KR20000073825A

KR20000073825A - 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물

Info

Publication number: KR20000073825A
Application number: KR1019990017373A
Authority: KR
Inventors: 김종국; 고종호; 김문희; 이미경; 이사원; 박정숙; 김양배
Original assignee: 유성락; 이연제약 주식회사
Priority date: 1999-05-14
Filing date: 1999-05-14
Publication date: 2000-12-05

Abstract

본 발명은 클라리스로마이신 0.5~30 중량%를 주성분으로 하여 오일 0.2~10 중량%, 인지질 1.2~60 중량%, 콜레스테롤 0.5~20 중량% 및 건조리포좀 제조용 부형제 2.1~50 중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은, 클라리스로마이신을 충분히 가용화시키고 체내소실을 지연시킴으로써 생체내이용율을 높였으며 물리적 및 화학적 안정성이 우수하며 주사시 지속성이 있으며 통증유발이 탁월하게 경감되어 나타난다.

Description

클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물 {Clarithromycin-containing dry liposome composition}

본 발명은 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물에 관한 것이다.

클라리스로마이신은 반합성 마크로라이드계 항생제로서 현재 경구용 정제 및 현탁용 과립으로서 시판되고 있다. 이 들 경구용 제제는 세균성기관지염 및 폐렴 (Legionella, Mycoplasma 및 Chlamydia종에 의해 유발되는 부정형의 폐렴 포함)을 포함하는 하기도 감염, 상기도감염 (인두염 및 부비강염) 및 피부 및 피부구조물 감염 치료에 널리 사용되고 있으며, 특히 최근 십이지장궤양 환자에게서 나선균 (Helicobacter pylori) 제거에 매우 효과적이어서, 오메프라졸 또는 라니티딘과 함께 십이지장궤양치료 및 재발방지에 사용되고 있다.

그러나 클라리스로마이신은 물에 대한 용해도가 낮고, 주사시 통증을 유발하므로 주사제화 하기가 어렵다. 현재 클라리스로마이신을 락토비오네이트염 형태로 제조하여 용해도를 높인 클라리스로마이신 락토비오네이트 주사제가 시판되고 있으나 근육주사시 여전히 통증을 유발한다. 따라서, 주사시 통증유발이 작은 다른 가용화시스템 개발이 절실히 요구되고 있다.

이러한 일환으로 생분해성 폴리머를 사용한 마이크로인캡슐레이션제제, 바이오 염을 이용한 미셀제제, 지방(fat) 에멀젼제제 등에 관한 많은 연구가 진행되어 왔다. 제제의 입자크기는 통증유발과 밀접한 관계가 있으나 이들 제제의 입자크기는 200 nm 이상으로서 충분히 작지 않으며 에멀젼과 같은 액상제제의 경우 화학적 안정성 뿐만 아니라 물리적 안정성이 크게 문제가 되어 실제적으로 실용화되지 못하고 있다. 따라서 좀더 입자크기가 작은 물리적 및 화학적으로 안정한 제제의 개발이 필요하다.

본 발명은 상기와 같은 종래의 문제점을 개선하여, 클라리스로마이신을 충분히 가용화시키고 체내소실을 지연시킴으로써 생체내이용율을 높일 수 있을 뿐만 아니라, 물리적 및 화학적 안정성이 우수하고 주사시 통증 유발이 탁월하게 경감된 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물을 제공하기 위한 것이다.

본 발명은 클라리스로마이신 0.5~30 중량%를 주성분으로 하여 오일 0.2~10 중량%, 인지질 1.2~60 중량%, 콜레스테롤 0.5~20 중량% 및 건조리포좀 제조용 부형제 2.1~50 중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물에 관한 것이다.

보다 구체적으로 본 발명을 설명하면 다음과 같다.

본 발명에서 채택하고 있는 건조리포좀 제제는 사용 직전에 주사용증류수 또는 주사용생리식염수를 가하면 입자크기가 작은 리포좀이 형성되는 시스템이다. 따라서 보관시 고체상태로 존재하므로 조성물의 물리적 및 화학적 안정성이 액상제제에 비하여 탁월하다.

본 발명의 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물은 리포좀 제조법 중 하나인 탈수-재수화법 (dehydration-rehydration method)을 응용하여 제조 할 수 있다. 예를 들면, 인지질, 오일, 콜레스테롤 및 클라리스로마이신을 바이알에 넣고 클로로포름을 가하여 완전히 용해시킨다. 이 용액을 회전 증발 농축기에서 감압하에 40~50℃ 수욕상에서 유기용매를 천천히 증발시켜 얇은 지질막이 형성되도록 한다. 유기용매를 완전히 증발시킨 후 고압진공펌프에 연결된 데시케이터에서 건조한다. 이 지질막에 건조리포좀 제조용 부형제의 수용액을 가하고 격렬히 혼합한 후 마이크로플루이다이저 (microfluidizer)를 이용하여 순환시킨다. 이것을 동결건조하여 건조 리포좀을 얻을 수 있다.이렇게 제조된 건조 리포좀은 액상제제에서 나타나는 물리적 및 화학적 불안정성 문제가 없으며 제조하기가 간단하고 취급이 용이하다. 또한 사용직전 주사용증류수 등에 형성시킨 리포좀의 입자크기가 작아 (<100 nm) 클라리스로마이신과 같은 난용성약물 주사시 초래되는 통증의 완화도 기대되어 진다. 더우기 투여된 리포좀은 생체 내에서 세망내피계 (reticuloendothelial systems)로의 이행이 감소됨으써 체내소실 지연되는 특징를 가지고 있는 PEG-PE를 함유 하여 약물의 체내소실을 지연시키므로 높은 생체내이용율을 기대할 수 있다.

본 발명의 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물의 제조에 사용할 수 있는 인지질로서는 리포좀에 제조에 일반적으로 사용되는 인지질을 이용할 수 있으며, 그 구체적인 예로서는 천연물인 에그 포스파티딜콜린 (egg phosphatidylcholine : PC) 이 있으며, 합성물인 디미리스토일포스파티딜콜린 (dimyristoylphosphatidylcholine : DMPC), 디팔미토일포스파티일콜린 (dipalmitoylphosphatidylcholine : DPPC), 디레오일포스파티딜콜린 (dileoylphosphatidylcholine : DOPC), 디스테아로일포스파티딜콜린 (distearoylphosphatidylcholine : DSPC), 디팔이토일포스파티딜에타놀아민 (dipalmitoylphosphatidylethanolamine : DPPE), 디레오일포스파티딜에타놀아민 (dileoylphosphatidylethanolamine : DOPE), 디미리스토일포스파티딜글리세롤 (dimyristoylphosphatidylglycerol : DMPG), 디스테아로일포스파티딜글리세롤 (distearoylphosphatidylglycerol : DSPG), 디스테라오일포스파티딜에타놀아민-엔-폴리(에틸렌 글리콜) 2000 [disteraoylphosphatidylethanolamine-N-poly(ethylene glycol) 2000 : PEG-PE] 등이 있다. 디스테라오일포스파티딜에타놀아민-엔-폴리(에틸렌 글리콜) 2000은 인지질인 포스파티딜에타놀아민 (phosphatidylethanolamine : PE)에 폴리에틸렌글리콜 (polyethyleneglycol : PEG)을 결합시킨 것으로서 제조하기에 간편하며 값이 싸고 또한 이것으로 제조한 리포좀은 정맥주사시 혈액에서 지속성이 탁월하므로 약물수송계에 많이 이용되고 있다. 본 발명의 조성물 제조에 있어서도 디스테라오일포스파티딜에타놀아민-엔-폴리(에틸렌 글리콜) 2000의 사용이 더욱 바람직하다. 본 발명에서 인지질은 전체 중량에 대하여 0.5 ~ 50 중량% 범위 내에서 함유시키는 것이 바람직하다. 그 함량이 0.5 중량% 미만이면 입자크기가 커지므로 바람직하지 않다.

본 발명의 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물의 제조에 적합한 오일로는 대두유 (soybean oil), 네오비 M-5 (Neobee M-5), 에틸올리에이트 (ethyloleate) 등이 있다. 식용유로도 이용되고 있는 대두유는 여러 종류의 지방산으로 구성되어 있다. 그 구성 지방산들로는 50% 이상을 차지하는 리놀레산과 올레인산, 리놀렌산, 팔미틴산, 스테아린산 등이 있다. 대두유는, 약물의 경구 및 정맥주사제로 이용되고 있는 에멀젼 제제의 제조에 사용되며 리포좀 제제의 제조에도 사용되고 있다. 본 발명에서 오일은 전체 중량에 대비하여 0.1 ~ 10 중량% 범위내에서 함유시키는 것이 바람직하다. 그 함량이 0.1 중량% 미만이면 입자의 안정성이 저하된다.

본 발명의 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물의 제조에 적합한 건조리포좀 제조용 부형제로써 락토스, 만니톨, 덱스트린, 싸이클로덱스트린, 트레할로스, 유당 일수화물 (monohydrated lactose) 등이 있으며 이들은 동결건조시 주성분을 안정화시키는 목적으로 사용된다. 본 발명에서 사용되는 건조리포좀 제조용 부형제는 전체 중량에 대비하여 0.5 ~ 50 중량% 범위내에서 함유시키는 것이 바람직하다.

이하 실시예를 통하여 본 발명을 구체적으로 설명하고자 하나, 다음의 실시예에 의하여 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1.

디스테라오일포스파티딜에타놀아민-엔-폴리(에틸렌 글리콜) 2000 84 mg, 포스파티딜콜린 36 mg, 대두유 6 mg, 콜레스테롤 1.5 mg 및 클라리스로마이신 15 mg을 4 ml 바이알에 넣고 클로로포름 1 ml를 가하여 완전히 용해시켰다. 이 용액을 회전 증발 농축기에서 감압하에 40~50℃ 수욕상에서 유기용매를 천천히 증발시켜 얇은 지질막이 형성되도록 하였다. 유기용매를 완전히 증발시킨 후 고압진공펌프에 연결된 데시케이터에서 약 2시간동안 건조하였다. 이 지질막에 유당 일수화물의 28.7% 수용액을 3 ml 가하고 보르텍스 믹서 (vortex mixer)를 이용하여 10분 동안 격렬히 혼합한 후 마이크로플루이다이저(microfluidizer)를 이용하여 압력 10.000 p.s.i.에서 5번 순환시켰다. 이것을 24시간 동안 동결건조하여 본 발명에 따르는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물을 얻었다.

실시예 2.

대두유를 가하지 않은 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 본 발명에 따르는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물을 제조하였다.

실험예 1. 입자크기

실시예 1과 2에서 제조한 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물에 생리식염수를 가하고 교반하여 형성시킨 리포좀의 입자크기를 광산란분석기 (Light scattring spectrophotometer : Nicomp 370, Particle Sizing System, Inc., Santa Barbara, CA, USA)를 이용하여 측정하였다. 그 결과는 다음과 같았다:

실시예 1의 조성물 --- 78.1±21.5 nm

실시예 2의 조성물 --- 113.8±18.4 nm

실험예 2. 스트래치 테스트

실시예 1의 조성물과 시판되고 있는 클라리스로마이신 락토비오네이트 (clarithromycin lactobionate) 제제를 각각 5mg/kg 씩 마우스(10마리/군, 체중 20~30g)에 피하주사한 후 5분 동안 관찰하여 마우스가 주사부위를 스트래치한 횟수를 측정하였다. 그 결과, 본 발명에 따르는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물을 투여한 경우 기존제제에 비하여, 부작용으로서 유발되는 통증이 훨씬 작게 나타남을 확인할 수 있었다.

투여	스트레치 횟수 (평균±표준편차)
실시예 1의 조성물	4.9±1.3
시판제제	41.8±9.5
생리식염수	1.7±0.8

실험예 3. 정맥자극 테스트

실시예 1의 조성물을 암, 수 토끼의 귀 정맥에 (8 ml/kg) 1 ml/min 속도로 투여 후 12시간 동안 매시간마다 관찰한 결과 주사부위는 정상으로 특별한 자극반응이 없었다. 따라서 본 발명의 조성물은 주사시 국소 자극을 일으키지 않는 것으로 보인다.

실험예 4. 항균활성

마우스 (10마리/군)를 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus, 100 LD dose)로 감염시킨 후 1시간 후에 실시예 1의 조성물과 시판중인 클라리스로마이신 락토비오네이트 제제를 각각 마우스의 꼬리정맥에 정맥주사 하였다. 감염 후 60일째 되는 날의 누적사망률로부터 ED50를 산출한 결과 두 제제의 항균작용은 유의성 있는 차이가 있다.

	실시예 1의 조성물	시판제제
ED50 (mg/kg/day)	21.8±1.8	67.2±5.1

실험예 5. 약물동태학적 연구

200-250g의 스프라그-도울리계 렛트 (Sprague-Dawley rat)를 사용하여 약물동태학적 실험을 실시하였다. 실시예 1의 조성물과 시판중인 클라리스로마이신 락토비오네이트 제제를 10mg/kg 씩를 각각 정맥주입한 후 0, 1, 2, 4, 6, 8, 12시간에 혈액을 채취하였다. 혈액중의 클라리스로마이신 농도를 HPLC법으로 측정한 후 약물동태학적 변수를 산출하여 비교하였다. 그 결과는 다음 표 3에 나타내었으며 본 발명에 따르는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물의 AUC는 시판제제와 비교하여 각각 1.3배 증가되었다. 따라서 본 발명의 조성물은, 클라리스로마이신을 충분히 가용화시키고 체내소실을 지연시킴으로써 시판제제와 비교하여 높은 생체내이용율을 나타냄을 확인할 수 있었다.

투여	AUC (㎍·h/㎖)
실시예 1의 조성물	94.8±7.4
시판제제	73.1±6.5

본 발명은, 클라리스로마이신을 충분히 가용화시키고 체내소실을 지연시킴으로써 생체내이용율을 높였으며 물리적 및 화학적 안정성이 우수하며 주사시 지속성이 있으며 통증유발이 탁월하게 경감되어 나타낼 수 있는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물을 제공한다.

Claims

클라리스로마이신 0.5~30 중량%, 인지질 1.2~60 중량%, 콜레스테롤 0.5~20 중량%, 및 건조리포좀 제조용 부형제 2.1~50 중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물.
제 1 항에 있어서, 인지질의 함량이 45~60 중량%, 및 콜레스테롤의 함량이 5~10 중량%인 것을 특징으로 하는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물.
제 1 항에 있어서, 인지질이 에그 포스파티딜콜린, 디미리스토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티일콜린, 디레오일포스파티딜콜린, 디스테아로일포스파티딜콜린), 디팔이토일포스파티딜에타놀아민, 디레오일포스파티딜에타놀아민, 디미리스토일포스파티딜글리세롤, 디스테아로일포스파티딜글리세롤, 및 디스테라오일포스파티딜에타놀아민-엔-폴리(에틸렌 글리콜)계 로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 것임을 특징으로 하는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물.
제 1 항에 있어서, 2~5 중량%의 오일을 함유한 것을 특징으로 하는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물.
제 4 항에 있어서, 오일이 대두유, 네오비 M-5, 및 에틸올리에이트 로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 것임을 특징으로 하는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물.
제 1 항에 있어서, 건조리포좀 제조용 부형제가 락토스, 만니톨, 덱스트린, 싸이클로덱스트린, 트레할로스 및 유당 일수화물 로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 것임을 특징으로 하는 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항에 따른 클라리스로마이신-함유 건조리포좀 조성물을 포함하는 주사제.