PT100487B

PT100487B - Formulacoes lipossomais de rifamicinas com elevada estabilidade e eficacia de incorporacao de antibiotico, e processo para a sua preparacao

Info

Publication number: PT100487B
Application number: PT100487A
Authority: PT
Inventors: Maria Eugenia Meirinhos D Cruz; Maria Manuela De Jesus Gaspar; Luis Vicente Constantino; Reetha Metha; Gabriel Lopez Berestein
Original assignee: Univ Texas; Ineti Inst Nac Engenh E Tecnol
Priority date: 1992-05-14
Filing date: 1992-05-14
Publication date: 1999-07-30
Also published as: WO1993023016A1; PT100487A

Description

Esta invenção relaciona-se com a preparação de formulações lipossomais contendo uma rifamicina, e misturas de glicerofosfolípidos de cadeia acílica saturada ou insaturada, com colesterol e moléculas carregadas, lipidicas ou não (e.g. estearilamina, ácido fosfatidico). As rifabutinas são um grupo de antibióticos onde se encontra a Rifampicina, um dos tuberculostáticos mais activos em uso clínico, cuja actividade pode ser potenciada pela sua encapsulação em lipossomas, uma vez que a farmacocinética do antibiótico fica modificada. Os lipossomas quando administrados são fagocitados pelos macrófagos daí que estes sistemas terapêuticos possam ser usados para transportar fármacos para os macrófagos infectados aumentando-se deste modo a concentração de antibiótico onde ela é mais necessária e diminuindo-se onde ela possa provocar toxicidade. Adicionalmente alguns antibióticos deste grupo possuem uma accão anti-virica que poderá também ser potenciada pela sua administração na forma t liposomal.

Manipulando a carga, a composição lípídica ou o tamanho dos lipossomas pode-se modular o comportamento in vivo destas vesículas.

Os macrófagos são células pertencentes ao sistema reticuloendotelial e estão na primeira linha das defesas do organismo tendo funções de fagocitose e destruição de corpos estranhos. Existem no entanto, organismos capazes de sobreviver dentro destas células, sendo, portanto, muito difíceis de eliminar. Entre eles encontram-se o Micobacterium

Tuberculosis, o Micobacterium Avium e outros microrganismos sensíveis às rifamicinas.

A presente invenção compreende um processo de formação de lipossomas por liofilização, seguida de hidratação do liofilizado de onde se destacam os seguintes passos :

-Formação de uma solução contendo o antibiótico e os componentes lipofilicos dos lipossomas, num solvente ou mistura de solventes apropriados como o t-Butanol ou o ciclo-hexano. Por solvente ou mistura de solventes apropriados entende-se que com eles e os restantes componentes se forme uma solução homogéneapassível de ser llofilizada.

-Passagem da solução ao estado sólido por arrefecimento.

-Liofilização do congelado.

-Hidratação do liofilizado com água,soro fisiológico, ou outra solução aquosa apropriada.

Com o presente processo obtêm-se formulações lipossomais de rifamicinas de grande estabilidade em soro humano e baixa toxicidade, destinadas a futura utilização clínica.

Foram realizadas por nós ensaios de encapsulação e estabilidade em soro humano da rifampicina, da ciclopentilrifampicina e da rifabutina.

É possível incorporar as rifamicinas em lipossomas de diferentes composições lípidicas. No entanto, são aqueles em que o principal componente lípidico é um fosfolípido com temperatura de transição de fase superior a 37° C, que demonstraram uma maior estabilidade em soro humano. A estabilidade em soro humano é fundamental para que os liposomas mantenham as suas características uma vez administrados. Os lipossomas com baixa estabilidade em soro humano libertarão as rifamicinas no momento da sua desintegração, passando o antibiótico a comportar-se como fármaco livre e desaparecendo a partir desse momento as vantagens da forma lipossomal.

Realizaram-se ensaios de toxicidade comparativa da rifampicina livre e lipossomal tendo-se utilizado células de ovário de hamster chinês como modelo para a toxicidade sobre células não fagocitárias, libertação do anião superóxido a partir de macrófagos como modelo para a toxicidade sobre células fagocitárias, e libertação de potássio a partir de eritrócitos como modelo de toxicidade sobre as membranas.

Testou-se ainda a toxicidade aguda em ratinhos.

A rifampicina lipossomal mostrou-se menos tóxica que a rifampicina Livre para as células de ovário de hamster chinês. Não demonstrou ser supressora de produção de 0^ pelos macrófagos, tendo até um efeito indutor na produção do ião superóxido. Um ponto importante uma vez que a produção deste ião paralela a de peróxido de hidrogénio, composto que o corpo humano usa para combater as infecções por micobactérias.

Também não se encontrou na rifampicina lipossomal nenhuma acção indutora de libertação de potássio pelos eritrócitos.não lhe sendo associada nenhuma actividade destabilizadora das membranas. Os testes de toxicidade aguda efectuados em ratinhos demonstraram que a rifampicina liposomal não tinha uma toxicidade superior à rifampicina livre .

RESUMO

Formulações lipossomais de Rifamicinas com elevada estabilidade e eficácia de incorporação de antibiótico, e processo para a sua preparação.

A presente invenção refere-se a formulações lipossomais contendo uma rifamicina, destinadas a uso clínico e caracterizadas por terem razões antibiótico / lípido até 2 moles de antibiótico por mole de lípido e da composição lipidica ser constituida por misturas de glicerofosfolípidos de cadeia acílica saturada ou insaturada, com colesterol e moléculas carregadas, lípidicas ou não.

produto obtido apresenta uma elevada estabilidade em soro fisiológico e soro humano e a sua toxicidade apresenta-se como sendo menor que a da forma livre do fármaco.

processo para a preparação de formulações liposomais de rifamicinas é caracterizado pela dissolução do antibiótico e dos outros componentes em solventes adequados, liofilização da solução e hidratação do liofilizado.

Claims

1. Formulações lipossomais ou mistura poten.cialmen.te formadora de liposomas uma vez hidratada contendo pelo menos uma rifamicina ou derivados hidrófobos como substância farmacológicamente activa, caracterizadas por terem elevada estabilidade e eficácia de incorporação.

2. Formulação lipossomal de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo facto dos lipossomas terem na sua composição fosfolípidos naturais ou sintéticos

3. Formulação lipossomal de acordo com a reivindicação 1 e 2 caracterizada pelo facto de na formulação também entrarem moléculas neutras ou carregadas, de natureza não lipídica.

4. Formulação lipossomal de acordo com a reivindicação 1 a 3 caracterizada pelo facto de conter pelo menos um dos seguintes fosfolípidos: fosfatidilcolina (PC), dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC) dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleioilfosfatidilcolina (DOPC), difitanoilfosfatidilcolina (DPhPC), fosfatidilglicerol (PG), dimiristoilfosfatidilglicerol (DMPG) e dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), diestearoilfosfatidilglicerol (DSPG).

5, Formulação lipossomal de acordo com as reivindicações 1 a 4 caracterizada pelo facto do antibiótico utilizado ser a Rifampicina, a Rifabutina, a ciclopentilrifampicina ou outra

Rifamicina, ou seus derivados hidrófobos.

6. Processo para a preparação de formulações lipossomais de rifamicinas, caracterizado pelos passos de:

- Dissolução dos lipidos e do antibiótico em solvente que permaneça sólido durante o processo de liofilização.

- Passagem da solução ao estado sólido por arrefecimento.

- Liofilização do sólido obtido.

- Obtenção de uma mistura potencialmente formadora de lipossomas que poderá ser hidratada logo a seguir á sua formação ou em qualquer momento antes da sua administração.

- Hidratação do liofilizado com ãgua ou qualquer solução aquosa apropriada.

7. Processo de acordo com a reivindicação 6 caracterizado por serem usados fosfolipidos e, ainda facultativamente, colesterol e/ou outras moléculas carregadas de natureza lípidica ou não.

8. Processo de acordo com as reivindicações 6 e 7 caracterizado por serem usadas misturas contendo fosfolipidos de cadeia acílica saturada ou insaturada.

9. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 8 caracterizado por os fosfolípidos serem escolhidos entre fosfatidilcolina (PC), dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC) dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleioilfosfatidilcolina (DOPC), dífitanoilfosfatidilcolina (DPhPC), fosfatidílglicerol (PG), dimiristoil- fosfatidílglicerol (DMPG) e dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), diestearoilfosfatidilglicerol (DSPG).

10. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 9 caracterizado pela proporção antibiótico / lípido variar entre

1/5 e 1/80.

11. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 10 caracterizado por os lipossomas possuírem um diâmetro que varia entre 0.05 μι» a 10 pm.

12. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 11 caracterizado por a eficácia de encapsulação ser pelo menos de

65%.

13. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 12 caracterizado pela estabilidade em soro fisiológico a 4°C ser superior a 80% ao fim de 15 dias.

14. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 13 caracterizado 80% ao fim de pela estabilidade 48 horas. em soro humano ser superior a 15. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 14

caracterizado pelo facto do tuberculostático utilizado ser a

Rifampicina, a Rifabutina, a ciclopentilrifampicina ou outra

Rifamicina, ou seus derivados hirófobos.

16. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 15 caracterizado pelo facto do lipido ser esterilizado antes de ser hidratado 17. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 16

caracterizado pelo facto dos lipossomas serem formados por hidratação de fosfolípidos que não estejam sobre a forma de liofilizado.

18. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 17 caracterizado pelo facto da rifabutina ser adicionada no passo de hidratação dos lipossomas.

19. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 18 caracterizado pelo facto da solução aquosa de hidratação conter outras substâncias farmacológicamente aetivas.

20. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 19 caracterizado pelo facto dos liposomas obtidos serem extrudados sob pressão. 21. Processo de acordo com as reivindicações 6 a 20

caracterizado pelo facto do fármaco não imobilizado ser separado dos lipossomas

22. Formulações lipossomais de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 caracterizadas por serem preparadas pelo processo de acordo com qualquer uma das reivindicaçães 6 a 21.