PT1492766E

PT1492766E - Síntese melhorada de análogos de cc-1065.

Info

Publication number: PT1492766E
Application number: PT03714042T
Authority: PT
Inventors: Ravi V J Chari; Robert Yongxin Zhao
Original assignee: Immunogen Inc
Priority date: 2002-04-05
Filing date: 2003-03-19
Publication date: 2007-07-26
Also published as: US20030195365A1; JP4578105B2; ATE361278T1; EP1492766B1; DE60313595D1; WO2003087055A1; EP1492766A4; ES2286418T3; US6534660B1; HK1068138A1; DE60313595T2; US6586618B1; CA2456453C; NZ530854A; DK1492766T3; AU2003218060A1; JP2005522506A; EP1492766A1; US7329760B2; AU2003218060B2

Description

ΕΡ1492766 1 DESCRIÇÃO "SÍNTESE MELHORADA DE ANÁLOGOS DE CC-1065"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção diz respeito à sintese de antibióticos anti-tumorais citotóxicos tais como CC-1065 e seus análogos. Em particular, a presente invenção proporciona uma sintese melhorada para seco(-)CBI (5-hidroxi-3-amino-l-[S]-(clorometil)-1,2-di-hidro-3H-benz(e)-índole) , e para a síntese relacionada de análogos de CC-1065 compreendendo uma porção de alquilação ciclopropa-benzindole (CBI), que pode ser incorporada em agentes terapêuticos dirigidos para células.

ANTECEDENTES CC-1065 é um antibiótico anti-tumoral altamente citotóxico isolado de culturas de Streptomyces zelensis. A molécula CC-1065 consiste em três subunidades de pirroloindole substituído unidas através de ligações amida. A subunidade "A" é a porção de alquilação ciclopropapir-roloindole (CPI), enquanto que as subunidades "B" e "C" são porções idênticas de pirroloindole. 2 ΕΡ1492766

Têm sido descritos novos conjugados de agente citotóxico-agente de ligação a células compreendendo um agente de ligação a células quimicamente ligado a análogos de CC-1065 [Patentes US 5 475 092; 5 585 499; 5 846 545, R. V. J. Chari et al., Câncer Res., 55, 4079-4084 (1995)]. Estes conjugados de agente citotóxico-agente de ligação a células possuem utilização terapêutica uma vez que distribuem os agentes citotóxicos a uma população celular especifica de uma forma dirigida. Nestes agentes citotóxicos, aqui referidos como DC1 e seus derivados, a subunidade "A" CPI de alquilação foi substituída pelo análogo benzofundido ciclopropabenzindole (CBI). A unidade CBI pode existir sob a forma de anel fechado ciclopropilo ou sob a forma de anel aberto seco(clorometil). As subunidades "B" e "C" foram substituídas por unidades indole. Para além disto, a unidade índole terminal suporta um substituinte que permitiu a ligação aos agente de ligação a células. 3 ΕΡ1492766

CBI é o precursor necessário para a síntese de fármacos DC1 e seus derivados. A síntese original de CBI foi descrita por D. L. Boger et al., [J. Org. Chem., 55, 5823-5833 (1990)]. Uma síntese "melhorada", também descrita por D. L. Boger et al., [J. Org. Chem., 57, 2873-2876 (1992)] é um processo de 15 passos partindo de nafta-lenodiol. Outras vias para obter sínteses de CBI a partir de diferentes materiais de partida também tem sido descrita [K. J. Drost & Μ. P. Cava, J. Org. Chem., 56, 2240-2244 (1991), P. A. Aristoff & P. D. Johnson, J. Org. Chem., 57, 6234-6239 (1992)]. Estas sínteses são extensas, consomem tempo, são caras e proporcionam fracos rendimentos.

Um passo chave para a síntese de CBI é a resolução dos enantiómeros no estádio seco-CBI. Apenas o enantiómero seco(-) é biologicamente activo, e é importante remover eficazmente o isómero(+) inactivo. A separação dos isómeros pode ser alcançada, por exemplo, através de HPLC 4 ΕΡ1492766 quiral. Este método não é muito eficaz quando aplicado a seco-CBI uma vez que a separação entre os dois enantiómeros é fraca. Para além disso, mesmo a separação optimizada numa coluna quiral é fraca (a diferença do tempo de retenção entre os dois isómeros é inferior a 5 minutos), e requer um sistema solvente fortemente não-polar, tal como uma mistura de 95% de hexano a 5% de isopropanol (Boger et al., 116, J. Am. Chem Soc., 7996-8006 (1994). Sob estas condições, seco-CBI possui uma solubilidade fraca, resultando numa baixa eficácia (quantidades de carga pequenas) na coluna, e consequentemente, longos tempos de processamento. Em alternativa, a mistura enantiomérica pode ser convertida num conjunto de diastereómeros através de esterificação com um ácido quiral, tal como ácido mandélico, seguido de separação através de HPLC. Contudo, o éster separado tem que ser hidrolisado e depois repurifiçado, adicionando-se desta forma um passo de processamento extra. D. L. Boger et al. (Tet. Let., 39 2227-2230 (1998)) descreve a utilização de uma ciclização intramo-lecular por radicais 5 exo-trig num cloreto de vinilo ligado para produzir um seco-CBI protegido com benzilo e t-BOC. A utilidade terapêutica e a promessa de fármacos tais como DC1 e seus derivados, por exemplo no tratamento de diversos cancros, torna desejável que métodos sintéticos melhorados sejam desenvolvidos de forma a ser possível fabricar CBI em larga escala, através de um processo 5 ΕΡ1492766 simples, de fácil variação de escala, de rendimento elevada, pouco dispendioso que utiliza materiais de partida pouco dispendiosos e facilmente disponíveis. A presente invenção proporciona esse método sintético melhorado que vai de encontro às lacunas anteriormente mencionadas da técnica precedente. Todas estas vantagens e outras mais são proporcionadas pela invenção aqui descrita, tal como será evidente para o especialista da técnica ao ler a descrição e exemplos que se seguem.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Os inventores descobriram uma nova, económica e eficaz síntese para seco(-)CBI que pode utilizar, por exemplo, o composto disponível comercialmente e pouco dispendioso 1,3-di-hidroxinaftaleno como material de partida, e que pode ser alcançado em apenas sete passos.

Os inventores proporcionaram ainda sínteses relacionadas flexíveis e eficazes para a conversão de seco(-)CBI numa larga gama de fármacos DC1. Embora existam várias diferenças entre o esquema sintético aqui descrito para seco(-)CBI e qualquer método previamente apresentado, uma diferença exemplar é a utilização do mesmo grupo protector para os grupos amino e hidroxi do precursor chave, 4-hidroxi-2-naftilamina. Consequentemente, num modelo de realização do método aqui descrito, é utilizado 6 ΕΡ1492766 um composto protegido com di-tert.-butiloxicarbonilo (di-t-boc), em vez de um grupo protector benzilo separado para o grupo hidroxilo e um grupo protector tert.-butiloxicarbonilo (t-boc) para a função amina, anteriormente descrita. Consequentemente, na síntese presente, alguns dos passos de protecção e desprotecção redundantes foram removidos. Estas e outras alterações reduziram o tempo de sintese, melhoraram consideravelmente o rendimento do produto, e também melhoraram a separação de enantiómeros.

Na presente invenção, a utilização de dois grupos protectores t-boc é preferida e resulta numa mistura enantiomérica seco-CBI que se separa bem numa coluna HPLC quiral. Para além disso, a coluna pode ser utilizada com uma mistura solvente com uma polaridade mais elevada, por exemplo contendo 20% de isopropanol, na qual o composto possui boa solubilidade. Estas duas características melhoram muito a capacidade de carga da coluna e consequentemente a eficácia do processo de separação, desta forma reduzindo consideravelmente o tempo de processamento.

Consequentemente, num primeiro aspecto, a presente invenção proporciona um processo para a preparação do seco(-)CBI da fórmula (I):

7 ΕΡ1492766 no qual um composto di-protegido da fórmula (II) é utilizado, no qual R é um grupo protector tal que o grupo amino e grupo hidroxilo são protegidos pelo mesmo composto:

e o composto da fórmula (II) é convertido através de reac-ções de alquilação e de fecho de anel para proporcionar uma mistura racémica representada por um composto da fórmula (III) :

m 0 isómero(-) de racemato (III) pode ser isolado, por exemplo através de cromatografia quiral, e o isómero(-) isolado do composto da fórmula (III) é desprotegido para produzir o composto da fórmula (I).

Em modelos de realização preferidos, R é tert-butiloxicarbonilo e o passo de alquilação emprega 1,3-dicloropropeno.

Em determinados modelos de realização, um composto da fórmula (II) pode ser convenientemente preparado a partir de um material de partida pouco dispendioso e ΕΡ1492766 de fácil obtenção tal como 1,3-di-hidroxinaftaleno através de aminação e protecção dos grupos hidroxilo e amina (FIG. 1) .

Num segundo aspecto, a presente invenção proporciona um processo para a preparação de DCl fazendo reagir o grupo amino de um composto do seco(-)CBI da fórmula (I) para formar uma ligação peptidica, em que o seco(-)CBI pode ser preparado de acordo com o método da presente invenção.

Deste modo, num primeiro modelo de realização deste segundo aspecto da invenção, forma-se uma ligação peptidica fazendo reagir o grupo amino de seco(-)CBI com o grupo carboxilo de, por exemplo, um composto da fórmula (IV) sob condições apropriadas,

<*- m na qual Ri, representa, neste modelo de realização, um grupo alquil- ou aril-tio que forma uma ligação dissul-fureto dentro de um composto da fórmula (IV), tal como, por exemplo, um alquil- ou aril-tiol, ou, mais especificamente, -S-CH3 ou -S-piridilo. Tais dissulfuretos podem ser utilizados para ligar o composto DCl a, por exemplo, um agente dirigido para células através de uma ligação que pode ser clivada no interior da célula alvo. 9 ΕΡ1492766

Este modelo de realização não se limita apenas à síntese do composto DC1 correspondente ao produto da reacção utilizando composto (IV), mas pode também ser prontamente adaptado para produzir uma vasta gama de compostos DCl, incluindo aqueles em que o grupo que é capaz de se ligar a um agente dirigido para células pode ser diferente de um grupo tio ou dissulfureto, tal como, por exemplo, um grupo instável a ácidos, um grupo foto-instável, um grupo instável à peptidase, ou um grupo instável à esterase, dependendo do análogo do composto (IV) que é seleccionado.

Num outro modelo de realização deste aspecto da invenção, não é necessário que o acoplamento de seco(-)CBI ocorra como um passo terminal da síntese. Consequentemente, neste modelo de realização o composto DCl é sintetizado a partir de uma porção bis-indolilo, uma porção contendo dissulfureto, e seco(-)CBI, através da sua união via ligações peptídicas, e a ordem em que estes três componentes de DCl são reunidos não é crítica. Por exemplo, a porção bis-indolilo e seco(-)CBI pode ser ligada antes da união da porção contendo dissulfureto.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS FIG. 1 Ilustra a síntese de seco(-)CBI (5-hi-droxi-3-amino-l-[S]-(clorometil)-1,2-di-hidro-3H-benz(e)índole) de acordo com o método da presente invenção. 10 ΕΡ1492766 FIG. 2 Ilustra uma síntese exemplar (via A) de DC1 de acordo com o método da presente invenção. FIG. 3 Ilustra uma segunda síntese exemplar (via B) de DC1 de acordo com o método da presente invenção.

DESCRIÇÃO DETALHADA A presente invenção proporciona uma síntese melhorada de seco(-)CBI (5-hidroxi-3-amino-l-[S]-(clorome-til)-1,2-di-hidro-3H-benz(e)índole) (7), e também sínteses melhoradas de DC1 e seus compostos derivados que utilizam seco(-)CBI como reagente.

Opcionalmente, a síntese de seco(-)CBI pode utilizar 1,3-di-hidroxinaftaleno como material de partida, o qual é pouco dispendioso e facilmente disponível. A presente invenção também proporciona novos compostos da fórmula (II) :

(B em que R é um grupo protector tal como é aqui definido. O termo "DC1 e seus derivados" tal como é aqui utilizado diz respeito a análogos de CC-1065 possuindo, como sua subunidade de alquilação "A", uma subunidade 11 ΕΡ1492766 ciclopropabenzidole (CBI) na sua forma aberta clorometilo no lugar da unidade ciclopropapirroloindole (CPI) de CC-1065. Compostos DC1 compreendem ainda subunidades "B" e "C" que são unidades índole ou seus análogos. As subunidades "B" e "C" estão unidas através de uma ligação amida, e proporcionam grupos funcionais carboxilo e amino para união via ligações amida à subunidade "A" e uma porção contendo dissulfureto, respectivamente.

Consequentemente as subunidades "B" e "C" não são particularmente limitadas, e podem ser, por exemplo, qualquer um dos compostos das fórmulas (V)-(XII), ou compostos relacionados revelados na Patente U. S. 5 585 499; 5 475 092; e 5 846 545.

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(XI) (ΧΠ>

Consequentemente, as subunidades "B" e "C" de DC1 podem incluir derivados 2-carboxi-indole ou 2-carboxi-benzofurano, ou ambos, tal como é representado pelos compostos das fórmulas (V)-(XII). Tal como pode ser comprovado a partir do CC-1065 natural e a partir das propriedades dos análogos que têm sido publicados (e.g. Warpehoski et ai, 31 J. Med. Chem. 590-603 (1988), Boger et al, 66 J. Org. Chem. 6654-6661 (2001)), as subunidades "B" e "C" podem também transportar diferentes substituintes em diferentes posições nos anéis indole ou benzofurano, correspondendo às posições Ri-R6 das fórmulas (V)-(XII), e conservando potente acti-vidade citotóxica. 13 ΕΡ1492766

Nas fórmulas (V)-(XII), Ri até Rô, os quais podem ser iguais ou diferentes, independentemente representam hidrogénio, alquilo linear C1-C3, metoxi, hidroxilo, amino primário, amino secundário, amino terciário, ou amido. Exemplos de substituintes contendo grupos amino primário são metilamino, etilamino, e isopropilamino. Exemplos de substituintes contendo grupos amino secundário são dime-tilamino, dietilamino, e etil-propilamino. Exemplos de substituintes contendo grupos amino terciário são trime-tilamino, trietilamino, e etil-isopropil-metilamino. Exemplos de grupos amido incluem N-metil-acetamido, N-metil-propionamido, N-acetamido, e N-propionamido.

Nas fórmulas (V)-(XII), R'' representa uma amina ou alquil Ci-C20-amina substituída ou insubstituída que é capaz de formar uma ligação amida um carboxilo da porção de DC1 contendo dissulfureto. 0 modelo de realização preferido de R" é -NH2. A porção contendo dissulfureto que é utilizada na síntese de DC1 é da estrutura HOOC-R7-S-R8, em que R7 representa uma região de ligação que não é particularmente limitada e pode ser, por exemplo, um grupo alquilo C1-C20 substituído ou insubstituído, um espaçador polietileno-glicol, e semelhantes. Desta forma, R7 pode representar metilo, alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo cíclico, arilo ou heterocíclico simples ou substituído ou uma cadeia de polietilenoglicol. Exemplos de alquilos lineares 14 ΕΡ1492766 representados por R7 incluem metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo e hexilo. Exemplos de alquilos ramificados representados por R7 incluem isopropilo, isobutilo, sec.-butilo, tert.-butilo, isopentilo e 1-etil-propilo. Exemplos de alquilos cíclicos representados por R7 incluem ciclo-propilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo. Exemplos de arilos simples representados por R7 incluem fenilo e naftilo. Exemplos de arilos substituídos representados por R7 incluem arilos tais como fenilo ou naftilo substituídos com grupos alquilo, com halogénios, tais como Cl, Br, F, grupos nitro, grupos amino, grupos ácido sulfónico, grupos ácido carboxílico, grupos hidroxi e grupos alcoxi. Heterocíclicos representados por R7 são compostos em que os heteroátomos são seleccionados a partir de 0, N, e S, e exemplos incluem furilo, pirrolilo, piridilo, (e.g., um grupo pirimidina 2-substituído) e tiofeno.

Rs representa qualquer grupo tiol separável apropriado que seja capaz de ser submetido a uma reacção de troca de dissulfureto pelo que DC1 pode ser ligado, por exemplo, a um reagente específico de uma célula tal como um anticorpo ou qualquer um dos agentes de ligação a células revelados na Patente U. S. 5 475 092. Modelos de realização de Rs preferidos incluem -SCH3 e tiopiridilo. Outros exemplos incluem -Salquilo, -Sarilo, glutationa, cisteína e semelhantes. 0 termo "grupo protector" (R) tal como é aqui utilizado representa qualquer grupo que seja capaz de 15 ΕΡ1492766 proteger o grupo amino ou hidroxilo fenólico ao qual esteja ligado de reacção posterior e o qual é posteriormente capaz de remoção subsequente controlada, por exemplo através do tratamento com um ácido ou base. Desta forma, grupos protectores amino estáveis ao tratamento com bases são selectivamente removidos com tratamento com ácidos, e vice versa, e podem ser utilizados para proteger o grupo amino na sintese de seco(-)CBI aqui referida. Exemplos de tais grupos são o FMOC (E. Atherton e R. C. Sheppard em The Peptides, S. Udenfriend, J. Meienhofer, Eds., Academic Press, Orlando, 1987, volume 9, p.l), e diversos carbamatos de sulfoniletilo substituídos exemplificados pelo grupo Nsc (Samukov et al., Tetrahedron Lett, 1994, 35:7821; Verhart e Tesser, Rec. Trav. Chim. Pays-Bas, 1987, 107:621). Grupos protectores amino adicionais incluem mas não se limitam a, grupos protectores carbamato, tais como 2-trimetilsilil-etoxicarbonilo (Teoc), 1-metil-l-(4-bifenilil)etoxicar-bonilo (Bpoc), t-butoxicarbonilo (BOC), aliloxicarbonilo (Aloc) , 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc) , difeniloxicar-bonilo, 2,2,2-tricloroetiloxicarbonilo, di-isopropilme-tiloxicarbonilo, 1-adamantiloxicarbonilo, viniloxicarbo-nilo, metoxibenziloxicarbonilo, nitrobenziloxicarbonilo, ciclo-hexiloxicarbonilo, ciclopentiloxicarbonilo, e benzi-loxicarbonilo (Cbz); grupos protectores amida, tais como formilo, acetilo, tri-haloacetilo, benzoílo e nitrofenil-acetilo; grupos protectores sulfonamida, tais como 2-nitro-benzenossulfonilo; e grupos protectores imina e imida cíclicos, tais como ftalimido e ditiassuccinoílo. Aqueles que são especialistas na técnica estão familiarizados com 16 ΕΡ1492766 tais grupos protectores de amino equivalentes. Como um exemplo, o qual não pretende ser uma limitação, podem ser utilizados grupos protectores de amino tais como grupos 2,6-dinitrobenzenossulfonilo, 4-nitrobenzenossulfonilo ou 2,4-dinitrobenzenossulfonilo. Em alternativa, outro grupo protector de amino pode ser utilizado em vez de um grupo protector sulfonilo.

Na presente invenção, é preferido tert-butoxi-carbonilo (BOC). A formação das ligações amida na síntese de seco(-)CBI e DC1 pode ser catalisada através de uma diversidade de agentes conhecidos dos especialistas na técnica. Por exemplo, carbodiimidas são utilizadas para mediar a formação de uma ligação peptídica entre um carboxilato e uma amina, e espécies de carbodi-imida solúveis e insolúveis em água podem ser seleccionados conforme apropriado. É preferido o EDC (hidrocloreto de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida) . Outros exemplos de reagentes de acoplamento amida úteis na presente invenção incluem EDC em conjunto com sulfo-NHS, CMC(1-ciclo-hexil-3-(2-morfolinoetil)carbodiimida), DCC (diciclo-hexilcarbodiiimida), DIC (diisopropilcarbodiimida), reagente K de Woodward, N,N'-carbonildiimidazole, PyBOP (hexa-fluorofosfato de benzotriazole-l-il-oxi-tris-pirrolidi-nofosfónio), TBTU (tetrafluoroborato de 2-(ÍH-Benzotriazol- 1- il)-1,1,3,3-tetrametilurónio) , HBTU (hexafluorofosfato de

2- (lH-Benzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio), BOP 17 ΕΡ1492766 (hexafluorofosfato de Benzotriazole-l-il-oxi-tris-(dimetil-amino)-fosfónio), PyBrOP (hexafluorofosfato de Bromo-tris-pirrolidino-fosfónio) , e semelhantes. 0 isolamento do (-)enantiómero do seco(-)CBI desprotegido precursor, um composto da fórmula (III), é Um passo importante na sintese de seco(-)CBI. 0 isolamento do (-)enantiómero pode ser realizado através de qualquer método conhecido daqueles que são especialistas da técnica para a separação de enantiómeros. Por exemplo, é preferida a utilização de uma matriz quiral e cromatografia liquida. 0 mais preferível, é a utilização de HPLC sobre uma coluna quiral. É um benefício da presente invenção que a separação do (-)enantiómero seja realizada com o precursor di-protegido em vez ser realizada com o seco (-)CBI (7), tal como foi acima descrito. Matrizes quirais apropriadas incluem, por exemplo, coluna de Chiralpak AD (Diacel), Chiralcel OD, Chiralcel OJ, e semelhantes. 0 termo "condições apropriadas", tal como é aqui aplicado a aspectos específicos da síntese de seco(-)CBI e DC1, tais como em referência à alquilação das reacções de fecho do anel, representa quer os métodos específicos revelados nos Exemplos aqui referidos como aqueles métodos equivalentes, adequadamente adaptados à espécie de DC1 específica que não é para ser sintetizada, conhecidos dos especialistas da técnica. A síntese de DC1 requer o acoplamento, via 18 ΕΡ1492766 ligações amida, de seco(-)CBI, uma subunidade "B" e "C", e uma porção contendo dissulfureto. A ordem pela qual estes componentes são acoplados não é crítica e a síntese pode ser facilmente adaptada de tal forma que os acoplamentos ocorrem seja qual for a ordem. Desta forma, podem ser primeiro acoplados seco(-)CBI e as subunidades "B" e "C" e em seguida pode ser ligada a porção contendo dissulfureto, ou a porção contendo dissulfureto e as subunidades "B" e "C" podem ser primeiro acopladas e em seguida pode ser ligado o seco(-)CBI. Ambos os processos são ilustrados nos Exemplos aqui referidos.

Encontra-se também no âmbito da presente invenção o facto de as subunidades "B" e "C" não necessitarem de ser primeiro acopladas através de uma ligação amida na síntese de DC1 de acordo com a presente invenção. Desta forma, encontra-se dentro do âmbito da presente invenção o facto de, por exemplo, seco(-)CBI e a subunidade "B" serem acoplados, em seguida seram acoplados a subunidade "C" e a porção contendo dissulfureto, e em seguida DC1 ser sintetizado através do acoplamento através das subunidades "B" e "C". Uma vez que DC1 compreende uma sequência linear de 4 partes, será evidente que muitas permutas da síntese de DC1 de acordo com a presente invenção são facilmente atingíveis.

EXEMPLOS A invenção será agora ilustrada por referência a exemplos não limitativos. A menos que de outro modo 19 ΕΡ1492766 estabelecido, todas as percentagens, proporções, partes, e semelhantes, são em peso. Um sumário da síntese exemplar (FIGS. 1-3) é seguido de uma descrição detalhada de cada passo. A síntese melhorada de CBI aqui exemplificada (FIG. 1) começa com 1,3-di-hidroxinaftaleno (1). Aminação através de tratamento com amoníaco a 125 a 140°C num recipiente de pressão proporcionou 4-hidroxi-2-naftilamina 2, que foi depois convertida no composto di-t-boc 3 através de tratamento com dicarbonato de di-tert-butilo. Iodação com I\7-iodossuccinimida prosseguiu com 86% de rendimento para produzir 4, que foi alquilado para dar o composto 5 a 93% de rendimento. 0 fecho do anel de 5 utilizando hidreto de tri-butilestanho na presença de 2,2 '-azobisisobu-tironitrilo (AIBN) prosseguiu suavemente com 94% de rendimento para dar o di-t-boc-seco-CBI racémico 6 com 94% de rendimento. Separação da mistura racémica é facilmente realizada utilizando uma coluna de HPLC quiral eluindo com isopropanol a 20% em hexano, em que os tempos de retenção dos dois isómeros diferem em 17 minutos, para dar o desejado isómero di-t-boc-seco(-)CBI 6b. Desprotecção com ácido clorídrico proporciona seco(-)CBI, 7.

Duas vias sintéticas independentes para a conversão de seco-CBI 7 em DCl-SMe 16a são exemplificados e são designados Via A (FIG. 2) e Via B (FIG. 3).

Na Via A (FIG. 2), foi sintetizada a porção bis- 20 ΕΡ1492766 indolilo suportando um substituinte contendo dissulfureto, e em seguida acoplada na passo final com seco-CBI. Na Via B, a porção bis-indolilo foi ligada a seco-CBI, e foi introduzido o substituinte contendo dissulfureto no passo final (FIG. 3).

Na Via A, 5-nitroindole-2-carboxilato de etilo (8) , o qual se encontra disponível comercialmente, foi hidrolisado até ao ácido 9, o qual foi em seguida convertido no éster de tert-butilo 10. Redução catalítica de 10 com hidrogénio proporcionou o aminoéster 11 com rendimento quantitativo. Acoplamento de 11 com ácido 5-nitroindole-2-carboxílico (9) na presença de tetraflouroborato de 0-(benzotriazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametilurónio (TBTU) proporcionou o éster de nitro-bis-indolilo 12 com 89% de rendimento. Redução do grupo nitro através de hidrogenação catalítica, seguida de acoplamento do composto amino resultante 13 com ácido 3-(metilditio)propanóico proporcionou 14a. O grupo éster em 14a foi hidrolisado com ácido trifluoroacético para dar ácido carboxílico 15a. Acoplamento de 15a com seco-CBI, na presença de EDC proporcionou DCl-SMe (16a). Redução de DCISMe com ditiotreitol proporcionou DCl (17).

Na Via B, ácido 5-nitroindole-2-carboxílico 9 foi primeiro condensado com 5-aminoindole-2-carboxilato de etilo 18 para proporcionar o éster de bis-indolilo 19. Hidrólise alcalina de 19, seguida de acoplamento com seco-CBI 21 ΕΡ1492766 proporcionou o composto bis-indolil-seco-CBI 21. Redução do grupo nitro em 21 com hidrogénio sobre Pd/C proporcionou o composto amino-bis-indolil-seco-CBI 22. Acoplamento de 22 com ácido 3-(metilditio)propanóico proporcionou DCl-SMe 16a.

Materiais e Métodos

Pontos de fusão foram medidos utilizando um aparelho Electrothermal e não foram corrigidos. Espectros de RMN foram registados num espectrómetro Bruker AVANCE400 (400 MHz) . Desvios químicos são referidos em ppm relativamente a TMS como padrão interno. Espectros de Massa foram obtidos utilizando um sistema Bruker Esquire 3000. Espectros ultravioleta foram registados num espectrofotómetro Hitachi U1200. HPLC analítica foi realizada utilizando um sistema Beckman Coulter GOLD 125 equipado com um detector de comprimento de onda variável GOLD 168 de sistema de Beckman Coulter e uma coluna Chiralcel OD 4, 6 x 250 mm. HPLC preparativa foi realizada num sistema R & S Technology Zonator equipado com um detector de UV Hitachi, utilizando uma coluna Chiralcel OD 7,5 x 50 cm de auto-embalada. Cromatografia de camada fina foi realizada sobre placas de TLC de gel de sílica Analtech GF. Gel de sílica para cromatografia de coluna "flash" era proveniente de Baker. Todos os solventes utilizados eram da qualidade reagente ou da qualidade HPLC. 22 ΕΡ1492766

Exemplos 1-5: Síntese de seco(-)CBI(5-hidroxi-3-amino-1-[S]-(clorometil)-1,2-di-hidro-3H-benz(e)índole) de acordo com o esquema da Figura 1.

Exemplo 1: Preparação de N-(tert-butiloxicarbo- nil)-4-0-(tert-butiloxicarbonil)-2-naftilamina (3)

Uma solução de 1, 3-di-hidroxinaftaleno (1, 50 g, 0,312 mol) em amoníaco líquido (200 mL) a -78°C foi selada numa bomba de aço de 1 L contendo um revestimento de vidro. A mistura de reacção foi aquecida até 135±10°C e 1300 psi durante 14 h com agitação vigorosa. O recipiente foi deixado a arrefecer até 60°C, e o amoníaco foi lentamente libertado. Os vestígios remanescentes de amoníaco foram removidos através de co-evaporação com THF (2 x 150 mL) sob uma corrente de árgon a 60°C. O intermediário 4-hidroxi-2-naftilamina (2) não foi isolado mas foi imediatamente convertido no composto protegido com di-tert-butiloxi-carbonilo 3. Uma solução de dicarbonato de di-tert-butilo (175 g, 0,801 mol) em THF seco (300 mL) e N,N-di-isopro-piletilamina (140 mL, 0,803 mol) foram sequencialmente adicionados à bomba. A bomba foi novamente selada, e os conteúdos foram aquecidos a 100°C com agitação durante 4 h. A bomba foi arrefecida até à temperatura ambiente, aberta, e o resíduo partilhado entre NaCl aquoso saturado (800 mL) e acetato de etilo (500 mL). A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (200 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram secas (sulfato de magnésio), filtradas, e concentradas sob pressão reduzida. Cromatografia sobre gel 23 ΕΡ1492766 de sílica (acetato de etilo/hexano 1:8 até 1:4) e recris-talização com acetato de etilo/etanol/hexano proporcionou 77,41 g puros (69%) do composto em epígrafe (3). 3H RMN (CDC13, 400 MHz) 8,14 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,66 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,43 (dd, 1H, J = 6,8, 8,2 Hz), 7,35 (dd, 1H, J = 6,8, 8,2 Hz), 7,22 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,15 (lg, 1H, NH), 6,69 (s, 1H) , 1,59 (s, 9H) , 1,37 (s, 9H) ; 13C RMN (CDC13) 153,71, 152,9, 136,11, 135,20, 128,12, 128,01, 126,81, 126,03, 123,61, 107,94, 102,95, 82,98, 82,10, 28,93, 27,69; EM m/z 382,52 (M+Na)+.

Exemplo 2: Preparação de N-(tert-butiloxicarbo-nil) -4-0-(tert-butiloxicarbonil)-l-iodo-2-naftilamina (4)

Uma solução de composto 3 (24,50 g, 68,24 mmol) e N-iodossuccinimida (NIS), (17,70 g, 74,73 mmol) em 250 mL de THF/metanol (1:1) foi agitada a -40°C sob árgon no escuro durante 5 min. Foi em seguida adicionado ácido tolueno-sulfónico (0,86 g, 4,52 mmol), e a mistura de reacção foi agitada sob árgon no escuro a -40°C durante 2 h, e em seguida à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi diluída com éter (800 mL) , lavada com NaHCCg saturado aquoso e NaCl saturado aquoso, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada in vácuo. Cromatografia "flash" sobre gel de sílica (acetato de etilo/hexano 1:10) foi seguida do isolamento do produto desejado. Cristalização a partir de etanol/acetato de etilo/hexano proporcionou 28,46 g (86%) do composto em epígrafe 4. Rf = 0,48 (acetato de etilo a 10%/hexano) . 3H RMN (CDCI3, 400 24 ΕΡ1492766 ΜΗζ) 8,27 (d, 1Η, J = 8,0 Hz), 7,98 (dd, 1H, J = 1,5, 8,1 Hz), 7,83 (s, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,18 (lg, 0,8H, NH), 1,62 (m, 18H); EM m/z 508,36 (M+Na)+.

Exemplo 3: Preparação de 2-[N- (tert-butiloxi-carbonil)-N- (3-cloro-2-propen-l-il)amino]-4-0-(tert-butiloxicarboniloxi)-1-iodonaftaleno (5) A uma solução de composto 4 (940 mg, 1,86 mmol) em 20 mL de DMF seco foi adicionado NaH (60% em óleo mineral, 150 mg, 3,75 mmol) sob uma atmosfera de árgon. Depois da agitação da mistura a 0°C durante 30 min, foi adicionado E,Z-l,3-dicloropropeno (1,50 mL, 14,57 mmol). A mistura de reacção foi agitada a 0°C sob árgon durante 2 h, depois neutralizada com NaH2P04 1,0 M, e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada in vacuo. Cromatografia "flash" sobre gel de sílica (acetato de etilo/hexano 1:9) proporcionou 1,01 g (93%) do composto desejado 5. Rfz = 0,37, RfE = 0,32 (acetato de etilo/hexano 1:8). (cloretos de vinilo e di-t-boc rotâmeros E:Z) /h RMN (CDCI3, 400 MHz) 8,26 (d, 2H, J = 7,7 Hz), 7,96 (m, 2H), 7,59 (lg, 4H), 7,20 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,17-6,07 (m, 4H), 4,64 (dd, 1H, J= 6,2, 15,2 Hz), 4,53 (dd, 1H, J = 6,2, 14,7 Hz), 4,31 (dd, 1H, J = 6,0, 15,0 Hz), 3,84 (dd, 1H, J = 7,5, 15,0 Hz), 1,58 (S, 9H); 1,33 (s, 9H) ; 13C RMN (CDC13) 153, 78, 151, 08, 150,98, 133,31, 133,29, 128,66, 128,61, 127,50, 127,41, 126,41, 121,68, 119,03, 84,22, 84,11, 80,99, 77,20, 28,20, 27,66; EM m/z 582,8 (M+Na)+. 25 ΕΡ1492766

Exemplo 4: Preparação de 5-(O-tert-butiloxi-carbonil)oxi-3-[N-(tert-butiloxicarbonil)amino-1-(clorome-til)-1,2-di-hidro-3H-benz(e)índole (6) A uma solução do composto 5 (1,36 g, 2,43 mmol) em benzeno seco (100 mL) foram adicionados hidreto de tri-n-butilestanho (0,70 mL, 2,52 mmol) e 2,2 '-azobis(isobuti-ronitrilo) (AIBN) (30 mg, 0,18 mmol). A mistura foi agitada sob árgon à temperatura ambiente durante 30 min e em seguida submetida a refluxo a 80°C durante 2 h. A mistura de reacção foi arrefecida, e o solvente foi removido in vacuo. Cromatografia "flash" sobre gel de sílica (acetato de etilo/hexano 1:9) proporcionou 1,01 g (94%) do composto desejado 6. Rf = 0,34 (acetato de etilo/hexano 1:9); 1H RMN (CDC13, 400 MHz) 8,12 (lg, 1H) , 7,91 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,69 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,50 (dt, 1H, J = 1,0, 6,9, 7,0 Hz), 7,37 (dt, 1H, J = 0,9, 6,9, 6,9 Hz), 4,27 (lg, 1H) , 4,12 (t, 1H, J = 9,0 + 10,0 Hz), 3,99 (m, 1H) , 3,90 (dd, 1H, J = 2,4, 11,0 Hz), 3,45 (t, 1H, J = 10,8 + 10,8 Hz), 1,58 (S, 18H); 13C RMN (CDCI3) 152,27, 151, 84, 147, 99, 130,17, 127,62, 124,33, 122,46, 122,22, 108,95, 83,78, 52, 80, 46, 13, 28,36, 27,79; EM m/z 456, 9 (M+Na)\

Resolução de (6): A mistura enantiomérica do composto 6 (1,0 g em 20 mL de acetato de etilo) foi resolvida numa Coluna de HPLC preparativa (20 mm, 7,5 x 50 cm, carregada com Diacel Chiralcel OD) utilizando eluente de isopropanol a 15%-hexano (180 mL/min). Os dois enantiómeros 26 ΕΡ1492766 eluídos com tempos de retenção de 18,5 minutos [6a enan-tiómero ( + ) ] e 35,8 minutos [6b enantiómero (IS) natural (-)], 6b (-)-(lS) : [a] 25 = -49, 6° (c = 5,25 CHC13) .

Exemplo 5: Preparação de 5-hidroxi-3-amino-l-[S]-(clorometil)-1,2-di-hidro-3H-benz(e)índole (7) A uma solução de 6b (100 mg, 0,25 mmol) em 5 mL de acetato de etilo, foi adicionado HC1 conc. (0,2 mL) e trietilsilano (0,2 mL). Depois da agitação durante 3 h sob árgon, a mistura foi diluída com 10 mL de 1:1 diclorome-tano/tolueno e evaporada até secura. O sólido seco foi co-evaporado três vezes com diclorometano/tolueno e em seguida imediatamente utilizado para acoplamento a compostos di-indole sem mais purificação adicional, (~90% puro), EM m/z 234,78 (M+H)+.

Exemplos 6-15: Síntese exemplar de DC1 de acordo com o esquema da Via A (Figura 2)

Exemplo 6: Preparação de 5-Nitroindole-2-carbo-xilato de tert-butilo (10) A uma solução agitada de etil-5-nitroindole-2-carboxilato (8) (25,0 g, 106,8 mmol), em 500 mL de THF- metanol (1:1, v/v) à temperatura ambiente, foi adicionada uma solução de NaOH (40 g, 1,0 mmol) em 300 mL de água. A solução vermelho-acastanhado escuro resultante foi agitada durante 3 h, em seguida temperada através de acidificação 27 ΕΡ1492766 até pH 1 com HCl diluído. O produto precipitado foi recolhido através de filtração sob vácuo, e o produto dissolvido remanescente foi extraído com THF/acetato de etilo (1:2, v/v, 2 x 400 mL) . O precipitado foi dissolvido em THF e esta solução foi combinada com as camadas orgânicas das extracções, supra. Secagem sobre sulfato de magnésio, filtração, concentração in vacuo, e cristalização do resíduo a partir de THF/acetato de etilo/hexano proporcionou 21,1 g (96% de rendimento) de ácido 5-nitroindole-2-carboxílico (9). JH RMN (DMSO), 11,50 (s, 1H), 7,20 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,85 (s, 1H), 6,70 (m, 2H). A uma solução agitada de 9 (12,8 g, 61,2 mmol) em THF seco (200 mL) sob árgon foi adicionado cloreto de oxalilo (12,0 mL, 137,5 mmol) seguido de DMF (0,1 mL), o que causou um vigoroso desenvolvimento de gás. Após 40 min, a mistura de reacçâo foi evaporada até secura. O sólido resultante foi re-dissolvido em THF (150 mL), arrefecido até ~30°C, e agitado sob árgon. Uma solução de t-butóxido de potássio (1,0 M em THF, 140 mL, 140 mmol) foi em seguida adicionada gota a gota ao longo de 45 min, e a agitação foi continuada durante mais 45 min. A reacção foi temperada com 600 mL de água, neutralizada com algumas gotas de uma solução aquosa a 10% de H3P04 e extraída com acetato de etilo (3 x 400 mL) . Os extractos orgânicos foram lavados com NaHC03 aquoso saturado, água, e em seguida secos sobre sulfato de magnésio, filtrados, concentrados e cristalizados com etanol/hexano para proporcionar o composto 10 (9,62 g, 85% de rendimento). Rf = 0,35 (Acetato de 28 ΕΡ1492766 etilo/Hexano 1:5); 1H RMN (CDCI3), 11,63 (s, 1H), 8,66 (dd, 1H, J = 0,5, 1,3 Hz), 8,20 (dd, 1H, J = 0,5, 9,0 Hz), 7,48 (dd, 1H, J = 0,5, 9,1 Hz), 7,28 (dd, 1H, J = 0,9, 11,1 Hz),

1,63 (s, 9H); 13C RMN 160,39, 142,12, 138,11, 132, 10, 126,78, 120,22, 119,83, 111,98, 109,82, 82,91, 28,26; EM m/z 285, 43 (M+Na)+.

Exemplo 7: Preparação de 5-aminoindole-2-carboxi-lato de tert-butilo (11)

Uma garrafa de hidrogenação de Parr de 500 mL foi carregada com composto 10 (5,80 g, 22,14 mmol), Pd a 10%/C (0,6 g) e metanol/THF (150 mL, 1:4 v/v), e purgada com hidrogénio. A mistura de reacçâo foi chocalhada com 50 psi de H2 ao longo da noite. O catalisador foi removido através de filtração e o solvente foi evaporado para dar 4,98 g (97% de rendimento) do composto em epígrafe 11 como um sólido castanho. XH RMN (DMSO), 11,42 (s, 1H), 7,18 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,83 (s, 1H) , 6,71 (s, 1H) , 6,67 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 1,62 (s, 9H). Este produto é instável e consequentemente foi imediatamente utilizado na passo seguinte.

Exemplo 8 : Preparação de 5-(5'-nitroindol-2'-il-carbonilamino)indole-2-carboxilato de tert-butilo (12) A uma mistura de compostos 9 (4,70 g, 22,81 mmol) e 11 (5,20 g, 22,41 mmol) em DMF (200 mL) foram adicio nados, sob árgon, tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il) -Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilurónio (TBTU, 10,5 g, 32,70 mmol) e 29 ΕΡ1492766

di-isopropiletilamina (DIPEA, 8,0 mL, 45,83 mmol). A mistura de reacção foi agitada ao longo da noite. A mistura foi concentrada e em seguida suspensa em acetato de etilo e NaHC03 aquoso (saturado). O composto sólido foi filtrado, lavado com água, e em seguida re-suspenso com NaH2PC>4 aquoso 1 M, pH 3,0, filtrado, e lavado novamente com água. O sólido foi em seguida seco sob vácuo para produzir 12 (8,40 g, 89% de rendimento). Rf = 0,31 (THF/hexano 1:2); 1H RMN (DMSO), 12, 43 (s. , 1H) , 11,69 (s, 1H), 10, 41 (s, 1H), 8,77 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 8,13 (dd, 2H, J = 2 ,3, 9,0 Hz) , 7, 64 (t, 2H, J = 9,2 Hz), 7,47 (d -, 1H, J = 8, ,9 Hz) , 7,08 (s, 1H) , 1, 59 (s, 9H); 13C RMN (DMSO), 161, 48 , 159 ,53, 142, 19, 140, 38, 136, 30, 135,27, 132,28, 130, 30 , 127 ,43, 127, 25, 120, 57, 120, 12, 114,08, 113,74, 108, 22 , 106 , 64, 81,74, 28,84; EM m/z 443,85 (M+Na)+.

Exemplo 9 : Preparação de 5-(5'-aminoindol-2'-il-carbonilamino)indole-2-carboxilato de tert-butilo (13)

Uma garrafa de hidrogenação de Parr de 250 mL foi carregada com composto 12 (2,40 g, 5,71 mmol), Pd a 10%/C (0,3 g) , e DMA (50 mL) , e purgada com hidrogénio. A mistura de reacção foi chocalhada com 40 psi de H2 ao longo da noite. O catalisador foi removido através filtração e o solvente foi evaporado para dar 2,05 g (92% de rendimento) do composto em epígrafe 13 como um sólido castanho. 3Η RMN (DMSO), 11,75, (s, 1H), 11,67 (s, 1H), 10,17 (s, 1H), 8,10 (d, 1H, J = 1,2 Hz), 7,59 (t, 2H, J = 8,8 Hz), 7,45 (m, 1H) , 7,35 (m, 1H) , 7,17 (dd, 1H, J = 0,8, 8,0 Hz), 7,06 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 1,57 (s, 9H); EM m/z 390,72 (M+Na)\ Este 30 ΕΡ1492766 produto é instável e consequentemente foi utilizado imediatamente na passo seguinte.

Exemplo 10: Preparação de 5-[5'- (3''-metilditio-propionil)indol-2'-il-carbonilamino]indole-2-carboxilato de tert-butilo (14a)

A uma solução de 13 (2,0 g, 5,12 mmol) ) em DMA (30 mL) foi adicionado ácido 3-(metilditio)propiónico (0,90 g, 5,92 mmol), EDC (3,0 g, 15,33 mmol) e DIPEA (0,90 mL, 5,12 mmol) . A mistura de reacção foi agitada ao longo da noite sob árgon, e em seguida diluida com 70 mL de NaH2P04 1,0 M, pH 6,0 e extraída com THF/acetato de etilo (1:1, 4 x 70 mL) . As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado através de cromatografia sobre gel de sílica (1:3 acetona/tolueno) e cristalizado a partir de THF/hexano para dar o composto 14a (2,30 g, 86% de rendimento). Pf = 279-283°C (dec), Rf = 0,31 (THF/tolueno 1:3); λΕ RMN (CD3COCD3) , 10, ,75 (d, 2H, J = 3, 07 Hz), 9 ,50 (s, 1H), 9,14 (S, 1H) , 8,20 (d, 1H, J = 2,0 Hz) , 8,14 (d, 1H, J = 1,8 Hz) , 7,62 (dd, 1H, J = 2, 0, 8,9 Hz) , 7,46 (dd, 2H, J = 0,7, 8,1 Hz) , 7,34 (dd, 1H, J = 2,0, 10 ,8 Hz), 7,26 (d, 1H, J = 1,5 Hz) , 7,07 (dd, 1H, J = 0,9, 2, 1 Hz), 3,05 (t, 2H, J = 7,1 Hz) , 2,76 (t, 2H, J =7,0 Hz), 2,42 (s, 3H), 1,57 (s, 9H) ; 13C RMN 169,42, 161,58, 1 60,32, 135,31, 134 ,76, 133 ,56, : 133,4 0, 133,12, 130,86 f 128,72, 128,27, 120 ,27, 118 ,75, : 113,69, 113,09, 113,02 f 112,69, 108,27, 103 ,58, 81, 66, 37 ,28, 34,00, 28,41; EM m/z 547,88 (M+Na)+. 31 ΕΡ1492766

Exemplo 11: Preparação de ácido 5-[5'-(3''-metil-ditiopropionil)indol-2'-il-carbonilamino]indole-2-carbo- xílico (15a)

Uma mistura do composto 14a (300 mg, 0,57 mol) e Et3SiH(l,5 mL) em diclorometano (30 mL) foi agitada sob árgon. Ácido trifluoroacético (7,0 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 3 h, e depois diluida com tolueno (25 mL) . A mistura foi evaporada até secura e cristalizada com THF/tolueno/hexano para produzir o composto 15a (245 mg, 92% de rendimento). 3H RMN (DMSO) ,

11, 71 (s, 1H) , 11,61 (s, 1H), 10,10 (S, 1H), 9, 92 (s, 1H), T3 τ—1 τ—1 OO 1H, J = 1 ,9 Hz), 8,02 (d, J = 1,7 Hz), 7,55 (dd, 1H, 2,0, 11,0 Hz), 7,42 (d, 1H r J = 8,8 Hz), 7 ,39 (d, 1H, J = 8 ,8 Hz) , 7,34 (d, 1H, J = 2, 0 Hz) , 7,31 (dd, 1H, J = 2,0, OO OO Hz) , 7, 08 (d, 1H, J = 1, 3 Hz) , , 3,06 (t, 2H, J = 7,0 Hz) , 2,75 (t, 2H, J = 7,0 Hz) , 2,45 (s, 3H) ; 13C RMN

(DMSO), 168,70, 162,79, 159,47, 134,37, 133, 56, 132,44, 131,98, 131,64, 126, 96, 126,75, 119,62, 117, 74, 113,04, 112,46, 112,35, 111,44, 107,36, 103,37, 36,03 , 33,01; EM 490,81 (M+Na)+.

Exemplo 12: Preparação de (S)-N-[2-{(1-cloro-metil) -1,2-di-hidro-5-hidroxi-3tf-benz (e) indol-3-il}carbo-nil] -l-H-indol-5-il] -5- [3-metilditio-l-oxopropil) amino] — li?— indole-2-carboxamida (16a) (DCISMe)

A uma solução de compostos 7 (55 mg, 0,20 mmol) e 15a (100 mg, 0,21 mmol) em DMA (7,0 mL) foi adicionado EDC 32 ΕΡ1492766 (120 mg, 0,62 mmol) sob árgon. A mistura de reacção foi agitada ao longo da noite, e em seguida foram adicionadas algumas gotas de ácido acético a 50%, e a mistura foi evaporada até secura. O residuo foi purificado através de cromatografia de coluna sobre gel de sílica (acetona a 20% a 30% em tolueno) e cristalizado com THF/tolueno/hexano para produzir DCISMe (16a) (108 mg, 79% de rendimento). Rf = 0, 40 (acetona/tolueno 3:7); 3H RMN (CD3COCD3) 1 .0, 91 (s, 1H) , 10 ,88 (s, 1H), 9,64 (s, 1H) , 9,56 (s, 1H), 9,27 (S, 1H) , 8, T—1 II V) I—1 LO oo 9 Hz) , 8 ,25 (d, 1H, J = 8,0 Hz) , Γ- τ—1 oo (d ., 1H, J = 1,9 Hz) , 8,07 ( s, 1H), 7,88 (d, 1H, J = 8,3 Hz) , 7, 64 (dd, 1H, J = 2,0 , 8, .1 Hz), 7,58-7,50 (m, 3H) , 7,38 -7, 35 (m, 2H), 7,31 (d, 1H , J =1,7 Hz), 7,26 (d, 1H, J = 1, 7 Hz), 4,86 (dd, 1H, J = 8 ,7, 11,0 Hz ;), 4,80 (dd, 1H, J = 2, 3, 10,9 Hz) , 4,30 (m, 1H) , 4, 07 (dd, 1H, J = : 3,1, 11,0 Hz) , 3, 83 (dd, 1H, J = 8, 4, 11,2 Hz), 3, 09 (t, 2H, , J = 7,1 Hz) , 2, ,83 (t, 2H, J = 7,1 Hz) , 2,45 (s, 3H); 13c RMN 169, 56, 161,10, 160,43, 155, 13, 143,50 , 134,78, 134 ,46, 133, 55, 133,34, 133,03, 132, 57, 131,21 , 128,80, 128 ,69, 128, 21, 124,22, 124,02, 123, 53, 123,44 , 120,16, 118 ,79, 116, 45, 113,91, 113,02, 112, 95, 112,73 , 106,78, 103 ,72, 101, 63, 56,01, 47,73, 43 ,10, 37, 25, 34, 01, 23,00 ; EM m/ z 706,71 (M+Na)+, 708,58, 707,71, 722,34 (M+K)+, 724,42.

Exemplo 13: Preparação de 5-[5'- (3''- (2-piridil-ditio)propionil)indol-2'-il-carbonilamino]indole-2-carboxilato de tert-butilo (14b) A uma solução de composto 13 (1,00 g, 2,56 mmol) em DMA (15 mL) foi adicionado ácido 3-(2-piridilditio)pro- 33 ΕΡ1492766 piónico (0,475 g, 2,21 mmol), EDC (1,26 g, 6,56 mmol), e DIPEA (0,20 mL) . Depois de agitação sob árgon ao longo da noite, a mistura foi diluída com 70 mL de NaH2P04 1,0 M, pH 3,0 e extraída com THF/acetato de etilo (1:1, 4 x 60 mL) . As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas, evaporadas, e purificadas através cromatografia sobre gel de sílica (THF/diclorometano 1:5). O produto foi isolado e recristalizado com THF/acetato de etilo/hexano para produzir 1,13 g (87% de rendimento) do composto em epígrafe 14b. Pf = 285-290 (dec), Rf = 0,31 (THF/tolueno 1:5); 3H RMN (CD3COCD3) , 10,78 (d, 2H, J = 14,3

Hz) , 9,52 (s, 1H) , 9,23 (s , 1H), LO co (dd, 1H, J = 0,9, CO Hz) , 8,23 (d , 1H, , J = i,s > hz: ) , 8,17 (d, 1H, J = 1,8 Hz) , 7,84 (dd, 1H, J = 1,0, 8,1 Hz) , 7 ,78 (m, 1H), ' 7,64 (dd, 1H, J = 2,1, 8, 9 Hz) , 7,49 (t, 2H, J = 8,8 ! Hz) , 7,: 35 (dd, 1H, J = 2, 0, 8 ,9 Hz), 7,29 1 :d, 1H, J = 1, 5 Hz ), 7 ,25 (m, 1H) , 7,10 (dd, 1H, , J = 0,8, 2, 1 Hz ), 3,21 (t, 2H, J = 7,0 Hz) , 2,85 (t, 2H, : = = 7,0 Hz) , 1 , 60 (s, 9H) ; 13C RMN 169 ,15, 161, 57, 160, 86, 150,44 r 138, 22, 135 ,30, 134 ,78, 133 ,58, 133, 13, 130, 86, 128,27 1 125, 75, 121 ,73, 120 ,26, 120 ,05, 118, 75, 113, 68, 113,09 r 113, 03, 112 ,70, 108 ,26, 103 ,56, 81,64, 36,74, 35,25, 28,41; EM m/z 610,48 (M+Na)\ 626,56 (M+K) +.

Exemplo 14: Preparação de ácido 5-[5'-(3''- (2-piridilditio)propionil)indol-2'-il-carbonilamino]indole-2-carboxílico (15b)

Uma mistura de composto 14b (115 mg, 0,195 mol) e Et3SiH (0,30 mL) em diclorometano (4,0 mL) foi agitada sob 34 ΕΡ1492766 árgon. À mistura leitosa foi adicionado ácido trifluoro-acético (1,0 mL), e a mistura tornou-se transparente. Depois da agitação durante 2 hrs, a mistura de reacção foi diluida com 5 mL de tolueno. A mistura foi evaporada até secura e cristalizada com THF/tolueno/hexano para produzir 93 mg (90% de rendimento) de composto 15b. 3H RMN (DMSO) , 12,92 (lg, 0,7 H), 11,74 (s, 1H), 11,63 (s, 1H), 10,11 (s, 1H) , 9, 92 (s, 1H) , 8, 47 (dd, 1H, J = 0 ,9, 4,6 Hz), 8,13 (s, 1H) , 8, 02 (s, , 1H) , 7, 81 (m, 2H), 7,56 (d, 1H, J = 9, 0 Hz) , 7,41 (m, 2H) , 7, 34 (s, 1H) , 7, 28-7,21 ( m, 2H) , 7,10 (s, 1H) , 3, 15 (t , 2H, r J = 7 ,0 H2 0 , 2,77 (t, 2H, J = 6, 9 Hz) ; 13C RMN 168, 34, 162, 70, 159 ,42 , 159 ,16, 149,61, 137 ,80, 134, 34, 133, 53, 132, 41, 131 ,88 , 131 ,63, 128,96, 126 ,90, 126, 69, 121, 18, 119, 60, 119 ,19 , 112 ,98, 112,42, 112 ,31, 111, 42, 107, 47, 35, 53, 33, 97; EM m/ z 532,31, (M+H) +, 553,41, 554,52 (M+Na)+;

Exemplo 15: Preparação de (S)-N- [2-{(1-clorome-til) -1,2-di-hidro-5-hidroxi-3fí-benz (e) indol-3-il) carbonil] -lH-indol-5-il] -5- [ (3-piridilditio-l-oxopropil) -amino] -1H-indole-2-carboxamida, DCISPy (16b) A uma solução de compostos 7 (25 mg, 0,094 mmol) e 15b (50 mg, 0, 094 mmol) em 10 mL de DMA foi adicionado EDC (120 mg, 0,62 mmol) sob árgon. Depois de agitação ao longo da noite, foram adicionadas algumas gotas de ácido acético a 50% e tolueno (5 mL), a mistura foi evaporada até secura, e o resíduo foi purificado através de cromatografia 35 ΕΡ1492766 de sílica gel (acetona a 30% em tolueno) . O produto foi isolado e recristalizado a partir de THF/tolueno/hexano para proporcionar 48 mg (68% de rendimento) do composto em epígrafe 16b. EM m/z 769,43 (M+Na)+, 771,51, 785,62 (M+K)+.

Exemplos 16-20: Síntese exemplar de DC1 de acordo com o esquema da Via B (Figura 3)

Exemplo 16: Preparação de 5-aminoindole-2-carbo-xilato de etilo (18)

Uma garrafa de hidrogenação de Parr de 500 mL foi carregada com 5-nitroindole-2-carboxilato de etilo (8) (5,0 g, 21,36 mmol) , Pd a 10%/C (0,3 g) , metanol/THF (150 mL, 1:4 v/v), e foi purgada com hidrogénio. A mistura de reacção foi chocalhada com 40 psi de H2 ao longo da noite. O catalisador foi removido através de filtração e o solvente foi evaporado para dar 4,10 g (94% de rendimento) do composto em epígrafe 18 como um sólido castanho. 1H RMN (CDC13) , 8,77 (s, 1H), 7,26 (s, 1H) , 7,23 (t, 1H, J = 0,8

Hz), 7,21 (d, 1H, J = 0,7 Hz), 7,03 (dd, 1H, J = 0,7, 1,5

Hz), 6,93 (dd, 1H, J = 0,7, 1,6 Hz), 6,80 (dd, 1H, J = 2,2, 8,6 Hz), 4,38 (dd, 2H, J = 7,2, 14,3 Hz), 1,40 (t, 3H, J = 7,2 Hz); 13C RMN (CDC13) 162, 02, 140, 30, 138, 14, 131, 87, 128,45, 127,77, 117,12, 112,50, 107,36, 105,86, 60,87, 14,41. Este produto é instável e consequentemente foi utilizado imediatamente na passo seguinte. 36 ΕΡ1492766

Exemplo 17: Preparação de 5-(5'-nitroindol-2'-il-carbonilamino)indole-2-carboxilato de etilo (19) A uma mistura de compostos 9 (1,020 g, 5,00 mmol) e 18 (1,02 g, 4,95 mmol) em DMF (30 mL) foi adicionado TBTU (4,0 g, 12,40 mmol) e DIPEA (1,8 mL) sob árgon. A mistura de reacção foi agitada ao longo da noite. Após concentração, a mistura foi diluida com acetato de etilo (30 mL) e NaHCCb saturado (150 mL) , e o sólido foi suspenso entre as duas camadas. O composto sólido foi filtrado, lavado com água e em seguida re-suspenso com NaH2P04 1 M, pH 3,0, filtrado, e lavado com água novamente. O produto foi seco sob vácuo para proporcionar composto 19 (1,543 g, 79% de rendimento). Rf = 0,31 (THF/hexano 1:2); 3H RMN (DMSO), 12, 45 (s, 1H) , 11 ,90 (s, 1H), 10,43 (s, 1H) , 8, 77 (d, 1H, J = 1 ,9 Hz; ), 8 ,15 (s, 1H), 8,13 (dd, 1H, J = 2, 2, 9,1 Hz) , 7,7 0 (s, 1H) , 7,61 (m, 2H), 7,46 (d, 1H, J = 8 ,9 Hz) , 7,18 (s, 1H) , 4,35 (dd , 2H, J = 7,1, 14,1 Hz), 1,35 (t , 3H, J = 7,1 Hz) ; 13C RMN (DMSO), 161,22, 158,68, 141, 32 , 139 ,50, 135 ,37, 134, 60, 131,47, 128,01, 126,56, 126, 38, . 119 ,92, 119 ,27, 118, 59, 113,27, 112,87, 112,60, 107, 77, . 105 ,69, 60, 43, 14 ,31; EM i n/z 443, 85 (M+Na) +.

Exemplo 18: Preparação de ácido 5-(5'-nitroindol-2'-il-carbonilamino)indole-2-carboxílico (20) A uma solução de composto 19 (630 mg, 1,60 mmol) em DMSO (15 mL) foi adicionado NaOH (1,0 g) em 5,0 mL de H20. Depois de agitação durante 1 h, a mistura foi 37 ΕΡ1492766 concentrada e co-evaporada três vezes com 10 mL de EpO a 60°C sob pressão reduzida. A solução residual foi diluida com metanol frio e H2O, produzindo um sólido. O composto sólido foi filtrado e seco sob vácuo para dar composto 20 (530 mg, 90% de rendimento). 1H RMN (DMSO), 12,48 (s, 1H), 11,75 (s, 1H), 10,44 (s, 1H) , 8,77 (s, 1H) , 8,15 (s, 1H) , 8,10 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 7,69 (s, 1H), 7,60 (m, 2H) , 7,44 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,10 (s, 1H); 13C RMN (DMSO), 161,91, 158,66, 141,32, 139,52, 135,45, 134,44, 131,26, 128,01, 126,72, 126,39, 119,47, 119,25, 118,02, 113,24, 112,88, 112,48, 107,23, 105,71; EM m/z 386,66, 387,85 (M+Na)\

Exemplo 19: Preparação de 1-[S]-(clorometil)-5-hidroxi-3-{{5-[5'-nitroindol-2'-il-carbonilamino]indol-2-il)carbonil}-l,2-di-hidro-3H-benz[e]índole (21) A uma solução de compostos 7 (20 mg, 0,072 mmol) e 20 (25 mg, 0,068 mmol) em DMA (3,0 mL) foi adicionado EDO (40 mg, 0,20 mmol) sob árgon. A mistura de reacção foi agitada ao longo da noite, foram adicionadas algumas gotas de ácido acético a 50%, e a mistura foi evaporada até secura. O resíduo foi purificado através de TLC preparativa sobre sílica (acetona a 40% em tolueno) para dar 25 mg de composto 21. 3H RMN ( DMF- d7) 12, 54 ( S, 1H), 11, 73 (s, 1H) , CO O O \—1 1H) , 10 ,58 (s, 1H) , 8,80 (d, 1H, J = 2,3 Hz) , 8,42 (d, 1H, J = 1,9 Hz) , 8,25 (d, 1H, J = 8, 5 Hz) , 8,19 (dd, 1H, J = 2, 1, 9,1 Hz) , 8,09 (ig, 1H), 7,95 (d , 1H, J = 8,3 Hz) , 7, 82 (d, 1H , J = 1,5 Hz) , 7,79 (d, 1H, J = = 9,1 Hz) , 7,74 (dd, 1H, J = 2, ,0, 8,9 Hz) , 7,62 (d, 1H , J = = 8,8 38 ΕΡ1492766

Hz), 7,58 (dt, 1H, J = 1,7, 7,0 + 7,0 Hz), 7,42 (dt, 1H, J = 1,2, 7,0 + 7,0 Hz), 7,33 (d, 1H, J = 1,7 Hz), 4,91 (t, 1H, J = 11,0 Hz), 4,77 (dd, 1H, J = 2,1, 11,1 Hz), 4,33 (m, 1H) , 4,13 (dd, 1H, J = 3,1, 11,1 Hz), 3,97 (dd, 1H, J = 7,9, 11,1 Hz); 13C RMN 163, 35, 161,48, 160,05, 155, 79, 142,98, 137,18, 135,03, 133,22, 133,16, 131,50, 128,85, 128,45, 128,11, 124,62, 124,02, 123,76, 120,33, 119,36, 118,70, 116,45, 114,00, 113,08, 106,97, 105,02, 101,53; EM m/z 602,96 (M+Na)+, 604,78, 603,81, 618,64 (M+K)+, 620,48.

Exemplo 20: Preparação de (S)-N-[2-{(1-cloro-metil) -1,2-di-hidro-5-hidroxi-3ií-benz (e) indol-3-il}carbo-nil]-lH-indol-5-il]-5-[(3-metilditio-l-oxopropil)-amino]-lfí-indole-2-carboxamida (16a) (DCl-SMe)

Uma solução de composto 21 (10 mg, 0,017 mmol) em DMA (2,5 mL) foi tratado com Pd/C (10 mg), 5 μΐ de HCl (conc.) e DMA (2,5 mL) . Depois do ar ser evacuado, foi introduzido hidrogénio através de um balão de hidrogénio ao longo da noite. O catalisador foi removido através de filtração e o solvente foi evaporado para dar composto 22 como um sólido castanho. O composto sólido foi utilizado directamente sem mais purificação adicional. A uma solução de composto 22 em DMA (2 mL) sob árgon foi adicionado ácido 3-(metilditio)propiónico (5 mg, 0,032 mmol) e EDC (15 mg, 0,078 mmol). Depois de agitação ao longo da noite, foram adicionadas à mistura duas gotas de ácido acético a 50% e a mistura foi evaporada até 39 ΕΡ1492766 secura. 0 resíduo foi purificado através de cromatografia preparativa sobre gel de sílica (acetona a 40% em tolueno) para dar 6 mg de DCl-SMe (16b). EM m/z 706, 66 (M+Na)+, 708,79, 707, 86; Os dados de 1H RMN são os mesmos de DC1 acima referido.

Lisboa, 16 de Julho de 2007

Claims

ΕΡ1492766 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um processo para a preparação um composto da fórmula (I) ou um seu sal, compreendendo:

(D (a) proporcionar um composto da fórmula (II) , em que R é um grupo protector de tal forma que o grupo amino e grupo hidroxilo estão protegidos pelo mesmo composto;

(b) realização de reacções de halogenação, alquilação e fecho de anel no composto (II) sob condições apropriadas para proporcionar o racemato (III);

(BD (c) isolamento do isómero (-) do racemato (III); e 2 ΕΡ1492766 (d) remoção dos referidos grupos protectores R a partir do isómero (-) isolado do composto (III) sob condições apropriadas para produzir composto (I) . 2. 0 processo da reivindicação 1, em que R é seleccionado a partir do grupo consistindo em tert-buti-loxicarbonilo, difeniloxicarbonilo, fluorenilmetiloxicar-bonilo, 2,2,2-tricloroetiloxicarbonilo, 2-trimetilsilil-etiloxicarbonilo, di-isopropilmetiloxicarbonilo, 1-ada-mantiloxicarbonilo, viniloxicarbonilo, aliloxicarbonilo, benziloxicarbonilo, metoxibenziloxicarbonilo, nitrobenzilo-xicarbonilo, ciclo-hexiloxicarbonilo, ciclopentiloxicar-bonilo. 3. 0 processo de qualquer uma das reivindicações 1 e 2, em que R é tert-butiloxicarbonilo. 4. 0 processo de qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que o passo (b) compreende ainda o passo de iodação de um composto 2-naftilamina. 5. 0 processo de qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que a referida alquilação utiliza C1-CH=CH-CH2-C1. 6. 0 processo de qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que o referido fecho de anel é realizado na presença de hidreto de tributilestanho e 2,2'-azobisiso-butironitrilo. 3 ΕΡ1492766 7· 0 processo de qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que o referido isómero (-) do racemato (III) é isolado utilizando uma matriz quiral. 8. 0 processo da reivindicação 7, em que o referido isómero (-) do racemato(III) é isolado através de HPLC quiral. 9. 0 processo de qualquer uma das reivindicações 1 a 8, em que o referido composto da fórmula (II) é produzido a partir de 1,3-di-hidroxinaftaleno.
10. Um processo para a preparação de DCl ou de um análogo de DCl, compreendendo o passo de reacção do grupo amino de um composto da fórmula (I) para formar uma ligação peptidica, em que o referido composto da fórmula (I) é preparado de acordo com o método de qualquer uma das reivindicações 1 a 9.
11. O processo da reivindicação 10, em que a referida ligação peptidica é formada através da reacção do grupo amino de composto (I) com o grupo carboxilo de composto (IV) sob condições apropriadas,

4 ΕΡ1492766 em que Ri é um grupo tiol capaz de formar uma ligação dissulfureto dentro do composto (IV), e deste modo o DC1 é preparado. 12. 0 processo de qualquer uma das reivindicações 10 e 11, em que a referida ligação peptídica é formada utilizando EDC.
13. O processo de qualquer uma das reivindicações 11 e 12, em que Ri é um alquiltio ou ariltio.
14. O processo de qualquer uma das reivindicações 11 a 13, em que Ri é -S-CH3 ou -S-piridilo.
15. O processo de qualquer uma das reivindicações 10 a 14, compreendendo também a ligação, através de ligações peptidicas, em qualquer ordem sequencial, do composto da fórmula (I), uma porção bis-indolilo ou bis-benzofurano, indolil-benzofuranilo ou benzofuranil-indo-lilo, e uma porção contendo dissulfureto.
16. O composto da fórmula (II):

>NHP em que R é um grupo protector seleccionado a partir do grupo consistindo em tert-butiloxicarbonilo, difeniloxi- 5 ΕΡ1492766 carbonilo, fluorenilmetiloxicarbonilo, 2,2,2-tricloroetilo-xicarbonilo, 2-trimetilsililetiloxicarbonilo, di-isopropil-metiloxicarbonilo, 1-adamantiloxicarbonilo, viniloxicar-bonilo, aliloxicarbonilo, benziloxicarbonilo, metoxiben-ziloxicarbonilo, nitrobenziloxicarbonilo, ciclo-hexiloxi-carbonilo, ciclopentiloxicarbonilo; de tal forma que o grupo amino e o grupo hidroxilo estejam protegidos pelo mesmo composto. 17. 0 composto da reivindicação 16, em que R é tert-butiloxicarbonilo. Lisboa, 16 de Julho de 2007