PL190078B1 - Liposomowy preparat mitoksantronu, sposób jego wytwarzania i przeciwnowotworowa kompozycja farmaceutyczna zawierająca ten preparat - Google Patents

Abstract

1 . Liposomowy preparat mitoksantronu zawierajacy nosnik liposomowy i ewentualnie dopuszczalne farmaceutycznie substancje pomocnicze, znamienny tym, ze nosnik liposomowy stanowi mieszanina lecy- tyny jajecznej (PC), uwodornionej lecytyny jajecznej (HPC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 11.2 lub lecytyny jajecznej (PC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1 1 5 Sposób wytwarzania liposomowego preparatu mitoksantronu zawierajacego nosnik liposomowy oraz dopuszczalne farmaceutycznie substancje pomocnicze, o stopniu enkapsulacji powyzej 89%, znamienny tym, ze roztwór mitoksantronu w rozpuszczalniku organicznym laczy sie z roztworem skladni- ków nosnika lipidowego obejmujacego mieszanine lecytyny jajecznej (PC), uwodornionej lecytyny jajecz- nej (HPC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1.2 lub lecytyny jajecznej (PC) 1 po- chodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1 1, w tym samym lub innym rozpuszczalniku orga- nicznym, odpedza sie rozpuszczalniki, warstwe lipidowa rozprowadza sie w rozpuszczalniku organicznym, wymraza 1 poddaje liofilizacji, po czym liofilizat kontaktuje sie z w oda otrzymujac pierwotny preparat wielowarstwowych liposomów, który stabilizuje sie poddajac go dodatkowym procesom fizycznym, otrzy- mujac zawiesine kalibrowanych unilamelarnych liposomów o wielkosci 100-300 nm, korzystnie 100 - 200 nm, 1 stopniu enkapsulacji powyzej 89%, po czym zawiesine liposomów poddaje sie liofilizacji 8 Przeciwnowotworowa kompozycja farmaceutyczna do podawania pozajelitowego, obejmujaca te- rapeutycznie skuteczna ilosc mitoksantronu w postaci preparatu liposomowego, znamienna tym, ze prepa- rat liposomowy zawiera mitoksantron w proporcji wagowej od 1:5 do 1.15 w stosunku do skladników lipi- dowych nosnika liposomowego stanowiacego mieszanine lecytyny jajecznej (PC), uwodornionej lecytyny jajecznej (HPC) 1 pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1.1.2 lub mieszaniny lecytyny jajecznej (PC) 1 pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1 · 1 , i ewentualnie dodatkowe farma- ceutycznie dopuszczalne nosniki i/lub substancje pomocnicze PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest nowy liposomowy preparat mitoksantronu, sposób wytwarzania liposomowego preparatu mitoksantronu o wysokim stopniu enkapsulacjii przeciwnowotworowa kompozycja farmaceutyczna zawierająca ten preparat.

190 078

Mitoksantron, l ,4-dihydroksy-5,8-bis(-i2-((2-hycłiOksyetylo)amino|etyIo}amino)ant.raceno-9,10-dion, jest syntetycznym cytostatykiem, stosowanym w chemioterapii nowotworów, zwłaszcza raka sutka i ostrych białaczek. W lecznictwie jest stosowany w formie iniekcji dożylnych roztworu chlorowodorku.

Użyteczność liposomów, jako nośników substancji leczniczych w farmacji i medycynie, jest znana od wczesnych lat sześćdziesiątych, kiedy poznano zjawisko zamykania niektórych związków chemicznych w mikropęcherzykach lipidowych. Jednak dopiero w ostatnich kilku latach uzyskano obiektywne dowody terapeutycznej skuteczności tego sposobu podawania substancji farmaceutycznych i wprowadzono do lecznictwa pierwsze liposomowe formy leków. Aktualny stan zastosowań liposomów, w tym szczególnie zastosowań farmaceutycznych, znany jest z opracowań książkowych, (np.: D.D. Lasie, „Liposomes : from physics to applications” , Elsevier, Amsterdam 1995; D.D. Lasie, F. Martin „Stealth liposomes” CRC Press Boca Raton 1995).

Korzystne efekty enkapsulacji leków w mikrosferach lipidowych polegają na podwyższeniu biodostępności, obniżeniu toksyczności układowej i/lub narządowej, wydłużeniu okresu półtrwania, czyli w sumie na polepszeniu selektywności działania i indeksu terapeutycznego.

Jednocześnie, dla pewnych klas terapeutyków, do których należą leki przeciwnowotworowe z grupy antybiotyków antra-cyklinowych, zarówno efektywność enkapsulacji jak i trwałość liposomów (in vitro i in vivo) stanowią poważny problem techniczny. W przypadku preparatów otrzymywanych w standardowych warunkach wytrząsania roztworu substancji czynnej ze składnikami lipidowymi uzyskuje się zarówno niski stopień enkapsulacji (ok. 35-55%) jak i ograniczoną trwałość liposomów, wynikającą m. in. z „wyciekania” substancji aktywnej ze struktur lipidowych.

Znane z literatury preparaty liposomowe mitoksantronu (D.D. Lasie, Chem. Ind., 2.996 (6), s.210 ; R. Perez Soler, W. Priebe, Cancer Res., 50, s.4260 (1990); T.G. Burke, T.R. Tritton, Biochemistry, 24, s.1768 i 5972 (1985)), zawierają składnik aktywny zamknięty w pęcherzykach liposomowych, będących kompozycją składników lipidowych, stabilizatory struktury pęcherzyka, rozpuszczalniki i ewentualnie inne dopuszczalne farmaceutycznie środki pomocnicze. Przez nośniki liposomowe rozumie się fosfolipidy pochodzenia naturalnego (np. lecytyny będące wynikiem rafinacji tłuszczów roślinnych), fosfolipidy syntetyczne, dostępne handlowo preparaty fosfolipidowe, w tym fosfolipidy modyfikowane chemicznie przy zastosowaniu pochodnych glikolu etylenowego, (np. l,2-diacylo-sn-glicero-3-fosfoetanolamino-N-[poli(etyleno-glikol) 2000 lub 5000] oferowane przez firmę Avanti Polar Lipids, Birmingham, ALA, USA), służące do bezpośredniego przygotowania liposomów stabilzowanych sferycznie (typu „stealth”).

Efektywność zamykania mitoksantronu w liposomach przygotowywanych klasycznymi metodami (P. Genne, N.O. Olsson, G. Gutierrez, O. Duchamp, B. Chauffert, Anti-Cancer Drug Design 9, 73 (1994)) jest niska i wynosi zwykle 54-67% przy stosunku nośnik liposomowy/substancja aktywna jak 300:1. Ulepszona forma liposomowa mitoksantronu uzyskana dzięki ładowaniu leku do liposomów w gradiencie elektrolitu (C.W. Chang, L. Barber, C. Ouyang, D. Masin, M.B. Bally, T.D. Madden, Brit. J. Cancer 75, 169 (1997)) zapewnia jedynie do 85% zamykania leku.

Celem wynalazku było opracowanie liposomowego preparatu mitoksantronu, który charakteryzowałby się korzystniejszym od znanych ze stanu techniki preparatów stosunkiem nośnik liposomowy/substancja aktywna, czyli umożliwiającego przenoszenie takiej samej ilości substancji aktywnej przez mniejszą ilość lipidowego nośnika. Celem było ponadto uzyskanie preparatu liposomowego przydatnego do wytwarzania środka farmaceutycznego, zwłaszcza podawanego pozajelitowo, a więc charakteryzującego się przede wszystkim wysokim stopniem enkapsulacji składnika aktywnego i wysoką stabilnością.

Istotę wynalazku stanowi liposomowy preparat mitoksantronu zawierający nośnik liposomowy i ewentualnie dopuszczalne farmaceutycznie substancje pomocnicze, charakteryzujący się tym, ze nośnik liposomowy stanowi mieszaninę lecytyny jajecznej (PC), uwodornionej lecytyny jajecznej (HPC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1:2 lub lecytyny jajecznej (PC) i pochodnej rezorcynolowej (Rl) w stosunku wagowym 1:1.

190 078

Korzystne pochodne rezorcynolowe stanowią acylowe pochodne wodorosiarczanowych lipidów rezorcynolowych (ASAR). Szczególnie korzystną pochodną stanowi wodorosiarczan 3-tridecylokarbonyloksy-5-pentadecylofenylu (MSAR).

Preparat liposomowy według wynalazku zawiera mitoksantron w postaci wolnej zasady lub farmaceutycznie dopuszczalnych soli, na przykład chlorowodorku.

W preparacie według wynalazku mitoksantron zamknięty jest w pęcherzykach liposomowych w proporcji 1 część wagowa mitoksantronu na 5-15 części wagowych nośników lipidowych, korzystnie 1 część wagowa mitoksantronu na 7 części wagowych składników lipidowych.

Dodatkowo preparat może zawierać substancje zwiększające trwałość liposomów in vivo, takie jak np. l,2-distc'aiOilo-sn-glicero-3-losf'oetanolaamino-N-|poli(glikol etylenowy 5000)], oraz substancje krioochronne, nie wpływające na obniżenie stopnia enkapsulacji.

Przedmiotem wynalazku jest ponadto sposób wytwarzania opisanego niniejszym preparatu liposomowego mitoksantronu o wysokim stopniu enkapsulacji, zwłaszcza o stopniu enkapsulacj i powyżej 89%.

Sposób według wynalazku polega na tym, że roztwór mitoksantronu w rozpuszczalniku organicznym łączy się z roztworem składników nośnika lipidowego obejmującego mieszaninę lecytyny jajecznej (PC), uwodornionej lecytyny jajecznej (HPC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1:2 lub lecytyny jajecznej (PC) i pochodnej rezorcynolowej (rl) w stosunku wagowym 1:1, w tym samym lub innym rozpuszczalniku organicznym, odpędza się rozpuszczalniki, warstwę lipidową rozprowadza się w rozpuszczalniku organicznym, wymraza i poddaje liofilizacji, po czym liofilizat kontaktuje się z wodą, otrzymując pierwotny preparat wielowarstwowych liposomów, który stabilizuje się poddając go dodatkowym procesom fizycznym, otrzymując zawiesinę kalibrowanych unilamelamych liposomów o wielkości 100-300 run, korzystnie 100 - 200 nm, i stopniu enkapsulacji powyżej 89%, po czym zawiesinę liposomów poddaje się liofilizacji.

W alternatywnym sposobie, najpierw sporządza się roztwór składników nośnika lipidowego w rozpuszczalniku organicznym, a substancję czynną wprowadza się do preparatu przed liofilizacja przez wytrząsanie składników warstwy lipidowej rozprowadzonych w rozpuszczalniku organicznym, z wodnym roztworem mitoksantronu.

Zgodnie z powyższym sposobem, składniki lipidowe i substancję aktywną rozpuszcza się na przykład w chloroformie lub cykloheksanie, ewentualnie z dodatkiem niższego alkanolu. Otrzymany po odpędzeniu rozpuszczalnika(ów) cienki film lipidowy rozprowadza się w rozpuszczalniku organicznym, np. cykloheksanie z ewentualnym dodatkiem substancji krioochronnych, takich jak gliceryna lub węglowodany, wymraza i liofilizuje.

Właściwy liposomowy preparat substancji aktywnej otrzymuje się przez kontaktowanie liofilizatu z wodą, polegające na wytrząsaniu, mieszaniu mechanicznym, lub poddaniu preparatu działaniu ultradźwięków (sonikacji) w obecności wody, roztworu soli fizjologicznej, buforu i ewentualnie roztworu innych farmaceutycznie dopuszczalnych substancji.

Hydratyzowany pierwotny preparat liposomowy składa się z liposomów wielo- i jednowarstwowych o średniej wielkości 80-1500 nm.

Pierwotny preparat liposomowy dodatkowo poddaje się stabilizacji poprzez zastosowanie odpowiednich procesów fizycznych, takich jak wymrażanie, ekstruzja lub sonikacja.

Korzystny proces fizyczny stanowi kilkukrotne wymrażanie w temperaturze ciekłego azotu (w tym przypadku stosuje się dodatek substancji krioochronnych) i rozmrazanie w temperaturze ok. 40°Ć. Czynności te powtarza się 7 do 10 razy. Badania przy użyciu elektronowego mikroskopu transmisyjnego Jeol 100C, przy powiększeniach 5000-100000 x wykazują ze wielokrotne zamrazanie i rozmrazanie zawiesiny liposomowej powoduje dwie istotne z punktu widzenia zastosowań farmaceutycznych zmiany, a mianowicie zmniejszenie warstwowości liposomów oraz ujednolicenie ich rozmiarów.

Inny odpowiedni sposób stabilizowania pierwotnego preparatu liposomowego mitoksantronu stanowi kilkukrotna lub kilkunastokrotna ekstruzja zawiesiny przez membranę poliwęglanową o określonej porowatości. W korzystnym wariancie sposobu według wynalazku, zawiesinę poddaje się 12-krotnej ekstruzji przez membrany o średnicy porów wynoszącej 100 - 200 nm.

190 078

Zastosowanie ekstruzji zapewnia jednoczesne zmniejszenie warstwowości liposomów oraz ujednolicenie ich rozmiarów i sterylizację preparatu.

Podobne zadanie spełnia poddawanie zawiesiny liposomów krótkotrwałemu działaniu ultradźwięków (sonikacja).

Dodatkowa stabilizacja zawiesiny liposomów zawierających mitoksantron, pozwala otrzymać preparat o korzystnych z punktu widzenia zastosowań farmaceutycznych właściwościach. Badania metodą elektronowego mikroskopu transmisyjnego potwierdzają zmniejszenie warstwowości liposomów oraz ujednolicenie ich rozmiarów. Otrzymuje się unilamelame liposomy o średniej wielkości 100 - 300 nm, korzystnie 2.00-200 nm. Stabilizacja preparatu zapewnia równocześnie jego sterylizację.

Skład nośnika Iiposomowego i opracowany sposób wytwarzania Iiposomowego preparatu mitoksantronu zapewnia uzyskanie preparatu o stopniu enkapsulacji składnika aktywnego ponad 89% przy stosunku lipid/substancja aktywna jak 7,5:1, podczas gdy dla klasycznych formulacji fosfolipidowych wartość ta nie przekracza 67% przy stosunku lipid/substancja aktywna jak 300:1. i odpowiednią trwałością. W związku z tym, preparat liposomowy według wynalazku może być stosowany do wytwarzania przeciwnowotwOrowej kompozycji do podawania pozajelitowego.

Istotę wynalazku stanowi zatem także przeciwnowotworowa kompozycja farmaceutyczna do podawania pozajelitowego, obejmująca terapeutycznie skuteczną ilość mitoksantronu w postaci preparatu Iiposomowego, który to preparat liposomowy zawiera mitoksantron w proporcji wagowej od 1:5 do 1:15 w stosunku do składników lipidowych nośnika liposomowego stanowiącego mieszaninę mieszaninę lecytyny jajecznej (PC), uwodornionej lecytyny jajecznej (HPC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1:2 lub lecytyny jajecznej (PC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1, i ewentualnie dodatkowe farmaceutycznie dopuszczalne nośniki i/lub substancje pomocnicze.

farmaceutycznie dopuszczalny dodatkowy nośnik może stanowić dowolna znana z praktyki farmaceutycznej substancja lub mieszanina substancji nośnikowych nie wywierających własnego działania farmakologicznego, rozcieńczalnik lub substancja pomocnicza, przeznaczone do podawania substancji biologicznie czynnych. Korzystne do stosowania w rozwiązaniu według wynalazku nośniki odpowiednie do podawania kompozycji drogą pozajelitową, na przykład dożylnie, obejmują na przykład sterylne roztwory wodne, takie jak roztwór soli fizjologicznej, roztwory węglowodanów, np. glukozy, mannitolu, dekstrozy, laktozy i roztwory wodne buforów, na przykład buforu fosforanowego. Ponadto kompozycja może zawierać inne substancje pomocnicze, tradycyjnie stosowane w celu zapewnienia izoosmotyczności, przeciwutleniacze, substancje konserwujące i inne, nie wykazujące niezgodności z substancją aktywną i ze składnikami nośnika lipidowego.

Kompozycja farmaceutyczna może mieć postać zawiesiny Iiposomowego preparatu substancji przeciwnowotworowej gotowej do użycia, liofilizatu do odtwarzania ex tempore bądź tez koncentratu do sporządzania wlewów dożylnych. Liofilizat występuje w jednostkowej postaci dawkowania, korzystnie w ampułce, zawierającej terapeutycznie skuteczną ilość substancji aktywnej. Kompozycję w jednostkowych postaciach dawkowania otrzymuje się przez rozdysponowanie jałowej zawiesiny w sterylnych warunkach do ampułek, liofilizację i szczelne zamknięcie. Liofilizat odtwarza się wodą do iniekcji lub innym farmaceutycznie dopuszczalnym rozcieńczalnikiem bezpośrednio przed użyciem.

Liofilizowane kompozycje według wynalazku charakteryzują się wysoką trwałością przy przechowywaniu.

Rozwiązanie według wynalazku ilustrują, nie ograniczając jego zakresu, następujące przykłady.

Przykład 1.

W probówce szklanej o pojemności 50 ml umieszczono roztwory chloroformowe: lecytyny jajecznej (PC), f-my Lipid Products, Wielka Brytania (37,5 mg/10 ml), uwodornionej lecytyny jajecznej (HPC) (37,5 mg/10 ml) i wodorosiarczanu 3-tridecylokarbonyloksy-5-pentadecylofenylu (MSAR) (75 mg/10ml) 5 oraz 20 mg mitoksantronu, a następnie odparowano rozpuszczalnik na wyparce obrotowej, pod zmniejszonym ciśnieniem lub strumieniem azotu. Do pozostałości po odparowaniu dodano 20 ml cykloheksanu i całość mieszano do rozpusz6

190 078 czenia. Roztwór zamrażano w ciekłym azocie i liofilizowano. Liofilizat lipidowo/mitoksantronowy hydratowano roztworem soli fizjologicznej lub odpowiedniego buforu przez energiczne wytrząsanie w termostatowanej łaźni wodnej o temp. 40° C. Badanie zawartości probówki po wytrząsaniu, przeprowadzone przy użyciu mikroskopu optycznego z głowicą kontrastowo-fazową, przy powiększeniu 1000 x wykazało obecność w preparacie struktur liposomowych, wypełnionych barwną zawartością. Sączenie molekularne zawiesiny liposomów przez kolumnę z wypełnieniem Sephadex G 50 Fine (Sigma, St. Louis, MO, USA) prowadzi do zatrzymania jedynie niewielkich ilości mitoksantronu na złożu, co dowodzi prawie całkowitej jego enkapsulacji w liposomach. Ilość substancji czynnej w liposomach można oznaczyć we frakcjach wycieku z kolumny sefadeksowej, po rozbiciu struktur liposomowych przez użycie detergentu (np. Triton XI00), przez zmierzenie ekstynkcji roztworu przy długości fali 489 nm. Niezależny pomiar zawartości fosforu (metoda z kw. nadchlorowym, molibdenianem amonu i kwasem askorbinowym z pomiarem ekstynkcji przy 812 nm), pozwolił oznaczyć stopień enkapsulacji badanych próbek na poziomie 89 +/- 3,9 %. Po 12-krotnej ekstruzji zawiesiny, przy zastosowaniu membrany o średnicy porów wynoszącej 200 nm uzyskano sterylny preparat o wielkości liposomów 255 +/-25 nm. Preparat zamykano w warunkach sterylnych w fiolkach.

Przykład 2.

W probówce szklanej o pojemności 50 ml umieszczono roztwory chloroformowe; lecytyny jajecznej (PC), f-my Lipid Products, Wielka Brytania (75 mg/10 ml) i wodorosiarczanu 3-tridecylokarbonyloksy-5-pentadecylofenylu (MSAR) (75 mg/10 ml) oraz 20 mg mitoksantronu, a następnie odparowano rozpuszczalnik na wyparce lub strumieniem azotu. Pozostałe operacje przeprowadzono analogicznie jak w przykładzie 1, poddając preparat 12 krotnej ekstruzji przez memebrany o wielkości porów 200 nm. Otrzymano preparat o stopniu enkapsulacji mitoksantronu 90 +/-2,5 %, oraz wielkości liposomów 240 +/- 15 nm. Uzyskany sterylny preparat zamykano w fiolkach.

Przykład 3.

W probówce szklanej o pojemności 50 ml umieszczono roztwory cykloheksanowe: lecytyny jajecznej (PC), firmy Lipid Products, Wielka Brytania (40mg/10ml), dimirystoilofosfatydyloglicerol (DMPG), firmy Lipid Products, Wielka Brytania (30mg/10ml) i alkiłorezorcynołi izolowanych z materiału zbożowego (RL) (30 mg/10 ml) oraz 10 mg mitoksantronu, mieszano i poddano liofilizacji pod zmniejszonym ciśnieniem w obniżonej temperaturze. Do liofilizatu dodano 0,2 ml gliceryny i preparat poddano obróbce poprzez zanurzenie w ciekłym azocie, a następnie gwałtowne rozmrożenie poprzez zanurzenie kolby w łaźni wodnej o temperaturze 40°C. Czynności te powtórzono 7-10 razy, pobierając na płytki inwarowe próbki do zbadania metodą mikroskopii elektronowej (elektronowy mikroskop transmisyjny Jeol 100C, powiększenia od 5 do 100 tysięcy razy). Otrzymano unilamelame liposomy, o średniej wielkości 260 +/- 12 nm. Preparat umieszczono w fiolkach, zamknięto je pod próżnią w warunkach sterylnych i zakapslowano.

Departament Wydawnictw UP RP Nakład 50 egz Cena 2,00 zł.

Claims (8)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Liposomowy preparat mitoksantronu zawierający nośnik liposomowy i ewentualnie dopuszczalne farmaceutycznie substancje pomocnicze, znamienny tym, ze nośnik liposomowy stanowi mieszanina lecytyny jajecznej (PC), uwodornionej lecytyny jajecznej (HPC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1:2 lub lecytyny jajecznej (PC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1.
2. 2. Liposomowy preparat mitoksantronu według zastrz. 1, znamienny tym, że pochodną rezorcynolową stanowi dwułańcuchowa wodorosiarczanowa pochodna acylowa lipidu rezorcynolowego (ASAR).
3. 3. Liposomowy preparat mitoksantronu według zastrz. 2, znamienny tym, że dwułańcuchową wodorosiarczanową pochodną acylową lipidu rezorcynolowego stanowi wodorosiarczan 3-tridecylokarbonyloksy-5-pentadecylofenylu.
4. 4. Liposomowy preparat mitoksantronu według zastrz. 1, znamienny tym, że stosunek wagowy mitoksantronu do nośnika liposomowego wynosi od 1:5 do 1:15, korzystnie 1:7.
5. 5. Sposób wytwarzania liposomowego preparatu mitoksantronu zawierającego nośnik liposomowy oraz dopuszczalne farmaceutycznie substancje pomocnicze, o stopniu enkapsulacji powyżej 89%, znamienny tym, że roztwór mitoksantronu w rozpuszczalniku organicznym łączy się z roztworem składników nośnika lipidowego obejmującego mieszaninę lecytyny jajecznej (PC), uwodornionej lecytyny jajecznej (HPC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1:2 lub lecytyny jajecznej (PC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1, w tym samym lub innym rozpuszczalniku organicznym, odpędza się rozpuszczalniki, warstwę lipidową rozprowadza się w rozpuszczalniku organicznym, wymraża i poddaje liofilizacji, po czym liofilizat kontaktuje się z wodą, otrzymując pierwotny preparat wielowarstwowych liposomów, który stabilizuje się poddając go dodatkowym procesom fizycznym, otrzymując zawiesinę kalibrowanych unilamelamych liposomów o wielkości 100-300 nm, korzystnie 100 - 200 nm, i stopniu enkapsulacji powyżej 89%, po czym zawiesinę liposomów poddaje się liofilizacji.
6. 6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, ze pierwotny preparat liposomowy poddaje się wielokrotnemu wymrażaniu w temperaturze ciekłego azotu i rozmrażaniu w temperaturze ok. 40°C.
7. 7. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że pierwotny preparat liposomowy poddaje się procesowi ekstruzji przez membrany o średnicy porów wynoszącej 100-300 nm, korzystnie 100-200 nm.
8. 8. Przeciwnowotworowa kompozycja farmaceutyczna do podawania pozajelitowego, obejmująca terapeutycznie skuteczną ilość mitoksantronu w postaci preparatu liposomowego, znamienna tym, ze preparat liposomowy zawiera mitoksantron w proporcji wagowej od 1'5 do 1:15 w stosunku do składników lipidowych nośnika liposomowego stanowiącego mieszaninę lecytyny jajecznej (PC), uwodornionej lecytyny jajecznej (HPC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1:2 lub mieszaniny lecytyny jajecznej (PC) i pochodnej rezorcynolowej (RL) w stosunku wagowym 1:1, i ewentualnie dodatkowe farmaceutycznie dopuszczalne nośniki i/lub substancje pomocnicze.