicações 1-9, em que o dito anticorpo é um anticorpo policlonal ou monoclonal.

24. A utilização de acordo com qualquer das reivindicações 1-9, em que o dito anticorpo ou fragmento de anticorpo é fabricado por engenharia genética.

25. A utilização de acordo com qualquer das reivindicações 1-9, em que o dito anticorpo ou fragmento de anticorpo é um fragmento F(ab')2 ou Fab.

26. A utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o dito anticorpo ou fragmento de anticorpo é humanizado; em que o dito anticorpo ou fragmento de anticorpo humanizado tem regiões determinantes de complementaridade não humanas (CDR) enxertadas em regiões framework e regiões constantes humanas.

27. A utilização de acordo com a reivindicação 24, em que o dito anticorpo ou fragmento de anticorpo é um anticorpo quimérico, fragmento Fv ou anticorpo de cadeia simples.

28. A utilização de acordo com as reivindicações 26 ou 27, em que os domínios variáveis são de origem não humana.