PT1608634E

PT1608634E - Processos para isolamento da forma i cristalina de 5-azacitidina

Info

Publication number: PT1608634E
Application number: PT47210786T
Authority: PT
Inventors: Dumitru Ionescu; Peter Blumbergs; Lee Alani Selvey
Original assignee: Celgene Internat Sarl
Priority date: 2003-03-17
Filing date: 2004-03-16
Publication date: 2013-08-27
Also published as: CA2518973A1; EP2266965A1; CY1114213T1; US20120245342A1; MXPA05009969A; PL1608634T3; WO2004082822A2; US8211862B2; SI2181988T1; US20040186284A1; US6943249B2; JP4792550B2; PL2181988T3; DK2181988T3; US20050272675A1; EP1608634A4; US20130274459A1; CY1117639T1; US8481715B2; PT2181988E

Description

ΕΡ 1 608 634/ΡΤ

DESCRIÇÃO "Processos para isolamento da Forma I cristalina de 5-azacitidina"

Campo do invento O invento refere-se ao isolamento da Forma I cristalina polimórfica de 5-azacitidina (também conhecida como azacitidina e 4-amino-l-3-D-ribofuranosil-S-triazin-2 (lfí-ona) . A 5-azacitidina pode ser utilizada no tratamento de doenças, incluindo o tratamento de sindromas mielodisplásicos (MDS).

Antecedentes do invento

Os polimorfos existem como duas ou mais fases cristalinas que possuem arranjos diferentes e/ou conformações diferentes da molécula numa rede cristalina. Quando uma molécula(s) solvente está contida dentro da rede cristalina, o cristal resultante é chamado um pseudopolimorfo, ou solvato. Se a molécula (s) solvente dentro da estrutura do cristal é uma molécula de água, então o pseudopolimorfo/solvato é chamado um hidrato. Os sólidos polimórficos e pseudopolimorficos exibem propriedades físicas diferentes, incluindo as devidas ao empacotamento, e várias propriedades termodinâmicas, espectroscópicas, interfaciais e mecânicas (ver H. Brittain, Polymorphism in Pharmaceutical Solids, Mareei Dekker, New York, NY, 1999, pp. 1-2). As formas polimórficas e pseudopolimorficas do fármaco (também conhecido como "ingrediente farmacêutico activo" (API)), tal como administrado por si ou formulado como um produto do fármaco (também conhecido como forma de dosagem final ou terminada, ou como composição farmacêutica) são bem conhecidas e podem afectar, por exemplo, a solubilidade, estabilidade, escoabilidade, fractabilidade e compressibilidade dos fármacos e a segurança e eficácia dos produtos do fármaco (ver, e.g., Knapman, K, Modern Drug Discoveries, March 2000: 53) . A 5-azacitidina (também conhecida como azacitidina e 4-amino-l-3-D-ribofuranosil-S-triazin-2(1H)-ona; designação do National Service Center NSC-102816; número de registo CAS 320-67-2) foi sujeita a ensaios patrocinados pelo NCI para o 2 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ tratamento de síndromas mielodisplásicos (MDS). Ver Kornblith et al., J. Clin. Oncol. 20(10):2441-2452 (2002) e Silverman

et al., J. Clin. Oncol. 20(10):2429-2440 (2002). A 5-azacitidina pode ser definida como possuindo a fórmula C8H12N4O5, um peso molecular de 244,20 e uma estrutura de:

No pedido de patente dos Estados Unidos com o N° de Série 10/390578 (Patente US N° 6887855) entitulado "Forms of 5-azacytidine", apresentado em 17 de Março de 2003, são descritas oito formas polimórficas e pseudopolimórficas diferentes de 5-azacitidina (Formas I-VIII), para além de uma forma amorfa. As Formas I-VIII possuem cada uma padrões característicos de Difracção de Raios-X em Pó (XRPD) e são facilmente distinguíveis entre si utilizando XRPD.

Em US 3817980 divulga-se a síntese de certos nucleósidos de 5-azapirimidina por reacção de um derivado de 1-O-acil-l-0-alquil- ou 1-halo- de um resíduo de açúcar bloqueado com um composto de 5-azacitosina sililado na presença de um ácido de Lewis. 0 resíduo contendo 5-azacitidina é cristalizado a partir de metanol húmido. M.W. Winkley e R.K. Robins, The Journal of Organic Chemlstry (1970) 491-495, divulgam a síntese de 5-azacitidina por glicosilação directa de 1,3,5-triazinas. O material é cristalizado em etanol aquoso.

Em US 3891623 descreve-se a síntese de citidina e derivados de citidina por reacção de um derivado de 4-trialquil-sililoxiuridina com amoníaco ou uma amina primária ou secundária, ou com um sal de uma amina primária ou secundária na presença de uma amina terciária. 3 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ

Em US 6723728 divulgam-se formas polimórficas de (-)- e (±)-cis-FTC (4-amino-5-fluoro-1-(2-(hidroximetil)-1,3-oxatiolan-5-il)-2(1H)-pirimidinona). A forma cristalina hidratada de (±)-cis-FTC é obtida por dissolução de (±)-cis-FTC em água e recristalização do FTC.

Em GB 1227691 A divulga-se o isolamento de l-glicosil-5-azacitosina como um sólido a partir de certas misturas reaccionais contendo metanol. A. Piscala et al., Nucleid Acid Chemistry (1978) 435-441 divulga o isolamento de 5-azacitidina como um sólido a partir de uma mistura reaccional. A reacção é realizada em metanol. 0 sólido é depois cristalizado em água-acetona. A. Piscala et al., Collection of Czechoslovak Chemical Communications (1964) 2060-2069, divulga o isolamento de 5-azacitidina como um sólido a partir de uma mistura reaccional. A reacção é realizada em metanol. O sólido é depois cristalizado em água-metanol.

Beisler J.A. et al., Journal of Carbohydrates (1977) 281-299, divulga o isolamento de 5-azacitidina como um sólido a partir de certas misturas reaccionais. As reacções são realizadas em metanol.

Beisler J.A. et al., Journal of Medicinal Chemistry (1978) 204-208, divulga a cristalização de 5-azacitidina em etanol-água.

No pedido de patente dos Estados Unidos com o N° de Série 10/390578 (Patente US N° 6877855) entitulado "Forms of 5-azacytidine", apresentado em 17 de Março, é demonstrado que este processo do estado da técnica para a recristalização do produto de sintese bruto não controla as formas polimórficas de 5-azacitidina. Especificamente, o procedimento de recristalização do estado da técnica produz ou a Forma I substancialmente isenta de outras formas, ou uma fase mista de Forma I/II, i.e. um material sólido em que a 5-azacitidina está presente numa fase mista de ambas Forma I polimórfica e Forma II polimórfica. Assim, os procedimentos do estado da 4 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ técnica não permitem que se aponte com confiança a Forma I como a única forma polimórfica no fármaco. O presente invento proporciona processos que permitem a recristalização da 5-azacitidina como Forma I polimórfica de forma robusta e reprodutivel.

Sumário do invento O presente invento proporciona processos para o isolamento de modo robusto e reprodutivel da 5-azacitidina como Forma I polimórfica substancialmente isenta de outras formas. Os processos envolvem a recristalização de 5-azacitidina dissolvida numa mistura de DMSO/co-solvente e a posterior recolha dos cristais resultantes. São também descritas composições farmacêuticas que compreendem a Forma I de 5-azacitidina juntamente com um excipiente, diluente ou suporte farmaceuticamente aceitável.

Descrição detalhada das concretizações preferidas

Forma I polimórfica de 5-azacitidina A Forma I de 5-azacitidina é descrita no pedido de patente dos Estados unidos com o N° de Série 10/390578 (Patente US N° 6877855) entitulado "Forms of 5-azacytidine", apresentado em 17 de Março de 2003. A Tabela 1 proporciona os ângulos 2Θ, espaçamentos d e intensidades relativas mais proeminentes para a Forma I observados utilizando Difracção de Raios-X em Pó (XRPD) realizada de acordo com o processo do Exemplo 4. 5 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ

Tabela 1: Forma I de 5-azacitidina - ângulos 2Θ, espaçamentos d e intensidades relativas mais proeminentes (radiação Cu Ka) Ângulo 2Θ (°) Espaçamento d (Â) Intensidade Relativa 12,182 7,260 39,1 13,024 6,792 44,1 14,399 6,146 31,5 16,470 5,378 27,1 18,627 4,760 16, 0 19,049 4,655 35, 9 20,182 4,396 37,0 21,329 4,162 12,4 23,033 3, 858 100, 0 23,872 3, 724 28, 0 26,863 3,316 10, 8 27,135 3,284 51,5 29,277 3, 048 25, 6 29,591 3, 016 11,5 30,369 2,941 10, 8 32,072 2,788 13,4

Isolamento da Forma I polimórfica de 5-azacitidina por recristalização A Forma I de 5-azacitidina pode ser isolada de modo reprodutível e substancialmente isenta de outras formas através de recristalização de 5-azacitidina dissolvida e recolha dos cristais resultantes. De modo específico, a 5-azacitidina é primeiro dissolvida completamente em dimetilsulfóxido (DMSO). A 5-azacitidina utilizada para formar a solução pode ser sintetizada através de qualquer procedimento conhecido na técnica; um esquema de síntese exemplar é proporcionado no Exemplo 1. Qualquer forma(s) polimórfica ou pseudopolimórfica de 5-azacitidina, incluindo fases mistas, pode ser utilizada para formar a solução. A 5-azacitidina amorfa pode também ser utilizada para formar a solução. É preferido, mas não requerido, que o DMSO seja pré-aquecido a uma temperatura elevada, de modo a assegurar que a 5-azacitidina é dissolvida completamente. O dimetilsulfóxido (DMSO) é preferencialmente pré-aquecido a uma temperatura na gama de cerca de 40 °C a cerca de 90°C. 6 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ

Após a solvatação da 5-azacitidina em DMSO, pelo menos um co-solvente seleccionado do grupo que consiste em etanol, 2-propanol (álcool isopropílico) , acetonitrilo e metiletil-cetona, é adicionado à solução de 5-azacitidina. A utilização de misturas de dois ou mais dos co-solventes anteriormente mencionados está também incluída no âmbito do invento. É preferido, mas não requerido, que os co-solventes sejam pré-aquecidos antes da mistura com DMSO, preferivelmente a uma temperatura inferior à temperatura a que uma porção substancial do co-solvente entraria em ebulição, muito preferencialmente a cerca de 50°C. É também preferido, mas não requerido, que o co-solvente (s) seja adicionado de modo gradual ao DMSO.

Após a mistura, a mistura DMSO/co-solvente(s) é depois equilibrada a temperaturas diferentes de modo a promover ou uma recristalização lenta ou uma recristalização rápida da Forma I de 5-azacitidina, tal como descrito em seguida.

Por recristalização lenta pretende referir-se que a solução co-solvente/DMSO é deixada equilibrar a uma temperatura na gama de cerca de 0°C a cerca de 40°C, preferivelmente na gama de cerca de 15°C a cerca de 30°C, e muito preferivelmente a uma temperatura próxima da temperatura ambiente. A recristalização lenta da Forma I de 5-azacitidina é realizada usando etanol, álcool isopropílico, metiletil-cetona ou acetonitrilo.

Por recristalização rápida pretende referir-se que a solução de co-solvente é deixada equilibrar a uma temperatura inferior a 0°C, preferivelmente inferior a cerca de -10°C, e muito preferivelmente a cerca de -20°C. A recristalização rápida da Forma I de 5-azacitidina é realizada com 2-propanol (álcool isopropílico) ou acetonitrilo como co-solvente.

Exemplos de protocolos para a recristalização da Forma I de acordo com os processos aqui descritos são proporcionados nos Exemplos 2 (recristalização lenta com DMSO como solvente primário e etanol, álcool isopropílico, acetonitrilo ou metiletil-cetona como co-solvente) e 3 (recristalização 7 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ rápida com DMSO como solvente primário e álcool isopropilico ou acetonitrilo como co-solvente) seguintes.

Após a recristalização, a Forma I dos cristais de 5-azacitidina pode ser isolada da mistura co-solvente através de qualquer processos conhecido na técnica. Preferivelmente, os cristais da Forma I são isolados utilizando filtração a vácuo através de um meio filtrante adequado ou por centrifugação.

Utilizando os novos processos aqui proporcionados, é possivel pela primeira vez apontar a Forma I de 5-azacitidina como fármaco de modo reprodutível e robusto. Em particular, o álcool isopropilico e o acetonitrilo produzem com confiança a Forma I independentemente da taxa de arrefecimento (quer por recristalização lenta ou recristalização rápida) e são preferidos como co-solventes de recristalização para recuperar a Forma I. Muito preferivelmente, a Forma I é isolada utilizando álcool isopropilico como co-solvente, uma vez que o álcool isopropilico possui uma classificação de risco da Classe 3 (solvente de baixo potencial tóxico), ao passo que o acetonitrilo possui uma classificação de risco da Classe 2 (solvente a ser limitado) pela International Conference of Harmonization's Guidelines for residual Solvents, Julho de 1997. A utilização do sistema DMSO/álcool isopropilico permite que a Forma I de 5-azacitidina seja recuperada com confiança pela primeira vez em solventes de baixo potencial tóxico, sem requerer controlo sobre a velocidade de recristalização. Na concretização mais preferida, a Forma I de 5-azacitidina pode ser recuperada simplesmente por dissolução de 5-azacitidina em DMSO (preferivelmente aquecido a uma temperatura na gama de cerca de 40°C a cerca de 90°C antes da adição de 5-azacitidina), adição de álcool isopropilico, e permissão para que a mistura solvente resultante equilibre a uma temperatura próxima da temperatura ambiente.

Em algumas concretizações do invento, a Forma I de 5-azacitidina pode ser recuperada de uma mistura de DMSO/co-solvente(s) por "sementeira" com uma pequena quantidade da Forma I de 5-azacitidina quer antes de, ou durante a adição do co-solvente(s). 8 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ

Ao permitir ο isolamento de uma forma polimórfica única, o perito na especialidade irá apreciar que o presente invento permite pela primeira vez a produção do fármaco de 5-azacitidina com propriedades uniformes e consistentes de lote para lote, propriedades essas que incluem mas não estão limitadas a solubilidade e velocidade de dissolução. Por outro lado, isto permite proporcionar um produto de fármaco de 5-azacitidina (ver abaixo) que também possui propriedades uniformes e consistentes de lote para lote.

Formulações farmacêuticas

Para a administração mais eficaz do fármaco do presente invento, é preferivel preparar uma formulação farmacêutica (também conhecida como "produto de fármaco" ou "composição farmacêutica") preferivelmente sob a forma de dose unitária, compreendendo um ou mais dos polimorfos de 5-azacitidina do presente invento e um ou mais suporte, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis. Muito preferivelmente, é utilizada a Forma I de 5-azacitidina preparada de acordo com os processos aqui proporcionados para preparar a formulação farmacêutica.

Uma tal formulação farmacêutica pode incluir uma forma sólida do presente invento que é misturada com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável, diluido por um excipiente ou incluído num tal suporte, que pode estar na forma de uma cápsula, saqueta, comprimido, bucal, pastilha, papel, ou outro recipiente. Quando o excipiente serve como diluente, pode ser um material sólido, semi-sólido ou líquido que actua como veículo, suporte ou meio para o polimorfo (s) de 5-azacitidina. Assim, as formulações podem estar na forma de comprimidos, pílulas, pós, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, cápsulas (tais como, por exemplo, cápsulas de gelatina mole e dura), supositórios, soluções injectáveis estéreis e pós embalados estéreis.

Exemplos de excipientes adequados incluem amidos, goma arábica, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope e metilcelulose. As formulações podem incluir adicionalmente agentes 9 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ lubrificantes tais como, por exemplo, talco, estearato de magnésio e óleo mineral; agentes molhantes; agentes emulsionantes ou suspensores; agentes conservantes tais como hidroxibenzoatos de metilo e propilo; agentes edulcorantes; ou agentes aromatizantes. Também podem ser usados polióis, tampões e cargas inertes. Exemplos de polióis incluem: manitol, sorbitol, xilitol, sacarose, maltose, glucose, lactose, dextrose e similares. Tampões adequados englobam fosfato, citrato, tartarato, succinato e similares. Outras cargas inertes que podem ser usadas englobam as que são conhecidas na técnica e são úteis no fabrico de várias formas de dosagem. Se desejado, as composições farmacêuticas sólidas podem incluir outros componentes tais como agentes dilatadores e/ou agentes granulantes, e similares. As composições aqui descritas podem ser formuladas de modo a proporcionar a libertação rápida, prolongada, controlada ou retardada do fármaco após administração ao paciente, empregando procedimentos bem conhecidos na técnica.

Apenas para referência, o polimorfo(s) de 5-azacitidina pode ser feito na forma de unidades de dosagem para administração oral. O polimorfo(s) de 5-azacitidina pode ser misturado com um suporte sólido pulverulento tal como, por exemplo, lactose, sacarose, sorbitol, manitol, amido, amilopectina, derivados de celulose ou gelatina, assim como com um agente anti-fricção tal como, por exemplo, estearato de magnésio, estearato de cálcio e ceras de polietilenoglicol. A mistura é depois prensada em comprimidos ou cheia em cápsulas. Se se pretendem comprimidos, cápsulas ou cápsulas de gelatina revestidos, tais comprimidos, cápsulas ou cápsulas de gelatina podem ser revestidos com uma solução concentrada de açúcar, que pode conter goma arábica, gelatina, talco, dióxido de titânio, ou com uma laca dissolvida no solvente orgânico volátil ou mistura de solventes. Para este revestimento podem ser adicionados diversos corantes, de modo a distingui-los entre comprimidos com diferentes compostos activos ou com quantidades diferentes do composto activo presentes.

Podem ser preparadas cápsulas de gelatina mole em que as cápsulas contêm uma mistura do polimorfo(s) de 5-azacitidina e óleo vegetal ou materiais não aquosos misciveis com água 10 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ tais como, por exemplo, polietilenoglicol e similares. As cápsulas de gelatina dura podem conter grânulos ou pó do polimorfo de 5-azacitidina em combinação com um suporte sólido pulverulento tal como, por exemplo, lactose, sacarose, sorbitol, manitol, amido de batata, amido de milho, amilopectina, derivados de celulose ou gelatina.

Os comprimidos para utilização oral são tipicamente preparados da seguinte maneira, embora possam ser empregues outras técnicas. As substâncias sólidas são trituradas ou peneiradas suavemente até ao tamanho de partícula desejado, e um agente aglutinante é homogeneizado e suspenso num solvente adequado. O polimorfo(s) de 5-azacitidina e agentes auxiliares são misturados com a solução de agente aglutinante. A mistura resultante é humedecida para formar uma suspensão uniforme. O humedecimento provoca tipicamente uma ligeira agregação das partículas, e a massa resultante é suavemente prensada através de um crivo de aço inoxidável possuindo a dimensão desejada. As camadas da mistura são depois secas em unidades de secagem controlada durante uma extensão de tempo pré-determinada para se conseguir um tamanho de partícula e consistência desejados. Os grânulos da mistura seca são peneirados suavemente para remover qualquer pó. A esta mistura são adicionados agentes desintegrantes, anti-fricção e anti-aderência. Por fim, a mistura é prensada em comprimidos utilizando uma máquina com os punções e matrizes apropriados para obter a dimensão de comprimido desejada.

No caso das formulações anteriores serem destinadas a administração parentérica, uma tal formulação compreende tipicamente soluções estéreis para injecção, aquosas e não aquosas, compreendendo um ou mais polimorfos de 5-azacitidina para o que as preparações são preferivelmente isotónicas com o sangue do destinatário pretendido. Estas preparações podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostatos e soluto; os quais tornam a formulação isotónica com o sangue do destinatário pretendido. As suspensões aquosas e não aquosas podem incluir agentes suspensores e agentes espessantes. As formulações podem estar presentes em recipientes de dose unitária ou multi-dose, por exemplo, ampolas e frascos selados. Podem ser preparadas soluções e suspensões para injecção extemporâneas a partir de pós estéreis, grânulos e comprimidos do tipo descrito previamente. 11 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ

As preparações líquidas para administração oral são preparadas sob a forma de soluções, xaropes ou suspensões, contendo as duas últimas formas, por exemplo, polimorfo(s) de 5-azacitidina, açúcar e uma mistura de etanol, água, glicerol e propilenoglicol. Se desejado, tais preparações líquidas contêm agentes corantes, agentes aromatizantes e sacarina. Também podem ser usados agentes espessantes tais como carboximetilcelulose.

Como tal, as formulações farmacêuticas aqui descritas são preparadas preferivelmente numa forma de dosagem unitária, contendo cada unidade de dosagem de cerca de 5 mg a cerca de 200 mg, mais habitualmente de cerca de 100 mg do polimorfo(s) de 5-azacitidina. Na forma líquida, a unidade de dosagem contém de cerca de 5 a cerca de 200 mg, mais habitualmente cerca de 100 mg do polimorfo(s) de 5-azacitidina. O termo "forma de dosagem unitária" refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para sujeitos/pacientes humanos ou outros mamíferos, contendo cada unidade uma quantidade pré-determinada do polimorfo de 5-azacitidina calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com preferivelmente pelo menos um suporte, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Exemplos

Exemplo 1 (comparativo)

Procedimento do estado da técnica para a síntese e recristalização de fármaco de 5-azacitidina A 5-azacitidina pode ser sintetizada usando 5-azacitosina e 1,2,3,5-tetra-0-acetil-p-D-ribofuranose (RTA) disponíveis comercialmente, de acordo com a seguinte via: (H3C)3SiO‘

(D NHSKCHsb

N “N

+

OAC OAC

(Π SnCI4,CH3CN ^ (2) NaOCH3,CH3OH

HO

OH OH (2) (3) 12 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ Ο produto de síntese bruto é dissolvido em DMSO (pré-aquecido a cerca de 90°C), e depois adiciona-se metanol à solução de DMSO. A mistura co-solvente é equilibrada a aproximadamente -20°C para permitir a formação de cristais de 5-azacitidina. O produto é recolhido por filtração a vácuo e deixado secar ao ar.

Exemplo 2

Forma I de 5-azacitidina: Recristalização lenta de 5-azacitidina em sistemas de co-solvente

Dissolveram-se aproximadamente 250 mg de 5-azacitidina em aproximadamente 5 ml de dimetilsulfóxido (DMSO), pré-aquecido a aproximadamente 90°C, em copos separados de 100 mL. Deixaram-se dissolver os sólidos até se obter uma solução límpida. Juntaram-se à solução aproximadamente 45 mL de co-solvente de etanol, álcool isopropílico, acetonitrilo ou metiletil-cetona, pré-aquecidos a aproximadamente 50°C, e a solução resultante foi sujeita a mistura. A solução foi coberta e deixada equilibrar sob condições ambiente. O produto foi recolhido por filtração a vácuo utilizando um funil Buchner.

Exemplo 3

Forma I de 5-azacitidina: Recristalização rápida de 5-azacitidina em sistemas de co-solvente

Dissolveram-se aproximadamente 250 mg de 5-azacitidina em aproximadamente 5 mL de DMSO, pré-aquecidos a aproximadamente 90°C, em copos separados de 100 mL. Deixaram-se os sólidos dissolver até se obter uma solução límpida. Juntaram-se à solução aproximadamente 45 mL de co-solvente de álcool isopropílico ou acetonitrilo, pré-aquecidos a aproximadamente 50°C, e a solução resultante foi misturada. A solução foi coberta e colocada num congelador para equilibrar a aproximadamente -20°C para permitir a formação de cristais. As soluções foram removidas do congelador após formação dos cristais. 0 produto foi recolhido por filtração a vácuo utilizando um funil Buchner. 13 ΕΡ 1 608 634/ΡΤ

Exemplo 4

Difracção de raios-X em pó da 5-azacitidina recristalizada

Os padrões de difracção de raios-X em pó (XRPD) para cada amostra foram obtidos num difractómetro Scintag XDS 2000 ou Scintag X2 Θ/Θ operando com radiação de cobre a 45 kV e 40 mA utilizando um detector Kevex Psi Peltier de silicio arrefecido ou um detector Thermo ARL Peltier de estado sólido arrefecido. Foram utilizadas aberturas de fonte de 2 ou 4 mm e aberturas de detector de 0,5 ou 0,3 mm para a recolha de dados. 0 material recristalizado foi suavemente triturado durante aproximadamente um minuto utilizando um pilão e almofariz de ágata. As amostras foram colocadas num suporte de amostras de aço inoxidável ou silicio e niveladas utilizando uma lâmina de microscópio de vidro. Os padrões de difracção em pó das amostras foram obtidos a ângulos 2Θ de 2 a 42° a Io/minuto. A calibração do difractómetro X2 é verificada anualmente utilizando um padrão de silicio em pó. A XRPD realizada de acordo com este processo revelou que a Forma I de 5-azacitidina foi isolada no Exemplo 2 através de recristalização lenta usando ou etanol, álcool isopropilico, acetonitrilo ou metiletil-cetona como co-solvente, e no Exemplo 3 por recristalização rápida usando álcool isopropilico ou acetonitrilo como co-solvente. Os resultados indicam que a Forma I de 5-azacitidina pode ser recuperada com confiança a partir de sistemas de solvente de DMSO/álcool isopropilico e DMSO/acetonitrilo sem controlo da velocidade de recristalização.

Lisboa, 2013-08-14

Claims

ΕΡ 1 608 634/ΡΤ 1/2 REIVINDICAÇÕES 1. Processo para o isolamento de uma forma cristalina de 5-azacitidina que compreende os passos de recristalização de 5-azacitidina numa mistura solvente compreendendo dimetil-sulfóxido e pelo menos um co-solvente seleccionado do grupo que consiste em etanol, 2-propanol (álcool isopropilico), acetonitrilo e metiletil-cetona, através do arrefecimento da referida mistura solvente desde uma temperatura seleccionada para permitir que a referida 5-azacitidina se dissolva completamente até temperatura ambiente; e isolamento da 5-azacitidina recristalizada.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, que compreende os passos de: (i) preparação de uma solução que compreende 5-azacitidina e dimetilsulfóxido; (ii) adição de pelo menos um co-solvente seleccionado do grupo que consiste em etanol, 2-propanol, acetonitrilo e metiletil-cetona à solução de 5-azacitidina, e arrefecimento da mistura até temperatura ambiente; e (iii) isolamento da 5-azacitidina recristalizada.
3. Processo para o isolamento de uma forma cristalina de 5-azacitidina que compreende os passos de recristalização de 5-azacitidina numa mistura solvente compreendendo dimetil-sulfóxido e pelo menos um co-solvente seleccionado do grupo que consiste em 2-propanol (álcool isopropilico) e acetonitrilo, através do arrefecimento da referida mistura solvente desde uma temperatura seleccionada para permitir que a referida 5-azacitidina se dissolva completamente até -20°C; e isolamento da 5-azacitidina recristalizada.
4. Processo de acordo com a reivindicação 3, que compreende os passos de: (i) preparação de uma solução que compreende 5-azacitidina e dimetilsulfóxido; (ii) adição de pelo menos um co-solvente seleccionado do grupo que consiste em 2-propanol e acetonitrilo à solução de 5-azacitidina e arrefecimento da mistura a - 2 0 ° C; e (iii) isolamento da 5-azacitidina recristalizada. ΕΡ 1 608 634/ΡΤ 2/2 1-4, 1-4,
5. Processo de acordo com qualquer das reivindicações em que o referido co-solvente é 2-propanol.
6. Processo de acordo com qualquer das reivindicações em que o referido co-solvente é acetonitrilo.
7. Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 e 2, em que o referido co-solvente é etanol.
8. Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 e 2, em que o referido co-solvente é metiletil-cetona.
9. Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 8, em que a forma cristalina de 5-azacitidina é caracterizada por, utilizando Difracção de Raios-X em Pó, picos observados a ângulos 2Θ de 12,182, 13,024, 14,399, 16,470, 19,049, 20,182, 23,033, 23,872, 27,135 e 29,277°.
10. Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 8, em que a forma cristalina de 5-azacitidina é caracterizada pelos seguintes ângulos 2Θ e espaçamentos d ângulo 2Θ (°) espaçamento d (Â) 12,182 7,260 13,024 6,792 14,399 6, 146 16,470 5,378 19,049 4,655 20,182 4,396 23,033 3, 858 23,872 3,724 27,135 3,284 29,277 3, 048 Lisboa 2013-08-14